專利名稱：測定器件、測定裝置和測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
測定的測定器件(device)、測定裝置和測定方法。
背景技術(shù)：
現(xiàn)有技術(shù)中，POCT (Point Of Care Testing)機器，作為用于在患 者的眼前迅速且正確地進行診斷和治療所必須的測定機器，在臨床檢 査的領(lǐng)域中使用。
作為POCT機器，例如能夠列舉血糖傳感器、妊娠i會斷裝置、排 卵檢查裝置、HbAlc/微量白蛋白'肌酸酐測定裝置(例如/《<工^^ 亍'Y力^株式會社制DCA2000系統(tǒng))等的測定機器。這些的POCT機 器，在某病情中聚焦于特殊的標記(marker)物質(zhì)，能夠簡易且迅速地 測定該標記物質(zhì)，因此對于被檢査者的篩選和監(jiān)視非常有效。另外， 這些POCT機器由于是比較小型，所以便攜性良好而且能夠以低成本 引入。并且，這些POCT機器，在其操作性方面并不需要特殊的專業(yè) 性，因此具有任何人都能夠容易地使用的優(yōu)點。
這里，所謂POCT機器，表示通常在除醫(yī)院的檢査室或檢査中心 以外的醫(yī)療現(xiàn)場中在臨床檢査時使用的測定機器。另一方面，POCT 機器，由于其良好的便攜性、經(jīng)濟性、操作性，在近年來，即使在家 中的醫(yī)療現(xiàn)場中也廣泛使用。因此，近年來，所謂POCT機器，表示 除醫(yī)院的檢查室或檢查中心以外的醫(yī)療現(xiàn)場中的臨床檢查中被使用的 測定機器，而且也表示在家中的醫(yī)療現(xiàn)場中使用的測定機器(例如， 參照專利文獻1、 2)。
但是，現(xiàn)在，在臨床檢査中，為了患者的疾病的正確的診斷和治 療，設(shè)置有大量的測定項目。例如，在臨床檢查中，為了糖尿病的正 確的診斷和治療，HbAlc、白蛋白、胰島素、C肽、酮體等作為被檢測 物質(zhì)而設(shè)定。作為用于進行這些被檢測物質(zhì)的測定的測定方式，在將尿等的體液作為檢測體試樣的情況下，主要能夠列舉光學測定方式和
電化學測定方式。通過使用這些方式的任意一種，在POCT機器、或
者現(xiàn)有的大規(guī)模自動化測定機器中，進行檢測體試樣中包含的被檢測 物質(zhì)的測定。
但是，現(xiàn)有的光學測定方式，由于是基于光學的變化進行在檢測 體試樣中包含的被檢測物質(zhì)的測定的測定方式，所以在被檢測物質(zhì)的 含有量為極微量的情況下，存在不能夠正確地進行被檢測物質(zhì)的測定 的情況。另外，在使用現(xiàn)有的光學測定方式的情況下，由于必須設(shè)置 用于正確的測定在檢測體試樣中包含的極微量的被檢測物質(zhì)的特殊的 結(jié)構(gòu)，所以存在不能以便宜的價格提供測定機器的情況。
因此，公開了作為不設(shè)置特殊的結(jié)構(gòu)，能夠正確地測定在檢測體 試樣中包含的被檢測物質(zhì)的光學測定方式，使在檢測體試樣中生成包 含被檢測物質(zhì)的凝集體，基于因該凝集體導(dǎo)致的檢測體試樣的渾濁程
度進行被檢測物質(zhì)的測定的光學測定方式(例如，參照專利文獻3)。
在該公開的光學測定方式中，進行臨床檢查時，混合包含作為被 檢測物質(zhì)的白蛋白(抗原)的作為檢測體試樣的尿、和抗白蛋白抗體 (抗體)以及作為凝集促進劑的聚乙二醇的混合物。由此，在作為檢 測體試樣的尿中，生成作為被檢測物質(zhì)的白蛋白和抗白蛋白抗體的凝 集體(即，抗原-抗體凝集體)。并且，在該光學測定方式中，通過使用 470nm的波長的光的比濁測定，測定抗原-抗體凝集體引起的檢測體試 樣的渾濁程度，從而進行作為被檢測體的尿中包含的作為被檢測物質(zhì) 的白蛋白的測定(定量)。
專利文獻l:特開平07-248310號公報
專利文獻2:特開平03-046566號公報
專利文獻3:特表2002-509247號公報

發(fā)明內(nèi)容
但是，本申請的發(fā)明者們發(fā)現(xiàn)，在上述公開的光學測定方式中， 在作為檢測體試樣的尿中生成的抗原-抗體凝集體的生成量，依賴于該 尿中包含的尿素的濃度而發(fā)生變化的問題。也就是說，本申請的發(fā)明 者們發(fā)現(xiàn)，即使使用上述公開的光學測定方式，由于依賴于尿中包含的尿素的濃度檢測體試樣的渾濁程度發(fā)生變化，所以以便宜的價格提 供能夠正確地測定在檢測體試樣中包含的被檢測物質(zhì)的POCT機器依 然不可能。
本發(fā)明是為了決解上述現(xiàn)有的課題而完成的，其目的在于提供具 有簡易的結(jié)構(gòu)，而且減輕由于檢測體試樣中包含的尿素導(dǎo)致的測定誤 差，能夠正確地進行被檢測物質(zhì)的測定的測定器件、測定裝置、和測 定方法。
為了解決上述現(xiàn)有的課題，本發(fā)明的測定器件，具備構(gòu)成試樣保 持部和試樣供給口的基體，上述試樣保持部用于保持包含尿素和被檢 測物質(zhì)的檢測體試樣，上述試樣供給口用于對該試樣保持部供給上述 檢測體試樣，上述基體具備光學測定部和試劑保持部，上述光學測定 部用于對上述試樣保持部所保持的上述檢測體試樣進行光學測定，上 述試劑保持部保持針對上述被檢測物質(zhì)的抗體以及水解上述尿素的尿 素酶。
如果形成這樣的結(jié)構(gòu)，則由于試劑保持部保持將檢測體試樣中包 含的尿素水解的尿素酶，所以能夠解決在檢測體試樣中生成的抗原-抗 體凝集體的生成量依賴尿素的濃度而發(fā)生變化的問題。因此能夠提供 具有簡易的結(jié)構(gòu)，而且減輕由于檢測體試樣中包含的尿素導(dǎo)致的測定 誤差，能夠正確地進行被檢測物質(zhì)的測定的測定器件。
在該情況下，上述試樣保持部，是在上述基體的內(nèi)部以與上述試 樣供給口連通的方式形成的空間，上述試劑保持部，在上述空間的內(nèi) 面，以上述抗體和上述尿素酶露出在該空間的方式形成。
如果形成這樣的結(jié)構(gòu)，由于試樣保持部是在基體的內(nèi)部以與試樣 供給口連通的方式形成的空間，所以能夠?qū)脑嚇庸┙o口供給的檢測 體試樣可靠地保持在保持部。另外，在作為試樣保持部的空間的內(nèi)面， 以抗體和尿素酶露出在該空間的方式形成有試劑保持部，所以在檢測 體試樣中可靠地溶解抗體和尿素酶。
另外，在上述情況下，上述試劑保持部，以上述抗體和上述尿素 酶的復(fù)合體的形態(tài)保持上述抗體和上述尿素酶。
如果形成這樣的結(jié)構(gòu)，在試樣保持部中，試劑保持部將抗體和尿 素酶以其復(fù)合體的形態(tài)保持，所以能夠可靠地解決在檢測體試樣中生成的抗原-抗體凝集體的生成量依賴于尿素的濃度發(fā)生變化的問題。
另外，在上述情況下，上述試劑保持部以各自單體的形態(tài)保持上 述抗體和上述尿素酶。
如果形成這樣的結(jié)構(gòu)，在試樣保持部中，由于試劑保持部以各自 單體的形態(tài)保持抗體和尿素酶，所以能夠不準備抗體和尿素酶的復(fù)合 體，而可靠地解決在檢測體試樣中生成的抗原-抗體凝集體的生成量依 賴于尿素的濃度發(fā)生變化的問題。
另外，在上述的情況下，上述光學測定部具備用于從上述試樣 保持部的外部向該試樣保持部的內(nèi)部射入光的光射入部；和用于從上 述試樣保持部的內(nèi)部向該試樣保持部的外部射出光的光射出部。
如果形成這樣的結(jié)構(gòu)，由于光學測定部具備光射入部和光射出部， 所以能夠容易地進行試樣保持部保持的檢測體試樣的光學測定(比濁 測定)。
