專利名稱：：Sparc及其使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及治療癌癥以及與組織和器官中的異常增殖、增生、重塑和炎性活性有關(guān)的其他疾病的方法。
背景技術(shù)：
：清蛋白納米顆粒配制物已經(jīng)顯示出能夠降低溶解性差的治療劑的毒性。例如，美國專利6，537，579公開了一種不含毒性乳化劑的清蛋白納米顆粒紫杉醇配制物。目前，抗癌劑紫杉醇(由BristolMyersSquibb公司以商品名Taxo^出售)已經(jīng)被批準用于治療包括卵巢癌、肺癌和乳腺癌在內(nèi)的多種癌癥。對于紫杉醇的應(yīng)用的主要限制是其溶解性差。因此，Taxol配制物含有作為起增溶作用的媒介物的CremophorEL,但是所述配制物中存在的Cremophor⑧與在動物(Lorenz等人，AgentsActions7，63-67，1987)和人(Weiss等人，J.Clin.Oncol.8，1263-1268，1990)中發(fā)生的嚴重的超敏反應(yīng)有關(guān)。因此，接受Taxo產(chǎn)的患者需要用皮質(zhì)類固醇(地塞米松)和抗組胺來進行前驅(qū)給藥，由此來減輕由于Cremopho^的存在而發(fā)生的超敏和過敏反應(yīng)。與此不同的是，同樣已知為ABI-007的人13^乂&116@是一種不含Cremopho,的紫杉醇清蛋白納米顆粒配制物，其由AbraxisOncology公司出售。將清蛋白納米顆粒作為媒介物使用使得當清蛋白納米顆粒在與鹽重構(gòu)時能夠形成膠體。基于臨床研究，已經(jīng)顯示出，與Taxol相比，使用Abraxane⑧可表征為超敏反應(yīng)減輕。因此，對于接受Abraxane⑧的患者不需要前驅(qū)給藥。清蛋白納米顆粒配制物的另一優(yōu)點在于，與使用TaxoP的目前可以達到的劑量和給藥頻率間隔相比，通過排除毒性乳化劑可以以更長的給藥頻率間隔給藥更高劑量的紫杉醇。因此，可能存在的情況是，由于(i)耐受劑量較高(300mg/m2);(ii)半衰期較長；(iii)對局部腫瘤的有效性延長；和/或(iv)體內(nèi)持續(xù)釋放的結(jié)杲，可能會見到在實體胂瘤中的效力增強^^&《&116@會在保持或改善藥物的化療效果的同時減輕超敏反應(yīng)。已知，由于脈管系統(tǒng)的滲漏，使得膠狀納米顆?；虺叽纭?00nm的顆粒往往會在腫瘤位置處集中。已經(jīng)描述了多種微脂體(lipsomal)酉己制物具有這種效果(Papahadjopoulos,等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.88,11460，1991);(Gabizon，A.，CancerRes.，52，891，1992;Dvorak,等人，Am.J.Pathol.133，95，1988);(Dunn，等人，Pharm，Res.，11，1016-1022，1994);以及(Gref，等人，Science263，1600-1603，1994)?？赡艿那闆r是，腫瘤位置處的局部化的紫杉醇納米顆?？梢允顾幬镌谀[瘤位置處緩慢釋放，從而使得與藥物以溶解形式(含有Cremophor)的給藥方式相比，會產(chǎn)生更大的效力。所述的納米顆粒配制物含有至少大約50%的納米顆粒形式的活性劑。此外，所述的納米顆粒配制物含有至少大約6Q%、至少大約70%、至少大約80%或至少大約90°/。的納米顆粒形式的活性劑。此外，所述的納米顆粒配制物含有至少大約95%或至少大約98%的納米顆粒形式的活性劑。富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC),也被稱為骨連蛋白，是一種281氨基酸糖蛋白。SPARC對多種配體具有親和性，其中所述配體包括陽離子(例如Ca2+、Cu2+、Fe2+)、生長因子(例如血小板衍生的生長因子(PDGF)和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF))、胞外基質(zhì)(ECM)蛋白(例如膠原蛋白I-V和膠原蛋白IX、玻連蛋白和血小板反應(yīng)蛋白-l)、內(nèi)皮細胞、血小板、清蛋白和羥基磷灰石(hydroxyapaptite)。SPARC的表達受到發(fā)育調(diào)控，并且主要在正常發(fā)育期間的或?qū)p傷做出應(yīng)答的期間的經(jīng)歷重塑的組織中表達(例如參見Lane等人，F(xiàn)ASEBJ，8，163-173(1994))。在正處于發(fā)育過程中的骨和牙中，SPARC蛋白的表達水平高。SPARC是一種在多種惡性癌癥中受到正調(diào)控的細胞基質(zhì)蛋白，而其在正常組織中卻不存在(Porter等人，JHistochem.Cytochem.，43，791(1995))。事實上，在多種胂瘤中，SPARC被誘導(dǎo)表達，其中所述的腫瘤例如為膀胱癌、肝癌、卵巢癌、腎癌、腸癌和乳腺癌。例如，在膀胱癌的情況中，SPARC的表達與中晚期癌癥有關(guān)。與Tl期的膀胱腫瘤(或淺表性更低的腫瘤)相比，T2期或更高階段的浸潤性膀胱癌顯示出表達了更高水平的SPARC,并且預(yù)后更差(例如參見Yamanaka等人，JUrology,166，2495-2499(2001))。在腦膜瘤的情況中，SPARC的表達只與浸潤性腫瘤有關(guān)(例如參見Rempe1等人，ClincalCancerRes.,5，237-241(1999))。此外，在74.5%的原位浸潤性乳腺癌損傷(例如參見Bellahcene,等人，Am.J.Pathol，146，95-100(1995))和54.2%的乳腺浸潤性導(dǎo)管癌(例如參見Kim等人，J.KoreanMed.Sci，13，652-657(1998))中還發(fā)現(xiàn)了SPARC的表達。SPARC的表達還與乳腺癌中常見的微鈣化有關(guān)(例如參見Bellahcene等人，同上)，表明SPARC的表達可能是造成乳腺癌轉(zhuǎn)移成骨癌的密切關(guān)系的原因。此外，已知SPARC能夠與清蛋白結(jié)合(例如參見Schnitzer，J.Biol.Chem.，269，6072(1994))?？贵w治療是一種用于控制其中可以鑒定出特定的蛋白質(zhì)標志物的疾病的有效方法。實例包括阿瓦斯汀(Avastin)，一種抗VEGF的抗體；美羅華(Rituxan)，一種抗CD20的抗體；以及Remicade，一種抗TNF的抗體。這樣，針對SPARC的抗體代表了一種用于治療人和其他哺乳動物腫瘤以及其他增殖、增生、重塑和炎性病癥(其中，表達了SPARC蛋白質(zhì))的重要的治療劑。此外，與成像劑或造影劑結(jié)合的針對SPARC的抗體將是檢測和診斷所述這些病癥的方法。仍存在對治療人和其他哺乳動物腫瘤以及其他增殖、增生、重塑和炎性病癥的方法的需要。而且，仍存在對為了預(yù)測或評價化療劑的效力而對人或其他哺乳動物肺瘤的應(yīng)答進行預(yù)測或確定的需要。此外，需要合適的方法以檢測和診斷所述病癥。本發(fā)明的這些以及其他優(yōu)點、以及其他發(fā)明特征將通過本文所提供的本發(fā)明的說明而變得顯而易見。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供一種用于預(yù)測或確定哺乳動物腫瘤或其他增殖疾病對化療劑或其他抗癌劑所產(chǎn)生的應(yīng)答的方法，其中所述方法包括以下步驟(a)從哺乳動物中分離生物樣品；(b)檢測SPARC蛋白質(zhì)或RNA在所述生物樣品中的表達；以及(c)對所述生物樣品中的SPARC蛋白質(zhì)的量進行定量。本發(fā)明提供了多個實施方案，在這些實施方案中，所述的生物樣品是從腫瘤(或與增殖疾病有關(guān)的組織)或體液(例如腦脊髓液、血液、血漿、血清或尿)中分離的。此外，本發(fā)明提供一種用化療劑或其他抗癌劑治療哺乳動物腫瘤或其他增殖疾病的方法，該方法包括以下步驟(a)從哺乳動物中分離生物樣品；(b)檢測SPARC蛋白質(zhì)或MA在所述生物樣品中的表達；(c)對所述生物樣品中的SPARC蛋白質(zhì)或RNA的量進行定量；(d)確定是否存在一定水平的SPARC蛋白質(zhì)或RNA,其中所述的水平指示使用化療劑或其他抗癌劑；以及(e)如果根據(jù)SPARC蛋白質(zhì)或RNA的水平，指示使用化療劑或其他抗癌劑，從而可以施用治療有效量的化療劑或其他抗癌劑。此外，本發(fā)明提供了用于預(yù)測哺乳動物腫瘤或其他增殖疾病對化療劑或其他抗癌劑所產(chǎn)生的應(yīng)答的試劑盒，該試劑盒包括用于從腫瘤中分離出蛋白質(zhì)的工具；SPARC蛋白質(zhì)的檢測和定量的工具；對照蛋白質(zhì)；以及用于預(yù)測腫瘤所產(chǎn)生的應(yīng)答的規(guī)則。本發(fā)明還提供了用于預(yù)測哺乳動物腫瘤或其他增殖疾病對化療劑或其他抗癌劑所產(chǎn)生的應(yīng)答的試劑盒，該試劑盒包括用于從腫瘤中分離出RNA的方法；SPARCRNA的檢測和定量的工具；對照RNA;以及用于根據(jù)腫瘤中SPARCRNA的水平來預(yù)測腫瘤所產(chǎn)生的應(yīng)答的規(guī)則。本發(fā)明提供一種用于預(yù)測或確定哺乳動物腫瘤對化療劑所產(chǎn)生的應(yīng)答的方法，以及一種用化療劑治療哺乳動物腫瘤的方法，其中所述的化療劑為(例如)多西他賽(docetaxel)、紫杉醇(例如Abraxane)或它們的組合。本發(fā)明進一步提供了多個實施方案，其中對哺乳動物腫瘤對化療劑產(chǎn)生的應(yīng)答的預(yù)測與SPARC的水平是呈正相關(guān)或負相關(guān)的。本發(fā)明提供一種用于預(yù)測或確定哺乳動物胖瘤所產(chǎn)生的應(yīng)答或用化療劑(其中化療劑被包括在內(nèi)并已舉例說明，但不能限定本發(fā)明)治療哺乳動物腫瘤的方法，其中所述的哺乳動物為人，并且所述腫瘤為乳腺癌、卵巢癌、頭頸癌、肺癌、結(jié)腸癌、膀胱癌或腎癌。本發(fā)明進一步提供一種使用清蛋白結(jié)合性蛋白質(zhì)作為治療劑以及使用SPARC以及抗SPARC的抗體或SPARC結(jié)合性蛋白質(zhì)作為治療劑、從而用于將化療劑遞送到哺乳動物的疾病位置處的方法，其中所述方法包括向哺乳動物施用治療有效量的藥物組合物，其中所述藥物組合物包含與能夠結(jié)合清蛋白結(jié)合性蛋白質(zhì)的化合物偶聯(lián)的化療劑，以及可藥用的載體。此外，本發(fā)明提供一種組合物，該組合物包含與能夠結(jié)合SPARC蛋白質(zhì)的化合物偶聯(lián)的化療劑，以及可藥用的載體。此外，本發(fā)明提供一種含有SPARC識別基團以及一種治療劑的遞送劑(deliveryagent),其中所述治療劑與所述的SPARC識別基團偶聯(lián)。此外，本發(fā)明提供一種將化療劑遞送至哺乳動物腫瘤處的方法，其中所述方法包括向哺乳動物施用治療有效量的藥物組合物，其中所述藥物組合物包含與能夠結(jié)合清蛋白的SPARC蛋白質(zhì)偶聯(lián)的化療劑、以及可藥用的載體。本發(fā)明的組合物可以是小分子、大分子或蛋白質(zhì)。圖1示出了人SPARC的氨基酸序列(SEQIDNO:1)。圖2示出了人SPARC的cDM序列(SEQIDNO:2)。圖3示出了在MX-1腫瘤異種移植物中清蛋白和SPARC的染色情況。圖4示出了紫杉醇穿過內(nèi)皮細胞單層的胞吞轉(zhuǎn)運過程。圖5A-B示出了Abraxane和Taxotere用于治療MX-1異種移才直物的效力(A,腫瘤體積)的對比，以及Abraxane和Taxotere用于治療MX-1異種移植物的毒性(B，重量損失％)的對比。圖6A-B示出了Abraxane和Taxotere用于治療LX-1異種移才直物的效力(A，腫瘤體積)的對比，以及Abraxane和Taxotere用于治療LX-1異種移植物的毒性(B，重量損失％)的對比。圖7A-B示出了Her2和SPARC在5種類型的腫瘤中的狀態(tài)(AX在每對柱條中，左側(cè)的柱條表示SPARC,右側(cè)的柱條表示Her2),以及Abraxane與Taxotere的相對效力(B)。圖8A-B示出了Abraxane和Taxotere用于治療HT29異種移才直物的效力(A,月中瘤體積)的對比，以及Abraxane和Taxotere用于治療HT29異種移植物的毒性(B，重量損失°/。)的對比。圖9A-B示出了Abraxane和Taxotere用于治療PC3異種移才直物的效力(A，月中瘤體積)的對比，以及Abraxane和Taxotere用于治療PC3異種移植物的毒性(B,重量損失％)的對比。圖10A-B示出了Abraxane和Taxotere用于治療MDA-MB-231異種移才直物的效力(A,腫瘤體積)的對比，以及Abraxane和Taxotere用于治療MDA-MB-231異種移植物的毒性(B，重量損失％)的對比。具體實施例方式目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，含有清蛋白結(jié)合性蛋白質(zhì)的組合物存在其他定位機制。諸如SPARC、cubilin和TGFP之類的清蛋白結(jié)合性蛋白質(zhì)可用于對治療劑所針對的疾病位置進行靶向，所述位置被表征為清蛋白結(jié)合性蛋白質(zhì)過表達。本發(fā)明提供了與試劑偶聯(lián)的基團的用途，其中所述基團能夠結(jié)合諸如SPARC、cubilin或TGFP之類的清蛋白結(jié)合性蛋白質(zhì)，并且所述試劑為疾病的治療劑、顯像劑或遞送劑，其中所述的清蛋白結(jié)合性蛋白質(zhì)起到了重要的作用并相對于正常組織過表達。優(yōu)選的是，所述的清蛋白結(jié)合性蛋白質(zhì)選自SPARC、cubilin或TGF0。