專利名稱：一種清熱利濕,活血通淋中藥組合物及制備方法和質(zhì)量檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥組合物及制備方法和質(zhì)量檢測方法，特別涉及一種清熱利濕，活血通淋的中藥組合物及制備方法和質(zhì)量檢測方法。
背景技術(shù)：
前列腺疾病是男性泌尿生殖系常見病，主要包括前列腺炎、前列腺增生及前列腺 癌。男性的大多數(shù)一生都要不同程度的受到前列腺疾病的困擾，其中尤以慢性前列腺炎為 多見。在20-65歲的男性中均有發(fā)現(xiàn)，22-40歲男子發(fā)病率高，發(fā)病趨勢呈年輕化發(fā)展。現(xiàn)有治療前列腺疾病的藥物有些屬于治標(biāo)不治本，有些使用價格昂貴的物質(zhì)，有 些在應(yīng)用過程中由于療效不確切而中斷使用。本發(fā)明的目的是提供一種療效確切、安全方 便、副作用小、價格低廉的純中藥治療前列腺疾病的藥物組合物及其制備方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明第一個目的在于提供一種清熱利濕，活血通淋的中藥組合物；本發(fā)明的第 二個目的在于提供該中藥組合物制劑的制備方法。本發(fā)明的第三個目的在于提供該中藥組 合物制劑的質(zhì)量檢測方法。本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的本發(fā)明一種清熱利濕，活血通淋的本發(fā)明組合物制劑的原料組成為金錢草300-500重量份、綿萆蘚300-500重量份、瞿麥150-300重量份、黃柏 150-350重量份、三七30-60重量份、川楝子150-350重量份、桃仁150-300重量份、烏藥 150-300重量份、牛膝150-350重量份。本發(fā)明一種清熱利濕，活血通淋的本發(fā)明組合物制劑的原料組成優(yōu)選為金錢草420重量份、綿萆蘚420重量份、瞿麥210重量份、黃柏250重量份、三七42 重量份、川楝子250重量份、桃仁210重量份、烏藥210重量份、牛膝250重量份。本發(fā)明一種清熱利濕，活血通淋的本發(fā)明組合物制劑的制備方法為三七粉碎成細粉。金錢草、綿萆蘚和黃柏加50-90%乙醇回流提取1-5次，每次 0. 5-3. 0小時，濾過，合并濾液，放置過夜，濾過，濾液備用。其余瞿麥等五味，加水煎煮1-5 次，每次0. 5-2小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1. 10 1. 30 (500C )，放冷，加 乙醇使含醇量達50-90 %，冷藏過夜，濾過，濾液與上述金錢草等醇提液合并，干燥，粉碎成 細粉，加入上述三七細粉，按照常規(guī)工藝，制成臨床或藥學(xué)上可接受的劑型，包括但不限于 片劑、膠囊劑、散劑、軟膠囊劑、滴丸、蜜丸、丸劑、顆粒劑、蜜煉膏劑、緩釋制劑、速釋制劑、控 釋制劑、口服液體制劑、注射制劑或外用制劑。本發(fā)明一種清熱利濕，活血通淋的中藥組合物顆粒劑的制備方法優(yōu)選為三七粉碎成細粉。金錢草、綿萆蘚和黃柏加70%乙醇回流提取2次，每次1. 5小 時，濾過，合并濾液，放置過夜，濾過，濾液備用。其余瞿麥等五味，加水煎煮三次，每次1小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1. 15 1. 20 (500C )，放冷，加乙醇使含醇量達 70 %，冷藏過夜，濾過，濾液與上述金錢草等醇提液合并，回收乙醇并濃縮至稠膏狀，干燥， 粉碎成細粉，加入上述三七細粉及糊精適量，甜菊素15g，混勻，用乙醇適量制成顆粒，干燥， 制成1000g，即得。本發(fā)明一種清熱利濕，活血通淋的中藥組合物膠囊劑的制備方法優(yōu)選為三七粉碎成細粉。金錢草、綿萆蘚和黃柏加70%乙醇回流提取2次，每次1. 5小 時，濾過，合并濾液，放置過夜，濾過，濾液備用。其余瞿麥等五味，加水煎煮三次，每次1小 時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1. 15 1. 20 (500C )，放冷，加乙醇使含醇量達 70 %，冷藏過夜，濾過，濾液與上述金錢草等醇提液合并，回收乙醇并濃縮至稠膏狀，干燥， 粉碎成細粉，加入上述三七細粉及糊精適量，甜菊素15g，混勻，用乙醇適量制成顆粒，裝膠 囊，即得。 本發(fā)明提供該中藥組合物制劑的質(zhì)量控制方法，該方法包括步驟A、鑒別取本發(fā)明組合物制劑2-10g，加乙醇10_30ml，置水浴上回流15_60分鐘， 取上清液2-15ml，加鹽酸0. 5-2ml，加熱回流0. 5-2小時后濃縮至約I-IOml，加水5_20ml， 用環(huán)己烷5-30ml振搖提取，提取液蒸干，殘渣加三氯甲烷l_3ml使溶解，作為供試品溶液。 另取綿萆蘚對照藥材l_5g，同法制成對照藥材溶液。再取薯蕷皂苷元對照品，加甲醇制成 每Iml含I-IOmg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液、對照藥材及對照品溶液各 2-10μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以(14-5 2)比例的環(huán)己烷-乙酸乙酯混合溶液 為展開劑，展開，取出，晾干，噴以磷鉬酸試液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜 中，在與對照藥材、對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。B鑒別取本發(fā)明組合物制劑2_4g，加甲醇10_30ml，超聲處理5_45分鐘，濾過，濾 液濃縮至l_4ml，作為供試品溶液。另取黃柏對照藥材0. 05-lg,同法制成對照藥材溶液。 再取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每Iml含0. I-Img的溶液，作為對照品溶液。吸取上述 三種溶液各2 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以(20-5 4-8 1 1)比例的乙酸乙 酯-丁酮-甲酸-水混合溶劑為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供 試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；在與對照品色譜相 應(yīng)的位置上，顯相同顏色的黃色熒光斑點。C鑒別取本發(fā)明組合物制劑0. 5_5g，加甲醇5_50ml，超聲處理5_60分鐘，靜置， 取上清液5-20ml，蒸干，殘渣加水10-50ml使溶解，加10 %氫氧化鈉溶液I-IOml，搖勻，用水 飽和正丁醇振搖提取1-3次，每次10_50ml，合并正丁醇液，加水洗滌1_3次，每次20_50ml， 棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加水l_5ml使溶解，通過DlOl型大孔吸附樹脂柱，40 60 目，濕法裝柱，內(nèi)徑1cm，長25cm，小玻璃柱內(nèi)，待樹脂沉淀，覆以脫脂棉少許，再添加棉花 少許輕壓，用水沖洗并用水浸沒備用。先用水20-100ml洗脫，棄去水液，再用70 %乙醇 10-50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇0. 5-2ml使溶解，作為供試品溶液。另取三七 對照藥材0. l-2g，同法制成對照藥材溶液。再取人參皂苷Rgl及三七皂苷Rl對照品，加甲 醇制成每Iml含0. l-2mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述三種溶液各1_10 μ 1，分別點 于同一硅膠G薄層板上，以(10-1 1 4-7)比例的正丁醇-乙酸乙酯-水混合溶液的 上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清 晰。供試品色譜中，在與對照藥材、對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
D含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以 (30-60 40-70)比例的甲醇-0.4%磷酸溶液混合溶劑為流動相；檢測波長為330-380nm。 對照品溶液的制備精密稱取槲皮素對照品及山奈素對照品適量，加甲醇制成每Iml各含 槲皮素5-25 μ g，山奈素10-30 μ g的溶液，即得。供試品溶液的制備取本發(fā)明組合物制 劑約l-10g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入2%鹽酸甲醇溶液25-75ml，密塞，稱定重 量，加熱回流0. 5-2小時，放冷，再稱定重量，用2%鹽酸甲醇溶液補足減失的重量，搖勻， 濾過，取續(xù)濾液，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5-20μ 1，注入 液相色譜儀，測定，即得。本發(fā)明組合物制劑每Ig含金錢草以槲皮素(C15H11O7)和山奈素 (C15H10O6)的總量計，不得少于0. 20mg。
