專利名稱：：以relt作為靶物的方法和組合物的制作方法以RELT作為乾物的方法和組合物發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及以下領(lǐng)域，即利用RELT多肽和核酸調(diào)控免疫細(xì)胞發(fā)育和調(diào)控細(xì)胞因子生成的方法。本發(fā)明還涉及抗RELT抗體的領(lǐng)域，更具體的i兌，涉及作為表達(dá)RELT細(xì)胞的細(xì)胞因子生成的激動(dòng)劑的抗RELT抗體。
背景技術(shù)：
：I型干擾素(IFN)是對(duì)多種細(xì)胞類型具有多效效應(yīng)的細(xì)胞因子。IFN因?yàn)槠淇共《净钚远鵀槿耸熘?，但它們還具有抗細(xì)菌、抗原生動(dòng)物、免疫調(diào)控和細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié)功能(vandenBroeketal.,Immunol.Rev.148:5-18(1995);Pfefferetal"CancerRes.58:2489-99(1998))。I型干擾素包括干擾素-a(IFN-a)和干擾素-卩(IFN-p)。鼠CD11c+B220+CD11b—CD45RB+類漿細(xì)胞樹突細(xì)胞(pDC)，亦稱為IFN生成細(xì)胞(IPC),展示獨(dú)特的類漿細(xì)胞形態(tài)學(xué)，當(dāng)暴露于未曱基化的CpG寡聚脫氧核苷酸或者各類DNA或RNA病毒時(shí)是I型IFN的強(qiáng)勁生成者(Colonnaetal.,Nat.Immunol.5:1219-26(2004》Hochreinetal"Hum.Immunol.63:1103-10(2002);Nakanoetal.,J.Exp.Med.194:1171-8(2001);Dieboldetal"Science303:1529-31(2004);Dalodetal.,J.Exp.Med.195:517-28(2002);Asselin-Patureletal.，Nat.Immunol.2:1144-50(2001);Lundetal.,J.Exp.Med.198:513_20(2003》。這種IFN生成取決于Toll樣受體7和9及下游轉(zhuǎn)接物(adaptor)MyD88(Dieboldetal.,Science303:1529-31(2004);Lundetal"J.Exp.Med.198:513-20(2003);Krugetal.，Immunity21:107-19(2004);Hemmietal.,J.Immunol.170:3059-64(2003))。在感染了某些病毒諸如鼠巨細(xì)胞病毒(MCMV)的小鼠中，pDC是IFN-a主要的也可能是唯一的來(lái)源(Dalodetal.,J.Exp.Med.195:517-28(2002);Asselin-Patureletal"Nat.Immunol.2:1144-50(2001))。pDC和常規(guī)CDllc+B220—DC(cDC)(—種激發(fā)抗原特異性幼稚T細(xì)胞的"專職"抗原呈遞細(xì)胞的獨(dú)特子集)(Colonnaetal.,Nat.Immunol.5:1219-26(2004);Banchereauetal.,Nature392:245-52(1998))的發(fā)育和協(xié)同作7用對(duì)于產(chǎn)生針對(duì)給定病原體的相應(yīng)免疫應(yīng)答至關(guān)重要。還認(rèn)為pDC在自身免疫性疾病諸如狼瘡(參見例如Ronnblom，J.Exp.Med.194:F59(2001))、免疫性病癥諸如變應(yīng)性鼻炎和哞喘(Jahnsenetal.，J.Immunol.165:4062-4068(2000);Matsudaetal.，Am.J.Resp.Crit.CareMed.166:1050-1054(2002))、和癌癥例如卵巢癌(Zouetal.，Nat.Med.7:1339-1346(2001))以及骨髓增生異常綜合征(MDS)(Maetal.，Leukemia18(9):1451-1456(2004))的發(fā)生/發(fā)展和病理生理:學(xué)中起著關(guān)鍵作用。鼠骨髓中的常見淋巴樣前體(CLP)和常見髓樣前體(CMP)細(xì)胞都能夠產(chǎn)生cDC和pDC群(Shigematsuetal.,Immunity21:43-53)，而外周血中的CD11c+MHCII—型已經(jīng)被鑒定為包含pDC和cDC子集的緊鄰前體的群(delHoyoetal.,Nature415:1043-7(2002))。小鼠中的基因把向研究已經(jīng)鑒定出數(shù)種調(diào)節(jié)cDC發(fā)育的胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)分子和轉(zhuǎn)錄因子；IFN調(diào)節(jié)因子(IRF)2、IRF4、Ikaros、Re舊、TRAF6和PU.l對(duì)cDC發(fā)育都是至關(guān)重要的(Ardavinetal.,NatRev.Immunol.3:582-90(2003))。對(duì)pDC發(fā)育的了解相當(dāng)少。缺失IRF8/IFN共有序列結(jié)合蛋白(ICSBP)的小鼠展示pDC發(fā)育的缺陷，但那些小鼠"中的髓樣細(xì)胞和cDC發(fā)育也受到損害(Tsujimuraetal.,J.Immunol.170:1131-5(2003))。小鼠或骨髓細(xì)胞培養(yǎng)物中前體細(xì)胞到pDC和cDC的分化受fms相關(guān)酪氨酸激酶3配體(FLT3L)刺激(Vollstedtetal.，J.Exp.Med.197:575-84(2003);Gillietetal"J.Exp.Med.195:953-8(2002》。某些TNF受體及其配體已經(jīng)被鑒定為樹突細(xì)胞活化和活性的重要介導(dǎo)物(Andersonetal.,Nature390:175-179(1997))。TNF受體超家族(TNFRSF)包含至少29個(gè)成員，其中大多數(shù)是I型內(nèi)在膜蛋白。這些受體具有保守的胞外半胱氨酸富含域(CRD),其是通常包含通過3個(gè)二硫鍵橋接的6個(gè)半胱氨酸殘基的假重復(fù)序列(pseudo-repeats)。當(dāng)TNFRSF成員被它們的關(guān)聯(lián)配體占據(jù)時(shí)，它們促進(jìn)一系列生物學(xué)結(jié)果，包括細(xì)胞存活、細(xì)胞死亡、增殖和分化(Locksleyetal"Cell104:487-501(2001);Bodmeretal"TrendsBiochem.Sci.27:19-26(2002》。在TNFRSF內(nèi)，存在數(shù)種5^兒受體，其特異性配體還有待鑒定，包括淋巴組織中表達(dá)的受體(RELT)/TNFRSF19L(Sicaetal.，Blood97:2702-7(2001))。RELT是一種具有兩個(gè)CRD的I型細(xì)胞表面蛋白。當(dāng)異位表達(dá)時(shí)，RELT活化NF-kB(同上)，一種先天免疫和獲得性免疫都需要的基因表達(dá)的重要轉(zhuǎn)錄因子(Bonizzietal.,TrendsImmunol.25:280-8(2004))。RELTmRNA表達(dá)似乎主要限于淋巴樣組織諸如脾和淋巴結(jié)(Sicaetal.，Blood97:2702-7(2001))。對(duì)RELT在免疫細(xì)胞調(diào)節(jié)和功能中作用的理解可以提供治療免疫性疾病的新方法。本文中所引用的所有參考文獻(xiàn)，包括專利申請(qǐng)和出版物，均完整引入作為參考。發(fā)明概述本發(fā)明提供了利用RELT多肽和核酸調(diào)控某些免疫細(xì)胞的發(fā)育和調(diào)控某些免疫細(xì)胞的細(xì)胞因子生成的方法。還提供了能夠結(jié)合RELT和/或調(diào)節(jié)與RELT有關(guān)的生物學(xué)活性的新抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種特異性結(jié)合RELT的分離的抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種分離的抗體，其包含至少一種高變(HVR)序列，所述高變序列選自分別為SEQIDNO:42-49、51-58和60-67中任一種的HVR-Hl、HVR-H2和HVR-H3。一方面，所述分離的抗體特異性結(jié)合RELT。另一方面，所述分離的抗體還包含選自SEQIDNO:l和SEQIDNO:2的輕鏈高變序列。另一方面，所述抗體特異性結(jié)合人RELT。另一方面，所述抗體抑制RELT與至少一種RELT配體的結(jié)合。另一方面，所述抗體是RELT的拮抗劑。另一方面，所述抗體抑制至少一種RELT介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑。另一方面，所述抗體刺激表達(dá)RELT細(xì)胞的NF-KB生成。另一方面，所述抗體是RELT的激動(dòng)劑。另一方面，所述抗體刺激至少一種RELT介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種分離的抗體，其包含至少一種選自HVR-Hl、HVR-H2、HVR-H3的序列，其中HVR-H1包含氨基S臾序列abcdefghij，其中氨基酸a是甘氨酸；氨基酸b是苯丙氨酸；氨基酸c是蘇氨酸；氨基酸d是異亮氨酸；氨基酸e選自蘇氨酸、絲氨酸和天冬酰胺；氨基酸f選自天冬酰胺、甘氨酸、絲氨酸和天冬氨酸；氨基酸g選自蘇氨酸、絲氨酸和天冬酰胺；氨基酸h選自色氨酸、酪氨酸和絲氨酸；氨基酸i是異亮氨酸；而氨基酸j是組氨酸；其中HVR-H2包含氨基酸序列klmnopqrstuvwxyza'b'，其中氨基酸k選自甘氨酸和丙氨酸；氨基酸l選自苯丙氨酸、精氨酸、色氨酸、甘氨酸、天冬酰胺和酪氨酸；氨基酸m是異亮氨酸；氨基酸n選自絲氨酸、酪氨酸、蘇氨酸和天冬酰胺；氨基酸o是脯氨酸；氨基酸p選自絲氨酸、天冬酰胺、酪氨酸和丙氨酸；氨基酸q選自甘氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸和絲氨酸；氨基酸r是甘氨酸；氨基酸s選自酪氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸和絲氨酸；氨基酸t(yī)是蘇氨酸；氨基酸u選自天冬酰胺、酪氨酸和天冬氨酸；氨基酸v是酪氨酸；氨基酸w是丙氨酸；氨基酸x是天冬氨酸；氨基酸y是絲氨酸；氨基酸z是纈氨酸；氨基酸a'是賴氨酸；而氨基酸b'是甘氨酸；其中HVR-H3包含氨基酸序列c，d，e，f，g，h，i，j，k，l，m，n，o，p，q，r，s，t，u，v，，其中氨基酸c'選自精氨酸和賴氨酸；氨基酸d'選自苯丙氨酸、色氨酸、絲氨酸、甘氨酸、亮氨酸和天冬氨酸；氨基酸e'選自亮氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、絲氨酸和精氨酸；氨基酸f選自絲氨酸、酪氨酸、甘氨酸、色氨酸和組氨酸；氨基酸g'選自天冬氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、丙氨酸、色氨酸和纈氨酸；氨基酸h'選自甘氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、色氨酸、丙氨酸、蘇氨酸和組氨酸；氨基酸i'選自丙氨酸、甘氨酸、曱硫氨酸、色氨酸、天冬氨酸和谷氨酸；氨基S吏j'選自酪氨.酸、色氨酸、天冬酰胺、纈氨酸、甘氨酸和谷氨酸；氨基酸k'選自丙氨酸、纈氨酸、甘氨酸、組氨酸、谷氨酸和精氨酸；氨基酸l'選自精氨酸、酪氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸和甘氨酸；氨基酸m'選自天冬氨酸、蘇氨酸、曱硫氨酸、谷氨酸、酪氨酸和精氨酸；氨基酸n'選自酪氨酸、絲氨酸、谷氨酸、丙氨酸、天冬氨酸和脯氨酸，或者不存在；氨基酸o'選自丙氨酸、酪氨酸、曱硫氨酸、色氨酸和纈氨酸，或者不存在；氨基酸p'選自曱硫氨酸、丙氨酸、纈氨酸和甘氨酸，或者不存在；氨基酸q'選自精氨酸、纈氨酸、曱硫氨酸和天冬氨酸，或者不存在；氨基酸r'選自酪氨酸和曱硫氨酸，或者不存在；氨基酸s'是纈氨酸，或者不存在；氨基酸t(yī)'是曱硫氨酸，或者不存在；氨基酸u'是天冬氨酸；而氨基酸v'是酪氨酸。一方面，所述分離的抗體特異性結(jié)合RELT。一方面，所述分離的抗體還包含選自SEQIDNO:l和SEQIDNO:2的輕鏈高變序列。另一方面，所述抗體特異性結(jié)合人RELT。另一方面，所述抗體抑制RELT與至少一種RELT配體的結(jié)合。另一方面，所述抗體是RELT的拮抗劑。另一方面，所述抗體抑制至少一種RELT介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑。另一方面，所述抗體刺激表達(dá)RELT細(xì)胞的NF-KB生成。另一方面，所述抗體是RELT的激動(dòng)劑。另一方面，所述抗體刺激至少一種RELT介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種分離的抗體，其包含HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3序列，這些序列對(duì)應(yīng)于圖5A和5B中針對(duì)克隆C21、CIO、E5/E7、F4、F5、H7、H9和H11所列的那些序列。一方面，所述分離的抗體特異性結(jié)合RELT。一方面，所述分離的抗體還包含選自SEQIDNO:1和SEQIDNO:2的輕鏈高變序列。另一方面，所述抗體特異性結(jié)合人RELT。另一方面，所述抗體抑制RELT與至少一種RELT配體的結(jié)合。另一方面，所述抗體是RELT的拮抗劑。另一方面，所述抗體抑制至少一種RELT介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑。另一方面，所述抗體刺激表達(dá)RELT細(xì)胞的NF-KB生成。另一方面，所述抗體是RELT的激動(dòng)劑。