專利名稱：桃樹休眠解除的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
屬于設(shè)施果樹栽培領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
在桃樹的促成栽培、提早促成栽培中，準(zhǔn)確掌握桃樹的休眠期， 是爭(zhēng)取提前上市和栽培成功的關(guān)鍵，休眠時(shí)間過長推遲成熟期，休眠時(shí)間不足 不能夠發(fā)芽。因此，對(duì)桃樹休眠期的預(yù)測(cè)顯得很重要。多年來科技工作者建立 了四種模型用于計(jì)算休眠期，即猶它模型、0 7'C模型、低于7'C模型、動(dòng)態(tài)模 型。近年來鄭州果樹所等單位對(duì)桃樹的休眠需冷量多個(gè)品種進(jìn)行了估算，然而 這種估算值只是一個(gè)大致的需冷量數(shù)值，各計(jì)算模型的計(jì)算結(jié)果是不同的而且 相差很大。同一品種在不同地區(qū)之間、同一地區(qū)的不同年份之間采用相同模型 計(jì)算，也存在較大差異。桃樹休眠時(shí)間的長短因脫葉時(shí)期、環(huán)境溫度、水分狀 況等差異而變。目前休眠期估算的方法是，在田間設(shè)置溫度自動(dòng)記錄裝置，記 錄每一時(shí)刻的溫度。每天采取枝條放入24"C培養(yǎng)箱中水培，每隔2天剪去枝條 基部0.5厘米露出新茬以利吸水，連續(xù)觀察15天，發(fā)芽率能夠超過50%的才算 解除休眠，那么這一天與休眠開始期間所經(jīng)歷的有效低溫時(shí)間作為這個(gè)品種的 休眠小時(shí)數(shù)，也可叫做需冷量。采用這種方法雖然知道了桃樹的休眠期，但時(shí) 間已經(jīng)過去了半個(gè)月，作為生產(chǎn)上應(yīng)用為時(shí)已晚；采用需冷量估算的方法不僅 需要進(jìn)行為期近2個(gè)月的溫度記錄和溫濕度管理，而且?guī)в泻艽蟮拿つ啃浴?br> 用于種子生活力測(cè)定的方法——四唑測(cè)定于1942年由德國Soealed Hoheneim學(xué)校的H. LakOn(萊康)教授發(fā)明，目前已經(jīng)成為全世界最先進(jìn)和實(shí)用 的種子四唑測(cè)定技術(shù)，在650多個(gè)屬和種的農(nóng)業(yè)、蔬菜、林木、牧草、藥材和 花卉種子中得到應(yīng)用。四唑測(cè)定具有原理可靠、結(jié)果準(zhǔn)確、不受休眠限制、方法簡便、省時(shí)快速、成本低廉等特點(diǎn)。所以四唑測(cè)定是世界公認(rèn)并得到廣泛應(yīng) 用的種子生活力測(cè)定方法之一。
發(fā)明目的本發(fā)明的主要目的是探索一種簡單、方便、快速準(zhǔn)確、成本低廉， 能夠指示桃樹花芽休眠解除的方法。

發(fā)明內(nèi)容
桃樹生長發(fā)育到一定階段即進(jìn)入休眠狀態(tài)，休眠期是一個(gè)生長相 對(duì)緩慢的發(fā)育時(shí)期，是花芽生長到一定階段后積極的生理反映。這個(gè)花芽的發(fā) 育時(shí)期需要7'C左右的低溫支持，在這個(gè)過程中花芽的形態(tài)和內(nèi)含物發(fā)生著極其 細(xì)微的變化，當(dāng)休眠到一定程度將發(fā)生質(zhì)的變化，即解除了休眠期。