專利名稱：：Slim-1在心力衰竭評估中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種評估個體心力衰竭的方法，包括步驟a)測量從個體獲得的樣品中標(biāo)識物SLIM-1的濃度，b)任選地測量樣品中一種或更多種其他的心力衰竭標(biāo)識物的濃度，并通過比較步驟(a)中確定的濃度以及任選地在步驟(b)中確定的濃度與對照樣品中確立的該標(biāo)識物或這些標(biāo)識物的濃度，來評估心力衰竭。此外還公開SUM-1作為標(biāo)識物蛋白在評估心力衰竭中的用途，包括SLIM-1的標(biāo)識物組合，以及用于測量SLIM-1的試劑盒。
背景技術(shù)：
：心力衰竭(HF)是一種主要的并日趨嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。例如，在美國，大約5百萬患者患有HF并且每年超過550000患者被首次診斷為HF(引自美國心臟協(xié)會，心臟病和中風(fēng)統(tǒng)計:更新至2005年，達(dá)拉斯、德克薩斯;美國心臟協(xié)會(2005))。類似的美國統(tǒng)計表明對于每年1200萬至1500萬個診所就診和650萬個住院病例，HF是主要原因。從1990至1999年，每年以HF作為主要診斷結(jié)論住院治療的患者數(shù)量從大約81萬增長至超過100萬，以HF作為主要或第二診斷結(jié)論的人數(shù)從240萬增至360萬。在2001年，接近53000名患者死于HF作為主因的疾病。心力衰竭主要是老年人的狀況，因此普遍認(rèn)為"人群的老齡化"也促使HF發(fā)生率增加。在年齡大于65歲的人群中HF的發(fā)生率每IOOO人近IO人。僅僅在美國，2005年由HF引起的直接和間接損失總共估計約$279億，并且每年在治療HF的藥物上花費(fèi)大約$29億(參照上述引用的AHA-統(tǒng)計數(shù)據(jù))。心力衰竭心力衰竭的特征是心臟泵出身體所需血液的量的能力的喪失。衰竭不是意味心臟停止泵送，而是指不能如其應(yīng)該的那樣有效地泵出血。NYHA[紐約心臟協(xié)會]和ACC/AHA[美國心臟病學(xué)協(xié)會/美國心臟協(xié)會]都建立了HF的功能分類以判斷該疾病的進(jìn)程。NYHA分類方案有四類疾病狀態(tài)類別1為在任何程度的行為下無癥狀，類別2為在重體力行為下有癥狀，類別III和IV分別在輕度行為和無行為下有癥狀。在四階段的ACC/AHA方案中，階段A為無癥狀但有發(fā)展HF的危險。階段B有心臟功能紊亂的證據(jù)而無癥狀。在階段C中，有心臟功能紊亂的證據(jù)并伴有癥狀。在階段D中，受試者盡管受到最大程度的治療但仍有癥狀。HF的病原學(xué)在醫(yī)學(xué)上，必須將心力衰竭(HF)理解為一種復(fù)合病。它可能由觸發(fā)事件的出現(xiàn)所引起，比如心肌梗死(心臟病發(fā)作)，或者是其他病因的后續(xù)，比如高血壓、糖尿病或心臟畸形例如心瓣病。心肌梗死或其他的HF病因?qū)е滦呐K泵送能力的初始減退，例如通過損壞心肌引起。由于一種或更多種代償機(jī)制的活化，這種泵送能力的減退可能不會立刻被注意。但是，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)HF的進(jìn)展與患者的血液動力狀態(tài)無關(guān)。因此，由疾病所引起損害性變化已經(jīng)出現(xiàn)并發(fā)展，而患者甚至仍無癥狀。事實上，在HF早期過程中維持正常心血管功能的代償機(jī)制可能實際上最終促進(jìn)了疾病的進(jìn)展，例如對心臟和它的容量施加有害作用以維持循環(huán)中充足的血流水平。一些發(fā)生在HF期間的更重要的病理生理變化有(i)下丘腦-垂體-腎上腺軸的活化，(ii)全身性內(nèi)皮功能紊亂和(iii)心肌重塑。(i)專門針對拮抗下丘腦-垂體-腎上腺軸活化的治療包括P-腎上腺素能阻滯劑(B阻滯劑)、血管緊張素轉(zhuǎn)變酶(ACE)抑制劑、某些鈣通道阻滯劑、硝酸鹽和內(nèi)皮素-1阻滯劑。鈣通道阻滯劑和硝酸鹽雖然產(chǎn)生臨床改善，卻沒有明確顯示出能延長生存期，而作為醛甾酮拮抗藥，B阻滯劑和ACE抑制劑已經(jīng)表現(xiàn)出了明顯的延長壽命的作用。使用內(nèi)皮素-1阻滯劑的實驗研究也已展示出有用的效果。(ii)全身性內(nèi)皮功能紊亂是HF的一種公知特征，在左心室功能紊亂體征出現(xiàn)時會明顯表現(xiàn)。內(nèi)皮功能紊亂對于心肌微循環(huán)與心臟肌細(xì)胞的密切關(guān)系十分重要。該跡象暗示微血管功能紊亂對于肌細(xì)胞功能紊亂以及導(dǎo)致進(jìn)行性心肌衰竭的形態(tài)學(xué)變化有明顯作用。依據(jù)潛在的病理生理學(xué)，有跡象暗示內(nèi)皮功能紊亂可能由NO的相對缺乏所引起，而NO的相對缺乏可以歸結(jié)為依賴NADH氧化酶引起的血管02生成增加和隨后的NO過度清除。潛在的提高02生成的作用因子包括升高的交感緊張性、新腎上腺素、血管緊張素II、內(nèi)皮素-l和TNF-a。此外，相對于TNF-a的水平，一種關(guān)4建的抗炎性細(xì)胞因子IL-10的水平顯示不相稱的低?，F(xiàn)在人們認(rèn)為TNF-a與相關(guān)的促炎性細(xì)胞因子包括IL-6和可溶性TNF-a受體的水平升高，通過降低心肌收縮性、雙心室膨大、血壓過低而在HF的發(fā)展中發(fā)揮重要作用，并且可能涉及內(nèi)皮細(xì)胞活化和功能紊亂。同時對于至今仍不可解釋的在嚴(yán)重HF患者中肌肉消痩現(xiàn)象，人們認(rèn)為TNF-a也可能在其中發(fā)揮作用。在對少數(shù)患者使用可溶性TNF受體進(jìn)行治療的初步研究中，通過對生活質(zhì)量指數(shù)的測量，表明有助于改善NYHA功能分類和患者健康。(iii)心肌重塑是一個復(fù)雜過程,伴隨著從無癥狀向有癥狀的心力衰竭轉(zhuǎn)變，并可被描述成心肌層內(nèi)的一系列適應(yīng)性改變，像心室形狀、質(zhì)量和體積的改變(Piano，M.R.等，J.Cardiovasc.Nurs.l4(2000)l-23,quizl19-120;Molkentin,J.D.,Ann.Rev.Physiol.63(2001)391-426)。心肌重塑的主要內(nèi)容是肌細(xì)胞生物學(xué)的改變，如肌細(xì)胞肥大，因為壞死或細(xì)胞程序性死亡而引起的肌細(xì)胞損失，細(xì)胞外基質(zhì)的改變和左心室腔的幾何學(xué)改變。現(xiàn)在還不清楚心肌重塑是否只是暴露于長時間神經(jīng)激素刺激產(chǎn)生的毒性效應(yīng)數(shù)年之后發(fā)生的終末器官效應(yīng)，或者是否心肌重塑獨(dú)立地促使心力衰竭的進(jìn)展。迄今證據(jù)暗示適當(dāng)?shù)闹委熆梢詼p緩或停止心肌重塑的進(jìn)展。標(biāo)識物和疾病狀態(tài)如上所述，肌細(xì)胞肥大可能代表發(fā)展至HF的最初步驟之一。肌細(xì)胞肥大的特征為某些編碼收縮蛋白的基因，如p-肌球蛋白重鏈和肌4丐蛋白T(TnT),和一些非收縮蛋白，如A型和B型利尿鈉肽的表達(dá)升高，同時還有細(xì)胞體積增加和細(xì)胞骨架變化(Piano，M.R.等，J.Cardiovasc.Nurs.14(2000)1-23,quiz119-120;Molkentin，J.D.，Ann.Rev.Physiol.63(2001)391-426)。對于人類和動物模型心力衰竭的研究表明心力衰竭的后期階段肌細(xì)胞功能降低?，F(xiàn)已暗示肌細(xì)胞功能紊亂的機(jī)制涉及鈣處理網(wǎng)絡(luò)、肌孩i絲和細(xì)月包支架的？文變(deTombe,P.P.，Cardiovasc.Res.37(1998)367-380)。例如，在心力衰竭的人類和動物模型中，肌漿網(wǎng)鈣-三磷酸腺普酶的酶活性降低，而肌膜Na+/Ca2+交換器的mRNA和蛋白水平都增加。而且，在心力衰竭的人類和動物模型中都具有TnT的同種型轉(zhuǎn)換、肌鈣蛋白I(TnI)磷酸化減少、肌纖維肌動球蛋白三磷酸腺苷酶活性降低和微管形成增加。最開始，導(dǎo)致心肌重塑的心臟改變意味著補(bǔ)償心肌層病變部分以維持身體對氧和營養(yǎng)物的需要。但是，心力衰竭的代償期是有限的，于是在最后，衰竭的心臟不能維持足夠滿足身體需求的心輸出量。于是有從代償期向代償失調(diào)期的轉(zhuǎn)變。在代償失調(diào)期內(nèi)，心臟中的變化級聯(lián)效應(yīng)會持續(xù)但不再有利，使患者進(jìn)入心力衰竭進(jìn)程直到慢性狀態(tài)并最終死亡。根據(jù)"ACC/AHA2005成年人慢性心力衰竭的診斷和管理的更新指南"(S.Hunt等，www.acc.org=ACC/AHA實踐指南)，在心力衰竭范圍內(nèi)該疾病現(xiàn)在被分為四個階段，如上所述。在階段A和B，會發(fā)現(xiàn)個體處于心力衰竭發(fā)展的危險中，而階段C和D表示這些患者組顯示了心力衰竭的體征和癥狀。A至D不同階段的詳細(xì)定義如上述參考資料所示，此處通過援引包括入。心力衰竭的診斷方法評價HF患者唯一最有效的診斷試驗是全面的2維超聲心電圖聯(lián)同多普勒流量研究，以確定是否心肌層、心臟瓣膜或心包出現(xiàn)異常，涉及哪些腔室。必須考慮三個基本問題:1)LVEF是維持還是減少，2)LV結(jié)構(gòu)是正常還是異常，3)是否還有其他可以解釋臨床表現(xiàn)的結(jié)構(gòu)異常，如瓣膜、心包或右心室的異常？該信息應(yīng)該由EF的數(shù)值預(yù)期、心室尺度和/或體積的測量、壁厚度的測量和腔室的幾何結(jié)構(gòu)以及局部室壁活動的評價來量化。應(yīng)該評估右心室的大小以及收縮性能。此外還應(yīng)該半定量地確定心房的大小并測量左心房的尺度和/或體積。對于EF保持或減少的患者來說，在進(jìn)行超聲波心動描記術(shù)時獲得的非侵襲性血液動力學(xué)數(shù)據(jù)是重要的附加關(guān)聯(lián)。綜合二尖瓣輸入模型、肺靜脈輸入模型和二尖瓣環(huán)流速的組合定量提供了關(guān)于LV充盈和左房壓特征的數(shù)據(jù)。三尖瓣回流梯度的評定聯(lián)同測量下腔靜脈的尺度和它在呼吸過程的反應(yīng)可提供對收縮肺動脈壓和中心靜脈壓的估算。心4粵量可以4關(guān)合尺度測量和LV流出道的脈沖多普勒加以確定。但是，在沒有HF時這些參數(shù)的任何一項都可能出現(xiàn)異常。所有的參數(shù)都不是與HF有必然的特異關(guān)聯(lián)；然而總體正常的充盈模型可排除臨床HF。一種臨床觀點(diǎn)認(rèn)為，該疾病在代償和早期的代償失調(diào)期無臨床癥狀(階段A完全無癥狀，階段B有結(jié)構(gòu)上的心臟病變但沒有HF的體征和癥狀，參考ACC/AHA實踐指南)。直到徹底進(jìn)入代償失調(diào)期(即依照ACC/AHA指南的階段C和D)疾病的外部體征(如氣促)才會出現(xiàn)?，F(xiàn)行的診斷方式基于階段C和D的患者的外部癥狀。一般地,使用能影響心力衰竭特異機(jī)制的藥物對心力衰竭患者進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)治療。沒有診斷性試驗可以可靠地反映那些特異機(jī)制并幫助醫(yī)師為適當(dāng)?shù)幕颊哌x擇適當(dāng)?shù)乃幬?和劑量)(例如，ACE抑制劑、ATII、J3阻滯劑等等)。用標(biāo)識物預(yù)診斷HF僅由生化標(biāo)識物對具有心力衰竭風(fēng)險的患者進(jìn)行早期評估是可能的，因為有發(fā)展心力衰竭風(fēng)險的個體在那個階段是仍然沒有HF臨床癥狀的?，F(xiàn)在尚無確定的生化標(biāo)識物能在該疾病癥狀發(fā)生前進(jìn)4亍可靠鑒定?，F(xiàn)在到診斷出HF的時候，這個疾病已經(jīng)有了深度發(fā)展。近年來利尿鈉肽家族，尤其是心房利尿鈉肽家族和腦利尿鈉肽家族被證明在評估HF中有重要價值。HF的預(yù)后和需求至少部分因為滯后的診斷，50%的HF患者在診斷后兩年之內(nèi)死亡。5年生存率小于30%。急切需要一種輔助心力衰竭早期診斷的新生化標(biāo)識物。在心力衰竭風(fēng)險個體，即，無心力衰竭臨床癥狀的個體的早期評估中的改進(jìn)是^皮證明是正確的(warranted)。最近幾年確立了以B型利尿鈉肽標(biāo)識物作為一種很好的手段來監(jiān)測HF患者的疾病進(jìn)程并評估他們心臟血管并發(fā)癥，如心臟病發(fā)作的風(fēng)險。然而，對于其他很多方面的診斷單一的標(biāo)識物是不夠的。