另一方面，所述抗體刺激至少一種RELT介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種分離的抗體，其包含SEQIDNO:49的HVR-H1序列、SEQIDNO:58的HVR-H2序列和SEQIDNO:67的HVR-H3序列。一方面，所述分離的抗體還包含選自SEQIDNO:l和SEQIDNO:2的輕鏈高變序列。一方面，所述抗體特異性結(jié)合人RELT。另一方面，所述抗體抑制RELT與至少一種RELT配體的結(jié)合。另一方面，所述抗體是RELT的拮抗劑。另一方面，所述抗體抑制至少一種RELT介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑。另一方面，所述抗體刺激表達(dá)RELT細(xì)胞的NF-KB生成。另一方面，所述抗體是RELT的激動(dòng)劑。另一方面，所述抗體刺激至少一種RELT介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種分離的抗體，其與任一種上述抗體結(jié)合RELT上相同的抗原性決定簇。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種分離的抗體，其與任一種上述抗體竟?fàn)幗Y(jié)合RELT。本發(fā)明的抗體可以采用許多形式。例如，本發(fā)明的抗體可以是嵌合抗體、人源化抗體或人抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體不是人抗體，例如它不是在攜帶異源基因的小鼠(xenomouse)中產(chǎn)生的抗體(例如W096/33735中所述)。本發(fā)明的抗體可以是全長(zhǎng)或其片段(例如包含抗原結(jié)合組件的片段)。一方面，提供了編碼本發(fā)明抗體的核酸分子。一方面，提供了包含該核酸的載體。一方面，提供了包含該載體的宿主細(xì)胞。一方面，提供了能夠產(chǎn)生本發(fā)明抗體的細(xì)胞系。一方面，提供了生產(chǎn)本發(fā)明抗體的方法，包括在產(chǎn)生抗體的條件下培養(yǎng)包含編碼抗體的核酸分子的宿主細(xì)胞。一方面，提供了包含有效量的本發(fā)明抗體和藥學(xué)上可接受的載體的組合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種測(cè)定懷疑含有RELT多肽的樣品中RELT多肽存在的方法，包括將所述樣品暴露于至少一種本發(fā)明的抗體，并測(cè)定所述至少一種抗體與所述樣品中RELT多肽的結(jié)合。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種治療患者中因IFN-a引起、惡化或延長(zhǎng)的疾病或疾患的方法，包括給患者施用有效量的至少一種本發(fā)明抗體。一方面，所述疾病或疾患是由于患者中的IFN-a水平相對(duì)于沒有所述疾病或疾患時(shí)的IFN-a水平降低而引起、惡化或延長(zhǎng)的。一方面，所述疾病或疾患是由于患者中的IFN-a水平相對(duì)于沒有所述疾病或疾患時(shí)的IFN-a水平升高而引起、惡化或延長(zhǎng)的。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種治療患者中與IFN-a相關(guān)的疾病或疾患的方法，包括給患者施用有效量的可溶形式的RELT。一方面，所述患者是哺乳動(dòng)物患者。另一方面，所述患者是人。另一方面，所述疾病或疾患選自至少一種細(xì)胞增殖性病癥、感染、免疫性/炎性病癥、和干擾素相關(guān)病癥。另一方面，所述免疫性/炎性病癥選自狼瘡、哮喘和變應(yīng)性鼻炎。另一方面，所述感染選自微生物感染、病毒感染和真菌感染。另一方面，所述細(xì)胞增殖性病癥選自骨髓增生異常綜合征(myelodysplasticsyndrome,MDS)禾口癌癥。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種使CD11c+MHCir細(xì)胞產(chǎn)生的類漿細(xì)CDllc+MHCir細(xì)胞中的RELT表達(dá)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種使CD11c+MHCII—細(xì)胞產(chǎn)生的類漿細(xì)胞樹突細(xì)胞(pDC)相對(duì)于常規(guī)樹突細(xì)胞(cDC)的比例升高的方法，包括抑制CDllc+MHCir細(xì)胞中的RELT活性。一方面，抑制RELT表達(dá)或活性包括破壞CDllc+MHCI廠細(xì)胞中的RELT。另一方面，抑制RELT表達(dá)或活性包括給CDllc+MHCII—細(xì)胞施用對(duì)RELT反義的寡核苷酸。另一方面，抑制RELT表達(dá)或活性包括給CDllc+MHCir細(xì)胞施用抑制RELT與其正常配體結(jié)合的抗體。另一方面，抑制RELT表達(dá)或活性發(fā)生在體內(nèi)。另一方面，抑制RELT表達(dá)或活性發(fā)生在體外。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種使CDllc+MHCir細(xì)胞產(chǎn)生的類漿細(xì)胞樹突細(xì)胞相對(duì)于常規(guī)樹突細(xì)胞的比例降低的方法，包括刺激CDllc+MHCir細(xì)胞中的RELT表達(dá)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種使CDllc+MHCII-細(xì)胞產(chǎn)生的類漿細(xì)胞樹突細(xì)胞相對(duì)于常規(guī)樹突細(xì)胞的比例降低的方法，包括刺激CDllc+MHCir細(xì)胞中的RELT活性。一方面，刺激RELT表達(dá)或活性包括給CD11c+MHCir細(xì)胞施用激動(dòng)RELT的抗體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，4是供了一種增加哺乳動(dòng)物中IFN-a生成的方法，包括抑制所述哺乳動(dòng)物中的RELT表達(dá)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種增加哺乳動(dòng)物中IFN-a生成的方法，包括抑制所述哺乳動(dòng)物中的RELT活性。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種減少哺乳動(dòng)物中IFN-a生成的方法，包括刺激所述哺乳動(dòng)物的CDllc+MHCII—細(xì)胞中的RELT表達(dá)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種減少哺乳動(dòng)物中IFN-a生成的方法，包括刺激所述哺乳動(dòng)物的CD11c+MHCir細(xì)胞中的RELT活性。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種診斷哺乳動(dòng)物中與異常IFN-a水平相關(guān)的疾病或疾患的方法，包括一企測(cè)所述哺乳動(dòng)物中表達(dá)的RELT的量。一方面，所述疾病或疾患選自至少一種細(xì)胞增殖性病癥、感染、免疫性/炎性病癥、和干才尤素相關(guān)病癥。附圖簡(jiǎn)述圖1A和1B及圖2描繪了用于實(shí)施本發(fā)明的例示性受體人共有框架序列，序列標(biāo)識(shí)符如下重鏈可變(VH)共有框架(圖1A和1B)人VH亞組I共有框架減去KabatCDR(SEQIDNO:3，73，74，75)人VH亞組I共有框架減去延伸的高變區(qū)(SEQIDNO:4-6，76-78,79-81和82-84)人VH亞組II共有框架減去KabatCDR(SEQIDNO:7，85,86,87)人VH亞組II共有框架減去延伸的高變區(qū)(SEQIDNO:8-10,88-90，91-93，94-96)人VH亞組III共有框架減去KabatCDR(SEQIDNO:11,97,98，99)人VH亞組III共有框架減去延伸的高變區(qū)(SEQIDNO:12-14，100-102,103-105,106-108)人VH受體框架減去KabatCDR(SEQIDNO:15,109，110，111)人VH受體框架減去延伸的高變區(qū)(SEQIDNO:16-17，112-114,115-117)人VH受體2框架減去KabatCDR(SEQIDNO:18,118,119,120)人VH受體2框架減去延伸的高變區(qū)(SEQIDNO:19-21,121-123,124-126,127-129)輕鏈可變(VL)共有框架(圖2)人VLK亞組I共有框架(SEQIDNO:22,130,131,132)人VLK亞組II共有框架(SEQIDNO:23,133，134,135)人VLK亞組III共有框架(SEQIDNO:24,136,137,138)人VLK亞組IV共有框架(SEQIDNO:25,139,140，141)圖3描繪了huMAb4D5-8輕鏈和重鏈的框架區(qū)序列。上標(biāo)/粗體的數(shù)值指示依照Kabat的氨基酸位置。圖4描繪了huMAb4D5-8輕鏈和重鏈的修飾的/變異的框架區(qū)序歹'J。上標(biāo)/粗體的數(shù)值指示依照Kabat的氨基酸位置。圖5A和5B顯示抗RELT抗體分子的重鏈HVR環(huán)序歹'J,如實(shí)施例1(A)所述。該圖顯示重鏈HVR序列，Hl、H2和H3。氨基酸位置根據(jù)如下所述Kabat編號(hào)系統(tǒng)進(jìn)4亍編號(hào)。圖6顯示抗RELT抗體與幼倉(cāng)鼠腎(BHK)細(xì)胞結(jié)合的FACS分析結(jié)果，所述幼倉(cāng)鼠腎細(xì)胞在細(xì)胞表面不表達(dá)("BHK")或表達(dá)("mRELT/BHK")小鼠RELT,如實(shí)施例l(b)(l)所述。圖7顯示抗RELT抗體與脾細(xì)胞結(jié)合的FACS分析結(jié)果，所述脾細(xì)胞在細(xì)胞表面不表達(dá)("-/-")或表達(dá)("+/+，，)小鼠RELT，如實(shí)施例l(b)(l)所述。圖8顯示轉(zhuǎn)染relt-xedar并用不同抗RELT抗體處理的細(xì)胞中NF-kB活化的活化程度，如實(shí)施例l(b)(2)所述。圖9顯示在高分辨率BIAcore⑧分析期間觀察到的不同濃度抗RELT抗體Hll和小鼠RELT之間的結(jié)合相互作用，如實(shí)施例l(b)(4)所述。圖IO顯示FACS分析，證明抗RELT抗體H11特異性結(jié)合293細(xì)胞表面表達(dá)的人RELT，如實(shí)施例l(b)(5)所述。T細(xì)胞群在細(xì)胞表面表達(dá)RELT,如實(shí)施例2所述。B細(xì)胞群受到Hl1抗體的結(jié)合，如實(shí)施例2所述。圖13顯示抗RELT抗體H11結(jié)合脾細(xì)胞的FACS分析結(jié)果，表明T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞在細(xì)胞表面表達(dá)RELT，如實(shí)施例2所述。圖14A-14C顯示RELT-缺陷小鼠的產(chǎn)生，如實(shí)施例3(a)所述。圖14A顯示側(cè)翼為/oxP位點(diǎn)的PGK-neo選擇盒，所述選擇盒用于置換小鼠RELT外顯子II到V(編碼氨基酸17-209)。圖148顯示來(lái)自^/+/+、^//+/-和^//1-/-小鼠的基因組DNA的SouthernBlot分析，如實(shí)施例3(a)所述。圖14C顯示來(lái)自("^^丁，，)和^/^/-小鼠的T細(xì)胞上表面RELT表達(dá)的流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果。兩張圖中最左邊的曲線(粗體)表示用對(duì)照抗體染色，而最右邊的曲線表示用RELT特異性mAbHI1染色。圖15A-15D顯示設(shè)計(jì)用于測(cè)定小鼠中正常T細(xì)胞、B細(xì)胞和NK細(xì)胞的發(fā)育是否需要RELT的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，如實(shí)施例3(b)所述。圖15A顯示來(lái)自IO周齡野生型和化/f-/-小鼠的脾細(xì)胞的流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果。數(shù)值代表每種基因型10只小鼠的均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差。T細(xì)胞以CD3+IgM—B220—DX5—的細(xì)胞來(lái)鑒定。B;細(xì)胞以CD31gM+B220+DX5—的細(xì)胞來(lái)鑒定。NK細(xì)胞以CD3—IgM_B220—DX5+的細(xì)胞來(lái)鑒定。圖15B顯示圖15A中所鑒定的T細(xì)胞、B細(xì)胞和NK細(xì)胞上的RELT表達(dá)。每張圖中最左邊的(粗體)曲線表示用對(duì)照mAb染色，而最右邊的曲線表示用RELT特異性mAbHll染色。圖15C顯示來(lái)自野生型("WT")和^//-/_小鼠的胸腺細(xì)胞的流式細(xì)胞術(shù)分析。顯示每個(gè)象限內(nèi)陽(yáng)性細(xì)胞的百分比，這代表每種基因型的5只小鼠。圖150顯示對(duì)來(lái)自野生型和"/^/-小鼠的純化T細(xì)胞進(jìn)行的[3司-胸芬摻入測(cè)定法的結(jié)果，所述T細(xì)胞暴露于單獨(dú)的抗CD3抗體(左圖)或抗CD3抗體和抗CD28抗體二者，證明RELT不是T細(xì)胞增殖所必需的。圖16A-16G顯示測(cè)定破壞小鼠中"&對(duì)那些小鼠在用免疫原攻擊后產(chǎn)生抗體亞型的影響的實(shí)^^結(jié)果，如實(shí)施例3(c)所述。圖17A-17D顯示測(cè)定消除RELT對(duì)小鼠中樹突細(xì)胞群的影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果」如實(shí)施例3(d)所述。