另一方面，本發(fā)明的測定裝置具備用于安裝第一方面上述的測 定器件的測定器件安裝部；光源，用于射出向安裝在上述測定器件安 裝部的上述測定器件的光學測定部射入的光；受光部，用于接受從安 裝在上述測定器件安裝部的上述測定器件的光學測定部射出的光；運 算部，用于基于由上述受光部接受的上述射出的光對上述檢測體試樣 中包含的上述被檢測物質(zhì)進行檢測或者定量。
如果形成這樣的結(jié)構(gòu)，由于試劑保持部具備用于安裝保持抗體和 尿素酶的測定器件的測定器件安裝部，所以雖然具有簡易的結(jié)構(gòu)，但 是能夠提供可減輕由于檢測體試樣中包含的尿素導(dǎo)致的測定誤差，正 確地進行被檢測物質(zhì)的測定的測定裝置。
在該情況下，還具備吸引部，上述吸引部用于向安裝在上述測定 器件安裝部的上述測定器件的上述試樣保持部吸引上述檢測體試樣。
如果形成這樣的結(jié)構(gòu)，由于還具備吸引部，所以能夠容易地將檢 測體試樣吸引到安裝在測定器件安裝部的測定器件的試樣保持部。
并且，本發(fā)明的測定器件具備用于保持包含尿素和被檢測物質(zhì) 的檢測體試樣的試樣保持部；用于對該試樣保持部所保持的上述檢測 體試樣進行光學測定的光學測定部；和試劑保持部，該試劑保持部保 持針對上述被檢測物質(zhì)的抗體以及水解上述尿素的尿素酶，上述測定方法的特征在于，包括(A)通過向上述測定器件的試樣保持部導(dǎo)入 上述檢測體試樣，由上述尿素酶水解上述檢測體試樣包含的尿素，并 且生成上述檢測體試樣包含的被檢測物質(zhì)和上述抗體的凝集體的工 序；(B)使光源射出的光射入到上述測定器件的光學測定部，使從上 述測定器件的光學測定部射出的光射入到受光元件的工序；(C)在上 述工序(B)中基于由上述受光元件接受的光對上述檢測體試樣中包含 的上述被檢測物質(zhì)進行檢測或者定量的工序。
如果形成這樣的結(jié)構(gòu)，使用測定器件的測定方法，由于包括工序 (A) 工序(C)，所以能夠解決在檢測體試樣中生成的抗原-抗體凝 集體的生成量依賴于尿素的濃度發(fā)生變化的問題。由此，雖然具有簡 易的結(jié)構(gòu)，但是能夠提供能夠減輕由于檢測體試樣中包含的尿素導(dǎo)致 的測定誤差，正確地進行被檢測物質(zhì)的測定的測定裝置。
在這種情況下，上述工序(A)包括(D)將上述測定器件浸入 上述檢測體試樣中的工序；和(E)將上述檢測體試樣吸引到上述測定 器件的試樣保持部中的工序。
如果形成這樣的結(jié)構(gòu)，由于工序(A)將測定器件浸入檢測體試樣 的工序(D);和將檢測體試樣吸引到測定器件的試樣保持部的工序(E)， 所以能夠容易地將檢測體試樣導(dǎo)入測定器件的試樣保持部。
依據(jù)本發(fā)明的上述特征性結(jié)構(gòu)，能夠提供雖然具有簡易的結(jié)構(gòu)， 但是能夠減輕由于檢測體試樣中包含的尿素導(dǎo)致的測定誤差，正確地 進行被檢測物質(zhì)的測定的測定器件、測定裝置和測定方法。


圖1是模式地表示本發(fā)明的實施方式1涉及的測定器件的結(jié)構(gòu)的 立體圖。
圖2是模式地表示圖i所示的測定器件的n-n線的截面結(jié)構(gòu)的截 面圖。
圖3是模式地表示分解本發(fā)明的實施方式1涉及的測定器件后的
狀態(tài)的分解立體圖。
圖4是模式地表示本發(fā)明的實施方式1涉及的測定裝置的結(jié)構(gòu)的 立體圖。圖5是模式地表示本發(fā)明的實施方式1涉及的測定裝置的內(nèi)部結(jié) 構(gòu)的方框圖。
圖6是表示本發(fā)明的實施方式1涉及的測定裝置的特征性動作的 流程圖。
圖7是模式地表示本發(fā)明的實施方式1涉及的測定器件的變形例
的結(jié)構(gòu)的立體圖。
圖8是模式地表示圖7所示的測定器件的變形例的W卜WI線的截面 結(jié)構(gòu)的截面圖。
圖9是模式地表示本發(fā)明的實施方式2中使用的尿素酶-抗體復(fù)合 體的結(jié)構(gòu)的概念圖。
圖IO是模式地表示進行關(guān)于相對于散射光強度的尿素濃度的影響 的試驗的結(jié)果的圖表。
符號說明
100a， b測定器件 101基體
101a中空四角柱部分 101b中空四角錐部分
103試樣供給口 104吸引口 105第一面 106第四面
107第二面(光射入部) 108第三面(光射出部) 109第一試劑保持部 110第二試劑保持部 111試劑保持部 112光學測定部 201第一部件 202第二部件 300測定裝置301測定器件安裝部 302顯示部
303試樣吸引開始按鈕 304測定器件拆卸按鈕 401控制器 404活塞機構(gòu) 406計時部 407光源 408受光器 409存儲器
410測定器件拆卸機構(gòu) 411記錄部 412發(fā)送部 413接收部
500尿素酶-抗體復(fù)合體 500a尿素酶 500b戊二醛 500c抗體
具體實施例方式
以下，參照附圖對用于實施本發(fā)明的最佳方式進行詳細說明。 (實施方式1)
在本發(fā)明的實施方式1中，關(guān)于檢測體試樣為尿，并且被檢測物 質(zhì)為人白蛋白的情況進行說明。
首先，關(guān)于本發(fā)明的實施方式l涉及的測定器件的構(gòu)成，參照圖1 和圖2進行詳細說明。
圖1為模式地表示本實施方式的測定器件的結(jié)構(gòu)的立體圖。另外， 圖2為模式地表示圖1所示的測定器件的II - II線的截面結(jié)構(gòu)的截面圖。
在本實施中，構(gòu)成測定器件100a的基體101的結(jié)構(gòu)與現(xiàn)有技術(shù)所 使用的測定器件的基體的結(jié)構(gòu)相同。
艮口，如圖1和圖2所示，本實施方式的測定器件100a具備透明的聚苯乙烯制的中空的基體101。并且，該基體101的兩端部被橫截而向
外部開放，在該基體101的內(nèi)部設(shè)置有空間，該空間作為測定器件100a 的試樣保持部102發(fā)揮功能。
另外，用作試樣保持部102的空間中的一個開放端部作為試樣供 給扣103發(fā)揮功能，該空間中的另一個開放端部作為吸引口 104發(fā)揮 功能。更具體而言，基體101具有中空四角柱部分101a和中空四角錐 部分101b，在中空四角柱部分101a的一個端部設(shè)置有吸引口 104，在 中空四角柱部分101a的另一個端部整體化地形成冇中空四角錐部分 101b。并且，在中空四角錐部分101b的、與中空四角柱部分101a相 反側(cè)的端部設(shè)置有試樣供給口 103。此外，在本實施方式中，如后文所 述，將測定器件100a的一部分浸入例如在容器內(nèi)采取的尿中之后，通 過測定裝置300的活塞機構(gòu)404從吸引口 104吸引試樣保持部102的 內(nèi)部的空氣，向試樣保持部102供給尿。
在此，在本實施方式中，構(gòu)成中空四角柱部分101a的外面的四個 面內(nèi)，在由第一面105和第四面106夾著的位置存在的第二面107作 為光射入部(以下也記作"光射入部107")發(fā)揮功能。另一方面，在 本實施方式中，構(gòu)成中空四角柱部分101a的外面的四個面內(nèi)，在由第 一面105和第四面106夾著的位置存在的、與第二面107相對的第三 面108作為光射出部(以下也記作"光射出部108")發(fā)揮功能。并且， 在本實施方式中，通過這些第二面(光射入部)107和第三面(光射出 部)108，構(gòu)成用于進行試樣保持部102所保持的檢測體試樣的光學測 定的光學測定部112。
