專利名稱：：用于診斷、風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)、和監(jiān)測(cè)孤獨(dú)癥譜系病癥的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及孤獨(dú)癥譜系病癥(AutismSpectrumDisorder)(ASD)的診斷，風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)，和監(jiān)測(cè)。更具體而言，本發(fā)明涉及小分子或代謝物的測(cè)量，所述小分子或代謝物被發(fā)現(xiàn)在具有ASD臨床表現(xiàn)的人和不表現(xiàn)ASD癥狀的受試者之間具有不同的多度。另外，本發(fā)明涉及關(guān)于設(shè)計(jì)用來(lái)改善與ASD有關(guān)的生物化學(xué)異常的推定治療策略的監(jiān)測(cè)。背景孤獨(dú)癥是未知來(lái)源的終身病癥。所述病癥的特征在于行為的、發(fā)育的、神經(jīng)病理學(xué)的、和感覺(jué)的異常(美國(guó)精神病學(xué)協(xié)會(huì)(AmericanPsychiatricAssociation)1994)并且通常在3和10歲之間被診斷出，在5-8歲的兒童中觀察到峰值流行率(Yeargin-Allsopp，Rice等.2003)。在這時(shí)，下降的小腦浦肯野細(xì)胞密度(Courchesne1997；Palmen,vanEngeland等·2004)，增加的氧化壓力(Yorbik，Sayal等·2002；Sogut,Zoroglu等·2003；Chauhan,Chauhan等.2004；James,Cutler等.2004；Zoroglu,Armutcu等.2004；Chauhan和Chauhan2006)，和異常的甲硫氨酸/高半胱氨酸代謝(James，Cutler等.2004)是孤獨(dú)癥的唯一有力的生物學(xué)特征。雖然存在關(guān)于孤獨(dú)癥是具有出生前來(lái)源(Courchesne,Redcay等.2004)還是出生后來(lái)源(Kern和Jones2006)的爭(zhēng)論，但是一般接受的是，癥狀和病理貫穿受試者的整個(gè)生命過(guò)程而持續(xù)(Bauman和Kemper2005)。這些發(fā)現(xiàn)提示，不管其來(lái)源，孤獨(dú)癥中存在基礎(chǔ)性和進(jìn)行性的生物化學(xué)異常。然而，尚未報(bào)告這樣的與ASD的病原學(xué)或癥候?qū)W有關(guān)的基礎(chǔ)生物化學(xué)異常。因而，沒(méi)有對(duì)于孤獨(dú)癥的生物化學(xué)測(cè)試。因此，存在對(duì)于可以在推測(cè)患有ASD的受試者中診斷ASD的方法或可以確定處于ASD風(fēng)險(xiǎn)中的受試者的方法的需要，并且還存在對(duì)于可以幫助監(jiān)測(cè)ASD治療的治療策略的方法的需要。概述已經(jīng)確定，患有臨床診斷的ASD的受試者，相對(duì)于非ASD受試者，在他們的血漿中具有不同的小分子或代謝物多度。另外已經(jīng)確定，一些具有很少或無(wú)ASD癥狀的高風(fēng)險(xiǎn)受試者(即家族史)顯示類似于具有完全臨床ASD表型的受試者的生物化學(xué)表型。因而，提供了診斷ASD和診斷升高的ASD風(fēng)險(xiǎn)的方法。已經(jīng)確定，臨床診斷患有ASD的受試者可以被生物化學(xué)地表征為具有一般由下列任一項(xiàng)描述的表型a)升高水平的含飽和或單不飽和極長(zhǎng)鏈脂肪酸(VLCFA)的磷脂；b)升高水平的含二十二碳六烯酸(22:6，DHA)的磷脂；c)升高水平的含多不飽和VLCFA的磷脂；或d)其組合。另外已經(jīng)確定，實(shí)驗(yàn)的ASD治療劑(乙?；鈮A)可以改變上述生物化學(xué)ASD表型，以使得一些ASD生物化學(xué)標(biāo)記物返回至非ASD水平，并使一些ASD生物化學(xué)標(biāo)記物保持不變。另外已經(jīng)確定，服用乙?；鈮A的ASD受試者顯示生物化學(xué)改變，所述改變使他們區(qū)別于未服用肉堿的ASD受試者以及未服用乙?；鈮A的非ASD受試者。因而，提供了一般用于監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)ASD治療劑的方法和用于具體監(jiān)測(cè)乙?；鈮A治療的方法。提供了用于區(qū)別性生物化學(xué)表征呈現(xiàn)ASD的受試者的方法。這個(gè)區(qū)別性生物化學(xué)表征對(duì)于呈現(xiàn)ASD癥狀的受試者的治療和管理具有一定后果(ramifications)。首先，已經(jīng)確定，具有類似的臨床表型的ASD受試者具有顯著不同的生物化學(xué)表型。這些發(fā)現(xiàn)表明，根據(jù)受試者的生物化學(xué)表型，可能需要開(kāi)發(fā)不同的治療策略用于不同的ASD受試者。更重要的是，本發(fā)現(xiàn)表明，優(yōu)選將關(guān)于診斷患有ASD的受試者中的ASD治療劑劑量和治療效力的監(jiān)測(cè)針對(duì)該具體的受試者生物化學(xué)特性進(jìn)行個(gè)體化。例如，在顯示高飽和VLCFA水平的受試者中，飽和VLCFA水平的監(jiān)測(cè)可以代表有效治療或劑量的最靈敏決定因素，但是這樣的測(cè)量對(duì)于顯示高的多不飽和VLCFA水平和正常的飽和VLCFA水平的ASD受試者可能幾乎沒(méi)有或沒(méi)有價(jià)值。在一個(gè)示范性的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種用于診斷人類受試者關(guān)于孤獨(dú)癥譜系病癥(ASD)的健康狀態(tài)或健康狀態(tài)的改變或確定人類受試者的ASD風(fēng)險(xiǎn)的方法，所述方法包括下列步驟a)分析從患者獲得的樣品以獲得一種或多種精確質(zhì)量的定量數(shù)據(jù)；b)將所述一種或多種精確質(zhì)量的定量數(shù)據(jù)與從一份或多份參考樣品獲得的相應(yīng)數(shù)據(jù)進(jìn)行比較；和c)使用所述比較，基于所述定量數(shù)據(jù)和所述一種或多種精確質(zhì)量的相應(yīng)數(shù)據(jù)之間的差異，來(lái)診斷人類受試者關(guān)于ASD的健康狀態(tài)或健康狀態(tài)的改變；其中所述一種或多種精確質(zhì)量是在表2至10的任何一個(gè)中列出的。在另一個(gè)示范性的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種用于診斷人類受試者關(guān)于孤獨(dú)癥譜系病癥(ASD)的健康狀態(tài)或健康狀態(tài)的改變或確定人類受試者的ASD風(fēng)險(xiǎn)的方法，所述方法包括下列步驟a)分析從患者獲得的樣品以獲得下列一項(xiàng)或多項(xiàng)的定量數(shù)據(jù)含飽和或單不飽和極長(zhǎng)鏈脂肪酸(VLCFA)的磷脂；含二十二碳六烯酸(22:6，DHA)的磷脂；DHA前體(24:5,24:6)；DHAβ-氧化的分解代謝產(chǎn)物(20:6)；含多不飽和VLCFA的磷脂；和其組合；b)將所述定量數(shù)據(jù)與從一份或多份參考樣品獲得的相應(yīng)數(shù)據(jù)進(jìn)行比較；和c)使用所述比較，基于在與從一份或多份參考樣品獲得的相應(yīng)數(shù)據(jù)相比時(shí)具有下列特性之一，來(lái)診斷所述人類受試者關(guān)于ASD的健康狀態(tài)或健康狀態(tài)的改變升高水平的含飽和或單不飽和極長(zhǎng)鏈脂肪酸(VLCFA)的磷脂；升高水平的含二十二碳六烯酸(22:6，DHA)的磷脂；升高水平的DHA前體(24:5，24:6)；升高水平的DHAβ-氧化分解代謝產(chǎn)物(20:6)；升高水平的含多不飽和VLCFA的磷脂；或其組合。在另一個(gè)示范性的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種用于診斷人類受試者關(guān)于孤獨(dú)癥譜系病癥(ASD)的健康狀態(tài)或健康狀態(tài)的改變或確定人類受試者的ASD風(fēng)險(xiǎn)的方法，所述方法包括下列步驟a)分析從患者獲得的樣品以獲得一種或多種代謝物的定量數(shù)據(jù)；b)將所述一種或多種代謝物的定量數(shù)據(jù)與從一份或多份參考樣品獲得的相應(yīng)數(shù)據(jù)進(jìn)行比較；和c)使用所述比較，基于所述定量數(shù)據(jù)和所述一種或多種代謝物的相應(yīng)數(shù)據(jù)之間的差異，來(lái)診斷人類受試者關(guān)于ASD的健康狀態(tài)或健康狀態(tài)的改變；其中所述一種或多種代謝物是表3至10的任何一個(gè)中列出的。在另一個(gè)示范性的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種用于診斷人類受試者關(guān)于孤獨(dú)癥譜系病癥(ASD)的健康狀態(tài)或健康狀態(tài)的改變或確定人類受試者的ASD風(fēng)險(xiǎn)的方法，所述方法包括將來(lái)自所述人類受試者的樣品的包括表2至10任何一個(gè)中列出的一種或多種精確質(zhì)量的定量數(shù)據(jù)與從一份或多份參考樣品獲得的相應(yīng)數(shù)據(jù)進(jìn)行比較；其中所述人類受試者關(guān)于孤獨(dú)癥譜系病癥(ASD)的健康狀態(tài)或健康狀態(tài)的改變或ASD的風(fēng)險(xiǎn)基于在來(lái)自所述人類受試者的樣品和一份或多份參考樣品之間的一種或多種精確質(zhì)量強(qiáng)度上的差異。在另一個(gè)示范性的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種用于診斷人類受試者關(guān)于孤獨(dú)癥譜系病癥(ASD)的健康狀態(tài)或健康狀態(tài)的改變或確定人類受試者的ASD風(fēng)險(xiǎn)的方法，所述方法包括將來(lái)自所述人類受試者的樣品的包括表3至10任何一個(gè)中列出的一種或多種代謝物的定量數(shù)據(jù)與從一份或多份參考樣品獲得的相應(yīng)數(shù)據(jù)進(jìn)行比較；其中所述人類受試者關(guān)于孤獨(dú)癥譜系病癥(ASD)的健康狀態(tài)或健康狀態(tài)的改變或ASD的風(fēng)險(xiǎn)基于在來(lái)自所述人類受試者的樣品和一份或多份參考樣品之間的一種或多種代謝物強(qiáng)度上的差異。附圖簡(jiǎn)述由以下在其中參考附圖的描述，本發(fā)明的這些及其它特征將變得更顯而易見(jiàn)，其中圖1是孤獨(dú)癥受試者血漿中PtdEtn(磷脂酰乙醇胺)改變的概述；圖2是說(shuō)明經(jīng)過(guò)一年過(guò)程從診斷患有孤獨(dú)癥的個(gè)體受試者收集的跟蹤(longitudinal)樣品中含關(guān)鍵DHA和花生四烯酸(AA)的PlsEtn(縮醛磷脂酰乙醇胺(plasmenylethanolamine))和PtdEtn的水平對(duì)比于對(duì)照的圖。數(shù)值是對(duì)照-標(biāo)準(zhǔn)化的并且表示為與PtdEtn16:0/18:0的比的平均值+/-SEM，對(duì)于每名兒童η=3，對(duì)于對(duì)照η=30,*,ρ<0.05對(duì)比于對(duì)照；圖3是說(shuō)明經(jīng)過(guò)一年過(guò)程從診斷患有孤獨(dú)癥的個(gè)體受試者收集的跟蹤樣品中含關(guān)鍵VLCFA的PtdEtn水平對(duì)比于對(duì)照的圖。