圖17八顯示10周齡野生型和^//-/-小鼠中脾樹突細(xì)胞子集的流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果。曲線圖表示總脾細(xì)胞的CDllc染色(左圖)或者電子門控(electronicallygating)以選擇CD1lc+細(xì)胞后的CD1lb和B220染色(右圖)。結(jié)果代表每種基因型的10只小鼠。圖17B顯示每組10只小鼠pDC(CDllc+B220+CDllb—)和cDC(CDllc+B220—CDllb十)的均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差，均以總細(xì)胞數(shù)和百分比形式表示。圖17C顯示pDC和cDC上RELT表達(dá)的流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果。每張圖中最左邊的(粗體)曲線表示用對(duì)照mAb結(jié)合，而最右邊的曲線表示用抗RELT抗體H11結(jié)合。圖17D顯示抗CD45RB、I-A、CD80或CD86抗體與來(lái)自野生型(最左邊的曲線)或"/-/-(最右邊的粗體曲線)小鼠的CDllc+B220+細(xì)胞結(jié)合的流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果。實(shí)心直方圖顯示與對(duì)照抗體的結(jié)合。圖18A和18B顯示評(píng)估破壞RELT對(duì)CDllc+MHCirpDC祖細(xì)胞群的影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，如實(shí)施例3(e)所述。圖18A顯示來(lái)自10周齡野生型和"&-/-小鼠的外周血的流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果。顯示每種基因型IO只小鼠CDllc+I-A—細(xì)胞的均值百分比±標(biāo)準(zhǔn)偏差。圖18b顯示MHCirDC前體細(xì)胞上細(xì)胞表面RELT表達(dá)的流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)杲。最左邊的(粗體)曲線表示對(duì)照抗體的結(jié)合，而最右邊的曲線表示抗RELT抗體H11的結(jié)合。圖19顯示評(píng)估野生型和r^-A細(xì)胞群IFN-a生成的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，如實(shí)施例4所述。圖19顯示脾細(xì)胞(左圖)或者純化的pDC和cDC(右圖)的IFN-a生成，所述細(xì)胞獲自10周齡野生型和^^-/-小鼠，所述小鼠用指定劑量的CpG-ODN培養(yǎng)24小時(shí)。數(shù)值代表每種基因型7只小鼠的均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差。圖20顯示評(píng)估刪除RELT對(duì)骨髓衍生細(xì)胞的影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，如實(shí)施例5所述。給致死照射過的野生型和"仏/-小鼠靜脈內(nèi)注射未處理的野生型和"/^/-骨髓。八周后，通過流式細(xì)胞術(shù)分析嵌合小鼠的脾和血細(xì)胞。數(shù)據(jù)代表每種基因型7只小鼠脾pDC(CDllc+B220+CDllb—)和外周血MHCII—DC前體細(xì)胞(CDllc+1-A—)的均值百分比土標(biāo)準(zhǔn)偏差。發(fā)明詳述通用技術(shù)除非另有說(shuō)明，本發(fā)明的實(shí)施將采用分子生物學(xué)(包括重組技術(shù))、微生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫學(xué)的常規(guī)技術(shù)，這些都在本領(lǐng)域的技術(shù)范圍內(nèi)。文獻(xiàn)中充分闡述了這些技術(shù)，諸如"MolecularCloning:ALaboratoryManual",thirdedition(Sambrooketal,,2001);"OligonucleotideSynthesis"(M.J.Gait,ed.，1984);"AnimalCellCulture"(R.I.Freshney,ed.,1987);"MethodsinEnzymology"(AcademicPress,Inc.);"CurrentProtocolsinMolecularBiology"(F.M.Ausubeletal.,eds.,1987,andperiodicupdates);"PCR:ThePolymeraseChainReaction"(Mullisetal"ed.，1994);PCR2:APracticalApproach(M.J.MacPherson,B.D.HamesandG.R.Tayloreds.，1995);Antibodies,ALaboratoryManual(HarlowandLane,eds.,1988);"APracticalGuidetoMolecularCloning"(PerbalBernardV.，1988);"PhageDisplay:ALaboratoryManual"(Barbasetal"2001)。定義16在用于本文時(shí)，術(shù)語(yǔ)"在淋巴樣組織中表達(dá)的受體，，和"RELT，，定義為所有種類的天然的和合成的RELT多肽，包括但不限于全長(zhǎng)RELT多肽、RELT多肽的成熟形式(其中信號(hào)肽已經(jīng)切除)、和RELT多肽的可溶形式。"分離的，，抗體指已經(jīng)鑒定且自其天然環(huán)境的一種成分分開和/或回收的抗體。其天然環(huán)境的污染性成分指將會(huì)干擾該抗體的研究、診斷或治療用途的物質(zhì)，可包括酶、激素、和其它蛋白質(zhì)性質(zhì)或非蛋白質(zhì)性質(zhì)的溶質(zhì)。在一個(gè)實(shí)施方案中，將抗體純化至(l)根據(jù)例如Lowry法的測(cè)定，抗體重量超過95%，在有些實(shí)施方案中重量超過99%，(2)足以通過使用例如轉(zhuǎn)杯式測(cè)序儀獲得至少15個(gè)殘基的N-末端或內(nèi)部氨基酸序列的程度，或(3)根據(jù)還原性或非還原性條件下的SDS-PAGE及使用例如考馬斯藍(lán)或銀染色，達(dá)到同質(zhì)。既然抗體天然環(huán)境的至少一種成分不會(huì)存在，那么分離的抗體包括重組細(xì)胞內(nèi)的原位抗體。然而，分離的抗體通常將通過至少一個(gè)純化步驟來(lái)制備。在用于本文時(shí)，術(shù)語(yǔ)"抗RELT抗體"指能夠特異性結(jié)合RELT的抗體。短語(yǔ)"基本上相似"、"基本上相同"、"等同"或"基本上等同"在用于本文時(shí)表示兩個(gè)數(shù)值(例如一個(gè)與某分子有關(guān)而另一個(gè)與參照/比較分子有關(guān))之間足夠高的相似程度，以致本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)為在用所述數(shù)值(例如Kd值)所測(cè)量的生物學(xué)特性背景內(nèi)兩個(gè)數(shù)值之間的差異具有很小的或沒有生物學(xué)和/或統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。作為參照/比較分子該數(shù)值的函數(shù)，所述兩個(gè)數(shù)值之間的差異例如小于約50%,小于約40%,小于約30%,小于約20%，和/或小于約10%。短語(yǔ)"實(shí)質(zhì)性降低"或"實(shí)質(zhì)性不同"在用于本文時(shí)表示兩個(gè)數(shù)值(通常一個(gè)與某分子有關(guān)而另一個(gè)與參照/比較分子有關(guān))之間足夠高的差異程度，以致本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)為在用所述數(shù)值(例如Kd值)所測(cè)量的生物學(xué)特性背景內(nèi)兩個(gè)數(shù)值之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。作為參照/比較分子該數(shù)值的函數(shù)，所述兩個(gè)數(shù)值之間的差異例如大于約10%，大于約20%，大于約30%,大于約40%,和/或大于約50%。"結(jié)合親和力"通常指分子(例如抗體)的單一結(jié)合位點(diǎn)與其結(jié)合配偶體(例如抗原)之間全部非共價(jià)相互作用總和的強(qiáng)度。除非另有說(shuō)明，在用于本文時(shí)，"結(jié)合親和力"指反映結(jié)合對(duì)的成員(例如抗體與抗原)之間l:l相互作用的內(nèi)在結(jié)合親和力。分子X對(duì)其配偶體Y的親和力通?？捎媒怆x常數(shù)(Kd)來(lái)表述。親和力可通過本領(lǐng)域知道的常用方法來(lái)測(cè)量，包括本文中所描述的。低親和力抗體通常緩慢的結(jié)合抗原且趨于容易解離，而高親和力抗體通常更快速的結(jié)合抗原且趨于保持更長(zhǎng)時(shí)間的結(jié)合。本領(lǐng)域知道測(cè)量結(jié)合親和力的多種方法，其中任一種都可用于本發(fā)明的目的。下文描述了具體的示例性實(shí)施方案。在一個(gè)實(shí)施方案中，依照本發(fā)明的"Kd"或"Kd值"是通過如下測(cè)定法所述使用Fab型式的目的抗體及其抗原進(jìn)行的放射性標(biāo)記抗原結(jié)合測(cè)定法(RIA)來(lái)測(cè)量的通過在存在未標(biāo)記抗原的滴定系列的條件下，用最小濃度的1251標(biāo)記抗原平衡Fab,然后用抗Fab抗體包被的平板捕捉結(jié)合的抗原來(lái)測(cè)量Fab對(duì)抗原的溶液結(jié)合親和力(Chen，etal.,JMolBiol293:865-881(1999))。為了確定測(cè)定條件，用50mM碳酸鈉(pH9.6)中的5jig/ml捕捉用抗Fab抗體(CappelLabs)包被微量滴定板(Dynex)過夜，隨后用PBS中的2%(w/v)牛血清清蛋白在室溫(約23。C)封閉2-5小時(shí)。在非吸附平板(Nunc存269620)中，將100pM或26pM[1251]-抗原與連續(xù)稀釋的目的Fab混合(例如與Prestaetal.,CancerRes.57:4593-4599(1997)中抗VEGF抗體，F(xiàn)ab-12的評(píng)估一致)。然后將目的Fab保溫過夜；不過，保溫可持續(xù)更長(zhǎng)時(shí)間(例如65個(gè)小時(shí))以保證達(dá)到平衡。此后，將混合物轉(zhuǎn)移至捕捉板以進(jìn)行室溫保溫(例如l小時(shí))。然后除去溶液，并用含0.1%Tween-20的PBS洗板8次。平板干燥后，加入150|11/孔閃爍液(MicroScint-20;Packard),然后在Topcount伽馬計(jì)數(shù)器(Packard)上對(duì)平板計(jì)數(shù)IO分鐘。選擇各Fab給出小于或等于最大結(jié)合之20Q/。的濃度用于竟?fàn)幮越Y(jié)合測(cè)定法。依照另一實(shí)施方案，Kd或Kd值是通過表面等離振子共振測(cè)定法使用BIAcoreTM隱2000或BIAcoreTM-3000(BIAcore,Inc.,Piscataway，NJ)在25。C使用固定化抗原CM5芯片在約IO個(gè)響應(yīng)單位(RU)測(cè)量的。簡(jiǎn)而言之，依照供應(yīng)商的說(shuō)明書用鹽酸N-乙基-N，-(3-二曱基氨基丙基)-碳化二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活化羧曱基化右旋糖芬生物傳感器芯片(CM5,BIAcoreInc.)。用10mM乙酸鈉pH4.8將抗原稀釋至5ng/ml(約0.2pM),然后以5jil/分鐘的流速注入至獲得約10個(gè)響應(yīng)單位(RU)的偶聯(lián)蛋白質(zhì)。注入抗原后，注入1M乙醇胺以封閉未反應(yīng)基團(tuán)。為了進(jìn)行動(dòng)力學(xué)測(cè)量，在25。C以約25nl/分鐘的流速注入在含0.05%Tween-20的PBS(PBST)中兩倍連續(xù)稀釋的Fab(0.78nM至500nM)。使用簡(jiǎn)單一對(duì)一朗格繆爾(Langmuir)結(jié)合模型(BIAcoreEvaluationSoftwareversion3.2)通過同時(shí)擬合結(jié)合和解離傳感圖計(jì)算結(jié)合速率(kon)和解離速率(koff)。平衡解離常數(shù)(Kd)以比率koff/kon計(jì)算。參見例如Chen,Y.，etal.,JMolBiol293:865-881(1999)。如果根據(jù)上文表面等離振子共振測(cè)定法，結(jié)合速率超過106M"S",那么結(jié)合速率可使用熒光淬滅技術(shù)來(lái)測(cè)定，即根據(jù)分光計(jì)諸如配備了斷流裝置的分光光度計(jì)(astop-flowequippedspectrophometer)(AvivInstruments)或8000系歹llSLM-Aminco分光光度計(jì)CThermoSpectronic)中用攪拌比色杯的測(cè)量，在存在濃度漸增的抗原的條件下，測(cè)量PBS,pH7.2中的20nM抗抗原抗體(Fab形式)在25。C的熒光發(fā)射強(qiáng)'度(激發(fā)二295nm;發(fā)射二340nm,16nm帶通)的升高或降低。依照本發(fā)明的"結(jié)合速率，，(on-rate，rateofassociation,associationrate)或"k。n，，也可通過上文所述相同的表面等離振子共振技術(shù)使用BIAcoreTM-2000或BIAcoreTM-3000(BIAcore,Inc.,Piscataway，NJ)在25。