專利名稱：：借助于利尿肽對nyhai級患者進行心功能不全的診斷和危險分層的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種用于對NYHAI患者的心功能不全進行診斷和/或危險分層和/或后果預測的方法，其中，對待測患者的標志物proANP、或者其片段或部分肽(尤其是NT-pmANP或者其片段或部分肽)的測定與對待.測患者的BNP、proBNP和/或NT-pmBNP的測定是平行進行的。
背景技術：
：在歐洲，診所的急診室每年要收治約一百萬具有急性呼吸窘迫癥狀的患者。呼吸窘迫是許多疾病的特征性癥狀，并且在大約35-47%的病例中是由于心功能不全而導致的(JanuzziJLJr，CamargoCA,AnwaruddinS，BaggishAL，ChenAA，KrauserDQTungR，CameronR，NagumeyJT，ChaeCU,Lloyd-JonesDM,BrownDF,Fo認-MelansonS，SlussPM,Lee-LewandrowskiE,LewandrowskiKB,TheN-terminalPro國BNPinvestigationofdyspneaintheemergencydepartment(PRIDE)study,AmJCardiol.95(8)(2005)，pp.948-954undMaiseiAS，KrishnaswamyP,Nowa-kRM，McCordJ，HollanderJE，DueP,OmlandT，StorrowAB，AbrahamWT,WuAH，CloptonP,StegPQWestheimA,KnudsenCW，PerezA，KazanegmR，HerrmannHC,McCulloughPA;BreathingNotProperlyMultinationalStudyInvestigators,RapidmeasurementofB-typenatriureticpeptideintheemergencydiagnosisofheartfailure,NEnglJMed.347(3)(2002)，pp.161-167)?；颊咴谠缙诔３π墓δ懿蝗挥泻苄〕潭鹊牟煊X。如不加以醫(yī)治，該病癥通常會加重，并且在晚期時在休息時也會導致身體的徹底衰竭。在該階段，包括心肌本身在內的所有身體器官供養(yǎng)不足可導致死亡。一旦該疾病開始發(fā)展，即使在最佳療法下，患者的預期壽命也大大下降(每年大約死亡30%)。因此，盡早地識別心衰并堅定地明確其原因是重要的。為了開始適當的治療，從而需要對在早期和在急診和重癥中已有的基礎病癥進行早期診斷和區(qū)分。由于非特異性癥狀(呼吸窘迫、咳嗽)，常常使得難于對心功能不全與其他疾病進行區(qū)分和界定?？衫媚X利鈉肽(BNP或NTproBNP)的血漿濃度的測定，來提供一種測試方法，此測試方法也在日常工作中用來診斷心功能不全(Maiseletal.(supra))。在現有技術狀態(tài)中，NT-proBNP被用于心功能不全的病程控制。:-在現有技術中同樣也已把proANP描述為標志物。US5498524記述了proANP對非癥候性心功能不全患者進行診斷的應用。EP721105B1記述了一種借助于對心臟病合適的抗體來確定proANP的方法。然而在現有技術中，對具有心功能不全癥狀的患者而言，特別是在診斷、危險分層和后果預測方面非常需要改進。
發(fā)明內容因此，本發(fā)明的目的是，提供一種用于對心功能不全進行診斷和/或危險分層和/或后果預測的改進方法。然而，利用先前所知標志物的已知診斷方法的不利之處在于，對危險患者的早期和完全檢測并不能完全成功，因而對患者進行的危險分層是不充分的。因此，另一個作為本發(fā)明基礎的目的是，開發(fā)出一種對心功能不全進行危險分層的方法，這種方法能夠改進對危險患者特別是患者子群的檢測。令人驚訝的是，現在事實已經證明，在測定proANP或者其片段或肽，尤其是在測定NT-proANP或者其片段或肽的同時，平行地測定proBNP、NT-proBNP禾fl/或BNP，能夠改進對于心功能不全，更確切地說是對于無癥狀的典型心功能不全(NYHA-StadiumI)尤其是無癥狀左心室心功能不全(NYHA-StadiumI)的診斷、危險分層和后果預因此，上述目的得通過一種根據權利要求1所述的方法實現(后文稱作"根據本發(fā)明的方法")。