數(shù)值是對(duì)照_標(biāo)準(zhǔn)化的并且表示為與PtdEtn16:0/18:0的比的平均值+/-SEM，對(duì)于每名兒童η=3，對(duì)于對(duì)照η=30，*，ρ<0.05對(duì)比于對(duì)照；圖4是說(shuō)明經(jīng)過(guò)一年過(guò)程從診斷患有孤獨(dú)癥的個(gè)體受試者收集的跟蹤樣品中肉堿和鄰_乙酰肉堿水平對(duì)比于對(duì)照的圖。數(shù)值是對(duì)照_標(biāo)準(zhǔn)化的并且表示為平均值+/-SEM，對(duì)于每名兒童η=3，對(duì)于對(duì)照η=30廣，ρ<0.05對(duì)比于對(duì)照；圖5是說(shuō)明經(jīng)過(guò)一年過(guò)程從服用肉堿增補(bǔ)劑的孤獨(dú)癥受試者[η=12(4X3)]收集的跟蹤樣品中含關(guān)鍵DHA和AA的PlsEtn和含VLCFA的PtdEtn的水平對(duì)比于未服用肉堿增補(bǔ)劑的受試者[η=33(11X3)]，和對(duì)比于對(duì)照[η=30(10X3)]的圖。數(shù)值是對(duì)照-標(biāo)準(zhǔn)化的并且表示為與PtdEtnl6:0/18:0的的比平均值+/-SEM，ρ<0.05對(duì)比于對(duì)照，#,P<0.05對(duì)比于孤獨(dú)癥，無(wú)肉堿；和圖6是說(shuō)明經(jīng)過(guò)一年過(guò)程從孤獨(dú)癥受試者和他們的無(wú)癥狀同胞收集的跟蹤樣品中含關(guān)鍵DHA的PlsEtn和PtdEtn和含AA的PlsEtn的家族內(nèi)比較的圖。數(shù)值是對(duì)照_標(biāo)準(zhǔn)化的表示為與PtdEtn16:0/18:0的比的平均值+/-SEM，*，ρ<0.05對(duì)比于對(duì)照。詳述已經(jīng)確定了被發(fā)現(xiàn)在臨床診斷的ASD，和不表達(dá)ASD癥狀的正?；颊咧g具有不同多度的小分子或代謝物?；谶@些差異，可以確定受試者關(guān)于ASD的健康狀態(tài)或健康狀態(tài)的改變。提供了用于診斷受試者健康狀態(tài)，例如用于診斷ASD的存在或缺乏的方法，且提供了用于診斷健康狀態(tài)的改變，例如用于監(jiān)測(cè)ASD治療的方法。本發(fā)明的用于診斷受試者關(guān)于ASD的健康狀態(tài)或健康狀態(tài)的改變的示范性方法包括下列步驟a)分析從人類受試者獲得的樣品以獲得一種或多種代謝物標(biāo)記物或精確質(zhì)量的定量數(shù)據(jù)；b)將所述一種或多種代謝物標(biāo)記物或精確質(zhì)量的定量數(shù)據(jù)與從一份或多份參考樣品獲得的相應(yīng)數(shù)據(jù)進(jìn)行比較；和c)使用所述比較以得出受試者健康狀態(tài)或健康狀態(tài)改變的確定。所述示范性方法可以另外包括從用于分析的人類受試者獲得一份或多份樣品的預(yù)備步驟。通過(guò)術(shù)語(yǔ)“代謝物”，意指特定的小分子，其水平或強(qiáng)度是在樣品中測(cè)量的，并且可以將其用作標(biāo)記物以診斷疾病狀態(tài)。這些小分子還可以在本文中稱為“代謝物標(biāo)記物”，“代謝物成分”，“生物標(biāo)記物”或“生物化學(xué)標(biāo)記物”。在一個(gè)示范性實(shí)施方案中，提供用于診斷受試者的生物化學(xué)ASD表型的方法，所述方法包括下列步驟將來(lái)自一名或多名患有可能的ASD的患者的一份或多份樣品引入到高分辨率質(zhì)譜儀(例如，并且不希望是限制性的，傅里葉變換離子回旋共振質(zhì)譜儀(FTMS))中；獲得一種或多種代謝物標(biāo)記物的定量數(shù)據(jù)；任選地，創(chuàng)建所述定量數(shù)據(jù)的數(shù)據(jù)庫(kù)；將來(lái)自所述樣品的定量數(shù)據(jù)與從非ASD受試者收集的相應(yīng)參考數(shù)據(jù)進(jìn)行比較；和使用所述比較來(lái)確定所述受試者的生物化學(xué)ASD表型?？梢曰谠趯?lái)所述自樣品的定量數(shù)據(jù)與相應(yīng)的參考數(shù)據(jù)比較時(shí)確定的差異來(lái)確定受試者的生物化學(xué)ASD表型。將ASD和非ASD受試者之間的差異描述在表2，11-18的任何一個(gè)中。在另一個(gè)示范性實(shí)施方案中，提供用于確定處于ASD風(fēng)險(xiǎn)中的受試者的方法，所述方法包括下列步驟將來(lái)自一名或多名未知ASD狀態(tài)的患者的一份或多份樣品引入到高分辨率質(zhì)譜儀(例如，并且不希望是限制性的，傅里葉變換離子回旋共振質(zhì)譜儀(FTMS))中；獲得表2-10的任何一個(gè)中列出的一種或多種母體質(zhì)量的定量數(shù)據(jù)；任選地，創(chuàng)建所述定量數(shù)據(jù)的數(shù)據(jù)庫(kù)；將來(lái)自所述樣品的定量數(shù)據(jù)與從非ASD受試者收集的相應(yīng)參考數(shù)據(jù)進(jìn)行比較；和使用所述比較來(lái)確定所述受試者是否具有升高的ASD風(fēng)險(xiǎn)。在另一個(gè)示范性實(shí)施方案中，提供用于監(jiān)測(cè)ASD治療的方法，所述方法包括下列步驟將來(lái)自一名或多名ASD受試者的多份樣品引入到高分辨率質(zhì)譜儀(例如，并且不希望是限制性的，傅里葉變換離子回旋共振質(zhì)譜儀(FTMS))中；獲得表2-10的任何一個(gè)中列出的一種或多種母體質(zhì)量的定量數(shù)據(jù)；任選地，創(chuàng)建所述定量數(shù)據(jù)的數(shù)據(jù)庫(kù)；將來(lái)自多份樣品的定量數(shù)據(jù)相互比較并且與從非ASD受試者收集的相應(yīng)參考數(shù)據(jù)比較，和/或與從受試者的治療前階段或早期治療階段預(yù)先收集的定量數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，和使用所述比較來(lái)確定治療策略對(duì)于所述受試者的基礎(chǔ)生物化學(xué)表型是否具有正效應(yīng)、負(fù)效應(yīng)或無(wú)效應(yīng)。在另一個(gè)示范性實(shí)施方案中，提供用于診斷受試者的生物化學(xué)ASD表型的方法，所述方法包括下列步驟將來(lái)自一名或多名具有臨床診斷的ASD的患者的一份或多份樣品引入到多級(jí)質(zhì)譜儀(例如，并且不希望是限制性的，三重四極桿質(zhì)譜儀(TQ))中；獲得表3-10的任何一個(gè)中列出的一種或多種代謝物的定量數(shù)據(jù)；任選地，創(chuàng)建所述定量數(shù)據(jù)的數(shù)據(jù)庫(kù)；將來(lái)自所述樣品的定量數(shù)據(jù)與從非ASD受試者收集的相應(yīng)參考數(shù)據(jù)進(jìn)行比較；和使用所述比較來(lái)確定所述受試者是否患有ASD。在另一個(gè)示范性實(shí)施方案中，提供用于確定處在ASD風(fēng)險(xiǎn)中的受試者的方法，所述方法包括下列步驟將來(lái)自一名或多名未知ASD狀態(tài)的受試者的一份或多份樣品引入到多級(jí)質(zhì)譜儀(例如，并且不希望是限制性的，三重四極桿質(zhì)譜儀(TQ))中；獲得表3-10的任何一個(gè)中列出的一種或多種代謝物的定量數(shù)據(jù)；任選地，創(chuàng)建所述定量數(shù)據(jù)的數(shù)據(jù)庫(kù)；將來(lái)自所述樣品的定量數(shù)據(jù)與從非ASD受試者收集的相應(yīng)參考數(shù)據(jù)進(jìn)行比較；和使用所述比較來(lái)確定所述受試者是否具有升高的ASD風(fēng)險(xiǎn)。在另一個(gè)示范性實(shí)施方案中，提供用于監(jiān)測(cè)ASD治療的方法，所述方法包括下列步驟將來(lái)自一名或多名ASD受試者的多份樣品引入到多級(jí)質(zhì)譜儀(例如，并且不希望是限制性的，三重四極桿質(zhì)譜儀(TQ))中；獲得表3-10的任何一個(gè)中列出的一種或多種代謝物的定量數(shù)據(jù)；任選地，創(chuàng)建所述定量數(shù)據(jù)的數(shù)據(jù)庫(kù)；將來(lái)自所述多份樣品的定量數(shù)據(jù)相互比較和/或與從非ASD受試者收集的相應(yīng)參考數(shù)據(jù)比較，和/或與從所述受試者的治療前階段或早期治療階段預(yù)先收集的定量數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，和使用所述比較來(lái)確定治療策略對(duì)于所述受試者的基礎(chǔ)生物化學(xué)表型是否具有正效應(yīng)、負(fù)效應(yīng)或無(wú)效應(yīng)。在另一個(gè)示范性實(shí)施方案中，提供用于診斷受試者的生物化學(xué)ASD表型的方法，所述方法包括下列步驟從一名或多名ASD受試者獲得在表2-10的任何一個(gè)中列出的一種或多種代謝物的定量數(shù)據(jù)；任選地，創(chuàng)建所述定量數(shù)據(jù)的數(shù)據(jù)庫(kù)；將來(lái)自所述樣品的定量數(shù)據(jù)與從非ASD受試者收集的參考數(shù)據(jù)進(jìn)行比較；和使用所述比較來(lái)確定所述受試者是否患有ASD。在另一個(gè)示范性實(shí)施方案中，提供用于確定處在ASD風(fēng)險(xiǎn)中的受試者的方法，所述方法包括下列步驟從一名或多名未知ASD狀態(tài)的受試者獲得在表2-10的任何一個(gè)中列出的一種或多種代謝物的定量數(shù)據(jù)；任選地，創(chuàng)建所述定量數(shù)據(jù)的數(shù)據(jù)庫(kù)；將來(lái)自所述樣品的定量數(shù)據(jù)與從非ASD受試者收集的參考數(shù)據(jù)進(jìn)行比較；和使用所述比較來(lái)確定所述受試者是否具有升高的ASD風(fēng)險(xiǎn)。在另一個(gè)示范性實(shí)施方案中，提供用于監(jiān)測(cè)ASD治療的方法，所述方法包括下列步驟從由一名或多名ASD受試者收集的多份樣品獲得表2-10的任何一個(gè)中列出的一種或多種代謝物的定量數(shù)據(jù)；任選地，創(chuàng)建所述定量數(shù)據(jù)的數(shù)據(jù)庫(kù)；將來(lái)自所述多份樣品的定量數(shù)據(jù)相互比較和/或與從非ASD受試者收集的相應(yīng)參考數(shù)據(jù)進(jìn)行比較和/或與從所述受試者的治療前階段或早期治療階段預(yù)先收集的定量數(shù)據(jù)進(jìn)行比較；和使用所述比較來(lái)確定治療策略對(duì)于所述受試者的基礎(chǔ)生物化學(xué)表型是否具有正效應(yīng)、負(fù)效應(yīng)或無(wú)效應(yīng)。如對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該明顯地，除了以上說(shuō)明的那些以外的其它分析技術(shù)可以用于量化表2-10中列出的代謝物，包括化學(xué)顯色定量分析(UV，或其它波長(zhǎng))，基于抗體的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISAs)，關(guān)于核酸檢測(cè)測(cè)定的基于芯片的和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，基于珠的核酸檢測(cè)方法，探針(dipstick)化學(xué)測(cè)定或其它化學(xué)反應(yīng)，圖像分析諸如磁共振成像(MRI)，正電子發(fā)射體層攝影(PET)掃描，計(jì)算機(jī)體層攝影(CT)掃描，核磁共振(NMR)，和多種基于質(zhì)譜法的系統(tǒng)。