上述質(zhì)量控制方法中優(yōu)選包括如下鑒別法綿萆蘚薄層鑒別取本發(fā)明組合物制劑5g，加乙醇20ml，置水浴上回流40分鐘， 取上清液10ml，加鹽酸1ml，加熱回流1小時后濃縮至約5ml，加水10ml，用環(huán)己烷20ml振 搖提取，提取液蒸干，殘渣加三氯甲烷2ml使溶解，作為供試品溶液。另取綿萆蘚對照藥材 2g，同法制成對照藥材溶液。再取薯蕷皂苷元對照品，加甲醇制成每Iml含5mg的溶液，作 為對照品溶液。吸取供試品溶液5 μ 1、對照藥材及對照品溶液各2 μ 1，分別點于同一硅膠 G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯(8 2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以磷鉬酸試液，在 105°C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材、對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相 同顏色的斑點。黃柏薄層鑒別取本發(fā)明組合物制劑2g，加甲醇20ml，超聲處理15分鐘，濾過，濾 液濃縮至2ml，作為供試品溶液。另取黃柏對照藥材O.lg，同法制成對照藥材溶液。再取鹽 酸小檗堿對照品，加甲醇制成每Iml含0. 5mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述三種溶液 各2μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10 6 1 1) 為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色 譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的黃 色熒光斑點。三七薄層鑒別取本發(fā)明組合物制劑2g，加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，靜置，取 上清液10ml，蒸干，殘渣加水25ml使溶解，加10%氫氧化鈉溶液5ml，搖勻，用水飽和正丁 醇振搖提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，加水洗滌2次，每次40ml，棄去水液，正丁醇液 蒸干，殘渣加水3ml使溶解，通過DlOl型大孔吸附樹脂柱，40 60目，濕法裝柱，內(nèi)徑1cm， 長25cm，小玻璃柱內(nèi)，待樹脂沉淀，覆以脫脂棉少許，再添加棉花少許輕壓，用水沖洗并用水 浸沒備用。先用水50ml洗脫，棄去水液，再用70%乙醇25ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣 加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取三七對照藥材0. 5g，同法制成對照藥材溶液。再 取人參皂苷Rgl及三七皂苷Rl對照品，加甲醇制成每Iml含0. 5mg的溶液，作為對照品溶 液。吸取上述三種溶液各5 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-乙酸乙酯-水 (4:1: 5)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱 至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材、對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的 斑點。含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以 甲醇-0. 4%磷酸溶液(48 52)為流動相；檢測波長為360nm。對照品溶液的制備精密稱取槲皮素對照品及山奈素對照品適量，加甲醇制成每Iml各含槲皮素15 μ g，山奈素20 μ g的溶液，即得。供試品溶液的制備取本發(fā)明組合物制劑約5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中， 精密加入2%鹽酸甲醇溶液50ml，密塞，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，再稱定重量，用 2%鹽酸甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。測定法分別精密吸取對照 品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。上述質(zhì)量控制方法本發(fā)明組合物制劑為金錢草420g、綿萆蘚420g、瞿麥210g、黃 柏250g、三七42g、川楝子250g、桃仁210g、烏藥210g、牛膝250g的顆粒劑，并通過如下方法 制備以上九味，三七粉碎成細粉。金錢草、綿萆蘚和黃柏加70%乙醇回流提取2次，每次 1. 5小時，濾過，合并濾液，放置過夜，濾過，濾液備用。其余瞿麥等五味，加水煎煮三次，每 次1小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1. 15 1. 20 (500C )，放冷，加乙醇使含 醇量達70%，冷藏過夜，濾過，濾液與上述金錢草等醇提液合并，回收乙醇并濃縮至稠膏狀， 干燥，粉碎成細粉，加入上述三七細粉及糊精適量，甜菊素15g，混勻，用乙醇適量制成顆粒， 干燥，制成1000g，即得。本發(fā)明中藥組合物具有很好的清熱利濕，活血通淋的作用，本發(fā)明組合物制劑均 表現(xiàn)顯著的抗炎、消腫效應(yīng)。本發(fā)明中藥組合物制劑的質(zhì)量檢測方法，經(jīng)實驗證明本發(fā)明含量測定方法檢測 專屬性好、穩(wěn)定性高、重現(xiàn)性好、精密度高，更加適合工業(yè)化的生產(chǎn)，真正確保了臨床用藥的 安全、有效、可靠。下面實驗例和實施例用于進一步說明但不限于本發(fā)明。本發(fā)明所有實驗例所選用的制劑均為根據(jù)本發(fā)明實施例1制得的本發(fā)明顆粒劑， 但是本發(fā)明實驗結(jié)果并不僅限于該顆粒劑。實驗例1 本發(fā)明組合物制劑治療前列腺炎的藥效學(xué)研究1、實驗材料本發(fā)明組合物制劑；醋酸潑尼松片(5mg/片)，使用時用0. 5 %縮甲 基纖維素鈉配成所需濃度的混懸液備用；前列舒樂顆粒(4g/袋)；0.9% NaCl注射液。試 劑二甲苯(分析純)；角叉菜膠；伊文思蘭；冰醋酸。動物昆明種小鼠(二級)，雄性，體質(zhì)量18 22g ；SD大鼠(二級)，體質(zhì)量180 200g；儀器722光柵分光光度計，上海第三分析儀器廠生產(chǎn)。FA2004電子天平，上海精 科天平；大鼠足容積測量裝置(自制)。2、實驗方法2. 1對角叉菜膠致大鼠非細菌性前列腺炎的影響將大鼠隨機分為正常對照組、模型對照組、本發(fā)明組合物制劑小劑量組(1. 5g/kg， 相當(dāng)于人臨床用量的3. 5倍)、本發(fā)明組合物制劑中劑量組(3. Og/kg，相當(dāng)于人臨床用量的 7倍)、本發(fā)明組合物制劑大劑量組(6. 0g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的14倍)及陽性藥前列舒 樂顆粒組(2. 4g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的14倍)，每組10只，各給藥組大鼠連續(xù)灌胃給藥 7d，每日1次，模型對照組給予等容量蒸餾水。末次給藥后30min，將大鼠用乙醚麻醉，無菌 條件下剖開腹腔，在每鼠前列腺內(nèi)注入滅菌的1.5%角叉菜膠0. 05mL，縫合切口，24h后斷 頭處死大鼠，取致炎前列腺組織50mg加入200 μ L白細胞稀釋液和200 μ L生理鹽水中，充 分混勻，鏡下記錄白細胞數(shù)和卵磷脂小體密度。
2. 2對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響 將小鼠隨機分為模型對照組、本發(fā)明組合物制劑小劑量組(2. Og/kg，相當(dāng)于人臨 床用量的4. 5倍)、本發(fā)明組合物制劑中劑量組(4. Og/kg,相當(dāng)于人臨床用量的9倍)、本 發(fā)明組合物制劑大劑量組(8. Og/kg，相當(dāng)于人臨床用量的18倍)及陽性藥醋酸潑尼松組 (8. Omg/kg,相當(dāng)于人臨床用量的9倍)，每組10只，給藥組連續(xù)灌胃給藥7d，每日1次，容 量為0. 2mL/10g，模型對照組給予等量蒸餾水。末次給藥后30min，分別在小鼠右耳兩面涂 以二甲苯0. 05mL/只，左耳作對照，15min后處死動物，用直徑6mm的打孔器將雙耳同部位切 下，用FA2004電子天平稱質(zhì)量，以左、右耳片質(zhì)量之差為腫脹度，計算各組腫脹度。2. 3對醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性的影響將小鼠隨機分為模型對照組、本發(fā)明組合物制劑小劑量組(2. Og/kg，相當(dāng)于人臨 床用量的4. 5倍)、本發(fā)明組合物制劑中劑量組(4. Og/kg,相當(dāng)于人臨床用量的9倍)、本 發(fā)明組合物制劑大劑量組(8. 0g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的18倍)及陽性藥醋酸潑尼松組 (8. 