NT-proBNP的低值對于HF或LVD的排除具有很高的陰性預(yù)測值，在上述的和其他的研究(參考TriepelsR.H.,等Clin.Chem.49,Suppl.(2003)A37-38)中心力衰竭的陽性預(yù)測值已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在50-60%的范圍內(nèi)。因此一種用于評估個體心力衰竭風(fēng)險的標(biāo)識物具有很高的臨床/實際重要性，它獨(dú)立地對于HF具有高的陽性預(yù)測值，或者協(xié)同NT-proBNP并且與單獨(dú)的NT-proBNP比較起來對于HF具有更好的陽性預(yù)測值。為了使這個重要并急需的臨床診斷領(lǐng)域取得更深遠(yuǎn)的技術(shù)進(jìn)步，一種輔助評估心力衰竭患者的標(biāo)識物意義重大。發(fā)明概述現(xiàn)在人們發(fā)現(xiàn)并確定了標(biāo)識物SLIM-1能輔助評估心力衰竭。在一個實施方式中它可以有助于評估個體是否具有發(fā)展心力衰竭的風(fēng)險。在進(jìn)一步的方面中，它可以輔助評估疾病的進(jìn)展。在另一個實施方式中，它可以輔助預(yù)測心力衰竭的發(fā)作。在另一個實施方式中，它能輔助評估并選擇一種適當(dāng)?shù)闹委煼桨敢灶A(yù)防或治療心力衰竭。在此公開的是一種評估個體心力衰竭的方法，包括步驟測量從該個體獲得的樣品中標(biāo)識物SLIM-1的濃度，4壬選地測量樣品中一種或更多種其他心力衰竭標(biāo)識物的濃度，通過將SLIM-1的濃度和任選地一種或更多種其他標(biāo)識物的濃度與對照樣品中確定的該標(biāo)識物或這些標(biāo)識物的濃度進(jìn)行比較來評估心力衰竭。該發(fā)明也涉及蛋白SLIM-1作為標(biāo)識物分子在心力衰竭評估中的用途。還公開了包括SLIM-1和一種或更多種其他心力衰竭標(biāo)識物的標(biāo)識物組合在評估心力衰竭中的用途。同時提供試劑盒，其用于進(jìn)行體外評估心力衰竭的方法，該方法包括步驟測量樣品中標(biāo)識物SLIM-1的濃度，任選地測量樣品中一種或更多種其他的心力衰竭標(biāo)識物的濃度，通過將SLIM-1的濃度和任選地一種或更多種其他標(biāo)識物的濃度與參考群體中確定的該標(biāo)識物或這些標(biāo)識物的濃度進(jìn)行比較以評估心力衰竭，該試劑盒包括特異性測定SLIM-1需要的試劑和任選地特異性測定所述一種或更多種其他心力衰竭標(biāo)識物的需要的試劑。'本發(fā)明其他方面和優(yōu)點(diǎn)將通過隨后的描述而變得明顯。然而應(yīng)該明白，當(dāng)指本發(fā)明優(yōu)選實施方式時，僅是以例示方式提供詳細(xì)描述和特定實施例，因為從該詳細(xì)描述中在本發(fā)明精神和范圍內(nèi)的各種變化和修改對于本領(lǐng)域技術(shù)人員將是明顯的。發(fā)明詳述在第一個實施方式中，本發(fā)明涉及一種評估個體心力衰竭的方法，包括步驟a)測量從該個體獲得的樣品中標(biāo)識物SLIM-1的濃度，b)任選地測量樣品中一種或更多種其他心力衰竭標(biāo)識物的濃度，c)通過將步驟(a)中確定的濃度和任選地步驟(b)中確定的濃度與對照樣品中確定的該標(biāo)識物或這些標(biāo)識物的濃度比4交以評估心力衰竭。如在此使用的，下列每一個術(shù)語都具有與在本節(jié)中的它相關(guān)的意義。在此使用的冠詞"一"是指一或超過一(即至少一)的該冠詞的語法客體。例如，"一種抗體"表示一種抗體或一種以上的抗體。"一或更多"表示1至50個，優(yōu)選1到20，也優(yōu)選2、3、4、5、6、7、8、9、10、12或15。在此使用的術(shù)語"標(biāo)識物"或"生化標(biāo)識物"指一種分子，該分子作為用于分析患者的測試樣品的靶標(biāo)。在一個實施方式中，這些分子靶標(biāo)的實例是蛋白質(zhì)或多肽。在本發(fā)明中用作標(biāo)識物的蛋白或多肽預(yù)計包括所述蛋白天然存在的片段，特別是免疫學(xué)可檢測的片段。免疫學(xué)可檢測的片段優(yōu)選包含所述標(biāo)識物多肽的至少6、7、8、10、12、15或20個連續(xù)氨基酸。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識到細(xì)胞釋放的蛋白或細(xì)胞外基質(zhì)中存在的蛋白會被損壞，比如在炎癥階段，并且可被降解或者裂解成這樣的片段。某些標(biāo)識物以非活性的形式合成，隨后可能通過蛋白水解被活化。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，蛋白質(zhì)或其片段也可以作為復(fù)合物的一部分存在。這些復(fù)合物也可能用作本發(fā)明意義上的標(biāo)識物。此外，或可選的，標(biāo)識物多肽可以帶有翻譯后修飾。翻譯后修飾的實例有糖基化、?；?或磷酸化等等。術(shù)語"評估心力衰竭"是指按照本發(fā)明的方法將輔助醫(yī)師評估個體是否具有發(fā)展心力衰竭的風(fēng)險，或輔助醫(yī)師在HF診斷相關(guān)的一個或幾個其他的領(lǐng)域評估HF患者。評估HF個體優(yōu)選的診斷相關(guān)領(lǐng)域為心力衰竭的分期、急性和慢性心力衰竭的鑒別診斷、判斷疾病進(jìn)程的風(fēng)險、指導(dǎo)選擇適當(dāng)?shù)乃幬?、治療反?yīng)的監(jiān)視和隨訪HF患者。本發(fā)明意義上的"心力衰竭標(biāo)識物"是〗壬何標(biāo)識物，如果該標(biāo)識物與標(biāo)識物SLIM-1相結(jié)合能為研究中的診斷疑難增加HF評估的相關(guān)信息。對評估HF而言，將所述標(biāo)識物納入一種已包含標(biāo)識物SLIM-1的標(biāo)識物組合，如果在給定特異性下的敏感性或如果在給定敏感性下的特異性可被分別提高，該信息被認(rèn)為是相關(guān)的或具有附加價值。優(yōu)選地，在敏感性或特異性方面的提高分別是統(tǒng)計學(xué)上顯著的，具有p=0.05、0.02、0.01或更小的顯著性水平。優(yōu)選地，一種或更多種心力衰竭的其他標(biāo)識物選自利尿鈉肽標(biāo)識物、心臟肌鈣蛋白標(biāo)識物和炎癥標(biāo)識物。在此使用的術(shù)語"樣品"指一種為了進(jìn)行體外評價而獲取的生物樣品。在本發(fā)明方法中，樣品或患者樣品優(yōu)選地可包含任何體液。優(yōu)選的試驗樣品包括血液、血清、血漿、尿液、唾液和關(guān)節(jié)液。優(yōu)選樣品是全血、血清、血漿或關(guān)節(jié)液，血漿或血清是最方便的樣品種類。技術(shù)人員將會知道，任何這樣的評估在體外進(jìn)行。然后丟棄患者樣品?；颊邩悠穬H僅用于本發(fā)明的體外方法并且患者樣品中的物質(zhì)不會回輸給患者身體。一般地，樣品是液體樣品，例如，全血、血清或血漿。"將......濃度與對照樣品中確定的濃度進(jìn)行比較"的表述僅用于進(jìn)一步的舉例對于4支術(shù)人員來il顯而易見的內(nèi)容。對照樣品可以是內(nèi)部對照或外部對照樣品。在一個實施方式中，使用內(nèi)部對照樣品，即在受試樣品中評估標(biāo)識物水平，并在取自于同一個受試者的一個或更多個其他樣品中也評估該標(biāo)識物水平以確定所述標(biāo)識物水平是否有任何的變化。在另一個實施方式中，使用外部對照樣品。對于外部對照樣品，來自該個體的樣品中標(biāo)識物的存在或數(shù)量將與另一個體中該標(biāo)識物的存在或數(shù)量進(jìn)行比較，后者個體已知正患有或已知具有某種給定狀況的風(fēng)險，或者個體已知沒有給定狀況，即"正常個體"。例如，在患者樣品中的標(biāo)識物水平可與HF中與特定病程有關(guān)的已知水平相比較。通常，樣品標(biāo)識物水平直接或間接與診斷相關(guān)，并且例如該標(biāo)識物水平用于確定個體是否具有HF的風(fēng)險。可選擇地，例如，樣品的標(biāo)識物水平可以與已知與在HF患者治療時的反應(yīng)、急性和慢性心力衰竭鑒別診斷、選擇適當(dāng)?shù)乃幬镏委烪F的指導(dǎo)、鑒別疾病進(jìn)展風(fēng)險或隨訪HF患者有關(guān)的標(biāo)識物水平相比較。根據(jù)計劃的診斷用途，選擇適當(dāng)?shù)膶φ諛悠凡⑶掖_定其中標(biāo)志物的對照或參考值。技術(shù)人員將理解在一個實施方式中這些對照樣品是從參考群體獲得的，該群體年齡匹配并且沒有混雜的疾病。同時^支術(shù)人員明了，在對照樣品中確定的標(biāo)識物絕對值將由所用的試驗方法決定。優(yōu)選從來自于適當(dāng)參考群體的100位明確表征的個體的樣品被用于確定對照(參考)值。還優(yōu)選的是，參考群體也可以被選擇由20、30、50、200、500或1000個個體組成。健康個體代表優(yōu)選的參考群體以確定對照值。在一個實施方式中，對照樣品是內(nèi)部對照樣品。該實施方案中的系列樣品來自接受研究的個體，并且比較標(biāo)識物水平。從來自個體的樣品測定的SLIM-1的提高的值是心力衰竭的指示。對照組或?qū)φ杖后w中測得的SLIM-1值用于例如確定截止值或參考范圍。高于該截止值或超出參考范圍和高端點(diǎn)的數(shù)值被認(rèn)為是升高了。在一個實施方式中，固定的截止值被確定。選定該截止值以符合感興趣的診斷問題。在一個實施方式中，從對照組或?qū)φ杖后w中測量的SLIM-1值用于確定參考范圍。在優(yōu)選的實施方式中，如果測量值高于參考范圍的90%，SLIM-1濃度^皮認(rèn)為升高。在進(jìn)一步優(yōu)選的實施方式中如果測量值高于參考范圍的95%、96%、97%或97.5%,SLIM-1濃度被認(rèn)為升高。在一個實施方式中，對照樣品為內(nèi)部對照樣品。在該實施方式中，從研究的個體中獲得系列樣品并比較標(biāo)識物水平。這樣可能對于比如評價治療效果是有用的。按照本發(fā)明的方法基于從個體獲得的液體樣品，并基于這些樣品中的SLIM-1測量。在此使用的"個體"指單個人類或非人類生物體。因此在此描述的方法和組合物可應(yīng)用到人類和動物疾病。優(yōu)選的個體是人。SLIM蛋白，特別是SUM-1SLIM-1、SLIM-2、SLIM-3的蛋白序列各自包括4個完整的LIM結(jié)構(gòu)i或和第五個LIM結(jié)構(gòu)i或的后半部分(FHL，四個半LIM蛋白)。SLIM-1分子量為36kD，由280個氨基酸組成(參見SEQIDNO:l)。最初，LIM蛋白家族的命名源于首次發(fā)現(xiàn)LIM序列的三個經(jīng)鑒定的轉(zhuǎn)錄因子的首字母lin-l1(Freyd,G.等.，Nature344(1990)876-879)、isle(Karlsson,O.等，Nature344(1990)879-882)和mec-3(Way,J.C.和Chalfie,M.,Cell54(1988)5-16)。LIM蛋白涉及大量的細(xì)胞功能，例如轉(zhuǎn)錄、癌轉(zhuǎn)化、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞粘附。由于LIM結(jié)構(gòu)域包含鋅指結(jié)構(gòu)，這可以通過蛋白-蛋白相互作用來實現(xiàn)。LIM結(jié)構(gòu)域可以與其他LIM結(jié)構(gòu)域締合，從而形成同二聚體和異二聚體(Feuerstein,R.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA91(1994)10655-10659)。據(jù)報道SLIM-1/FHL-1的定位是在骨骼成肌細(xì)胞的l占著斑，它促進(jìn)依賴整聯(lián)蛋白的細(xì)胞擴(kuò)展和遷移(Robinson等，Am.J.Physiol.284(2003)C681)。近來人骨骼肌文庫的酵母雙雜交篩選鑒定出肌球蛋白結(jié)合蛋白C(MyBP-C)是FHL-1結(jié)合伴侶，并推測FHL-l的功能是MyBP-C活性和肌節(jié)裝配的調(diào)節(jié)因子(McGmth,M丄等，J.Biol.Chem.281(2006)7666-7683)。FHL-1的表達(dá)才莫式暗示FHL-1在胚胎發(fā)育過程中(Chu,P.H.等，Mech.Dev.95(200)259-265)和出生后骨骼肌生長過程中在心臟中發(fā)揮重要作用。已發(fā)現(xiàn)在拉伸引發(fā)的骨骼肌肥大過程中FHL-1mRNA水平升高(Morgan,M丄等,Biochem.Biophys.Res.Commun.212(1995)840-846)。