專利名稱：：高甘油三脂對血紅蛋白濃度測定干擾的消除方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于含高甘油三脂的血液的血紅蛋白濃度的測定領(lǐng)域，特別涉及一種高甘油三脂對血紅蛋白濃度測定干擾的消除方法。
背景技術(shù)：
：試驗表明，當血液中的甘油三脂(TG)含量〉4.76ramol/L時，會嚴重干擾血常規(guī)檢驗的血紅蛋白濃度測定，甘油三脂(TG)濃度越高，則干擾程度越大，其結(jié)果是導致血紅蛋白(HGB)濃度的測定結(jié)果假性增高。為了準確獲得含高甘油三脂的血液的血紅蛋白濃度，目前國內(nèi)外主要采用兩種方法，即高速離心法和間接測量法。高速離心法的操作是1、以3500轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心5分鐘，然后吸出分離出的血漿，再將血漿以10000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心20分鐘使脂肪顆粒懸浮在血漿表面；2、吸出脂肪顆粒后，向血漿中補入同體積稀釋液，然后將血漿與步驟1分離出的血細胞混合均勻再上機檢測。此種方法不僅受到特殊設(shè)備(高速離心機)的限制，而且操作煩瑣，費時，在操作過程中發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過高速離心后的脂肪顆粒凝集成塊漂浮在血漿上面，很難完全吸出和準確測量其吸出的體積，因而準確度差。間接測量法(見KalacheGR，Sartor醒，HughesWG.Theindirectestimationofhemoglobinconcentrationinwholeblood.Pathology.1991Apr:23(2):115-7.)通過標準電子計數(shù)得到平均紅細胞體積(MCV)，計算出MCV與平均血紅蛋白含量(MCH)的指數(shù)比值，再通過公式校正HGB，該方法受大部分血液細胞分析儀沒有標準電子計數(shù)MCV功能的限制，亦很難被推廣和實用化。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種高甘油三脂對血紅蛋白濃度測定干擾的消除方法，此種方法不僅能提高含高甘油三脂血液的血紅蛋白濃度測定的準確性，而且操作簡單，析用設(shè)備為常規(guī)設(shè)備，便于推廣。本發(fā)明所述高甘油三脂對血紅蛋白濃度測定干擾的消除方法，步驟如下(1)將含高甘油三脂的血液進行全血細胞計數(shù)，得到其血紅蛋白濃度的測定值HGB脂血和紅細胞壓積的測定值HCT脂血，(2)將步驟(1)所述含高甘油三脂的血液進行低速離心操作，使該血液中的紅細胞與血漿分離，(3)吸出步驟(2)分離出的血漿，將所述血漿進行全血細胞計數(shù)，得到血漿中的血紅蛋白濃度測定值HGB脂血血漿贅(4)對步驟(1)得到的血紅蛋白濃度測定值HGB脂血進行校正，得到血紅蛋白濃度的校正值，校正式如下HGB校正值=HGB脂血一(HGB脂血血漿—HGB脂血血漿XHCT脂血)，巾，HGB脂血血漿XHGT脂血^f高甘油三脂的血液中紅細胞所占比例；所述含高甘油三脂的血液是指血液中甘油三脂的含量〉4.76ramol/L(干擾HGB的差異為4.56%，見實施例3)，根據(jù)美國臨床實驗室改進法案(CLIA88)和日本臨床實驗室標.準委員會(JCCLS)的要求，HGB的檢測允許差異分別為7%和4%，為了提高準確性，本發(fā)明將HGB的允許差異定為5%。上述方法中，對含高甘油三脂的血液進行低速離心操作時，轉(zhuǎn)速為1500-3000轉(zhuǎn)/分鐘(離心力310-1685g)，時間至少為3分鐘。轉(zhuǎn)速優(yōu)選1500-2000轉(zhuǎn)/分鐘(離心力310-550g)，時間優(yōu)選3-5分鐘。本發(fā)明具有以下有益效果1、采用本發(fā)明所述方法獲得的含高甘油三脂的血液的血紅蛋白濃度的準確性高，與血紅蛋白濃度真實值的差異小于±2.0%。