CM吏用固定化抗原CM5芯片在約10個(gè)響應(yīng)單位(RU)來(lái)測(cè)定。簡(jiǎn)而言之，依照供應(yīng)商的說(shuō)明書用鹽S吏N-乙基-N，-(3-二曱基氨基丙基)-碳化二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活化羧曱基化右旋糖苷生物傳感器芯片(CM5,BIAcoreInc.)。用10mM乙酸鈉pH4.8將抗原稀釋至5嗎/ml(約0.2i^M)，然后以5pl/分鐘的流速注入至獲得約10個(gè)響應(yīng)單位(RU)的偶聯(lián)蛋白質(zhì)。注入抗原后，注入1M乙醇胺以封閉未反應(yīng)基團(tuán)。為了進(jìn)行動(dòng)力學(xué)測(cè)量，在25。C以約25^11/分鐘的流速注入在含0.05%Tween-20的PBS(PBST)中兩倍連續(xù)稀釋的Fab(0.78nM至500nM)。使用簡(jiǎn)單一對(duì)一朗才各纟夢(mèng)爾(Langmuir)結(jié)合才莫型(BIAcoreEvaluationSoftwareversion3.2)通過同時(shí)擬合結(jié)合和解離傳感圖計(jì)算結(jié)合速率(k。n)和解離速率(k。ff)。平衡解離常數(shù)(Kd)以比率k。ff/k。n計(jì)算。參見例如Chen,Y.,etal.,JMolBiol293:865-881(1999)。然而，如果根據(jù)上文表面等離振子共振測(cè)定法，結(jié)合速率超過IO6NT1S"，那么結(jié)合速率可以使用焚光淬滅技術(shù)來(lái)測(cè)定，即根據(jù)分光計(jì)諸如配備了斷流裝置的分光光度計(jì)(AvivInstruments)或8000系歹'JSLM-Aminco分光光度計(jì)(ThermoSpectronic)中用攪拌比色杯的測(cè)量，在存在濃度漸增的抗原的條件下，測(cè)量PBS，pH7.2中的20nM抗抗原抗體(Fab形式)在25。C的熒光發(fā)射強(qiáng)度(激發(fā)二295nm;發(fā)射二340nm,16nm帶通)的升高或降低。術(shù)語(yǔ)"載體"在用于本文時(shí)意指能夠運(yùn)輸與其連接的其它核酸的核酸分子。一類載體是"質(zhì)粒"，指其中可連接另外的DNA區(qū)段的環(huán)狀雙鏈DNA環(huán)。另一類載體是噬菌體載體。另一類載體是病毒載體，其中可將另外的DNA區(qū)段連接到病毒基因組中。某些載體能夠在其所導(dǎo)入的宿主細(xì)胞中自主復(fù)制(例如具有細(xì)菌復(fù)制起點(diǎn)的細(xì)菌載體和附加型哺乳動(dòng)物載體)。其它載體(例如非附加型哺乳動(dòng)物載體)可在導(dǎo)入宿主細(xì)胞后整合到宿主細(xì)胞的基因組中，由此隨著宿主基因組一起復(fù)制。此外，某些載體能夠指導(dǎo)與其可操作連接的基因表達(dá)。此類載體在本文中稱為"重組表達(dá)載體"(或簡(jiǎn)稱為"重組載體")。通常，在重組DNA技術(shù)中有用的表達(dá)載體常常是質(zhì)粒形式。在本說(shuō)明書中，"質(zhì)粒"和"載體，，可互換使用，因?yàn)橘|(zhì)粒是載體的最常用形式。"多核苷酸"或"核酸"在本文中可互換使用，指任何長(zhǎng)度的核苷酸聚合物，包括DNA和RNA。核苷酸可以是脫氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、經(jīng)過修飾的核苦酸或堿基、和/或其類似物，或者是可通過DNA或RNA聚合酶或者通過合成反應(yīng)摻入聚合物的任何底物。多核苷酸可包含經(jīng)過修飾的核苷酸，諸如曱基化核苷酸及其類似物。如果有的話，對(duì)核苷酸結(jié)構(gòu)的修飾可以在裝配聚合物之前或之后進(jìn)行。核苷S吏序列可以由非核苷酸組分中斷。多核苷酸可以在合成后進(jìn)一步修飾，諸如通過與標(biāo)記物偶聯(lián)。其它類型的修飾包括例如"帽"，將一個(gè)或多個(gè)天然存在的核苦酸用類似物替代，核苷酸間修飾諸如例如具有不帶電荷連接(例如膦酸曱酯、磷酸三酯、磷酰胺酯(phosphoamidate)、氨基曱酸酯等)和具有帶電荷連接(例如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)的修飾，含有懸垂模塊(pendantmoiety)諸如例如蛋白質(zhì)(例如核酸酶、毒素、抗體、信號(hào)肽、聚L-賴氨酸等)的修飾、具有嵌入劑(例如吖啶、補(bǔ)骨脂素等)的修飾、含有螯合劑(例如金屬、放射性金屬、硼、氧化性金屬等)的修飾、含有烷化劑的修飾、具有經(jīng)修飾連接(例如cc端基異構(gòu)核酸(anomericnucleicacid)等)的修飾、以及未修飾形式的多核苷酸。另外，通常存在于糖類中的任何羥基可以用例如膦酸(phosphonate)基團(tuán)、磷酸(phosphate)基團(tuán)替換，用標(biāo)準(zhǔn)保護(hù)基團(tuán)保護(hù)，或活化以制備與別的核苷酸的別的連接，或者可偶聯(lián)至固體或半固體支持物。5'和3'末端OH可磷酸化或者用胺或l-20個(gè)碳原子的有機(jī)加帽基團(tuán)模塊取代。其它羥基也可衍生成標(biāo)準(zhǔn)保護(hù)基團(tuán)。多核苷酸還可含有本領(lǐng)域普遍知道的核糖或脫氧核糖糖類的類似物形式，包括例如2'-氧-曱基、2'-氧-烯丙基、2'-氟-或2'-疊氮-核糖，碳環(huán)糖類似物，a-端基異構(gòu)糖，差向異構(gòu)糖諸如阿拉伯糖、木糖或來(lái)蘇糖、吡喃糖、呋喃糖、景天庚酮糖，無(wú)環(huán)類似物及脫堿基核苷類似物諸如甲基核糖核苷?？捎脗溥x連接基團(tuán)替換一個(gè)或多個(gè)磷酸二酯連接。這些備選連接基團(tuán)包括但不限于以下實(shí)施方案，其中磷酸酯用P(O)S("硫代酸酯"(thioate))、P(S)S("二硫代酸酯"(d他ioate))、(0)NR2("酰胺酯，，(amidate))、P(O)R、P(O)OR'、CO或CH2("曱縮醛"(formacetal))替代，其中R或R'各自獨(dú)立為H或者取代或未取代的烷基(l-20個(gè)C),任選含有醚(-O-)連接、芳基、烯基、環(huán)烷基、環(huán)烯基或芳烷基(araldyl)。并非多核苷酸中的所有連接都必需是相同的。前述描述適用于本文中提及的所有多核苷酸，包括RNA和DNA。"寡核普酸"在用于本文時(shí)一般指短的多核苷酸，一般是單鏈，一般是合成的，長(zhǎng)度一般但不是必需小于約200個(gè)核苷酸。術(shù)語(yǔ)"寡核苷酸"與"多核苦酸"并不互相排斥。上文關(guān)于多核苷酸的描述平等且完全適用于寡核香酸。'."抗體"(Ab)和"免疫球蛋白"(Ig)是具有相同結(jié)構(gòu)特征的糖蛋白。雖然抗體展現(xiàn)出對(duì)特定抗原的結(jié)合特異性，但是免疫球蛋白包括抗體和一般缺乏抗原特異性的其它抗體樣分子二者。后一類多肽例如由淋巴系統(tǒng)以低水平生成而由骨髓瘤以升高的水平生成。術(shù)語(yǔ)"抗體，，和"免疫球蛋白"以最廣義互換使用，包括單克隆抗體(例如全長(zhǎng)或完整單克隆抗體)、多克隆抗體、單價(jià)、多價(jià)抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體，只要它們展現(xiàn)出期望的生物學(xué)活性)，而且還可以包括某些抗體片段(如本文中更為詳細(xì)描述的)?？贵w可以是嵌合的、人的、人源化的和/或親和力成熟的?？贵w的"可變區(qū)(variableregion)"或"可變域(variabledomain)"指抗體重鏈或輕鏈的氨基末端結(jié)構(gòu)域。這些結(jié)構(gòu)域一般是抗體的最易變部分且包含抗原結(jié)合位點(diǎn)。術(shù)語(yǔ)"可變的"指可變域中的某些部分在抗體序列間差異廣泛且用于每種特定抗體對(duì)其特定抗原的結(jié)合和特異性的實(shí)情。然而，變異性并非均勻分布于抗體的整個(gè)可變域。它集中于輕鏈和重鏈可變域中稱作互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)或高變區(qū)的三個(gè)區(qū)段。可變域中更加高度保守的部分稱作框架(FR)。天然重鏈和輕鏈的可變域各自包含四個(gè)FR區(qū)，它們大多采取(3-折疊片構(gòu)象，通過形成環(huán)狀連接且在有些情況中形成(3-折疊片結(jié)構(gòu)一部分的三個(gè)CDR連接。每條鏈中的CDR通過FR區(qū)非常接近的保持在一起，并與另一條鏈的CDR一起促成^元體的^t原結(jié)合4立點(diǎn)的形成(參見Kabatefa/.，Segwewceso/尸rafe/似。///wwM"o/og7'ca//"femst，第5版，NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD.(1991))。恒定域不直接參與抗體與抗原的結(jié)合，但展現(xiàn)出多種效應(yīng)器功能，諸如抗體依賴性細(xì)胞的細(xì)胞中抗體的參與。用木瓜蛋白酶消化抗體產(chǎn)生兩個(gè)相同的抗原結(jié)合片段，稱為"Fab"片段，各自具有一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，及剩余的"FC"片段，其名稱反映了它易于結(jié)晶的能力。胃蛋白酶處理產(chǎn)生F(ab')2片段，它具有兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)且仍能夠交聯(lián)抗原。"Fv"是包含完整抗原識(shí)別和結(jié)合位點(diǎn)的最小抗體片段。在雙鏈Fv種類中，此區(qū)由緊密、非共價(jià)結(jié)合的一個(gè)重鏈可變域和一個(gè)輕鏈可變域的二聚體組成。在單鏈Fv種類中，一個(gè)重鏈可變域和一個(gè)輕鏈可變域可以通過柔性肽'接頭共價(jià)相連，使得輕鏈和重鏈在與雙鏈Fv種類類似的"二聚體"結(jié)構(gòu)中相結(jié)合。正是在這種構(gòu)造中，各可變域的三個(gè)CDR相互作用而在VH-VL二聚體表面上確定了一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。六個(gè)CDR共同賦予抗體以抗原結(jié)合特異性。然而，即使是單個(gè)可變域(或只包含對(duì)抗原特異的三個(gè)CDR的半個(gè)Fv)也具有識(shí)別和結(jié)合抗原的能力，只是親和力低于完整結(jié)合位點(diǎn)。Fab片段還包含輕鏈的恒定域和重鏈的第一恒定域(CH1)。Fab'片段與Fab片段的不同之處在于重鏈CH1結(jié)構(gòu)域的羧基末端增加了少數(shù)殘基，包括來(lái)自抗體鉸鏈區(qū)的一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸。Fab'-SH是本文中對(duì)其中恒定域半胱氨酸殘基攜帶游離硫醇基的Fab'的稱謂。F(ab')2抗體片段最初是作為在Fab'片段之間有鉸鏈半胱氨酸的成對(duì)Fab'片段生成的。還知道抗體片段的其它化學(xué)偶聯(lián)。根據(jù)其恒定域的氨基酸序列，來(lái)自任何脊推動(dòng)物物種的抗體(免疫球蛋白)的"輕鏈"可歸入兩種截然不同的型中的一種，稱作卡巾白(K)和拉姆達(dá)(x)。根據(jù)其重鏈恒定域的氨基S餅列，抗體(免疫球蛋白)可歸入不同的類。免疫球蛋白有五大類IgA、IgD、IgE、IgG和IgM,其中有些可進(jìn)一步分為亞類(同種型)，例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2。將與不同類的免疫球蛋白對(duì)應(yīng)的重鏈恒定域分別稱作a、S、s、y和P。不同類別免疫球蛋白的亞基結(jié)構(gòu)和三維構(gòu)造是眾所周知的，一般性描述于例如Abbasetal.,CellularandMol.Immunology,4thed.(2000)。抗體可以是抗體與一種或多種其它蛋白質(zhì)或肽共價(jià)或非共價(jià)關(guān)聯(lián)而形成的更大融合分子的一部分。術(shù)語(yǔ)"全長(zhǎng)抗體"和"完整抗體"在本文中可互換使用，指基本上完整形式的抗體而非如下文所定義的抗體片段。該術(shù)語(yǔ)具體指重鏈包含F(xiàn)c區(qū)的抗體。"抗體片段"只包含完整抗體的一部分，其中所述部分保留該部分存在于完整抗體中時(shí)通常與之有關(guān)的至少一項(xiàng)、多至大多數(shù)或所有功能。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體片段包含完整抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)，如此保留結(jié)合抗原的能力。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體片段，例如包含fc區(qū)的抗體片段，保留通常與fc區(qū)存在于完整抗體中時(shí)通常與之有關(guān)的至少一項(xiàng)生物學(xué)功能，諸如FcRn結(jié)合、抗體半衰期調(diào)控、ADCC功能和補(bǔ)體結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體片段是體內(nèi)半衰期與完整抗體基本上相似的單價(jià)抗體。例如，這樣的抗體片段可包含一個(gè)抗原結(jié)合臂且其與能夠賦予該片段以體內(nèi)穩(wěn)定性的Fc序列相連。術(shù)語(yǔ)"單克隆抗體"在用于本文時(shí)指從一群基本上同質(zhì)的抗體獲得的抗體，即構(gòu)成群體的各個(gè)抗體相同，除了可以極小量存在的可能的天然存在突變外。如此，修飾語(yǔ)"單克隆，，表明抗體不是分立的抗體的混合物的特征。