去神經(jīng)支配引發(fā)的萎縮過程中FHL-1mRNA水平下降(Loughna，P.T.等，Mol.CellBiol.Res.Commun.3(2000)136-140)。不一致的研究報道了，人衰竭心臟中的SLIM-1mRNA分別的上調(diào)或下調(diào)。據(jù)報道，人月巴大心臟中的FHL-1mRNA表達(dá)增加(Hwang,D.M.等，Circulation96(1997)4146-4203;Hwang,D.M.等，Genomics66(2000)1畫14;Lim，D,S.等,J.Am.Coll.Cardiol.38(2001)1175-1180)。相反，Loughna,P.T.等，Mol.Cell.Biol.Res.Commun.3(2000)136-140和Zimme謹(jǐn)nn,R.等，Circulation100，Suppl.1(1999)565報道FHL-1表達(dá)下降。Yang,J等(Circulation102(2000)3046-3052)報道源自人衰竭心臟的組織中，SLIM-1的mRNA和蛋白水平均減少。US2006/0094038描述了在個體對心力衰竭易感性的診斷中，眾多基因的差別基因表達(dá)，包括FHL-1(上調(diào))和FHL-2(下調(diào))。此外，描述了FHL-1mRNA差別表達(dá)在皮膚、神經(jīng)、造血和胚胎干細(xì)胞群中的微陣列研究，暗示FHL-1在多種干細(xì)胞和祖細(xì)胞群中更廣泛的作用(Ramalho-SantosM.等，Science298(2002)597-600;Tumbar，T.等，Science303(2004)359-363)。另夕卜，一些專利申請通過分析FHL-1的差別表達(dá)，進(jìn)行腫瘤診斷。US2005/0037389公開了眾多基因，其中之一是FHL-1，可用于診斷子宮漿液性乳頭狀癌和卵巢漿液性乳頭瘤。US2005/0048535公開了包括FHL-1的候選基因列表，它們與原發(fā)卵巢漿液性乳頭瘤有關(guān)。US2004/0029151描述了前列腺癌的基因概況分析(geneticprofiling),在其他許多差別表達(dá)的基因中提到了SLIM-l。WO2006/112867涉及通過基因概況分析的乳頭狀腎細(xì)胞癌侵襲性診斷，在其他許多差別表達(dá)的基因中提到了SLIM-l。WO2004/092410描述了分別在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或骨關(guān)節(jié)炎中SLIM-l的差別表達(dá)。還報道了另一種疾病多發(fā)性硬化癥與FHL-1基因表達(dá)相關(guān)(上調(diào))(US2004/0018522和US2004/0156826)。因此似乎現(xiàn)有4支術(shù)通過分析相應(yīng)的mRNA水平已廣泛研究了SLIM-l的基因表達(dá)。這些研究并不清楚因為相反的數(shù)據(jù)也被報道。另外迄今也沒有顯示SLIM-l蛋白水平與循環(huán)中心力衰竭之間關(guān)系的數(shù)據(jù)。優(yōu)選地，標(biāo)識物SLIM-l是通過使用特異結(jié)合試劑從液體樣品中特異性測定的。特異結(jié)合試劑是例如SLIM-l受體，結(jié)合SLIM-l的凝集素或SLIM-l的抗體。特異結(jié)合試劑對其相應(yīng)的靶分子具有至少1071/mol的親合力。特異結(jié)合試劑優(yōu)選對靶分子具有1081/mol或更優(yōu)選109l/mol的親合力。技術(shù)人員應(yīng)理解術(shù)語"特定"用于表示存在于樣品中的其他生物分子不能與SLIM-l特異結(jié)合試劑有明顯的結(jié)合。優(yōu)選靶分子的親合力的10%或更小，更優(yōu)選地僅5%或更小。優(yōu)選的特異結(jié)合試劑應(yīng)具有上述親合力以及特異性的最低的標(biāo)準(zhǔn)。特異結(jié)合試劑優(yōu)選是與SLIM-l反應(yīng)的抗體。術(shù)語"抗體"指多克隆抗體、單克隆抗體、這些抗體的抗原結(jié)合片段、單鏈抗體以及包括抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的遺傳構(gòu)建物。任何保留上述特異結(jié)合試劑標(biāo)準(zhǔn)的抗體片段都能被使用?？贵w可通過目前工藝水平步驟所生產(chǎn)，例如，如Tijssen描述(Tijssen,P.，酶4關(guān)免疫分沖斤的實踐和理i侖(Practiceandtheoryofenzymeimmunoassays)，ElsevierSciencePublishersB.V.,阿姆斯特丹(1990)，全書，特別是43-78頁)。此外，技術(shù)人員非常了解基于可用于抗體特異性分離的免疫吸附劑的方法。通過這些方法，多克隆抗體的質(zhì)量以及由此它們在免疫測定中的性能可被增強(qiáng)(Tijssen，P.，上文，108-115頁)。對于在該本發(fā)明中公開的成果，可以使用從兔子獲得的多克隆抗體。然而，很清楚，從不同的物種，例如大鼠、山羊或豚鼠中獲得的多克隆抗體以及單克隆抗體也可以使用。因為單克隆抗體能以恒定性能按需要的數(shù)量生產(chǎn)，它們是臨床常規(guī)的分析的開發(fā)中的理想工具。在根據(jù)本發(fā)明的方法中，產(chǎn)生和使用SLIM-1的單克隆抗體分別代表其他的優(yōu)選實施方式?，F(xiàn)在技術(shù)人員應(yīng)理解，SLIM-1已經(jīng)鑒定為在評估HF中有用的標(biāo)識物，可用替代方法獲得與本發(fā)明成果相當(dāng)?shù)慕Y(jié)果。例如，可使用產(chǎn)生抗體的替代策略。這些策略包括使用合成或重組肽等等，這些肽代表SLIM-1的臨床相關(guān)的表位以用于免疫。可選地，可以使用DNA免疫，又稱i故DNA疫苗4矣種。對于測量，將從個體中獲得的液體樣品和SLIM-1的特異結(jié)合試劑在適合形成結(jié)合試劑SLIM-l-復(fù)合物的條件下孵育。這些情況無須特別指定，因為即便沒有任何創(chuàng)造性勞動技術(shù)人員也可以很容易地鑒定這些適當(dāng)?shù)姆跤龡l件。測定結(jié)合試劑SLIM-l-復(fù)合物的數(shù)量并用于HF的評估。技術(shù)人員應(yīng)理解，有許多的方法可測定特異結(jié)合試劑SLIM-l-復(fù)合物的數(shù)量，這些方法在相關(guān)的教科書中有詳細(xì)地描述(參見,例^口,TijssenP.，上文，或Diamandis,E.P.andChristopoulos,T.K.(eds.),Immunoassay,AcademicPress,Boston(1996))。優(yōu)選地，使用三明治檢驗形式檢測SLIM-1。在這種檢驗中，用第一特異結(jié)合試劑從一側(cè)捕獲SLIM-1,并使用帶有能直接或間接檢測標(biāo)記的第二特異結(jié)合試劑作用于另一側(cè)。優(yōu)選地，在定性(有或無SLIM-1)或定量(確定SLIM-1的量)的免疫測定中，使用抗SLIM-1的抗體。如在實施例部分詳細(xì)描述的，兩種小鼠模型已經(jīng)用于鑒定通過先進(jìn)的蛋白組方法在實驗動物心臟組織中發(fā)現(xiàn)的多肽。然而這些模型得到了至少部分矛盾的數(shù)據(jù)，當(dāng)然多肽的組織數(shù)據(jù)并不能代表這些多肽在循環(huán)中的有或無。在一種模型中被發(fā)現(xiàn)差異表達(dá)的標(biāo)識物可能不能在第二種模型中差異表達(dá)，或者甚,至在進(jìn)一步的模型中顯示出矛盾的數(shù)據(jù)。即使蛋白可以在組織中差異表達(dá)，但如果從體液中測定，大多數(shù)情況下這種蛋白沒有任何診斷性關(guān)聯(lián)，因為它可能不被釋放至循環(huán)中，可能變成片段或者被修飾，例如從細(xì)胞或者組織釋放時，可能在循環(huán)系統(tǒng)中不穩(wěn)定，可能在循環(huán)系統(tǒng)中不能被檢測，可能對于特定的疾病不特異，等等。令人驚訝地，本發(fā)明的發(fā)明人能在體液樣品中檢測蛋白SLIM-1。更意外地是，他們能證明在這種獲自個體的液體樣品中SLIM-1的存在可以與HF相關(guān)。4吏用標(biāo)識物SLIM-1評估HF無需組織和活4企樣品。測量蛋白SLIM-1的水平在HF領(lǐng)域被認(rèn)為是十分優(yōu)越的。在一個優(yōu)選實施方式中，依據(jù)本發(fā)明的方法是以血清作為液體樣品材料進(jìn)行的。在一個更優(yōu)選的實施方式中，按照本發(fā)明的方法是以血漿作為液體樣品材料進(jìn)行的。在另一個優(yōu)選的實施方式中，按照本發(fā)明的方法是以全血作為液體樣品材料進(jìn)行的。在進(jìn)一步優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明涉及蛋白SLIM-1作為標(biāo)識物分子從獲自個體的液體樣品來評價心力衰竭的用途。用于診斷的理想情況應(yīng)是其中單一事件或者過程導(dǎo)致相應(yīng)疾病的情況，例如傳染病。在其他所有的病例中正確的診斷是^f艮難的，尤其是該疾病的病原學(xué)沒有像HF病那樣被充分認(rèn)識。技術(shù)人員應(yīng)理解，在HF領(lǐng)域，針對某一診斷問題，沒有生化標(biāo)識物在診斷上有100%特異性并同時具有100%敏感性。生化標(biāo)識物更合適用以某種可能性或者預(yù)測值來評估潛在的診斷問題。技術(shù)人員十分熟悉對于評價診斷問題時用來計算相對危險性或者可能性的常規(guī)數(shù)學(xué)/統(tǒng)計方法。在常規(guī)臨床實踐中，在醫(yī)師診斷、治療和處置潛在疾病時通常會同時考察各種的臨"^癥狀和生物標(biāo)志物。優(yōu)選地，在本發(fā)明的進(jìn)一步優(yōu)選的實施方式中，用于評估HF的方法是通過測量SLIM-1和一種或更多種其他的標(biāo)識物的濃度并通過在HF的評估中利用SLIM-1和一種或更多種其他的標(biāo)識物的濃度來實現(xiàn)的。在評估HF中，標(biāo)識物SLIM-1將會以下面的一個或更多個方面輔助醫(yī)師:評估個體患心力衰竭的風(fēng)險或者評估患有心力衰竭的患者，例如鑒定心力衰竭的階段；區(qū)分急性和慢性心力衰竭；判斷疾病進(jìn)程的風(fēng)險；對選擇適當(dāng)治療提供指導(dǎo)；監(jiān)測患者對治療的反應(yīng)；監(jiān)測病程，即隨訪HF患者。篩選(評估個體是否有發(fā)展心力衰竭的風(fēng)險)在一個優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明涉及一種評估個體是否有發(fā)展心力衰竭風(fēng)險的體外方法，包括步驟測量樣品中標(biāo)識物SLIM-1的濃度，任選地測量樣品中一種或更多種心力衰竭的其他標(biāo)識物的濃度，通過將該SLIM-1濃度和任選地對所述任選的一種或更多種其他標(biāo)識物觀'J量的濃度與該標(biāo)識物或這些標(biāo)識物濃度的參考值比較來評價所述個體發(fā)展為心力衰竭的風(fēng)險。本發(fā)明意義上的篩選涉及關(guān)于個體發(fā)展心力衰竭的風(fēng)險的無偏見的評估。而這種篩選在理論上可以對任何樣品進(jìn)行，在臨床實踐中這種篩選通常會給予具有以某種方式發(fā)展心力衰竭風(fēng)險的個體。按以上討論的，這種個體可以無臨床癥狀，即他們沒有HF的體征或者癥狀。在一個優(yōu)選實施方式中，將對具有發(fā)展心力衰竭風(fēng)險的個體進(jìn)行HF篩選，例如屬于按ACC/AHA實踐指南定義的階段A或者B。如上述，心力衰竭是發(fā)達(dá)國家中流行性最高、花費(fèi)最多和對生命威脅最嚴(yán)重的疾病之一。因為它的高流行性和無癥狀期長，為了干預(yù)并如果可能的話阻斷該病程，對于個體發(fā)展HF風(fēng)險的鑒定將變得極其重要。只有進(jìn)行足夠早期的風(fēng)險評估，才可能阻止HF病程從無癥狀期進(jìn)入有癥狀期。心力衰竭風(fēng)險的評估是通過數(shù)學(xué)/統(tǒng)計方法進(jìn)行的，技術(shù)人員對該方法有充分地認(rèn)識和理解。優(yōu)選地，個體患心力衰竭的風(fēng)險是以相對值表示的并按所謂的相對風(fēng)險性(RR)來給出。為了計算這種心力衰竭的RR，將SLIM-1的個體數(shù)值與在參考群體中確定的數(shù)值進(jìn)行對比，優(yōu)選不發(fā)生心力衰竭的健康個體。此外優(yōu)選對這種心力衰竭RR的評估基于在研究期內(nèi)，優(yōu)選一年或者也可優(yōu)選兩年之內(nèi)發(fā)展心力衰竭的個體群和在相同研究期內(nèi)未發(fā)展心力衰竭的個體群。