并且，如圖2所示，在本實施方式的測定器件100a中，包圍試樣 保持部102的內(nèi)壁面內(nèi)，在中空四角柱部分101a的第四面106的內(nèi)壁 面，設(shè)置有第一試劑保持部109和第二試劑保持部110。在此，這些第 一試劑保持部109和第二試劑保持部110，設(shè)置成在作為試樣保持部 102的空間內(nèi)具有露出部分。
像這樣，本實施方式的測定器件100a具備中空的基體101，在該 基體101的內(nèi)部，形成有用于保持包含尿素和被檢測物質(zhì)的檢測體試 樣的試樣保持部102。另外，該測定器件100a具備與試樣保持部102 連通的試樣供給口 103與吸引口 104、和用于進行檢測體試樣的光學測定的光學測定部112。并且，該測定器件100a，在基體101的內(nèi)壁面 的規(guī)定位置，具備用于保持相對于被檢測物質(zhì)的抗體和尿素酶的試劑 保持部1U。
通過構(gòu)成為這樣的結(jié)構(gòu)，使用一個測定器件100a，通過對試樣保 持部102只供給一次檢測體試樣，就能夠?qū)崿F(xiàn)基于抗原-抗體反應(yīng)的凝 集體的生成、和基于尿素酶的尿素的水解。也就是說，通過在試劑保 持部111中保持的尿素酶溶解在檢測體試樣中，如化學式1所示，基 于尿素酶的尿素的水解反應(yīng)進行，因此檢測體試樣中包含的尿素的濃 度減少。然后，對測定器件100a的光學測定部112射入光，通過測定 從測定器件100a的光學測定部112射出的散射光和透過光，能夠正確 地測定凝集體的生成量。因此，通過這樣的簡單的結(jié)構(gòu)，能夠減輕由 于在被檢測體中包含的尿素引起的測定誤差，正確地進行作為被檢測 物質(zhì)的抗原的測定。<formula>formula see original document page 12</formula>
另外，在本實施方式的測定器件100a中，光學測定部112具備 用于從試樣保持部102的外部向該試樣保持部102的內(nèi)部射入光的光 射入部107;和用于從試樣保持部102的內(nèi)部向該試樣保持部102的外 部射出光的光射出部108。
在此，光射入部107和光射出部108優(yōu)選由光學性透明材料或者 實質(zhì)上不吸收可見光的材料形成。作為該材料，例如能夠列舉石英、 玻璃、聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲基等。特別是，在測定器件100a為 一次性的測定器件的情況下，從成本的觀點出發(fā)，優(yōu)選利用聚苯乙烯 形成光射入部107和光射出部108。
另外，在本實施方式的測定器件100a中，試劑保持部111具備第 一試劑保持部109和第二試劑保持部110。并且，優(yōu)選第一試劑保持部 109保持抗體，第二試劑保持部110保持尿素酶的方式。由此，與使抗體和尿素酶混合 干燥后保持在同一試劑保持部中的情況相比，抗體 和尿素酶的向檢測體試樣的溶解變得更加順利，因此，能夠穩(wěn)定地進 行檢測體試樣的光學測定。
在本實施方式的測定器件100a中，抗體和尿素酶等的試劑，在試 樣保持部102的內(nèi)部以干燥狀態(tài)具備，當對試樣保持部102的內(nèi)部供 給檢測體試樣時，優(yōu)選以易于溶解于該檢測體試樣的方式配置。例如， 在使試劑的溶液浸滲在由玻璃纖維或濾紙等構(gòu)成的多孔性的載體后， 通過使其干燥，使抗體和尿素酶等的試劑載持在載體中。然后，將載 持該試劑的載體設(shè)置在試劑保持部102的內(nèi)部即可。另外，也可以在 構(gòu)成試劑保持部102的內(nèi)壁面的一部分直接涂敷試劑的溶液之后，通 過使其充分干燥，將抗體和尿素酶等的試劑配置在試樣保持部102的 內(nèi)部?；蛘撸部梢栽谠嚇颖３植?02的外部使試劑凍結(jié)干燥，將該 凍結(jié)干燥后的試劑配置在試樣保持部102的內(nèi)部。
在此，作為試劑中包含的抗體，能夠列舉針對白蛋白或CRP等的 尿中包含的蛋白的抗體、針對hCG、LH等的尿中包含的激素的抗體等。 這些抗體由于能夠利用公知的方法生產(chǎn)，所以在試劑易于制作的觀點 方面有利。例如，將白蛋白或CRP等的蛋白、或hCG、 LH等的激素 作為抗原，通過對鼠，兔等進行免疫，能夠容易地獲得針對上述抗原 的抗體。
在本實施方式中，為了促進基于抗原和抗體的凝集體的生成反應(yīng)， 也可以在試劑保持部111中還保持有凝集促進劑。作為該凝集促進劑 的化學構(gòu)造的主鏈，例如能夠使用聚乙二醇等的化合物。此外，凝集 促進劑的分子量和側(cè)鏈的化學結(jié)構(gòu)，根據(jù)凝集反應(yīng)的種類，能夠使用 適宜、適當?shù)姆肿恿亢突瘜W結(jié)構(gòu)。例如，通過使凝集促進劑的分子量 為500 10000，能夠充分促進基于抗原和抗體的凝集體的生成反應(yīng)。 另外，當在試劑保持部111中還保持有凝集促進劑的情況下，優(yōu)選使 該凝集促進劑與測定器件100a的試樣保持部102中的抗體的附近共 存。由此，能夠更進一步促進基于抗原和抗體的凝集體的生成反應(yīng)。
此外，在本實施方式中，測定器件100a優(yōu)選以可裝卸的狀態(tài)被安 裝在后述的測定裝置300的測定器件安裝部301。另外，該測定器件 100a，為了實現(xiàn)檢測體試樣中包含的被檢測物質(zhì)的正確的測定，優(yōu)選為一次性的器件。
接著，關(guān)于本發(fā)明的實施方式1的測定器件的制作方法，參照圖3 進行詳細的說明。
圖3是模式地表示將本發(fā)明的實施方式1的測定器件分解后的狀 態(tài)的分解立體圖。
如圖3所示，本實施方式的測定器件100a具備第一部件201和第 二部件202。這里，構(gòu)成測定器件100a的第一部件201和第二部件202 分別為透明的聚苯乙烯制，并且分別具有凹部。并且，這些第一部件 201和第二部件202以凹部相對的方式相互組合，由此構(gòu)成具有中空四 角柱部分101a和中空四角錐部分101b的基體101。
在此，第一部件201和第二部件202能夠通過使用金屬模的成型 加工而得到。作為該成型加工，使用公知的樹脂成型技術(shù)即可。此外， 第一部件201和第二部件202的各尺寸能夠根據(jù)測定器件100a的規(guī)格 等進行適當調(diào)整，但是在本實施方式中，寬度A為10mm，長度B為 84mm，長度C為6mm，壁部的厚度為lmm。
在制作測定器件100a時，首先，在第二部件202的凹部的底面、 即第四面106的內(nèi)壁面，形成第一試劑保持部109和第二試劑保持部 110。
作為第一試劑保持部109的形成方法，能夠舉出使用微型注射器 等，將針對作為用于光學測定的試劑的人白蛋白的抗體的水溶液一定 量滴加而涂敷在第二部件202的凹部的底面，將其在室溫 3(TC左右 的環(huán)境中靜置使水分蒸發(fā)而形成的方法。利用該形成方法，能夠形成 以干燥狀態(tài)載持抗人白蛋白抗體的第一試劑保持部109。例如，使用濃 度為8mg/dL的上述抗體的水溶液，將其以0.7mL的滴加量滴加在面積 為5平方厘米的滴加部分，由此形成第一試劑保持部109。
另一方面，作為第二試劑保持部110的形成方法，能夠舉出通過 使用微型注射器等，將尿素酶的水溶液一定量滴加在第二部件202的 凹部的底面中的與第一試劑保持部109不同的位置而進行涂敷，并將 其靜置于室溫 30'C左右的環(huán)境中使水分蒸發(fā)而形成的方法。利用該 形成方法，能夠形成以干燥狀態(tài)載持尿素酶的第二試劑保持部110。例 如，使用濃度為476U/mL的尿素酶的水溶液，將其以0.7mL的滴加量滴加在面積為5平方厘米的滴加部分，由此能夠形成第二試劑保持部