0mg/kg,相當(dāng)于人臨床用量的9倍)，每組10只，給藥組連續(xù)灌胃給藥7d，每日1次，容 量為0. 2mL/10g，模型對照組給予等量蒸餾水。末次給藥后30min，分別尾靜脈注射0. 5% 伊文思蘭生理鹽水0. lmL/10g,同時腹腔注射0. 6%醋酸0. 2mL/只。20min后處死動物，剪 開腹部皮膚肌肉，用6mL生理鹽水分3次洗滌腹腔，吸管吸出洗滌液，合并后加生理鹽水至 IOmL, 300r/min離心15min。取上清液于590nm處測吸光度(0D，表示滲入腹腔的染料量)。2. 4對角叉菜膠至大鼠足跖腫脹的影響將大鼠隨機分為模型對照組、本發(fā)明組合物制劑小劑量組(1. 5g/kg，相當(dāng)于人臨 床用量的3. 5倍)、本發(fā)明組合物制劑中劑量組(3. Og/kg,相當(dāng)于人臨床用量的7倍)、本 發(fā)明組合物制劑大劑量組(6. 0g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的14倍)及陽性藥醋酸潑尼松組 (6. 0mg/kg，相當(dāng)于人臨床用量的7倍)，每組10只，各給藥組大鼠連續(xù)灌胃給藥7d，每日1 次，模型對照組給予等容量蒸餾水，末次給藥后30min，在每鼠右后肢踝部皮下注入角 叉菜膠0. ImL致炎，于致炎前后不同時間點測量右后足跖容積，計算腫脹度(致炎后容積與 致炎前容積之差)。統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 10. 0統(tǒng)計軟件處理，組間比較采用t檢驗。3 結(jié)果3. 1對角叉菜膠致大鼠細菌性前列腺炎的影響模型對照組大鼠前列腺內(nèi)白細胞數(shù)明顯較正常對照組大鼠增多(P < 0.01)，卵 磷脂小體明顯較正常對照組大鼠減少(P <0.01)；本發(fā)明組合物制劑(1.5g/kg、3. Og/kg、 6. Og/kg)組大鼠前列腺內(nèi)白細胞數(shù)明顯較模型對照組大鼠減少(P <0.01)，卵磷脂小體明 顯較模型對照組大鼠增多(P < 0. 01)。見表1。表1各組大鼠前列腺內(nèi)白細胞數(shù)及卵磷脂小體密度比較 與模型對照組比較*ρ < 0. 05，**ρ < 0. 01。3. 2對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響模型對照組小鼠耳腫脹度為(9.8士1.23)!1^，本發(fā)明組合物制劑小劑量組為 (7. 5士2. 23)mg，本發(fā)明組合物制劑中劑量組為(6. 8士2. 14)mg，本發(fā)明組合物制劑大劑量 組為(6. 7 士 2. 16) mg，醋酸潑尼松組為(5. 7 士 2. 45) mg。各給藥組與模型對照組均有顯著性 差異(P < 0.05 或 0.01)。3. 3對醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性的影響模型對照組吸光度為0. 434 士 0. 0656，本發(fā)明組合物制劑小劑量組為 0. 367士0. 0565，本發(fā)明組合物制劑中劑量組為0. 365士0. 0334，本發(fā)明組合物制劑大劑量 組為0. 312 士 0. 0465，醋酸潑尼松組為0. 243 士 0. 0454。各給藥組小鼠吸光度均明顯低于模 型對照組(P < 0. 01)。3. 4對角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的影響本發(fā)明組合物制劑(1. 5g/kg、3. 0g/kg、6. Og/kg)組大鼠足跖腫脹在致炎后lh、 2h、4h、6h均較對照組大鼠輕，見表2。表2各組大鼠致炎后不同時間的腫脹度(mL) 與模型對照組比較*ρ < 0. 05。
本實驗證明本發(fā)明組合物制劑(1. 5g/kg、3. 0g/kg、6. Og/kg)可明顯減少1. 5% 角叉菜膠致非細菌性前列腺炎大鼠前列腺組織內(nèi)白細胞數(shù)，增加前列腺組織內(nèi)卵磷脂小體 密度，并可明顯抑制棉球肉芽腫形成。本發(fā)明組合物制劑(2. 0g/kg、4. 0g/kg、8. Og/kg)對 二甲苯致小鼠耳腫脹均有明顯抑制作用；可明顯抑制0.6%醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通 透性的增加。實驗例2 綿萆蘚薄層鑒別試驗本發(fā)明組合物制劑處方中含有綿萆蘚，主要有效成分為薯蕷皂苷類成分。本發(fā)明 利用薄層色譜鑒別制劑水解后的薯蕷皂苷元，來鑒定制劑中的綿萆蘚藥材。1、薄層色譜方法的選擇綿萆蘚中的薯蕷皂苷元極性較弱，故選擇硅膠層析進行實驗。2、供試品的制備2. 1供試品制備方法的選擇通過實驗確定是否需要將供試品水解后鑒別。方法1 取本發(fā)明組合物制劑5g，加乙醇20ml，置水浴上回流40分鐘，取上清液 10ml，加鹽酸1ml，加熱回流1小時后濃縮至約5ml，加水10ml，用環(huán)己烷20ml振搖提取，提 取液蒸干，殘渣加三氯甲烷2ml使溶解，作為供試品溶液1。取綿萆蘚對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液1。方法2 取本發(fā)明組合物制劑5g，加乙醇20ml，置水浴上回流40分鐘，取上清液 10ml，減壓濃縮至干，加2ml乙醇溶解，作為供試品溶液2。取綿萆蘚對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液2。取薯蕷皂苷元對照品，加甲醇制成每Iml含5mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液5 μ 1、對照藥材及對照品溶液各2 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層 板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯(8 2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以磷鉬酸試液，在105°C 加熱至斑點顯色清晰。實驗結(jié)果如下在對照藥材溶液1中沒有觀察到明顯色譜斑點；在對照藥材溶液2中在薯蕷皂苷 元色譜相應(yīng)位置上觀察到明顯色譜斑點，且供試品溶液色譜中在其位置上也有明顯色譜斑
點ο所以選擇將供試品水解后鑒別其中的薯蕷皂苷元。2. 2供試品溶液提取條件的優(yōu)化采用L93⑷正交實驗設(shè)計，對供試品溶液提取條件進行優(yōu)化。 精密稱取本發(fā)明組合物制劑九份，各5g，分別按照表格中條件進行提取。樣品提取 后均將體積調(diào)整至20ml，取上清液10ml，加鹽酸1ml，加熱回流1小時后濃縮至約5ml，加水 10ml，用環(huán)己烷20ml振搖提取，提取液蒸干，殘渣加三氯甲烷2ml使溶解，作為供試品溶液 1-9取薯蕷皂苷元對照品，加甲醇制成每Iml含5mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液5μ 1、對照品溶液各2μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己 烷-乙酸乙酯(8 2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以磷鉬酸試液，在105°C加熱至斑點顯 色清晰。綜合考慮確定供試品溶液最優(yōu)提取方法為取本發(fā)明組合物制劑5g，加乙醇 20ml，置水浴上回流40分鐘。2. 3供試品溶液水解條件的優(yōu)化采用L93(4)正交實驗設(shè)計，對供試品溶液水解條件進行優(yōu)化。 精密稱取本發(fā)明組合物制劑九份，各5g，加乙醇20ml，置水浴上回流40分鐘，取上 清液10ml，分別按照表格中實驗條件進行水解，樣品水解濃縮后，加水10ml，用環(huán)己烷20ml 振搖提取，提取液蒸干，殘渣加三氯甲烷2ml使溶解，作為供試品溶液1-9。取薯蕷皂苷元對照品，加甲醇制成每Iml含5mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液5μ 1、對照品溶液各2μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己 烷-乙酸乙酯(8 2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以磷鉬酸試液，在105°C加熱至斑點顯 色清晰。綜合考慮確定供試品溶液提取方法為取本發(fā)明組合物制劑5g，加乙醇20ml，置 水浴上回流40分鐘，取上清液10ml，加鹽酸1ml，加熱回流1小時后濃縮至約5ml。2. 4供試品溶液萃取條件的優(yōu)化采用L93(4)正交實驗設(shè)計，對供試品溶液水解條件進行優(yōu)化。 精密稱取本發(fā)明組合物制劑九份，各5g，加乙醇20ml，置水浴上回流40分鐘，取上 清液10ml，加鹽酸1ml，加熱回流1小時后濃縮至約5ml，加水10ml，按表格中實驗方法進行萃取，作為供試品溶液1-9。取薯蕷皂苷元對照品，加甲醇制成每Iml含5mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液5μ 1、對照品溶液各2μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯(8 2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以磷鉬酸試液，在105°C加熱至斑點顯 色清晰。