因而，根據本發(fā)明的方法能夠特別有利地為NYHAI級患者改進診斷和預測價值。另外，在根據本發(fā)明的特別優(yōu)選的實施方案中，患者的身體質量指數(BMI)至少為30kg/m2。這是個額外的參數，額外明顯地改進了診斷和預測價值。在本發(fā)明范圍內，術語"心功能不全"是指心臟急性或慢性的衰竭，其不能供給組織以足夠的血液，并因此不能供給組織以足夠的氧氣，因而無力確保在休息或負載時的組織代謝。在臨床上，心功能不全在典型癥狀(呼吸困難、疲勞、液體潴留)存在時出現，其原因是基于心臟收縮或舒張功能失常的心功能失常。根據本發(fā)明，慢性心功會b不全(CHF)同樣包括在其中(Kardiologiecompact,herausgegebenvonChrisianMewis，ReimerRiessenundIoakimSpyridopoulos,2.unveranderteAuflage，Thieme2006)。心功能不全的原因可以是心臟瓣膜缺陷(比如風濕熱的晚期癥狀)、心肌炎(心肌炎癥)、心律失常、心肌梗塞連同血壓過高(高血壓)和/或冠狀血管動脈硬化(鈣化)(冠心病)。此外，根據本發(fā)明還包括伴有(充血性)心功能不全的高血壓性心臟病，伴有(充血性)心功能不全的高血壓性心臟病和腎病。本發(fā)明涉及這樣罹患無癥狀心功能不全(NYHA-StadiumI)的患者。(NYHA為紐約心臟聯合會的分級(HoppeUCetal.:LeitlinienzurTherapiederchronischenHerzinsuffizienz.ZKardiol(2005)94:488-509))。根據本發(fā)明，術語"危險分層"包括發(fā)現預后較差的患者，尤其是急診患者和重癥患者，以便對心功能不全進行更強化的診斷和治療/處理，從而使得可能獲得最有利的治療進展。因而根據本發(fā)明的危險分層，使得對于無癥狀心功能不全(NYHA-StadiumI)患者采取有效的療法。尤其有利地，尤其是在急診和/或重癥的情況下，借助于根據本發(fā)明的方法可以實現可靠的診斷或者后果預測。根據本發(fā)明的方法使得能夠作出導致快速治療成功的臨床決策。這種臨床決策同樣包括借助于藥物的進一步治療，用于心功能不全的治療或療法，如ACE抑制劑、ATI拮抗劑血管緊張素II受體(亞型1)阻滯劑、(3阻滯劑比索洛爾、卡維地洛、美托洛爾和奈必洛爾、血管加壓素受體拮抗劑、自NYHA-分級in級的醛固醇拮抗劑、鈣增敏劑(左西孟旦)。在進一步優(yōu)選的實施方案中，根據本發(fā)明所述方法因而還涉及對無癥狀心功能不全(NYHA-StadiumI)的治療控制。因此，本發(fā)明同樣涉及對患者進行危險分層的方法，尤其是對患者進行危險分層以進行臨床決策，尤其是在時間緊迫的重癥或急診中，以及用于患者的入院。在根據本發(fā)明所述方法的進一步優(yōu)選實施方式中，對罹患無癥狀心功能不全(NYHA-StadiumI)的患者進行診斷，用于預測，優(yōu)選用于后果預測，用于鑒別診斷性早期識別和識別，用于嚴重程度的評價以及用于伴隨治療的過程評估。在根據本發(fā)明所述方法的進一步實施方式中，從待檢查病人采集體液(特別是血液，任選全血或血清)，并且在體外/離體，即在人或動物的外部進行診斷?；趯酥疚飌roANP或者其片段或肽(尤其是NT-pmANP或者其片段或肽)以及對所述標志物在至少一個患者樣本中的含量的確定，能夠實現診斷。根據本發(fā)明，平行地對標志物proBNP、NT-proBNP和/或BNP在至少一個患者樣本中的含量進行確定。在本發(fā)明的范圍內，"proANP"(也包括NT-proANP)是指一種包括98個自由氨基酸的心納肽的多肽/蛋白質或者其片段或部分肽。pmANP的N末端片段(氨基酸1-98)是在漂移激素阿爾法-ANP(99-126，具有28氨基酸)從激素原"proANP"(氨基酸1-126，參見SEQIDNo.l)分裂出之后產生的，所述激素原"proANP"由126個氨基酸組成，其儲存在且根據本發(fā)明包含在心肌細胞的分泌微粒(SekretgranuladermyoendokrinenZellen)中。