最優(yōu)選的是，所述的清蛋白結(jié)合性蛋白質(zhì)為SPARC,并且所述與清蛋白結(jié)合性蛋白質(zhì)結(jié)合的基團為SPARC識別基團。合適的SPARC識別基團包括(但不限于)配體、小分子、抗體。本發(fā)明還提供一種用于預(yù)測或確定人或其他哺乳動物腫瘤、或者其他增殖疾病對化療劑或其他抗癌劑所產(chǎn)生的應(yīng)答的方法。所述方法包括(a)從人或其他哺乳動物中分離出生物樣品；(b)檢測SPARC蛋白質(zhì)在所述生物樣品中的表達；以及(c)對所述生物樣品中的SPARC蛋白質(zhì)的量進行定量。一旦確定出胂瘤所表達的SPARC的量，就可以例如通過將SPARC的表達與所給藥的治療劑的劑量相關(guān)聯(lián)，從而預(yù)測或確定出治療劑的效力。本發(fā)明還提供了針對SPARC所產(chǎn)生的、作為疾病的治療或顯像劑的抗體的用途，其中SPARC起到了重要的作用，并且相對于正常組織過表達。"預(yù)測人或其他哺乳動物肺瘤或者其他增殖疾病對化療劑所產(chǎn)生的應(yīng)答"是指基于測定結(jié)果，再結(jié)合臨床經(jīng)驗，在施用所述治療劑之前對應(yīng)答產(chǎn)生的可能性做出判斷。"確定人或其他哺乳動物腫瘤對化療劑所產(chǎn)生的應(yīng)答"是指基于測定結(jié)果，再結(jié)合臨床經(jīng)驗，在施用所述治療劑之后、但是在通過臨床技術(shù)或通過醫(yī)學領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所知的傳統(tǒng)實驗室方法或顯像研究方法來確定所產(chǎn)生的應(yīng)答之前，對應(yīng)答產(chǎn)生的可能性做出判斷。如本文所用，"人或其他哺乳動物腫瘤對化療劑所產(chǎn)生的應(yīng)答"是指由于化療劑的作用，使得患者所產(chǎn)生的臨床改善或者腫瘤尺寸減小或惡性減輕的程度或量。可以根據(jù)諸如行為狀態(tài)、身體檢查、顯像研究或?qū)嶒炇覚z測結(jié)果之類的客觀標準來評價患者發(fā)生的臨床改善。此外，可以根據(jù)患者所報告的諸如疼痛、憂郁、疲勞或精神面貌之類的主觀標準來評價患者發(fā)生的臨床改善?？梢葬娪帽绢I(lǐng)域已知的合適的方法(例如身體檢查、顯像研究或?qū)嶒炇覕?shù)據(jù))測量得到的最初腫瘤負荷或整體腫瘤負荷來得到腫瘤尺寸的減小值。"腫瘤尺寸的減小"是指發(fā)生至少約1oy。的變化。此外，理想的是發(fā)生至少約20%的變化，優(yōu)選的是發(fā)生至少約25%的變化，更優(yōu)選的是發(fā)生至少約33%的變化，更優(yōu)選的是發(fā)生至少約50%的變化，更優(yōu)選的是發(fā)生至少約90%的變化，更優(yōu)選的是發(fā)生至少約95°/。的變化，最優(yōu)選的是發(fā)生至少約99%的變化。"腫瘤侵襲性"的減輕是指，例如組織級別的降低、腫瘤中活細胞的百分率、腫瘤中增殖細胞的百分率、腫瘤的浸潤性、腫瘤轉(zhuǎn)移的能力或本領(lǐng)域已知的腫瘤侵襲性的其他量度。"腫瘤侵襲性的減輕"是指與腫瘤侵襲性相關(guān)的被醫(yī)藥領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常使用的測量參數(shù)發(fā)生了至少約10%的變化。此外，理想的是，與胂瘤侵襲性相關(guān)的被醫(yī)藥領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常使用的測量參數(shù)發(fā)生了至少約20°/的變化，優(yōu)選的是發(fā)生至少約25%的變化，更優(yōu)選的是發(fā)生至少約33%的變化，更優(yōu)選的是發(fā)生至少約50%的變化，更優(yōu)選的是發(fā)生至少約90°/。的變化，更優(yōu)選的是發(fā)生至少約95%的變化，最優(yōu)選的是發(fā)生至少約99%的變化。如本文所用，術(shù)語"抗性"或"對化學治療劑或其他抗癌劑具有抗性"是指癌癥樣品或哺乳動物對治療具有獲得性抗性或天然抗性，即，對治療處理不產(chǎn)生應(yīng)答，或產(chǎn)生較輕的應(yīng)答，或產(chǎn)生有限的應(yīng)答，例如，對治療處理產(chǎn)生25%或更高的較輕的應(yīng)答。此外，抗性例如還可以由30%、40%、50%、60°/。、70°/。、80%或更高直至2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、15倍、20倍或更高的較輕的應(yīng)答來表示。應(yīng)答的減輕程度可以通過與獲得抗性前的相同的癌癥樣品或哺乳動物相比較來測量，或者通過與已知對治療處理不具有抗性的不同的癌癥樣品或哺乳動物相比較來測量。如本文所用，術(shù)語"敏感"或"對化學治療劑或其他抗癌劑敏感"是指不具有抗性。此外，本發(fā)明提供一種用化學治療劑或其他抗癌劑治療哺乳動物腫瘤或其他增殖疾病的方法，該方法包括以下步驟(a)從哺乳動物中分離生物樣品；(b)檢測SPARC蛋白質(zhì)或RNA在所述生物樣品中的表達；(c)對所述生物樣品中的SPARC蛋白質(zhì)或RM的量進行定量；(d)確定是否存在一定水平的SPARC蛋白質(zhì)或RNA，其中所述的水平指示使用化療劑或其他抗癌劑；以及(e)如果根據(jù)SPARC蛋白質(zhì)或RNA的水平，指示^f吏用化療劑或其他抗癌劑，從而可以施用治療有效量的化療劑或其他抗癌劑。如本文所用，術(shù)語"治療"、"療法"和"治療處理，，是指治愈性治療、預(yù)防性治療或預(yù)防治療。"預(yù)防治療"的實例是預(yù)防或減輕目標疾病(例如癌癥或其他增殖疾病)或其相關(guān)病癥的幾率。需要治療的對象包括已經(jīng)患有所述疾病或病癥的那些，以及傾向于患有所述疾病或病癥的、待預(yù)防的那些。如本文所用，術(shù)語"治療"、"療法"和"治療處理"還描述了為了達到控制疾病或相關(guān)病癥的目的而對哺乳動物所進行的處理和看護，包括施用組合物，從而減輕疾病及其相關(guān)病癥的癥狀、副作用或其他并發(fā)癥。對癌癥的治療處理包括(但不限于)手術(shù)、化療、放射治療、基因治療和免疫治療。"確定是否存在一定水平的SPARC蛋白質(zhì)或RNA，其中所述的水平指示使用化療劑"是指存在于得自患有腫瘤的哺乳動物的樣本中的SPARC蛋白質(zhì)或RNA的所定量水平足夠高，基于SPARC水平及治療應(yīng)答的組織學相關(guān)數(shù)據(jù)的對比情況，表明可以合理地預(yù)測腫瘤對化療劑產(chǎn)生的應(yīng)答。"指示"或"得以指示"是指根據(jù)SPARC的水平并基于合理的醫(yī)學判斷，應(yīng)該使用化療劑。例如(沒有限定本發(fā)明)，可以通過在顯微鏡的載玻片上制備一個薄的活組織切片來制備腫瘤的活組織，并使用抗SPARC的抗體對其進行免疫組織學研究。然后，使用抗SPARC的免疫組織學方案來對活組織切片進行染色(例如參見Sweetwyne等人，J.Histochem.Cytochem.52(6):723-33(2004);Tai等人，J.Clin.Invest.115(6):1492-502(2005)),同時對對照切片也進行染色，其中所述的對照切片含有得自對考慮使用的化療劑敏感的其他腫瘤的、且SPARC的水平已知的活組織部分，以及含有得自對被考慮使用的化療劑具有抗性的其他腫瘤的、且SPARC的水平已知的活組織部分。在本領(lǐng)域的普通的實施方法中，使用光學顯微鏡對免疫組織學染色的程度進行評級。普通的技術(shù)人員(例如病理學研究者)可以根據(jù)與對照載玻片的染色程度的對比情況，來確定腫瘤活組織的染色級別(例如0、l+、2+、3+、4+)。如果腫瘤活組織的染色級別例如為3+或4+，則可以"指示，，用化療劑進行治療。所述的這些對比方法以及染色級別的確定是本領(lǐng)域中治療患有腫瘤的哺乳動物的普通醫(yī)務(wù)人員(例如醫(yī)師、病理學研究者、腫瘤研究者、獸醫(yī))所公知的。"治療有效量，，是指可以緩解(在某種程度上而言，可由熟練的醫(yī)務(wù)從業(yè)者來判斷)哺乳動物的疾病或病癥的一個或多個癥狀的量。此外，"治療有效量，，是指恢復(fù)至正常(部分正常或完全正常)的生理學或生物化學參數(shù)所需要的量，其中所述的生理學或生物化學參數(shù)與疾病或病癥有關(guān)，或者由疾病或病癥所導(dǎo)致。本領(lǐng)域的熟練的臨床醫(yī)生可以確定，為了治療或預(yù)防特定的疾病癥狀或病癥，當將組合物例如以靜脈內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)、口腔或通過吸入方式進行給藥時，該組合物的治療有效量。進行有效治療所需的組合物的精確的量除了取決于患者特定的多種考慮因素外，還取決于許多因素，例如活性劑的特定活性、所用的遞送裝置(deliverydevice)、所述試劑的物理特征以及給藥的目的。治療有效量的給藥量的確定方法在本領(lǐng)域中是常規(guī)的，并且是普通的臨床醫(yī)生所掌握的技巧。才艮據(jù)本發(fā)明實施的方法要求這樣的生物樣品，該生物樣品可以通過任何合適的程序來從與增殖疾病有關(guān)的腫瘤或組織中分離出來，其中所述的程序包括(但不限于)切除、活組織檢查、吸出、微靜脈穿孔(venupuncture)或它們的組合?？晒┻x用的其他方式是，才艮據(jù)本發(fā)明實施的方法要求這樣的生物樣品，該生物樣品可以從諸如腦脊髓液、血液、血漿、血清和尿之類的體液中得到。此外，包括腫瘤和體液材料的對照或參照生物樣品可以從同一哺乳動物的正常組織、未患有腫瘤或增殖疾病的其他個體、或者SPARC水平已知的以及已知對所給的化療劑敏感或具有抗性的其他腫瘤中獲得。此外，本發(fā)明的方法可以在其中患有腫瘤或增殖疾病的哺乳動物為人的條件下實施。此外，本發(fā)明提供一種用于預(yù)測哺乳動物腫瘤或其他增殖疾病對化療劑或其他抗癌劑所產(chǎn)生的應(yīng)答的試劑盒，該試劑盒包括用于從腫瘤中分離出蛋白質(zhì)的工具；SPARC蛋白質(zhì)的檢測和定量的工具；對照蛋白質(zhì)；以及用于預(yù)測腫瘤所產(chǎn)生的應(yīng)答的規(guī)則。本發(fā)明還提供了一種用于預(yù)測哺乳動物腫瘤或其他增殖疾病對化療劑或其他抗癌劑所產(chǎn)生的應(yīng)答的試劑盒，該試劑盒包括用于從腫瘤中分離出RNA的工具；SPARCRNA的檢測和定量的工具；對照RNA;以及用于根據(jù)腫瘤中SPARCRNA的水平來預(yù)測腫瘤所產(chǎn)生的應(yīng)答的規(guī)則。例如，肺瘤活組織中的SPARC蛋白質(zhì)或RNA可以通過將一個薄的腫瘤活組織切片力丈置在顯微鏡的載玻片上而"分離，，得到。然后，可以通過使用抗SPARC的抗體進行免疫組織學染色(例如參見Sweetwyne等人，J.Histochem.Cytochem.52(6):723-33(2004);Tai等人，J.Clin.Invest.115(6):1492-502(2005))或者通過4吏用與SPARCRNA互補的核酸探針進行原位雜交(例如參見Thomas等人，Clin.Can.Res.6:1140-49(2000))來檢測任何存在的SPARC蛋白質(zhì)或RNA，并對其進行定量。同時，對SPARC蛋白質(zhì)或RNA的陽性對照載玻片和陰性對照載玻片進行染色。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以容易地使用光學顯微鏡來對腫瘤活組織中的SPARC的染色程度進行評級(例如0、l+、2+、3+、4+)。本發(fā)明的試劑盒還包括根據(jù)腫瘤中SPARC蛋白質(zhì)或RM的水平來預(yù)測該腫瘤的應(yīng)答的規(guī)則，例如，"如果腫瘤活組織的染色級別例如為3+或4+，則可以指示用化療劑進行治療"或"染色級別為3+或4+的腫瘤具有高的應(yīng)答率"。與本發(fā)明的試劑盒的具體實施方案相關(guān)的特定規(guī)則可以容易地通過進行相關(guān)的回顧性研究或相關(guān)的前瞻性研究而產(chǎn)生，其中所述的研究在本領(lǐng)域中是常規(guī)的并且不需要過多的試驗。人SPARC基因編碼了303氨基酸的SPARC蛋白質(zhì)，而成熟的SPARC為285氨基酸的糖蛋白。在信號序列被酶切后，形成了32kD的分泌形式的蛋白質(zhì)，由于該分泌形式的蛋白質(zhì)為糖蛋白，所以其在SDS-PAGE上遷移至43kD。完全SPARC蛋白質(zhì)的氨基酸序列在SEQIDNO:l(參見圖1)中公開，并且編碼這種SPARC蛋白質(zhì)的RNA的核酸序列在SEQIDNO:2(其以cDNA序列的形式呈現(xiàn)，即，RNA中的尿苷("U")成為胸腺嘧啶("T"))(參見圖2)中公開。如本文所用，術(shù)語"多肽"和"蛋白質(zhì)"可交換使用。本發(fā)明提供了對SPARC多肽或蛋白質(zhì)(例如含有如SEQIDNO:1所示的氨基酸序列的多肽或蛋白質(zhì))的檢測和定量。本發(fā)明還提供了對SPARC多肽的檢測，其中所述多肽含有得自如SEQIDNO:1所示序列的至少約10個連續(xù)氨基酸的氨基酸序列，優(yōu)選為得自如SEQIDNO:1所示序列的至少約15個連續(xù)氨基酸的氨基酸序列，更優(yōu)選為得自如SEQIDNO:l所示序列的至少約20個連續(xù)氨基酸的氨基酸序列，最優(yōu)選為得自如SEQIDNO:1所示序列的至少約100個連續(xù)氨基酸的氨基酸序列。此外，本發(fā)明提供了對SPARC多肽的檢測，其中所述SPARC多肽含有這樣的多肽，該多肽的序列與如SEQIDNO:1所示的相應(yīng)序列具有至少約80%的同源性，優(yōu)選為與如SEQIDNO:1所示的相應(yīng)序列具有至少約90°/。的同源性，甚至更優(yōu)選的是與如SEQIDNO:1所示的相應(yīng)序列具有至少約95%的同源性，甚至更優(yōu)選的是與如SEQIDNO:1所示的相應(yīng)序列具有至少約99%的同源性。"SEQIDNO:l的相應(yīng)序列"是指與如SEQIDNO:1所示的序列相必對的序列，其中對比區(qū)域為至少約10個氨基酸長，優(yōu)選為至少約15個氨基酸長，更優(yōu)選為至少約20個氨基酸長，更優(yōu)選為至少約30個氨基酸長，更優(yōu)選為至少約40個氨基酸長，更優(yōu)選為至少約50個氨基酸長，甚至更優(yōu)選為至少約IOO個氨基酸長。序列對比的多種方法在生物
