專利名稱：一種檢測唾液中酒精含量的試劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬唾液中檢測酒精領(lǐng)域，特別是涉及一種檢測唾液中酒精含量的試劑的制備方法。
背景技術(shù)：
酒精檢測的社會(huì)應(yīng)用已很廣泛，而近年來，酒后引起的刑事案例和酒后駕車引起的交 通事故案例不斷上升。許多國家都制定了血液中酒精濃度與交通事故責(zé)任認(rèn)定的關(guān)系，建 立了多種能夠檢測血液中酒精含量的方法。但在實(shí)際中，取血樣檢測酒精含量，總有衛(wèi)生 安全隱患，因而更青睞于取唾液進(jìn)行酒精檢測。目前，出現(xiàn)了很多便于攜帶的檢測試劑條，如公開號為CN1837821A和CN1904619A，它們都利用了以下，原理CH3CH2OH+02 CH3CHO+ H202H202+還原態(tài)TMB (無色)， > 氧化態(tài)TMB (藍(lán)色)+H20ALO:酒精氧化酶 HRP:辣根過氧化物酶 TMB: 3,3'5,5，-四甲基聯(lián)苯月安但對于高酒量人群，在酗酒以后，檢測結(jié)果會(huì)出現(xiàn)反而降低的現(xiàn)象，因此在執(zhí)行交通 法規(guī)的檢測時(shí)，作為處罰的依據(jù)反而難以執(zhí)行。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種檢測唾液中酒精含量的試劑的制備方法，該方法能改善上述 問題，清除測定高酒量人群中的抑制反應(yīng)，使反應(yīng)結(jié)果更準(zhǔn)確。本發(fā)明的一種檢測唾液中酒精含量的試劑的制備方法，包括下列步驟(1) 濾紙?jiān)诘谝幌嘟褐薪莺?，吸去過多的浸液，20-30。C迅速溫?zé)岣稍铮僭诘诙?浸液中浸泡，20-3(TC再次千燥，得到測定試紙的原紙；(2) 用雙面膠將上述測定試紙的原紙粘貼在塑料片上，切割成小塊的測定試紙條。 所述的第一相浸液總體積為10mL的配制過程如下1) 配pH7.2的0.1 mol/L 2 mol/L Tris-丙二酸緩沖液或pH7.8的0.5 mol/L PB(磷酸鹽緩沖 液)；2) 溶入乙醇氧化酶，10mL緩沖液中含有10 200iu;3) 溶入辣根過氧化物酶，10mL緩沖液中含有200 5000iu;4) 溶入乙醛脫氫酶，10mL緩沖液中含有2 100iu， NAD+0.01-0.1g;5) 溶入穩(wěn)定劑和保護(hù)劑，濃度0.1%~3% (g/100mL)。所述的穩(wěn)定劑和保護(hù)劑是天然或人工聚合高分子膠體，是明膠、阿拉伯膠、牛血清白 蛋白、聚乙二醇、聚丙烯酸-丙烯酸酯中的一種或幾種混合物。所述的第二相浸液是采用3,3'5，5'-四甲基聯(lián)苯胺顯色劑，溶于有機(jī)溶劑，濃度為0. 2.~1.5% (g/100mL)。采用甲苯、二甲苯、氯仿、二氯甲垸、二氯乙烷或二甲基甲酰胺作為溶劑。 所述步驟(2)中的切割成小塊的測定試紙條是切割成含有0.4X0.4 0.6X0.6cm的小 塊的測定試紙條。 本發(fā)明的原理1. CH3CH2OH+02 CH3CHO+ H202 H202+還原態(tài)TMB (無色)腳 > 氧化態(tài)TMB (藍(lán)色)+H20CH3CHO 她一掘> CH3COOH2. CH3CHO+NAD+ 她—，> CH3COOH+NADHNADH+氯化硝基四氮唑蘭^^NAD++還原型氯化硝基四氮唑蘭(紅色)ALO:酒精氧化酶 HRP:辣根過氧化物酶 TMB: 3,3'5,5'-四甲基聯(lián)苯胺 Aldehyde-DH:乙醛脫氫酶 NAD+:輔酶I NADH:還原輔酶I本發(fā)明的有益效果1) 可以加速反應(yīng)進(jìn)程；2) 清除反應(yīng)產(chǎn)物，有利于反應(yīng)更完全；3) 當(dāng)被測樣品中含有較高濃度乙醇時(shí)，可減少反應(yīng)物和反應(yīng)產(chǎn)物的干擾；4) 有利于清除測定高酒量人群中的抑制反應(yīng)，使反應(yīng)結(jié)果更準(zhǔn)確。5) 對于高酒量人群大酒量飲酒后產(chǎn)生的乙醛，通過酶催化顯色反應(yīng)進(jìn)行測定。