在另一個優(yōu)選實施方式中，本發(fā)明涉及標(biāo)識物SLIM-1來篩選心力衰竭的用途。如技術(shù)人員熟知，術(shù)語"用作標(biāo)識物"表示標(biāo)識物分子的濃度可以通過適當(dāng)手段進(jìn)行量化而且測出的這種標(biāo)識物的值將用于指示，即標(biāo)示，疾病或者臨床狀況的有或無。用于定量的適當(dāng)手段例如是特異結(jié)合試劑，如抗體。優(yōu)選地，HF篩選將實施于懷疑在未來出現(xiàn)心力衰竭風(fēng)險的個體上。在該意義上，具有未來心力衰竭風(fēng)險的患者是已診斷有高血壓、動脈粥樣硬化疾病、糖尿病、肥胖和代謝綜合4正的患者。優(yōu)選地，對患有高血壓、動脈粥樣硬化疾病、糖尿病和/或代謝綜合征的個體進(jìn)行未來心力衰竭的風(fēng)險評估。還優(yōu)選的是，標(biāo)識物SLIM-1對處于按照ACC/AHA實踐指南定義的階段B中的個體，即呈現(xiàn)心臟結(jié)構(gòu)改變但沒有顯示心力衰竭癥狀的個體評估未來心力衰竭風(fēng)險的用途。在一個更優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明涉及SLIM-1作為HF標(biāo)識物組合的一種標(biāo)識物用于HF篩選目的的用途。在篩選設(shè)置中，SLIM-1的水平升高是個體發(fā)展心力衰竭的風(fēng)險升高的陽性指示。患者的分級在一個優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明涉及一種輔助對心力衰竭患者分級的體外方法，包括步驟a)測量樣品中標(biāo)識物SLIM-1的濃度，b)任選地測量樣品中一種或更多種心力衰竭的其他標(biāo)識物的濃度，并通過將在步驟(a)中確定的濃度和任選地步驟(b)中確定的濃度與該標(biāo)識物或這些標(biāo)識物濃度的參考值進(jìn)行比較來對心力衰竭進(jìn)行分級。優(yōu)選地標(biāo)識物SLIM-1的水平用作在分級中輔助將受試個體分入個體組，這些組為臨床"正常"(即，按照ACA/ACC分類在階段A的個體)，具有結(jié)構(gòu)心臟病但無癥狀的患者(按照ACA/ACC分類的階段B)和心力衰竭患者組(即，按照ACA/ACC分類處于階段C或階段D的患者)。區(qū)別急性心臟事件和慢性心臟病在一個優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明涉及輔助鑒別診斷急性心臟事件和慢性心臟病的體外方法，包括步驟測量樣品中標(biāo)識物SLIM-1的濃度，任選地測量樣品中一種或更多種心力衰竭的其他標(biāo)識物的濃度，并通過將步驟(a)確定的濃度和任選地步驟(b)中確定的濃度與這個標(biāo)識物或這些標(biāo)識物濃度的參考值進(jìn)行比較以確立對急性心臟事件和慢性心臟病的鑒別診斷。所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員熟悉"急性心臟事件"和"慢性心臟病"的意優(yōu)選地，"急性心臟事件"涉及心臟的急性狀況、疾病或機(jī)能紊亂，特別指急性心力衰竭，例如，心肌梗死(MI)或心律失常。根據(jù)MI的程度，可能后續(xù)LVD和CHF。優(yōu)選地，"慢性心臟病"是心臟功能的減弱，例如，由于心臟缺血、冠狀動脈病或前期的特別小型的心肌梗死(也許后續(xù)發(fā)生進(jìn)行性LVD)造成。也可能由于炎性疾病、心臟瓣膜缺陷(例如二尖瓣缺陷)、擴(kuò)張型心肌病(dilatativecardiomyopathy)、月巴厚型心肌病、心臟節(jié)奏缺陷(心律失常)和慢性阻塞性肺病造成。因此，慢性心臟病顯然也可以包括患有過急性冠狀綜合征，例如MI的患者，但他們當(dāng)前沒有患有急性心臟事件。區(qū)分急性心臟事件和慢性心臟病十分重要，因為急性心臟事件和慢性心臟病可能要求相當(dāng)不同的治療方案。例如對于存在急性心肌梗死的患者早期再灌注治療可能極度重要。而對慢性心力衰竭的患者進(jìn)行再灌注治療最多是對這個患者無害或僅僅是幾乎無害。按照本發(fā)明的一個更優(yōu)選的實施方式，標(biāo)識物SLIM-1用于鑒別診斷急性和慢性心力衰竭。評估疾病進(jìn)展的風(fēng)險在一個優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明涉及一種評估HF患者疾病進(jìn)展風(fēng)險的體外方法，包括步驟在樣品中測量標(biāo)識物SLIM-1的濃度，任選地測量樣品中一種或更多種心力衰竭的其他標(biāo)識物的濃度，通過將該SLIM-1濃度和任選地對所述任選的一種或更多種其他的標(biāo)識物確定的濃度與該標(biāo)識物或這些標(biāo)識物的濃度的參考值比較來確定所述個體疾病進(jìn)展的風(fēng)險。目前很難評估或甚至預(yù)言一種合理的可能性，即診斷有HF的患者是否具有一種或多或少的穩(wěn)定狀態(tài)，或是否疾病將會發(fā)展，以及患者的健康狀態(tài)是否最終可能惡化。心力衰竭的嚴(yán)重性和進(jìn)展在臨床上通常通過評估臨床癥狀或使用成像技術(shù)，如超聲波心動描記術(shù)鑒定有害變化而確定的。在一個具體實施方式中，心力衰竭的惡化是通過監(jiān)測左側(cè)心室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)來確定。LVEF的5%或更多的惡化被認(rèn)為是疾病進(jìn)展。在進(jìn)一步優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明因此涉及標(biāo)識物SLIM-1來評估患有HF患者的疾病進(jìn)展風(fēng)險的用途。在患有HF的患者的疾病進(jìn)展評估中，SLIM-1水平的升高指示在HF早期階段疾病進(jìn)展的風(fēng)險升高，而SLIM-1水平的降低指示末期心力衰竭。指導(dǎo)選擇適當(dāng)?shù)腍F治療方法在一個優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明涉及輔助選擇適當(dāng)?shù)腍F療法的體外方法，包括步驟在樣品中測量標(biāo)識物SLIM-1的濃度，任選地測量樣品中一種或更多種心力衰竭的其他標(biāo)識物的濃度，并通過將該SLIM-1濃度和4壬選地對所述^f壬選的一種或更多種其4也的標(biāo)識物測定的濃度與該標(biāo)識物或這些標(biāo)識物的濃度的參考值比較來選擇適當(dāng)?shù)寞煼?。人們期望?biāo)識物SLIM-1能輔助醫(yī)師從心力衰竭領(lǐng)域中手邊各種治療方案中選擇最適當(dāng)?shù)闹委煼桨?。因此一個更優(yōu)選的實施方式涉及了標(biāo)識物SLIM-1在選擇治療患HF患者的方案中的用途。監(jiān)測患者對治療方法的反應(yīng)在一個優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明涉及一種監(jiān)測患者對HF治療方法的反應(yīng)的體外方法，包括步驟a)在樣品中測量標(biāo)識物SLIM-1的濃度，b)任選地測量樣品中一種或更多種心力衰竭的其他標(biāo)識物的濃度，并通過將步驟(a)中確定的SLIM-1濃度和任選地步驟(b)中確定的濃度與該標(biāo)識物或這些標(biāo)識物的濃度的參考值比較來監(jiān)測患者對HF治療方法的反應(yīng)?？蛇x擇地，上述用于監(jiān)測患者對療法反應(yīng)的方法可以通過確定治療前后SLIM-1和任選所述一種或更多種其他標(biāo)識物的標(biāo)識物水平并對治療前后的標(biāo)識物水平加以比較來實施。心力衰竭的診斷是臨床確定的。根據(jù)本發(fā)明，如果患者到達(dá)按ACC/AHA實踐指南定義的階段C或D的標(biāo)準(zhǔn)，HF被認(rèn)為是臨床確定的。依據(jù)該指南，階段C指患者具有結(jié)構(gòu)性心臟病并有心力衰竭的較早或當(dāng)前癥狀。階段D的患者是具有難治性心力衰竭的患者，需要專門的干預(yù)。進(jìn)一步如上所示，測定的NT-proBNP值與心力衰竭的嚴(yán)重性高度相關(guān)。然而，BNP和NT-proBNP在監(jiān)測患者對治療方法的反應(yīng)上并不理想,參考如Beck-da-Silva，L.等，Congest.HeartFail.11(2005)248-253,quiz254-255。標(biāo)識物SLIM-1看起來適合于監(jiān)測患者對治療方法的反應(yīng)。本發(fā)明因此也涉及SLIM-1監(jiān)測患者對治療方法的反應(yīng)的用途。在該診斷領(lǐng)域，標(biāo)識物SLIM-1還可以用于確定在治療之前的基線值并測定在治療之后的一個或幾個時間點(diǎn)的SLIM-1。在隨訪的HF患者中SLIM-1的水平升高是HF的治療有效的陽性指示。標(biāo)識物組合各生化標(biāo)識物可以被單獨(dú)測定，或者在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實施方式中，也可以用基于芯片或基于珠的陣列技術(shù)同時測定。然后用每個標(biāo)識物的單獨(dú)截止獨(dú)立解釋該生物標(biāo)識物的濃度或?qū)⑺鼈兘M合起來解釋，即它們形成標(biāo)識物組合。技術(shù)人員將理解將標(biāo)識物水平關(guān)聯(lián)于某種可能性或風(fēng)險的步驟可以用不同的方法進(jìn)行并完成。優(yōu)選地，標(biāo)識物SLIM-1和一種或更多種其他的標(biāo)識物的測定值用數(shù)學(xué)的方法進(jìn)行組合并且該組合值與潛在診斷問題關(guān)聯(lián)。標(biāo)識物的值可以用任何本領(lǐng)域適當(dāng)?shù)臄?shù)學(xué)法與SLIM-1的測量數(shù)據(jù)組合起來。優(yōu)選地，應(yīng)用于標(biāo)識物組合的數(shù)學(xué)算法是邏輯函數(shù)。應(yīng)用這種數(shù)學(xué)算法或這種邏輯函數(shù)的結(jié)果優(yōu)選是單一值。依賴于潛在診斷問題上，該值可以很容易地與如個體患心力衰竭的風(fēng)險或在評估HF患者中有益的其他計劃診斷應(yīng)用相互關(guān)聯(lián)。在一個優(yōu)選的方式中該邏輯函數(shù)按以下步驟獲得a)將個體分成組，例如正常、具有心力衰竭風(fēng)險的個體、具有急性或慢性心力衰竭患者等組，b)用單變量分析法鑒定這些組之間有顯著相異的標(biāo)識物，c)邏輯回歸分析以評估在評估這些不同各組中有用的標(biāo)識物獨(dú)立差異值，d)構(gòu)建邏輯函數(shù)來組合獨(dú)立差異值。在這類分析中標(biāo)識物不再是獨(dú)立的而代表標(biāo)識物組合。在一個優(yōu)選的實施方式中，用于組合SLIM-1值和另外至少一個標(biāo)識物值的邏輯函數(shù)通過以下方法獲得a)將個體分別地分入正常組和心力衰竭風(fēng)險個體組，b)確定SLIM-1的值和另外至少一個標(biāo)識物的值，c)進(jìn)行邏輯回歸分析，和d)構(gòu)建邏輯函數(shù)來組合SLIM-1的值和另外至少一個標(biāo)識物的4直。用于將標(biāo)識物組合與疾病關(guān)聯(lián)的邏輯函數(shù)優(yōu)選使用算法，這種算法通過統(tǒng)計方法的應(yīng)用而開發(fā)得到。適當(dāng)統(tǒng)計方法例如判別分析(DA)(即線性、二次方程、正規(guī)化(regularized)-DA),核方法(即SVM),非參數(shù)法(即k-最近-相鄰分級法)，PLS(偏最小二乘法)，基于樹狀法(即邏輯回歸，CART,隨才幾森林法，Boosting/Bagging法)，廣義線性模型(即，邏輯回歸)，基于主分量的方法(即，SIMCA),廣義加性模型，基于模糊邏輯的方法，基于神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)和遺傳算法的方法。技術(shù)人員選擇適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計方法來評價本發(fā)明的標(biāo)識物組合并藉此獲得適當(dāng)?shù)臄?shù)學(xué)算法應(yīng)沒有什么問題。