技術(shù)領(lǐng)域：
中是已知的(例如參見Rosenberg,BMCBioinformatics6:278(2005);Altschul等人，F(xiàn)EBSJ.272(20):5101-5109(2005))。本發(fā)明提供了對SPARCRNA(例如含有如SEQIDNO:2所示的核酸序列的RNA)的檢測和定量。本發(fā)明還提供了對SPARCRNA的檢測，其中所述RNA含有得自如SEQIDNO:2所示序列的至少約15個連續(xù)核苷酸的核酸序列，優(yōu)選的是得自如SEQIDNO:2所示序列的至少約20個連續(xù)核苷酸的核酸序列，更優(yōu)選的是得自如SEQIDNO:2所示序列的至少約30個連續(xù)核苷酸的核酸序列。此外，本發(fā)明提供了對SPARCRNA的檢測，其中所述SPARCRM含有這樣的核酸，該核酸的序列與如SEQIDNO:2所示的相應(yīng)序列具有至少約80%的同源性，優(yōu)選的是與如SEQIDNO:2所示的相應(yīng)序列具有至少約90%的同源性，甚至更優(yōu)選的是與如SEQIDNO:2所示的相應(yīng)序列具有至少約95%的同源性，甚至更優(yōu)選的是與如SEQIDNO:2所示的相應(yīng)序列具有至少約99%的同源性。"SEQIDNO:2的相應(yīng)序列"是指與如SEQIDNO:2所示的序列相必對的序列，其中對比區(qū)域為至少約15個核苷酸長，優(yōu)選為至少約20個核普酸長，更優(yōu)選為至少約30個核苷酸長，更優(yōu)選為至少約60個核苷酸長，更優(yōu)選為至少約120個核苷酸長，更優(yōu)選為至少約150個核苷酸長，甚至更優(yōu)選為至少約200個核苷酸長。序列對比的多種方法在生物
技術(shù)領(lǐng)域：
中是已知的(例如參見Rosenberg,BMCBioinformatics6:278(2005);Altschul等人，F(xiàn)EBSJ.272(20):5101-5109(2005))。SPARCRNA是指任何SPARCRNA,包括U旦不限于)SPARCmRNA、hnRNA、初級轉(zhuǎn)錄物或剪接變體。如本文所用，"定量"是指確定所存在的量或濃度。本發(fā)明提供一種對SPARC蛋白質(zhì)或RM的水平進行定量的方法，其中腫瘤中的SPARC蛋白質(zhì)或RNA相對于正常組織是過表達或表達不足的，其中所述水平包括(但不限于)在腫瘤來源的相應(yīng)的正常組織中所發(fā)現(xiàn)的水平?？晒┻x用的其他方式是，本發(fā)明提供一種對SPARC蛋白質(zhì)或RNA的水平進行定量的方法，其中腫瘤中的SPARC蛋白質(zhì)或RNA相對于其他腫瘤是過表達或表達不足的，其中所述的其他腫瘤包括(但不限于)相同組織或相同組織結(jié)構(gòu)的肺瘤。此外，本發(fā)明提供一種對SPARC蛋白質(zhì)或RNA的水平進行定量的方法，其中腫瘤中的SPARC蛋白質(zhì)或RNA相對于其他腫瘤是過表達或表達不足的，其中所述的其他腫瘤包括(但不限于)對化療劑或化療劑的組合敏感或具有抗性的腫瘤。過表達或表達不足是指SPARC蛋白質(zhì)或RNA的水平在兩種樣本或樣品之間的差異為至少約5%。此外，理想的是SPARC蛋白質(zhì)或RNA的水平在兩種樣本或樣品之間的差異為至少約10°/。，更優(yōu)選的是所述差異為至少約20%，更優(yōu)選的是所述差異為至少約50%,更優(yōu)選的是所述差異為至少約100%，更優(yōu)選的是所述差異為至少約3倍，更優(yōu)選的是所述差異為至少約5倍，最優(yōu)選的是所述差異為至少約IO倍。本發(fā)明提供一種對SPARC蛋白質(zhì)或RNA的水平進行定量的方法，其中在測試生物流體中的SPARC蛋白質(zhì)或RM相對于得自未患有腫瘤的患者的流體中的SPARC蛋白質(zhì)或RNA是過表達的或表達不足的?？晒┻x用的其他方式是，本發(fā)明提供一種對SPARC蛋白質(zhì)或RNA的水平進行定量的方法，其中在測試生物流體中的SPARC蛋白質(zhì)或RNA相對于得自患有腫瘤的另一患者的流體中的SPARC蛋白質(zhì)或RM是過表達的或表達不足的，其中所述的腫瘤包括(但不限于)對化療劑或化療劑的組合敏感或具有抗性的腫瘤。過表達或表達不足是指SPARC蛋白質(zhì)或RNA的水平在兩種樣本之間的差異為至少約5%。此外，理想的是SPARC蛋白質(zhì)或RNA的水平在兩種樣本之間的差異為至少約10%，優(yōu)選的是所述差異為至少約20%，更優(yōu)選的是所述差異為至少約50%，更優(yōu)選的是所述差異為至少約100%，更優(yōu)選的是所述差異為至少約3倍，更優(yōu)選的是所述差異為至少約5倍，最優(yōu)選的是所述差異為至少約10倍。本發(fā)明提供了對腫瘤對化療劑或其他抗癌劑所產(chǎn)生的應(yīng)答進行預(yù)測或確定的方法，治療腫瘤的方法，以及用于預(yù)測哺乳動物腫瘤對化療劑或其他抗癌劑所產(chǎn)生的應(yīng)答的試劑盒，其中所述腫瘤選自口腔腫瘤、咽部腫瘤、消化系統(tǒng)腫瘤、呼吸系統(tǒng)腫瘤、骨腫瘤、軟骨性腫瘤、骨轉(zhuǎn)移、肉瘤、皮膚瘤、黑素瘤、乳腺腫瘤、生殖系統(tǒng)腫瘤、尿路腫瘤、眼眶肺瘤、腦和中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、內(nèi)分泌系統(tǒng)腫瘤、甲狀腺腫瘤、食道腫瘤、胃部腫瘤、小腸腫瘤、結(jié)腸腫瘤、直腸胂瘤、膽門腫瘤、肝臟腫瘤、膽嚢腫瘤、胰腺腫瘤、喉部腫瘤、肺部腫瘤、支氣管腫瘤、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、宮頸腫瘤、子宮體胂瘤、卵巢腫瘤、外陰腫瘤、陰道腫瘤、前列腺腫瘤、前列腺癌、睪丸腫瘤、陰莖腫瘤、膀胱胂瘤、腎臟腫瘤、腎盂腫瘤、輸尿管腫瘤、頭和頸部腫瘤、副甲狀腺癌、霍奇金疾病、非霍奇金淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤、白血病、急性淋巴細胞性白血病、慢性淋巴細胞性白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病。此外，本發(fā)明提供了預(yù)測和確定腫瘤對化療劑所產(chǎn)生的應(yīng)答的方法，治療腫瘤的方法，以及預(yù)測哺乳動物腫瘤對化療劑所產(chǎn)生的應(yīng)答的試劑盒，其中所述腫瘤為肉瘤、腺癌、扁平細胞癌、巨細胞癌、小細胞癌、基細胞癌、透明細胞癌、嗜酸性細胞腺瘤(oncytoma)或它們的組合。此外，本發(fā)明提供了預(yù)測或確定腫瘤對化療劑所產(chǎn)生的應(yīng)答的方法，治療腫瘤的方法，以及用于預(yù)測哺乳動物腫瘤對化療劑所產(chǎn)生的應(yīng)答的試劑盒，其中所述胂瘤為良性瘤或惡性瘤。此外，本發(fā)明提供了預(yù)測或確定增殖疾病對化療劑所產(chǎn)生的應(yīng)答或治療增殖疾病的方法，其中所述的增殖疾病包括(但不限于)良性前列腺增生、子宮內(nèi)膜異位、子宮內(nèi)膜增生、動脈硬化、銀屑病或增殖性腎小球病。本發(fā)明提供了多個實施方案，其中所述的腫瘤或增殖疾病在哺乳動物中發(fā)生，其中所述的哺乳動物包括(但不限于)人。如本文所用，術(shù)語"試劑"、"藥物"或"治療劑"是指化合物、由化合物形成的混合物、生物大分子、或由諸如細菌、植物、真菌或動物(特別是哺乳動物)細胞或組織之類的懷疑具有治療性質(zhì)的生物材料中制得的提取物。所述試劑或藥物可以是純的、基本純的或部分純的。根據(jù)本發(fā)明，"試劑"還包括放射治療劑。如本文所用，術(shù)語"化療劑，，是指對癌癥、贅生物和/或增殖疾病具有活性的試劑。根據(jù)本發(fā)明使用的合適的化療劑或其他抗癌劑包括(但不限于)酪氨酸激酶抑制劑(染料木黃酮)、生物活性劑(tTF中的TNF)、放射性核素(1311、9°Y、mIn、211At、"P和其他已知的治療用放射性核素)、阿霉素、柄型大環(huán)類抗生素、天冬酰胺酶、爭光霉素、白消安、順鉑、卡鉑、卡莫司汀、卡培他濱、苯丁酸氮芥、阿糖胞苷、環(huán)磷酰胺、喜樹堿、達卡巴嗪、放線菌素D、道諾霉素、右雷佐生、多西他賽、亞德里亞霉素、依托泊苷、埃博霉素、氟尿苷、氟達拉濱、氟尿嘧啶、吉西他濱、羥基脲、依達比星、異環(huán)磷酰胺、伊立替康、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、巰基嘌呤、美法侖(meplhalan)、甲氨蝶齡、雷帕霉素(西羅莫司)及其衍生物、絲裂霉素、米托坦、米托蒽醌、亞硝基脲、紫杉醇、帕米磷酸二鈉、噴司他丁、普卡霉素、甲基芐肼、利妥昔單抗、鏈脲佐菌素、替尼泊甙、硫鳥嘌呤、塞替派、紫杉烷類、長春堿、長春新堿、酒石酸長春瑞賓、Taxol、考布他汀(combretastatins)、替斯利得和反鉑。因此，根據(jù)本發(fā)明使用的合適的化療劑包括(不限于)抗代謝物(例如天冬酰胺酶)、抗有絲分裂物(例如長春花生物堿)、DNA損壞劑(例如順鉑)、促細胞凋亡物質(zhì)(誘導(dǎo)程序性細胞死亡或凋亡的試劑)(例如、表鬼臼脂素)、分化誘導(dǎo)試劑(例如類視覺素)、抗生素(例如博來霉素)、和激素(例如三苯氧胺、己烯雌酚)。此外，根據(jù)本發(fā)明使用的合適的化療劑包括血管生成抑制劑(血管發(fā)生抑制劑)，例如INF-a、煙曲霉素、制管張素、內(nèi)皮抑素、鎮(zhèn)靜劑等。"其他抗癌劑"還包括(但不限于)生物活性多肽、抗體、血凝素和毒素。根據(jù)本發(fā)明使用的合適的抗體包括(但不限于)連接(偶聯(lián))或未連接(未偶聯(lián))的抗體、單克隆或多克隆的抗體、人的抗體或非人的抗體、以及Fab'、Fab或Fab2片段、單鏈抗體等。優(yōu)選的化療劑包括多西他賽、紫杉醇及其組合。"及其組合"是指以包含1種以上的一定劑量的藥物(例如多西他賽和紫杉醇)的形式進行給藥，以及將多西他賽和紫杉醇順序地但是是暫時分開的方式進行給藥(例如在一個周期中使用多西他賽，而在下一周期中使用紫杉醇)。特別優(yōu)選的化療劑包括由結(jié)合了蛋白質(zhì)的藥物形成的顆粒，包括(但不限于)，其中構(gòu)成結(jié)合了蛋白質(zhì)的藥物的顆粒的蛋白質(zhì)包括清蛋白，并且其中所述化療劑的50°/。以上為非顆粒形式。最優(yōu)選的是，所述化療劑包含結(jié)合了清蛋白的紫杉醇顆粒，例如Abraxane⑧?？梢愿鶕?jù)本發(fā)明使用所述的這種結(jié)合了清蛋白的紫杉醇配制物，其中紫杉醇的給藥劑量為約30mg/ii^至約1000mg/m2,并且劑量給藥的周期為約3星期(即，大約每3個星期進行1次一定劑量的紫杉醇給藥)。此外，在給藥周期為約3個星期的條件下，理想的是紫杉醇的給藥劑量為約50mg/m'至約800mg/m、優(yōu)選的是為約80mg/W至約700mg/m2,最優(yōu)選的是為約250mg/m2至約300mg/m2。任何合適的生物樣品都可以根據(jù)本發(fā)明的方法從哺乳動物中分離得到，并用于多肽和/或RNA的檢測和定量。優(yōu)選的是，所述生物樣品是通過諸如活組織檢查從胖瘤中分離的。采用本領(lǐng)域已知的方法從哺乳動物中分離出所述的生物樣品?？晒┻x用的其他方式是，所述生物樣品可以從哺乳動物的體液(例如包括腦脊髓流體、血液、血漿、血清或尿)中分離得到。特別是，許多蛋白質(zhì)純化技術(shù)在本領(lǐng)域中是已知的(例如參見Harlow&Lane,Antibodies,ALaboratoryManual,ColdSpringHarbor,pp.421-696(1988))?？梢愿鶕?jù)本發(fā)明采用任何合適的方法來對SPARC蛋白質(zhì)進行檢測和定量，所述的方法包括(但不限于)使用抗SPARC的抗體(例如蛋白印跡法，ELISA)(例如參見Sweetwyne等人，J.Histochem.Cytochem.52(6):723-33(2004);Tai等人，J.Clin.Invest.115(6):1492-502(2005)),使用SPARC特異性結(jié)合蛋白質(zhì)(例如放射性標記的SPARC配體，類ELISA檢測)，雙向電泳，質(zhì)"i普或它們的組合(例如參見NedelkovD等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.102(31):10852-7(2005);Chen等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.101(49):17039-44(2004))。此外，免疫組織化學可用于分離、檢測樣品中的SPARC蛋白質(zhì)，并對其進行定量(例如參見Sweetwyne等人，J.Histochem.Cytochem.52(6):723-33(2004);Tai等人，J.Clin.Invest.115(6):1492-502(2005))。