休眠解除 時(shí)期的及時(shí)準(zhǔn)確掌握，是設(shè)施果樹開始升溫的指導(dǎo)依據(jù)。將測(cè)定種子生活力的 四唑染色方法運(yùn)用到桃樹花芽休眠的檢測(cè)上，是一種新的嘗試，本來種子生活 力的測(cè)定不受休眠限制，而在這里卻用于檢測(cè)花芽休眠。這項(xiàng)技術(shù)是建立在試 驗(yàn)基礎(chǔ)之上的，試驗(yàn)要求花芽在規(guī)定時(shí)間內(nèi)能夠染色才是解除休眠，種子染色 則需要預(yù)處理和較長時(shí)間，這是桃樹休眠生理與種子生潔力測(cè)定原理相結(jié)合的 產(chǎn)物。
休眠檢測(cè)原理桃樹真休眠后期，能量代謝從磷酸戊糖途徑(PPP)轉(zhuǎn)換為 三羧酸循環(huán)途徑(TCA);四唑溶液做為一種無色的指示劑被芽吸收，接受細(xì)胞 內(nèi)三羧酸代謝途徑中釋放出來的氫離子，被還原成一種紅色、穩(wěn)定、不會(huì)擴(kuò)散 和不溶于水的三苯基甲替。其特點(diǎn)是檢測(cè)方法簡單，速度快，可以實(shí)現(xiàn)即時(shí)檢
試劑的配制
四唑染色液四唑全稱為2， 3， 5-氯化(或溴化)三苯基四氮唑，簡稱為四唑
或紅四唑。英文名為2， 3， 5-Triphenyl TetrazoliumChloride(Or Bromide),縮寫TTC(TTB)或TZ。分子式為C19H15N4C1，分子量334.8，為白色或淡黃色的粉劑， 溶點(diǎn)243°C，易溶于水，具有微毒。四唑染色通常使用濃度為0. 1% 1.0%的四 唑溶液。稱取1. 0克紅四唑溶于100克蒸餾水中即為1. 0%的四唑溶液。四唑遇 到直射光線會(huì)被還原成粉紅色，因此，該試劑需用棕色瓶盛裝，并用黑紙外面 包裝。同樣，己配好的四唑溶液也應(yīng)裝入棕色玻璃瓶里，存放在暗處。在進(jìn)行 休眠解除的檢測(cè)時(shí)，也需將其放在暗處。
磷酸緩沖液的配制為保證四唑的染色效果，要求四唑溶液的pH值必須在 6.5 7.5范圍之內(nèi)。當(dāng)四唑溶液的pH值不在這一范圍之內(nèi)時(shí)，建議采用磷酸緩 沖液來配制。首先配兩種母液I和II，母液I為稱取9. 087克磷酸二氫鉀溶于 1000毫升蒸餾水中，母液II為稱取9. 472克磷酸氫二鈉溶于1000毫升蒸餾水 中，然后取母液I 2份和母液I1 3份混合而成。
用磷酸緩沖液配制四唑溶液的方法取母液I 40毫升和母液I1 60毫升混 合，稱取1. 0克四唑粉末，用上述混合液定容至100毫升，即為pH值7. 5的1. 0% 的四唑溶液。
具體實(shí)施例方式將花芽縱切，用O. 1% 1.0%的四唑水溶液浸泡，要求四唑溶 液的pH值必須在6. 5 7. 5范圍之內(nèi)，四唑溶液可以采用磷酸緩沖液來配制。 顯色反應(yīng)的溫度范圍為20 °C 45 "C，在設(shè)定的溫度下于黑暗處進(jìn)行顯色反應(yīng)。 要求的顯色時(shí)間為20分鐘到2小時(shí)，在要求時(shí)間內(nèi)花芽切面顯示紅色為解除休 眠。鑒定時(shí)借助放大鏡或解剖顯微鏡觀察。用過的四唑溶液不可以重復(fù)使用。
實(shí)施例1: 取正在休眠階段或休眠剛剛解除或休眠已經(jīng)解除的桃樹花芽，用刀 片將花芽縱切，放入染色皿中，加入1.0%濃度的四唑水溶液，以淹沒芽片為度，移置在35 'C恒溫箱內(nèi)進(jìn)行染色反應(yīng)，恒溫箱內(nèi)要保持黑暗。若沒有恒溫箱也可 以用人的體溫捂熱染色皿進(jìn)行顯色反應(yīng)。顯色反應(yīng)1小時(shí)，借助放大鏡或解剖 顯微鏡觀察，花芽切片染成紅色的為花芽已經(jīng)解除休眠期。