此外，根據本發(fā)明的這一多肽可以具有翻譯后的修飾，例如乙二醇化或糖基化、脂化或者衍生化。尤其是，NT-proANP(氨基酸1-98)在血漿中極其穩(wěn)定。在本發(fā)明的范圍內，片段和部分肽可尤其涉及NT-pmANP(1-98)和proANP(1-126)中的氨基酸50-90的中間部分，根據本發(fā)明尤其優(yōu)選的是NT-proANP(1-98)的氨基酸53-90的片段或部分肽(也被稱作MR-proANP,參見WO2004046181以及SEQIDNo.l)。在WO2004046181Al(BRAHMS股份公司)中公開了一種合適的檢驗。此外優(yōu)選NT-proANP(氨基酸1-98)。根據本發(fā)明，片段(a)-ANP(氨基酸99-126)也包括在內。在本發(fā)明的范圍內，BNP(氨基酸77-108)是指B型利鈉肽，其從激素原proBNP(氨基酸1-108，參見SEQIDNo.2)分裂而出，在此分裂過程中同時產生NT-proBNP(氨基酸1-76)。根據本發(fā)明優(yōu)選NT-proBNP。"平行測定"是指同時地實施測定或者使測定之間至少能夠具有足夠的關聯或者能夠進行組合評價。在進一步的實施方案中，對proANP、NT-pmANP或者其片段或部分肽與對BNP、proBNP和/或NT-proBNP的平行測定額外地借助其他標志物進行，即優(yōu)選地這樣的標志物，這些標志物已指示心功能不全，并在根據本發(fā)明的方法中能夠產生標志物組合的綜合效果。由此，本發(fā)明涉及一種根據本發(fā)明方法的這樣的實施方式，其中借助至少一個選自下列的其它標志物對待測患者額外進行該測定炎癥標志物、心血管標志物或缺血性標志物。根據本發(fā)明，炎癥標志物可以選自下列至少一種標志物C-反應蛋白(CRP)、細胞因子(Cytokinen)諸如例如TNF-a、白細胞介素諸如例如IL-6、降鈣素原(1-116，3-116)和粘附分子如VCAM或者ICAM;心血管標志物選自下列至少一種標志物肌酸激酶、髓過氧化物酶、和肽素、肌紅蛋白、心肌鈣蛋白、CRP。此外，同樣理解來調節(jié)循環(huán)的激素(原)，特別是如胃泌素釋放肽原(proGRP)、內皮素原(proEnd)、瘦蛋白原、神經肽Y原、生長抑素原、神經肽YY原、阿黑皮素原、腎上腺髓質素原(proADM)、和肽素或各自的部分序列。8缺血性標志物可以選自下列至少一種標志物肌^5蛋白I和T、CK國MB。在本發(fā)明的進一步實施方式中，可以通過平行地或同時地測定標志物(例如，96孔或更多孔的多重滴定板)來實施根據本發(fā)明的方法，其中該測定在至少一個病人樣品上進行。此外，根據本發(fā)明的方法及其測定可以在自動分析儀上進行，特別是借助Kryptor(http:〃www.kryptor.net/)進行。在另一實施方式中，根據本發(fā)明的方法及其測定可以通過快速檢驗(例如免疫層析)進行，優(yōu)選以多參數測定。另一發(fā)明對象涉及利用標志物proANP或者NT-pmANP或者其片段和部分肽，并平行地對待測患者進行標志物proBNP、NT-proBNP和/或BNP的測定，用于對無癥狀心功能不全((NYHA-StadiumI〉進行體外診斷和/或危險分層和/或后果預測。MR-proANP是優(yōu)選的片段或部分肽。根據本發(fā)明的應用同樣涉及其它上述的實施方式。具體實施例方式利用下列的實施例和附圖對本發(fā)明進行更詳細的解釋，但本發(fā)明不限于這些實施例和附圖。實施例和附圖實施例1:NHYA-分級I的患者受試者工作特性，用于存活/死亡的分析(ROC，用于Windows的軟件Statview5.0(Abacus,Concepts,Berkley,CanadaundMedCalc，Broekstraat，Mariakerke，Belgien))。從患者血漿中分離出MR-proANP，并在-80度溫度下冷凍。采用根據BRAHMS股份公司的W02004046181的夾心法(LIA)來探測MR-proANP(Morgenthaleretal.Immunoluminometricassayforthemidregionofpro-atrialnatriureticpeptideinhumanplasma,CIin.Chem，2004;50:234-236)。