專(zhuān)利名稱(chēng)：一種塑料包埋制片方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物標(biāo)本的包埋制片方法，尤其是一種塑料包埋制片方法。
背景技術(shù)：
塑料包埋是指它的包埋劑是一種甲基丙烯酸羥乙酯、聚乙二醇-400、 N-N二 甲基苯胺的混合試劑，用于替代石蠟。用塑料包埋劑制作的切片，與石蠟切片 相比，具有細(xì)胞收縮小，結(jié)構(gòu)清晰，分辨率高等優(yōu)點(diǎn)。傳統(tǒng)的塑料包埋的制片 方法采用下述工藝步驟
1、 固定用升汞、重鉻酸鉀、甲醛混合固定液(PCF)固定組織標(biāo)本。固 定時(shí)間〉12h。
2、 脫鈣用體積分?jǐn)?shù)2X硝酸對(duì)組織標(biāo)本脫轉(zhuǎn)2.5h。
3、 脫水梯度脫水，對(duì)組織標(biāo)本脫水，用體積分?jǐn)?shù)80M乙醇脫水40mim-95 %乙醇脫水40mim-100%乙醇脫水40mim (2次)，純丙酮吸附組織標(biāo)本中殘留乙 醇15mim。
4、 浸透浸透液選用甲基丙烯酸羥乙脂(HEMA)，浸透脫水后的組織標(biāo)本， 在浸透進(jìn)行到一半時(shí)，用甲基丙烯酸羥乙脂更換一次甲基丙烯酸羥乙脂，繼續(xù) 浸透，約12h。
5、 包埋(1)從浸透液最后一步液體中取出組織標(biāo)本，用濾紙吸去多余浸 透液；
(2) 把組織標(biāo)本放入包埋盒底部，放平，同時(shí)把標(biāo)簽放入，包埋盒壁的一 側(cè)數(shù)字正面向外；
(3) 包埋液甲液(甲基丙烯酸羥乙脂)乙液(聚乙二醇-400、 N-N二甲 基苯胺的混合液)二IOO : 1.6—100 : 2，將包埋液攪拌均勻立即加滿盛滿組織 標(biāo)本的內(nèi)包埋盒，在包埋盒口蓋一塑料薄膜，使液體與空氣隔離促進(jìn)表面聚合;(4)將包埋盒放入4r冰箱內(nèi)冷藏，時(shí)間大于12h。取出后放室溫2h，變 硬后即可去掉包埋盒。
6、 切片用鋼銼磨去包埋塊底部，暴露出組織切面，用切片機(jī)將組織切面 切成l一3um薄切片，在潔凈水面中展平，撈至潔凈玻片上。并在60—8(TC電 熱板上充分烤1. 5-2. 5h。此過(guò)程需3h左右。
7、 染色用蘇木素一姬姆薩一伊紅(H-Gieinsa-E)染色，然后用中性樹(shù)膠 封片，即可得到塑料包埋制片。
上述得到的塑料包埋制片用圖文分析系統(tǒng)根據(jù)組織形態(tài)的特點(diǎn)即可分析結(jié) 果。這種傳統(tǒng)常規(guī)操作程序大致需要4個(gè)工作日(注在〉12小時(shí)操作中過(guò)夜 的時(shí)間未計(jì)算在工作日內(nèi))，嚴(yán)重制約了制片速度，長(zhǎng)期以來(lái)是組織學(xué)領(lǐng)域的一 個(gè)難以解決的困難。對(duì)于急需獲得病理結(jié)果的患者來(lái)說(shuō)，4天時(shí)間太長(zhǎng)，尤其是 門(mén)診病人、遠(yuǎn)道求醫(yī)的患者或者外地甚至國(guó)外的患者，4天的時(shí)間的等待、住宿 及消費(fèi)會(huì)消耗患者大量的時(shí)間和金錢(qián)，從而使患者承擔(dān)嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)、消耗 保貴的治療時(shí)間。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種制片時(shí)間短的塑料包埋制片方法，以 減少患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和等待時(shí)間。