如上所述，本發(fā)明的用于診斷受試者關(guān)于ASD的健康狀態(tài)或健康狀態(tài)的改變的示范性方法包括下列步驟a)分析從人類受試者獲得的樣品以獲得一種或多種代謝物標(biāo)記物的定量數(shù)據(jù)；b)將所述一種或多種代謝物標(biāo)記物的定量數(shù)據(jù)與從一份或多份參考樣品獲得的相應(yīng)數(shù)據(jù)進(jìn)行比較；和c)使用所述比較，來(lái)得出所述受試者健康狀態(tài)或健康狀態(tài)改變的確定。所述示范性方法可以另外包括從用于分析的人類受試者獲得一份或多份樣品的預(yù)備步驟。分析樣品的步驟(步驟a)可以包括使用質(zhì)譜儀(MS)分析樣品。例如，并且不希望是限制性的，這樣的質(zhì)譜儀可以是FTMS，軌道阱(orbitrap)，飛行時(shí)間(TOF)，磁式扇形(magneticsector)，線性離子阱(LIT)或四極型。備選地，質(zhì)譜儀可以裝有另外的預(yù)檢測(cè)濾質(zhì)器。例如，并且不希望是限制性的，這樣的儀器通常稱為四極-FTMS(Q-FTMS)，四極-TOF(Q-TOF)或三重四極(TQ或QQQ)。另外，質(zhì)譜儀可以以母離子檢測(cè)模式(MS)或以MSn模式運(yùn)行，其中η>=2。MSn指這樣的情況，其中母離子(parention)通過(guò)碰撞誘導(dǎo)的離解(CID)或其它碎裂步驟分裂以產(chǎn)生碎片離子，并且然后通過(guò)質(zhì)譜儀檢測(cè)一種或多種所述碎片。然后這樣的碎片可以進(jìn)一步地分裂以產(chǎn)生另外的碎片。備選地，可以使用液相或氣相層析系統(tǒng)或通過(guò)直接注射，將樣品引入到質(zhì)譜儀中。通過(guò)術(shù)語(yǔ)“區(qū)別性診斷”或“區(qū)別地診斷”，它指的是，疾病狀態(tài)的多個(gè)方面可以相互區(qū)別。特別是，本文中公開(kāi)的方法允許ASD的多種生物化學(xué)表型的區(qū)別性診斷；例如并且不希望是限制性的，本文中公開(kāi)的方法可以提供關(guān)于具有下列生物化學(xué)表型的患有ASD或處于ASD風(fēng)險(xiǎn)中的受試者的診斷a)升高水平的含飽和或單不飽和極長(zhǎng)鏈脂肪酸(VLCFA)的磷脂；b)升高水平的含二十二碳六烯酸(22:6，DHA)的磷脂；c)升高水平的含多不飽和VLCFA的磷脂；或d)其組合。根據(jù)本文中公開(kāi)的方法，可以使用源自體內(nèi)任何部位的任何類型的生物樣品，例如但不限于，血液(血清/血漿)，CSF，尿，大便，呼吸，唾液，或任何實(shí)體組織包括腫瘤，相鄰的正常肌肉、平滑肌和骨骼肌，脂肪組織，肝，皮膚，毛發(fā)，腦，腎，胰，肺，結(jié)腸，胃，或其它的活組織檢查。特別感興趣的是作為血漿的樣品。雖然在本文中使用術(shù)語(yǔ)“血漿”，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該承認(rèn)，還可以使用血清或全血或全血的亞組分。可以通過(guò)需要局部麻醉藥的腰椎穿刺獲得CSF。在一個(gè)非限制性實(shí)施例中，當(dāng)從患者抽取血樣時(shí)，存在可以處理樣品的若干方法。處理程度可以小到不進(jìn)行處理那樣(即冷凍的全血)或復(fù)雜到像分離特殊的細(xì)胞類型那樣。最普通的和常規(guī)的步驟涉及從全血制備血清或血漿。全血樣品處理方法，包括將血樣定位(spotting)到固相支持物，諸如濾紙或其它固定材料上，屬于本文中所述方法的范圍。不希望是限制性的，可以然后進(jìn)一步處理上述處理的血液或血漿樣品，以使其與在檢測(cè)和測(cè)量處理的血樣內(nèi)包含的代謝物中采用的方法分析技術(shù)相容。處理的類型可以在少至沒(méi)有進(jìn)一步處理到復(fù)雜到區(qū)別性提取和化學(xué)衍生化的范圍內(nèi)。提取方法可以包括在常用溶劑諸如甲醇，乙醇，醇和水的混合物，或有機(jī)溶劑諸如乙酸乙酯或己烷中的聲波處理，索克利特萃取，微波輔助的提取(MAE)，超臨界流體提取(SFE)，加速的溶劑提取(ASE)，加壓的液相提取(PLE)，加壓的熱水提取(PHWE)和/或表面活性劑輔助的提取(PHWE)。提取用于FTMS非靶向分析和用于流動(dòng)注射LC-MS/MS分析的代謝物的特殊目的方法是進(jìn)行液相/液相提取，由此使非極性代謝物溶于有機(jī)溶劑中并且使極性代謝物溶于水性溶劑中?？梢岳萌魏芜m合的方法包括本領(lǐng)域已知的那些來(lái)分析提取的樣品。例如，并且不希望是限制性的，生物樣品的提取物可以按照基本上任何質(zhì)譜法平臺(tái)上，通過(guò)直接注射或者在層析分離之后的分析來(lái)分析。典型的質(zhì)譜儀包括電離樣品內(nèi)分子的源，和用于檢測(cè)電離的分子或分子碎片的檢測(cè)器。常用源的非限制性實(shí)例包括電子碰撞，電噴射電離(ESI)，大氣壓化學(xué)電離(APCI)，大氣壓光致電離(APPI)，基質(zhì)輔助的激光解吸電離(MALDI)，表面增強(qiáng)的激光解吸電離(SELDI)，和其衍生物。常用質(zhì)量分離和檢測(cè)系統(tǒng)可以包括四極，四極離子阱，線性離子阱，飛行時(shí)間(TOF)，磁式扇形，離子回旋加速器(FTMS)，軌道阱，及其衍生物和組合。FTMS超過(guò)其它基于MS的平臺(tái)的優(yōu)點(diǎn)是它的高分辨能力，該高分辨能力容許分離僅相差數(shù)百道爾頓的代謝物，這些代謝物中的許多會(huì)被較低分辨率的儀器遺漏。代謝物一般通過(guò)它們的精確質(zhì)量來(lái)表征，如通過(guò)質(zhì)譜法技術(shù)測(cè)量。精確質(zhì)量還可以稱為“精確的中性質(zhì)量”或“中性質(zhì)量”。代謝物的精確質(zhì)量在本文中以道爾頓(Da)或基本上與其相等的質(zhì)量給出。通過(guò)“基本上與其相等”，意指精確質(zhì)量中+/_5ppm的差異應(yīng)該表示相同的代謝物。精確質(zhì)量作為中性代謝物的質(zhì)量給出。在樣品分析期間發(fā)生的電離代謝物的過(guò)程中，代謝物將導(dǎo)致一個(gè)或多個(gè)氫原子的失去或獲得和電子的失去或獲得。這將精確質(zhì)量改變成“電離的質(zhì)量”，其通過(guò)電離期間失去或獲得的氫原子和電子的質(zhì)量區(qū)別于精確質(zhì)量。除非另有說(shuō)明，精確的中性質(zhì)量將在本文中涉及。類似地，當(dāng)代謝物通過(guò)其分子式描述時(shí)，應(yīng)該給出中性代謝物的分子式將。自然，電離的代謝物的分子式將通過(guò)在電離期間失去或獲得的氫原子數(shù)目或由于添加非氫加合離子而區(qū)別于中性分子式。在分析期間收集數(shù)據(jù)并且獲得一種或多種代謝物的定量數(shù)據(jù)。通過(guò)測(cè)量存在于樣品中的特定代謝物的水平或強(qiáng)度獲得“定量數(shù)據(jù)”。將定量數(shù)據(jù)和來(lái)自一份或多份參考樣品的相應(yīng)數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比?！皡⒖紭悠贰笔顷P(guān)于特定疾病狀態(tài)的任何適合的參考樣品。例如，并且不希望是以任何方式限制性的，參考樣品可以是來(lái)自對(duì)照個(gè)體的樣品，即，有或者沒(méi)有ASD家族史的沒(méi)患ASD的人(在本文中也稱為“‘正?！北尽?；參考樣品也可以是從臨床診斷患有ASD的患者獲得的樣品。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解地，可以使用多于一份參考樣品來(lái)與定量數(shù)據(jù)比較。例如并且不希望是限制性的，一份或多份參考樣品可以是從非ASD對(duì)照個(gè)體獲得的第一參考樣品。一份或多份參考樣品還可以包括從患有臨床診斷的過(guò)氧化物酶體型ASD的患者獲得的第二參考樣品，從患有臨床診斷的線粒體型ASD的患者獲得的第三參考樣品，從患有臨床診斷的未知類型的ASD的患者獲得的第四參考樣品，或其任何組合。在監(jiān)測(cè)受試者疾病狀態(tài)改變的情況下，參考樣品可以包括治療前或治療期間較早時(shí)期獲得的樣品，以比較作為治療結(jié)果的疾病狀態(tài)的改變。本發(fā)明范圍內(nèi)的方法將在下面的非限制性實(shí)施例中進(jìn)一步說(shuō)明。_9]實(shí)施例ι-.W^m^mm^m^mmiASP等i式者樣品收集.經(jīng)過(guò)12個(gè)月期間(在采樣之間間隔六個(gè)月)從15位臨床診斷的ASD受試者和12位非ASD對(duì)照收集三份血漿樣品。樣品提取.血漿樣品儲(chǔ)存在-80°C直到解凍用于分析。全部提取在冰上進(jìn)行。代謝物使用的氫氧化銨和乙酸乙酯(EtOAc)提取三次，其各自的比例為115，接著用0.33%甲酸和EtOAc再提取兩次，其各自的比例為115。將樣品在提取之間在4°C以3500rpm離心lOmin，并且合并有機(jī)層。然后將有機(jī)和水性提取物儲(chǔ)存在_80°C直到分析。質(zhì)譜分析.血漿提取物通過(guò)直接注入到FTMS中和通過(guò)ESI或大氣壓化學(xué)電離(APCI)的采用正和負(fù)模式的電離來(lái)分析。對(duì)于負(fù)電離模式，在甲醇0.1%(ν/ν)氫氧化銨(5050,ν/ν)中，或?qū)τ谡婋x模式，在甲醇0.1%(ν/ν)甲酸(5050,ν/ν)中，將樣品提取物稀釋三或六倍。對(duì)于APCI，在不稀釋的情況下，直接注射樣品提取物。全部分析均在裝有7.OT活動(dòng)屏蔽的超導(dǎo)磁體的BrukerDaltonicsAPEXIII傅里葉變換離子回旋共振質(zhì)譜儀(BrukerDaltonics,Billerica,MA)上進(jìn)行。使用電噴射電離(ESI)和/或APCI以1200μL/小時(shí)的流速直接注射樣品。使用絲氨酸，四丙氨酸，利血平，Hewlett-Packard調(diào)整混合物和促腎上腺皮質(zhì)激素片段4-10的標(biāo)準(zhǔn)混合物來(lái)優(yōu)化離子傳遞/檢測(cè)參數(shù)。另夕卜，根據(jù)儀器制造商的推薦，在lOO-lOOOamu質(zhì)量范圍內(nèi)調(diào)整儀器條件以優(yōu)化離子強(qiáng)度和寬帶積累。將上述標(biāo)準(zhǔn)物的混合物用于內(nèi)部校準(zhǔn)每個(gè)樣品譜以獲得遍及l(fā)OO-lOOOamu范圍內(nèi)的質(zhì)量準(zhǔn)確度。總體上，對(duì)于每個(gè)樣品獲得包括提取物和電離模式的組合的六種單獨(dú)的分析水性提取物1.正ESI(分析模式1101)2.負(fù)ESI(分析模式1102)有機(jī)提取物3.正ESI(分析模式1201)4.負(fù)ESI(分析模式1202)5.正APCI(分析模式1203)6.負(fù)APCI(分析模式1204)質(zhì)譜數(shù)據(jù)處理.使用線性最小二乘方回歸線，校準(zhǔn)質(zhì)量軸的值，以致每個(gè)內(nèi)標(biāo)質(zhì)量峰與它的理論質(zhì)量相比具有<lp.P.m.