NT-proBNP通過EUCIA(羅氏診斷，Penzberg，德國)確定。受檢者人數n=66，其中7人死亡。圖1顯示了MR-proANP=0.665禾QNT-proBNP=0.533的曲線(AUC)下的區(qū)域。MR-proANP:0.665-0.5(不顯著)0.165NT-proBNP:0.533—0.5(不顯著)0.0330.165/0.033=5與此相應，相較于NHYA-分級1中患者子群中的NT-proBNP，MR-proANP得到提高了5倍的診斷價值(考慮存活/死亡)。實施例2:與借助于Cox-回歸法的NT-proBNP相比，MR-proANP的預測價值提高了。單變量分析過程在NYHA-I患者子群中，計算兩種標志物(MR-proANPundNT-proBNP)的中值；NT-proBNP的中值比MR-proANP的中值高3.7倍。因此在Cox-分析中計算出，較于MR-proANP的風險比，NT-proBNP的風險比是3.7倍大小的濃度增長。單變量Cox比例風險分析的結果:<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>與NT-proBNP沒有得到顯著的結果(p=0.536)無關，相比于NT-proBNP的風險比1.107，MR-proANP的風險比為2.517，說明其在NYHA-l級患者的子群中有了改善。1.000的風險比意味著，每個濃度單元下死亡的風險沒有增加。對于MR-proANP而言，風險比為2.517意味著，每單位(這里為100pmol/L)中死亡的風險增加了151.7%。與NT-proBNP相比，風險增高了14.2倍。多變量模型:<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>結果再次說明，在應用MR-proANP時有了改善，因為在采用NT-pmBNP和年齡作為預測死亡的唯一獨立變量的模型中，在NYHA-I級患者子群中，它保持不變(p=0.015)。實施例3:身體質量指數(BMI)^30kg/n^的患者與借助于Cox-回歸法的NT-proBN相比，闡述了MR-proANP提高的預測價值(受檢者人數n=114;其中36名患者死亡)單變量分析過程在身體質量指數(BMI)^30kg/i^的患者子群中，計算兩種標志物(MR-proANP和NT-proBNP)的中值，由此得到NT-proBNP的中值比MR-proANP的中值高5倍。因此在Cox-分析中計算出，與MR-proANP相比，NT-proBNP的風險比是5倍大小的濃度增長。單變量Cox比例風險分析的結果:<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>與NT-proBNP沒有得到顯著的結果(p=0.416)無關，相比于NT-proBNP的風險比1.024，MR-proANP具有風險比1.503說明其在身體質量指數>=30的患者子群中的優(yōu)越性。1.000的風險比意味著，每濃度單元下死亡的風險沒有增加。對于MR-pmANP而言，風險比為1.503相應地意味著，每單位(這里為100pmol/L)中死亡的風險增加了50.3%。與NT-proBNP相比，風險增高了21倍。多變量模型:<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>結果再次說明了MR-pmANP的預后值的升高，因為，在采用NT-proBNP作為預測死亡的獨立變量的模型中，在身體質量指數>=30的患者子群中，它保持不變(p=0.007)。與此相反，NT-proBNP不是獨立變量。表l:在不同時間點MR-proANP和NT-proBNP的AUC—覽<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>表2:在心功能不全的不同階段用于預測存活的MT-proANP和NT-proBNP的Cox比例風險分析<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>*=對于MR-proANP的額外的預測價值受檢者人數n=774DiseaseSeverity:疾病嚴重度，RR:風險比，increase:增加表3:紐約心臟協(xié)會(NYHA)分級NYHAI:體力活動不受限制。