為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明方法包括固定、脫鈣、脫水、浸透、包埋、 切片和染色過(guò)程，其中固定、脫鈣、脫水、浸透在超聲波高頻振諧下進(jìn)行。
本發(fā)明方法進(jìn)一步的工藝步驟為
(1) 、固定用升汞、重鉻酸鉀、甲醛混合固定液固定組織標(biāo)本3 — 5h;
(2) 、脫鈣用體積分?jǐn)?shù)2^硝酸對(duì)組織標(biāo)本脫鈣15—25mim;
(3) 、脫水用體積分?jǐn)?shù)60%、 70%、 80%、 95%、 100%乙醇溶液對(duì)脫鈣 后的組織標(biāo)本梯度脫水，各濃度乙醇溶液分別脫水7 — 12mim，然后用純丙酮吸 附組織標(biāo)本中殘留乙醇3—6mim;
(4) 、浸透用甲基丙烯酸羥乙脂浸透脫水后的組織標(biāo)本2 — 5h;(5) 、包埋從浸透液取出的組織標(biāo)本放入包埋盒內(nèi)，然后在包埋盒內(nèi)加
入包埋液后密封，將包埋盒在4。C冷藏40mim—2h，然后去掉包埋盒；
(6) 、切片用切片機(jī)將包埋后的組織切面切成l一3ixm薄切片，將薄切 片在60—80。C電熱板上充分烤1. 5—2. 5h;
(7) 、染色用蘇木素一姬姆薩一伊紅將薄切片染色，然后用中性樹(shù)膠封
片，即可得到塑料包埋制片。
本發(fā)明原理是超聲波以每秒80萬(wàn)次高頻振諧使生物組織、有機(jī)溶劑、浸
透液(HEMA)隨高速振蕩而產(chǎn)生周期性縮張運(yùn)動(dòng)，在一定溫度下加速分子運(yùn)動(dòng)， 使生物組織的水分更容易被有機(jī)溶劑替代出來(lái)，并加速有機(jī)溶劑、浸透液(HEMA) 浸透到生物組織內(nèi)。由于分子運(yùn)動(dòng)加快，加速了組織與各種試劑的反應(yīng)，使整 個(gè)操作程序在短時(shí)間內(nèi)完成。
采用上述技術(shù)方案所產(chǎn)生的有益效果在于本發(fā)明方法與傳統(tǒng)塑料包埋制 片法相比，時(shí)間從50小時(shí)縮短到15小時(shí)左右，約節(jié)省3個(gè)工作日。大大減少 塑料包埋制片的時(shí)間，從而減少了患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，贏來(lái)保貴的治療時(shí)間。
具體實(shí)施例方式
本塑料包埋制片方法使用生物組織快速處理儀(型號(hào)規(guī)格TKY-KC)在超 聲波為每秒80萬(wàn)次高頻振諧的環(huán)境下進(jìn)行包埋切片。
實(shí)施例h本塑料包埋制片方法在超聲波每秒80萬(wàn)次高頻振諧下，采用下 述工藝步驟，
1、 固定用升汞、重鉻酸鉀、甲醛混合固定液固定組織標(biāo)本4h;
2、 脫鈣用體積分?jǐn)?shù)2。/a肖酸對(duì)組織標(biāo)本脫鈣20mim;
3、 脫水采用梯度脫水，即用體積分?jǐn)?shù)60%、 70%、 80%、 95%乙醇溶液 對(duì)脫鈣后的組織標(biāo)本分別脫水10mim，再用體積分?jǐn)?shù)100X乙醇脫水5min，更換 100%乙醇后，再脫水5min;最后用純丙酮吸附組織標(biāo)本中殘留乙醇4mim;
4、 浸透用甲基丙烯酸羥乙脂浸透脫水后的組織標(biāo)本1.5h，更換甲基丙烯 酸羥乙脂后再浸透1.5h。5、 包埋(1)從浸透液最后一步液體中取出組織標(biāo)本，用濾紙吸去多余浸 透液；
(2) 把組織標(biāo)本放入包埋盒底部，放平，同時(shí)把標(biāo)簽放入，包埋盒壁的一 側(cè)數(shù)字正面向外；