的質(zhì)量誤差。使用來(lái)自BrukerDaltonicsInc.的XMASS軟件，獲得1兆詞的數(shù)據(jù)文件尺寸并且零填充到2兆詞。在傅里葉變換和量級(jí)計(jì)算之前進(jìn)行sinm數(shù)據(jù)變換。將來(lái)自每個(gè)分析的質(zhì)譜整合，產(chǎn)生包含每個(gè)峰的精確質(zhì)量和絕對(duì)強(qiáng)度的峰列表。分析在100-2000m/z范圍內(nèi)的化合物。為了跨越不同的電離模式和極性來(lái)比較和概括數(shù)據(jù)，將全部檢測(cè)到的質(zhì)量峰轉(zhuǎn)變成它們相應(yīng)的中性質(zhì)量，假定形成氫加合物。然后使用DISCOVAmetrics軟件(PhenomenomeDiscoveriesInc.，Saskatoon，SK，力口拿大)構(gòu)建自我產(chǎn)生的二維(質(zhì)量對(duì)比樣品強(qiáng)度)陣列。將來(lái)自多個(gè)文件的數(shù)據(jù)整合，并且然后處理該合并的文件以確定獨(dú)特的質(zhì)量。確定每種獨(dú)特的質(zhì)量的平均值，代表y_軸。該值表示全部檢測(cè)到的在統(tǒng)計(jì)上確定為相等的精確質(zhì)量的平均值?？紤]到儀器關(guān)于校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)物的質(zhì)量準(zhǔn)確度大約是lppm，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)公認(rèn)，這些平均質(zhì)量可以包括屬于該平均質(zhì)量+/-5ppm之內(nèi)的單個(gè)質(zhì)量。對(duì)于最初選擇進(jìn)行分析的每個(gè)文件創(chuàng)建一欄，代表χ-軸。然后將選擇的每一個(gè)文件中存在的每種質(zhì)量的強(qiáng)度填入到它的代表性x，y坐標(biāo)中。將不含有強(qiáng)度值的坐標(biāo)保留為空白。一旦在陣列中，數(shù)據(jù)將被進(jìn)一步處理，可視化和解釋，并且賦予假定的化學(xué)特征。然后將每一個(gè)光譜進(jìn)行峰選擇以獲得檢出的全部代謝物的質(zhì)量和強(qiáng)度。然后將這些來(lái)自全部模式的數(shù)據(jù)合并以產(chǎn)生一個(gè)數(shù)據(jù)文件/樣品。然后將來(lái)自全部樣品的數(shù)據(jù)合并和比對(duì)以產(chǎn)生二維代謝物陣列，其中每個(gè)樣品由一欄表示，且每種獨(dú)特的代謝物由單行表示。在對(duì)應(yīng)于給定的代謝物樣品組合的細(xì)胞中，顯示所述樣品中的代謝物強(qiáng)度。當(dāng)以這種形式表示數(shù)據(jù)時(shí)，可以確定在樣品組之間顯示出差異的代謝物。使用該方法，精確質(zhì)量特征在不服用肉堿增補(bǔ)劑的ASD受試者和非ASD受試者之間不同。通過(guò)使用表2中描述的精確質(zhì)量的全部或子集，本文中公開(kāi)的方法允許ASD的診斷。實(shí)施例2使用LC-MS/MS診斷和個(gè)體表征ASD警試者以及ASD治療劑的評(píng)價(jià)樣品收集.經(jīng)過(guò)12個(gè)月的期間(在采樣之間間隔六個(gè)月)從15位臨床診斷的ASD受試者和12位非ASD對(duì)照收集三份血漿樣品。用肉堿(A09，All,A13，A15)治療四位受試者。表1描述了受研究的受試者的臨床特征。使用本領(lǐng)域已知的方法確定社會(huì)認(rèn)知分?jǐn)?shù)。雖然登記了12位非孤獨(dú)癥對(duì)照受試者，但是將兩名同胞(C08和C29)從用于總比較的對(duì)照群中排除，這歸因于他們的PlsEtn18:1/22:6血漿水平顯著高于其余對(duì)照的事實(shí)(分別地，ρ=5.6e-6和4.Oe-4,圖6)。樣品提取如實(shí)施例1中所描述。LC-MS/MS流動(dòng)注射分析.使用與Agilent1100LC系統(tǒng)連接的線性離子阱質(zhì)譜儀(4000QTRAP,AppliedBiosystems(應(yīng)用生物系統(tǒng)))進(jìn)行分析。通過(guò)向每份樣品的120μL乙酸乙酯級(jí)分添加15μL內(nèi)標(biāo)(處于甲醇中的5μg/mL的(24_13C)_膽酸(CambridgeIsotopeLaboratories(劍橋同位素實(shí)驗(yàn)室)，Andover,MA)。通過(guò)流動(dòng)注射分析(FIA)注射100μ1樣品，并且在負(fù)APCI模式下監(jiān)測(cè)。所述方法基于每種代謝物的一個(gè)母體/碎片轉(zhuǎn)換和(24-13C)-膽酸的多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)。將每個(gè)轉(zhuǎn)換掃描70ms。將流速為360μ1/min的MeOH中的10%EtOAc用作流動(dòng)相。源參數(shù)設(shè)置如下CUR10.0，CAD:8，NC-4.0，TEM:400，GSl:30，GS2:50，界面加熱器開(kāi)啟?；衔飬?shù)設(shè)置如下=DP-120.0，EP:_10，NC-4.0，CE-40,CXP:_15。表3-10列出了代謝物和用于每種代謝物的MS/MS轉(zhuǎn)換。通過(guò)用恒定濃度的(24-13C)_膽酸連續(xù)稀釋健康正常血清提取物，對(duì)于全部分析物形成標(biāo)準(zhǔn)曲線以驗(yàn)證儀器線性。以隨機(jī)盲方式分析全部樣品并且通過(guò)已知的血清標(biāo)準(zhǔn)稀釋物分類。全部標(biāo)準(zhǔn)曲線均具有r2值>0.98。血漿PtdEtn，PlsEtn，和孤獨(dú)癥總計(jì)，測(cè)量了136個(gè)PtdEtn和15個(gè)PlsEtn種類的血漿水平。這些分析結(jié)果概括在表11-18和圖1中。不服用肉堿的孤獨(dú)癥受試者的關(guān)鍵觀察是1.幾乎全部飽和VLCFA(SVLCFA)的水平顯著升高；2.18:1的水平降低，但是單不飽和VLCFA(MUVLCFA)的水平升高；3.含有三個(gè)雙鍵的LCFA和VLCFA水平顯著降低；4.DHA(226)，DHA前體(245，246)，和DHAβ-氧化的分解代謝產(chǎn)物(206)的水平全部升高；5.含有DHA的PlsEtn水平升高。沒(méi)有觀察到含有26:0的PtdEtn的血漿水平相對(duì)于含有22:0的PtdEtn增加。這些結(jié)果與由患有過(guò)氧化物酶體病癥的受試者觀察的那些相反，在所述患有過(guò)氧化物酶體病癥的受試者中26:0比22:0升高至大得多的程度(Moser和Moser1996)。因此，本申請(qǐng)中描述的方法提供將ASD與過(guò)氧化物酶體病癥相區(qū)別的方法。這些結(jié)果表明，全部患有ASD的兒童顯示普遍的代謝表型。收集流程的非受控天性是這樣的，即這些發(fā)現(xiàn)表示ASD受試者真正的二次采樣(sub-sampling)。每名受試者在經(jīng)過(guò)一年的期間在三個(gè)不同時(shí)刻取樣并且不強(qiáng)制實(shí)行膳食限制。在這些設(shè)置下，11/11名未經(jīng)治療的ASD兒童顯示相同的生物化學(xué)表型，即，統(tǒng)計(jì)上升高的含VLCFA和/或DHA的磷脂的水平(圖2-3)。另外，在8/8個(gè)這樣的家族中，即其中非ASD同胞可用于比較分析，ASD兒童具有比非ASD同胞更顯著的生物化學(xué)表型(圖6)。這些代謝異常最好適合減弱的線粒體脂肪酸β氧化的模型，導(dǎo)致棕櫚酸酯的過(guò)量線粒體外處理。實(shí)施例3個(gè)體警試者分析因?yàn)殛P(guān)于全部參與者收集跟蹤(longitudinal)樣品，所以單獨(dú)地評(píng)價(jià)每位參與者是可能的。該分析揭示顯著的受試者-對(duì)-受試者的變異性，但是在受試者變異性內(nèi)部相對(duì)適度，鑒于三份樣品是歷經(jīng)一整年的過(guò)程收集的。如上所述，全部ASD受試者顯示相同的基礎(chǔ)代謝異常_棕櫚酸酯的過(guò)量的線粒體外的處理。然而，該異常的實(shí)際生物化學(xué)表現(xiàn)和診斷被觀察到具有多種受試者-對(duì)-受試者的變異性。為了說(shuō)明該現(xiàn)象，表2和3顯示八種原型生物標(biāo)記物的個(gè)體特性，所述原型生物標(biāo)記物代表實(shí)施例2中描述的5種代謝物改變(注意，最后4位受試者服用乙?；?肉堿并且不是該討論的一部分)。表2集中在含有DHA和AA的PlsEtn和PtdEtn上?？梢杂^察到，僅受試者A22和A05不顯示顯著升高水平的含有DHA的PlsEtn或PtdEtn。然而，通過(guò)看圖3可以看出，這2位受試者具有升高水平的多不飽和VLCFA26:3。未服用肉堿增補(bǔ)劑的所有孤獨(dú)癥兒童(11/11)被觀察到具有顯著更高水平(ρ<0.05)的DHA-PlsEtn或VLCFA-PtdEtn(圖2禾口3)。實(shí)施例4監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)的ASD治療的生物化學(xué)功效已經(jīng)提出，線粒體缺陷與ASD有關(guān)(Lombard1998；Clark-Taylor禾口Clark-Taylor2004)。因?yàn)橐阎阴；鈮A具有線粒體增強(qiáng)的性質(zhì)(Pettegrew，Levine等.2000)所以它已經(jīng)被提出作為可能的ASD治療劑。乙?；鈮A沒(méi)有被批準(zhǔn)，并且也沒(méi)有證明它在ASD中是有效的。為了說(shuō)明本文中所公開(kāi)的監(jiān)測(cè)ASD治療的方法的實(shí)用性，在服用乙?；鈮A增補(bǔ)劑的受試者中量化上述診斷ASD生物標(biāo)記物。圖4圖解全部受試者中肉堿和乙?；鈮A水平。未服用肉堿的ASD受試者沒(méi)有顯示肉堿或乙?；鈮A的缺乏或上升。服用乙酰基肉堿的全部受試者具有升高水平的肉堿和乙?；鈮A。在肉堿+/_孤獨(dú)癥受試者和對(duì)照之間的八種最具說(shuō)明性的代謝物的血漿水平比較確定，肉堿對(duì)于孤獨(dú)癥生物標(biāo)記物的作用是驚人的(圖5)。觀察到DHA-PlsEtn，DHA-PtdEtn，DHA前體(24:6)和飽和的VLCFA(280)的完全標(biāo)準(zhǔn)化。肉堿增補(bǔ)劑對(duì)于28:1和263的PdtEtn沒(méi)有顯著作用，這提示肉堿僅在調(diào)制棕櫚酸酯來(lái)源的延長(zhǎng)產(chǎn)物上有效。然而，服用肉堿的受試者具有顯著升高水平的AA-PtdEtn(20:4)。這些數(shù)據(jù)提示，肉堿通過(guò)在線粒體中恢復(fù)棕櫚酸酯氧化，有效防止VLCFA、DHA、和DHA-PlsEtn累積。然而，單-和二-不飽和脂肪酸前體的延長(zhǎng)和去飽和率似乎不受影響，并且似乎發(fā)生AA的補(bǔ)償性上升。t施徹丨5確定n有升高的ASPmmmt^對(duì)于八位登記的孤獨(dú)癥兒童(不包括服用肉堿的那些)，同時(shí)追蹤無(wú)癥狀的或輕微癥狀的同胞(表1)。由于同胞中增加的ASD流行性，這些受試者被認(rèn)為是高風(fēng)險(xiǎn)的(Newschaffer,Fallin等·2002)。當(dāng)圖2的PlsEtn代謝物按照家族繪圖時(shí)(圖6)，受影響的同胞總是具有比沒(méi)有受影響的同胞更高水平的這些代謝物之一。