綜合考慮確定供試品溶液提取方法為取本發(fā)明組合物制劑5g，加乙醇20ml，置 水浴上回流40分鐘，取上清液10ml，加鹽酸1ml，加熱回流1小時后濃縮至約5ml，加水 10ml，用環(huán)己烷20ml振搖提取，提取液蒸干，殘渣加三氯甲烷2ml使溶解，作為供試品溶液。3、對照藥材溶液的制備方法對照品溶液的制備方法同供試品溶液制備方法。4、供試品溶液、對照藥材溶液、對照品溶液點樣量的確定分別吸取供試品溶液2、5、10ul，對照藥材、對照品溶液l、2、5ul分別點于同一硅 膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯(8 2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以磷鉬酸試液， 在105°C加熱至斑點顯色清晰。實驗結(jié)果如下對照藥材及對照品溶液點樣量為1時，斑點強度較低，不宜觀察；點樣量為 2μ 1時，四季紅對照藥材溶液薄層上熒光斑點清晰，大小適中；點樣量為5μ 1時，斑點太 大，拖尾。確定對照藥材及對照品溶液的最佳點樣量為2 μ 1。供試品溶液點樣量為2μ 1時，在對照藥材及對照品溶液相對應(yīng)的位置上斑點強 度較低，不宜觀察；點樣量為5μ 1時，在對照藥材及對照品溶液相對應(yīng)的位置上斑點明顯， 斑點大小適中，前后無干擾；點樣量為10μ 1時，在對照藥材及對照品溶液相對應(yīng)的位置上 熒光斑點較大，明顯拖尾，與前后熒光斑點相連。確定供試品的最佳點樣量為5 μ 1。5、展開劑條件的優(yōu)選薯蕷皂苷元極性較小，因此選擇環(huán)己烷和極性稍大的醋酸乙酯為展開劑，通過實 驗選擇合適的比例，使所需成分得到分離。取缺綿萆蘚的綿萆蘚陰性制劑按供試品制備方法制備缺綿萆蘚陰性對照溶液。精密吸取供試品溶液、缺綿萆蘚陰性對照溶液5μ 1，對照藥材及對照品溶液2μ 1 點于同一硅膠G薄層板上，反復(fù)五塊薄層板。分別用以下展開劑展開，取出，晾干，噴以磷鉬 酸試液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。試驗結(jié)果如下方法1 展開劑為環(huán)己烷-乙酸乙酯(20 2)，展開劑極性較小，薯蕷皂苷元斑點 Rf值接近0. 2，供試品色譜中薯蕷皂苷元斑點與前后斑點未分開；方法2:展開劑為環(huán)己烷-乙酸乙酯(8 2)，極性適宜，對照藥材斑點Rf值接近 0. 5，供試品色譜中，在與薯蕷皂苷元對照品溶液相對應(yīng)的斑點，分離良好，前后無干擾；方法3:展開劑為環(huán)己烷-乙酸乙酯(2 2)，極性偏高，供試品色譜中薯蕷皂苷元 斑點Rf值接近0. 85，供試品色譜中薯蕷皂苷元斑點與前后斑點未分開；確定分離本發(fā)明組合物制劑中薯蕷皂苷元的最優(yōu)薄層展開劑為環(huán)己烷_乙酸乙 酯(8:2)。
6、顯色劑的選擇薯蕷皂苷元薄層色譜斑點在日光下沒有顏色，需顯色后觀察。常用的顯色劑為磷 鉬酸試液、10%的硫酸乙醇溶液以及碘蒸氣。按上述方法制備供試品溶液、對照藥材溶液。取三塊硅膠薄層分別點樣、展開、晾干。方法一噴以磷鉬酸試液，在105°C加熱至斑點顯色清晰；方法二 噴以10%的硫酸乙醇溶液，105°C加熱至斑點顯色清晰；方法三碘蒸氣顯色。實驗結(jié)果如下方法一薄層噴以磷鉬酸試液，在105°C加熱至斑點顯色清晰后觀察，在薯蕷皂苷 元對照品相對應(yīng)的位置上，供試品溶液有明顯相同顏色的斑點，斑點清晰，前后無干擾；方 法二 薄層在噴以10%的硫酸乙醇溶液，105°C加熱至斑點顯色清晰。在薯蕷皂苷元對照品 相對應(yīng)的位置上，供試品溶液色譜中斑點有干擾；方法三，碘蒸氣熏后斑點較多。在四季紅 對照藥材相對應(yīng)的位置上，供試品溶液色譜中斑點供試品溶液與對照藥材溶液色譜中沒有 觀察到顏色及Rf值一致的斑點。確定最佳顯色條件為噴以磷鉬酸試液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。最后確定本發(fā)明組合物制劑中綿萆蘚的薄層色譜鑒別條件為取本發(fā)明組合物制劑5g，加乙醇20ml，置水浴上回流40分鐘，取上清液10ml，力口 鹽酸1ml，加熱回流1小時后濃縮至約5ml，加水10ml，用環(huán)己烷20ml振搖提取，提取液蒸 干，殘渣加三氯甲烷2ml使溶解，作為供試品溶液。另取綿萆蘚對照藥材2g，同法制成對照 藥材溶液。再取薯蕷皂苷元對照品，加甲醇制成每Iml含5mg的溶液，作為對照品溶液。吸 取供試品溶液5μ 1、對照藥材及對照品溶液各2μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己 烷-乙酸乙酯(8 2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以磷鉬酸試液，在105°C加熱至斑點顯 色清晰。實驗例3 黃柏薄層鑒別試驗本發(fā)明組合物制劑中所含黃柏藥材中的有效成分為以小檗堿類為代表的生物堿 類成分。本發(fā)明利用薄層色譜鑒別制劑中的鹽酸小檗堿，鑒定制劑中的黃柏藥材。1、供試品溶液提取條件的優(yōu)化采用L93⑷正交實驗設(shè)計，對提取供試品中的鹽酸小檗堿實驗條件進行優(yōu)化。
精密稱取本發(fā)明組合物制劑九份，各2g，分別按照表中實驗條件進行實驗，提取液 濃縮至2ml，作為供試品溶液1-9
鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每Iml含0. 5mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液、對照品溶液各2 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙 酯-丁酮-甲酸-水(10 6 1 1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm) 下檢視。綜合考慮，確定供試品溶液提取方法為取本發(fā)明組合物制劑2g，加甲醇20ml，超聲處理15分鐘，濾過，濾液濃縮至2ml，作為供試品溶液。2、供試品溶液點樣量的考察分別吸取供試品溶液1、2、5μ 1點于同一硅膠G板上，展開、檢識。試驗結(jié)果如下供試品溶液點樣量為1μ 1時，斑點強度較低，不宜觀察；供試品溶液點樣量為 2μ1時，薄層上熒光斑點清晰，大小適中，無拖尾，前后無干擾；供試品溶液點樣量為5μ 1 時，供試品溶液薄層上熒光斑點較大，與前后熒光斑點相連。確定供試品溶液的最佳點樣量為2 μ 1。最后確定本發(fā)明組合物制劑中黃柏的薄層色譜鑒別條件為取本制劑組合物2g，加甲醇20ml，超聲處理15分鐘，濾過，濾液濃縮至2ml，作為供 試品溶液。另取黃柏對照藥材0. lg，同法制成對照藥材溶液。再取鹽酸小檗堿對照品，加甲 醇制成每Irnl含0. 5mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述三種溶液各2 μ 1，分別點于同一 硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10 6 1 1)為展開劑，展開，取出， 晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相 同顏色的熒光斑點；在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的黃色熒光斑點。實驗例4 三七薄層鑒別試驗本發(fā)明組合物制劑中所含三七藥材中的有效成分為皂苷類成分。本發(fā)明利用薄層 色譜鑒別制劑中的人參皂苷Rg1及三七皂苷R1，鑒定制劑中的三七藥材。1、供試品溶液的提取、純化方法1. 1供試品溶液提取條件的優(yōu)化采用L93⑷正交實驗設(shè)計，對制劑中的人參皂苷Rg1及三七皂苷R1提取實驗條件進
行優(yōu)化。 精密稱取本發(fā)明組合物制劑九份，各2g，分別按照表中實驗條件進行考察，各組取 一半提取液，蒸干，殘渣加水25ml使溶解，加10%氫氧化鈉溶液5ml，搖勻，用水飽和正丁醇 振搖提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，加水洗滌2次，每次40ml，棄去水液，正丁醇液蒸 干，殘渣加水3ml使溶解，通過DlOl型大孔吸附樹脂柱，40 60目，濕法裝柱，內(nèi)徑1cm，長 25cm，小玻璃柱內(nèi)，待樹脂沉淀，覆以脫脂棉少許，再添加棉花少許輕壓，用水沖洗并用水浸沒備用。先用水50ml洗脫，棄去水液，再用70%乙醇25ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液。濃縮至2ml，作為供試品溶液1_9取人參皂苷Rg1及三七皂苷R1對照品，加甲醇制成每Iml含0. 5mg的溶液，作為對 照品溶液。吸取上述三種溶液各5 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-乙酸乙 酯-水(4 1 5)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在 105°C加熱至斑點顯色清晰。綜合考慮確定供試品溶液提取方法為取本發(fā)明組合物制劑2g，加甲醇20ml，超 聲處理30分鐘。1. 2供試品溶液純化方法的考察皂苷類成分常見的純化方法為正丁醇萃取，本發(fā)明采用正丁醇萃取的方法并結(jié)合 其他方法純化制劑中的皂苷類成分。