110。此外，尿素酶的典型的活性為600U/mg (例如，Sigma株式會社 制尿素酶的情況下)，所以濃度476U/mL大約相當于0.79mg/mL。
在此，如圖2和圖3所示，在本實施方式中，將第二試劑保持部 110形成于比第一試劑保持部109更靠近試樣供給口 103的位置，但是 并不局限于這樣的方式。例如，與該方式相反，也可以將第一試劑保 持部109形成于比第二試劑保持部IIO更靠近試樣供給口 103的位置。
另外，在本實施方式中，第一試劑保持部109和第二試劑保持部 IIO在相互不同的位置形成，但是并不局限于這種方式，也可以形成包 含抗體和尿素酶的一個試劑保持部。例如通過在滴加后被干燥的抗體 上滴加尿素酶的水溶液，能夠形成在混合狀態(tài)下包含抗體和尿素酶的 試劑保持部。另外，在滴加抗體和尿素酶的混合水溶液后，通過將其 干燥，能夠形成一個試劑保持部。
另外，包含涂敷的試劑的水溶液的濃度和滴加量，根據(jù)測定器件 100a所要求的特性、第二部件202的形成位置的空間性限制，能夠適 當?shù)剡x擇。并且，第二部件202中的試劑保持部101的形成位置和形 成面積，鑒于試劑的相對于檢測體試樣的溶解性和光學測定部112的 位置等，能夠適宜、適當?shù)剡x擇。
此外，如上所述，相對于人白蛋白的抗體能夠利用公知的方法獲 得。例如將對人白蛋白免疫后的兔子的抗血清，利用蛋白質(zhì)A柱色譜 提煉后，使用透析管進行透析，由此能夠得到抗人白蛋白抗體。
接下來，將如上所述獲得的第一部件201和第二部件202接合具 有圖3所示的點劃線所示的位置關(guān)系，由此組成測定器件100a。這時， 在第一部件201和第二部件202的接合部分，例如涂敷環(huán)氧樹脂等的 粘接劑。并且，此后，使第一部件201和第二部件202粘在一起，將 該粘合體靜置使其干燥，由此組成測定器件100a。此外，也可以不涂 敷粘接劑組合第一部件201和第二部件202之后，使用市場上銷售的 熔敷機通過熱或者超音波熔敷第一部件201和第二部件202，組成測定 器件100a。
如上所述，能夠得到圖1和圖2所示的本實施方式涉及的特色的 測定器件100a。接著，關(guān)于本發(fā)明的實施方式l涉及的測定裝置的結(jié)構(gòu)，參照圖4
和圖5進行說明。此外，本實施方式涉及的測定裝置本身的結(jié)構(gòu)與現(xiàn)
有技術(shù)所使用的公知的測定裝置的結(jié)構(gòu)相同。因此，在以下的說明中， 省略測定裝置的結(jié)構(gòu)的詳細說明。
圖4是模式地表示本發(fā)明的實施方式1涉及的測定裝置的結(jié)構(gòu)的 立體圖。另一方面，圖5是模式地表示本發(fā)明的實施方式1涉及的測 定裝置的內(nèi)部結(jié)構(gòu)的方框圖。
如圖4所示，本實施方式的測定裝置300，具備用于在測定裝置 300上安裝測定器件100a的測定器件安裝部301。在該測定器件安裝 部301上設(shè)置有器件安裝口 (在圖4中未表示)，用于可裝卸地接合測 定器件100a的吸引口 104。另外，在測定裝置300的主面?zhèn)龋O(shè)置有 作為顯示測定結(jié)果的顯示器的顯示部302、試樣吸引開始按鈕303、和 測定器件拆卸按鈕304。
在測定裝置300中，在器件安裝口的內(nèi)側(cè)設(shè)置有凸部，當測定器 件100a被安裝時，該凸部被插入吸引口 104。這里，在器件安裝口的 內(nèi)部設(shè)置的凸部的周圍，為了使這些接合部不發(fā)生空氣的泄漏，優(yōu)選 例如設(shè)置有特氟綸(注冊商標)等的氟樹脂或者異戊二烯橡膠等的具 有彈性的樹脂制的環(huán)狀的密封件等，提高凸部和吸引口 104的密合性。 另外，上述的凸部本身也可以由特氟綸(注冊商標)或者異戊二烯橡 膠等的具有彈性的樹脂構(gòu)成。
另一方面，如圖5所示，在本實施方式的測定裝置300的內(nèi)部， 設(shè)置有用于使光射入到安裝在測定器件安裝部301的測定器件100a的 光學測定部112的射出光的光源407、和用于接受從該光學測定部112 射出的光的作為受光部的受光器408。這里，在本實施方式中，作為光 源407，例如能夠使用射出波長為620nm的光的半導(dǎo)體激光器。此外， 作為光源407，也可以使用半導(dǎo)體發(fā)光二極管(LED)等的半導(dǎo)體器件 代替半導(dǎo)體激光器。另外，在本實施方式中，作為受光器408，例如能 夠使用光敏二極管。此外，作為受光器408，也可以使用電荷耦合型元 件(CCD)，或者光敏萬用表等代替光敏二極管。
此外，在本實施方式中，假定通過應(yīng)用免疫比濁法進行被檢測物 質(zhì)的測定，選擇620nm的照射和受光波長，但該照射和受光波長也可以根據(jù)測定法和測定對象適當?shù)剡x擇。例如，照射和受光波長，在測 定對象為尿的情況下，由于通過可視吸收呈現(xiàn)黃色，所以優(yōu)選按照避 開這樣的吸收域的波長的方式進行選擇。
另外，在該測定裝置300的內(nèi)部，與現(xiàn)有的測定裝置的結(jié)構(gòu)相同， 設(shè)置有作為用于將試樣吸引到測定器件100a的試樣保持部102的吸 引部的活塞機構(gòu)404;用于使測定器件100a從測定裝置300脫離的測 定器件拆卸機構(gòu)410;具備運算部的控制器401，上述運算部基于由受 光器408接受的射出光檢測或者定量被檢測體中包含的被檢測物質(zhì)； 存儲有與測量線相關(guān)的數(shù)據(jù)的作為存儲部的存儲器409，上述測量線表 示作為被檢測物質(zhì)的人白蛋白的濃度與由受光器408接受的射出光的 強度的相關(guān)關(guān)系；用于記錄測定結(jié)果的記錄部411;用于將測定結(jié)果發(fā) 送到外部的發(fā)送部412;用于從外部接收分析結(jié)果的接收部413;和用 于計測經(jīng)過時間的計時部406。此外，在本實施方式中，活塞機構(gòu)404 具備通過線性的步進電動機使活塞進退的結(jié)構(gòu)。
像這樣，本實施方式的測定裝置300具備用于安裝測定器件100a 的測定器件安裝部301;用于射出向測定器件100a的光學測定部112 射入的光的光源407;用于接受從光學測定部112射出的光的受光部 408;和用于基于由受光部408接受的光的強度檢測或者定量測定器件 100a的試樣保持部102保持的檢測體試樣中包含的被檢測物質(zhì)的控制 器401。
另外，如上所述，測定裝置300，優(yōu)選具備用于通過吸引對安裝在 測定器件安裝部301上的測定器件100a的試樣保持部102供給檢測體 試樣的吸引部。也就是說，為了容易地實施在檢測體試樣中包含的被 檢測物質(zhì)的測定，測定器件100a具備試樣供給口 103和吸引口 104， 并且測定裝置300具備作為吸引部的活塞機構(gòu)404，優(yōu)選采用使活塞機 構(gòu)404驅(qū)動從測定器件100a的試樣保持部102吸引空氣，通過測定器 件100a的試樣供給口 103將檢測體試樣導(dǎo)入試樣保持部102的方式。 當采用這樣的構(gòu)成時，通過將測定器件101a的吸引口 104與測定器件 安裝部301連接，驅(qū)動測定裝置300的活塞機構(gòu)404這樣的簡單的結(jié) 構(gòu)，能夠容易地通過試樣供給口 103將檢測體試樣供給到測定器件100a 的試樣保持部102。此外，本實施方式的測定裝置300，具備通過線性的步進電動機使 活塞進退動作的活塞機構(gòu)404，但是并不局限于這樣的方式。例如，也 可以用通過手動使活塞進退動作的方式，代替通過線性的步進電動機 使活塞進退動作的方式。這里，作為用于通過手動使活塞進退動作的 機構(gòu)，能夠列舉與現(xiàn)有的注射器、分配器等同樣的活塞機構(gòu)。但是， 作為用于使活塞進退動作的方式，可以是手動也可以是自動，從能夠 減輕作業(yè)者的負擔的觀點出發(fā)，優(yōu)選自動地使活塞進退動作的方式。