該差異在8名受試者中的5名中是統(tǒng)計(jì)上顯著的(ρ<0.05)。在三種情況的兩種中，其中受影響的同胞對(duì)比沒(méi)有受影響的同胞沒(méi)有觀察到具有顯著更高的水平，沒(méi)有受影響的同胞相對(duì)于對(duì)照具有顯著升高的水平。這些受試者應(yīng)該被生物化學(xué)地診斷為處于ASD風(fēng)險(xiǎn)中。當(dāng)使用社會(huì)認(rèn)知測(cè)試更精密地評(píng)價(jià)這兩位對(duì)照兒童(C29和C08)的ASD癥狀時(shí)(Skuse2000)，可以看出男性受試者(C29)顯示社會(huì)認(rèn)知缺陷，而女性(C08)是完全無(wú)癥狀的(表1)。在女性受試者中缺乏作用不出乎意料，因?yàn)榕员徽J(rèn)為具有社會(huì)認(rèn)知儲(chǔ)備(reserve)。基于這些發(fā)現(xiàn)，本申請(qǐng)中描述的方法可以有效確定處于ASD風(fēng)險(xiǎn)中的受試者。表1:臨床信息概述。<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>表2在孤獨(dú)癥受試者對(duì)比對(duì)照之間不同的精確質(zhì)量特征。<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>表4具有含一個(gè)不飽和的sn-2位脂肪酸的磷脂酰乙醇胺(PtdEtn)代謝物的分子式，精確質(zhì)量，和LC-MS/MS參數(shù)。<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>表6具有含三個(gè)不飽和的Sn一2位脂肪酸的磷脂酰乙醇胺(PtdEtn)代謝物的分子式，精確質(zhì)量，和LC—MS／MS參數(shù)。<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>表7具有含四個(gè)不飽和的sn-2位脂肪酸的磷脂酰乙醇胺(PtdEtn)代謝物的分子式，精確質(zhì)量，和LC-MS/MS參數(shù)。_Z.cooog\g__ε8ζ-(ζοοεΗ8το)τΗ__9OOCLOurjg__Td8SNg8HLOK>二ΖΖ/0:8upMmd_ζ,COOO^LOdg__ε8ζ-(ζοοεΗ8το)τΗ__Lo,gc--Lo豸Lo卜Qv卜__Td8SN8ZHcoK>_οζ/ο:8τupMmdζ.LOLOg\oo,ss__LOLOg-(gscoHso)TH8·8τοτΖ8ζ8·βτ0τ__τ1χ80τΝΗτΗτ8二0寸/ο:9τupMmd_Z■gLOg/sββ__LOgg-(gscoHso)TH__Oo.Qgg69βζ·τββ__Td8CHNOnHgo^8ε/0:9τupMmd_Z.LOLOg\oo__LOgg-(gscoHso)TH__00ojgggcog__Td8SN9SHZS^9ε/0:9τsMmd_ζ._pyg__LOgg-(gscoHso)TH__^寫(xiě)coc--Log__Td8CHNg3HLOLOoε/0:9τUdnd_Z._pdg__LOgg-(gscoHso)TH__^■①gocog__Td8SN86HSo^ζε/0:9τupMmd_Z._p061^-00__LOgg-(gscoHso)TH___59___Td8SN寸βΗτ^0ε/0:9τupMmd_Z.LOLOg\gdLOoo__LOgg-(gscoHso)TH__9OLOOO藝藝dLOoo__^feogols^8ζ/0:9τupMmd_Z.LOLOg\g■習(xí)Oo__LOgg-(gscoHso)TH__g.ggg〗gQ9.cogg__Td80Ν98ΗΖΚ3^9ζ/0:9τsMmd_Z.LOLOg\g__LOgg-(gscoHso)TH__9OOCLOurjg__τd80τΝΖ8Ηοκ>ζ/0:9τupMmd_Z,LOLO^LO.99C--__99ζ-(ζοτεΗ9το)τΗ__Lo,gc--Lo豸Lo卜Qv卜__Td8SN8ZHcoK>^ζζ/0:9τupMmd_Z,LOLO^LO.gcoc--__LOgg-(gscoHso)TH__Looococ--S二^^__Td80Ν寸ΖΗΚ>^0ζ/0:9τupMmd_謹(jǐn)sw/sw_誥靈漤敢_<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>表8具有含五個(gè)不飽和的sn-2位脂肪酸的磷脂酰乙醇胺(PtdEtn)代謝物的分子式，精確質(zhì)量，和LC-MS/MS參數(shù)。_Z.cooog\gojg__ε8ζ-(ζοοεΗ8το)τΗ__9gh.cog__Td8SN08HLOK>ο:ζζ/0:8τupMmd_Z,COOO^LO■藝C--__ε8ζ-(ζοοεΗ8το)τΗ__Lo)汔OOOCOLO-S卜__Td8SN9ZHcoK>οοζ/ο:8τupMmdζ.LOLOg\oo,S3__LOLOg-(gscoHso)TH8·9τοτοζ8·ζτοτ__τ1χ80τΝζπΗτ8Loo寸/ο:9τupMmd_ζ.LOLOg\oo06g__LOgg-(gscoHso)TH__g.ggg^οοΖ8β__Td8SN8SHgoο:8ε/0:9τUdnd_ζ._pdg__LOgg-(gscoHso)TH__^,ogg藝__TcmhNMHHZSο:9ε/0:9τsMmd_Z._p㈠g__LOgg-(gscoHso)TH__^ojgcoooccog__tcmhnoshlolooLo:寸ε/Ο:9upMmd_Z._pyg__LOgg-(gscoHso)TH__^PSLog__Td8SN96HSoο:ζε/0:9τupMmd_Z.LOLOg\g■汔Oo__LOgg-(gscoHso)TH__9gooogLOgcoo__Td8CHNganLOoοοε/ο:9τupMmd_Z.LOLOg\gοο__LOgg-(gscoHso)TH__9οο■浮Oo__Td8SN88H6K>ο:8ζ/0:9τupMmd_Z.LOLOg\g■宕Oo__LOgg-(gscoHso)TH__9.Qggigg.口g__Td8SN寸8HZK3ο:9ζ/0:9τsMmd_Z.LOgg\gojg__LOgg-(gscoHso)TH__9gh.cog__Td8SN08HLOK>Lo:藝/ο:9τupMmd_Z,LOLO^LO^92,__LOgg-(gscoHso)TH__Lo)汔OOOCOLO-S卜__Td80τΝ9ΖΗε5Lo:gg/O:supMmd_Z,LOLO^LO.9COC--__LOgg-(gscoHso)TH__Locococ---β__Td80ΝΖΖΗK>Loog/O9upMmd_謹(jǐn)sw/sw_誥靈漤敢_<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>表11在Sn一2位置具有飽和脂肪酸的磷脂酰乙醇胺(PtdEtn)代謝物在非孤獨(dú)癥兒童、未服用肉堿增補(bǔ)劑的孤獨(dú)癥兒童，和服用肉堿增補(bǔ)劑的孤獨(dú)癥兒童中的血漿水平(全部值表示為與PtdEtn16o／18o的比)。<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>表12具有含一個(gè)不飽和的sn-2位脂肪酸的磷脂酰乙醇胺(PtdEtn)代謝物在非孤獨(dú)癥兒童、未服用肉堿增補(bǔ)劑的孤獨(dú)癥兒童，和服用肉堿增補(bǔ)劑的孤獨(dú)癥兒童中的血漿水平(全部值表示為與PtdEtn16:0/18:0的比)。<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>表13具有含兩個(gè)不飽和的sn-2位脂肪酸的磷脂酰乙醇胺(PtdEtn)代謝物在非孤獨(dú)癥兒童、未服用肉堿增補(bǔ)劑的孤獨(dú)癥兒童，和服用肉堿增補(bǔ)劑的孤獨(dú)癥兒童中的血漿水平(全部值表示為與PtdEtn16:0/18:0的比)。____孤獨(dú)癥ι孤獨(dú)癥對(duì)比對(duì)照ι_kΓ~代謝物MS/MS對(duì)照__-肉滅__+肉堿__-肉堿__+肉堿+Camvs.-Camj名稱轉(zhuǎn)換AvgSEMAvg_SEMAvgSEM比率ρ啦率ρ比率ρPtdEtn16:0/18:2714.5/255.20.6120.041)0.5230.0420.9130.145(0.851.4Ε-011.499.9Ε-031.751.1Ε-03PtdEtn16:0/20:2742.5/255.210.8160.27010.9630.48710.6790.6541.018.0Ε-010.998.2Ε-010,977.5Ε-01RdEtn18:0/22:2770.6/255.20.3550.0130.3240.0150.3980.0280.911.2Ε-011.12.1Ε-011.231.7Ε-02PtdEtn16:0/24:2798.6/255.20.0220.0010.0220.0010.0260.0021.009.7Ε-011.229.1Ε-031.229.1Ε-03PtdEtn16:0/26:2826.6/255.20.0410.0020.0400.0020.0410.0020.987.3Ε-010.988.5Ε-011.019.5Ε-01PtdEin16:0/28:2854.7/255.20.0150.0010.0150.0010.0190.0021.02&.0Ε-011.252.6Ε-021.236.3Ε-02PtdEtn16:0/30:2882.7/255.20.0030.0000.0030.0000.0040.0000.934.8Ε-011.373.1Ε-031.472.8Ε-03PldEtn16:0/32:2910.7/255.20.0030.0000.0030.0000.0040.0011.075.5Ε-011.328.9Ε-021.241.6Ε-01PtdEtn16:0/342938.8/255.20.0050.0000.0040.0000.0060.0000.976.0Ε-011.241.6Ε-021.289.8Ε-03PtdEtn16:0/36:2966.8/255.20.0050.0000.0050.0000.0060.0001.102.1Ε-011.235.7Ε-021.122.2Ε-01PtdEtn16:0/38:2994.8/255.20.0030.0000.0030.0000.0040.0010.892.8Ε-011.279.2Ε-021.422.7Ε-02PtdEtn16:0/40:21022.9/255.20.0040.0000.0060.000Q.Q050.0011.248.1Ε-031.197.0Ε-020.967.3E-Q1PtdHtn16:0/18:2742.5/283.21.2160.0921.0920.0981.9770.4300.903.6Ε-011.621.7Ε-021.S1~5-4Ε-03PtdEtn18:0/20:2770.6/283.26.8610.2107.1070.2577.2370.6091.044.7Ε-011.054.6Ε-011.028.2Ε-01PtdEtn18:0/22:2798.6/283.20.2030.0080.1930.0090.2670.0280.953.8Ε-011.314.8Ε-031.391.7Ε-03PtdEtn18:0/24:2826.6/283.20.0120.0010.0130.0010.0160.0021.046.3Ε-011.301.7Ε-021.2&1.9Ε-02PtdEtn18:0/26:2854.7/283.20.0210.0010.0230.0010.0230.0021.082.4Ε-011.103.4Ε-011.018.9Ε-01RdEtn18:0/28:2882.7/283.20.0060.0000.0080.0000.0080.0011.219.5Ε-031.273.7Ε-021.056.6Ε-01PtdEtn18:0/30:2910.7/283.20.0020.0000.0030.0000.0030.0001.423.2Ε-031.502.1Ε-021.057.4Ε-01PtdEtn18:0/32:2938.8/283.20.0020.0000.0020.0000.0020.0001.241.5Ε-011.077.4Ε-010.874.2Ε-01PtdEtn18:0/34:2966.8/283.20.0020.0000.0020.0000.0030.0001.133.0Ε-011.452.6Ε-021.281.3Ε-01PtdEtn18:0/36:2994.8/283.20.0020.0000.0020.0000.0020.0001.172.3Ε-011.193.4Ε-011.029.1Ε-01PtdEtn18:0/38:21022.9/283.20.0010.0000.0020.0000.0030.0001.172.1E-011.722.3Ε-031.472.4Ε-02PtdEtn18:0/40:2|1050.9；283.210.0010.000)0.D020.0ΡΡ|0.0020.00111.303.6E-D111.423.7Ε-0111.098,1E-01表14具有含三個(gè)不飽和的sn-2位脂肪酸的磷脂酰乙醇胺(PtdEtn)代謝物在非孤獨(dú)癥兒童、未服用肉堿增補(bǔ)劑的孤獨(dú)癥兒童，和服用肉堿增補(bǔ)劑的孤獨(dú)癥兒童中的血漿水平(全部值表示為與PtdEtn16:0/18:0的比)。