1.2. 1水提液調(diào)節(jié)pH值取本發(fā)明組合物制劑2g三份，分別加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，靜置，取上清液 10ml，蒸干，殘渣加水25ml使溶解，分別加入10%氫氧化鈉溶液0、5ml搖勻，用水飽和正丁 醇振搖提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，加水洗滌2次，每次40ml，棄去水液，正丁醇液 蒸干，殘渣加水3ml使溶解，通過DlOl型大孔吸附樹脂柱，40 60目，濕法裝柱，內(nèi)徑1cm， 長25cm，小玻璃柱內(nèi)，待樹脂沉淀，覆以脫脂棉少許，再添加棉花少許輕壓，用水沖洗并用水 浸沒備用。先用水50ml洗脫，棄去水液，再用70%乙醇25ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣 加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液1-3。取人參皂苷Rg1及三七皂苷R1對照品，加甲醇制成每Iml含0. 5mg的溶液，作為對 照品溶液。吸取上述三種溶液各5 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-乙酸乙 酯-水(4 1 5)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在 105°C加熱至斑點顯色清晰。實驗結(jié)果如下供試品溶液1水提液中不加入氫氧化鈉溶液，色譜中人參皂苷Rgl及三七皂苷Rl 斑點受其他雜質(zhì)干擾；供試品溶液2水提液中加入氫氧化鈉溶液5ml氫氧化鈉溶液5ml，色 譜中參皂苷Rgl及三七皂苷Rl斑點前后無干擾。所以確定供試品水提液中需加入氫氧化鈉溶液5ml調(diào)節(jié)pH值后萃取。1.2.2正丁醇萃取液的洗滌取本發(fā)明組合物制劑2g四份，分別加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，靜置，取上清液 10ml，蒸干，殘渣加水25ml使溶解，分別加入10%氫氧化鈉溶液5ml搖勻，用水飽和正丁醇 振搖提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，加水洗滌0、1、2、3次，每次40ml，棄去水液，正丁 醇液蒸干，殘渣加水3ml使溶解，通過DlOl型大孔吸附樹脂柱，40 60目，濕法裝柱，內(nèi)徑 Icm,長25cm，小玻璃柱內(nèi)，待樹脂沉淀，覆以脫脂棉少許，再添加棉花少許輕壓，用水沖洗并 用水浸沒備用。先用水50ml洗脫，棄去水液，再用70%乙醇25ml洗脫，收集洗脫液，蒸干， 殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液1-4。取人參皂苷Rg1及三七皂苷R1對照品，加甲醇制成每Iml含0. 5mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述溶液各5 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇_乙酸乙酯-水 (4:1: 5)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱 至斑點顯色清晰。實驗結(jié)果如下 供試品溶液1正丁醇萃取液不用水洗滌，色譜中人參皂苷Rgl及三七皂苷Rl斑點 受其他雜質(zhì)干擾；供試品溶液2正丁醇萃取液水洗滌1次，色譜中參皂苷Rgl及三七皂苷Rl 斑點前后干擾較供試品溶液1改善；供試品溶液3正丁醇萃取液水洗滌2次，色譜中參皂苷 Rgl及三七皂苷Rl斑點前后無干擾；供試品溶液4正丁醇萃取液水洗滌3次，色譜結(jié)果同 供試品溶液3。確定供試品正丁醇萃取液水洗滌3次。1. 2. 3正丁醇萃取液的大孔樹脂純化方法1 正丁醇萃取液不使用大孔樹脂純化取本發(fā)明組合物制劑2g份，加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，靜置，取上清液10ml， 蒸干，殘渣加水25ml使溶解，加入10%氫氧化鈉溶液5ml搖勻，用水飽和正丁醇振搖提取2 次，每次30ml，合并正丁醇液，加水洗滌0、1、2、3次，每次40ml，棄去水液，正丁醇液蒸干，甲 醇Iml使溶解，作為供試品溶液1。方法2 正丁醇萃取液使用大孔樹脂純化取本發(fā)明組合物制劑2g份，加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，靜置，取上清液10ml， 蒸干，殘渣加水25ml使溶解，加入10%氫氧化鈉溶液5ml搖勻，用水飽和正丁醇振搖提取2 次，每次30ml，合并正丁醇液，加水洗滌0、1、2、3次，每次40ml，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘 渣加水3ml使溶解，通過DlOl型大孔吸附樹脂柱，40 60目，濕法裝柱，內(nèi)徑1cm，長25cm， 小玻璃柱內(nèi)，待樹脂沉淀，覆以脫脂棉少許，再添加棉花少許輕壓，用水沖洗并用水浸沒備 用。先用水50ml洗脫，棄去水液，再用70%乙醇25ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇 Iml使溶解，作為供試品溶液2。取人參皂苷Rg1及三七皂苷R1對照品，加甲醇制成每Iml含0. 5mg的溶液，作為對 照品溶液。吸取上述三種溶液各5 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-乙酸乙 酯-水(4 1 5)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在 105°C加熱至斑點顯色清晰。實驗結(jié)果如下供試品溶液1不使用大孔樹脂純化色譜中人參皂苷Rgl及三七皂苷Rl斑點受其 他雜質(zhì)干擾；供試品溶液2正丁醇萃取液使用大孔樹脂純化，色譜中參皂苷Rgl及三七皂苷 Rl斑點前后無干擾。確定供試品正丁醇萃取液使用大孔樹脂純化。1. 2. 4大孔樹脂洗脫乙醇濃度的確定取本發(fā)明組合物制劑2g三份，分別加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，靜置，取上清液 IOml，蒸干，殘渣加水25ml使溶解，加10 %氫氧化鈉溶液5ml，搖勻，用水飽和正丁醇振搖提 取2次，每次30ml，合并正丁醇液，加水洗滌2次，每次40ml，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加水3ml使溶解，三份樣品分別通過DlOl型大孔吸附樹脂柱，40 60目，濕法裝柱，內(nèi)徑Icm,長25cm，小玻璃柱內(nèi)，待樹脂沉淀，覆以脫脂棉少許，再添加棉花少許輕壓，用水沖洗并 用水浸沒備用。先用水50ml洗脫，棄去水液，三份樣品分別用30、70、95%乙醇25ml洗脫， 收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液1-3。實驗結(jié)果如下供試品溶液1使用30%乙醇洗脫，色譜中人參皂苷Rgl及三七皂苷Rl斑點受其他 雜質(zhì)干擾；供試品溶液2使用70%乙醇洗脫，色譜中參皂苷Rgl及三七皂苷Rl斑點前后無 干擾。供試品溶液3使用95%乙醇洗脫，色譜中人參皂苷Rgl及三七皂苷Rl斑點受其他雜 質(zhì)干擾；確定供試品使用70%乙醇將皂苷類成分從大孔樹脂柱上洗脫。2、供試品溶液、對照藥材溶液、對照品溶液點樣量的確定分別吸取供試品溶液、對照藥材、對照品溶液2、5、10ul分別點于同一硅膠G薄層 板上，以正丁醇-乙酸乙酯-水(4 1 5)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以 10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。實驗結(jié)果如下對照藥材及對照品溶液點樣量為2μ 1時，斑點強度較低，不宜觀察；點樣量為 5μ 1時，四季紅對照藥材溶液薄層上熒光斑點清晰，大小適中；點樣量為10 μ 1時，斑點太 大，拖尾。確定對照藥材及對照品溶液的最佳點樣量為5 μ 1。供試品溶液點樣量為2μ 1時，在對照藥材及對照品溶液相對應(yīng)的位置上斑點強 度較低，不宜觀察；點樣量為5μ 1時，在對照藥材及對照品溶液相對應(yīng)的位置上斑點明顯， 斑點大小適中，前后無干擾；點樣量為10μ 1時，在對照藥材及對照品溶液相對應(yīng)的位置上 熒光斑點較大，明顯拖尾，與前后熒光斑點相連。確定供試品的最佳點樣量為5 μ 1。3、展開劑條件的優(yōu)取缺三七的三七陰性制劑按供試品制備方法制備缺三七陰性對照溶液。精密吸取供試品溶液、缺三七陰性對照溶液、對照藥材及對照品溶液5 μ 1點于于 同一硅膠G薄層板上，反復(fù)點于五塊薄層板上。分別用以下展開劑展開，取出，晾干，噴以 10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。試驗結(jié)果如下方法1 展開劑為正丁醇-乙酸乙酯-水(10 1 5)的上層溶液，展開劑極性 較小，供試品色譜中在與人參皂苷Rg1及三七皂苷R1對照品溶液相對應(yīng)的斑點與前后斑點 未分開。