本發(fā)明提供一種對SPARCRNA進行檢測和定量的方法。已知，本領(lǐng)域中有許多方法可用于分離RNA，例如由Chomczynski(美國專利No.5，945，515)或DiMartino等人(Leukemia20(3):426-32(2006))所描述的那些方法。可供選用的其他方式是，可以通過制備含有組織切片的顯微鏡載玻片來分離出適于根據(jù)本發(fā)明進行檢測和定量的形式的RM(例如參見Thomas等人，Clin.Can.Res.6:1140-49(2000))?？梢圆捎帽绢I(lǐng)域已知的任何合適的方法來對SPARCRNA進行檢測和定量，所述方法包括(但不限于)原位雜交(例如參見Thomas等人，Clin.Can.Res.6:1140-49(2000)),RM印跡法(例如參見Wrana等人，Eur.J.Biochem.197:519-28(1991))，實時RT-PCR(例如參見DiMartino等人，Leukemia20(3):426-32(2006))，基于核酸序列的實時擴增技術(shù)(例如參見Landry等人，J.Clin.Microbiol.43(7):3136-9(2005))，微陣列分析(例如參見Tai等人，J.Clin.Invest.115(6):1492-502(2005);DiMartino等人，Leukemia20(3):426-32(2006))，以及它們的組合。本發(fā)明還提供一種用于預(yù)測或確定人或其他哺乳動物腫瘤、或者其他增殖疾病對化療劑或其他抗癌劑所產(chǎn)生的應(yīng)答的方法，其中哺乳動物腫瘤對化療劑所產(chǎn)生的應(yīng)答與SPARC的水平呈正相關(guān)或負相關(guān)。"與SPARC的水平相關(guān)"是指(例如)肺瘤對所給定的化療劑所產(chǎn)生的應(yīng)答與所檢測的SPARC蛋白質(zhì)或RNA的水平之間的互利關(guān)系或互反關(guān)系。換言之，腫瘤所產(chǎn)生的應(yīng)答的質(zhì)量、程度、范圍或水平隨著所檢測的SPARC蛋白質(zhì)或RNA的水平的變化而變化。當腫瘤所產(chǎn)生的應(yīng)答的質(zhì)量、程度、范圍或水平隨著所檢測的SPARC蛋白質(zhì)或RNA的水平的增加而增加時，則呈現(xiàn)"正相關(guān)"。當腫瘤所產(chǎn)生的應(yīng)答的質(zhì)量、程度、范圍或水平隨著所檢測的SPARC蛋白質(zhì)或RNA的水平的增加而降低時，則呈現(xiàn)"負相關(guān)"。腫瘤所產(chǎn)生的應(yīng)答的水平與SPARC蛋白質(zhì)或RM的水平之間的關(guān)系可以呈現(xiàn)出或大致為階躍函數(shù)、線性函數(shù)或?qū)?shù)函數(shù)。此外，本發(fā)明還提供一種通過將所檢測的SPARC蛋白質(zhì)或RM的水平與在已知的參照樣品中所檢測的SPARC蛋白質(zhì)或RNA的水平進行對比，來預(yù)測或確定人或其他哺乳動物腫瘤、或者其他增殖疾病對化療劑或其他抗癌劑所產(chǎn)生的應(yīng)答的方法。所述的這種參照樣品可以為(例如)正常組織或體液?？晒┻x用的其他方式是，所述參照樣品可以為SPARC的水平是已知的腫瘤，對給定的化療劑或其他抗癌劑產(chǎn)生應(yīng)答的腫瘤，對給定的化療劑或其他抗癌劑敏感的腫瘤，對給定的化療劑或其他抗癌劑具有抗性的腫瘤，或它們的組合。此外，經(jīng)預(yù)測的應(yīng)答可以被表征為有效力的或無效力的，這樣可以使用給定的化療劑或者使用可供選用的其他化療劑。這樣，經(jīng)預(yù)測的應(yīng)答可以被表征為由使用一種化療劑所產(chǎn)生的應(yīng)答與使用另一化療劑所產(chǎn)生的應(yīng)答的比率，例如由Abraxane⑧所產(chǎn)生的應(yīng)答與由Taxotere⑧所產(chǎn)生的應(yīng)答的比率。本發(fā)明進一步提供了預(yù)測哺乳動物腫瘤或其他增殖疾病對化療劑或其他抗癌劑所產(chǎn)生的應(yīng)答的方法，該方法包括以下步驟(a)從哺乳動物中分離出生物樣品；(b)檢測SPARC蛋白質(zhì)或RM在所述生物樣品中的表達；(c)對所述生物樣品中的SPARC蛋白質(zhì)或RNA的量進行定量；以及(d)檢測腫瘤或增殖疾病中Her2的狀態(tài)。本發(fā)明還提供了用化療劑或其他抗癌劑治療哺乳動物肺瘤或其他增殖疾病的方法，該方法包括以下步驟(a)從哺乳動物中分離出生物樣品；(b)檢測SPARC蛋白質(zhì)或RNA在所述生物樣品中的表達；(c)對所述生物樣品中的SPARC蛋白質(zhì)或RNA的量進行定量；(d)檢測腫瘤或增殖疾病中Her2的狀態(tài)；(e)基于腫瘤或增殖疾病中所存在的SPARC蛋白質(zhì)或RNA的水平以及Her2的狀態(tài)，確定是否指示使用化療劑或其他抗癌劑；以及(f)如果指示使用化療劑或其他抗癌劑，則施用治療有效量的化療劑或其他抗癌劑。"確定胂瘤或增殖疾病中Her2的狀態(tài)"是指通過檢測腫瘤、與其他增殖疾病組織的組織、或其他生物樣品中Her2蛋白質(zhì)或RNA的表達來確定腫瘤或其他增殖疾病是否表達了Her2蛋白質(zhì)或RNA;以及對所存在的Her2蛋白質(zhì)或RNA的量進行定量。確定腫瘤或增殖疾病是否表達了Her2蛋白質(zhì)或RNA的合適的方法包括(但不限于)免疫組織化學、蛋白印跡法、ELISA、雙向電泳、質(zhì)譜、原位雜交、RNA擴增、RNA印跡法、微陣列分析或它們的組合。Her2的狀態(tài)可以作為附加因素或作為主要因素來對預(yù)測化療劑或其他抗癌劑所產(chǎn)生的應(yīng)答或確定化療劑或其他抗癌劑是否被表明會產(chǎn)生正相關(guān)關(guān)系或負相關(guān)關(guān)系進行歸因化。例如(但不限于)，Her2不表達可以表明SPARC的水平與應(yīng)答之間為非正相關(guān)的，而Her2表達則可以表明SPARC的水平與應(yīng)答之間是正相關(guān)的。Her2表達與不表達之間的區(qū)別在本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所掌握的技能范圍內(nèi)，并且該區(qū)別可根據(jù)(例如)同時對陽性對照樣品或陰性對照樣品進行操作所得到的結(jié)果來確立，其中所述樣品得自患有腫瘤或其他增殖疾病的哺乳動物。因此，本發(fā)明提供一種用于預(yù)測哺乳動物腫瘤或其他增殖疾病對化療劑或其他抗癌劑所產(chǎn)生的應(yīng)答的試劑盒，該試劑盒包含用于從腫瘤中分離出蛋白質(zhì)或RNA的工具；SPARC蛋白質(zhì)的檢測和定量的工具；對照蛋白質(zhì)或RNA;以及用于預(yù)測腫瘤所產(chǎn)生的應(yīng)答的規(guī)則。這種試劑盒可以用于(例如，但不限于)預(yù)測乳腺癌、卵巢癌、或者頭頸癌對包括結(jié)合了清蛋白的紫杉醇納米顆粒的化療劑所產(chǎn)生的應(yīng)答。用于分離蛋白質(zhì)或RNA的合適的工具以及SPARC蛋白質(zhì)或RM檢測和定量的工具已經(jīng)在本文中有所描述。合適的對照蛋白質(zhì)或RNA應(yīng)該包括陽性對照，例如從患有腫瘤的哺乳動物中得到的腫瘤材料或生物流體，或者從患有腫瘤的哺乳動物所收獲的腫瘤材料或生物流體中分離得到的蛋白質(zhì)或RM。合適的對照蛋白質(zhì)或RNA包括陰性對照，例如從未患有胂瘤的哺乳動物中得到的正常組織或生物流體，或者從未患有腫瘤的哺乳動物所收獲的正常組織或生物流體中分離得到的蛋白質(zhì)或RNA。在所述的試劑盒中的對照物還可以包括用于建立對得自敏感腫瘤和具有抗性的腫瘤的SPARC蛋白質(zhì)或RM或材料進行定量的標準曲線的材料。本發(fā)明的試劑盒還可以包括用于確定腫瘤中的He"的狀態(tài)的工具。本發(fā)明的試劑盒進一步包括用于預(yù)測腫瘤所產(chǎn)生的應(yīng)答的規(guī)則。這種規(guī)則是以根據(jù)按照本文所述的方法測定的SPARC蛋白質(zhì)或RNA的水平而對給定的化療劑所產(chǎn)生的應(yīng)答的預(yù)測為基礎(chǔ)的，其中所述的根據(jù)按照本文所述的方法測定的SPARC蛋白質(zhì)或RNA的水平與預(yù)測或確定對化療劑所產(chǎn)生的應(yīng)答的方法有關(guān)。例如，根據(jù)之前進行的試驗，SPARC蛋白質(zhì)或RNA的特定水平可以指示應(yīng)該使用化療劑。在本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員的技能范圍內(nèi)，無需過多試驗，可以得到充足的數(shù)據(jù)(通過前瞻性研究、回顧性研究或它們的組合)來確定SPARC蛋白質(zhì)或RNA的水平，從而預(yù)測對給定化療劑所產(chǎn)生的應(yīng)答。在下文中，為了方便起見，與清蛋白結(jié)合的包括SPARC在內(nèi)的所有蛋白質(zhì)均是指SPARC。在某些人腫瘤中，SPARC蛋白質(zhì)是造成清蛋白累積的原因。由于清蛋白是一種化療藥物的主要載體，所有SPARC的表達水平預(yù)示了發(fā)生滲透的并被腫瘤保留的化療藥物的量。因此，SPARC的表達水平預(yù)示了腫瘤對化療所產(chǎn)生的應(yīng)答。根據(jù)本發(fā)明的方法，可以從所關(guān)注的哺乳動物中分離出任何合適的生物樣品。優(yōu)選的是，所述的生物樣品通過諸如活組織檢查從腫瘤中分離?？晒┻x用的其他方式是，所述的生物樣品可以從哺乳動物的體液中分離得到，例如包括腦脊髓液、血液、血漿、血清或尿。用于分離生物樣品的技術(shù)和方法對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是已知的。在本發(fā)明的方法中，可以使用任何適合的藥學活性劑(例如與SPARC識別基團偶聯(lián)的化療劑)，只要該活性劑的轉(zhuǎn)運或結(jié)合需要清蛋白即可。合適的活性劑包括(但不限于)酪氨酸激酶抑制劑(染料木黃酮)、生物活性劑(tTF中的TNF)、放射性核素(例如，mI、9°Y、mIn、mAt、32P和其他已知的治療用放射性核素)、阿霉素、柄型大環(huán)類抗生素、天冬酰胺酶、爭光霉素、白消安、順鉑、卡鉑、卡莫司汀、卡培他濱、苯丁酸氮芥、阿糖胞苷、環(huán)磷酰胺、喜樹堿、達卡巴*、放線菌素D、道諾霉素、右雷佐生、多西他賽、亞德里亞霉素、依托泊苷、埃博霉素、氟尿苷、氟達拉濱、氟尿嘧啶、吉西他濱、羥基脲、依達比星、異環(huán)磷酰胺、伊立替康、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、巰基噪呤、美法侖(meplhalan)、甲氨蝶齡、雷帕霉素(西羅莫司)及其衍生物、絲裂霉素、米托坦、米托蒽醌、亞硝基脲、紫杉醇、帕米磷酸二鈉、噴司他丁、普卡霉素、曱基節(jié)肼、利妥昔單抗、鏈脲佐菌素、替尼泊甙、硫鳥嘌呤、噻替派、紫杉烷類、長春堿、長春新堿、酒石酸長春瑞賓、紫杉烷類、考布他汀(combretastatins)、替斯利得、反鉑、血管粑向劑、抗血管內(nèi)皮生長因子化合物("抗VEGF")、抗外皮生長因子受體化合物("抗EGFR")、5-氟尿嘧啶、及其衍生物。此外，所述的藥學活性劑可以為毒素，例如蓖麻蛋白A、放射性核素、抗體本身的Fc片段、單鏈抗體、Fab片度、雙功能抗體等。所述的選自上述物質(zhì)中的藥學活性劑可以識別SPARC并與其結(jié)合，或者所述的藥學活性劑適于與識別SPARC的SPARC識別基團(例如包括蛋白質(zhì)或非蛋白質(zhì)、抗體、抗體本身的Fc片段、單鏈抗體、Fab片段、雙功能抗體、肽或其他非蛋白質(zhì)類小分子)結(jié)合。根據(jù)本發(fā)明可以給藥1個或多個劑量的l種或多種化療劑。在本發(fā)明的方法中使用的化療劑的種類和數(shù)量將取決于用于特定腫瘤類型的標準的化療療法。換言之，當按照慣例使用單一的化療劑來治療特定的癌癥時，可以按照慣例使用化療劑的組合來治療另一種癌癥。用于將合適的治療劑、化療劑、放射性核素等與抗體或其片段偶聯(lián)或結(jié)合的方法在本領(lǐng)域中被廣泛描述。用于本發(fā)明中的疾病包括增殖的異常狀態(tài)、組織重塑、增生、在任何身體組織中的過大傷口的愈合，其中所述的身體組織包括軟組織、連接組織、骨、實體器官、血管等。可使用本發(fā)明的組合物進行治療或診斷的疾病的實例包括癌癥、糖尿病、其他視網(wǎng)膜病、發(fā)炎、關(guān)節(jié)炎、血管或人工血管移植或血管內(nèi)支架中的再狹窄等。所述的待檢測的肺瘤的類型(其對化療產(chǎn)生的應(yīng)答是可預(yù)測或確定的，并且是可以根據(jù)本發(fā)明進行治療的)通常是在人和哺乳動物中發(fā)現(xiàn)的那些類型。所述胂瘤還可以由接種產(chǎn)生，例如在實驗室動物中。在人和其他動物的條件下可以遭遇許多類型和形式的腫瘤，并且無意于將本發(fā)明方法的應(yīng)用限定于任何具體的腫瘤類型或種類。如公知的那樣，肺瘤包括組織的異常團塊，其由不受控的且進行性的細胞分化所導(dǎo)致，并且通常還稱為"贅生物"。本發(fā)明的方法例如可用于人的腫瘤細胞及相關(guān)的基質(zhì)細胞、實體腫瘤以及軟組織相關(guān)腫瘤(例如軟組織癌)。肺瘤或癌可以位于口腔和咽部、消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、骨和關(guān)節(jié)(例如骨轉(zhuǎn)移)、軟骨、皮膚(例如黑素瘤)、乳腺、生殖系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、眼和眼眶、腦和中樞神經(jīng)系統(tǒng)(例如神經(jīng)膠質(zhì)瘤)、或內(nèi)分泌系統(tǒng)(例如甲狀腺)，并且不必限于原發(fā)性腫瘤或癌。