優(yōu)選地，應(yīng)用統(tǒng)計方法來獲得用于評估心力衰竭的數(shù)學(xué)算法，該統(tǒng)計方法選自于DA(即線性-，二次方程-，正規(guī)化的判別分析)，核方法(即SVM),非參數(shù)法(即，k-最近-相鄰分級法),PLS(偏最小二乘法)，基于樹狀法(即邏輯回歸，CART,隨機(jī)森林法，Boosting方法)，或廣義線性模型(即邏輯回歸)。涉及這些統(tǒng)計方法的細(xì)節(jié)可在以下的參考資料中找到Ruczinski,I.等，J.ofComputationalandGraphicalStatistics12(2003)475-511;Friedman,J.H.，J.oftheAmericanStatisticalAssociation84(1989)165-175;Hastie，T.等，TheElementsofStatisticalLearning,SpringerVerlag(2001);Breiman,L.等,Classificationandregressiontrees,WadsworthInternationalGroup,California(1984);Breiman,L.,MachineLearning45(2001)5-32;Pepe,M.S.,theStatisticalEvaluationofMedicalTestsforClassificationandPrediction,OxfordStatisticalScienceSeries,28，OxfordUniversityPress(2003);和Duda,R.O.等，PatternClassification,JohnWiley&Sons，Inc,Inc.,2nded.(2001)。發(fā)明的一個優(yōu)選的實施方式是將優(yōu)化多變量截止用于生物標(biāo)志物的潛在組合并區(qū)分狀態(tài)A和狀態(tài)B，例如，分別區(qū)分正常和具有心力衰竭風(fēng)險的個體，對治療有反應(yīng)的HF患者和治療失敗，患有急性心力衰竭的患者和患有慢性心力衰竭的HF患者，顯示出疾病進(jìn)展的HF患者和未顯示疾病進(jìn)展的HF患者。在受試者工作曲線(receiveroperatorcurve)以下的面積(=AUC)能指示診斷程序的有效性或正確性。診斷方法的正確性最好是由它的受試者工作特征(receiver-operatingcharacteristics)(ROC)來進(jìn)行描述(特別見Zweig，M.H.，和Campbell,G.,Clin.Chem.39(1993)561-577)。ROC圖是從連續(xù)改變所有觀測數(shù)據(jù)的判定閾中全部敏感性/特異性配對結(jié)果的繪圖。實驗室試驗的臨床效果取決于它診斷的準(zhǔn)確性，或正確將受試者分級入臨床相關(guān)亞群的能力。診斷準(zhǔn)確性衡量該測定正確區(qū)別研究的受試者兩種不同狀況的能力。這些狀況例如健康和疾病或疾病進(jìn)展對沒有疾病進(jìn)展。在每個病例中，ROC曲線圖通過在判定閾全范圍中繪制敏感性對1-特異性的曲線來描述了兩種分布之間的重疊。y軸是敏感性，或真陽性分?jǐn)?shù)[按(真陽性測定結(jié)果數(shù)量)/(真陽性測定結(jié)果數(shù)量+假陰性測定結(jié)果數(shù)量)確定]。這也表示為疾病或狀況存在的陽性。它僅是通過受影響亞群計算得到。X軸是假陽性分?jǐn)?shù)，或l-特異性[按(假陽性結(jié)果數(shù)量)/(真陰性結(jié)果數(shù)量+假陽性結(jié)果數(shù)量)確定]。它是特異性的指標(biāo)，完全由未受影響亞群計算得到。因為真假陽性分?jǐn)?shù)完全分開計算，通過使用來自兩種不同亞群的試驗結(jié)果，ROC曲線圖與樣品中的疾病流行性無關(guān)。在ROC曲線圖中的每個點(diǎn)表示敏感性/l-特異性配對，其對應(yīng)于一個特定的判斷閾。辨別力很好的測定(在兩種結(jié)果分布上沒有重疊)具有的ROC曲線圖穿過左上角，真陽性分?jǐn)?shù)為1.0或100%(非常好的敏感性)，假陽性分?jǐn)?shù)是O(非常好的特異性)。對于一個無辨別力的測定(對兩組的結(jié)果分布相同)來說理論曲線圖是一條從左下角到右上角的45。對角線。大多數(shù)曲線在這兩種極端之間。(如果ROC曲線圖完全落在45。對角線下，這種情況很容易補(bǔ)救，即通過顛倒"陽性"標(biāo)準(zhǔn)，從"大于"到"小于"或反之亦然。)定性地，曲線圖越才妄近左上角，測定的總精度越高。量化實驗室試驗診斷準(zhǔn)確性的一個方便的目標(biāo)是通過單一數(shù)字來表示它的效果。最常用的總體量度是ROC曲線下的面積(AUC)。按照慣例，該面積總^).5(如果不是這樣，可以顛倒判定規(guī)則來使它如此)。數(shù)值介于l.O(兩組的測試值非常好地分開)和0.5(在測試值上兩組無明顯的分布差異)之間。該面積不僅僅依賴曲線圖的特定部分如最接近對角線的點(diǎn)或在90%特異性處的敏感性，而是整個曲線圖。這是一個定量的、描述性的表達(dá)式，表示ROC曲線圖接近完美(面積=1.0)的程度?？偟臋z驗敏感性依賴于特異性，該特異性對于實踐此處公開的方法是需要的。在某些優(yōu)選的設(shè)定中，75%的特異性可能足夠并且統(tǒng)計方法和結(jié)果算法可以基于該特異性的需求。在一個優(yōu)選的實施方式中，應(yīng)用于評估個體心力衰竭風(fēng)險的方法是基于80%、85%或優(yōu)選90%或95%的特異性。正如以上討^論的，標(biāo)識物SLIM-1有助于評估個體發(fā)展心力衰竭的風(fēng)險以及進(jìn)一步地在體外診斷評估患有心力衰竭患者。因此一個優(yōu)選實施方式是SLIM-1作為評估心力衰竭的標(biāo)識物分子的用途。4吏用包括SLIM-1和一種或更多種其他的HF標(biāo)識物的標(biāo)識物組合來評估HF患者或評估個體患HF風(fēng)險代表了本發(fā)明的一種進(jìn)一步優(yōu)選的實施方式。在這種標(biāo)識物組合中，一種或更多種其他的標(biāo)識物優(yōu)選地選自利尿鈉肽標(biāo)識物、心臟肌鉤蛋白標(biāo)識物和炎癥標(biāo)識物?？膳cSLIM-1測量組合的一種或更多種優(yōu)選的其他HF標(biāo)識物優(yōu)選選自利尿鈉肽標(biāo)識物、心臟肌4丐蛋白標(biāo)識物和炎癥標(biāo)識物。這些優(yōu)選的其他標(biāo)識物的測量優(yōu)選地與SLIM-1的測量組合或者形成包括-SLIM-1在內(nèi)的HF標(biāo)識物組合的一部分，它們在以下內(nèi)容中分別會有更詳細(xì)地討論。利尿鈉肽標(biāo)識物.在本發(fā)明意義上，利尿鈉肽標(biāo)識物可以是從心房利尿鈉肽(ANP)家族中挑選出來的標(biāo)識物，也可以是從腦利尿鈉肽(BNP)家族中挑選出來的標(biāo)識物。無論是在心房利尿鈉肽家族還是在腦利尿鈉肽家族中的多肽標(biāo)識物都是源自于相應(yīng)活性激素的前形式原(preproforms)。按照本發(fā)明優(yōu)選的利尿鈉肽標(biāo)識物是NT-proANP、ANP、NT-proBNP、BNP和可用免疫法4企測的其生理片4殳。技術(shù)人員4艮容易理解，可用免疫法檢測的片段必須包括至少一個表位以允許特異性檢測這種生理片段。生理片段是天然存在于個體循環(huán)的片段。在兩種利尿鈉肽家族中的標(biāo)識物代表相應(yīng)激素原的片段，分別即proANP和proBNP。因為對于兩個家族的考慮是相似的，僅對BNP標(biāo)識物家族作一些詳細(xì)描述。BNP家族的激素原，即proBNP,由108個氨基酸組成。proBNP被剪切成為32個C末端氨基酸(77-108),其代表有生物活性的激素BNP,和叫做N末端proBNP(或NT-proBNP)的N末端氨基酸1-76。BNP、N末端proBNP(l-76)以及進(jìn)一步的分解產(chǎn)物(Hunt，P.J.,等，Biochem.BiophysRes.Com.214(1995)1175-1183)在血液中循環(huán)。完整的前體分子(proBNPl-108)是否也存在于血漿現(xiàn)在還不完全明確。不過可以闡述為proBNP(1-108)在血漿中的低釋放量是可檢測的，但由于在其N末端的迅速局部降解，一些氨基酸是缺失的(Hunt,P丄，等，Peptides18(1997)1475-1481)?，F(xiàn)在普遍接受例如對于NT-proBNP,該分子殘存于氨基酸10至50之間的中心部分代表生理上更穩(wěn)定的部分。包括NT-proBNP的這個中心部分的NT-proBNP分子能從體液中被可靠地測定。關(guān)于基于免疫法4企測該NT-proBNP分子中心部分的方法在WO00/45176中有詳細(xì)的z〉開，讀者可以參考該處了解細(xì)節(jié)。僅測定NT-proBNP的某一亞組份可能更為優(yōu)越，對此提出了術(shù)語"天然NT-proBNP"。關(guān)于NT-proBNP亞組份的詳細(xì)公開可以在WO2004/099253中找到。技術(shù)人員將在那里找到所有必需的指導(dǎo)。優(yōu)選地，測定的NT-proBNP是或?qū)?yīng)于使用來自德國RocheDiagnostics的ElecsysNT-proBNP測定劑測定的NT-proBNP。應(yīng)用NT-proBNP進(jìn)行預(yù)分析是有效的，這樣可使樣品轉(zhuǎn)移至中心實驗室變得容易(Muelle，T.，等，Clin.Chem.Lab.Med.42(2004)942-944)。血樣可以在室溫下存儲幾天或可郵寄或運(yùn)輸而沒有回收率的損失。相反，將BNP儲存在室溫下或4。C48小時可能造成至少20%的濃度損失(Mueller,T.,等，上文;Wu，A.H.等，Clin.Chem.50(2004)867-873)。腦源的利尿鈉肽家族(尤其是BNP和NT-proBNP)已經(jīng)在對某些群體進(jìn)行HF篩選時進(jìn)行了徹底的研究。這些標(biāo)識物，尤其是NT-proBNP的發(fā)現(xiàn)是相當(dāng)鼓舞人心的。NT-proBNP的值甚至在無癥狀"患者"中升高，這種升高的值明確地表明了"心臟問題"(Gremmler，B.等，Exp.Clin.Cardiol.8(2003)91-94)。這些作者證明了升高的NT-proBNP顯示了"心-腎不適"的存在并應(yīng)該迅速安排進(jìn)一步檢查。與其他的組的研究人員相一致，Gremmler等也發(fā)現(xiàn)了NT-proBNP濃度異常對于排除群體中的HF和排除氣喘受試者中的左心室功能紊亂(-LVD)是準(zhǔn)確的診斷性試驗。陰性BNP或NT-proBNP值在排除HF或LVD時的作用被其他組研究人員確證，參考如McDonagh,T.A.等，Eur.J.HeartFail.6(2004)269-273;以及Gustafsson,F.等，J.Card.Fail.11，Suppl.5(2005)S15畫20。BNP主要在心室中產(chǎn)生(雖然不是唯一)并在壁壓力升高時釋放。因此，BNP釋放的升高主要反映了心室功能紊亂或起源于心房但影響心室的功能紊亂，例如，通過流入量減少或血容量過載。與BNP相反，ANP主要從心房產(chǎn)生并釋放。因此ANP的水平可能主要反映心房的功能。ANP和BNP是活性激素，與他們的相應(yīng)非活性對應(yīng)物NT-proANP和NT-proBNP相比具有較短的半衰期。BNP在血液中被代謝，而NT-proBNP則作為完整的分子在血液中循環(huán)并通過腎臟除去。NT-proBNP的體內(nèi)半衰期比BNP長120分鐘，BNP的體內(nèi)半衰期為20分鐘(Smith,M.W.等，J.Endocrinol.167(2000)239-246)。因此取決于時間過程或感興趣的性質(zhì)，活性的或非活性形式的利尿鈉肽的測量都可能是有益的。在個體心力衰竭風(fēng)險的評估中，測定的SLIM-1值優(yōu)選與NT-proANP和/或NT-proBNP的值相組合。優(yōu)選地，NT-proBNP的值與SLIM-1的值相組合。類似的考慮應(yīng)用于選擇適當(dāng)?shù)闹委煼椒?、鑒別疾病進(jìn)展的風(fēng)險并監(jiān)測疾病的過程。在SLIM-1用于評估患者對治療方法的反應(yīng)的情況下，優(yōu)選地將其的測量與ANP或BNP的測量組合起來。在SLIM-1用來區(qū)分急性和慢性心力衰竭的情況下，優(yōu)選的標(biāo)識物組合包含SLIM-1、ANP或proANP和BNP或proBNP。心臟肌4丐蛋白標(biāo)識物術(shù)語心臟肌鈣蛋白涉及心臟肌鈣蛋白I和肌鈣蛋白T的同種型。按上述說明，術(shù)語標(biāo)識物也涉及標(biāo)識物分子的生理變異體，如生理片段或復(fù)合體。對于心臟肌鈣蛋白標(biāo)識物，它們的生理學(xué)存在的復(fù)合體已知是診斷相關(guān)的并因此明確包含在內(nèi)。