圖1是本發(fā)明的制備流程圖。圖2是酒精測定試劑條。圖3是酒精和酒精在體內(nèi)代謝產(chǎn)物乙醛二項(xiàng)測定試劑條。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一歩闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù) 人員可以對本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限 定的范圍。實(shí)施例11. 配制第一相浸液在pH7.2的0.2mol/L Tris-丙二酸緩沖液lOmL中，溶解100iu的乙醇氧化酶，再加入 辣根過氧化物酶2500iu，攪拌均勻，充分溶解后，再加入乙醛脫氫酶100iu、 NAD+20mg、 20mg明膠(預(yù)溶)。2. 以3號whatman定量分析試紙浸濕均勻，取出，吸去多余液體，在28。C下孵箱中吹干。3. 配制第二相浸液稱取TMB 100mg，用10mL 二甲基甲酰胺溶解。將已干燥的浸取第一相浸液的濾紙?jiān)俅卧诘诙嘟褐薪?，迅速取出，?(TC下孵箱 中吹干。4. 將浸取后的干燥濾紙用雙面膠粘貼在塑料卡片上，切成條狀，每條長度為8cm，頂部帶 有0.5X0.5cm的測定試紙塊。(圖2)實(shí)施例21. 在pH7.8的0.5 mol/L PB緩沖液10mL中，溶解200iu的乙醇氧化酶，再加入辣根過 氧化物酶1000iu，攪拌均勻，充分溶解后，再加入乙醛脫氫酶20iu、 NAD+10mg、終濃度 為3% (w/v)的BSA (牛血清白蛋白)。2. 以3號whatman定量分析試紙浸濕均勻，取出，吸去多余液體，在28。C下孵箱中吹干。3. 配制第二相浸液稱取TMB 1 OOmg，用1 OmL 二甲基甲酰胺溶解。將已干燥的浸取第一相浸液的濾紙?jiān)俅卧诘诙嘟褐薪?，迅速取出，?8"C下孵箱 中吹干。將浸取后的干燥濾紙用雙面膠粘貼在塑料卡片上，切成條狀，每條長度為8cm， 頂部帶有0.5X0.5cm的測定試紙塊。(圖2)實(shí)施例31. 配制乙醛測定試劑塊浸液在pH7. 2的0.2 mol/LTris-丙二酸緩沖液10mL中，溶解120iu乙酸脫氫酶、NAD+50mg、 黃遞酶60iu和氯化硝基四氮唑蘭200mg、牛血清白蛋白100mg。2. 以3號Whatman定量分析試紙浸濕均勻，取出，吸去多余液體，在28'C下孵箱中吹干。3. 將浸取后的干燥原紙用雙面膠粘貼在塑料卡片上，作為第二測定塊，切成條狀。(圖3)
權(quán)利要求
1. 一種檢測唾液中酒精含量及其在體內(nèi)代謝產(chǎn)物的試劑的制備方法，包括下列步驟(1)濾紙?jiān)诘谝幌嘟褐薪莺螅ミ^多的浸液，20-30℃迅速溫?zé)岣稍铮僭诘诙嘟褐薪荩?0-30℃再次干燥，得到測定試紙的原紙；(2)將上述測定試紙的原紙粘貼在塑料片上，切割成小塊的測定試紙條。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測唾液中酒精含量的試劑的制備方法，其特征在于，所述的 第一相浸液總體積為10mL的配制過程如下1) 酉己pH6.5-8.5的0.1mol/L 2mol/LTris-丙二酸緩沖液或pH7.2-8.0的0.5 mol/L磷酸鹽緩 沖液；2) 溶入乙醇氧化酶，lOmL緩沖液中含有10 500iu;3) 溶入辣根過氧化物酶，10mL緩沖液中含有500 10000iu;4) 溶入乙醛脫氫酶，10mL緩沖液中含有2 100iu， NAD+0.01-0.1g;5) 溶入穩(wěn)定劑和保護(hù)劑，濃度0.1%~3% (g/100ml)。