與口腔有關(guān)的組織包括(但不限于)舌頭和嘴的組織。癌可以在消化系統(tǒng)的組織中產(chǎn)生，所述消化系統(tǒng)包括(例如)食道、胃、小腸、結(jié)腸、直腸、肛門、肝臟、膽嚢和胰腺。呼吸系統(tǒng)的癌可以影響喉、肺和支氣管，并且包括(例如)非小細胞肺癌。腫瘤可以在宮頸、子宮體、卵巢、外陰、陰道、前列腺、睪丸和陰莖(上述器官構(gòu)成了雄性和雌雄的生殖系統(tǒng))、以及膀胱、腎臟、腎盂和輸尿管(上述器官構(gòu)成了泌尿系統(tǒng))處產(chǎn)生。腫瘤或癌可以位于頭和/或頸部(例如喉癌和副曱狀腺癌)。腫瘤和癌還可以位于造血系統(tǒng)或淋巴系統(tǒng)中，并且包括(例如)淋巴瘤(例如霍奇金疾病和非霍奇金淋巴瘤)、多發(fā)性骨髓瘤、或白血病(例如急性淋巴細胞白血病、慢性淋巴細胞白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病等)。優(yōu)選的是，所述腫瘤位于膀胱、肝臟、卵巢、腎、腸、腦或乳腺。SPARC蛋白質(zhì)與多種配體具有親和性。因此，將治療劑遞送至疾病位置處的本發(fā)明的方法是基于這樣的發(fā)現(xiàn)而進行的，所述發(fā)現(xiàn)為對SPARC具有親和性的化合物或配體(包括清蛋白)可以將治療藥物遞送至疾病位置處，而兒乎不或完全不遞送到正常組織中。本發(fā)明還提供一種將治療組合物由血管穿過內(nèi)皮屏障遞送至腫瘤間質(zhì)中的方法。抗體治療和化療中的主要障礙是穿過內(nèi)皮屏障遷移至腫瘤間質(zhì)中。清蛋白利用清蛋白受體轉(zhuǎn)運機制而穿過內(nèi)皮屏障。這種轉(zhuǎn)運機制可以與文獻(gp60和清蛋白激活蛋白(albondin))所報告的那些機制相同，或為其他未被發(fā)現(xiàn)的機制。之前已經(jīng)報告，背附在清蛋白上的治療劑顯示出被腫瘤吸收的程度增強(Desai，N.etal.Increasedendothelialtranscytosisofnanoparticlealbumin-boundpaclitaxel(ABI-007)byendothelialgp60receptors:apathwayinhibitedbyTaxol,27thAnnualSanAntonioBreastCancerSymposium(SABCS)(2004)，abstract#1071)。此外，利用生理學上的清蛋白轉(zhuǎn)運機制可以使穿過內(nèi)皮屏障的遷移程度增強(Schnitzer，J.E.;Oh，P.J.Biol.Chem.269，6072-6082(1994))。對于小分子而言，可以進行改性，這樣可以增加藥物對清蛋白的親和性。對于小分子配制物而言，可以除去阻止藥物與清蛋白結(jié)合的溶劑?？晒┻x用的其他方式是，所述的小分子可以與清蛋白、針對清蛋白的抗體、針對清蛋白的抗體片段或清蛋白受體的配體連接，這將在下文中描述。對于諸如蛋白質(zhì)、抗體或其片段的生物分子而言，可以用清蛋白結(jié)合性肽來改造生物學性質(zhì)，使得生物學性質(zhì)表現(xiàn)為對清蛋白具有親和性。所述的清蛋白結(jié)合性肽可以為清蛋白結(jié)合性序列、針對清蛋白的抗體或其抗體片段、針對清蛋白栽體的抗體或其片段(例如gp60/清蛋白激活蛋白/清除劑受體/或TGF-p受體)、針對在細胞膜穴樣內(nèi)陷中發(fā)現(xiàn)的任何蛋白質(zhì)的抗體、或清蛋白的轉(zhuǎn)運物質(zhì)。本發(fā)明還考慮了抗體或其合適的片段(其被制備成對SPARC具有1價而對跨內(nèi)皮轉(zhuǎn)運的效應(yīng)器具有其他價的嵌合體，例如gp60/清蛋白激活蛋白/清除劑受體/或TGF-P受體)、或針對在內(nèi)皮細胞的細胞膜穴樣內(nèi)陷中發(fā)現(xiàn)的任何蛋白質(zhì)的抗體或其合適的片段。本發(fā)明還提供一種通過由SPARC抗體引起的補體結(jié)合和/或細胞介導(dǎo)的克疫應(yīng)答的募集來破壞SPARC表達組織(例如，腫瘤和再狹窄(restenotic)組織)的方法。在這種情況下，與Rituxan(即，一種抗CD20的抗體)類似，效應(yīng)器部分為Fc片段，其可以以直接破壞SPARC表達細胞的方式來調(diào)節(jié)補體活性，或者以通過細胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答來導(dǎo)致所述組織被破壞的方式募集針對SPARC表達組織的免疫細胞。本發(fā)明還提供一種利用針對SPARC的中和抗體來抑制SPARC的活性的方法。所述的中和抗體具有阻斷體內(nèi)SPARC與其效應(yīng)器相互作用的能力。例如，中和抗體可以阻斷SPARC與細胞表面成分的相互作用或SPARC與其天然配體(例如清蛋白、生長因子和0&2+)的結(jié)合。本發(fā)明還提供一種確定人或其他哺乳動物腫瘤對抗SPARC的治療產(chǎn)生的應(yīng)答的方法。所述方法包括以下步驟(a)從人體中分離生物樣品；(b)檢測SPARC蛋白質(zhì)在所述生物樣品中的表達；以及(c)對所述生物樣品中的SPARC蛋白質(zhì)的量進行定量。由于抗SPARC的治療依賴于SPARC抗體與疾病組織中SPARC的結(jié)合，所以疾病組織中存在的SPARC是活性所必需的。本發(fā)明進一步提供與SPARC識別基團(例如上文所述的抗體或其片段)結(jié)合的一種或多種診斷劑的使用方法。所述的診斷劑包括放射性同位素或放射性核素、MRI造影劑、X射線造影劑、超聲波造影劑和PET造影劑。用于結(jié)合的方法是本領(lǐng)域已知的。采用本領(lǐng)域已知的任何合適的方法來檢測樣品中SPARC蛋白質(zhì)的表達，并對其進行定量。蛋白質(zhì)檢測和定量的合適的方法包括蛋白質(zhì)印跡法、酶聯(lián)免疫吸附檢測法(ELISA)、銀染色、BCA檢測法(Smith等人，Anal.Biochem.，750,76-85(1985))、Lowry蛋白質(zhì)檢檢測法(例如Lowry等人，J.Biol.Chem.，193，265-275(1951)所述)(其為基于蛋白質(zhì)-銅絡(luò)合物的比色測定)、以及Bradford蛋白質(zhì)檢驗(例如Bradford等人，Anal.Biochem.，72，248(1976)所述)(其取決于在蛋白質(zhì)結(jié)合時考馬斯亮藍G250的吸收變化)?？梢圆捎萌魏吻笆鎏幚矸椒▉矸治瞿[瘤活組織，或者可以采用抗SPARC的抗體(單克隆或多克隆)與合適的可視系統(tǒng)(即，HRP底物和結(jié)合HRP的第二抗體)結(jié)合通過免疫組織化學來分析胂瘤活組織。在本發(fā)明的方法中可以使用針對SPARC的任何合適的抗體，只要該抗體展現(xiàn)出可與SPARC特異性的結(jié)合即可。所述抗體可以為單克隆的或多克隆的，并且可以通過使動物免疫或者通過重組DNA技術(shù)(例如嗟菌體展示以及體外突變形成或合成抗體重鏈和輕鏈基因的可變區(qū))來制備。多克隆抗體包括(但不限于)人抗體、以及由諸如禽類(例如雞)、嚙齒動物(例如大鼠、小鼠、倉鼠、豚鼠)、牛、山羊、綿羊、兔等之類的動物衍生的人源化抗體。單克隆抗體包括由單一克隆的抗體產(chǎn)生細胞得到的抗體，其中所述的單一克隆的抗體產(chǎn)生細胞包括(但不限于)人細胞，以及由其他種類的動物(例如雞、兔、大鼠、小鼠、倉鼠、豚鼠、牛、山羊、綿羊等)細胞得到的抗體。合成的抗體包括釆用重組DNA技術(shù)通過對重鏈和輕鏈基因的可變區(qū)進行基因工程操作而制備得到的抗體。合成的抗體還包括具有SPARC結(jié)合活性的化學合成的抗體片段、或由噬菌體展示或類似的技術(shù)得到的抗體。在人類使用的情況下，為了避免免疫原性和免疫應(yīng)答的產(chǎn)生，優(yōu)選的是4吏用人源化的抗SPARC的抗體或諸如Fab'、Fab或Fab2之類的合適的片段?；蛟S可以使用(例如)以下建立的方法中的一種方法來制備人源化的抗體或其片段1)可以用其可變CDR區(qū)被針對SPARC的抗體的可變CDR區(qū)替代的人IgG主鏈來構(gòu)建人源化的抗體，其中所述的重鏈和輕鏈在分開的啟動子下單獨表達，或者在具有IRES序列的同一啟動子下共表達；2)可以用被改造成具有人免疫系統(tǒng)的小鼠產(chǎn)生針對SPARC的人源化的單克隆抗體；3)可以用噬菌粒(M13、A大腸桿菌噬菌體、或任何能夠在表面上存在的噬菌體系)產(chǎn)生針對SPARC的人源化的抗體。為了構(gòu)建全長的抗體，可以將所述的可變區(qū)轉(zhuǎn)移到重鏈和輕鏈的CDR中。重鏈和輕鏈在諸如CHO、293或人髓細胞之類的哺乳動物細胞中共表達會產(chǎn)生全長的抗體。類似的是，可以采用良好建立的方法制備Fab'、Fab或Fab2片段、以及單鏈抗體。此外，針對SPARC的抗體不限于整個抗體或保留有SPARC結(jié)合位點的抗體片段(例如Fab和Fab2)。此外，所述抗體不限于任何一類抗體，例如IgM、IgA、IgG、IgE、IgD和IgY。此外，所述抗體不限于二價抗體、一價抗體或?qū)PARC具有1價而對諸如tTF或蓖麻蛋白A之類的效應(yīng)器具有其他價的嵌合體。人源化的抗體不限于IgG。可以采用相同的技術(shù)制備所有其他種類的抗體，例如IgE、IgA、IgD和IgM，胞毒性(ADCC)活性及補體依賴性細胞毒性(CDC)活性。通過有限的蛋白質(zhì)水解可以制備抗體的功能片段。這些片段可以是一價的(例如FaM)或二價的(例如Fab2)。所述片段還可以以單鏈scFv或雙功能抗體的形式在大腸桿菌中合成。本發(fā)明進一步提供一種組合物，該組合物含有能夠直接發(fā)揮其藥學作用的藥學活性劑或者與能夠結(jié)合SPARC(或其他清蛋白結(jié)合性部分)的化合物偶聯(lián)的藥學活性劑，以及可藥用的栽體?？梢詾樗幬锝M合物的遞送劑包括與SPARC識別基團偶聯(lián)的藥學活性劑，該藥學活性劑以一定的量向諸如人之類的哺乳動物施用，使得治療有效量的藥學活性劑被遞送給所述的哺乳動物。本發(fā)明還提供一種將化學治療劑遞送至哺乳動物中的腫瘤處的方法。所述方法包括向人或其他哺乳動物施用治療有效量的藥物組合物，其中所述的藥物組合物包含與能夠結(jié)合SPARC蛋白質(zhì)的化合物或配體偶聯(lián)的化療劑，以及可藥用的載體。在此列出的與本發(fā)明的其他實施方案相關(guān)的化療劑、胂瘤、哺乳動物和多種成分的描述還分別適用于之前所述的將化療劑遞送至胂瘤處的方法的相同的方面。優(yōu)選的是，所述的藥物組合物不包含50%以上的納米顆粒形式的治療劑。更優(yōu)選的是，所述藥物組合物不包含10%以上的納米顆粒形式的治療劑。甚至更優(yōu)選的是，所述藥物組合物不包含5%以上的、或4%以上的或3%以上的納米顆粒形式的治療劑。在更優(yōu)選的實施方案中，所述的藥物組合物不包含2%以上的、或1%以上的納米顆粒形式的治療劑。最優(yōu)選的是，所述的藥物組合物不包含任何納米顆粒形式的治療劑。本發(fā)明還提供一種將化療劑遞送至人或其他哺乳動物的腫瘤處的方法。所述方法包括向人或其他哺乳動物施用治療有效量的遞送劑，例如藥物組合物，其中所述的遞送劑(例如藥物組合物)包含與SPARC識別基團偶聯(lián)的化療劑。例如，所述的化療劑可以是與諸如識別SPARC蛋白質(zhì)的抗體之類的SPARC識別基團或單獨的SPARC抗體偶聯(lián)。所述的藥物組合物優(yōu)選包含與SPARC識別基團偶聯(lián)的化療劑、以及可藥用的載體。在此列出的與本發(fā)明的其他實施方案相關(guān)的化療劑、胂瘤、哺乳動物和多種成分的描述還分別適用于之前所述的將化療劑遞送至肺瘤處的方法的相同的方面。在其他實施方案中，本發(fā)明提供一種將藥物活性劑以SPARC識別基團的方式遞送至疾病位置的方法，其中所述的疾病可表征為在表達另一清蛋白結(jié)合性蛋白質(zhì)或標志物的人或其他動物中SPARC或所述的另一清蛋白結(jié)合性蛋白或標志物過表達。所述的這種疾病包括增殖的異常狀態(tài)、組織重塑、增生、在任何身體組織(例如軟組織、連接組織、骨、實體器官、血管等)中的過大傷口的愈合。可以通過施用藥物組合物來治療或診斷的疾病的實例包括癌癥、糖尿病、其他視網(wǎng)膜病、發(fā)炎、關(guān)節(jié)炎、血管或人工血管移植或血管內(nèi)支架中的再狹窄等，其中所述的藥物組合物包含與能夠結(jié)合SPARC蛋白質(zhì)(或另一清蛋白結(jié)合性蛋白質(zhì))的化合物或配體偶聯(lián)的治療劑。在此列出的與本發(fā)明的其他實施方案相關(guān)的藥物活性劑、腫瘤、哺乳動物和多種成分的描述還分別適用于之前所述的遞送藥物活性劑的方法的相同的方面。在其他實施方案中，本發(fā)明提供一種將藥物活性劑(例如單獨的SPARC抗體或者與SPARC識別基團結(jié)合的化療劑，例如SPARC抗體、放射性標記的SPARC抗體等)遞送至疾病位置的方法，其中所述的疾病可表征為SPARC在表達所述蛋白質(zhì)或標志物的人或其他動物中是過表達的。所述的這種疾病包括增殖的異常狀態(tài)、組織重塑、增生、在任何身體組織(例如軟組織、連接組織、骨、實體器官、血管等)中的過大傷口的愈合。可以通過施用藥物組合物來治療或診斷的疾病的實例包括癌癥、糖尿病、其他視網(wǎng)膜病、發(fā)炎、關(guān)節(jié)炎、血管或人工血管移植或血管內(nèi)支架中的再狹窄等，其中所述的藥物組合物包含抗SPARC的治療劑。在此列出的與本發(fā)明的其他實施方案相關(guān)的藥物活性劑、腫瘤、哺乳動物和多種成分的描述還分別適用于之前所述的遞送藥物活性劑的方法的相同的方面。