此類單克隆抗體典型的包括包含結(jié)合靶物的多肽序列的抗體，其中靶物結(jié)合多肽序列是通過包括從眾多多肽序列中選擇單一靶物結(jié)合多肽序列在內(nèi)的過程得到的。例如，選擇過程可以是從眾多克隆諸如雜交瘤克隆、噬菌體克隆或重組DNA克隆的集合中選擇獨(dú)特克隆。應(yīng)當(dāng)理解，選定的靶物結(jié)合序列可進(jìn)一步改變，例如為了提高對(duì)靶物的親和力、將靶物結(jié)合序列人源化、提高其在細(xì)胞培養(yǎng)物中的產(chǎn)量、降低其在體內(nèi)的免疫原性、創(chuàng)建多特異性抗體等，而且包含改變后的靶物結(jié)合序列的抗體也是本發(fā)明的單克隆抗體。與典型的包含針對(duì)不同決定簇(表位)的不同抗體的多克隆抗體制備物不同，單克隆抗體制備物的每種單克隆抗體針對(duì)抗原上的單一決定簇。在它們的特異性之外，單克隆抗體制備物的優(yōu)勢(shì)在于它們通常未受到其它免疫球蛋白的污染。修飾語(yǔ)"單克隆"指明抗體從基本上同質(zhì)的抗體群獲得的特征，不應(yīng)解釋為要求通過任何特定方法來(lái)生產(chǎn)抗體。例如，將依照本發(fā)明使用的單克隆抗體可通過多種技術(shù)來(lái)生成，包括例如雜交瘤法(例如Kohlerda/.,A^w^256:495(1975);Harlowefa/"勘/7'6o(i/w丄a60rato7Mawwa/,ColdSpringHarborLaboratoryPress,第2版,1988;Hammerlingo/.，于Mo"oc/owa/y^幼c^/asam/r-Ce〃//>^nWomas，563-681,Elsevier,N.Y.,1981)、重組DNA法(參見例如美國(guó)專利No.4,816,567)、噬菌體展示技術(shù)(參見例如Clackson淑臟352:624-628(1991);Marks"a/.，M/.編.222:581-597(1992);Sidhu&a/.,JAfo/.所o/.338(2):299-310(2004);Lee"a/"JjWo/.340(5):1073-1093(2004);Fellouse，尸rac.TVaf.爿cadSc/.23101(34):12467-12472(2004);Lee"a/"J/畫腳/.M"Ws284(1-2):119-132(2004))、及用于在具有部分或整個(gè)人免疫球蛋白基因座或編碼人免疫球蛋白96/34096;WO96/33735;WO91/10741;Jakobovits"a/.，Ato/.Jcad90:2551(1993);Jakobovitsd7Va&w362:255-258(1993);Bruggemannda/.,/"/wm朋o/.7:33(1993);美國(guó)專利No.5,545,807;5,545,806;5,569,825;5,625,126;5,633,425;5,661,016;Marks"a/.,5/o/rec/^o/，10:779-783(1992);Lonberg"a/"Atowe368:856-859(1994);Morrison,Atowe368:812-813(1994);Fishwild&"/.,胸廳腸tec/mo/.14:845-851(1996);Neuberger,A^wre所otec/mo/.14:826(1996);LonbergandHuszar,/"fem.iev./mw,/.13:65-93(1995》。單克隆抗體在本文中明確包括"嵌合"抗體，其中重鏈和/或輕鏈的一部分與衍生自特定物種或?qū)儆谔囟贵w類別或亞類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源，而鏈的剩余部分與衍生自另一物種或?qū)儆诹硪豢贵w類別或亞類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源，以及此類抗體的片段，只要它們展現(xiàn)出期望的生物學(xué)活性(美國(guó)專利No.4,816,567;Morrison等，尸rac.A^/,爿cad6W.81:6851-6855(1984))。非人(例如鼠)抗體的"人源化，，形式指最低限度包含衍生自非人免疫球蛋白的序列的嵌合抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，人源化抗體指人免疫球蛋白(受體抗體)中的高變區(qū)殘基用具有期望特異性、親和力和/或能力的非人物種(供體抗體)諸如小鼠、大鼠、兔或非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物的高變區(qū)殘基替換的免疫球蛋白。在有些情況中，將人免疫球蛋白的框架區(qū)(FR)殘基用相應(yīng)的非人殘基替換。此外，人源化抗體可包含在受體抗體或供體抗體中沒有找到的殘基。進(jìn)行這些修飾是為了進(jìn)一步改進(jìn)抗體的性能。一般而言，人源化抗體將包含至少一個(gè)、通常兩個(gè)基本上整個(gè)如下可變域，其中所有或基本上所有高變環(huán)對(duì)應(yīng)于非人免疫球蛋白的高變環(huán)，且所有或基本上所有FR是人免疫球蛋白序列的FR。人源化抗體任選還將包含至少部分免疫球蛋白恒定區(qū)(Fc),通常是人免疫球蛋白的恒定區(qū)。更多細(xì)節(jié)參見Jones"a/.，A^m"321:522-525(1986);Riechmannda/.,淑騰332:323-329(1988);和Presta,C贓Op.祝o/.2:593-596(1992)。還可參見以下綜述及其引用的參考文獻(xiàn)VaswaniandHamilton,Ann.Allergy,Asthma&Immunol.1:105-115(1998);Harris,Biochem.Soc.Transactions23:1035-1038(1995);HurleandGross,Curr.Op.Biotech.5:428-433(1994)。術(shù)語(yǔ)"高變區(qū)"、"HVR"或"HV"在用于本文時(shí)指抗體可變域中序列上高度可變和/或形成結(jié)構(gòu)上定義的環(huán)的區(qū)域。通常，抗體包含六個(gè)高變區(qū)三個(gè)在VH中(Hl、H2、H3),三個(gè)在VL中(Ll、L2、L3)。本文中使用且涵蓋許多高變區(qū)的敘述。Kabat互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)是以序列變異性為基礎(chǔ)的，而且是最常用的(Kabat^a/.，Se《we"ceo/尸ra^/rao/7m附w"o/og7'ca//"femst,i5thEd.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda，MD.(1991))。術(shù)語(yǔ)"HVR"前面的字母"HC"和"LC"分別指重鏈和輕鏈的CDR。Chothia改為指結(jié)構(gòu)環(huán)的位置(ChothiaandLesk,JMo/.歷o/.196:901-917(1987))。AbM高變區(qū)代表KabatCDR與Chothia結(jié)構(gòu)環(huán)之間的折衷，而且得到OxfordMolecular的AbM抗體建模軟件的使用。"接觸"高變區(qū)是以對(duì)可獲得的復(fù)合物晶體結(jié)構(gòu)的分析為基礎(chǔ)的。下文記錄了這些高變區(qū)中每一個(gè)的殘基。環(huán)KabatAbMChothia接觸LIL24-L34L24-L34L26-L32L30-L36L50-L56L50-L56L50-L52L46-L55L89-L97L89-L97L91-L96L89-L96HIH31-H35BH26-H35BH26-H32H30-H35B(Kabat編號(hào))HIH31-H35H26-H35H26-H32H30-H35(Chothia編號(hào))H2H50-H65H50-H58H53-H55H47-H58H3H95-H102H95-H102H96-H101H93-H101高變區(qū)可包括如下"延伸的高變區(qū)"VL中的24-36或24-34(Ll)、46-56或50-56(L2)和89-97或89-96(L3)及VH中的26-35(Hl)、50-65或49-65(H2)和93-102、94-102或95-102(H3)。對(duì)于這些定義中的每一個(gè)，可變區(qū)殘基是依照Kabat等，見上文編號(hào)的。"框架"或"FR"殘基指可變域中除本文中所定義的高變區(qū)殘基外的那些殘基。25術(shù)語(yǔ)"依照Kabat的可變域殘基編號(hào)"或"依照Kabat的氨基酸位置編號(hào)"及其變體指Kabatetal.，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,5thEd.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda，MD.(1991)中的抗體編輯用于重鏈可變域或輕鏈可變域的編號(hào)系統(tǒng)。^f吏用此編號(hào)系統(tǒng)，實(shí)際的線性氨基酸序列可包含較少或另外的氨基酸，對(duì)應(yīng)于可變域FR或HVR的縮短或插入。例如，重鏈可變域可包含H2殘基52后的單一氨基酸插入(依照Kabat為殘基52a)及重鏈FR殘基82后的插入殘基(例如依照Kabat為殘基82a、82b和82c等)。給定抗體的Kabat殘基編號(hào)可通過將抗體序列與"標(biāo)準(zhǔn)"Kabat編號(hào)序列對(duì)比同源區(qū)來(lái)確定。"單鏈Fv，，或"scFv"抗體片段包含抗體的Vh和Vl結(jié)構(gòu)域，其中這些結(jié)構(gòu)域存在于一條多肽鏈上。一般而言，scFv多肽在VH與VL結(jié)構(gòu)域之間還包含多肽接頭，使得scFv能夠形成結(jié)合抗原的期望結(jié)構(gòu)。關(guān)于scFv的綜述參見Pluckthun，于77ze/VzaT-maco/o^o/Afowoc/owa/vol.113,RosenburgandMoore編,Springer-Verlag,NewYork,pp.269-315(1994)。術(shù)語(yǔ)"雙抗體"指具有兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的小型抗體片段，該片段在同一條多肽鏈(VH-vj中包含相連的重鏈可變域(VH)和輕鏈可變域(vo。通過使用過短的接頭使得同一條鏈上的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域之間不能配對(duì)，迫使這些結(jié)構(gòu)域與另一條鏈的互補(bǔ)結(jié)構(gòu)域配對(duì)，從而產(chǎn)生兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。雙抗體更完整的記載于例如EP404,097;WO93/1161;Hollinger&a/.,iVoc,7Va/.爿cad園90:6444-6448(1993)。"人抗體"指擁有與由人生成的抗體的氨基酸序列對(duì)應(yīng)的氨基酸序列和定義明確排除包含非人抗原結(jié)合殘基的人源化抗體。"親和力成熟的"抗體指在抗體的一個(gè)或多個(gè)HVR中具有一處或多處改變、導(dǎo)致該抗體對(duì)抗原的親和力與沒有這些改變的親本抗體相比有所改進(jìn)的抗體。在一個(gè)實(shí)施方案，親和力成熟的抗體具有納摩爾或甚至皮摩爾量級(jí)的對(duì)耙抗原的親和力。親和力成熟的抗體可通過本領(lǐng)域已知規(guī)/程來(lái)生成。Marks""/.,歷o/Tec/z"o/ogv10:779-783(1992)記載了通過VH和VL結(jié)構(gòu)域改組進(jìn)行的親和力成熟。以下文獻(xiàn)記載了CDR和/或框架殘基的隨機(jī)誘變Barbas"a/.，Ato.^cadSW.91:3809-3813(1994);SchierWa/.，Ge"e169:147-155(1995);Yelton"a/,，//顯畫/.155:1994-2004(1995);Jacksona/.，/mmwm/.154(7):3310-9(1995);HawkinsWa/"Mo/.5/o/.226:889-896(1992)。"阻斷性"抗體(blockingantibody)或"拮抗性"抗體(antagonistantibody)指抑制或降低其所結(jié)合的抗原的生物學(xué)活性的抗體。某些的阻斷性抗體或拮抗性抗體實(shí)質(zhì)或完全抑制抗原的生物學(xué)活性。"激動(dòng)性抗體(agonistantibody)"在用于本文時(shí)指才莫擬目的多肽的至少一項(xiàng)功能性活性的抗體。"病癥"指任何會(huì)受益于本發(fā)明的抗體的治療的疾患。這包括慢性和急性病癥或疾病，包括那些使哺乳動(dòng)物傾向于所討i侖病癥的病理狀況。本文中4寺治療的病癥的非限制性例子包括感染、細(xì)胞增殖性病癥、免疫性/炎性病癥(包括但不限于自身免疫性病癥)、和其它干擾素相關(guān)病癥。術(shù)語(yǔ)"感染"指由一種或多種其它生物體侵入或侵犯受到感染的哺乳動(dòng)物正常生理學(xué)引起的疾病。感染的例子包括但不限于病毒感染、細(xì)菌感染、寄生蟲感染(例如由蠕蟲和線蟲引起的感染)、和真菌感染。術(shù)語(yǔ)"細(xì)胞增殖性病癥"和"增殖性病癥"指與一定程度的異常細(xì)胞增殖有關(guān)的病癥。在一個(gè)實(shí)施方案中，細(xì)胞增殖性病癥指癌癥。術(shù)語(yǔ)"癌癥"和"癌性"指向或描述哺乳動(dòng)物中特征通常為細(xì)胞生長(zhǎng)/增殖不受調(diào)控和例如腫瘤形成的生理疾患。癌癥的例子包括但不限于癌、淋巴瘤(例如何杰金氏(Hodgkin)淋巴瘤和非何杰金氏淋巴瘤)、母細(xì)胞瘤、肉瘤和白血病。此類癌癥的更具體例子包括鱗狀細(xì)胞癌、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、肺的腺癌、肺的鱗癌、腹膜癌、肝細(xì)胞癌、胃腸癌、胰腺癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、宮頸癌、卵巢癌、肝癌(livercancer)、膀胱癌、肝瘤(hepatoma)、乳腺癌、結(jié)腸癌、結(jié)腸直腸癌、子宮內(nèi)膜癌或子宮癌、唾液腺癌、腎癌、前列腺癌、外陰癌、曱狀腺癌、肝癌(hepaticcarcinoma)、白血病和其它淋巴增殖性病癥、及各種類型的頭和頸癌。