肌鉤蛋白T具有約37.000Da的分子量。發(fā)現(xiàn)于心臟組織的肌鈣蛋白T同種型(cTnT)與骨骼肌TnT有充分的區(qū)別，以至于可以生產(chǎn)抗體來判別這兩種TnT同種型。TnT被認(rèn)為是急性心肌損傷的標(biāo)識物；參見Katus，H.A.等J.Mol.Cell.Cardiol.21(1989)1349-1353;Hamm,C.W.等，N.Engl.J.Med.327(1992)146-150;Ohman，E.M.,等，N.Engl.J.Med.335(1996)1333-1341;Christenson,R.H.,等Clin.Chem.44(1998)494-501;和EP0394819。肌4丐蛋白I(TnI)是肌鈣蛋白復(fù)合物的抑制元件，為25kDa，發(fā)現(xiàn)于^L肉組織。Tnl在沒有Ca2+時結(jié)合肌動蛋白，抑制肌動球蛋白的三磷酸腺苷酶活性。發(fā)現(xiàn)于心臟組織的Tnl同種型(cTnl)與骨骼肌Tnl有40%的差異，可以用免疫法判別兩種同種型。cTnl的正常血漿濃度小于0.1ng/ml(4pM)。cTnl在心臟細(xì)胞死亡后釋放進(jìn)入血流；因此在有急性心肌梗死的患者血漿中cTnl濃度升高(Benamer，H.等Am.J.Cardiol.82(1998)845-850)。肌鈣蛋白I和T獨(dú)特的心臟同種型讓它們可以通過免疫法與其他的骨骼肌肌鈣蛋白加以區(qū)別。因此肌鈣蛋白I和T由損傷心肌釋》文進(jìn)入血液可以特異性地與心臟組織損傷相關(guān)聯(lián)?，F(xiàn)在技術(shù)人員也知道心臟肌鈣蛋白可能從循環(huán)中檢出，可能是游離態(tài)也可能是復(fù)合物的一部分(參考如US6,333,397,US6,376,206和US6,174,686)。在評估個體患心力衰竭的風(fēng)險以及評估已患心力衰竭患者的時候，測定的SLIM-1值優(yōu)選地與肌鈣蛋白T和/或月幾鈣蛋白I心臟同種型的值相組合。與標(biāo)識物SLIM-1組合使用的優(yōu)選的心臟肌鈣蛋白是心臟月幾釣蛋白T。炎癥標(biāo)識物技術(shù)人員對術(shù)語炎癥標(biāo)識物是熟悉的。優(yōu)選的炎癥標(biāo)識物是白介素-6，C-反應(yīng)蛋白、血清淀粉樣蛋白A和S100蛋白。白介素-6(IL-6)是一種21kDa的分泌性蛋白質(zhì)，它具有多種生物活性，可分為參與紅細(xì)胞生成作用的活性和參與活化先天免疫反應(yīng)的活性。IL-6是急性期反應(yīng)物并刺激多種蛋白，包括粘著分子的合成。它的主要功能是介導(dǎo)急性期肝臟蛋白的生產(chǎn)，細(xì)胞因子IL-1和TNF-a誘導(dǎo)它的合成。IL-6通常是由巨噬細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生。IL-6的正常血清濃度小于5pg/ml。C-反應(yīng)蛋白(CRP)是一種同型五聚體(homopentameric)Ca2+-結(jié)合急性期蛋白，具有參與宿主防御的21kDa亞基。CRP的合成可被IL-6誘導(dǎo)以及IL-1間接誘導(dǎo)，因為IL-1可以觸發(fā)肝血竇的庫柏法(kupffer)細(xì)胞的IL-6的合成。在90%的健康群體中CRP的正常血漿濃度小于3jng/ml(30nM)，在99%的健康個體中小于10jug/ml(100nM)。例如血漿的CRP濃度可以通過血清淀粉樣蛋白A(=SAA)來測定，血清淀粉樣蛋白A是一種11.7kDa的低分子量急性期蛋白。它主要是在肝響應(yīng)于IL-1、IL-6或TNF-a刺激時合成，并參與調(diào)控T細(xì)力包依賴的免疫反應(yīng)。在急性事件中，SAA的濃度增加最高達(dá)1000倍以到達(dá)1毫克/毫升。它可以用來監(jiān)測在如嚢性纖維化、腎移植排斥、外傷或感染的疾病中的炎癥。在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的某些病例中被用于替代CRP,但是SAA仍然沒有被廣泛認(rèn)可。S100蛋白形成不斷擴(kuò)大的Ca^-結(jié)合蛋白家族，該家族現(xiàn)在已有超過20個的成員。S100蛋白的生理性相關(guān)結(jié)構(gòu)是一種同源二聚體，但有些也可以互相形成異源二聚體，例如，S100A8和S100A9。其細(xì)胞內(nèi)功能包括蛋白質(zhì)磷酸化、酶活性或涉及細(xì)胞增殖和分化的細(xì)胞骨架動力學(xué)的調(diào)控。因為某些S100蛋白也可以從細(xì)胞中釋放，其胞外功能現(xiàn)在也已有描述，例如，神經(jīng)元存活、星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞程序死亡以及炎性過程的調(diào)控。S100A8、S100A9、異源二聚體S100A8/A9以及S100A12已經(jīng)在炎癥中發(fā)現(xiàn)，S100A8對慢性炎癥應(yīng)答，而S100A9、S100A8/A9和S100A12在急性炎癥中增多。S100A8、S100A9、S100A8/A9和S100A12已發(fā)現(xiàn)與有炎性成分的不同疾病有關(guān)聯(lián)，包括某些癌癥、腎同種異體移植排異、結(jié)腸炎，最重要的是與RA有關(guān)聯(lián)(Burmeister，G.,和Gallacchi,G.，Inflammopharmacology3(1995)221-230;Foell，D.等，Rheumatology42(2003)1383-1389)。用于評估個體患HF風(fēng)險或患有HF患者的最優(yōu)選S100標(biāo)識物，例如按照本發(fā)明使用的標(biāo)識物組合，是S100A8、S100A9、S100A8/A9異源二聚體和S100A12。sE-選擇蛋白(可溶的內(nèi)皮性白細(xì)胞粘著分子-1，ELAM-1)是一種115kDa的I型跨膜糖蛋白，只在內(nèi)皮細(xì)胞上并僅受炎性細(xì)胞因子(IL-lfi,TNF-a)或內(nèi)毒素活化后表達(dá)。細(xì)胞表面的E-選擇蛋白是一種白細(xì)胞轉(zhuǎn)動附著至內(nèi)皮的媒介，該過程是白細(xì)胞在炎癥位點(diǎn)外滲(extravasion)的必需步驟，由此該蛋白在局部炎性反應(yīng)中具有重要的作用。在健康個體的血液中有發(fā)現(xiàn)可溶性E-選擇蛋白，這可能是由于表面表達(dá)的分子被蛋白酶剪切后生成的。已有報道在許多病理狀況下血清中sE-選擇蛋白的水平升高(Gearing,A.J.H和Hemingway,I.，Ann.N.Y.Acad.Sci.667(1992)324-331)。在一個優(yōu)選實施方式中本發(fā)明涉及SLIM-1作為HF的標(biāo)識物分子，與一種或更多種HF標(biāo)識物分子組合用以從個體獲得的液體樣品中評估HF的用途。按以上說明，在按照本發(fā)明的優(yōu)選方法中，SLIM-1的測定值至少與至少另一種標(biāo)識物的值組合，這種標(biāo)識物選自利尿鈉肽標(biāo)識物、心臟月幾鈣蛋白標(biāo)識物和炎癥標(biāo)識物。在一個優(yōu)選實施方式中，本發(fā)明涉及SLIM-1和NT-proBNP的標(biāo)識物組合來評估心力衰竭的用途。在一個優(yōu)選實施方式中，本發(fā)明涉及SLIM-1和月幾鈣蛋白T的標(biāo)識物組合來評估心力衰竭的用途。在一個優(yōu)選實施方式中，本發(fā)明涉及SLIM-1和CRP的標(biāo)識物組合來評估心力衰竭的用途。在一個更優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明涉及包括標(biāo)識物SLIM-1、fL鈣蛋白T、NT-proBNP和CRP的標(biāo)識物組合。在一個更優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明涉及用于在體外用生化標(biāo)識物來評估HF的方法的標(biāo)識物組，所述方法包^r測量在^^羊品中SLIM-1和一種或更多種其他的HF標(biāo)識物的濃度，并使用確定的濃度來評估HF。根據(jù)本發(fā)明的標(biāo)識物組，優(yōu)選地用蛋白陣列技術(shù)來進(jìn)行測定。陣列是可尋址的個體標(biāo)識物集合。這些標(biāo)識物可以在空間上被尋址，如包含于微量滴定板中或印在平面表面的陣列，其中每個標(biāo)識物存在于不同的X和Y軸坐標(biāo)?？蛇x擇地，標(biāo)識物也可才艮據(jù)標(biāo)簽、珠、納米?；蛭锢硇再|(zhì)來尋址。微陣列可按照普通技術(shù)人員已熟知的方法(參見如US5，807，522;Robinson,W.H.等，Nat.Med.8(2002)295-301;Robinson,W.H.等，ArthritisRheum.46(2002)885-893)制備。在此使用的陣列指任何具有多種可尋址標(biāo)識物的免疫學(xué)測定。在一種實施方式中，可尋址標(biāo)識物是抗原。在另一個實施方式中，可尋址元件是自身抗體。微陣列是小型化形式的陣列。在此使用的抗原指任何可以特異性結(jié)合于抗體的分子。術(shù)語自身抗體在該領(lǐng)域已有明確的定義。在一種優(yōu)選實施方式中，本發(fā)明涉及蛋白陣列，其包括標(biāo)識物SLIM-1和任選地包括一種或更多種HF的其他標(biāo)識物。在一種優(yōu)選實施方式中，本發(fā)明涉及蛋白陣列，其包括標(biāo)識物SLIM-1和NT-proBNP。在一種優(yōu)選實施方式中，本發(fā)明涉及蛋白陣列，其包括標(biāo)識物SLIM-1和月幾4丐蛋白T。在一種優(yōu)選實施方式中，本發(fā)明涉及蛋白陣列，其包括標(biāo)識物SLIM-1和CRP。在一種進(jìn)一步優(yōu)選實施方式中，本發(fā)明涉及包括標(biāo)識物SLIM-1、肌鉤蛋白T、NT-proBNP和CRP的蛋白陣列。在一種更優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明涉及試劑盒，其包括特異性測定SLIM-1需要的試劑。優(yōu)選的另一種試劑盒包括特異性測定SLIM-1需要的試劑和測定一種或更多種其他心力衰竭標(biāo)識物需要的試劑，這些標(biāo)識物在HF標(biāo)識物組合中一起4吏用。以下提供的實施例、序列表和附圖用于輔助了解本發(fā)明，其真實范圍在附加的權(quán)利要求中闡述。需要理解，在未偏離本發(fā)明精神前提下所述的步驟可以被修改。圖1野生型和R9C小鼠的表型分析。(A)野生型小鼠(n-79)和R9C小鼠(11=44)在24周后的生存曲線。(B)用超聲波心動描記術(shù)進(jìn)行的心臟縮短評估(=縮短分?jǐn)?shù))。早在8周齡R9C轉(zhuǎn)基因動物出現(xiàn)了明顯的功能損害。圖2野生型和AB小鼠的超聲心動圖和血液動力學(xué)參數(shù)。(A)術(shù)后2、4和8周最高壓強(qiáng)的變化(mmHg)。(B)術(shù)后2、4和8周左心室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)變化的百分?jǐn)?shù)。(封閉圓表示來源于假手術(shù)小鼠的數(shù)據(jù)，開口圓表示來源于具主動脈綁扎(aorticbinding)(AB)的小鼠的數(shù)據(jù))。圖3分別從R9C和對照小鼠心臟組織獲得的Western印跡數(shù)據(jù)。比起從健康的小鼠(=+/+)獲得的組織樣品，患有心力衰竭的實驗動物(R9C)的組織樣品中可觀察到SLIM-1的明顯過量表達(dá)。染色條帶下面的數(shù)字表示由質(zhì)譜記錄數(shù)值確定的相對表達(dá)水平。圖4分別從10例HF和對照樣品中測得的SLIM-1。分別對標(biāo)記的來源于心力衰竭患者(HF-菱形)的樣品和健康對照(正常人血清=NHS=正方形)給出在SLIM-1檢驗中的光密度(ODs)。圖5分別從10例HF和對照樣品中測得的SLIM-1。分別對標(biāo)記的來源于心力衰竭患者(HF)的樣品和來自健康對照(正常人血清NHS)樣品測出的SLIM-1給出ODs。盒須圖(box-and-whisker-blots)顯示了較低和較高的四分位值(盒(boxes))以及最高和最低的值(須(whiskers))。實施例1心力衰竭的小鼠模型1.1R9C小鼠模型已報道一種遺傳的人類擴(kuò)張型心肌病源于人受磷蛋白(PLN)基因(PLN-R9C)中的精氨酸9轉(zhuǎn)變?yōu)榘腚装彼?Schmitt,J.P.等，Science299(2003)1410-1413)。