2、本發(fā)明所述方法操作簡單，使用的檢測儀器和離心機為常規(guī)設(shè)備，因而便于在各種醫(yī)院推廣。3、本發(fā)明所述方法所需時間短，能很快得到檢測結(jié)果。具體實施方式下述實施例中使用的離心機為具有定時和調(diào)節(jié)離心速度的TDZ4-WS型低速臺式普通離心機，由湘儀器材廠提供；血細胞分析儀為日本Sysmex公司生產(chǎn)的XE-2100型血細胞分析儀，儀器使用的所有試劑均由Sysraex公司提供的原裝配套試劑；新鮮全血標本來源于四川大學華西醫(yī)院臨床血液常規(guī)標本和正常獻血員；脂肪乳液用質(zhì)量分數(shù)30%的無菌脂肪乳注射液配制。數(shù)據(jù)處理時，計量資料以均值(x)±標準差(s力表示；兩均數(shù)比較采用t檢驗進行分析，A0.05為差異有統(tǒng)計學意義；所有數(shù)據(jù)處理應(yīng)用MicrosoftExcel軟件。實施例l將EDTAK2(乙二酸四乙酸鉀鹽)抗凝(血常規(guī)專用濃度)的正常新鮮全血(TG<1.83mmol/L，TG正常參考范圍為0.29-1.83raraol/L,無溶血，肉眼觀察，紅細胞沉降后血漿為淡黃色透明狀)，40份分成4組，每組10份，每份2ml。(1)將各份正常新鮮全血進行全血細胞計數(shù)在XE-2100血液細胞分析儀準備就緒(綠色Ready燈亮)的狀態(tài)下，將裝有正常新鮮全血的試管顛倒8-10次使血液混勻，然后拔開試管蓋，將正常新鮮全血置于儀器吸樣針下，確認吸樣針進入血液中部，按綠色計數(shù)鍵進行吸樣，當儀器發(fā)出的吸樣聲停止后，移開試管，1分鐘后自動顯示出紅細胞(RBC)、血紅蛋白濃度(HGB)和紅細胞壓積(HCT)的測定值。經(jīng)數(shù)據(jù)處理，得各組正常新鮮全血的紅細胞和血紅蛋白的測定值，見表l。(2)將各份正常新鮮全血低速離心對各份新鮮全血進行全血細胞計數(shù)后，用TDZ4-WS型低速臺式離心機進行低速離心，第1組的離心轉(zhuǎn)速1500轉(zhuǎn)/分鐘(離心力310g)、離心時間5分鐘，第2組的離心轉(zhuǎn)速2000轉(zhuǎn)/分鐘(離心力550g)、離心時間3分鐘，第3組的離心轉(zhuǎn)速2000轉(zhuǎn)/分鐘(離心力550g)、離心時間5分鐘，第4組的離心轉(zhuǎn)速3000轉(zhuǎn)/分鐘(離心力1685g)、離心時間5分鐘。(3)將血漿進行全血細胞計數(shù)低速離心后，將各試管中的血漿吸出分別進行全血細胞計數(shù)(所用儀器和操作與步驟(1)相同)，得到各份新鮮全血所分離出的血漿中紅細胞(RBC)和血紅蛋白濃度(HGB)的檢測值，經(jīng)數(shù)據(jù)處理，得各組正常新鮮全血分離出的血漿中的紅細胞和血紅蛋白濃度的檢測值，見表l。表l新鮮全血及其低速離心后分離出的血漿中的RBC和HGB<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>根據(jù)美國臨床實驗室改進法案(CLIA88)和日本臨床實驗室標準委員會(JCCLS)的要求，HGB的檢測允許差異分別為7%和4%，為了提高準確性，本發(fā)明將HGB的允許差異定為5%。從表l可以看出，4組新鮮全血的RBC完全沉降到試管底部，即血漿內(nèi)RBC和HGB接近O(4組HGB濃度X)，因血漿本底所致)，證明可以通過低速離心的方法(轉(zhuǎn)速為1500-3000轉(zhuǎn)/分鐘、時間為3-5分鐘)使新鮮全血中的紅細胞RBC與血漿分離。實施例2用質(zhì)量分數(shù)30%的無菌脂肪乳注射液與正常血漿(TG<1.83mmol/L，淡黃色透明狀)配制4組脂肪乳液，每組10份(濃度從4.76到53.28mraol/L不等)，每份2ml。(1)將各份脂肪乳液進行全血細胞計數(shù)(CBC)在XE-2100血液細胞分析儀準備就緒(綠色Ready燈亮)的狀態(tài)下，拔開試管蓋，將脂肪乳液置于儀器吸樣針下，確認吸樣針進入脂肪乳液中部，按綠色計數(shù)鍵進行吸樣，當儀器發(fā)出的吸樣聲停止后，移開試管，l分鐘后自動顯示出紅細胞(RBC)和血紅蛋白(HGB)的檢測值。