細(xì)胞增殖性病癥還包括但不限于白血病前病癥，諸如骨髓增生異常綜合征(MDS)。"月中瘤"在用于本文時(shí)指所有腫瘤性細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖，無(wú)論是惡性的還是良性的，及所有癌前(pre-cancerous)和癌性細(xì)月包和組織。術(shù)語(yǔ)"癌癥"、"癌性"、"細(xì)胞增殖性紊亂"、"增殖性紊亂"和"腫瘤，，在本文中提到時(shí)并不互相排斥。術(shù)語(yǔ)"干擾素相關(guān)病癥，，指向或描述典型的以一種或多種干擾素的異常量或活性為特征或歸咎于此的病癥。干擾素相關(guān)病癥的例子包括但不限于，術(shù)語(yǔ)"炎性病癥，，和"免疫性病癥"指向或描述由異常免疫學(xué)機(jī)制和/或異常細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)(例如異常千擾素信號(hào)傳導(dǎo))引起的病癥。炎性和免疫性病癥的例子包括但不限于自身免疫性疾病、免疫學(xué)缺陷綜合征、和超敏感性。"自身免疫性疾病"或"自身免疫病"在本文中指源于且針對(duì)個(gè)體自身組織的非惡性疾病或病癥。自身免疫病在本文中明確排除惡性或癌性疾病或疾患，尤其排除B細(xì)胞淋巴瘤、急性成淋巴細(xì)胞白血病(ALL)、慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)、毛細(xì)胞白血病和慢性成髓細(xì)胞白血病。自身免疫性疾病或病癥的例子包括但不限于炎性應(yīng)答，諸如炎性皮膚病，包括銀屑病和皮炎(例如特應(yīng)性皮炎)；系統(tǒng)性硬皮病和硬化；與炎性腸病有關(guān)的應(yīng)答(諸如克羅恩氏(Crohn)病和潰瘍性結(jié)腸炎)；呼吸窘迫綜合征(包括成人呼吸窘迫綜合癥(ARDS));皮炎；腦膜炎；腦炎；葡萄膜炎；結(jié)腸炎；腎小球腎炎；過敏狀況，諸如濕滲和哮喘及牽涉T細(xì)胞浸潤(rùn)和慢性炎性應(yīng)答的其它狀況；動(dòng)脈粥樣硬化；白細(xì)胞粘著缺陷；類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)(包括但不限于狼瘡腎炎、皮膚狼瘡)；糖尿病(例如I型糖尿病或胰島素依賴性糖尿病)；多發(fā)性硬化；雷諾氏(Reynaud)綜合征；自身免疫性曱狀腺炎；橋本氏(Hashimoto)曱狀腺炎；變應(yīng)性腦脊髓炎；斯耶格倫氏(Sjogren)綜合征;幼發(fā)型糖尿??；通常在結(jié)核病、結(jié)節(jié)病、多肌炎、肉芽腫病和血管炎中發(fā)現(xiàn)的與細(xì)胞因子和T-淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的急性和遲發(fā)性超^:感性有關(guān)的免疫應(yīng)答；惡性貧血(阿狄森氏(Addison)病)；牽涉白細(xì)胞滲出的疾??；中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)炎性病癥；多器官損傷綜合征；溶血性貧血(包括但不限于冷球蛋白血癥或庫(kù)姆斯氏(Coombs)陽(yáng)性貧血)；重癥肌無(wú)力；抗原-抗體復(fù)合物介導(dǎo)的疾??；抗腎小球基膜??；抗磷脂綜合癥；過每文性神經(jīng)炎；格雷夫斯氏(Graves)??；朗-伊二氏(Lambert-Eaton)肌無(wú)力綜合癥；大皰性類天皰瘡；天皰瘡；自身免疫性多種內(nèi)分泌腺病；萊特氏(Reiter)病；僵人綜合癥；貝切特氏(Behcet)??；巨細(xì)胞動(dòng)脈炎；免疫復(fù)合物腎炎；IgA腎病；IgM多神經(jīng)??；免疫性血小板減少性紫癜(ITP)或自身免疫性血小板減少癥等。免疫學(xué)缺陷綜合征的例子包括，但不限于，共濟(jì)失調(diào)性毛細(xì)血管擴(kuò)張癥、白血病粘著缺陷綜合征、淋巴細(xì)胞減少、異常丙種球蛋白血癥、HIV或5逆轉(zhuǎn)錄病毒感染、常見變異型免疫缺陷、無(wú)丙種球蛋白血癥、DiGeorge綜合征、和Wiskott-Aldrich綜合征。超敏感性的例子包括，但不限于，變態(tài)反應(yīng)、哮喘、皮炎、蕁麻滲、過敏反應(yīng)、Wissler氏綜合征、和血小板減少性紫癜。在用于本文時(shí)，"治療"或"處理"指試圖改變所治療個(gè)體或細(xì)胞的自然進(jìn)程的臨床干預(yù)，可以是為了預(yù)防或在臨床病理學(xué)的進(jìn)程中進(jìn)行。治療的期望效果包括預(yù)防疾病的發(fā)生或復(fù)發(fā)、緩解癥狀、削弱疾病的任何直接或間接病理學(xué)后果、預(yù)防或降低炎癥和/或組織/器官損傷、減緩疾病進(jìn)展的速率、改善或減輕疾病狀態(tài)、及免除或改善預(yù)后。在有些實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體用于延遲疾病或病癥的發(fā)生/發(fā)展。"個(gè)體"指脊推動(dòng)物。在某些實(shí)施方案中，脊推動(dòng)物指哺乳動(dòng)物。哺乳動(dòng)物包括，但不限于，牲畜(諸如牛)、運(yùn)動(dòng)用動(dòng)物、寵物(諸如貓、犬、和馬)、靈長(zhǎng)類動(dòng)物、小鼠和大鼠。在某些實(shí)施方案中，脊推動(dòng)物指人。為了治療的目的，"哺乳動(dòng)物"指歸入哺乳類的任何動(dòng)物，包括人，家畜和牲畜，及動(dòng)物園、運(yùn)動(dòng)或?qū)櫸飫?dòng)物，諸如犬、馬、貓、牛等。在某些實(shí)施方案中，哺乳動(dòng)物指人。"有效量，，指在必需的劑量和時(shí)間上有效實(shí)現(xiàn)期望的治療或預(yù)防效果的量。本發(fā)明的物質(zhì)/分子的"治療有效量"可根據(jù)諸如個(gè)體的疾病狀態(tài)、年齡、性別和體重及該物質(zhì)/分子在個(gè)體中引發(fā)期望應(yīng)答的能力等因素而變化。治療有效量還指該物質(zhì)/分子的治療有益效果勝過任何有毒或有害后果的量。"預(yù)防有效量"指在必需的劑量和時(shí)間上有效實(shí)現(xiàn)期望的預(yù)防效果的量。通常而非必然，由于預(yù)防劑量是在疾病發(fā)作之前或在疾病的早期用于受試者的，因此預(yù)防有效量將低于治療有效量。術(shù)語(yǔ)"細(xì)胞毒劑，，在用于本文時(shí)指抑制或防止細(xì)胞的功能和/或引起細(xì)胞破壞的物質(zhì)。該術(shù)語(yǔ)意圖包括放射性同位素，例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb"2和Lu的放射性同位素；化療劑，例如曱氨蟲菜卩令(methotrexate)、阿霉素(adriamycin)、長(zhǎng)春花生物石威類(vincaalkaloids)(長(zhǎng)春新石威(vincristine)、長(zhǎng)春石咸(vinblastine)、依4乇泊苦(etoposide))、多柔比星(doxorubicin)、美法侖(melphalan)、絲裂霉素(mitomycin)C、苯丁酸氮芥(chlorambucil),柔紅霉素(daunorubicin)或其它嵌入劑；酶及其片段，諸如溶核酶；抗生素；和毒素，諸如小分子毒素或者細(xì)菌、真菌、植物或動(dòng)物起源的酶活毒素，包括其片段和/或變體；及下文披露的各種抗腫瘤藥或抗癌藥。下文記載了其它細(xì)胞毒劑。殺腫瘤藥引起腫瘤細(xì)胞的破壞。"化療劑"指可用于治療癌癥的化學(xué)化合物?；焺┑膶?shí)例包括烷化劑類(alkylatingagents)，諸如塞替派(thiotepa)和CYTOXAN環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide);石黃酸烷基酯類(alkylsulfonates),i者如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和p底泊舒凡(piposulfan);氮丙^定類(aziridines)，i者》口苯佐替派(benzodepa)、卡波醌(carboquone)、美妥替派(meturedepa)和烏瑞替派(uredepa);乙撐亞胺類(ethylenimines)和曱基蜜胺類(methylamelamines)，包括六曱蜜胺(altretamine)、三乙撐蜜胺(triethylenemelamine)、三乙撐磷酰胺(triethylenephosphoramide)、三乙撐石jM戈石粦酰胺(triethylenethiophosphoramide)和三羥曱蜜胺(trimethylolomelamine);番篇枝內(nèi)酯類(acetogenin)(尤其是布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone));5-9-四氫大麻酚(tetrahydrocannabinol)(屈大麻酚(dronabinol),MARINOL);(3-才立帕醌(lapachone);拉帕醇(lapachol);牙火水仙素類(colchicines);白樺脂酸(betulinicacid);喜杉于石咸(camptothecin)(包4舌合成類似、物4乇泊替康(topotecan)(HYCAMTIN)、CPT-11(伊立替康(irinotecan)，CAMPTOSAR)、乙酰喜樹堿、東蒗菪亭(scopoletin)和9-氨基喜樹堿)；苔蘚抑素(bryostatin);callystatin;CC-1065(包括其阿多來(lái)新(adozelesin)、卡折來(lái)新(carzelesin)和比折來(lái)新(bizelesin)合成類似物)；鬼臼毒素(podophyllotoxin);鬼臼酸(podophyllinicacid);替尼泊香(teniposide);隱條素類(cryptophycins)(凈爭(zhēng)另ll是隱藻素1和隱藻素8);多拉司他汀(dolastatin);duocarmycin(包括合成類似物，KW-2189和CB1畫TM1);艾榴塞洛素(eleutherobin);pancratistatin;sarcodictyin;〉每纟帛#卩素(spongistatin);氮芥類(nitrogenmustards)，i者長(zhǎng)口苯丁酉吏氮芥(chlorambucil)、萘氮齊(chlornaphazine)、膽石舞酰胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、異環(huán)石舞酰胺(ifosfamide)、雙氯乙基曱胺(mechlorethamine)、鹽酸氧氮齊(mechlorethamineoxidehydrochloride)、美法侖(melphalan)、新氮齊(novembichin)、苯芥月旦甾醇(phenesterine)、潑尼莫司汀(prednimustine)、曲石舞胺(trofosfamide)、尿口密口定氮芥(uracilmustard);亞石肖脲類(nitrosoureas),i者^口卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、3畐莫司汀(fotemustine)、;各莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)牙口雷莫司汀(ranimustine);4元生素類，諸如烯二炔類抗生素(enediyne)(如加利車霉素(calicheamicin),尤其是加利車霉素YlI和加利車霉素coIl(參見例如Agnew，Chem.Intl.Ed.Engl.33:183-186(1994));蒽環(huán)類抗生素(dynemicin),包括dynemicinA;埃斯波霉素(esperamicin);以及新制癌素(neocarzinostatin)發(fā)色團(tuán)和相關(guān)色蛋白烯二炔類抗生素發(fā)色團(tuán))、阿克拉霉素(aclacinomycin)、放線菌素(actinomycin)、氨茴霉素(anthramycin)、偶氮絲氨酸(azaserine)、博來(lái)霉素(bleomycin)、放線菌素C(cactinomycin)、carabicin、；羊纟工零素(carminomycin)、？著癌審素，(carzinophilin)、色霉素(chromomycin)、放線菌素D(dactinomycin)、柔紅霉素(daunorubicin)、i也4乇比星(detorubicin)、6-二氣畫5畫氧-L畫正亮氛酸、ADRIAMYCIN⑧多柔比星(doxorubicin)(包括嗎啉代多柔比星、氰基嗎啉4、多柔比星、2-吡咯代多柔比星和脫氧多柔比星)、表柔比星(epirubicin)、依索t匕星(esorubicin)、4尹達(dá)t匕星'(idarubicin)、麻西羅審素(marcellomycin)、絲裂審素類(mitomycins)諸如絲裂霉素C、霉酚酸(mycophenolicacid)、諾拉霉素(nogalamycin)、揪攬霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、potfiromycin、口票呤霉素(puromycin)、三鐵阿霉素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、《連,紫、菌素(streptonigrin)、《連佐星(streptozocin)、殺纟吉#亥菌素(tubercidin)、烏笨美司(ubenimex)、凈司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin);抗代謝物類，諸如曱氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU);葉酸類似物，諸如二曱葉酸(denopterin)、曱氨蟲萊呤、蟲萊酰三谷氨酸(pteropterin)、三曱曲沙(trimetrexate);噤呤類似物，i者^口氟達(dá)4立濱(fludarabine)、6-3?