方法2:展開劑為正丁醇-乙酸乙酯-水(4 1 5)的上層溶液，極性適宜，供 試品色譜中在與人參皂苷Rg1及三七皂苷R1對照品溶液相對應(yīng)的斑點，分離良好，前后無干 擾；方法3:展開劑為正丁醇-乙酸乙酯-水(1 1 5)的上層溶液，極性偏高，供 試品色譜中在與人參皂苷Rg1及三七皂苷R1對照品溶液相對應(yīng)的斑點與前后斑點未分開；確定分離本發(fā)明組合物制劑中三七皂苷成分的最優(yōu)薄層展開劑為正丁醇_乙酸乙酯-水(1:1:5)的上層溶液。最后確定本發(fā)明組合物制劑中三七的薄層色譜鑒別條件為取本制劑組合物2g，加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，靜置，取上清液10ml，蒸干，殘渣加水25ml使溶解，加10%氫氧化鈉溶液5ml，搖勻，用水飽和正丁醇振搖提取2次，每次 30ml，合并正丁醇液，加水洗滌2次，每次40ml，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加水3ml使溶 解，通過DlOl型大孔吸附樹脂柱，40 60目，濕法裝柱，內(nèi)徑1cm，長25cm，小玻璃柱內(nèi)，待 樹脂沉淀，覆以脫脂棉少許，再添加棉花少許輕壓，用水沖洗并用水浸沒備用。先用水50ml 洗脫，棄去水液，再用70%乙醇25ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為 供試品溶液。另取三七對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液。再取人參皂苷Rgl及三七 皂苷Rl對照品，加甲醇制成每Iml含0. 5mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述三種溶液 各5μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-乙酸乙酯-水(4 1 5)的上層溶液 為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。實驗例5 金錢草含量測定方法本發(fā)明制劑組合物處方中金錢草的有效成份為以槲皮素、山奈素為母核的黃酮類 成分。本發(fā)明中通過測定本發(fā)明組合物中槲皮素、山奈素的含量有助于控制本中成藥制劑 的質(zhì)量，確保臨床用藥的安全、有效。1、色譜柱考察為了保證色譜條件的廣泛適用性，考察不同品牌色譜柱對槲皮素、山奈素的分離， 試驗結(jié)果表明Diamonsil C18 (5 μ m，250mmX4. 6mm)、Agilent ZORBAX Extend-C18(5 μ m, 250mmX4. 6mm) > Agilent ZORBAX Eclipse XDB (5 μ m，250mmX 4. 6mm)均對槲皮素、山奈素 有良好的分離。2、本發(fā)明組合物片中槲皮素、山奈素提取條件的考察為了確保測定結(jié)果真實、準(zhǔn)確，本發(fā)明通過一系列考察，確保制備供試品溶液時將 本發(fā)明組合物片中的槲皮素、山奈素提取完全。選擇正交試驗設(shè)計優(yōu)選影響制劑中成分提取率的3個因素提取溶劑中鹽酸濃 度、提取溶劑量、回流提取時間，每個因素設(shè)置3個水平。試驗設(shè)計如下 按正交表L9(34)安排實驗。實驗方法如下 按表格中條件分別提取9份供試品溶液，精密吸取對照品溶液與供試品溶液各 lOiil，注入液相色譜儀，測定。對實驗測定結(jié)果進行統(tǒng)計分析，獲得本發(fā)明組合物片中槲皮素、山奈素的最優(yōu)提 取條件取本發(fā)明組合物約5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入2%鹽酸甲醇溶液 50ml，密塞，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，再稱定重量，用2%鹽酸甲醇溶液補足減失的 重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。通過實驗確定本發(fā)明組合物顆粒劑中槲皮素、山奈素含量測定的色譜條件及對照 品和供試品制備方法為色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0. 4% 磷酸溶液(48 52)為流動相；檢測波長為360nm。理論板數(shù)按槲皮素峰計算應(yīng)不低于 2500。對照品溶液的制備精密稱取槲皮素對照品及山奈素對照品適量，加甲醇制成每 lml各含槲皮素15 y g，山奈素20 y g的溶液，即得。供試品溶液的制備取本發(fā)明組合物，取約5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密 加入2%鹽酸甲醇溶液50ml，密塞，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，再稱定重量，用2%鹽 酸甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。實驗例6 金錢草含量測定方法學(xué)驗證檢測儀器(室溫檢測):AgilentllOO型高效液相色譜儀色譜柱Agilent Zorbax C184. 6 X 150mm, 5 u m流動相甲醇-0.4%磷酸溶液(48 52)檢測波長360nm對照品來源槲皮素和山奈素(購于中國藥品生物制品檢定所)供試品批號02120401、02120502、02120603供試品制備取本發(fā)明組合物，取約5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入2% 鹽酸甲醇溶液50ml，密塞，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，再稱定重量，用2%鹽酸甲醇溶 液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
對照品溶液的制備精密稱取槲皮素對照品及山奈素對照品適量，加甲醇制成每 lml各含槲皮素15 ii g，山奈素20 ii g的溶液，即得。1.含量測定方法考察1. 1線性關(guān)系考察分別精密吸取槲皮素、山奈素對照品溶液2、6、10、14、18iU注入液相色譜儀，記 錄峰面積，以峰面積積分值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，以槲皮素和山奈素的含量(yg)為橫坐標(biāo)，計算其 回歸方程。槲皮素回歸方程Area = 3. 6027X 104Amt+6. 3193X 103(r = 0. 9999)，線性范圍:30-270u go山奈素回歸方程Area = 3. 8393 X 104Amt+2. 7966 X 104 (r = 0. 9999)，線性范圍40-360 u g。1. 2穩(wěn)定性試驗對照品溶液，分別于配制后0、2、4、6、12、24小時，依法測定。結(jié)果表明槲皮素、山 奈素在24小時內(nèi)基本穩(wěn)定，RSD(% )分別為0. 8,1. 3。1. 3精密度試驗精密吸取供試品溶液(批號02120603) 10 yl，重復(fù)進樣5次，求得相對標(biāo)準(zhǔn)偏差， 槲皮素、山奈素RSD(% )分別為0. 5、0.8，均< 3%01. 4重現(xiàn)性試驗取同一批號(批號02120603)樣品五份，對每份進行測定，求得相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。槲 皮素、山奈素RSD(% )分別為1.5、1.2，均< 3%01.5回收率試驗精密稱取已知含量的同一批號(批號02120603)的樣品2. 5g，分別精密加入一定 量槲皮素、山奈素對照品，測定其含量，計算其回收率。槲皮素回收率為101.0%，RSD(%) =1.8 ；槲皮素回收率為 100. 1%, RSD(% ) =0.8。2.本制劑組合物測定結(jié)果見下表 根據(jù)以上數(shù)據(jù)，將含量限度定為本發(fā)明組合物制劑每lg含金錢草以槲皮素 (C15Hn07)和山奈素(C15H1006)的總量計，不得少于0. 20mg。
具體實施例方式實施例1金錢草 420g 綿萆蘚420g 瞿麥 210g黃柏 250g 三七 42g 川楝子 250g桃仁 210g 烏藥 210g 牛膝 250g