經(jīng)數(shù)據(jù)處理，得各組脂肪乳液的紅細胞和血紅蛋白濃度的測定值，見表2。(2)將各份脂肪乳液低速離心將各份脂肪乳液進行全血細胞計數(shù)(CBC)后，用TDZ4-WS型低速臺式離心機進行低速離心，第1組的離心轉(zhuǎn)速1500轉(zhuǎn)/分鐘(離心力310g)、離心時間5分鐘，第2組的離心轉(zhuǎn)速2000轉(zhuǎn)/分鐘(離心力550g)、離心時間3分鐘，第3組的離心轉(zhuǎn)速2000轉(zhuǎn)/分鐘(離心力550g)、離心時間5分鐘，第4組的離心轉(zhuǎn)速3000轉(zhuǎn)/分鐘(離心力1685g)、離心時間5分鐘。(3)將低速離心后的脂肪乳液進行全血細胞計數(shù)將低速離心后的脂肪乳液進行全血細胞計數(shù)，所用儀器和操作與步驟(1)相同，所獲低速離心后各份脂肪乳液中的假紅細胞(RBC)和假血紅蛋白濃度(HGB)的測定值經(jīng)數(shù)據(jù)處理，得低速離心后各組脂肪乳液中假紅細胞和假血紅蛋白濃度的測定值，見表2。表2低速離心前和低速離心后各組脂肪乳液中的假RBC和假HGB<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>從表2可以看出，4組脂肪乳液低速離心前后的假的RBC均為0(不受干擾)；假HGB均值分別是29.5與30.0，30.5與29.9，31.4與30.7,32.3與32.1，/M).05，其差異無統(tǒng)計學意義，證明脂肪乳液不受以上離心時間和離心轉(zhuǎn)速(離心力)的影響。實施例3將EDTAK2抗凝的正常新鮮全血(TG<1.83ramol/L,無溶血，肉眼觀察，紅細胞沉降后血漿為淡黃色透明狀)120ml分成60份，每份2ml，每組10份，共6組。(1)將各份正常新鮮全血進行全血細胞計數(shù)在XE-2100血液細胞分析儀準備就緒(綠色Ready燈亮)的狀態(tài)下，將裝有正常新鮮全血的試管顛倒8-10次使血液混勻，然后拔開試管蓋，將正常新鮮全血置于儀器吸樣針下，確認吸樣針進入血液中部，按綠色計數(shù)鍵進行吸樣(吸樣130nl),當儀器發(fā)出的吸樣聲停止后，移開試管，1分鐘后自動顯示出血紅蛋白濃度(HGB)的測定值。經(jīng)數(shù)據(jù)處理，得各組正常新鮮全血的血紅蛋白濃度測定值，見表4。(2)對各份正常新鮮全血(無溶血和脂血)低速離心對正常新鮮全血進行全血細胞計數(shù)后，用TDZ4-WS型低速臺式離心機進行低速離心，6組正常新鮮全血的離心轉(zhuǎn)速均為3000轉(zhuǎn)/分鐘(離心力1685g)、離心時間均為5分鐘。(3)配制含不同TG濃度的脂血樣品低速離心后，輕輕取出試管，用濃度為483.96ramol/L的脂肪乳液置換出血漿，配制含不同TG濃度的脂血樣品，具體操作見表3。表3脂血樣品的配制<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>豐血液的總TG濃度(mmol/L，血液自身的TG濃度(1.52)+配制的TG濃度。(4)對配制的脂血樣品進行全血細胞計數(shù)在XE-2100血液細胞分析儀準備就緒(綠色Ready燈亮)的狀態(tài)下，將裝有脂血樣品的試管顛倒10次使脂血混勻，然后拔開試管蓋，將脂血置于儀器吸樣針下，確認吸樣針進入脂血中部，按綠色計數(shù)鍵進行吸樣，當儀器發(fā)出的吸樣聲停止后，移開試管，1分鐘后自動顯示出血紅蛋白濃度(HGB)測定值。經(jīng)數(shù)據(jù)處理，得各組脂血的血紅蛋白濃度測定值，見表4。表4正常新鮮全血和脂血樣品的HGB<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>尸值均<0.05，有顯著性差異。從表4看出，當TG濃度〉4.02mmol/L時，正常新鮮全血與脂血樣品的HGB有顯著差異(戶值均O.05).說明HGB受到干擾。