(3) 包埋包埋液是甲液乙液=100 : 1.6 100 : 2 (體積比)混合而成； 其中甲液是甲基丙烯酸羥乙脂，乙液為聚乙二醇-400 : N-N二甲基苯胺^15 : 1
(體積比)的混合液。將包埋液攪拌均勻立即加滿盛滿組織標(biāo)本的內(nèi)包埋盒， 在包埋盒口蓋一塑料薄膜，使液體與空氣隔離促進(jìn)表面聚合；
(4) 將包埋盒放入4'C冰箱內(nèi)冷藏lh。包埋盒取出變硬后即可去掉包埋盒。
6、 切片用鋼銼磨去包埋塊底部，暴露出組織切面，用切片機(jī)將組織切面 切成1—3um薄切片，在潔凈水面中展平，撈至潔凈玻片上。并在60—8(TC電 熱板上充分烤2h。
7、 染色用蘇木素一姬姆薩一伊紅將薄切片染色，然后用中性樹(shù)膠封片， 即可得到塑料包埋制片。
實(shí)施例2:本塑料包埋制片方法在超聲波每秒80萬(wàn)次高頻振諧下，采用下 述工藝步驟，
(1) 、固定用升汞、重鉻酸鉀、甲醛混合固定液固定組織標(biāo)本3h;
(2) 、脫鈣用體積分?jǐn)?shù)2X硝酸對(duì)組織標(biāo)本脫鈣25mim;
(3) 、脫水脫水，用體積分?jǐn)?shù)60%、 70%、 80%、 95%、 100%乙醇溶液 對(duì)脫鈣后的組織標(biāo)本梯度脫水，各濃度乙醇溶液分別脫水7mim，然后用純丙酮 吸附組織標(biāo)本中殘留乙醇3mim;
(4) 、浸透用甲基丙烯酸羥乙脂浸透脫水后的組織標(biāo)本5h;
(5) 、包埋從浸透液取出的組織標(biāo)本放入包埋盒內(nèi)，然后在包埋盒內(nèi)加 入包埋液后密封，將包埋盒在4。C冷藏40mim,然后去掉包埋盒；
(6) 、切片用切片機(jī)將包埋后的組織切面切成l一3um薄切片，將薄切 片在60—8(TC在烤片機(jī)上烤2. 5h;
7(7)、染色用蘇木素一姬姆薩一伊紅將薄切片染色，然后用中性樹(shù)膠封 片，即可得到塑料包埋制片。
實(shí)施例3:本塑料包埋制片方法在超聲波每秒80萬(wàn)次高頻振諧下，采用下 述工藝步驟，
(1) 、固定用升汞、重鉻酸鉀、甲醛混合固定液固定組織標(biāo)本5h;
(2) 、脫鈣用體積分?jǐn)?shù)2。/a肖酸對(duì)組織標(biāo)本脫鈣15mim;
(3) 、脫水脫水，用體積分?jǐn)?shù)60%、 70%、 80%、 95%、 100%乙醇溶液 對(duì)脫鈣后的組織標(biāo)本梯度脫水，各濃度乙醇溶液分別脫水12mim，然后用純丙酮 吸附組織標(biāo)本中殘留乙醇6mirn;
(4) 、浸透用甲基丙烯酸羥乙脂浸透脫水后的組織標(biāo)本2h;
(5) 、包埋從浸透液取出的組織標(biāo)本放入包埋盒內(nèi)，然后在包埋盒內(nèi)加 入包埋液后密封，將包埋盒在fC冷藏2h，然后去掉包埋盒；
(6) 、切片用切片機(jī)將包埋后的組織切面切成l一3um薄切片，將薄切 片在60—8(TC在烤片機(jī)上烤1. 5h;
(7) 、染色用蘇木素一姬姆薩一伊紅將薄切片染色，然后用中性樹(shù)膠封
片，即可得到塑料包埋制片。
權(quán)利要求
1、一種塑料包埋制片方法，該方法包括固定、脫鈣、脫水、浸透、包埋、切片和染色過(guò)程，其特征在于該方法中固定、脫鈣、脫水、浸透在超聲波高頻振諧下進(jìn)行。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種塑料包埋制片方法，其特征在于該方法采用 下述工藝步驟-(1) 、固定用升汞、重鉻酸鉀、甲醛混合固定液固定組織標(biāo)本3 —5h;(2) 、脫鈣用體積分?jǐn)?shù)2Q/a肖酸對(duì)組織標(biāo)本脫鈣15—25mim;(3) 、脫水用體積分?jǐn)?shù)60%、 70%、 80%、 95%、 100%乙醇溶液對(duì)脫鈣 后的組織標(biāo)本梯度脫水，各濃度乙醇溶液分別脫水7 — 12mim，然后用純丙酮吸 附組織標(biāo)本中殘留乙醇3—6mim;(4) 、浸透用甲基丙烯酸羥乙脂浸透脫水后的組織標(biāo)本2 — 5h;(5) 、包埋從浸透液取出的組織標(biāo)本放入包埋盒內(nèi)，然后在包埋盒內(nèi)加入包埋液后密封，將包埋盒在4(冷藏40mim—2h,然后去掉包埋盒；(6) 、切片用切片機(jī)將包埋后的組織切面切成1—3nm薄切片，將薄切 片在60—8(TC電熱板上充分烤1. 