以上九味，三七粉碎成細粉。金錢草、綿萆蘚和黃柏加70%乙醇回流提取2次，每 次1. 5小時，濾過，合并濾液，放置過夜，濾過，濾液備用。其余瞿麥等五味，加水煎煮三次， 每次1小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1. 15 1. 20(50°C )，放冷，加乙醇使 含醇量達70%，冷藏過夜，濾過，濾液與上述金錢草等醇提液合并，回收乙醇并濃縮至稠膏 狀，干燥，粉碎成細粉，加入上述三七細粉及糊精適量，甜菊素15g，混勻，用乙醇適量制成顆 粒，干燥，制成1000g，即得。鑒別(1)取本品5g，加乙醇20ml，置水浴上回流40分鐘，取上清液10ml，加鹽酸1ml，加 熱回流1小時后濃縮至約5ml，加水10ml，用環(huán)己烷20ml振搖提取，提取液蒸干，殘渣加三 氯甲烷2ml使溶解，作為供試品溶液。另取綿萆蘚對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液。再 取薯蕷皂苷元對照品，加甲醇制成每1ml含5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試 驗，吸取供試品溶液5 u 1、對照藥材及對照品溶液各2 u 1，分別點于同一硅膠G薄層板上， 以環(huán)己烷-乙酸乙酯(8 2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以磷鉬酸試液，在105°C加熱至 斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材、對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑 點o(2)取本品2g，加甲醇20ml，超聲處理15分鐘，濾過，濾液濃縮至2ml，作為供試品 溶液。另取黃柏對照藥材O.lg，同法制成對照藥材溶液。再取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇 制成每1ml含0. 5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附 錄VI B)試驗，吸取上述三種溶液各2iU，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁 酮-甲酸-水(10 6 1 1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。 供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；在與對照品色譜 相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的黃色熒光斑點。(3)取本品2g，加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，靜置，取上清液10ml，蒸干，殘渣加 水25ml使溶解，加10 %氫氧化鈉溶液5ml，搖勻，用水飽和正丁醇振搖提取2次，每次30ml， 合并正丁醇液，加水洗滌2次，每次40ml，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加水3ml使溶解， 通過D101型大孔吸附樹脂柱，40 60目，濕法裝柱，內(nèi)徑1cm，長25cm，小玻璃柱內(nèi)，待樹 脂沉淀，覆以脫脂棉少許，再添加棉花少許輕壓，用水沖洗并用水浸沒備用。先用水50ml洗 脫，棄去水液，再用70%乙醇25ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供 試品溶液。另取三七對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液。再取人參皂苷Rgl及三七皂 苷隊對照品，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國 藥典2005年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述三種溶液各5 yl，分別點于同一硅膠G薄層 板上，以正丁醇-乙酸乙酯-水(4 1 5)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以 10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材、對照品色 譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。含量測定照高效液相色譜法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填 充劑；以甲醇-0.4%磷酸溶液(48 52)為流動相；檢測波長為360nm。理論板數(shù)按槲皮素 峰計算應(yīng)不低于2500。對照品溶液的制備精密稱取槲皮素對照品及山奈素對照品適量，加甲醇制成每lml各含槲皮素15 ii g，山奈素20 ii g的溶液，即得。供試品溶液的制備取裝量差異項下的本品，研細，取約5g，精密稱定，置具塞錐 形瓶中，精密加入2%鹽酸甲醇溶液50ml，密塞，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，再稱定重 量，用2%鹽酸甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 iU，注入液相色譜儀，測 定，即得。本品每lg含金錢草以槲皮素(C15Hn07)和山奈素(C15H1Q06)的總量計，不得少于 0. 20mg。功能與主治清熱利濕，活血通淋。用于慢性非特異性前列腺炎屬濕熱下注，瘀血 阻滯證者，癥見尿頻，尿急、尿道灼熱澀痛，尿濁，尿道口滴白、舌黯或紅或有瘀點瘀斑，苔薄 黃或黃膩等。
-次1袋，用法與用量開水沖服。-規(guī)格每袋裝8g實施例2金錢草 360g 綿萆蘚黃柏 250g 三七桃仁 230g 烏藥以上九味，三七粉碎成細粉,
日3次。療程4周。
460g 62g 180g
子
麥楝膝
臺 MM hi
晷一/
210g 280g 250g
金錢草、綿萆蘚和黃柏加70%乙醇回流提取2次，每 次1. 5小時，濾過，合并濾液，放置過夜，濾過，濾液備用。其余瞿麥等五味，加水煎煮三次， 每次1小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1. 15 1. 20(50°C )，放冷，加乙醇使 含醇量達70%，冷藏過夜，濾過，濾液與上述金錢草等醇提液合并，回收乙醇并濃縮至稠膏 狀，干燥，粉碎成細粉，加入上述三七細粉及糊精適量，甜菊素15g，混勻，用乙醇適量制成顆 粒，干燥，制成1000g，即得。
實施例3 金錢草420g 黃柏 250g 桃仁 210g 三七粉碎成細粉。
綿萆蘚 420g 瞿麥 210g 三七 42g 川楝子 250g 烏藥 210g 牛膝 250g
金錢草、綿萆蘚和黃柏加70%乙醇回流提取2次，每次1. 5小 時，濾過，合并濾液，放置過夜，濾過，濾液備用。其余瞿麥等五味，加水煎煮三次，每次1小 時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1. 15 1. 20(50°C )，放冷，加乙醇使含醇量達 70 %，冷藏過夜，濾過，濾液與上述金錢草等醇提液合并，回收乙醇并濃縮至稠膏狀，干燥， 粉碎成細粉，加入上述三七細粉及糊精適量，甜菊素15g，混勻，用乙醇適量制成顆粒，裝膠 囊，即得。
權(quán)利要求
一種清熱利濕，活血通淋的中藥組合物，其特征在于該藥物組合物的原料藥組成為金錢草300-500重量份、綿萆薢300-500重量份、瞿麥150-300重量份、黃柏150-350重量份、三七30-60重量份、川楝子150-350重量份、桃仁150-300重量份、烏藥150-300重量份、牛膝150-350重量份。
2.如權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于該藥物組合物的原料藥組成為 金錢草420重量份、綿萆蘚420重量份、瞿麥210重量份、黃柏250重量份、三七42重量份、川楝子250重量份、桃仁210重量份、烏藥210重量份、牛膝250重量份。
3.如權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為三七粉碎成細粉。金錢草、綿萆蘚和黃柏加50-90%乙醇回流提取1-5次，每次0. 5-3. 0 小時，濾過，合并濾液，放置過夜，濾過，濾液備用。其余瞿麥等五味，加水煎煮1-5次，每次 0. 5-2小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1. 10 1. 30 (50°C )，放冷，加乙醇使含 醇量達50-90%，冷藏過夜，濾過，濾液與上述金錢草等醇提液合并，干燥，粉碎成細粉，加入 上述三七細粉，按照常規(guī)工藝，制成臨床或藥學(xué)上可接受的劑型，包括但不限于片劑、膠囊 齊U、散劑、軟膠囊劑、滴丸、蜜丸、丸劑、顆粒劑、蜜煉膏劑、緩釋制劑、速釋制劑、控釋制劑或 口服液體制劑。
4.如權(quán)利要求3所述的藥物組合物顆粒劑的制備方法，其特征在于該方法為三七粉碎成細粉。金錢草、綿萆蘚和黃柏加70%乙醇回流提取2次，每次1. 5小時，濾 過，合并濾液，放置過夜，濾過，濾液備用。其余瞿麥等五味，加水煎煮三次，每次1小時，合 并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1. 15 1.20(50°C )，放冷，加乙醇使含醇量達70%， 冷藏過夜，濾過，濾液與上述金錢草等醇提液合并，回收乙醇并濃縮至稠膏狀，干燥，粉碎成 細粉，加入上述三七細粉及糊精適量，甜菊素15g，混勻，用乙醇適量制成顆粒，干燥即得。