另外，作為在活塞機構(gòu)404中使活塞進退動作的動力源，不一定 必須使用線性的步進電動機，也可以使用步進電動機或者直流電動機 等一般的動力源。
步進電動機是，轉(zhuǎn)子根據(jù)被輸入的一個脈沖的信號僅旋轉(zhuǎn)特定的 旋轉(zhuǎn)角度的電動機，由于能夠通過輸入的脈沖數(shù)決定轉(zhuǎn)子的旋轉(zhuǎn)角度， 所以不需要用于定位的編碼器。也就是說，所謂步進電動機，是能夠 通過輸入的脈沖數(shù)適當?shù)乜刂苹钊膭幼骶嚯x的電動機。在此，基于 步進電動機的活塞的進退動作，能夠通過齒輪機構(gòu)與使雄螺紋和雌螺 紋組合的直進機構(gòu)等將步進電動機的轉(zhuǎn)子的旋轉(zhuǎn)運動變換為直進運 動。此外，為了使用直流電動機使活塞進退動作，必須需要將轉(zhuǎn)子的 旋轉(zhuǎn)運動變換為直進運動的直進機構(gòu)等，并且為了適當?shù)乜刂苹钊?動作距離，需要用于檢測轉(zhuǎn)子的旋轉(zhuǎn)位置的編碼器。
此外，線性的步進電動機，在其內(nèi)部組裝有使雄螺紋和雌螺紋組 合的直進機構(gòu)，按照依賴于輸入的脈沖數(shù)，棒狀的可動部直進運動的 方式構(gòu)成。因此，通過在該棒狀的可動部直接連接活塞能夠構(gòu)成活塞 機構(gòu)404，因此活塞機構(gòu)404的構(gòu)成能夠成為比較簡單的結(jié)構(gòu)。
接著，關(guān)于本發(fā)明的實施方式1的測定器件和使用測定裝置的檢 測體試樣中包含的被檢測物質(zhì)的測定方法，參照圖4 圖6進行說明。
圖6是模式地表示本發(fā)明的實施方式1涉及的測定裝置的特征性 動作的流程圖。而且，在圖6中，為了方便，測定裝置的動作附帶的 作業(yè)者的操作和與此相伴進行的化學反應(yīng)等也表示在圖中。
作業(yè)者首先將測定器件100a的吸引口 104與位于測定裝置300的 測定器件安裝部301的內(nèi)部的器件安裝口 (未圖示)接合，將測定器 件100a安裝于測定器件安裝部301 (步驟S1)。當測定器件100a被安裝時，在測定裝置300中，在測定器件安裝 部301的內(nèi)部設(shè)置的由微型開關(guān)構(gòu)成的測定器件插入檢測開關(guān)(未圖 示)進行工作，作為控制部發(fā)揮功能的控制器401檢測測定器件100a 的插入。由此，使測定裝置300的電源成為ON狀態(tài)(步驟S2)。
接著，例如在便器的內(nèi)部設(shè)置的受尿容器或者紙杯等的可搬運的 容器中采取的尿中，作業(yè)者使測定器件100a浸入至至少試樣供給口 103 浸入的位置(步驟3)。
接著，作業(yè)者通過按下測定裝置300具備的試樣吸引開始按鈕 303，使活塞機構(gòu)404工作。由此，在活塞機構(gòu)404的內(nèi)部設(shè)置的活塞 工作，從測定器件100a的試樣供給口 103向試樣保持部102中導(dǎo)入規(guī) 定量(例如，3mL)的尿(步驟S4)。
伴隨著檢測體試樣被導(dǎo)入測定器件100a的試樣保持部102，試樣 保持部102所保持的檢測體試樣，和試劑保持部111所保持的抗體和 尿素酶被混合(步驟S5)。由此，被供給到試樣保持部102中的尿，將 被第一試劑保持部109和第二試劑保持部110載持的作為干燥狀態(tài)的 試劑的抗人白蛋白抗體和尿素酶溶解。
如此以來，在測定器件100a的試樣保持部102中，進行尿中包含 的作為抗原的人白蛋白和抗人白蛋白抗體的免疫反應(yīng)，同時進行利用 尿素酶的尿中包含的尿素的水解(步驟S6)。此外，作業(yè)者通過搖動安 裝有測定器件100a的測定裝置300等，也可以使檢測體試樣和抗體以 及尿素酶混合。
另一方面，在步驟S4中當將檢測體試樣導(dǎo)入測定器件100a的試 樣保持部102中時，測定裝置300的控制器401，通過使作為計時部 406的計時器工作，開始測定從檢測體試樣被導(dǎo)入試樣保持部102后經(jīng) 過的時間(步驟S7)。
接著，測定裝置300的控制器401，當根據(jù)計時部406的輸出信號 判斷為從向試樣保持部102的檢測體試樣的供給完成后的經(jīng)過時間Td 己達到規(guī)定的經(jīng)過時間Tpd (例如2分鐘)(步驟S8為是)，開始測定 器件100a的試樣保持部102所保持的檢測體試樣的光學測定(步驟 S9)。
當進行該檢測體試樣的光學測定時，測定裝置300的控制器401進行控制使得利用光源407進行向測定器件100a的光學測定部112的 光的照射。具體而言，控制器401按照以下方式進行控制，使得光從 光源407射出，通過測定器件100a的光射入部107射入到試樣保持部 102，透過作為檢測體試樣的尿并發(fā)生散射，在規(guī)定的時間(例如3分 鐘)由設(shè)置在測定裝置300的受光器408接受從光射出部108射出的 光。
此外，測定裝置300的控制器401，當根據(jù)計時部406的輸出信號 判斷為從向試樣保持部102的檢測體試樣的供給完成后的經(jīng)過時間Td 未達到規(guī)定的經(jīng)過時間Tpd (步驟S8為否)，則以繼續(xù)經(jīng)過時間Td的 測定的方式進行控制。
然后，測定裝置300的控制器401讀取在存儲器409中存儲的表 示射出光強度和人白蛋白濃度的相關(guān)關(guān)系的測量線，通過參照該測量 線，將由受光器408接受的射出光的強度換算為人白蛋白濃度。由此，
白蛋白的定量(步驟SIO)。
在步驟S10中當進行作為被檢測物質(zhì)的人白蛋白的定量時，通過 該定量動作獲得的人白蛋白濃度，在測定裝置300的顯示部302中被 顯示。由此，測定裝置300的使用者，能夠知道尿中包含的人白蛋白 濃度的測定完成。這時，優(yōu)選通過定量動作獲得的人白蛋白濃度與由 計時部406計時的時刻一起被保存在存儲器409中。
依據(jù)本實施方式的測定裝置300的結(jié)構(gòu)，與通過定量動作獲得的 人白蛋白濃度相關(guān)的數(shù)據(jù)，通過記錄部411能夠記錄在SD卡等的可拆 卸的存儲介質(zhì)中。由此，測定結(jié)果能夠容易地從測定裝置300取出， 所以能夠?qū)⒋鎯橘|(zhì)帶去或者郵寄給專業(yè)分析員，能夠委托其進行詳 細的分析。
另外，依據(jù)本實施方式的測定裝置300的結(jié)構(gòu)，能夠?qū)⑼ㄟ^定量 動作獲得的與人白蛋白濃度相關(guān)的數(shù)據(jù)通過發(fā)送部412發(fā)送到測定裝 置300的外部。由此，將測定結(jié)果發(fā)送到醫(yī)院內(nèi)的相關(guān)分析部門或者 相關(guān)專業(yè)分析員，能夠由相關(guān)分析部門或者相關(guān)專業(yè)分析員對其進行 分析，所以能夠縮短從測定到分析所需要的時間。