___孤獨(dú)癥j孤獨(dú)癥對(duì)4對(duì)照j_代謝物MS/MS對(duì)照__-肉堿+肉堿'肉堿__+肉堿+Camvs.-Cam名稱轉(zhuǎn)換AvgSEMAvgSEMAvgSEM比率β比率ρ比率ρPtdEtn16:0/18:3712.5/255.20.3390.01510.2900.0150.3480.0240.862.6Ε-021.037.4Ε-011.20~5.1Ε-02PldEtn16:0/20:3740.5/255.20.3090.0150.2510.0100.3390.0390.812.1Ε-031.103.7Ε-011.353.5Ε-03PtdEtn16:0/22:3768.6/255.22.3270.0991.9860.1012.5060.1660.851.9Ε-021.083.5Ε-011.261.1￡-02PldEtn16:0/24:3796.6/255.20.0500.0020.0430.0020.0640.0030.851.6Ε-021.2&1ΛΕ31.515.0Ε-06PtdEtn16:0/26:3824.6/25520.0230.0010.0300.0040,0310.0051.331.1Ε-011.372.7Ε-021.039.1Ε-01PtdEtn16:0/28:3852.6/255.20.0090.0000,0090.0010.0130.0021.056.3Ε-011.399.5Ε-031.334.4Ε-02RdEtn16:0/30:3880.7f255.20.0090.0000.0100.0010.0130,0021.143.5E-011.411.4E-021.243.0E-01PldEtn16:0/32:3908.7/255.20.0040.0000.0040.0000.0050.0011.185.3E-021.415.5E-031.191.5E-01PtdEtn16:0/34:3936.7/255.20.0030.0000.0040.0000.0050.0001.142.0E-011,387.5E-031.211.4E-01PtdEtn16:0/36:3964.8/255.20.0060.0000.0060.0000.0060.0001.137.9E-021.161.4E-011.037.3E-01PtdEtn16:0/38:3992.8/255.20.0050.0000.0050.0000.0060.0010.891.6E-011.152.1E-011.291.1E-02PtdEtn16:ΟΜΟ:31020.8/255.20.0050.0000.0050.0000.0050.0011,214.0E-021.192.3E-010.999.4E-01PtdEtn18:0/18:3740.5/283.20.1850.0080.1690.0090.2180.0190.911.6E-011.177.0E-021.291.2E-02PtdEtn18:0/20:3768.6/2B3.20.3480.0200.2980.0180.4350.0650.866.4E-021.259.6E-021.467.7E-03PtdEtn18:0/22:3796.6/283.21.5740.0711.4610.07-41.8540.1290.932.8E-011.185.1E-021,271.0E-02PtdEtn18:0/24:3824.6/283.20.0290.0020.0260.0010.0420.0030.877.2E-021.442.3E-041.656.9E-07PtdEtn18:0/26:3852.6/283.20.0120.0010.0140.0030.0130.0021.204.9H-011.105.7E-010.928.3E-01PtdEtn18:0/28:3880.7/283.20.0060.0000.0060.0000.0060.0011.019.6E-011.103.9E-011.104.7E-01RdEtn18:0/30:3908.7/283.20.0040.0000.0050.0000.0060.0011.152.2E-011.431.4E-021.241.8E-01PtdEtn18:0/32:3936.7/283.20.0020.0000.0020.0000.0010.0001.123.3E-010.771.3E-010.693.8E-02PtdEtn18:0/34:3954.B/283.20.0020.0000.0020.0000.0030.0011.135.5H-011.611.1E-011.431.7E-01PldEtn18:0/36.3992.8/283.20.0030.0000,0030.0000.0040.0010.957.0E-011.322.1￡-011.389.4E-02PldEtn18:0/38:31020.8/283.20.0020.0000.0020.0000.0020.0001.105.2E-011.301.4E-011.183.1E-01PldEtn18:0/40:3|1048.9/283.2|0.0020.000|0.QQ20.00C·!Q.Q040.001[1.085.9E-01|1.802.3E-Q211.673.0E-02表15具有含四個(gè)不飽和的sn-2位脂肪酸的磷脂酰乙醇胺(PtdEtn)代謝物在非孤獨(dú)癥兒童、未服用肉堿增補(bǔ)劑的孤獨(dú)癥兒童，和服用肉堿增補(bǔ)劑的孤獨(dú)癥兒童中的血漿水平(全部值表示為與PtdEtn16:0/18:0的比)。<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>表16具有含五個(gè)不飽和的sn-2位脂肪酸的磷脂酰乙醇胺(PtdEtn)代謝物在非孤獨(dú)癥兒童、未服用肉堿增補(bǔ)劑的孤獨(dú)癥兒童，和服用肉堿增補(bǔ)劑的孤獨(dú)癥兒童中的血漿水平(全部值表示為與PtdEtn16:0/18:0的比)。<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>表17具有含六個(gè)不飽和的sn-2位脂肪酸的磷脂酰乙醇胺(PtdEtn)代謝物在非孤獨(dú)癥兒童、未服用肉堿增補(bǔ)劑的孤獨(dú)癥兒童，和服用肉堿增補(bǔ)劑的孤獨(dú)癥兒童中的血漿水平(全部值表示為與PtdEtn16:0/18:0的比)。<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>表18具有選擇的sn-2位脂肪酸的乙醇胺縮醛磷脂(PlsEtn)代謝物在非孤獨(dú)癥兒童、未服用肉堿增補(bǔ)劑的孤獨(dú)癥兒童，和服用肉堿增補(bǔ)劑的孤獨(dú)癥兒童中的血漿水平(全部值表示為與PtdEtn16:0/18:0的比)。<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>將本文中確定的全部參考通過(guò)參考結(jié)合于此。已經(jīng)關(guān)于多個(gè)示范性的實(shí)施方案，描述了本發(fā)明。然而，對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見(jiàn)的是，在不背離權(quán)利要求中限定的本發(fā)明范圍的情況下，可以進(jìn)行許多變化和修改。參考文獻(xiàn)美國(guó)精神病學(xué)協(xié)會(huì)(AmericanPsychiatricAssociation)(1994).精神疾病的診斷和統(tǒng)計(jì)手冊(cè)-第四版(DiagnosticandStatisticalManualofMentalDisorders-FourthEdition).Bauman,M.L.禾口Τ·L.Kemper(2005)."Neuroanatomicobservationsofthebraininautism:areviewandfuturedirections(孤獨(dú)癥中腦的神經(jīng)解剖學(xué)觀察回顧和未來(lái)方向)."IntJDevNeurosci(國(guó)際發(fā)育神經(jīng)科學(xué)雜志)23(2-3)183-7.Chauhan,A.和V.Chauhan(2006).“Oxidativestressinautism(孤獨(dú)癥中的氧化壓力)·“Pathophysiology(病理生理學(xué))13(3):171_81·Chauhan,Α.,V.Chauhan,等.(2004)."Oxidativestressinautismincreasedlipidperoxidationandreducedserumlevelsofceruloplasminandtransferrin—theantioxidantproteins(孤獨(dú)癥中的氧化壓力增加的脂質(zhì)過(guò)氧化和減小的血漿銅藍(lán)蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白一抗氧化蛋白質(zhì)的血清水平).“LifeSci(牛命科學(xué))75(21)2539-49.Clark-Taylor,Τ.禾口B.Ε·Clark—Taylor(2004)·〃Isautismadisorderoffattyacidmetabolism？Possibledysfunctionofmitochondrialbeta-oxidationbylongchainacyl-CoAdehydrogenase(孤獨(dú)癥是月旨肪酸代病癥嗎？由長(zhǎng)鏈?；?輔酶A脫氫酶引起的可能的線粒體β-氧化功能障礙).“MedHypotheses(^學(xué)假說(shuō))62(6)970-5.Courchesne,Ε.(1997).“Brainstem,cerebellarandlimbicneuroanatomicalabnormalitiesinautism(孤獨(dú)癥中腦干，小腦和腦邊緣的神經(jīng)解剖學(xué)異常).〃CurrQpinNeurobiol(神經(jīng)牛物學(xué)的現(xiàn)代觀點(diǎn))7(2)=269-78.Courchesne,Ε.,E.Redcay,等.(2004).“Theautisticbrain:birththroughadulthood(孤獨(dú)癥患者的腦出生至成年期).