；?。票口令(mercaptopurine)、碌b口米嘌口令(thiamiprine)、石克鳥。票呤(thioguanine);嘧咬類似物，諸如安西他濱(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-氮尿香、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、雙脫氧尿芬(dideoxyuridine)、去氧氟尿苦(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿香(floxuridine);il激素類，諸如卡魯睪酮(calusterone)、丙酸屈4也#>酮(dromostanolonepropionate)、表石克i]l醇(epitiostanol)、美名,》克(mepitiostane)、睪內(nèi)面旨(testolactone);抗腎上&泉類，諸如氨魯米特(aminoglutethimide)、米4乇坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane);葉酸補(bǔ)充劑，諸如亞葉酸(folinicacid);醋葡醛內(nèi)酯(aceglatone);醛磷酰胺糖苷(aldophosphamideglycoside);氨基乙酰丙酉吏(aminolevulinicacid);恩尿。密口定(eniluracil);安吖口定(amsacrine);bestrabucil;比生群(bisantrene);依達(dá)曲沙(edatraxate);地磷酰胺(defosfamide);地美可辛(demecolcine);地吖醌(diaziquone);elfornithine;依利醋按(elliptiniumacetate);i矣i皮審素(epothilone);依托格魯(etoglucid);硝酸鎵；幾脲(hydroxyurea);香菇多糖(lentinan);氯尼達(dá)明(lonidamine);美登木素生物石威類(maytansinoids),"i者如美登素(maytansine)31和美登醇(maytansinol);安絲菌素(ansamitocin);米托胍腙(mitoguazone);米托蒽醌(mitoxantrone);莫旅達(dá)醇(mopidamol);二胺硝吖口定(nitracrine);噴司他丁(pentostatin);蛋氨氮芥(phenamet);他柔比星(pirarubicin);洛索蒽酉昆(losoxantrone);2-乙基酰肼(ethylhydrazide);丙卡巴肼(procarbazine);PSK多糖復(fù)合物(JHSNaturalProducts,Eugene,OR);雷佐生(razoxane);才艮霉素(rhizoxin);西索菲蘭(sizofiran);螺旋鍺(spirogermanium);纟田交鏈孑包菌酮酸'(tenuazonicacid);三亞胺醌(triaziquone);2，2',2"-三氯三乙胺；單端孢菌素類(trichothecenes)(尤其是T-2毒素、疣孑包菌素(verrucarin)A、桿孑包菌素(roridin)A和蛇行菌素(anguidin));烏拉坦(urethan);長(zhǎng)春地辛(vindesine)(ELDISINE,'FILDESIN);達(dá)卡巴。秦(dacarbazine);甘露醇氮芥(mannomustine);二溴甘露醇(mitobronitol);二溴衛(wèi)矛醇(mitolactol);，派泊溴烷(pipobroman);gacytosine;阿糖胞苷(arabinoside)("Ara-C");塞替派(thiotepa);類紫杉醇(taxoids)，例如TAXOL⑧紫杉醇(paclitaxel)(Bristol-MyersSquibbOncology,Princeton,N丄)、ABRAXANETM不含克列莫佛(Cremophor)，清蛋白改造的納米顆斗立劑型紫杉醇(AmericanPharmaceuticalPartners,Schaumberg,Illinois)和TAXOTERE⑧多西他塞(doxetaxel)(Rh6ne-PoulencRorer,Antony,France);苯丁酸氮芥(chlorambucil);吉西他濱(gemcitabine)(GEMZAR);6-硫鳥嘌p令(thioguanine);巰基口票口令(mercaptopurine);曱氨蟲萊p令(methotrexate);柏類4以物，諸如順柏(cisplatin)和卡柏(carboplatin);長(zhǎng)春堿(vinblastine)(VELBAN);柏；依托泊苷(etoposide)(VP-16);異環(huán)磷酰胺(ifosfamide);米托蒽醌(mitoxantrone);長(zhǎng)春新石威(vincristine)(ONCOVIN);奧沙利柏(oxaliplatin);亞葉酸(leucovorin);長(zhǎng)春瑞濱(vinorelbine)(NAVELBINE);能滅瘤(novantrone);依達(dá)曲沙(edatrexate);道諾霉素(daunomycin);氛基蝶吟(aminopterin);伊本膦酸鹽(ibandronate);拓樸異構(gòu)酶抑制劑RFS2000;二氟曱基鳥氨酸(DMFO);類維A酸(retinoids)，諸如維A酸(retinoicacid);卡培他濱(capecitabine)(XELODA);任何上述物質(zhì)的藥學(xué)可接受鹽、酸或衍生物；以及兩種或多種上述物質(zhì)的組合，諸如CHOP(環(huán)磷酰胺、多柔比星、長(zhǎng)春新石咸和潑尼+>龍聯(lián)合療法的縮寫)和FOLFOX(奧沙利鉑(ELOXATIN)聯(lián)合5-FU和亞葉酸的治療方案的縮寫)。該定義還包括作用為調(diào)節(jié)、降低、阻斷、或抑制可促進(jìn)癌生長(zhǎng)的激素效果的抗激素劑，且常常是系統(tǒng)或全身治療的形式。它們自身可以是激素。實(shí)例包括抗雌激素類和選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑類(SERM)，包括例如他莫昔芬(tamoxifen)(包括NOLVADEX⑧他莫昔芬)、EVISTA⑧雷洛昔芬(raloxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、那洛昔芬(keoxifene)、LY117018、奧那司酮(onapristone)和FARESTON托瑞米芬(toremifene);抗孕酮類；雌激素受體下調(diào)劑類(ERD);功能為抑制或關(guān)閉卵巢的藥劑，例如促黃體生成激素釋放激素(LHRH)激動(dòng)劑，諸如LUPRON⑧和ELIGARD醋酸亮丙瑞林(leuprolideacetate)、醋酸戈舍瑞林(goserelinacetate)、醋酸布舍瑞4木(buserelinacetate)和曲普瑞4木(triptorelin);其它拍L雄激素類，諸如氟他米特(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)和比卡米特(bicalutamide);及抑制在腎上腺中調(diào)節(jié)雌激素生成的芳香酶的芳香酶抑制劑，諸如例如4(5)-咪唑、氨魯米特(aminoglutethimide)、MEGASE⑧醋酸曱地孕酮(megestrolacetate)、AROMASIN依西美坦(exemestane)、福美坦(formestane)、法倔唑(fadrozole)、RIVISOR⑧伏羅唑(vorozole)、FEMARA來(lái)曲唑(letrozole)和ARIMIDEX⑧阿那曲唑(anastrozole)。另外，化療劑的這種定義包括二騰fe鹽類(bisphosphonates),i者長(zhǎng)口氯騰臥吏鹽(clodronate)(例々口BONEFOS⑧或OSTAC⑧)、DIDROCAL⑧依替膦酸鈉(etidronate)、NE-58095、ZOMETA⑧唑來(lái)膦酸/唑來(lái)膦酸鹽(zoledronicacid/zoledronate)、FOSAMAX阿倫膦酸鹽(alendronate)、AREDIA⑧帕米膦酸鹽(pamidronate)、SKELID⑧替魯膦酸鹽(tiludronate)或ACTONEL⑧利塞膦酸鹽(risedronate);以及曲沙他濱(troxacitabine)(1,3-二氧戊環(huán)核苷胞嘧啶類似物)；反義寡核苷酸，特別是抑制牽涉粘著細(xì)胞增殖的信號(hào)途經(jīng)中的基因表達(dá)的反義寡核苷酸，諸如例如PKC-oc、Raf、H-Ras和表皮生長(zhǎng)因子受體(EGF-R);疫苗，諸如THERATOPE⑧疫苗和基因療法疫苗，例如ALLOVECTIN疫苗、LEUVECTIN疫苗和VAXID⑧疫苗；LURTOTECAN⑧拓樸異構(gòu)酶l抑制劑；ABARELIX⑧rmRH;lapatinibditosylate(ErbB-2和EGFR雙重酪氨酸激酶小分子抑制劑，也稱為GW572016);及任何上述物質(zhì)的藥學(xué)可接受鹽、酸或衍生物?；衔锛捌渲苽浞椒?br>技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明提供了與RELT特異性結(jié)合的抗體。一方面，本發(fā)明提供了包含如下HVR-H1區(qū)的抗體，該HVR-H1區(qū)包含SEQIDNO:42-49至少之一的序列。一方面，本發(fā)明提供了包含如下HVR-H2區(qū)的抗體，該HVR-H2區(qū)包含SEQIDNO:51-58至少之一的序列。一方面，本發(fā)明4是供了包含如下HVR-H3區(qū)的抗體，該HVR-H3區(qū)包含SEQIDNO:60-67至少之一的序列。一方面，本發(fā)明提供了包含如下HVR-H1區(qū)和如下HVR-H2區(qū)的抗體，該HVR-H1區(qū)包含SEQIDNO:42-49至少之一的序列，且該HVR-H2區(qū)包含SEQIDNO:51-58至少之一的序列。一方面，本發(fā)明提供了包含如下HVR-H3區(qū)的抗體，該HVR-H3區(qū)包含SEQIDNO:60-67至少之一的序列。一方面，本發(fā)明提供了包含如下HVR-H1區(qū)和如下HVR-H3區(qū)的抗體，該HVR-H1區(qū)包含SEQIDNO:42-49至少之一的序列，且該HVR-H3區(qū)包含SEQIDNO:60-67至少之一的序列。一方面，本發(fā)明提供了包含如下HVR-H2區(qū)和如下HVR-H3'區(qū)的抗體，該HVR-H2區(qū)包含SEQIDNO:51-58至少之一的序列，且該HVR-H3區(qū)包含SEQIDNO:60-67至少之一的序列。一方面，本發(fā)明提供了包含至少一個(gè)、至少兩個(gè)、或所有三個(gè)以下序列的抗體(i)HVR-H1序列，其包含SEQIDNO:42-49至少之一的序列；(ii)HVR-H2序列，其包含SEQIDNO:51-58至少之一的序列；(iii)HVR-H3序列，其包含SEQIDNO:60-67至少之一的序列。如圖5A和5B所示，SEQIDNO:42-49、51-58、和60-67的氨基酸序列對(duì)各個(gè)HVR(即H1、H2或H3)進(jìn)行了編號(hào)，編號(hào)方式與如下所述的Kabat編號(hào)系統(tǒng)是一致的。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體包含上文(i)-(iii)中的一個(gè)、兩個(gè)、或三個(gè)HVR序列，及SEQIDNO:l或2所示的輕鏈高變區(qū)。一方面，本發(fā)明提供了包含圖5A和5B所示重鏈HVR序列的抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體進(jìn)一步包含SEQIDNO:1或2所示輕鏈HVR序列。本發(fā)明抗體的有些實(shí)施方案包含下文SEQIDNO:l所示人源化4D5抗體(huMAb4D5-8)(HERCEPTIN,Genentech,Inc.,SouthSanFrancisco,CA,USA)(還可參見美國(guó)專利No.6,407,213和Leeetal.，J.Mol.Biol.(2004),340(5):1073-93)的輕鏈可變域。1AsplieGinMetThrGinSerProSerSerLeuSerAlaSerValGlyAspArgValThrlieThrCysArgAlaSerGinAspValThrAlaValAlaTipTyrGinGinLysProGlyLysAlaProLysLeuLeulieTyrSerAlaSerPheLeuTyrSerGlyValProSerArgPheSerGlySer^4fgSerGlyThrAspPheThrLeuThrlieSerSerLeuGinProGluAspPheAlaThrTyrTyrCysGinGin歷sTvrThrThrProProThrPheGlyGinGlyThrLysValGlulieLys107(SEQIDNO:1)(HVR殘基標(biāo)有下劃線)在一個(gè)實(shí)施方案中，所述huMAb4D5-8輕鏈可變域序列在第30、66和91位(在上文中分別以粗體/斜體標(biāo)示的Asn、Arg和His)中的一個(gè)或多個(gè)處有修飾。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述經(jīng)過修飾的huMAb4D5-8序列在第30位包含Ser,在第66位包含Gly，和/或在第91位包含Ser。因而，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體包含輕鏈可變域，其包含下文SEQIDNO:2所示序列1AsplieGinMetThrGinSerProSerSerLeuSerAlaSerValGlyAspArgValThrlieThrCysArgAlaSerGinAspValThrAlaValAlaTrpTyrGinGinLysProGlyLysAlaProSerArgPheSerGlySerG(ySerGlyThrAspPheThrLeuThrlieSerSerLeuGinProGluAspPheAlaThrTyrTyrCysGinGin&rTyrThrThrProProThrPheGlyGinGlyThrLysValGlulieLys107(SEQIDNO:2)(HVR殘基標(biāo)有下劃線)相對(duì)于huMAb4D5-8的替代殘基在上文中以粗體/斜體標(biāo)示。