進一步，依據(jù)本實施方式的測定裝置300的結(jié)構(gòu)，由于設(shè)置有用于接收由相關(guān)分析部門或者相關(guān)專業(yè)分析員分析的結(jié)果的接收部413， 所以能夠迅速地將分析結(jié)果反饋給使用者。
最后，由作業(yè)者按下測定裝置300的測定器件拆卸按鈕304，測定 器件拆卸機構(gòu)410工作，通過移動活塞機構(gòu)404的內(nèi)部的活塞，測定 器件100a的試樣保持部102所保持的尿從試樣供給口 103被排出到便 器內(nèi)或者紙杯等的容器內(nèi)，測定器件100a從測定裝置300自動地被拆 卸(步驟Sll)。
當測定器件100a被拆卸時，在測定裝置300中，在測定器件安裝 部301的內(nèi)部設(shè)置的由微型開關(guān)構(gòu)成的測定器件插入檢測開關(guān)工作， 控制器401對測定器件100a的脫離進行檢測。從而，測定裝置300的 電源處于OFF狀態(tài)(步驟S12)。
此外，在本實施方式中，表示出測定裝置300具備從測定器件100a 排出檢測體試樣并且將其自動地脫離的結(jié)構(gòu)的方式，但是并不局限于 該方式。例如，也可以是不設(shè)置測定器件100a的拆卸和檢測體試樣排 出的機構(gòu)，使用者通過手動從測定器件安裝部301拆卸測定器件100a 的方式。
依據(jù)本發(fā)明能夠提供，通過以上所說明的簡單的結(jié)構(gòu)，能夠減輕 檢測體試樣中包含的尿素引起的測定誤差，能夠迅速且正確地進行作 為測定對象物質(zhì)的被檢測物質(zhì)(抗原)的測定的測定器件、測定裝置 和測定方法。
此外，作為本實施方式的檢測體試樣，能夠列舉血清、血漿、尿、 間質(zhì)液、淋巴液等的體液、培養(yǎng)基的上清液等的液體的檢測體試樣。 尤其是，作為包含尿素的檢測體試樣的尿，由于能夠非侵入性地進行 在家中的日常健康管理而優(yōu)選。另外，也可以將與上述液體中的特定 的成分發(fā)生反應(yīng)的試劑，例如酵素、抗體、或者色素等與體液混合后 的物質(zhì)，作為檢測體試樣供給到測定器件100a。
另外，鑒于在健康管理的最初的階段進行的尿的定性檢査、腎功 能檢查、妊娠檢査"排卵檢查等，由與蛋白、微量白蛋白、hCG、 LH 等的激素相關(guān)的測定的要求，在該測定時適合基于抗原一抗體反應(yīng)的 光學測定。因此，作為本發(fā)明的被檢測物質(zhì)，例如能夠列舉與白蛋白、 hCG、 LH、 CRP、 IgG、內(nèi)臟脂肪相關(guān)的激素等。另外，作為光學測定方法，能夠列舉免疫濁度法、免疫比濁法、膠乳免疫凝集法等的、基 于抗原一抗體反應(yīng)測定在檢測體試樣中產(chǎn)生的渾濁情況。
在此，在以上記載的說明中，對本發(fā)明的實施方式的一個例子進
行了說明，但是測定器件100a的形狀，只要是滿足本發(fā)明的構(gòu)成必要 條件，并且能夠得到本發(fā)明的效果的形狀，則并不局限于本實施方式 的方式中所述的形狀。
以下，關(guān)于本實施方式的測定器件的變形例的結(jié)構(gòu)，參照圖7和 圖8進行說明。
圖7是模式地表示本發(fā)明的實施方式1的測定器件的變形例的結(jié) 構(gòu)的立體圖。另外，圖8是模式地表示圖7所示的測定器件的變形例 的Vffl — VIIl線的截面結(jié)構(gòu)的截面圖。此外，在圖7和圖8中，對與圖1 和圖2所示的構(gòu)成要素相同的構(gòu)成要素標注相同的符號，并省略其詳 細的說明。
如圖7所示，作為本實施方式的測定器件100a的變形例的測定器 件100b，在其內(nèi)部具備具有作為試樣保持部102發(fā)揮功能的空間的有 底中空長方體形狀的基體101。并且，在該基體101的第一面105的規(guī) 定位置，設(shè)置有試樣供給口 103。
另外，如圖7和圖8所示，作為本變形例的基體IOI，由具有第一 面105、第二面107、第三面108、以及底部的部件(第一部件201); 和具有第四面106的背面板(第二部件202)構(gòu)成。
在該測定器件100b中，與上述測定器件100a的情況同樣，通過 將包含用于光學測定的試劑的水溶液涂敷在第四面106的內(nèi)側(cè)并進行 干燥，能夠形成第一試劑保持部109和第二試劑保持部110，但是也可 以代替該方法，而采用使試劑的溶液浸滲在由玻璃纖維或者濾紙等構(gòu) 成的多孔性的載體后，通過使其干燥或者凍結(jié)干燥來載持試劑，將該 多孔性的載體粘貼在第二部件202的凹部的底面的方式。
此外，關(guān)于其它的方面，與使用測定器件100a的情況相同。 (第實施方式2)
以下，對本發(fā)明的實施方式2的測定器件的其它優(yōu)選實施方式進 行說明。
在本實施方式中，關(guān)于通過使在實施方式1中使用的抗體和尿素酶預(yù)先結(jié)合獲得尿素酶一抗體復(fù)合體，將該尿素酶一抗體復(fù)合體向試 劑保持部配置的方式進行敘述。
圖9是模式地表示本發(fā)明的實施方式2中使用的尿素酶一抗體復(fù) 合體的結(jié)構(gòu)的概念圖。
如圖9所示，本實施方式的尿素酶一抗體復(fù)合體500具備尿素酶 500a、戊二醛500b、抗體500c。
尿素酶一抗體復(fù)合體500的調(diào)制按照如下所述那樣進行。
艮P，將1UM的抗體水溶液(例如，相對于人白蛋白的抗體的水 溶液)和luM的尿素酶水溶液等量混合，以最終濃度成為0.25 uM 的方式在其中添加戊二醛水溶液(摩爾比為2:2:1)。將該溶液在室 溫中攪拌1小時，由此抗體表面和尿素酶表面的氨基殘基(例如賴氨 酸)通過戊二醛交聯(lián)結(jié)合，能夠獲得尿素酶一抗體復(fù)合體500。
在本實施方式中，使用微型注射器將被調(diào)制的尿素酶一抗體復(fù)合 體500的水溶液，與實施方式1的情況同樣，通過以一定量滴加涂敷 在第二部件202的凹部的底面。然后將其靜置在室溫 30'C左右的環(huán) 境中使水分蒸發(fā)，由此形成以干燥狀態(tài)載持抗人白蛋白抗體的第一試 劑保持部109。例如，以0.7mL的滴加量將尿素酶抗體復(fù)合體500的 水溶液滴加在面積為5平方厘米的滴加部分。而且，在此之后，與實 施方式l的情況相同，組成測定器件，完成測定器件。
使用如上所述那樣得到的測定器件100a (測定器件100b)和與實 施方式1的情況同樣的測定裝置300和測定方法，從測定器件100a的 試樣供給口 103將包含作為抗原的人白蛋白的規(guī)定量的(例如3mL) 尿吸引到試樣保持部102。這樣，供給到測定器件100a的試樣保持部 102中的尿，將被第一試劑保持部109載持的作為干燥狀態(tài)的試劑的抗 人白蛋白抗體一尿素酶復(fù)合體溶解，與實施方式1的情況同樣地，在 尿中包含的作為抗原的人白蛋白與抗人白蛋白抗體的免疫反應(yīng)進行的 同時，進行基于尿素酶的尿中包含的尿素的水解。
在此，本實施方式的測定器件100a的尿素酶載持量為實施方式1 中的載持量的大約1/4。盡管如此，使用在上述實施方式1中所述的 方法得到的人白蛋白濃度的定量值，相對于尿中包含的尿素的濃度變 化的變化比實施方式1的變化小。這是由于尿素酶與抗體結(jié)合，只有接近抗體附近的尿素能夠高效率的進行水解。如上所述，通過使用結(jié) 合有尿素酶的抗體，能夠更進一步高效率地得到本發(fā)明的效果。