擴(kuò)張型心肌病的發(fā)病一般開始于患病患者的青春期階段，隨后在心臟功能上漸進(jìn)性惡化以導(dǎo)致危險和死亡。該突變的轉(zhuǎn)基因小鼠模型顯示出與患病患者類似的心臟表型，存在擴(kuò)張型心月幾病、降低的心臟收縮力和早產(chǎn)兒死亡(Schmitt,2003,上文)。我們繪制了轉(zhuǎn)基因小鼠的存活曲線。PLN-R9C小鼠平均存活僅~20周，只有少于15%的能存活超過24周(圖1A)。在PLN-R9C系中，最早有記錄的死亡在12周齡被觀察到，而僅一只野生型對照小鼠在24周內(nèi)死亡。先于最早有記錄的死亡，八周^皮選作為疾病的'早期，階段的代表時間點(diǎn)，而16周被選為中點(diǎn)，介于8至24周之間(經(jīng)典DCM)。一份詳細(xì)的分離的心臟的病理學(xué)分析顯示了PLN-R9C小鼠甚至在8周齡時心室和心房擴(kuò)大的證據(jù)。分離心肌的交叉部分(獲自于野生型和PLN-R9C小鼠)在蘇木素和伊紅染色之后也顯示了左心室擴(kuò)張或心室壁變薄的證據(jù)，在轉(zhuǎn)基因動物中8周開始，隨年齡增長擴(kuò)張進(jìn)程延續(xù)。對8、16和24周齡的力,性小鼠用超聲波心動描記術(shù)進(jìn)行心臟功能測定(匯總于表1中)。前后壁厚度的超聲波心動描記術(shù)測定結(jié)果顯示R9C小鼠在8周時具有顯著的擴(kuò)張，且在小鼠生存期內(nèi)持續(xù)惡化。收縮性，用心臟縮短來評估(圖1B)，也是在8周時出現(xiàn)輕的但顯著的減低，而更顯著的減低在16周時變得明顯。雌性小鼠分析結(jié)果顯示與雄性相同的結(jié)果(數(shù)據(jù)未展示)。il:野生型和R9C雄性小鼠在8、16和24周時的超聲心動圖和血液動力學(xué)參數(shù)<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>表1中的值是平均值士SEM。在表1中使用的符號:HR=心率；AW，PW=前壁和后壁的厚度(左心室)；LVEDD,LVESD分別表示左心室舒張和收縮末期尺寸；FS-縮短分?jǐn)?shù)KLVEDD-LVESD)ZLVEDDx100%;ETC=對于HR校正的射血時間；VCFC:對HR校正的周期縮短速度二FS/ETC;PAVC-對HR校正的主動脈速度頂點(diǎn)；E-波早期-充盈傳播(transmitral)舒張期波；LVESP，LVEDP:左心室收縮和舒張末期壓；+(1/(111113乂=左心室壓的最大正一階導(dǎo)數(shù)；-(1/&1113乂=左心室壓的最大負(fù)一階導(dǎo)數(shù)；AVA-主動脈速度增速(PAVc/加速時間)；相對WT*P<0，05。1.2主動脈綁扎(AB)小鼠模型在小鼠模型中由主動脈綁扎(AB)造成壓力過載而誘導(dǎo)心臟肥大。通過外科手術(shù)在C57BL小鼠實施壓力過載。升主動脈縮窄(coarction)(稱為主動脈綁扎)誘導(dǎo)心臟肥大以及心肌生長，特別是在左心室，這些是作為主動脈縮窄的一種初級反應(yīng)。在這種小鼠模型的后期階段中心臟會變得肥大并最終膨脹。該模型可以很好地表征并已證明可以高度重現(xiàn)，根據(jù)經(jīng)驗該模型有10-15%或更低的低死亡率。在縮窄之后，該動物模型可用于評價響應(yīng)血液動力學(xué)應(yīng)力的左心室肥大和心力衰竭的發(fā)展進(jìn)程。簡言之，用氯胺酮(90mg/kg)和曱苯噻嗪(Rompun)(10mg/kg)混合麻醉C57BL小鼠并使用25號針結(jié)扎主動脈。假(sham)手術(shù)小鼠經(jīng)歷相同的手術(shù)步驟，只是不用針扎緊。實驗時間點(diǎn)為了檢驗原發(fā)肥大反應(yīng)和后期的擴(kuò)張反應(yīng)，綁扎的動物和假手術(shù)對照在干預(yù)后一、二、四和八周處死。通過超聲心動圖分析以評估心臟功能和肥大發(fā)展，并通過組織學(xué)檢查處死后加以確認(rèn)。表2展示了不同的時間點(diǎn)用超聲波心動描記術(shù)評價的心臟功能的總覽。技術(shù)人員熟知表2中給出的詳細(xì)超聲心動圖參數(shù)并能在例如Asahi,M.等Proc.Natl.Acad.Sci.USA101(2004)9199-9204以及Oudit，G.Y.等，Nat.Med.9(2003)1187-1194文獻(xiàn)中找到。除了功能參數(shù)以外，對取自于2、4和8周的AB小鼠和對照小鼠<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>心臟組織進(jìn)行蘇木紫/伊紅(HE)染色的組織學(xué)分析。組織學(xué)證實了在AB小鼠中預(yù)期的壞死和重塑過程，而在假手術(shù)小鼠的心臟組織中未顯示任何顯著的變化。在手術(shù)之后二周，結(jié)扎小鼠的心室顯示出明顯的左心室肥大，四周后進(jìn)一步發(fā)展，并在術(shù)后八周變得十分類似于擴(kuò)張型心力幾病的終末期。實施例2樣品制備和質(zhì)譜分析心臟勻漿以及細(xì)胞器分離分離心臟，除去心房，將心室用刀片小心切碎并用冰冷卻的PBS(磷酸鹽緩沖鹽水)徹底沖洗以除去剩余血液。使用較松的手持玻璃勻漿器在10ml裂解緩沖液(250mM蔗糖，50mMTris-HC1,pH7.6,lmMMgC12，lmMDDT(二硫蘇糖醇)和lmMPMSF(苯曱基磺酰氟))中勻漿組織30秒。所有后續(xù)步驟都在4。C下操作。裂解液用臺式離心機(jī)在800xg下離心15分鐘；上清液作為胞質(zhì)溶膠、線粒體和微粒體組分的來源。包含細(xì)胞核的沉淀塊用8ml裂解緩沖液稀釋并加到4ml0.9M蔗糖緩沖液(0.9M蔗糖，50mMTris-HC1pH7.6,lmMMgC12，lmMDDT和lmMPMSF)上層，4。C1000xg離心20min。得到的沉淀再懸浮于8ml2M蔗糖緩沖液(2M蔗糖，50mMTris-HC1pH7.4,5mMMgC12,lmMDTT和lmMPMSF)，加到4ml的2M蔗糖緩沖液上層并在150,000xg下超速離心lh(BeckmanSW40.1轉(zhuǎn)子)而沉淀。細(xì)胞核作為沉淀回收。在4。C7500xg下再離心20分鐘從上清液中分離線粒體；獲得的沉淀用裂解緩沖液洗滌兩次。將除去線粒體的細(xì)胞質(zhì)用BeckmanSW41轉(zhuǎn)子在100，000xg超速離心lh沉淀微粒體。上清液為胞質(zhì)溶膠部分(-cyto)。提取細(xì)胞器用低滲裂解緩沖液(10mMHEPES，pH7.9,lmMDTT，lmMPMSF)在冰上孵育線粒體30分鐘，抽提可溶的線粒體蛋白。使用超聲法短暫地處理懸浮物，在13，000xg離心30min除去碎片。上清液作為"mitol"組分。獲得的不溶的沉淀用膜去污劑抽提緩沖液(20mMTris-HCl，pH7.8,0.4MNaCl，15%甘油，lmMDTT,lmMPMSF，1.50/oTriton-X-100)再懸浮并溫和振搖30分鐘后在13,000xg離心30分鐘；上清液作為"mito2"組分。通過將微粒體在膜去污劑抽提緩沖液中再懸浮來抽提膜相關(guān)蛋白。溫和振動懸浮物孵育lh并在13,000xg離心30min除去不溶碎片。上清液作為"micro"組分。細(xì)胞器提取物的消化和MudPIT分析從每個組分中取大約含100|Lig總蛋白的整分試樣(通過Bradford測定法確定)用5倍體積的冰冷丙酮在大約20。C沉淀過液，然后在13,000xg離心15min。蛋白沉淀在小體積的8M脲、50mMTris-HCl、pH8.5、1mMDTT的溶液中37。C溶解lh，接著用5mM碘乙酰胺在37。C避光處理lh進(jìn)行羧酰氨基曱基化。用相等體積的100mM、pH8.5的碳酸氫銨稀釋樣品至4M脲，并用1:150比例的內(nèi)蛋白酶Lys畫C(RocheDiagnostics,Laval,奎北克，力口拿大)在37。C消4匕過夜。第二天，用相等體積的50mM、pH8.5的碳酸氫銨稀釋樣品至2M脲，補(bǔ)加CaC12至終濃度lmM,并用Poroszyme胰蛋白酶珠(應(yīng)用生物系統(tǒng)(AppliedBiosystems),Streetsville，Ontario,力口拿大)在30。C專爭動孵育過夜。產(chǎn)生的肽混合物用SPEC-PlusPTC18管(AnsysDiagnostics,LakeForest,加拿大)按廠家說明進(jìn)行固相抽提然后存儲于-80。C以備后期使用。如所述，設(shè)定了一個全自動、需時20hl2個步驟的多循環(huán)MudPIT程序(Mol.CellProteom.2(2003)96—106)。簡短而言，HPLC四元泵與LCQDECAXP離子阱質(zhì)譜儀(ThermoFinnigan,SanJose，CA)連接。將一支100|uM內(nèi)徑的熔融石英毛細(xì)管孩t型柱(PolymicroTechnologies,Phoenix,AZ)用P-2000激光拉伸器(SutterInstruments,Novato,CA)拉成極細(xì)的尖頭并填入8cm的5pMZorbaxEclipseXDB畫C18杉于月旨(AgilentTechnologies,Mississauga,Ontario,加拿大)，再填入6cm的5)liMPartisphere強(qiáng)陽離子交換樹脂(Whatman,Clifton，NJ)。將單個樣品用高壓容器手動加在分離柱上。層析溶劑的條件嚴(yán)格按Kislinger，T.等，Mol.CellProteom.2(2003)96—106所述。蛋白質(zhì)的鑒定和驗證用SEQUEST數(shù)據(jù)庫檢索算法將肽串聯(lián)質(zhì)譜與在局部-維持最小冗余FASTA格式的小鼠和人類蛋白序列(來自于Swiss-Prot/TrEMBL和IPI數(shù)據(jù)庫)數(shù)據(jù)庫中的肽序列匹配。為了統(tǒng)計學(xué)評估實驗性假發(fā)現(xiàn)率以控制并且因此最小化假陽性鑒定，將全部光謙都對無論正常(正向的)和倒置(翻轉(zhuǎn)的)的氨基酸方向的蛋白序列進(jìn)行搜索(Kislinger，T.等Mol.CellProteom.2(2003)96-106)。然后應(yīng)用STATQUEST濾除算法至所有假定的搜索結(jié)果以獲得對于每個候選鑒定結(jié)果的統(tǒng)計可靠性測定(置信度得分)(截止p值S15,相當(dāng)于85%或更大可能性的是正確匹配)。高置信度匹配被解析成為一種使用基于Perl腳本的內(nèi)部SQL型數(shù)據(jù)庫。該數(shù)據(jù)庫被設(shè)計成可容納對與給定蛋白匹配的多種肽的數(shù)據(jù)庫搜索結(jié)果和光譜信息(掃描首(scanheaders))，以及關(guān)于樣品名、實驗編號、MudPIT步驟、細(xì)胞器源、氨基酸序列、分子量、等電點(diǎn)、帶電性和置信水平的信息。只有那些具有預(yù)計置信度95%或更高的p值以及至少二種光譜都一起檢出的蛋白才能保留以進(jìn)行進(jìn)一步分析。實施例3模型系統(tǒng)中獲得數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學(xué)評價。3.1用于生成R9C小鼠模型差異表達(dá)p值的統(tǒng)計方法對于137個不同實驗過程的每一個，用實施例2所述的方法獲得的原始數(shù)據(jù)由每種都有光譜計數(shù)的6190個蛋白組成，所有光譜都與該蛋白相關(guān)。原始數(shù)據(jù)，6190個蛋白亞組，都進(jìn)行了國際通用的規(guī)范化，首先將在每個過程中的數(shù)據(jù)根據(jù)他們的光諳計數(shù)分進(jìn)數(shù)目相同的組中，對于我們的分析設(shè)置成100。然后對每組(1-IOO)進(jìn)行LOESS(Cleveland,W.S.和Devlin,S丄,JournalofTheAmericanStatisticalAssociation83(1988)596-610)，對于具有類似光譜計數(shù)的一組基因調(diào)整在光譜計數(shù)中的差異?；谠紨?shù)據(jù)我們構(gòu)建了兩個線性模型，第一個模型使用對照/疾病，時間(8周，16周，末期)以及位置(cyto、micro、mitol、mitoll)作為因子并使用下式描述過程計數(shù)=B0+JM時間+152時間2+位置+M對照(1)第二個模型僅使用時間(8周，16周，末期)和位置(cyto、micro、mitol、mitoll)作為因子并用下式描述過禾呈計凄t=130+131時間+152時間2+1334立置(2)其中130為截距，M、B2、J33和/34為可變時間、時間平方、位置和對照/疾病的斜率估計值。用Anova對這兩個模型比較，解消假設(shè)為兩模型之間無差異。而低的p值顯示無充足的證據(jù)說這兩個模型是相同的。