在其他實施方案中，本發(fā)明的方法包括向哺乳動物施用治療有效量的藥物組合物，所述的藥物組合物包含與能夠結(jié)合SPARC蛋白質(zhì)的化合物或配體偶聯(lián)的化療劑?？梢圆捎萌魏魏线m的方法使所述的化療劑與所述的能夠結(jié)合SPARC蛋白質(zhì)的化合物或配體偶聯(lián)。優(yōu)選的是，所述的化療劑通過共價鍵(例如二硫鍵)與所述的化合物化學偶聯(lián)。本發(fā)明還提供一種方法，該方法包括向哺乳動物施用治療有效量的藥物組合物，其中所述的藥物組合物包含與SPARC識別基團偶聯(lián)的化療劑或放射性元素。所述的化療劑或放射性試劑可以采用任何合適的方法與識別SPARC的抗體偶聯(lián)。優(yōu)選的是，所述的化療劑可以通過共價鍵(例如二硫鍵)與所述的化合物化學偶聯(lián)。優(yōu)選的是，本發(fā)明方法中使用的化合物或配體能夠結(jié)合SPARC蛋白質(zhì)。在本發(fā)明優(yōu)選的實施方案中，所述的化合物為結(jié)合SPARC蛋白質(zhì)的配體。合適的配體的實例包括鈣離子(Ca2+)、銅離子(Cu2+)、鐵離.子(Fe2+)、血小板衍生的生長因子(PDGF)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、膠原蛋白(例如膠原蛋白I、膠原蛋白II、膠原蛋白III、膠原蛋白IV、膠原蛋白V和膠原蛋白IX)、玻連蛋白、血小板反應(yīng)蛋白1、內(nèi)皮細胞、血小板、清蛋白和幾磷灰石陽離子。在本發(fā)明另一優(yōu)選的實施方案中，所述的化合物為小分子。術(shù)語"小分子"是指分子量低于約600的任何分子。合適的小分子的實例包括蛋白質(zhì)、核酸、碳水化合物、脂、輔酶(例如維生素)、抗原、激素和神經(jīng)傳遞素。優(yōu)選的是，所述的小分子為化學品(例如有機化學品或無機化學品)、肽、模擬肽、蛋白質(zhì)或碳水化合物。在本發(fā)明另一優(yōu)選的實施方案中，所述的化合物是指SPARC蛋白質(zhì)的抗體。在本發(fā)明的方法中，可以使用任何與SPARC蛋白質(zhì)結(jié)合的合適的抗體或其片段。在幾乎所有的癌癥種類中都已經(jīng)證實了SPARC在腫瘤組織中的表達。已經(jīng)有證據(jù)表明，腫瘤組織中SPARC的加工可能得自于SPARC在腫瘤中的表達或者由基質(zhì)細胞衍生。腫瘤的SPARC表現(xiàn)型可以通過給予外源SPARC而從SPARC陰性轉(zhuǎn)變?yōu)镾PARC陽性。因此，SPARC陽性的腫瘤于是會變得對化療劑敏感。可供選用的其他方式是，SPARC會被放射性標記或與多種毒素結(jié)合，從而賦予其直接或間接殺滅肺瘤的能力。可以采用已知的技術(shù)來合成和純化SPARC。通過將SPARC結(jié)構(gòu)基因/cDNA置于強啟動子/轉(zhuǎn)錄起始位點的控制下并將載體轉(zhuǎn)染到哺乳動物的細胞中、從而驅(qū)動SPARC在這些細胞中的表達來形成表達外源SPARC的細胞?？晒┻x用的其他方式是，可以使用諸如腺病毒之類的桿狀病毒或其他病毒來表達SPARC。由所述的這些細胞表達的SPARC可以通過諸如離子交換色鐠、大小排阻層析或C18層析之類的傳統(tǒng)的純化方法來純化。純化的SPARC可以在含有防腐劑的生理鹽水中配制形成，并可以以靜脈內(nèi)的方式、以氣霧劑的形式、以皮下注射的方式或其他方法來施用。本發(fā)明還提供一種將化療劑遞送至哺乳動物的腫瘤處的方法。所述方法包括向哺乳動物施用治療有效量的藥物組合物，其中所述的藥物組合物包含與能夠結(jié)合清蛋白的SPARC蛋白質(zhì)偶聯(lián)的化療劑，以及可藥用的載體。在此列出的與本發(fā)明的其他實施方案相關(guān)的化療劑、遞送至腫瘤處的方法的相同的方面。對于體內(nèi)應(yīng)用而言，與能夠結(jié)合SPARC蛋白質(zhì)的化合物或配體偶聯(lián)的化療劑理想地是被配制成含有生理學可接受的載體的藥物組合物。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，可以使用任何合適的生理學可接受的栽體，并且這種載體在本領(lǐng)域中是公知的。對于體內(nèi)應(yīng)用而言，所述的抗SPARC的治療劑理想地是被配制成含有生理學可接受的載體的藥物組合物。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，可以使用任何合適的生理學可接受的載體，并且這種載體在本領(lǐng)域中是公知的。所述的載體通常為液體，但是也可以為固體，或者為液體成分和固體成分的組合。所述的載體理想地是生理學可接受的(例如藥用的或可藥用的)栽體(例如賦形劑或稀釋劑)。生理學可接受的載體是公知的并且是易于獲得的。通過目標組織和/或細胞的定位情況以及用于對所述組合物進行給藥的具體方法可以至少部分地確定載體的選擇。通常，可以將所述的組合物制備成液體溶液形式或懸浮液形式的注射劑；還可以制備成這樣的固體形式，該固體形式適于在注射前通過加入液體而形成溶液或懸浮液來進行使用；并且所得的制備物還可以被乳化。適于注射使用的所述的藥物配制物包括無菌水溶液或分散液；含有已知的蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑和蛋白保護劑的配制物；含有麻油、花生油或含水丙二醇的配制物；以及用于臨時制備無菌注射溶液或分散液的無菌粉末。在所有的情況下，所述的配制物必需是無菌的，并且其流動性必需達到易于注射的程度。所述的配制物在生產(chǎn)及儲存的條件下必需是穩(wěn)定的，并且必需受到保護，以防止微生物(例如細菌和真菌)的污染行為。所述的活性化合物可以通過在水中與諸如氧化述的活性化合物以游離堿或可藥用的鹽的形式存在。還可以在甘油、液態(tài)聚乙二醇、甘油與液態(tài)聚乙二醇的混合物以及油中制備分散液。在儲存及使用的通常條件下，所述的這些制備物含有防腐劑，以抑制微生物的生長。與結(jié)合SPARC蛋白質(zhì)的化合物或配體偶聯(lián)的化療劑(例如抗SPARC的治療劑)可以被配制成中性或鹽形式的組合物?？伤幱玫柠}包括酸加成鹽(其由蛋白質(zhì)的游離氨基形成)，該酸加成鹽是使用無機酸(例如鹽酸或磷酸)或有機酸(例如乙酸、草酸、酒石酸、杏仁酸等)形成的。使用游離羧基形成的鹽還可以得自無機堿(例如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨、氫氧化鈣或氫氧化鐵)以及有機堿(例如異丙胺、三甲胺、組氨酸、普魯卡因等)。所述的組合物可以進一步含有任何其他合適的成分，以特別用于增強所述組合物的穩(wěn)定性和/或其最終用途。因此，存在著種類廣泛的本發(fā)明組合物的合適的配制物。以下所述的配制物和方法僅是示例性的，決不會限定本發(fā)明。適于吸入給藥的配制物包括氣霧劑配制物?？梢詫⒃摎忪F劑配制物放置于可接受壓力的推進劑中，所述的推進劑例如有二氯二氟甲烷、丙烷、氮等。它們還可以被配制成未加壓的制備物，從而通過噴霧器或霧化器進行遞送。適于腸胃外給藥的配制物包括含水的和不含水的等張無菌注射液，該注射液可以含有抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑和溶質(zhì)，這些物質(zhì)可以提供與預(yù)接受者的血液等張的配制物；以及含水的和不含水的無菌懸浮液，該懸浮液可以含有懸浮劑、增溶劑、增稠劑、穩(wěn)定劑和防腐劑。所述的配制物可以在單位劑量或多劑量的密封容器(例如安瓿和小瓶)中存放，并且可以儲存在冷凍干燥(凍干)的條件下，因此，對于注射劑而言，僅需要在使用前即刻加入無菌液態(tài)賦形劑(例如水)?？梢杂芍八龅臒o菌粉末、顆粒和片劑制備臨時注射液和懸浮液。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，與結(jié)合SPARC蛋白質(zhì)的化合物偶聯(lián)的化療劑(例如抗SPARC治療劑)被配制成注射劑(例如腸胃外給藥)。在這點上，所述的配制物理想地是適于腫瘤內(nèi)給藥，但是可以被配制用于靜脈注射、腹膜內(nèi)注射、皮下注射等。適于肛門給藥的配制物可以通過將活性組分與諸如乳化用堿或水溶性堿之類的多種堿混合來制備成栓劑。適于陰道給藥的配制物可以以陰道栓劑、棉塞、膏、凝膠、糊劑、沫劑或噴霧配制物的形式存在，這些配制物除了含有所述的活性組分外，還含有本領(lǐng)域已知合適的那些載體。此外，所述的組合物可以包含其他治療劑或生物活性劑。例如，可以存在用于治療特定的適應(yīng)癥的治療因子?？刂瓢l(fā)炎的因子(例如布洛芬或類固醇)可以是所述組合物中的一部分，從而減輕與體內(nèi)給藥所述的藥物組合物有關(guān)的腫脹和發(fā)炎、以及生理痛苦。以下實施例將進一步說明本發(fā)明，但是無論如何不應(yīng)該被解釋成限定了本發(fā)明的范圍。實施例1本實施例對SPARC與清蛋白在MX-1腫瘤異種移植物中的協(xié)同定位進行說明。在3期轉(zhuǎn)移性乳腺癌試驗結(jié)束之后，與Taxol(TAX)相比，紫杉醇清蛋白納米顆粒(Abraxane,ABX或ABI-O07)顯示出具有改善的應(yīng)答率(33%與19%,p<0.0001)(例如參見O'Shaughnessy，SABCS)。對于ABX與TAX,最近證實了清蛋白介導(dǎo)的紫杉醇(P)跨內(nèi)皮轉(zhuǎn)運過程以及紫杉醇在腫瘤內(nèi)增加的累積(例如參見Desai，SABCS20(H)。清蛋白結(jié)合至SPARC(例如參見Schnitzer，JBiol.Chem.，269，6072-82(1994))。MX-1腫瘤細胞系得自人乳腺癌。對人MX-1腫瘤異種移植物、人原發(fā)性乳腺胂瘤組織(n-141)以及正常的人乳腺組織(n=115)的一系列冷凍切片進行免疫染色，并分別對清蛋白、SPARC(使用抗SPARC的抗體)和小窩蛋白-1的染色情況進行評分(0-4)。此外，將培養(yǎng)的MX-1細胞也用于SPARC的免疫染色。用放射性紫杉醇(P)(20mg/kgIV)制備紫杉醇清蛋白納米顆粒(Abraxane，ABX或ABI-007)和Taxol(TAX)，并將該紫杉醇清蛋白納米顆粒和Taxol用于測定紫杉醇在無胸腺小鼠的正常組織中的生物分布。MX-1腫瘤中的清蛋白染色是集中的，并且與SPARC協(xié)同定位(參見圖3)。小窩蛋白-l染色證實，含有清蛋白的區(qū)域中的血管密度與不含有清蛋白的區(qū)域中的血管密度沒有不同。通過使用抗SPARC的抗體所得的陽性染色結(jié)果證實，MX-1培養(yǎng)細胞表達SPARC。與TAX相比，ABX產(chǎn)生的紫杉醇在正常組織(SPARC為陰性)中的累積顯著減少(p<0.004),占該組織的7/10。與1%正常組織的SPARC染色相比，46%的人原發(fā)性乳腺肺瘤呈現(xiàn)出SPARC染色(分值〉2),(p<0.0001)。在具有50個腫瘤組織的亞組中，SPARC的表達與分期、ER的狀態(tài)或PgR的狀態(tài)無關(guān)；但是在p53為陰性的腫瘤中，SPARC往往高表達。清蛋白與SPARC的協(xié)同定位表明，SPARC通過其清蛋白的結(jié)合活性可以在乳腺腫瘤中起到用于清蛋白結(jié)合的腫瘤內(nèi)靶向的作用。由于ABX中的紫杉醇轉(zhuǎn)運取決于清蛋白(例如參見DesaiSABCS，2003)，所以這解釋了與TAX相比，ABX產(chǎn)生的改善的腫瘤積累。ABX在正常組織中的積累低于TAX在正常組織中的積累，這符合正常組織中不表達SPARC的情況。針對SPARC對患者進行篩選，可以確定患者對ABX更容易產(chǎn)生應(yīng)答。SPARC在所述這些腫瘤中的存在可以用于靶向以及使用抗SPARC的抗體進行治療。實施例2本實施例對SPARC在MX-1腫瘤細胞中的表達進行說明。對MX-l細胞進行蓋片(overslip)上培養(yǎng)，并用采用本領(lǐng)域已知的方法用針對人SPARC的抗體對培養(yǎng)的MX-1細胞進行染色。觀察抗體染色，其證實MX-1表達出SPARC。該結(jié)果表明，在MX-l腫瘤細胞中檢測到的SPARC的表達是MX-1腫瘤細胞分泌SPARC的結(jié)果。與諸如HUVEC(人臍靜脈內(nèi)皮細胞)、HLMVEC(人肺微血管內(nèi)皮細胞)和HMEC(人乳房上皮細胞)之類的正常的初級細胞相比，MX-1腫瘤細胞的染色程度更強。盡管被染色的大部分SPARC是內(nèi)部SPARC,但是可以發(fā)現(xiàn)水平顯著的表面SPARC,這可由共聚焦顯微鏡以及對未滲透細胞進行染色來證實。實施例3本實施例對SPARC蛋白質(zhì)在人乳腺癌細胞中的過表達進行說明。使用得自Cybrdi公司(Gaithersburg，MD)的腫瘤陣列來測定SPARC在人乳腺癌細胞中的表達。所得的分析結(jié)果列于表1中。染色的強度由"陰性"評起，直到4+，其中數(shù)值越大表示過表達的程度越強。與1°/。的正常組織的SPARC染色呈陽性的情況相比，49%的乳腺癌的SPARC染色為陽性(2+及更高)(p<0.0001)。<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>實施例4本實施例對內(nèi)皮細胞受體(gp60)介導(dǎo)的紫杉醇清蛋白納米顆粒(ABI-007)細胞膜穴樣內(nèi)陷的(caveolar)月包吞轉(zhuǎn)運作用進行說明。在III期轉(zhuǎn)移性乳腺癌試驗結(jié)束之后，與Taxol相比，紫杉醇(P)清蛋白納米顆粒(Abraxane，ABX或ABI-007)證實具有改善的應(yīng)答率(33%與19%,p<0.0001)(SABCS，(TShaughnessy等人，2003)。