實(shí)施例2: 取正在休眠階段或休眠剛剛解除或休眠己經(jīng)解除的桃樹花芽，用刀
片將花芽縱切，放入染色皿中，加入用磷酸緩沖液配制的pH值7. 5的1. 0%的四 唑溶液。以淹沒芽片為度，移置在35 'C恒溫箱內(nèi)進(jìn)行染色反應(yīng)，恒溫箱內(nèi)要保 持黑暗。若沒有恒溫箱也可以用人的體溫捂熱染色皿進(jìn)行顯色反應(yīng)。顯色反應(yīng)l 小時(shí)，借助放大鏡或解剖顯微鏡觀察，花芽切片染成紅色的為花芽已經(jīng)解除休 眠期。
權(quán)利要求
1、一種桃樹休眠解除的檢測(cè)方法，其特征是將花芽縱切，用四唑溶液浸泡，在設(shè)定的溫度下于黑暗處進(jìn)行顯色反應(yīng)，于規(guī)定的時(shí)間內(nèi)花芽切面顯示紅色為解除休眠。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的桃樹休眠解除的檢測(cè)方法，其特征是 所述的四唑溶液為2， 3， 5-氯化(或溴化)三苯基四氮唑，簡稱 為四唑或紅四唑0. 1% 1. 0%的水溶液。要求四唑溶液的pH值必須在6. 5 7. 5范圍之內(nèi)，四唑溶液可以采用磷酸緩沖液來配 制。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的桃樹休眠解除的檢測(cè)方法，其特征是所述的設(shè)定溫度為顯色反應(yīng)的溫度范圍為2(TC 45i:。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的桃樹休眠解除的檢測(cè)方法，其特征是所述的顯色反應(yīng)時(shí)間為20分鐘到2小時(shí)。
全文摘要
該項(xiàng)技術(shù)屬于設(shè)施果樹栽培領(lǐng)域。桃樹生長發(fā)育到一定階段即進(jìn)入休眠狀態(tài)，休眠期是一個(gè)生長相對(duì)緩慢的發(fā)育時(shí)期，這個(gè)發(fā)育時(shí)期需要7℃左右的低溫支持，在這個(gè)過程中花芽的形態(tài)和內(nèi)含物發(fā)生著極其細(xì)微的變化。當(dāng)休眠到一定程度將發(fā)生質(zhì)的變化，即解除了休眠期。如果休眠時(shí)間過長將推遲成熟期，休眠時(shí)間不足則不能夠發(fā)芽，因此，休眠解除時(shí)期的及時(shí)、準(zhǔn)確掌握，是設(shè)施果樹開始升溫的指導(dǎo)依據(jù)。在桃樹的促成栽培、提早促成栽培中，準(zhǔn)確掌握桃樹的休眠期，是爭(zhēng)取提前上市和栽培成功的關(guān)鍵。而采用需冷量估算的方法不能滿足生產(chǎn)需要。這里提供了一種簡單、方便、快速準(zhǔn)確、成本低廉，能夠指示桃樹花芽休眠解除的方法。
文檔編號(hào)G01N21/78GK101514965SQ200810074139
公開日2009年8月26日 申請(qǐng)日期2008年2月22日 優(yōu)先權(quán)日2008年2月22日
發(fā)明者友 傅, 張新生, 王召遠(yuǎn), 王學(xué)軍, 湖 陳 申請(qǐng)人:河北省農(nóng)林科學(xué)院昌黎果樹研究所