此外，在本實施方式中敘述了，在通過抗體和尿素酶的交聯(lián)結(jié)合 而得到的復(fù)合體的調(diào)制中，將戊二醛作為交聯(lián)劑使用的例子，但是并 不局限于此，也可以使用其它的交聯(lián)劑，例如使用在分子量末端具有 環(huán)氧基或者活化酯基的化合物。這些基與氨基發(fā)生反應(yīng)形成共價鍵。
作為這些化合物的例子，能夠列舉聚乙二醇二縮水甘油醚或烷基雙(N-
羥基琥珀酰亞胺)等。另外，也可以是在分子兩端具備與硫醇基反應(yīng) 的馬來酸酐縮壓胺基的化合物，與上述同樣地，能夠?qū)⒖贵w和尿素酶 進行交聯(lián)?；蛘?，也可以是分別在每一個分子末端具備一個氨基和一 個與硫醇基反應(yīng)的官能基的化合物。 實施例1
以下，關(guān)于本發(fā)明的實施例， 一邊與比較例比較一邊進行說明。 首先，對比較例進行說明。 (比較例1)
在本比較例中，關(guān)于進行由使用抗白蛋白抗體的免疫凝集反應(yīng)的 白蛋白的測定的一例進行了說明。
在本比較例中，將針對2.66pM (約4mg/mL)的人白蛋白的抗體 (抗白蛋白抗體)的水溶液O.lmL注入聚苯乙烯樹脂制的盒容器中。 并且，在本比較例中使用的盒容器的形狀，其外尺寸為3XlXlcm的 長方體，中空部為2.75X0.5X0.5cm的長方體。g卩，形成盒(cell)容 器的樹脂的厚度為0.25cm，盒容器外觀的長方體的一個面與中空部連 通形成開口。然后在進入有抗體的水溶液的盒容器中，添加O.lmL包 含濃度為20mg/dL的白蛋白和己知濃度的尿素的水溶液，使得白蛋 白濃度成為10mg/dL，使尿素的濃度成為各種規(guī)定的濃度。
之后，通過使用市場銷售的振動攪拌器(VORTEX)對盒容器施 加振動，強力攪拌盒容器內(nèi)的混合溶液5分鐘。并且在攪拌之后，將 盒容器靜止40秒，使白蛋白和抗體的結(jié)合，凝集反應(yīng)進行。其間，使 用電力lmW的半導(dǎo)體激光器從盒容器的一面射入波長630nm的光。 于是，射入到盒容器中的光通過該盒容器的壁面，由于通過反應(yīng)溶液 中的白蛋白和抗體的結(jié)合 凝集產(chǎn)生的凝集體而被散射，該被散射的光從包括射入面和其它面的盒容器的壁面被射出。這時，使用光敏二
極管測定從位于與所使用的光射入面成為90度關(guān)系的位置的盒容器的
壁面射出的散射光。
圖10是模式地表示關(guān)于相對于散射光強度的尿素濃度的影響進行 實驗的結(jié)果的圖表。并且，在圖10中，曲線a表示使用尿素酶抗體復(fù) 合體的情況下的散射光強度和尿素濃度的關(guān)系，曲線b表示僅使用尿 素酶的情況下的散射光強度和尿素濃度的關(guān)系，曲線c表示不使用尿 素酶的情況下的散射光強度和尿素濃度的關(guān)系。另外，公知尿中包含 的尿素的一般濃度為2 8%左右。
這里，由圖10的曲線c表示的數(shù)據(jù)是表示從與白蛋白抗體的混合 開始45秒后得到的散射光的強度、和使用的尿素濃度的關(guān)系的測定結(jié) 果。
從該曲線c可知，在不使用尿素酶的情況下，伴隨尿素的濃度的 上升，散射光的強度大幅降低。因此可知，在作為現(xiàn)有方法的本比較 例中的白蛋白的測定方法中，受到檢測體試樣中包含的尿素的影響， 其濃度測定的結(jié)果根據(jù)尿素的濃度產(chǎn)生較大的測定誤差。
像這樣，白蛋白的測定受到尿素的影響的現(xiàn)象是由于，由尿素導(dǎo) 致抗體受到變性，抗體的相對于抗原(白蛋白)的結(jié)合力降低所引起 的。而且，還由于這樣的結(jié)合力的降低，由抗體一抗原構(gòu)成的凝集體 的大小降低所引起。這里，認為該結(jié)合力的降低伴隨尿素的濃度的上 升而變大。像這樣，認為散射光的強度伴隨尿素的濃度的上升而降低。 或者，由抗體一抗原構(gòu)成的凝集體的形成由于尿素的存在而被阻礙， 其結(jié)果認為是，散射光的強度伴隨尿素的濃度的上升而降低。 (實施例1)
接著，對實施例l進行說明。
在本實施例中，對在由使用抗白蛋白抗體的免疫凝集反應(yīng)的白蛋 白的測定中，使尿素酶溶解與反應(yīng)液共存的一例進行說明。 在本實施例中，期待利用共存的尿素酶的尿素的水解。 在本實施例中，將包含相對于2.66pM (約4mg/mL)的人白蛋白 的抗體(抗白蛋白抗體)和2.66pM的尿素酶的水溶液O.lmL注入聚苯 乙烯樹脂制的盒容器中。在此，在本實施例中使用的盒容器的形狀，其外尺寸為3XlXlcm的長方體，中空部為2.75X0.5X0.5cm的長方 體。B卩，形成盒容器的樹脂的厚度為0.25cm，盒容器外觀的長方體的 一個面與中空部連通形成開口。然后在進入有抗體的水溶液的盒容器 中，添加O.lmL包含濃度為20mg/dL的白蛋白和己知濃度的尿素的 水溶液，使得白蛋白濃度成為10mg/dL，使尿素的濃度成為各種規(guī)定 的濃度。
之后，通過使用市場銷售的振動攪拌器(VORTEX)對盒容器施 加振動，強力攪拌盒容器內(nèi)的混合溶液5分鐘。并且在攪拌之后，將 盒容器靜止40秒，使白蛋白和抗體的結(jié)合，凝集反應(yīng)、和利用尿素酶 的尿素的水解反應(yīng)進行。其間，使用電力lmW的半導(dǎo)體激光器從盒容 器的一面射入波長630nm的光。于是，射入到盒容器中的光通過該盒 容器的壁面，由于通過反應(yīng)溶液中的白蛋白和抗體的結(jié)合 凝集產(chǎn)生 的凝集體而被散射，該被散射的光從包括射入面和其它面的盒容器的 壁面被射出。這時，使用光敏二極管測定從處于與所使用的光射入面 成為90度關(guān)系的位置的盒容器的壁面射出的散射光。
圖10的曲線b所示的數(shù)據(jù)表示從白蛋白和抗體以及尿素酶的混合 開始經(jīng)過45秒后得到的散射光的強度、與使用的尿素濃度的關(guān)系的測 定結(jié)果。
從曲線c和曲線b的比較可知，伴隨尿素濃度的上升的散射光的 強度的降低由于尿素酶的共存而減輕。像這樣，散射光的強度的測定 結(jié)果沒有很大地受到尿素的濃度的影響的理由是因為，由于共存的尿 素酶使尿素被水解，抗體受到的變性的情況與沒有尿素酶共存的情況 相比變小。另外還因為，抗體的相對于抗原(白蛋白)的結(jié)合力的降 低相對被抑制，由此，因結(jié)合力的低下引起的抗體一抗原凝集體的大 小的低下被抑制。如此一來，散射光的強度的伴隨尿素濃度的上升而 降低與比較例的情況相比較被抑制?；蛘?，對于利用尿素的抗體一抗 原凝集體的形成的阻礙由于基于尿素酶的水解被減輕，作為其結(jié)果， 伴隨尿素濃度的上升的散射光的強度的低下與比較例1的情況相比被 抑制。
(實施例2) 接著，對實施例2進行說明。在本實施例中，對進行由使用抗白蛋白抗體一尿素酶復(fù)合體的免 疫凝集反應(yīng)的白蛋白的測定的一例進行說明。
在本實施例中，期待利用與抗體結(jié)合 復(fù)合的尿素酶的尿素的有 效的水解。
在本實施例中，按如下方式進行尿素酶一抗體復(fù)合體的調(diào)制。
在本實施例中，將相對于2.66fiM(約4mg/mL)的人白蛋白的抗 體(抗白蛋白抗體)的水溶液和2.66pM的尿素酶的水溶液各0.2mL 等量混合，在其中少量添加lmM的戊二醛水溶液(摩爾比2:2:1) 使得最終濃度成為1.33pM。通過將該混合溶液在室溫中攪拌1小時， 抗體表面和尿素酶表面的氨基殘基(例如賴氨酸)通過戊二醛交聯(lián)結(jié) 合，得到尿素酶一抗體復(fù)合體。并且，在本實施例中，將所得到的尿 素酶一抗體復(fù)合體的水溶液O.lmL注入聚苯乙烯樹脂制的盒容器中。