5.如權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物制劑的質(zhì)量檢測方法，該方法包括如下步驟 A、鑒別取本發(fā)明組合物制劑2-10g，加乙醇10-30ml，置水浴上回流15-60分鐘，取上清液2-15ml，加鹽酸0. 5-2ml，加熱回流0. 5-2小時后濃縮至約1-lOml，加水5_20ml，用環(huán) 己烷5-30ml振搖提取，提取液蒸干，殘渣加三氯甲烷l_3ml使溶解，作為供試品溶液；另取 綿萆蘚對照藥材l_5g，同法制成對照藥材溶液；再取薯蕷皂苷元對照品，加甲醇制成每1ml 含l-10mg的溶液，作為對照品溶液；吸取供試品溶液、對照藥材及對照品溶液各2-10 yl， 分別點于同一硅膠G薄層板上，以14-5 2比例的環(huán)己烷-乙酸乙酯混合溶液為展開劑， 展開，取出，晾干，噴以磷鉬酸試液，在105°C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對 照藥材、對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；B鑒別取本發(fā)明組合物制劑2-4g，加甲醇10-30ml，超聲處理5_45分鐘，濾過，濾液 濃縮至l_4ml，作為供試品溶液；另取黃柏對照藥材0. 05-lg,同法制成對照藥材溶液；再取 鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1ml含0. 1-lmg的溶液，作為對照品溶液；吸取上述三種 溶液各2 yl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以20-5 4-8 1 1比例的乙酸乙酯-丁 酮-甲酸-水混合溶劑為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜 中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；在與對照品色譜相應(yīng)的位置 上，顯相同顏色的黃色熒光斑點；C鑒別取本發(fā)明組合物制劑0. 5-5g，加甲醇5-50ml，超聲處理5_60分鐘，靜置，取上清液5-20ml，蒸干，殘渣加水10-50ml使溶解，加10%氫氧化鈉溶液l_10ml，搖勻，用水飽 和正丁醇振搖提取1-3次，每次10_50ml，合并正丁醇液，加水洗滌1-3次，每次20-50ml，棄 去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加水l_5ml使溶解，通過D101型大孔吸附樹脂柱，40 60目， 濕法裝柱，內(nèi)徑1cm，長25cm，小玻璃柱內(nèi)，待樹脂沉淀，覆以脫脂棉少許，再添加棉花少許 輕壓，用水沖洗并用水浸沒備用；先用水20-100ml洗脫，棄去水液，再用70%乙醇10-50ml 洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇0. 5-2ml使溶解，作為供試品溶液；另取三七對照藥材 0. l_2g，同法制成對照藥材溶液；再取人參皂苷Rgl及三七皂苷R1對照品，加甲醇制成每 lml含0. l_2mg的溶液，作為對照品溶液；吸取上述三種溶液各1-10 iU，分別點于同一硅膠 G薄層板上，以10-1 1 4-7比例的正丁醇-乙酸乙酯-水混合溶液的上層溶液為展開 劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜 中，在與對照藥材、對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；D含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以 30-60 40-70比例的甲醇-0. 4%磷酸溶液混合溶劑為流動相；檢測波長為330-380nm ；對 照品溶液的制備精密稱取槲皮素對照品及山奈素對照品適量，加甲醇制成每lml各含槲 皮素5-25 y g，山奈素10-30 u g的溶液，即得；供試品溶液的制備取本發(fā)明組合物制劑約 l-10g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入2%鹽酸甲醇溶液25-75ml，密塞，稱定重量， 加熱回流0. 5-2小時，放冷，再稱定重量，用2%鹽酸甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，濾過， 取續(xù)濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5-20 yl，注入液相色 譜儀，測定，即得；本發(fā)明組合物制劑每lg含金錢草以槲皮素和山奈素的總量計，不得少于 0. 20mg。
6.如權(quán)利要求5所述的藥物組合物制劑的質(zhì)量檢測方法，該方法包括如下步驟綿萆蘚薄層鑒別取本發(fā)明組合物制劑5g，加乙醇20ml，置水浴上回流40分鐘，取上 清液10ml，加鹽酸1ml，加熱回流1小時后濃縮至約5ml，加水10ml，用環(huán)己烷20ml振搖提 取，提取液蒸干，殘渣加三氯甲烷2ml使溶解，作為供試品溶液；另取綿萆蘚對照藥材2g，同 法制成對照藥材溶液；再取薯蕷皂苷元對照品，加甲醇制成每lml含5mg的溶液，作為對照 品溶液；吸取供試品溶液5iU、對照藥材及對照品溶液各2iU，分別點于同一硅膠G薄層板 上，以8 2的環(huán)己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以磷鉬酸試液，在105°C加 熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材、對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色 的斑點；黃柏薄層鑒別取本發(fā)明組合物制劑2g，加甲醇20ml，超聲處理15分鐘，濾過，濾液 濃縮至2ml，作為供試品溶液；另取黃柏對照藥材0. lg,同法制成對照藥材溶液；再取鹽酸 小檗堿對照品，加甲醇制成每lml含0. 5mg的溶液，作為對照品溶液；吸取上述三種溶液各 2ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以10 `6 1 1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水為 展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相 應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的黃色熒 光斑點；三七薄層鑒別取本發(fā)明組合物制劑2g，加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，靜置，取上清 液10ml，蒸干，殘渣加水25ml使溶解，加10%氫氧化鈉溶液5ml，搖勻，用水飽和正丁醇振搖 提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，加水洗滌2次，每次40ml，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加水3ml使溶解，通過D101型大孔吸附樹脂柱，40 60目，濕法裝柱，內(nèi)徑1cm，長25cm， 小玻璃柱內(nèi)，待樹脂沉淀，覆以脫脂棉少許，再添加棉花少許輕壓，用水沖洗并用水浸沒備 用；先用水50ml洗脫，棄去水液，再用70 %乙醇25ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇 lml使溶解，作為供試品溶液；另取三七對照藥材0. 5g，同法制成對照藥材溶液；再取人參 皂苷Rgl及三七皂苷R1對照品，加甲醇制成每lml含0. 5mg的溶液，作為對照品溶液；吸取 上述三種溶液各5 yl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以4 1 5正丁醇-乙酸乙酯-水 的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色 清晰；供試品色譜中，在與對照藥材、對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以 48 52的甲醇-0.4%磷酸溶液為流動相；檢測波長為360nm;對照品溶液的制備精密稱 取槲皮素對照品及山奈素對照品適量，加甲醇制成每lml各含槲皮素15 y g，山奈素20 y g 的溶液，即得；供試品溶液的制備取本發(fā)明組合物制劑約5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中， 精密加入2%鹽酸甲醇溶液50ml，密塞，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，再稱定重量，用 2%鹽酸甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法分別精密吸取對 照品溶液與供試品溶液各10yl，注入液相色譜儀，測定，即得。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種清熱利濕，活血通淋的中藥組合物，該組合物由金錢草、綿萆薢、瞿麥、黃柏、三七等制成臨床或藥學(xué)上可接受的劑型，該中藥組合物具有很好的清熱利濕，活血通淋的作用，具有顯著的抗炎、消腫效應(yīng)；本發(fā)明中藥組合物制劑的質(zhì)量檢測方法檢測專屬性好、穩(wěn)定性高、重現(xiàn)性好、精密度高，更加適合工業(yè)化的生產(chǎn)，真正確保了臨床用藥的安全、有效、可靠。
文檔編號G01N30/90GK101856449SQ20091008176
公開日2010年10月13日 申請日期2009年4月10日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月10日
發(fā)明者付建家, 付立家 申請人:北京亞東生物制藥有限公司