5—2, 5h;(7) 、染色用蘇木素一姬姆薩一伊紅將薄切片染色，然后用中性樹(shù)膠封 片，即可得到塑料包埋制片。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種塑料包埋制片方法，其特征在于所述固 定過(guò)程中的固定時(shí)間為4h。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種塑料包埋制片方法，其特征在于所述脫 鈣過(guò)程中的脫f5時(shí)間為20min。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種塑料包埋制片方法，其特征在于所述脫 水過(guò)程中在用體積分?jǐn)?shù)100%乙醇脫水時(shí)，更換一次同等濃度乙醇溶液進(jìn)行脫 水。
6、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種塑料包埋制片方法，其特征在于所述浸透過(guò)程中的浸透時(shí)間為3h。
7、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種塑料包埋制片方法，其特征在于所述浸透過(guò)程中，更換一次甲基丙烯酸羥乙脂進(jìn)行浸透。
8、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種塑料包埋制片方法，其特征在于所述包 埋過(guò)程中的包埋液是體積比甲液乙液=100 : 1.6 100 : 2混合而成；其中甲 液是甲基丙烯酸羥乙脂，乙液為體積比聚乙二醇-400 : N-N^甲基苯胺二15 : 1的混合液。
9、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種塑料包埋制片方法，其特征在于所述包 埋過(guò)程中，包埋盒在4'C冷藏lh。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種骨髓組織塑料包埋制片方法，該方法包括固定、脫鈣、脫水、浸透、包埋、切片和染色過(guò)程，其中固定、脫鈣、脫水、浸透過(guò)程在超聲波高頻振諧下進(jìn)行。本塑料包埋制片方法與傳統(tǒng)塑料包埋制片法相比，時(shí)間從50小時(shí)縮短到15小時(shí)左右，約節(jié)省3個(gè)工作日。大大減少塑料包埋制片的時(shí)間，從而減少了患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，蠃來(lái)寶貴的治療時(shí)間。
文檔編號(hào)G01N1/36GK101430261SQ20081007982
公開(kāi)日2009年5月13日 申請(qǐng)日期2008年11月25日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月25日
發(fā)明者麗 姚, 尚銀濤, 張學(xué)軍, 華 彭, 琳 楊, 楊敬慈, 溫樹(shù)鵬, 王福旭, 羅建民 申請(qǐng)人:河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院