在此，在本實施例中使用的盒容器的形狀，其外尺寸為3XlXlcm 的長方體，中空部為2.75X0.5X0.5cm的長方體。即，形成盒容器的 樹脂的厚度為0.25cm，盒容器外觀的長方體的一個面與中空部連通形 成開口。然后在進入有抗體的水溶液的盒容器中，添加O.lmL包含濃 度為20mg/dL的白蛋白和己知濃度的尿素的水溶液，使得白蛋白濃 度成為10mg/dL，使尿素的濃度成為各種規(guī)定的濃度。
之后，通過使用市場銷售的振動攪拌器(VORTEX)對盒容器施 加振動，強力攪拌盒容器內(nèi)的混合溶液5分鐘。并且在攪拌之后，將 盒容器靜止40秒，使白蛋白和抗體的結(jié)合，凝集反應(yīng)、和利用尿素酶 的尿素的水解反應(yīng)進行。其間，使用電力lmW的半導(dǎo)體激光器從盒容 器的一面射入波長630nm的光。于是，射入到盒容器中的光通過該盒 容器的壁面，由于通過反應(yīng)溶液中的白蛋白和抗體的結(jié)合 凝集產(chǎn)生 的凝集體而被散射，該被散射的光從包括射入面和其它面的盒容器的 壁面被射出。這時，使用光敏二極管測定從處于與所使用的光射入面 成為90度關(guān)系的位置的盒容器的壁面射出的散射光。
圖10的曲線a所示的數(shù)據(jù)表示從白蛋白和尿素酶一抗體復(fù)合體的 混合開始經(jīng)過45秒后得到的散射光的強度、與使用的尿素濃度的關(guān)系 的測定結(jié)果。
從曲線a、曲線b和曲線c的比較可知，伴隨尿素濃度的上升的散射光的強度的降低，與尿素酶不存在的一例(比較例O，和尿素酶溶 解共存的一例(實施例i)的各情況相比較，進一步減輕。像這樣，散 射光的強度的測定結(jié)果幾乎不受到尿素的濃度的影響的理由是因為， 由于與抗體結(jié)合的尿素酶使抗體的周邊的尿素被高效地水解，抗體受 到的變性的情況與沒有尿素酶共存的情況和尿素酶溶解共存的情況相 比進一步變小。另外還因為，抗體的相對于抗原(白蛋白)的結(jié)合力 的降低進一步被抑制，由此，因結(jié)合力的低下引起的抗體一抗原凝集 體的大小的低下被進一步抑制。如此一來，散射光的強度的伴隨尿素 濃度的上升而降低與比較例1和實施例1的情況相比較被更強地抑制。 或者，對于利用尿素的抗體一抗原凝集體的形成的阻礙由于基于與抗 體結(jié)合的尿素酶的水解被減輕，作為其結(jié)果，伴隨尿素濃度的上升的 散射光的強度的低下與比較例1和實施例1的情況相比被進一步抑制。 以上，通過比較例l、實施例1和實施例2，確認了本發(fā)明對于包 含尿素的檢測體試樣中含有的被檢測物質(zhì)的測定是有效的。
本發(fā)明的測定器件、測定裝置和測定方法，作為具有簡易的結(jié)構(gòu)， 并且能夠減輕由于檢測體試樣中包含的尿素引起的測定誤差，能夠正 確的進行被檢測物質(zhì)的測定的測定器件、測定裝置和測定方法，具有 產(chǎn)業(yè)上的利用可能性。因此，本發(fā)明的測定器件、測定裝置和測定方 法，在醫(yī)療和與醫(yī)療相關(guān)的檢查領(lǐng)域，特別是將尿作為檢測體試樣進 行測定的情況下有用。
權(quán)利要求
1. 一種測定器件，其特征在于具備構(gòu)成試樣保持部和試樣供給口的基體，所述試樣保持部用于保持包含尿素和被檢測物質(zhì)的檢測體試樣，所述試樣供給口用于對該試樣保持部供給所述檢測體試樣，所述基體具備光學測定部和試劑保持部，所述光學測定部用于對所述試樣保持部所保持的所述檢測體試樣進行光學測定，所述試劑保持部保持針對所述被檢測物質(zhì)的抗體以及水解所述尿素的尿素酶。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定器件，其特征在于-所述試樣保持部，是在所述基體的內(nèi)部以與所述試樣供給口連通的方式形成的空間，所述試劑保持部，在所述空間的內(nèi)面，以所述抗體和所述尿素酶 露出在該空間的方式形成。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定器件，其特征在于 所述試劑保持部，以所述抗體和所述尿素酶的復(fù)合體的形態(tài)保持所述抗體和所述尿素酶。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定器件，其特征在于 所述試劑保持部以各自單體的形態(tài)保持所述抗體和所述尿素酶。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的測定器件，其特征在于 所述光學測定部具備用于從所述試樣保持部的外部向該試樣保持部的內(nèi)部射入光的光射入部；和用于從所述試樣保持部的內(nèi)部向該 試樣保持部的外部射出光的光射出部。
6. —種測定裝置，其特征在于，包括 用于安裝權(quán)利要求1所述的測定器件的測定器件安裝部；光源，用于射出向安裝在所述測定器件安裝部的所述測定器件的 光學測定部射入的光；受光部，用于接受從安裝在所述測定器件安裝部的所述測定器件 的光學測定部射出的光；運算部，用于基于由所述受光部接受的所述射出的光對所述檢測 體試樣中包含的所述被檢測物質(zhì)進行檢測或者定量。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的測定裝置，其特征在于 還具備吸引部，所述吸引部用于向安裝在所述測定器件安裝部的所述測定器件的所述試樣保持部吸引所述檢測體試樣。
8. —種使用測定器件的測定方法，所述測定器件具備用于保持 包含尿素和被檢測物質(zhì)的檢測體試樣的試樣保持部；用于對該試樣保 持部所保持的所述檢測體試樣進行光學測定的光學測定部；和試劑保 持部，該試劑保持部保持針對所述被檢測物質(zhì)的抗體以及水解所述尿 素的尿素酶，所述測定方法的特征在于，包括(A) 通過向所述測定器件的試樣保持部導(dǎo)入所述檢測體試樣，由 所述尿素酶水解所述檢測體試樣包含的尿素，并且生成所述檢測體試 樣包含的被檢測物質(zhì)和所述抗體的凝集體的工序；(B) 使光源射出的光射入到所述測定器件的光學測定部，使從所 述測定器件的光學測定部射出的光射入到受光元件的工序；(C) 在所述工序(B)中基于由所述受光元件接受的光對所述檢 測體試樣中包含的所述被檢測物質(zhì)進行檢測或者定量的工序。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的使用測定器件的測定方法，其特征在于 所述工序(A)包括(D)將所述測定器件浸入所述檢測體試樣中的工序；和(E)將所述檢測體試樣吸引到所述測定器件的試樣保持 部中的工序。
全文摘要
本發(fā)明的測定器件(100a)具備構(gòu)成試樣保持部(102)和試樣供給口(103)的基體，該試樣保持部(102)用于保持包含尿素和被檢測物質(zhì)的檢測體試樣，該試樣供給口(103)用于對該試樣保持部供給檢測體試樣，該基體具備光學測定部和試劑保持部(111)，該光學測定部用于對試樣保持部(102)所保持的檢測體試樣進行光學測定，該試劑保持部保持針對被檢測物質(zhì)的抗體以及水解尿素的尿素酶。由此，能夠提供雖然具有簡易的結(jié)構(gòu)，但是能夠減輕檢測體試樣中包含的尿素導(dǎo)致的測定誤差，能夠正確地進行被檢測物質(zhì)的測定的測定器件、測定裝置和測定方法。
文檔編號G01N33/543GK101506655SQ20078003102
公開日2009年8月12日 申請日期2007年8月9日 優(yōu)先權(quán)日2006年8月21日
發(fā)明者中南貴裕, 村岡仁 申請人:松下電器產(chǎn)業(yè)株式會社