表5不同TG濃度對HGB干^阮的程度<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>根據(jù)美國臨床實驗室改進法案(CLIA88)和日本臨床實驗室標準委員會(JCCLS)的要求，HGB的檢測允許差異分別為7%和4%，為了提高準確性，本發(fā)明將HGB的允許差異定為5%。從表5可以看出，當TG濃度為4.02和4.76腿ol/L時，真實值與加脂后的HGB的差異百分率分別為4.09%和4.56%，因此將高甘油三脂的臨界值定為4.76mmol/L;同時表明HGB受干擾的程度與TG的濃度成正比，TG濃度越高，干擾程度越大，其差異百分率隨著TG濃度的增大而增大。實施例4EDTAK2抗凝的正常新鮮全血(TG〈1.83mmol/L,TG正常參考范圍為0.29-1.83mraol/L，無溶血，肉眼觀察，紅細胞沉降后血漿為淡黃色透明狀)102份，每份2ml。(1)對各份正常新鮮全血進行全血細胞計數(shù)(CBC)在XE-2100血液細胞分析儀準備就緒(綠色Ready燈亮)的狀態(tài)下，將裝有正常新鮮全血的試管顛倒8-10次使血液混勻，然后拔開試管蓋，將正常新鮮全血置于儀器吸樣針下，確認吸樣針進入血液中部，按綠色計數(shù)鍵進行吸樣，當儀器發(fā)出的吸樣聲停止后，移開試管，1分鐘后自動顯示出血紅蛋白濃度(HGB)測定值。經(jīng)數(shù)據(jù)處理，正常新鮮全血的血紅蛋白濃度測定均值=110.7±17.25g/L。(2)對各份正常新鮮全血低速離心對各份正常新鮮全血進行全血細胞計數(shù)后，用TDZ4-WS型低速臺式離心機進行低速離心，離心轉(zhuǎn)速均為3000轉(zhuǎn)/分鐘(離心力1685g)、離心時間均為5分鐘。(3)配制脂血樣品低速離心后，輕輕取出試管，用濃度為483.96mmol/L的脂肪乳液置換出血漿，配制TG濃度為4.76-53.28mmol/L之間的任意TG濃度的脂血樣品102份。(4)對配制的脂血樣品進行全血細胞計數(shù)與步驟(1)使用同一儀器、同一工作模式，將裝有脂血樣品的試管顛倒10次使脂血混勻，然后拔開試管蓋，將脂血置于儀器吸樣針下，確認吸樣針進入脂血中部，按綠色計數(shù)鍵進行吸樣，當儀器發(fā)出的吸樣聲停止后，移開試管，l分鐘后自動顯示出血紅蛋白濃度(HGB)測定值和紅細胞壓積(HCT)測定值。經(jīng)數(shù)據(jù)處理，脂血樣品的血紅蛋白濃度測定均值HGB脂血=132.8±24.77g/L，紅細胞壓積測定均值HCT脂血=0.352±0.050L/L。(5)對配制的脂血樣品低速離心對各份脂血樣品進行全血細胞計數(shù)后，用TDZ4-WS型低速臺式離心機進行低速離心，離心轉(zhuǎn)速均為2000轉(zhuǎn)/分鐘(離心力550g)、離心時間均為3分鐘。(6)對分離出的脂血樣品的血漿進行全血細胞計數(shù)低速離心后，將各試管中的脂血樣品血漿吸出分別進行全血細胞計數(shù)，與步驟(1)使用同一儀器、同一工作模式。將所獲各份脂血樣品血漿的血紅蛋白濃度(HGB)測定值進行數(shù)據(jù)處理，得脂血樣品血漿的血紅蛋白濃度測定均值恥8脂血血榮=35.2±23.85g/L，(7)對脂血樣品的血紅蛋白檢測均值進行校正HGB校正值=HGB脂血一(HGB脂血血漿一HGB脂血血漿乂HCT脂血)=110-3il7*62g/L本實施例中，102份正常新鮮全血的血紅蛋白濃度檢測均值為110.7±17.25g/L(此值為正常新鮮全血的血紅蛋白濃度的真實值)，脂血樣品的血紅蛋白濃度測定均值為132.8±24.77g/L，脂血樣品的血紅蛋白濃度校正值為110.3±17.62g/L。將脂血樣品的血紅蛋白濃度校正值與正常新鮮全血的血紅蛋白濃度測定均值進行t檢驗，/M).05，差異無統(tǒng)計學意義；經(jīng)計算，脂血樣品的血紅蛋白濃度校正值與正常新鮮全血的血紅蛋白濃度測定均值的差異百分率為-0.33%。上述結(jié)果說明，釆用本發(fā)明所述方法可消除高甘油三脂對血紅蛋白濃度測定的干擾，提高含高甘油三脂血液的血紅蛋白濃度測定的準確性。