Taxol(TAX)中的Cremophor將P誘陷于原生質(zhì)的微團中，由此減少了細胞內(nèi)各個分隔部分可利用的紫杉醇(例如參見Sparreboom等人，Cancer.Res.,59，1454(1999))。在無胸腺小鼠的研究中顯示，與使用等劑量的TAX相比，使用ABX的小鼠的腫瘤內(nèi)紫杉醇的濃度高出30%-40%(SABCS，Desai等人，2003)。通過特異受體(gp60)介導(dǎo)的細胞膜穴樣內(nèi)陷的胞吞轉(zhuǎn)運作用使清蛋白轉(zhuǎn)運穿過內(nèi)皮細胞(EC)(例如參見John等人，Am.J.Physiol,284，LI87(2001))。假定，ABX中與清蛋白結(jié)合的紫杉醇可以通過gp60的作用轉(zhuǎn)運穿過腫瘤微脈管EC，并且與TAX相比，這種機制對于ABX可能是特別有效的。針對ABX和TAX實施一系列試驗，以便通過人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)和人肺微血管內(nèi)皮細胞(HLMVEC)來評價紫杉醇的結(jié)合和轉(zhuǎn)運。使用熒光標記的紫杉醇(FP)作為探針，并將熒光標記的ABX和TAX與FP相配制，從而探測紫杉醇的結(jié)合以及穿過在Transwell裝置上生長的單層EC的轉(zhuǎn)運。ABX中的紫杉醇與細胞(HUVEC)的結(jié)合比TAX中的高出10倍。與TAX相比，對于HUVEC和HMVEC而言，得自ABX中的紫杉醇穿過單層EC的轉(zhuǎn)運分別增強2-3倍、及2-4倍。所述的轉(zhuǎn)運過程取決于清蛋白。ABX中的紫杉醇的轉(zhuǎn)運受到了所存在的抗SPARC的抗體的抑制，已知抗SPARC的抗體與gp60結(jié)合，而該gp60為細胞膜穴樣內(nèi)陷的清蛋白胞吞轉(zhuǎn)運作用所必需的受體。細胞膜穴樣內(nèi)陷的胞吞轉(zhuǎn)運作用的已知的抑制劑(NEM和P-曱基環(huán)糊精(BMC))還抑制ABX中的紫杉醇穿過單層內(nèi)皮細胞的轉(zhuǎn)運(參見圖4)。對細胞膜穴樣內(nèi)陷的胞吞轉(zhuǎn)運作用的抑制將對ABX中的P的轉(zhuǎn)運降至對TAX中的P的轉(zhuǎn)運的水平。上述結(jié)果表明，ABX中的紫杉醇通過gp60介導(dǎo)的細胞膜穴樣內(nèi)陷的胞吞轉(zhuǎn)運作用而有效轉(zhuǎn)運穿過EC,而TAX中的P主要通過細胞旁路(非細胞膜穴樣內(nèi)陷)機制而顯示出其轉(zhuǎn)運率低2-4倍。上迷途徑可能部分地造成了所看到的ABX中的紫杉醇比TAX中的紫杉醇在腫瘤內(nèi)的濃度升高。TAX中的Cremophor抑制了紫杉醇穿過內(nèi)皮細胞的胞吞轉(zhuǎn)運作用。實施例5本實施例證實了SPARC的過表達與在頭和頸部皮膚鱗癌中^f吏用的結(jié)合了清蛋白的紫杉醇納米顆粒(ABI-007)所產(chǎn)生的高應(yīng)答率的關(guān)系。在對患有頭和頸部(H&N)、以及肛管的鱗狀細胞癌(SCC)的患者進行的I期和II期臨床研究中，分別觀察到對動脈內(nèi)傳遞的結(jié)合了清蛋白的紫杉醇納米顆粒所產(chǎn)生的78%和64%的應(yīng)答率(Abraxane,ABX或ABI-007)(例如參見Damascelli等人，Cancer,92(10)，2592-2602(2001)，andDamascelli等人，AJR，181，253-260(2003))。在對由ABX和Taxol(TAX)在體外所產(chǎn)生的細胞毒性進行比較的過程中，我們觀察到對于ABX(0.004mg/ml)與TAX(0.012jag/ml),鱗狀宮頸癌細胞(A431)系顯示出IC5。s有所改善。對于ABX與TAX,最近證實了清蛋白介導(dǎo)的紫杉醇(P)跨內(nèi)細胞膜穴樣內(nèi)陷的跨內(nèi)皮轉(zhuǎn)運過程以及P在肺瘤內(nèi)增加的累積(例如參見Desai,SABCS2003)。用腫瘤及正常組織陣列對人H&N肺瘤組織(n=119)和正常的人H&N組織(n=15)進行免疫染色，并對SPARC染色進行評分(0-4)。用兔的抗SPARC的多克隆抗體進行免疫染色。在新的、劑量增加的I期研究中(在30分鐘內(nèi)以IV方式給予ABX，q3w),對亞組中患有頭頸癌的患者(n-3)對ABX所產(chǎn)生的應(yīng)答進行分析。在60%(72/119)的H&N肺瘤及0%(0/15)的正常組織中，SPARC發(fā)生過表達(分值>2)(P<0.0001)。在所述的I期研究中，在以135mg/m2(1pt)和225mg/m2(1pt)的劑量水平治療2個周期之后，2/3的H&N患者產(chǎn)生了部分應(yīng)答(PR)。對三分之一的患者以260mg/m2的劑量進行研究。在60%的H&N鱗狀腫瘤中，發(fā)現(xiàn)SPARC過表達。由于結(jié)合了清蛋白的紫杉醇與所述腫瘤中表達的SPARC相結(jié)合，所以所述現(xiàn)象可以解釋在之前的鱗狀H&N癌癥中所見的高的ABX單一試劑的活性。在新的I期研究中，2/3的鱗狀H&N腫瘤患者發(fā)生PR。SPARC染色一--------------0-/+1234H&N腫瘤陣列-癌組織171416232029{14%〉(12%)(13%)09%)(17%〉(24%)-正常組織1302000一--------------(87%)(。％)(13%)(0%)(0%)(0%)用腫瘤及正常組織陣列對人H&N腫瘤組織(n=119)和正常的人H&N組織(n=15)進行免疫染色，并對SPARC染色進行評分(0-4)。用兔的抗SPARC的多克隆抗體進行免疫染色。在60%(72/119)的H&N腫瘤及0%(0/15)的正常組織中，SPARC發(fā)生過表達(分值>2)(p<0.0001)。由于結(jié)合了清蛋白的紫杉醇與所述腫瘤中表達的SPARC相結(jié)合，所以所述現(xiàn)象可以解釋之前在鱗狀H&N癌癥中所見的高的ABX單一試劑的活性。在新的、劑量增加的I期研究中(在30分鐘內(nèi)以IV方式給予ABX，q3w),對亞組中患有頭頸癌的患者(n-3)對ABX所產(chǎn)生的應(yīng)答進行分析。在所述的I期研究中，在以135mg/m2(1pt)和225rag/m2(1pt)的劑量水平治療2個周期之后，2/3的H&N患者產(chǎn)生了部分應(yīng)答(PR)。對三分之一的患者以260mg/m2的劑量進行研究。對得自這些患者的腫瘤組織進行針對SPARC的染色，并且產(chǎn)生應(yīng)答的患者顯示出強的SPARC過表達。在另一采用動脈內(nèi)遞送ABX來治療54位患有頭和頸部鱗狀細胞癌患者的n期臨床研究中，發(fā)現(xiàn)總體應(yīng)答率為78%。用得自上述研究中的、接受動脈內(nèi)ABX的16位患者的癌活組織，進行SPARC表達以及與臨床應(yīng)答的相關(guān)性的評價。在0-4(0-未染色，4=強陽性)的等級上，對使用抗SPARC的多克隆抗體(R&DSystems,Minneapolis,MN，USA)的染色情況進行評分。將呈陽性的SPARC表達確定為染色程度〉2，而將呈陰性的SPARC表達確定為染色程度<2+。與ABX的非應(yīng)答者(2/5，40%)相比，ABX的應(yīng)答者(10/11，91%)表現(xiàn)為SPARC表達的發(fā)生率更高(p=0.06)。與SPARC呈陰性的患者(1/4=25%)相比，SPARC呈陽性的患者(10/12=83%)的ABX應(yīng)答率明顯更高(p=0.06)。此外，與所述研究(包括使用ABX或其他化療劑治療的患者)中的總體應(yīng)答率相比，SPARC呈陰性的患者表現(xiàn)為應(yīng)答率明顯更低(1/4，25%與42/54，78%;p<0.05)。實施例6本實施例對標記的清蛋白進入MX-1腫瘤細胞中的內(nèi)化過程以及標記的清蛋白在MX-1細胞內(nèi)與胞內(nèi)表達的SPARC的協(xié)同定位進行說明。對MX-1細胞進行蓋片培養(yǎng)，并用合適的試劑進行滲透。將培養(yǎng)的細胞暴露于熒光清蛋白，并在洗滌后，將該細胞暴露于SPARC抗體。然后，將所得細胞暴露于與所述清蛋白具有不同的熒光標記物的第二抗體。另人驚奇觀察到，標記的清蛋白在所述細胞內(nèi)與存在的SPARC協(xié)同定位，從而表明清蛋白被快速地內(nèi)化，并把向胞內(nèi)SPARC。實施例7本實施例證實了與Taxol相比，含有紫杉醇和清蛋白的藥物組合物通過gp60(清蛋白受體)的內(nèi)皮胞吞轉(zhuǎn)運過程增強。^f吏人肺微血管內(nèi)皮細胞(HLMVEC)生長，從而在Transwell裝置上匯合。將濃度為20jug/mL的含有紫杉醇和清蛋白的本發(fā)明的藥物組合物或者將濃度為20jag/mL的含有熒光標記的紫杉醇的Taxol(Flutax)加入到Transwell小室的上室中。使用熒光計連續(xù)監(jiān)測紫杉醇通過胞吞轉(zhuǎn)運作用由上室進入下室中的轉(zhuǎn)運。此外，還使用了只含有Flutax但不含有清蛋白的對照物。含有Flutax的對照物顯示出沒有發(fā)生轉(zhuǎn)運，從而確認了匯合的HLMVEC單層細胞的完整性。在5%(生理學濃度)的HSA存在的條件下，清蛋白紫杉醇組合物中的紫杉醇的轉(zhuǎn)運比Taxol中的紫杉醇的轉(zhuǎn)運更快。清蛋白紫杉醇組合物以及Taxol的轉(zhuǎn)運速率常數(shù)(Kt)分別為1.396h—1和0.03h人清蛋白紫杉醇組合物中紫杉醇轉(zhuǎn)運穿過單層細胞的總量是Taxol中紫杉醇轉(zhuǎn)運穿過單層細胞的3倍。因此，使用清蛋白或其他合適的類似物(包括針對gp60受體或其他內(nèi)皮細胞受體的抗體或片段)可以有助于所需的治療劑穿過內(nèi)皮屏障進入腫瘤間質(zhì)的轉(zhuǎn)運。實施例8本實施例證實了抗SPARC的抗體與SPARC的特異性結(jié)合。通過超聲波降解由HUVEC細胞制備全細胞提取物。采用以下過程分離所需的蛋白質(zhì)進行s5-15%SDS-PAGE,然后轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，并使用針對SPARC的多克隆抗體和針對SPARC的單克隆抗體進行顯現(xiàn)。兩種抗體都與38kDa(其為SPARC的校正分子量)的單一條帶反應(yīng)。當使用相同的方法對MX-1進行分析時，在澄清的細胞裂解物中或膜富集的膜部分中都檢測到SPARC。實施例9本實施例證實了在正常組織中SPARC不表達。使用腫瘤和正常組織陣列對正常人和小鼠的組織進行免疫染色，并對SPARC染色進行評分(0-4)。用兔的抗SPARC的多克隆抗體進行免疫染色。除了食道之外，在其他任何正常組織中，SPARC都不表達。與此類似，除了雌鼠的腎之外，在其他任何正常的小鼠組織中，SPARC都不表達。然而，上述表達可能是由于與SPARC具有同源性的卵泡抑素(follistatin)的存在。在人正常組織中SPARC的表達0/80/90/150/140/100/141/141/140/80/30/90/100/100/105/50/50/50/5小鼠正常組織肝臟0/19腎(M)0/8腎(F)6/8肺0/16肌肉0/20腦0/20心臟0/180/20脾0/20實施例10本實施例證實了Abraxane(結(jié)合了清蛋白的紫杉醇納米顆粒，ABX，，)比Taxotere(與吐溫80和乙醇配制而成的多西他賽，"TAT，，)腸腸臟丸列臟桃巴尾道腺球巢胃結(jié)直肝脾肺腎腦睪前心扁淋闌食胰眼卵優(yōu)異，以及在所測試的Her2呈陽性的異種移植物中對ABX所產(chǎn)生的相關(guān)應(yīng)答與所表達的SPARC呈正相關(guān)。采用鼠的腫瘤異種移植物模型體系來比較ABX與TAT在MX-1人乳腺癌細胞系和LX-1人肺癌細胞系的Her2呈陰性的異種移植物中的效力。在MX-1的研究中，3組中的每一組都使用8只鼠TAT(每周給藥1次并持續(xù)3周，以iv方式給藥)，濃度為15mg/kg;ABX，(每周給藥1次并持續(xù)3周，以iv方式給藥)，濃度為15mg/kg;以及生理鹽水(每周給藥l次并持續(xù)3周，以iv方式給藥)。每周都要獲取每只鼠的體重和肺瘤尺寸，并持續(xù)3周。在LX-1的研究中，3組中的每一組都使用8只鼠TAT(每4天給藥1次并持續(xù)3個周期，以iv方式給藥)，濃度為15rag/kg;ABX(每4天給藥1次并持續(xù)3個周期，以iv方式給藥)，濃度為50mg/kg或120mg/kg;以及生理鹽水(每4天給藥l次并持續(xù)3個周期，以iv方式給藥)。每周都要獲取每只鼠的體重和腫瘤尺寸，并持續(xù)3周。通過免疫組織化學使用抗人Her2的單克隆抗體和抗人SPARC的多克隆抗體來測定異種移植物腫瘤Her2和SPARC的狀態(tài)。采用0-4的等級來對滑片上的染色情況評分，O為陰性，4為強陽性。在MX-1的研究中,等劑量的ABX比TAT更有效力(p<0.0001,ANOVA統(tǒng)計法)(參見圖5A)。對于LX-1細胞，在2個劑量水平上，ABX都比TAT(15mg/kg)更有效力(對于50mg/kg的ABX，p=0.0001;對于120mg/kg的ABX，p<0.0001)(參見圖6A)。但是，通過免疫組織化學，不能得出對ABX所產(chǎn)生的應(yīng)答與SPARC的水平相關(guān)(參見圖7)。在第二個研究中，采用鼠的胂瘤異種移植物模型體系來比較ABX與TAT在3種Her2呈陽性的異種移植物(HT29:人結(jié)腸癌細胞系；PC3:人前列腺癌細胞系；MDA-MB-231:人乳腺癌細胞系)中的效力。