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測唾液中酒精含量的試劑的制備方法，其特征在于，所述的 穩(wěn)定劑和保護(hù)劑是天然或人工聚合高分子膠體，是明膠、阿拉伯膠、牛血清白蛋白、聚乙 二醇、聚丙烯酸-丙烯酸酯中的一種或幾種混合物。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測唾液中酒精含量的試劑的制備方法，其特征在于，所述的 第二相浸液是3,3'5，5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)顯色劑溶于有機(jī)溶劑，濃度為0.2% 1.5%(g/100ml)。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測唾液中酒精含量的試劑的制備方法，其特征在于，TMB被 溶解在甲苯、二甲苯、氯仿、二氯甲垸、二氯乙烷、二甲基甲酰胺中。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測唾液中酒精含量的試劑的制備方法，其特征在于，所述步 驟(2)中的切割成小塊的測定試紙條是切割成含有0.4X0.4 0.6X0.6cm的小塊的測定試 紙條。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測唾液中酒精含量及其在體內(nèi)代謝產(chǎn)物的試劑制備方法，其 特征在于，所述的測定酒精代謝產(chǎn)物乙醛第一相浸液總體積為10mL的配制過程如下1) 配pH6.5-8.5的0.1mol/L~2 mol/L Tris-丙二酸緩沖液或pH7.2-8.0的0.5 mol/L磷酸鹽緩 沖液；2) 溶入乙醛脫氫酶，10mL緩沖液中含有20 200iu， NAD+0.01-0.1g;3) 溶入NAD黃遞酶10-100iu;4) 溶入氯化硝基四氮唑蘭0.01-0.5g;5)溶入穩(wěn)定劑和保護(hù)劑，濃度0.1% 3% (g/100ml)。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測唾液中含有的酒精代謝產(chǎn)物乙醛測定試劑塊，被切割成含 有0.4X0.4-0.6X0.6cm的小塊，并列在測定試劑條上。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種檢測唾液中酒精含量的試劑的制備方法，包括1)濾紙?jiān)诘谝幌嘟褐薪莺螅ミ^多的浸液，20-30℃迅速溫?zé)岣稍?，再在第二相浸液中浸泡?0-30℃再次干燥，得到測定試紙的原紙；2)將上述測定試紙的原紙粘貼在塑料片上，切割成小塊的測定試紙條。該方法可以加速反應(yīng)進(jìn)程；清除反應(yīng)產(chǎn)物，有利于反應(yīng)更完全；當(dāng)被測樣品中含有較高濃度乙醇時(shí)，可減少反應(yīng)物和反應(yīng)產(chǎn)物的干擾；有利于清除測定高酒量人群中的抑制反應(yīng)；本方法還可以在一根測試條上，同時(shí)設(shè)置二個(gè)測試塊，使結(jié)果判斷更準(zhǔn)確。
文檔編號G01N33/98GK101271120SQ200810036780
公開日2008年9月24日 申請日期2008年4月29日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月29日
發(fā)明者孫大尼, 王福進(jìn), 管利豐 申請人:上海高豐科技有限公司