“CurrOpinNeurol(神經(jīng)學(xué)的現(xiàn)代觀點(diǎn))17(4)=489-96.James,S.J.,P.Cutler,^.(2004).‘‘Metabolicbiomarkersofincreasedoxidativestressandimpairedmethylationcapacityinchildrenwithautism(患有孤獨(dú)癥的兒童中具有增加的氧化壓力和削弱的甲基化能力的代謝生物標(biāo)記物。)·“AmIClinNutr(美國(guó)臨床營(yíng)養(yǎng)學(xué)雜志)80(6)1611-7.Kern,J.K.禾口A.Μ·Jones(2006)·"Evidenceoftoxicity,oxidativestress,andneuronalinsultinautism(孤獨(dú)癥中的毒性，氧化壓力，和神經(jīng)元損傷的證據(jù)).‘‘JToxicolEnvironHealthBCritRev(毒物學(xué)環(huán)境健康B標(biāo)準(zhǔn)評(píng)述雜志)9(6):485_99·Lombard,J.(1998).“Autism:amitochondrialdisorder癥)？"MedHypotheses(醫(yī)學(xué)假說(shuō))50(6):497_500·Newschaffer,C.J.,D.Fallin,等·(2002)·“Heritableandnonheritableriskfactorsforautismspectrumdisorders(孤獨(dú)癥譜系病癥的可遺傳的和不可遺傳的風(fēng)險(xiǎn)因子).“EpidemiolRev(流行病學(xué)評(píng)述)24(2)137-53.Palmen,S.J.,H.vanEngeland,等·(2004).“Neuropathologicalfindingsinautism(孤獨(dú)癥中的神經(jīng)病理學(xué)發(fā)現(xiàn))·〃Brain(腦)127(Pt12):2572_83.Pettegrew,J.W.,J.Levine,等·(2000).“Acetyl-L-carnitinephysical-chemical,metabolic,andtherapeuticproperties:relevanceforitsmodeofactioninAlzheimer'sdiseaseandgeriatricdepression(乙酉先基-L-肉堿物理-化學(xué)的，代謝的，和治療的性質(zhì)關(guān)于其在阿爾茨海默病和老年抑郁中的作用方式的關(guān)聯(lián)性).“MolPsychiatry(分子精神病學(xué))5(6):616_32.Skuse,D.H.(2000).“Imprinting,theX-chromosome,andthemalebrainexplainingsexdifferencesintheliabilitytoautism(胚教，X-染色體，男性腦解釋對(duì)于孤獨(dú)癥傾向中的性別差異).〃PediatrRes(兒科研究)47(1):9_16.Sogut,S.,S.S.Zoroglu,等.(2003).“Changesinnitricoxidelevelsandantioxidantenzymeactivitiesmayhavearoleinthepathophysiologicalmechanismsinvolvedinautism(一^iUftlTK5F禾口舌t生白勺改變可以在孤獨(dú)癥涉及的病理生理機(jī)制中具有作用。)."ClinChimActa(臨床化學(xué)學(xué)報(bào))331(1-2)111-7.Yeargin-Allsopp,M.，C.Rice，等.(2003).‘‘美國(guó)大城市區(qū)域中的孤獨(dú)癥流行(PrevalenceofautisminaUSmetropolitanarea)."Jama289(1):49_55.Yorbik,0.,A.Sayal,^.(2002)."Investigationofantioxidantenzymesmchildrenwithautisticdisorder(患有孤獨(dú)癥病癥的兒童中的抗氧化酶類研究)·“ProstaglmdinsLeukotEssentFattyAcids(前列腺素類脂化合物和必需脂肪酸)67(5)341-3.Zoroglu,S.S.，F(xiàn).Armutcu,等.(2004).〃Increasedoxidativestressandalteredactivitiesoferythrocytefreeradicalscavengingenzymesinautism(孤獨(dú)癥中的紅血球游離基清除酶的增加的氧化壓力和改變的活性).“EurArchPsychiatryClinNeurosci(歐洲精神病學(xué)和臨床神經(jīng)科學(xué)文獻(xiàn))254(3)143-7.權(quán)利要求一種用于診斷人類受試者關(guān)于孤獨(dú)癥譜系病癥(ASD)的健康狀態(tài)或健康狀態(tài)改變或確定人類受試者的ASD風(fēng)險(xiǎn)的方法，所述方法包括下列步驟a)分析從患者獲得的樣品以獲得一種或多種精確質(zhì)量的定量數(shù)據(jù)；b)將所述一種或多種精確質(zhì)量的數(shù)據(jù)與從一份或多份參考樣品獲得的相應(yīng)數(shù)據(jù)比較；和c)使用所述比較，基于所述定量數(shù)據(jù)和所述一種或多種精確質(zhì)量的相應(yīng)數(shù)據(jù)之間的差異，診斷人類受試者關(guān)于ASD的健康狀態(tài)或健康狀態(tài)的改變；其中所述一種或多種精確質(zhì)量在表2至10的任何一個(gè)中列出。2.權(quán)利要求1的方法，其中所述一種或多種精確質(zhì)量在表3至10的任何一個(gè)中列出。3.權(quán)利要求1的方法，其中所述一種或多種精確質(zhì)量在表2中列出。4.權(quán)利要求1的方法，其中確定所述健康狀態(tài)或健康狀態(tài)改變包括確定ASD的存在或缺乏，所述受試者的生物化學(xué)ASD表型，升高的ASD風(fēng)險(xiǎn)，或ASD治療策略對(duì)于所述受試者的基礎(chǔ)生物化學(xué)表型的正效應(yīng)、負(fù)效應(yīng)、或無(wú)效應(yīng)。5.權(quán)利要求4的方法，其中所述確定的受試者表型被表征為下列的任何一項(xiàng)a)升高水平的含飽和或單不飽和極長(zhǎng)鏈脂肪酸(VLCFA)的磷脂；b)升高水平的含二十二碳六烯酸(22:6，DHA)的磷脂；c)升高水平的含多不飽和VLCFA的磷脂；d)降低水平的18:IVLCFAe)降低水平的含雙鍵的LCFA(長(zhǎng)鏈脂肪酸)和VLCFA和f)其組合。6.權(quán)利要求1的方法，其中所述樣品是全血，血漿，血清，或全血的亞組分。7.權(quán)利要求1的方法，其中步驟a)包括將精確質(zhì)量提取到有機(jī)溶劑中。8.權(quán)利要求1的方法，其中步驟a)包括將精確質(zhì)量提取到水性溶劑中。9.權(quán)利要求1的方法，其中步驟a)包括用質(zhì)譜法分析所述樣品。10.權(quán)利要求9的方法，其中所述質(zhì)譜儀選自由下列組成的組傅里葉變換離子回旋共振，飛行時(shí)間，軌道阱(orbitrap)，四極桿質(zhì)譜儀和三重四極桿質(zhì)譜儀。11.權(quán)利要求10的方法，其中所述質(zhì)譜儀是三重四極桿質(zhì)譜儀。12.權(quán)利要求1的方法，其中所述參考樣品取自非ASD受試者。13.權(quán)利要求1的方法，其中所述參考樣品取自不在治療計(jì)劃上的一名或多名ASD受試者ο14.權(quán)利要求1的方法，其中所述參考樣品是取自處于治療前階段或處于早期治療階段的人的一份或多份樣品。15.權(quán)利要求1的方法，其中所述人類受試者基于具有下列的任何一項(xiàng)而診斷患有ASD升高水平的含飽和或單不飽和極長(zhǎng)鏈脂肪酸(VLCFA)的磷脂；升高水平的含二十二碳六烯酸(22:6，DHA)的磷脂；升高水平的DHA前體(24:5，24:6)，升高水平的DHAβ-氧化的分解代謝產(chǎn)物(20:6)，升高水平的含多不飽和VLCFA的磷脂；或其組合。16.權(quán)利要求15的方法，其中，基于具有表11-18任何一個(gè)中列出的一種或多種代謝物所描述的代謝異常，其相對(duì)于來(lái)自非ASD受試者的參考樣品的相應(yīng)數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計(jì)上顯著的(P<0.05)改變，來(lái)診斷所述人類受試者患有ASD。17.一種用于診斷人類受試者關(guān)于孤獨(dú)癥譜系病癥(ASD)的健康狀態(tài)或健康狀態(tài)改變或確定人類受試者的ASD風(fēng)險(xiǎn)的方法，所述方法包括下列步驟a)分析從患者獲得的樣品以獲得下列一項(xiàng)以上的定量數(shù)據(jù)含飽和或單不飽和極長(zhǎng)鏈脂肪酸(VLCFA)的磷脂；含二十二碳六烯酸(22:6，DHA)的磷脂；DHA前體(24:5,24:6)；DHAβ-氧化的分解代謝產(chǎn)物(20:6)；含多不飽和VLCFA的磷脂；和其組合；b)將所述定量數(shù)據(jù)與從一份或多份參考樣品獲得的相應(yīng)數(shù)據(jù)進(jìn)行比較；和c)使用所述比較，基于在與從一份或多份參考樣品獲得的相應(yīng)數(shù)據(jù)相比時(shí)具有下列特性之一，來(lái)診斷所述人類受試者關(guān)于ASD的健康狀態(tài)或健康狀態(tài)改變升高水平的含飽和或單不飽和極長(zhǎng)鏈脂肪酸(VLCFA)的磷脂；升高水平的含二十二碳六烯酸(22:6，DHA)的磷脂；升高水平的DHA前體(24:5，24:6)；升高水平的DHAβ-氧化的分解代謝產(chǎn)物(20:6)；升高水平的含多不飽和極長(zhǎng)鏈脂肪酸的磷脂；或其組合。18.權(quán)利要求1的方法，其中所述方法用于監(jiān)測(cè)ASD治療，其中步驟b)包括將所述一種或多種精確質(zhì)量的定量數(shù)據(jù)與獲自從非ASD受試者收集的一份或多份參考樣品的相應(yīng)數(shù)據(jù)和/或與從所述患者的治療前階段或早期治療階段預(yù)先收集的定量數(shù)據(jù)進(jìn)行比較；并且步驟c)包括c)使用所述比較來(lái)確定所述治療對(duì)于所述人類受試者的生物化學(xué)效應(yīng)；其中所述一種或多種精確質(zhì)量在表2至10的任何一個(gè)中列出。19.權(quán)利要求18的方法，其中所述治療是肉堿治療。20.一種用于診斷人類受試者關(guān)于孤獨(dú)癥譜系病癥(ASD)的健康狀態(tài)或健康狀態(tài)改變或確定人類受試者的ASD風(fēng)險(xiǎn)的方法，所述方法包括下列步驟a)分析從患者獲得的樣品以獲得關(guān)于一種或多種代謝物的定量數(shù)據(jù)；b)將所述一種或多種代謝物的定量數(shù)據(jù)與從一份或多份參考樣品獲得的相應(yīng)數(shù)據(jù)進(jìn)行比較；和c)使用所述比較，基于所述定量數(shù)據(jù)和所述一種或多種代謝物的相應(yīng)數(shù)據(jù)之間的差異，來(lái)診斷人類受試者關(guān)于ASD的健康狀態(tài)或健康狀態(tài)改變；其中所述一種或多種代謝物在表3至10的任何一個(gè)中列出。21.權(quán)利要求20的方法，其中確定所述健康狀態(tài)或健康狀態(tài)改變包括確定ASD的存在或缺乏，所述受試者的生物化學(xué)ASD表型，升高的ASD風(fēng)險(xiǎn)，或ASD治療策略對(duì)于所述受試者的基礎(chǔ)生物化學(xué)表型的正效應(yīng)、負(fù)效應(yīng)、或無(wú)效應(yīng)。