額外的信息顯示狀態(tài)(即，對照/疾病)似乎是該模型的重要部分。為了提取在我們的對照和疾病模型之間相對蛋白豐度上有重大變化的蛋白，我們的6190個蛋白列表根據(jù)他們計算的p值進(jìn)行分級。這樣產(chǎn)生了一組593個具有p值0.05的蛋白。為了從上述模型中解釋多重假設(shè)檢驗，p值用假發(fā)現(xiàn)率(FDR)校正法進(jìn)行校正，特別是Benjamini-HochbergFDR校正法(Benjamini,Y.和Hochberg，Y.,JournaloftheRoyalStatisticalSocietyB.57(1995)289-300)。這樣產(chǎn)生了一組40個具有對于R9C小鼠模型校正p^i<0.05的蛋白3.2用于產(chǎn)生主動脈綁扎小鼠模型差異表達(dá)p值的統(tǒng)計方法。如上所述應(yīng)用于R9C小鼠模型的相同數(shù)據(jù)分析法被用于主動脈綁扎小鼠模型的數(shù)據(jù)集。實施例4用Western印跡法檢測標(biāo)識物SLIM-1從R9C小鼠心臟組織樣品得到粗組織裂解液。簡言之，切碎心臟組織，在杜恩斯勻漿器中碾碎并于8000g離心30min以除去細(xì)胞核和細(xì)胞碎片。上清液用于Western印跡法。使用德國Karlsruhe的Invitrogen的試劑和設(shè)備進(jìn)行SDS-PAGE和Western印跡。對于每個測試的組織樣品，10pg的胞質(zhì)組分用還原性NuPAGE(Invitrogen)SDS樣品緩沖液稀釋并在95。C加熱lOmin。樣品在MES緩沖系統(tǒng)中用4-12%NuPAGE@凝膠(丁1^-甘氨酸)進(jìn)行電泳。將凝膠分離的蛋白混合物用InvitrogenXCellII印跡模塊(Invitrogen))和NuPAGE⑧轉(zhuǎn)移緩沖系統(tǒng)印跡至硝酸纖維素膜上。將膜在PBS/0.05%Tween-20洗滌3次并用Roti-Block封閉緩沖液(A151.1;CarlRothGmbH，Karlsruhe,Germany)封閉2小時。將一抗，四個半LIM結(jié)構(gòu)域的兔多克隆抗體(FHL-1)(IMG-3374;Imgenex/Cedarlane)用Roti-Block封閉緩沖液稀釋并與膜孵育1小時。將膜在PBS/0.05%Tween-20中洗滌6次。特異性結(jié)合的SLIM-1的第一抗體用POD綴合的的抗兔IgG多克隆抗體進(jìn)行標(biāo)記，用0.5xRoti-Block封閉緩沖液稀釋至10mU/ml。孵育lh后，將膜在PBS/0.05%Tween-20中洗滌6次。為了檢測已結(jié)合的POD綴合的抗兔抗體，將膜用Lumi-LightPLUSWestern印跡底物(貨號-2015196，RocheDiagnosticsGmbH，Mannheim，德國)孵育并對放射自顯影膜曝光。圖3展示了典型的實驗結(jié)果。對比在相應(yīng)的時間點(diǎn)來源于健康小鼠的組織樣品，來源于患有心力衰竭的R9C實驗動物的組織樣品中可以看到SLIM-1的強(qiáng)過量表達(dá)。實施例5用ELISA檢測人血清和血漿樣品中的SLIM-1為了在人血清或血漿中^r測SLIM-1，開發(fā)了一種三明治式ELISA。為捕獲抗原，使用抗SLIM-1的多克隆抗體的等分試樣，它來自于用HEK細(xì)胞產(chǎn)生的SLIM-1對兔免疫。為檢測抗原，使用由氨基酸233-346組成的SLIM片段在山羊中產(chǎn)生的血清，它們分別與生物素和地高辛綴合。將覆蓋有抗生物素蛋白鏈菌素的96孔微量滴定板與lOOpl的10|ig/ml生物素?；目?SLIM-l多克隆抗體的IxPBS溶液孵育60分鐘。之后用lxPBS+0.02%Tween-20洗滌平4反三次,用PBS+1%BSA(牛血清白蛋白)封閉，然后再用IxPBS+0.02%Tween-20洗滌三次。分別用連續(xù)稀釋的重組SLIM-1作為標(biāo)準(zhǔn)抗原或用來自于患者或?qū)φ諅€體的稀釋血清或血漿樣品(1:5)孵育孔1小時。結(jié)合SLIM-1之后，平板用lxPBS+0.02Tween-20洗滌三次。為了特異性檢測結(jié)合的SLIM-1，孔用lOOpl的0.5pg/ml的地高辛化抗SLIM-1多克隆抗體的IxPBS,P/oBSA溶液孵育45min。其后洗滌平一反三次以除去未結(jié)合的抗體。下一步，用75mU/ml抗地高辛-POD綴合物(RocheDiagnosticsGmbH,Mannheim,德國，貨號1633716)的IxPBS，1%BSA溶液孵育孔30分鐘。然后，平板用相同的緩沖液洗滌六次。為了檢測抗原-抗體復(fù)合體，用100^1ABTS溶液(RocheDiagnosticsGmbH,Mannheim，德國，貨號11685767)孵育孔并于30分鐘之后用ELISA讀數(shù)器在405和492nm處測定光密度(OD)。測定獲自于不同的患有心力衰竭患者的10份血清樣品(HF樣品)和從正常健康供者獲得10份血清(NHS)。之后按以上描述進(jìn)行分析程序，以下結(jié)果(見表3)由這些樣品獲得表3:SLIM-1ELISA結(jié)果(檢測顯影樣品)<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>表3總結(jié)的數(shù)據(jù)也顯示在圖4和5中。從圖4和5中可以明顯看到，與從對照個體獲得的樣品相比，從患HF患者獲得的血清中SLIM-1的水平平均要高。實施例6評估心力衰竭的包括標(biāo)識物SLIM-1的標(biāo)識物組合實施例6.1NT-proBNP和SLIM-1的標(biāo)識物組合評價NT-proBNP和SLIM-1標(biāo)識物組合用于分別區(qū)分處于階段B和階段C及D的患者。通過分析從明確鑒定的個體組，即50個按照ACA/ACC的HF分類標(biāo)準(zhǔn)處于階段B的個體和50個患有HF并按照ACA/ACC的HF分類標(biāo)準(zhǔn)處于階段C的患者，獲得的個體液體樣品來評估診斷的準(zhǔn)確性。在獲自于每個這些個體的血清樣品中，用一種已商品化的測定劑(RocheDiagnostics,NT-proBNP測定劑(對于Elecsys系統(tǒng)免疫測定分析劑貨號03121640160))測定的NT-proBNP，和如上所述測定的SLIM-1^皮量化。4要照Zweig,M.H.和Campbell,上文的方法進(jìn)行ROC-分析。通過正規(guī)化的判別分析(Friedman,J.H.,J.ofTheAmericanStatisticalAssociation84(1989)165-175)來計算對于SLIM-1與已確立的標(biāo)識物NT隱proBNP的組合區(qū)別階段C患者與階段B個體的判別能力。實施例6.2肌釣蛋白T和SLIM-1的標(biāo)識物組合評價肌釣蛋白T和SLIM-1標(biāo)識物組合用于區(qū)分患有急性心臟事件和患有慢性心臟病的患者。通過分析從明確鑒定的個體組，即50個診斷為患急性心臟事件的個體和50個診斷為患慢性心臟病的患者，獲得的個體液體樣品來評估診斷的準(zhǔn)確性。在獲自于每個這些個體的血清樣品中，用一種已商品化的測定劑(RocheDiagnostics,肌鈣蛋白T測定劑(對于Elecsys系統(tǒng)免疫測定分析劑貨號2017644))測定的月幾釣蛋白T和如上所述測定的SLIM-1^皮量化。4安照Zweig，M.H.和Campbell，G.上文進(jìn)行ROC-分析。通過正規(guī)化的判別分析(Friedman,J.H.，J.ofTheAmericanStatisticalAssociation84(1989)165-175)來計算對于SLIM-1與已確立的標(biāo)識物NT-proBNP的組合區(qū)別階段C患者和階段B個體的判別能力。實施例6.3NT-proBNP和CRP的標(biāo)識物組合評價C-反應(yīng)蛋白和SLIM-1標(biāo)識物組合用于區(qū)分診斷為患有心肌病的患者和未患任何混雜的心臟病的對照。通過分析從明確鑒定的個體組，即50個具有心肌病的個體和50個健康對照個體，獲得的個體液體樣品來評估診斷的準(zhǔn)確性。在獲自于每個這些個體的血清中，用一種已商品化的測定劑(RocheDiagnostics，CRP-測定劑(Tina-quantC反應(yīng)蛋白(latex)高敏感性的測定劑-Roche貨號11972855216)測定的CRP和如上所述測定的SLIM-1被量化。按照Zweig，M.H.和Campbell,G.上文的方法進(jìn)行ROC-分析。通過正規(guī)化的判別分析(Friedman,J.H.，J.ofTheAmericanStatisticalAssociation84(1989)165-175)計算SLIM-1與已確立的標(biāo)識物NT-proBNP的組合區(qū)別階段C患者和階段B個體的判別能力。雖然為了清楚和理解的目的上述發(fā)明已經(jīng)進(jìn)行了詳細(xì)描述，本領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠通過閱讀公開內(nèi)容，從形式和細(xì)節(jié)上進(jìn)行多種改變，而不偏離本發(fā)明附加權(quán)利要求的真實范圍。所有出版物、專利和申請以與每篇所述參考文獻(xiàn)被特異地和單獨(dú)地指明全文通過援引并入本文相同的程度，全文通過援引并入本文。權(quán)利要求1.一種評估個體心力衰竭的方法，其包括步驟a)測量從所述個體獲得的樣品中標(biāo)識物SLIM-1的濃度，b)任選地測量所述樣品中一種或更多種其他心力衰竭標(biāo)識物的濃度，和c)通過將在步驟(a)中測定的濃度以及任選地步驟(b)中測定的濃度與對照樣品中確定的這種標(biāo)識物或這些標(biāo)識物的濃度比較來評估心力衰竭。2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其進(jìn)一步的特征是所述樣品選自血清、血漿以及全血。3根據(jù)權(quán)利要求1和2的任一項的方法，其進(jìn)一步的特征是所述一種或更多種其他標(biāo)識物選自利尿鈉肽標(biāo)識物、心臟肌鈣蛋白標(biāo)識物以及炎癥標(biāo)識物。4.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其進(jìn)一步的特征是所述一種或更多種其他標(biāo)識物是NT-proBNP。5.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其進(jìn)一步的特征是所述一種或更多種其他標(biāo)識物是肌4丐蛋白T。6.蛋白SLIM-1作為標(biāo)識物分子在評估心力衰竭中的用途。7.標(biāo)識物組合在評估心力衰竭中的用途，所述標(biāo)識物組合包括SLIM-1和一種或更多種其他心力衰竭標(biāo)識物。8.根據(jù)權(quán)利要求7的標(biāo)識物組合的用途，其中所述一種或更多種其他標(biāo)識物選自利尿鈉肽標(biāo)識物、心臟"幾鈣蛋白標(biāo)識物和炎癥標(biāo)識物。9.根據(jù)權(quán)利要求8的標(biāo)識物組合的用途，其至少包括SLIM-1和NT-proBNP。10.—種用于進(jìn)行根據(jù)權(quán)利要求1的方法的試劑盒，其包括特異性測定SLIM-1需要的試劑和任選地特異性測定所述一種或更多種其他心力衰竭標(biāo)識物需要的試劑。11.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中測量獲自有心力衰竭風(fēng)險的個體的樣品中的標(biāo)識物SLIM-1。全文摘要本發(fā)明涉及一種體外評估心力衰竭的方法，包括步驟測量在樣品中標(biāo)識物SLIM-1的濃度，任選地測量樣品中一種或更多種其他心力衰竭標(biāo)識物的濃度，并通過將測定的SLIM-1濃度和對于所述任選的一種或更多種其他標(biāo)識物測定的濃度與參考群體中確定的這個標(biāo)識物或這些標(biāo)識物的濃度進(jìn)行比較來評估心力衰竭。同時也公開了SLIM-1作為標(biāo)識物蛋白用于評估心力衰竭的用途，包括SLIM-1的標(biāo)識物組合和用于測量SLIM-1的試劑盒。文檔編號G01N33/50GK101627306SQ200880007195公開日2010年1月13日申請日期2008年3月7日優(yōu)先權(quán)日2007年3月8日發(fā)明者A·厄米利,A·格拉莫利尼,D·布洛克,D·麥克倫南,G·赫斯,H·休迪格,H·馮德埃爾茨,P·劉,R·伊瑟林,T·基斯林杰,U·-H·韋恩休斯-塞倫,V·方申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司;多倫多大學(xué)董事局