實施例5本實施例中，對XE-2100血液細胞分析儀出現(xiàn)"乳糜/血紅蛋白干擾(Turbidity/HGBInterference)"報警的7例臨床血液標本進行了以下步驟的操作(1)將7例臨床血液標本進行全血細胞計數(shù)(CBC)在XE-2100血液細胞分析儀準備就緒(綠色Ready燈亮)的狀態(tài)下，將裝有臨床血液標本的試管顛倒8-10次使血液混勻，然后拔開試管蓋，將臨床血液標本置于儀器吸樣針下，確認吸樣針進入血液中部，按綠色計數(shù)鍵進行吸樣，當儀器發(fā)出的吸樣聲停止后，移開試管，l分鐘后自動顯示出所測臨床血液標本的血紅蛋白濃度測定值HGBj^和紅細胞壓積測定值HCT脂血。7例臨床血液標本的血紅蛋白濃度測定值HGB脂血和紅細胞壓積測定值HCTm見表6。(2)將7例臨床血液標本進行低速離心對各例臨床血液標本進行全血細胞計數(shù)(CBC)后，用TDZ4-WS型低速臺式離心機進行低速離心，離心轉(zhuǎn)速均為2000轉(zhuǎn)/分鐘(離心力550g)、離心時間均為3分鐘。通過低速離心，紅細胞與血漿分離，沉降到試管底部。(3)對血槳進行全血細胞計數(shù)(CBC)低速離心后，將各試管中臨床血液標本的血漿吸出分別進行全血細胞計數(shù)，與步驟(1)使用同一儀器、同一工作模式。所獲各例臨床血液標本的血漿中的血紅蛋白濃度測定值HGB脂血血柴見表6。(4)血紅蛋白濃度測定值HGB脂血的校正采用校正公式HGB校正值-HGB脂血一(HGB脂血血榮—HGB脂血血榮XHCT脂血)進行校正，各例臨床血液標本的校正值見表6。表67例臨床血液標本的TG濃度和HGB<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>權(quán)利要求1、一種高甘油三脂對血紅蛋白濃度測定干擾的消除方法，其特征在于步驟如下(1)將含高甘油三脂的血液進行全血細胞計數(shù)，得到其血紅蛋白濃度的測定值HGB脂血和紅細胞壓積的測定值HCT脂血，(2)將步驟(1)所述含高甘油三脂的血液進行低速離心操作，使該血液中的紅細胞與血漿分離，(3)吸出步驟(2)分離出的血漿，將所述血漿進行全血細胞計數(shù)，得到血漿中的血紅蛋白濃度測定值HGB脂血血漿，(4)對步驟(1)得到的血紅蛋白濃度測定值HGB脂血進行校正，得到血紅蛋白濃度的校正值，校正式如下HGB校正值＝HGB脂血—(HGB脂血血漿—HGB脂血血漿×HCT脂血)式中，HGB脂血血漿×HCT脂血為含高甘油三脂的血液中紅細胞所占比例；所述含高甘油三脂的血液是指血液中甘油三脂的含量>4.76mmol/L。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的高甘油三脂對血紅蛋白濃度測定干擾的消除方法，其特征在于對含高甘油三脂的血液進行低速離心操作時，轉(zhuǎn)速為1500-3000轉(zhuǎn)/分鐘，時間至少為3分鐘。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的高甘油三脂對血紅蛋白濃度測定干擾的消除方法，其特征在于對含高甘油三脂的血液進行低速離心操作時，轉(zhuǎn)速為1500-2000轉(zhuǎn)/分鐘，時間為35分鐘。全文摘要一種高甘油三脂對血紅蛋白濃度測定干擾的消除方法，步驟如下(1)將含高甘油三脂的血液進行全血細胞計數(shù)，得到其血紅蛋白濃度的測定值HGB_脂血和紅細胞壓積HCT_脂血，(2)將步驟(1)所述含高甘油三脂的血液進行低速離心，使該血液中的紅細胞與血漿分離，(3)吸出步驟(2)分離出的血漿，將所述血漿進行全血細胞計數(shù)，得到血漿中的血紅蛋白濃度測定值HGB_脂血血漿，(4)對步驟(1)得到的血紅蛋白濃度測定值HGB_脂血進行校正，得到血紅蛋白濃度校正值，校正式如下HGB_校正值＝HGB_脂血-(HGB_脂血血漿-HGB_脂血血漿×HCT_脂血)，式中，HGB_脂血血漿×HCT_脂血為含高甘油三脂的血液中紅細胞所占比例。文檔編號G01N33/48GK101398422SQ20081004639公開日2009年4月1日申請日期2008年10月28日優(yōu)先權(quán)日2008年10月28日發(fā)明者靜周,唐書強,孫玉明,曾婷婷,曾素根,虹江,賈永前,黃玉霞申請人:四川大學華西醫(yī)院