日常體力活動不引起過度疲勞、心悸、呼吸困難或心絞痛。NYHAII:體力活動輕度受限。休息時無癥狀，但日?；顒蛹纯梢鹌?、心悸、呼吸困難或心絞痛。NYHAIII:體力活動高度受限。休息時無癥狀，輕于日常的活動即可引起疲勞、心悸、呼吸困難或心絞痛。NYHAIV:在所有體力活動及休息時都有癥狀。限于臥床。權利要求1.用于對無癥狀心功能不全(NYHA-StadiumI)進行體外診斷和/或危險分層和/或后果預測的方法，其特征在于，對待測患者的標志物proANP或NT-proANP或者其片段或部分肽的測定與對待測患者的標志物proBNP、NT-proBNP和/或BNP的測定是平行進行的。2.根據權利要求1所述的用于對無癥狀心功能不全(NYHA-StadiumI)進行體外診斷和/或危險分層和/或后果預測的方法，其特征在于，所述標志物是MR-proANP(NT-proANP的AS53-90)。3.根據權利要求1或2所述的用于對無癥狀心功能不全(NYHA-StadiumI)進行體外診斷和/或危險分層和/或后果預測的方法，其特征在于，所述患者的身體質量指數至少為30kg/m2。4.根據權利要求1至3之任一所述的對無癥狀心功能不全(NYHA-StadiumI)進行體外診斷和/或危險分層和/或后果預測的方法，其用于進行臨床決策，尤其是用于借助藥物的進一步治療和療法，尤其是用在重癥監(jiān)護或急診中，并且用于患者的入院。5.根據權利要求1至4之任一所述的對無癥狀心功能不全(NYHA-StadiumI)進行體外診斷和/或危險分層和/或后果預測的方法，其用于鑒別診斷性早期識別和識別，用于嚴重程度的評價以及用于伴隨治療的過程評估。6.根據前述權利要求之任一所述的方法，其特征在于，借助至少一個選自下列的其他標志物對待測患者進行額外測定炎癥標志物、心血管標志物或缺血性標志物。7.根據前述權利要求之任一所述的方法，其特征在于，所述炎癥標志物選自下列至少一種標志物C-反應蛋白(CRP)、細胞因子諸如例如TNF-醺、白細胞介素諸如例如IL-6、降鈣素原(1-116,3-116)和粘附分子如VCAM或ICAM。8.根據前述權利要求之任一所述的方法，其特征在于，所述心血管標志物選自下列至少一種標志物肌酸激酶、和肽素、髓過氧化物酶、肌紅蛋白、利鈉肽、心肌鈣蛋白、CRP和調節(jié)循環(huán)的激素(原)如胃泌素釋放肽原(proGRP)、內皮素1原、瘦蛋白原、神經肽Y原、生長抑素原、神經肽YY原、阿黑皮素原、腎上腺髓質素原(proADM)、和肽素或各自的部分序列。9.根據前述權利要求之任一所述的方法，其特征在于，所述缺血性標志物選自下列至少一種標志物肌鈣蛋白I和T、CK-MB。10.根據前述權利要求之任一所述的方法，其特征在于，平行或者同時進行標志物測定。11.根據前述權利要求之任一所述的方法，其特征在于，所述測定需在至少一個病人樣本中進行的。12.根據前述權利要求之任一所述的方法，其特征在于，所述測定在自動分析儀上進行，特別是借助于Kryptor。13.根據前述權利要求之任一所述的方法，其特征在于，所述測定借助于快速檢驗進行，特別是單參數或多參數測定。14.利用標志物proANP或者NT-proANP或者其片段和部分肽，用來平行地對待測患者進行標志物proBNP、NT-proBNP和/或BNP的測定，用于對無癥狀心功能不全((NYHA-StadiumI)進行體外診斷和/或危險分層和/或后果預測。全文摘要本發(fā)明涉及一種對NYHAI級患者的心功能不全進行診斷和/或危險分層和/或后果預測的方法，其中，對待測患者的標志物proANP、NT-proANP或者其片段或部分肽的測定與對待測患者的BNP、proBNP和/或NT-proBNP的測定是平行進行的。文檔編號G01N33/68GK101636657SQ200880006990公開日2010年1月27日申請日期2008年3月3日優(yōu)先權日2007年3月3日發(fā)明者A·伯格曼,J·帕帕索蒂里奧,J·斯特魯克,N·莫根塔勒,S·安科爾申請人:布拉姆斯股份公司