22.權(quán)利要求20的方法，其中所述確定的受試者表型被表征為下列的任何一項(xiàng)a)升高水平的含飽和或單不飽和極長(zhǎng)鏈脂肪酸(VLCFA)的磷脂；b)升高水平的含二十二碳六烯酸(22:6，DHA)的磷脂；C)升高水平的含多不飽和VLCFA的磷脂；和d)其組合。23.權(quán)利要求20的方法，其中所述樣品是全血，血漿，血清，或全血的亞組分。24.權(quán)利要求20的方法，其中步驟a)包括將所述代謝物提取到有機(jī)溶劑中。25.權(quán)利要求20的方法，其中步驟a)包括將所述代謝物提取到水性溶劑中。26.權(quán)利要求20的方法，其中步驟a)包括用質(zhì)譜法分析樣品。27.權(quán)利要求26的方法，其中所述質(zhì)譜儀選自由下列組成的組傅里葉變換離子回旋共振，飛行時(shí)間，軌道阱(orbitrap)，四極桿質(zhì)譜儀和三重四極桿質(zhì)譜儀。28.權(quán)利要求27的方法，其中所述質(zhì)譜儀是三重四極桿質(zhì)譜儀。29.權(quán)利要求20的方法，其中所述參考樣品取自非ASD受試者。30.權(quán)利要求20的方法，其中所述參考樣品取自不在治療計(jì)劃上的一名或多名ASD受試者。31.權(quán)利要求20的方法，其中所述參考樣品是取自處于治療前階段或處于早期治療階段的人的一份或多份樣品。32.權(quán)利要求10的方法，其中所述人受試者基于具有下列的任何一項(xiàng)而診斷患有ASD升高水平的含飽和或單不飽和極長(zhǎng)鏈脂肪酸(VLCFA)的磷脂；升高水平的含二十二碳六烯酸(22:6，DHA)的磷脂；升高水平的DHA前體(24:5，24:6)，升高水平的DHAβ-氧化的分解代謝產(chǎn)物(20:6)，升高水平的含多不飽和VLCFA的磷脂；或其組合。33.權(quán)利要求32的方法，其中，基于具有表11-18中列出的一種或多種代謝物所描述的代謝異常，其相對(duì)于來(lái)自非ASD受試者的參考樣品的相應(yīng)數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計(jì)上顯著的(ρ<0.05)改變，來(lái)診斷所述人類受試者患有ASD。34.權(quán)利要求20的方法，其中所述方法用于監(jiān)測(cè)ASD治療，其中步驟b)包括b)將所述一種或多種代謝物的定量數(shù)據(jù)與獲自從非ASD受試者收集的一份或多份參考樣品的相應(yīng)數(shù)據(jù)和/或與從所述患者的治療前階段或早期治療階段預(yù)先收集的定量數(shù)據(jù)進(jìn)行比較；并且步驟c)包括c)使用所述比較來(lái)確定所述治療對(duì)于所述人類受試者的生物化學(xué)效應(yīng)；其中所述一種或多種代謝物在表3至10的任何一個(gè)中列出。35.權(quán)利要求34的方法，其中所述治療是肉堿治療。36.一種用于診斷人類受試者關(guān)于孤獨(dú)癥譜系病癥(ASD)的健康狀態(tài)或健康狀態(tài)改變或確定人類受試者的ASD風(fēng)險(xiǎn)的方法，所述方法包括將來(lái)自人類受試者的樣品的包括表2至10任何一個(gè)中列出的一種或多種精確質(zhì)量的定量數(shù)據(jù)與從一份或多份參考樣品獲得的相應(yīng)數(shù)據(jù)進(jìn)行比較；其中所述人類受試者關(guān)于孤獨(dú)癥譜系病癥(ASD)的健康狀態(tài)或健康狀態(tài)改變或ASD的風(fēng)險(xiǎn)基于在來(lái)自所述人類受試者的樣品和一份或多份參考樣品之間的一種或多種精確質(zhì)量強(qiáng)度上的差異。37.權(quán)利要求36的方法，其中所述一種或多種精確質(zhì)量在表3-8的任何一個(gè)中列出。38.權(quán)利要求36的方法，其中所述一種或多種精確質(zhì)量在表2中列出。39.權(quán)利要求36的方法，其中所述ASD的健康狀態(tài)或健康狀態(tài)改變或風(fēng)險(xiǎn)的診斷包括確定ASD的存在或缺乏，所述受試者的生物化學(xué)ASD表型，升高的ASD風(fēng)險(xiǎn)，或ASD治療策略對(duì)于所述受試者的基礎(chǔ)生物化學(xué)表型的正效應(yīng)、負(fù)效應(yīng)、或無(wú)效應(yīng)。40.權(quán)利要求37的方法，其中所述確定的受試者表型被表征為下列的任何一種a)升高水平的含飽和或單不飽和極長(zhǎng)鏈脂肪酸(VLCFA)的磷脂；b)升高水平的含二十二碳六烯酸(22:6，DHA)的磷脂；c)升高水平的含多不飽和VLCFA的磷脂；和d)其組合。41.權(quán)利要求36的方法，其中來(lái)自所述人類受試者的樣品是全血，血漿，血清，或全血的亞組分。42.權(quán)利要求36的方法，其中來(lái)自所述人類受試者的樣品用質(zhì)譜法分析。43.權(quán)利要求42的方法，其中所述質(zhì)譜儀選自由下列組成的組傅里葉變換離子回旋共振，飛行時(shí)間，軌道阱(orbitrap)，四極桿質(zhì)譜儀和三重四極桿質(zhì)譜儀。44.權(quán)利要求43的方法，其中所述質(zhì)譜儀是三重四極桿質(zhì)譜儀。45.權(quán)利要求36的方法，其中所述參考樣品取自非ASD受試者。46.權(quán)利要求36的方法，其中所述參考樣品取自不在治療計(jì)劃上的一名或多名ASD受試者。47.權(quán)利要求36的方法，其中所述參考樣品是取自處于治療前階段或處于早期治療階段的人的一份或多份樣品。48.權(quán)利要求36的方法，其中所述人類受試者基于具有下列的任何一項(xiàng)而診斷為患有ASD升高水平的含飽和或單不飽和極長(zhǎng)鏈脂肪酸(VLCFA)的磷脂；升高水平的含二十二碳六烯酸(22:6，DHA)的磷脂；升高水平的DHA前體(24:5，24:6)；升高水平的DHAβ-氧化的分解代謝產(chǎn)物(20:6)；升高水平的含多不飽和VLCFA的磷脂；或其組合。49.權(quán)利要求48的方法，其中，基于具有表11-18中列出的一種或多種代謝物所描述的代謝異常，其相對(duì)于來(lái)自非ASD受試者的參考樣品的相應(yīng)數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計(jì)上顯著的(ρ<0.05)改變，來(lái)診斷所述人類受試者患有ASD。50.權(quán)利要求36的方法，其中所述方法用于監(jiān)測(cè)ASD治療并且其中一份或多份參考樣品是從非ASD受試者收集的，和/或具有從所述人類受試者的治療前階段或早期治療階段預(yù)先收集的定量數(shù)據(jù)并且其中所述比較用于確定所述治療對(duì)于所述人類受試者的生物化學(xué)效應(yīng)。51.權(quán)利要求50的方法，其中所述治療是肉堿治療。52.一種用于診斷人類受試者關(guān)于孤獨(dú)癥譜系病癥(ASD)的健康狀態(tài)或健康狀態(tài)改變或確定人類受試者的ASD風(fēng)險(xiǎn)的方法，所述方法包括將來(lái)自人類受試者的樣品的包括表3至10任何一個(gè)中列出的一種或多種代謝物的定量數(shù)據(jù)與從一份或多份參考樣品獲得的相應(yīng)數(shù)據(jù)進(jìn)行比較；其中所述人類受試者關(guān)于孤獨(dú)癥譜系病癥(ASD)的健康狀態(tài)或健康狀態(tài)改變或ASD的風(fēng)險(xiǎn)是基于在來(lái)自所述人類受試者樣品和一份或多份參考樣品之間的一種或多種代謝物強(qiáng)度上的差異。53.權(quán)利要求52的方法，其中所述ASD的健康狀態(tài)或健康狀態(tài)改變或風(fēng)險(xiǎn)的診斷包括確定ASD的存在或缺乏，所述受試者的生物化學(xué)ASD表型，升高的ASD風(fēng)險(xiǎn)，或ASD治療策略對(duì)于所述受試者的基礎(chǔ)生物化學(xué)表型的正效應(yīng)、負(fù)效應(yīng)、或無(wú)效應(yīng)。54.權(quán)利要求52的方法，其中所述確定的受試者表型被表征為下列的任何一種a)升高水平的含飽和或單不飽和極長(zhǎng)鏈脂肪酸(VLCFA)的磷脂；b)升高水平的含二十二碳六烯酸(22:6，DHA)的磷脂；c)升高水平的含多不飽和VLCFA的磷脂；和d)其組合。55.權(quán)利要求52的方法，其中來(lái)自所述人類受試者的樣品是全血，血漿，血清，或全血的亞組分。56.權(quán)利要求52的方法，其中來(lái)自所述人類受試者的樣品用質(zhì)譜法分析。57.權(quán)利要求56的方法，其中所述質(zhì)譜儀選自由下列組成的組傅里葉變換離子回旋共振，飛行時(shí)間，軌道阱(orbitrap)，四極桿質(zhì)譜儀和三重四極桿質(zhì)譜儀。58.權(quán)利要求57的方法，其中所述質(zhì)譜儀是三重四極桿質(zhì)譜儀。59.權(quán)利要求52的方法，其中所述參考樣品取自非ASD受試者。60.權(quán)利要求52的方法，其中所述參考樣品取自不在治療計(jì)劃上的一名或多名ASD受試者。61.權(quán)利要求52的方法，其中所述參考樣品是取自處于治療前階段或處于早期治療階段的人的一份或多份樣品。62.權(quán)利要求52的方法，其中所述人類受試者基于具有下列的任何一項(xiàng)而診斷患有ASD升高水平的含飽和或單不飽和極長(zhǎng)鏈脂肪酸(VLCFA)的磷脂；升高水平的含二十二碳六烯酸(22:6，DHA)的磷脂；升高水平的DHA前體(24:5，24:6)；升高水平的DHAβ-氧化的分解代謝產(chǎn)物(20:6)；升高水平的含多不飽和VLCFA的磷脂；或其組合。63.權(quán)利要求62的方法，其中，基于具有表11-18中列出的一種或多種代謝物所描述的代謝異常，其相對(duì)于來(lái)自非ASD受試者的參考樣品的相應(yīng)數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計(jì)上顯著的(ρ<0.05)改變，來(lái)診斷所述人類受試者患有ASD。64.權(quán)利要求52的方法，其中所述方法用于監(jiān)測(cè)ASD治療并且其中一份或多份參考樣品是從非ASD受試者收集的，和/或具有從所述人類受試者的治療前階段或早期治療階段預(yù)先收集的定量數(shù)據(jù)并且其中所述比較用于確定所述治療對(duì)于所述人類受試者的生物化學(xué)效應(yīng)。65.權(quán)利要求64的方法，其中所述治療是肉堿治療。全文摘要公開(kāi)了用于診斷，風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)，和監(jiān)測(cè)孤獨(dú)癥譜系病癥(ASD)的方法。更具體而言，本發(fā)明涉及人血漿中小分子(代謝物)的測(cè)量，所述小分子(代謝物)被發(fā)現(xiàn)在具有ASD臨床表現(xiàn)的人和不表現(xiàn)ASD癥狀的受試者之間具有不同的多度。另外，本發(fā)明涉及關(guān)于設(shè)計(jì)用來(lái)改善與ASD有關(guān)的生物化學(xué)異常的推定治療策略的監(jiān)測(cè)。文檔編號(hào)G01N33/483GK101802607SQ200880107178公開(kāi)日2010年8月11日申請(qǐng)日期2008年7月25日優(yōu)先權(quán)日2007年7月26日發(fā)明者達(dá)揚(yáng)·古德諾申請(qǐng)人:菲諾梅諾米發(fā)現(xiàn)公司