將32只小鼠用于各種異種移植物中，其中8只小鼠用15mg/kg的TAT進行治療(每4天給藥l次并持續(xù)3個周期，以iv方式給藥)，8只小鼠用50mg/kg的ABX進行治療(每4天給藥1次并持續(xù)3個周期，以iv方式給藥)，8只小鼠用120mg/kg的ABX進行治療(每4天給藥l次并持續(xù)3個周期，以iv方式給藥)，并且8只對照小鼠用生理鹽水進行治療(每4天給藥l次并持續(xù)3個周期，以iv方式給藥)。在3周中的每1周都要獲取每只鼠的體重和腫瘤尺寸。通過免疫組織化學使用抗人Her2的單克隆抗體和抗人SPARC的多克隆抗體來測定Her2和SPARC的狀態(tài)。采用0-4的等級來對滑片上的染色情況評分，0為陰性，4為強陽性。在HT29的異種移植物中，在2個劑量水平上，ABX都比TAT(15mg/kg)更有效力(對于50mg/kg的ABX，p=0.0057;對于120mg/kg的ABX，p<0.0001)(參見圖8A)。在PC3的異種移植物的情況下，50mg/kg的ABX比TAT(15mg/kg)的效力〗氐(p<0.001)，但是120mg/kg的ABX與TAT(15mg/kg)的效力相等(p=ns)(參見圖9A)，并且毒性更小(重量損失更少，參見圖9B)。最后，在MDA-MB-231的異種移植物的情況下，在2個劑量水平上，ABX都比TAT(15mg/kg)的效力低(分別為p<0.0001和p<0.0001)(參見圖10A)。將5種腫瘤中的Her2和SPARC的狀態(tài)示于圖7A中，并將ABX與TAX的相對效力示于圖7B中。采用15mg/kg的TAT和120mg/kg的ABX來計算相對效力(TAT組腫瘤的體積/ABX組肺瘤的體積)(MX-1細胞系除外，其相對腫瘤效力是釆用15mg/kgTAX和15mg/kgABX來計算的)。在Her2呈陽性的異種移植物(HT29,PC3和MDA-MB-231)中，ABX相對于TAT的效力隨著SPARC表達的增加而增大(參見圖7)。因此，本實施例顯示出，在所采用的模型體系中，在所測驗的5種異種移植物胂瘤中的4種胂瘤中，ABX都比TAT更有效力或者與TAT的效力相等，并且在所測驗的Her2呈陽性的異種移植物中，ABX相對于TAX的效力與SPARC的表達呈正相關(guān)。包括出版物、專利申請和專利在內(nèi)的本文所引用的所有參考文獻都以引用方式并入本文，其程度如同每份參考文獻都4皮單獨且明確地48表明以引用方式并入本文、并如同每份參考文獻都在本文中全部列出一樣。除非文中另外指明或與所述內(nèi)容截然矛盾，否則在用于描述本發(fā)明的上下文(特別是在權(quán)利要求書的上下文)中所使用的詞語"一，，、"該"和"所述"以及類似的指代詞語都應(yīng)該被理解為涵蓋了單數(shù)和復(fù)數(shù)這兩種情況。除非另作說明，否則詞語"包含"、"具有"、"包括"和"含有"都應(yīng)該被理解為是開放式(即，指"包括，但不限于")的詞語。除非文中另外指明，否則本文中表示數(shù)值范圍的敘述方法僅是作為個別地參考落入本發(fā)明范圍內(nèi)的每一個單獨的值的簡單方法，并且每個單獨的值都^皮并入本說明中，如同這些值在本文中被單獨引用一樣。除非文中另外指明或與所述內(nèi)容截然矛盾，否則本文中所描述的所有方法都可以以任何合適的順序?qū)嵤?。除非另有要求，否則任何及所有實施例、或示例性的語言(例如"如")的使用都僅是為了更好地說明本發(fā)明，而不是限定本發(fā)明的范圍。在本說明書中沒有語言能夠被解釋成其指示了任何未被要求保護的要素成為實施本發(fā)明的必要要素。在此已經(jīng)描述了本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，包括用于實施本發(fā)明的發(fā)明人所知的最佳實施方式。這些優(yōu)選的實施方案的變體對于閱讀了以上說明書之后的本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言將變得顯而易見。本發(fā)明人預(yù)計技術(shù)人員能夠合適地使用這些變體，并且本發(fā)明人預(yù)計本發(fā)此，如同適用的法律所允許的那樣，本發(fā)明包括所附權(quán)利要求書中所引用的主題的所有修改方式及等同形式。此外，除非文中另外指明或與所述內(nèi)容截然矛盾，否則在本發(fā)明所有可能的變體中的上述要素的任意組合都嚢括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。權(quán)利要求1.一種用于預(yù)測哺乳動物腫瘤對化療劑或其他抗癌劑所產(chǎn)生的應(yīng)答的方法，該方法包括以下步驟(a)從所述哺乳動物中分離生物樣品；(b)檢測SPARC蛋白質(zhì)或RNA在所述生物樣品中的表達；以及(c)對所述生物樣品中的SPARC蛋白質(zhì)或RNA的量進行定量。2.權(quán)利要求1所述的方法，其進一步包括檢測Her2蛋白質(zhì)或RNA在所述生物樣品中的表達，以及對所述生物樣品中的Her2蛋白質(zhì)或RNA的量進4亍定量。3.權(quán)利要求1-2所述的方法，其中所述的生物樣品是從所迷腫瘤中分離的。4.權(quán)利要求1-3所述的方法，其中所述的生物樣品是從體液中分離的。5.權(quán)利要求4所述的方法，其中所述體液選自腦脊髓液、血液、血漿、血清和尿06.權(quán)利要求1-5所述的方法，其中所述的哺乳動物為人。7.權(quán)利要求3所述的方法，其中相對于正常組織，所述的SPARC蛋白質(zhì)或RNA在所述胂瘤中是過表達的。8.權(quán)利要求1-7所述的方法，其中所述腫瘤選自口腔腫瘤、咽部腫瘤、消化系統(tǒng)腫瘤、呼吸系統(tǒng)腫瘤、骨腫瘤、軟骨性腫瘤、骨轉(zhuǎn)移、肉瘤、皮膚瘤、黑素瘤、乳腺腫瘤、生殖系統(tǒng)腫瘤、尿路腫瘤、眼眶腫瘤、腦和中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、內(nèi)分泌系統(tǒng)腫瘤、甲狀腺腫瘤、食道腫瘤、胃部腫瘤、小腸腫瘤、結(jié)腸腫瘤、直腸腫瘤、肛門胂瘤、肝臟腫瘤、膽嚢腫瘤、胰腺腫瘤、喉部腫瘤、肺部腫瘤、支氣管腫瘤、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、宮頸腫瘤、子宮體腫瘤、卵巢腫瘤、外陰腫瘤、陰道腫瘤、前列腺腫瘤、前列腺癌、睪丸腫瘤、陰莖腫瘤、膀胱腫瘤、腎臟腫瘤、腎盂腫瘤、輸尿管腫瘤、頭和頸部胂瘤、副曱狀腺癌、霍奇金疾病、非霍奇金淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤、白血病、急性淋巴細胞性白血病、慢性淋巴細胞性白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病。9.權(quán)利要求1-8所述的方法，其中所述的化療劑或抗癌劑選自多西他賽、紫杉醇、紫杉烷類、鉑化合物、葉酸拮抗劑、抗代謝物、抗有絲分裂物、DM石皮壞劑、促細胞凋亡物質(zhì)、分化誘導(dǎo)試劑、抗血管生成劑、抗生素、激素、肽、抗體及其組合。10.權(quán)利要求l所述的方法，其中所述的化療劑包括結(jié)合了蛋白質(zhì)的藥物的顆粒。11.權(quán)利要求10所述的方法，其中所述的結(jié)合了蛋白質(zhì)的藥物的顆粒中的蛋白質(zhì)成分包括清蛋白。12.權(quán)利要求11所述的方法，其中所述的化療劑包括結(jié)合了清蛋白的紫杉醇的顆粒。13.權(quán)利要求12所述的方法，其中超過50%的所述的化療劑為納米顆粒形式。14.權(quán)利要求1-13所述的方法，其中哺乳動物腫瘤對化療劑產(chǎn)生的應(yīng)答與SPARC的水平呈正相關(guān)。15.權(quán)利要求14所述的方法，其中所述的生物樣品是從所述肺瘤中分離的。16.權(quán)利要求15所述的方法，其中所述的化療劑包括結(jié)合了清蛋白的紫杉醇的顆粒。17.權(quán)利要求16所述的方法，其中超過50°/。的所述的化療劑為納米顆粒形式。18.權(quán)利要求17所述的方法，其中在大約3周的給藥周期中，所述紫杉醇的劑量為約30mg/m2至約1000mg/m2。19.權(quán)利要求1-13所述的方法，其中哺乳動物腫瘤對化療劑產(chǎn)生的應(yīng)答與SPARC的水平呈負相關(guān)。20.權(quán)利要求16所述的方法，其中所述的生物樣品是從所述腫瘤中分離的。21.權(quán)利要求1-13所述的方法，其中SPARC蛋白質(zhì)的表達使用抗體進行檢測。22.權(quán)利要求1-13所述的方法，其中SPARC蛋白質(zhì)的表達不使用抗體進行檢測。23.權(quán)利要求1-13所述的方法，其中SPARC蛋白質(zhì)的表達使用非抗體的SPARC結(jié)合性分子來檢測。24.權(quán)利要求1-13所述的方法，其中SPARC蛋白質(zhì)的表達不使用SPARC結(jié)合性分子進行檢測。25.權(quán)利要求1-13所述的方法，其中所述的SPARC的RNA通過原位雜交、RNA擴增、RNA印跡法、微陣列分析或其組合來檢測。26.—種使用化療劑或其他抗癌劑治療哺乳動物中的腫瘤的方法，該方法包括以下步驟(a)從哺乳動物中分離生物樣品；(b)檢測SPARC蛋白質(zhì)或RNA在所述生物樣品中的表達；(c)對所述生物樣品中的SPARC蛋白質(zhì)或RNA的量進行定量；(d)確定是否存在一定水平的SPARC蛋白質(zhì)或RNA，其中所述的水平指示使用化療劑或其他抗癌劑；以及(e)施用治療有效量的化療劑或其他抗癌劑。27.權(quán)利要求26所述的方法，其進一步包括檢測Her2蛋白質(zhì)或RNA在所述生物樣品中的表達；對所述生物樣品中的Her2蛋白質(zhì)或RNA的量進行定量；確定是否存在一定水平的Her2蛋白質(zhì)或RNA，其中所述的水平指示使用化療劑或其他抗癌劑；以及施用治療有效量的化療劑或其他抗癌劑。28.權(quán)利要求26-27所述的方法，其中所述化療劑選自多西他賽、紫杉醇、紫杉烷類、鉑化合物、葉酸拮抗劑、抗代謝物、抗有絲分裂物、DNA破壞劑、促細胞凋亡物質(zhì)、分化誘導(dǎo)試劑、抗血管生成劑、抗生素、激素、肽、抗體及其組合。29.權(quán)利要求26-28所述的方法，其中所述的化療劑包括結(jié)合了蛋白質(zhì)的藥物的顆粒。30.權(quán)利要求29所述的方法，其中所述的結(jié)合了蛋白質(zhì)的藥物的顆粒中的蛋白質(zhì)成分包括清蛋白。31.權(quán)利要求26-28所述的方法，其中所述的化療劑包括結(jié)合了清蛋白的紫杉醇的顆粒。32.權(quán)利要求31所述的方法，其中超過50%的所述的化療劑為納米顆粒形式。33.權(quán)利要求32所述的方法，其中在大約3周的給藥周期中，所述紫杉醇的劑量為約30mg/m2至約1000mg/m2。34.權(quán)利要求26所述的方法，其中所述的哺乳動物為人。35.權(quán)利要求26所述的方法，其中所述的腫瘤為乳腺癌、卵巢癌、頭頸癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、膀胱癌或腎癌。36.權(quán)利要求32所述的方法，其中所述的哺乳動物為人。37.權(quán)利要求32所述的方法，其中所述的腫瘤為乳腺癌、卵巢癌、頭頸癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、膀胱癌或腎癌。38.—種用于預(yù)測哺乳動物腫瘤對化療劑或其他抗癌劑所產(chǎn)生的應(yīng)答的試劑盒，該試劑盒包括用于從肺瘤中分離出蛋白質(zhì)的工具；SPARC蛋白質(zhì)的檢測和定量的工具；對照蛋白質(zhì)；以及用于預(yù)測腫瘤所產(chǎn)生的應(yīng)答的規(guī)則。39.權(quán)利要求38所述的試劑盒，其進一步包括用于確定腫瘤的Her2狀態(tài)的工具。40.權(quán)利要求38所述的試劑盒，其中所述的化療劑包括結(jié)合了清蛋白的藥物的顆粒，并且超過50%的所述的化療劑為納米顆粒形式。41.權(quán)利要求40所述的試劑盒，其中所述的結(jié)合了清蛋白的藥物為紫杉醇。42.—種用于預(yù)測哺乳動物肺瘤對化療劑或其他抗癌劑所產(chǎn)生的應(yīng)答的試劑盒，該試劑盒包括用于從腫瘤中分離出RNA的工具；SPARCMA的檢測和定量的工具；對照RNA;以及用于基于腫瘤中SPARCRNA的水平來預(yù)測該肺瘤所產(chǎn)生的應(yīng)答的規(guī)則。43.權(quán)利要求42所述的試劑盒，其進一步包括用于確定腫瘤的Her2狀態(tài)的工具。44.權(quán)利要求42所述的試劑盒，其中所述的化療劑包括結(jié)合了清蛋白的藥物的顆粒，并且超過50%的所述的化療劑為納米顆粒形式。45.權(quán)利要求44所述的試劑盒，其中所述的結(jié)合了清蛋白的藥物為紫杉醇。全文摘要本發(fā)明提供了預(yù)測或確定哺乳動物腫瘤對化療劑所產(chǎn)生的應(yīng)答、以及治療哺乳動物腫瘤的方法，該方法包括檢測由哺乳動物分離出的樣品中的SPARC蛋白質(zhì)或RNA，并對其進行定量。本發(fā)明進一步提供了用于預(yù)測哺乳動物腫瘤對化療劑所產(chǎn)生的應(yīng)答的試劑盒，該試劑盒包括用于從腫瘤中分離出蛋白質(zhì)或RNA的工具；SPARC蛋白質(zhì)或RNA的檢測和定量的工具；對照RNA；以及根據(jù)腫瘤中SPARC蛋白質(zhì)或RNA的水平來預(yù)測該腫瘤所產(chǎn)生的應(yīng)答的規(guī)則。文檔編號G01N33/574GK101454673SQ200780019544公開日2009年6月10日申請日期2007年3月29日優(yōu)先權(quán)日2006年3月31日發(fā)明者N·P·德塞,P·索恩-希翁,V·特里魯申請人:阿布拉西斯生物科學公司