本發(fā)明的抗體可包含任何合適的框架可變域序列，倘若對(duì)RELT的結(jié)合活性基本上得到保留。例如，在有些實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體包含人亞組ni重鏈框架共有序列。在這些抗體的一個(gè)實(shí)施方案中，所述框架共有序列在第71、73和/或78位包含替代。在這些抗體的有些實(shí)施方案中，第71位為A,第73位為T,和/或第78位為A。在一個(gè)實(shí)施方案中，這些抗體包含huMAb4D5-8(HERCEPTIN,Genentech，Inc.,SouthSanFrancisco,CA，USA)(還可參見美國(guó)專利No.6,407,213&5,821,337和Leeetal.,J.Mol.Biol.(2004)，340(5):1073-93)的重鏈可變域框架序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，這些抗體進(jìn)一步包含人Kl輕鏈框架共有序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，這些抗體包含huMAb4D5-8的輕鏈HVR^歹'J(美國(guó)專利No.6,407,213&5,821,337)。在一個(gè)實(shí)施方案中，這些抗體包含huMAb4D5-8(HERCEPTIN,Genentech,Inc.,SouthSanFrancisco,CA，USA)(還可參見美國(guó)專利No.6,407,213&5,821,337和Leeetal.，J.Mol.Biol.(2004),340(5):1073-93)的輕鏈可變域序列(SEQIDNO:l和2)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體包含重鏈可變域，其中所述框架序列包含SEQIDNO:3-21、30-33、38-41、和73-129至少之一的序列，而且HVRHl、H2和H3序列分別選自SEQIDNO:42-50、51-59、和60-68至少之一。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體包含輕鏈可變域，其中所述框架序列包含SEQIDNO:22-25、26-29、34-37、和130-141至少之一的序列,而且所述高變區(qū)選自SEQIDNO:l和2。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體包含重鏈可變域，其中所述框架序列包含SEQIDNO:3-21和73-129至少之一的序列，而且HVRH1、H2和H3序列分別為SEQIDNO:49、58、和67(克隆H11)。類似的，在其它實(shí)施方案中，克隆C21、C10、E5/E7、F4、F5、H7、和H9每一個(gè)的抗體包含重《連可變i或，其中所述框架序列包含SEQIDNO:3-21和73-129至少之一的序列，而且HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3序列就是圖5A和5B中對(duì)每種克隆或Fab具體列舉的那些序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體進(jìn)行了親和力成熟以獲得期望的靶結(jié)合親和力。一方面，本發(fā)明提供了與任何上述抗體竟?fàn)幗Y(jié)合RELT的抗體。一方面，本發(fā)明提供了與任何上述抗體結(jié)合RELT上相同抗原性決定簇的抗體。提供了包含至少一種抗RELT抗體或至少一種包含抗RELT抗體編碼序列的多核苷酸的組合物。在某些實(shí)施方案中，組合物可以是藥用組合物。在用于本文時(shí)，組合物包含一種或多種與RELT結(jié)合的抗體和/或一種或多種包含一種或多種結(jié)合RELT的抗體的編碼序列的多核香酸。這些組合物可進(jìn)一步包含合適的載體，諸如制藥學(xué)可接受的賦形劑，包括緩沖劑，它們是本領(lǐng)域眾所周知的。還提供了分離的抗體和多核苷酸。在某些實(shí)施方案中，分離的抗體和多核苷酸是基本上純的。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗RELT抗體是單克隆的。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了抗RELT抗體的片段(例如Fab、Fab，-SH、和F(ab，)2片段)。這些抗體片段可以通過傳統(tǒng)手段來(lái)創(chuàng)建，諸如酶促消化，或者可以通過重組技術(shù)來(lái)生成。此類抗體片段可以是嵌合的、人源化的、或人的。這些片段可用于下文所述診斷和治療目的。使用噬菌體展示庫(kù)生成抗RELT抗體本領(lǐng)域知道多種方法可用于生成噬菌體展示庫(kù)，從中可得到感興趣的抗體。一種生成感興趣抗體的方法是通過如Leeetal.，J,Mol.Biol.(2004)，340(5):1073-93所述使用噬菌體抗體庫(kù)。本發(fā)明的抗RELT抗體可以通過使用組合庫(kù)篩選具有期望活性的合成抗體克隆來(lái)創(chuàng)建。在原理上，通過篩選噬菌體文庫(kù)來(lái)選擇合成抗體克隆，所述噬菌體文庫(kù)含有展示融合至噬菌體外殼蛋白的各種抗體可變區(qū)(Fv)片段的噬菌體。通過針對(duì)所需抗原的親和層析淘選此類噬菌體文庫(kù)。表達(dá)能夠結(jié)合所需抗原的Fv片段的克隆被吸附至抗原，從而與文庫(kù)中不結(jié)合的克隆分開。然后將結(jié)合的克隆從抗原上洗脫，而且可以通過額外的抗原吸附/洗脫循環(huán)進(jìn)一步富集。本發(fā)明的任何抗RELT抗體可以如下獲得，即設(shè)計(jì)合適的抗原篩選規(guī)程來(lái)選擇感興趣的噬菌體克隆，接著使用來(lái)自感興趣的噬菌體克隆的Fv序歹寸和Kabatetal.,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,FifthEdition,NIHPublication91-3242，BethesdaMD(1991),vols,l-3中記載的合適的恒定區(qū)(Fc)序列構(gòu)建全長(zhǎng)抗RELT抗體克隆?？贵w的抗原結(jié)合域由兩個(gè)約110個(gè)氨基酸的可變(V)區(qū)形成，分別來(lái)自重鏈(VL)和輕鏈(VH),都呈現(xiàn)三個(gè)高變環(huán)或互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)?？勺冇蚩梢怨δ苄缘卣故驹谑删w上，或是作為單鏈Fv(scFv)片段(其中VH和VL通過短的、柔性的接頭共價(jià)相連)，或者作為Fab片段(其中它們各自與恒定域融合且非共^介相互作用)，如Winteretal.,Ann.Rev.Immunol.,12:433-455(1994)所述。在用于本文時(shí)，編碼scFv的噬菌體克隆和編碼Fab的噬菌體克隆統(tǒng)稱為"Fv噬菌體克隆"或"Fv克隆"。VH和VL基因的全集可以通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)分開克隆，并在噬菌體文庫(kù)中隨機(jī)重組，然后可以搜索抗原結(jié)合克隆，如Winteretal.,Ann.Rev.Immunol.,12:433-455(1994)所述。來(lái)自經(jīng)免疫來(lái)源的文庫(kù)能提供對(duì)免疫原有高親和力的抗體，無(wú)需構(gòu)建雜交瘤?；蛘?，可以克隆未免疫的全集，用于為廣泛的非自身的及自身的抗原提供單一人抗體來(lái)源，無(wú)需任何免疫，如Gri伍thsetal.,EMBOJ,12:725-734(1993)所述。最后，未免疫的文庫(kù)還可以以合成方式來(lái)構(gòu)建，即從干細(xì)胞克隆未重排的V基因，并使用包含隨機(jī)序列；的PCR引物來(lái)編碼高度可變的CDR3區(qū)及用來(lái)在體外實(shí)現(xiàn)重排，如HoogenboomandWinter,J.Mol.Biol.,227:381-388(1992)所述。通過與次要外殼蛋白pin融合，使用絲狀噬菌體來(lái)展示抗體片段?？贵w片段可以展示為單鏈Fv片段，其中VH與VL結(jié)構(gòu)域通過柔性多肽間隔物在同一多肽鏈上相連，例如如Marksetal.,J.Mol.Biol.，222:581-597(1991)所述，或者展示為Fab片段，其中一條鏈與pIII融合，另一條鏈分泌到細(xì)菌宿主細(xì)胞周質(zhì)中，在此裝配Fab-外殼蛋白結(jié)構(gòu)，其通過取代一些野生型外殼蛋白而展示在p羞菌體表面上，1"列^口^口Hoogenboometal.,Nucl.AcidsRes.，19:4133-4137(1991)所述。一般而言，從收獲自人或動(dòng)物的免疫細(xì)胞獲得編碼抗體基因片段的核酸。如果希望文庫(kù)偏向抗RELT克隆，那么可以給受試者免疫RELT以產(chǎn)生抗體應(yīng)答，并回收脾細(xì)胞和/或循環(huán)B細(xì)胞或其它外周血淋巴細(xì)胞(PBL)用于文庫(kù)構(gòu)建。在一個(gè)實(shí)施方案中，如下得到了偏向抗人RELT克隆的人抗體基因片段文庫(kù)，即在攜帶功能性人免疫球蛋白基因陣列(且缺乏功能性內(nèi)源抗體生成系統(tǒng))的轉(zhuǎn)基因小鼠中產(chǎn)生抗人RELT抗體應(yīng)答，使得RELT免疫產(chǎn)生生成針對(duì)RELT的人抗體的B細(xì)胞。生成人抗體的轉(zhuǎn)基因小鼠的制備方法在下文(III)(b)章節(jié)中有描述。可以如下獲得抗RELT反應(yīng)性細(xì)胞群的進(jìn)一步富集，即使用合適的篩選規(guī)程來(lái)分離表達(dá)RELT特異性膜結(jié)合抗體的B細(xì)胞，例如通過用RELT親和層析進(jìn)行的細(xì)胞分離或者細(xì)胞對(duì)熒光標(biāo)記的RELT的吸附及后續(xù)的熒光激活細(xì)胞分選(FACS)?；蛘?，來(lái)自未免疫供體的脾細(xì)胞和/或B細(xì)胞或其它PBL的使用提供了可能的抗體全集的更佳展現(xiàn)，而且還容許使用RELT在其中沒有抗原性的動(dòng)物(人或非人的)物種構(gòu)建抗體文庫(kù)。為了構(gòu)建摻入體外抗體基因的文庫(kù)，從受試者收獲干細(xì)胞以提供編碼未重排抗體基因區(qū)段的核酸。可以從多種動(dòng)物物種(諸如人、小鼠、大鼠、兔類、luprine、犬、貓、豬、牛、馬、和禽類等)獲得感興趣的免疫細(xì)胞。從感興趣的細(xì)胞回收編碼抗體可變基因區(qū)段(包括VH和VL區(qū)段)的核酸并擴(kuò)增。就重排的VH和VL基因文庫(kù)而言，可以如下獲得所需DNA,即從淋巴細(xì)胞分離基因組DNA或mRNA，接著用與重排的VH和VL基因的5'和3'末端匹配的引物進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)，如Orlandietal.,Proc.Natl.Acad.Sci.(USA),86:3833-3837(1989)所述，由此構(gòu)建多樣性V基因全集供表達(dá)?？梢詮腸DNA和基因組DNA擴(kuò)增V基因，反向引物位于編碼成熟V結(jié)構(gòu)域的外顯子的5'末端，正向引物基于J區(qū)段內(nèi)部，如Orlandietal.(1989)和Wardetal.，Nature,341:544-546(1989)所述。然而，為了從cDNA進(jìn)行擴(kuò)增，反向引物還可基于前導(dǎo)外顯子內(nèi)，如Jonesetal"Biotechnol"9:88-89(1991)所述，正向引物基于恒定區(qū)內(nèi),如Sastryetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)，86:5728-5732(1989)所述。為了使互補(bǔ)性最大化，引物中可以摻入簡(jiǎn)并性，如Orlandietal.(1989)或Sastryeta1.(1989)所述。在某些實(shí)施方案中，如下將文庫(kù)多樣性最大化，即使用靶向每個(gè)V基因家族的PCR引物來(lái)擴(kuò)增免疫細(xì)胞核酸樣品中存在的所有可獲得的VH和VL重排，例如如Marksetal.，J.Mol.Biol.,222:581-597(1991)或Ommetal.,NucleicAcidsRes.，21:4491-4498(1993)所述。為了將所擴(kuò)增的DNA克隆到表達(dá)載體中，可以在PCR引物的一端引入罕見的限制性位點(diǎn)作為標(biāo)簽，如Orlandietal.(1989)所述，或者用帶標(biāo)簽的引物進(jìn)行進(jìn)一步的PCR擴(kuò)增，如Clacksonetal.，Nature,352:624-628(1991)所述。合成重組的V基因全集可以在體外從V基因區(qū)段衍生。大多數(shù)人VR&因區(qū)段已經(jīng)克隆和測(cè)序(Tomlinsonetal.，J.Mol.Biol"227:776-798(1992)),并定位(Matsudaetal.,NatureGenet.，3:88-94(1993));這些克隆的區(qū)段(包括H1和H2環(huán)的所有主要構(gòu)造)可用于生成多樣性VI1基因全集，用到編碼序列和長(zhǎng)度多樣性的H3環(huán)的PCR引物，如HoogenboomandWinter,J.Mol.Biol.,227:381-388(1992)所述。VH全集還可如下生成，所有序列多樣性集中于單一長(zhǎng)度的長(zhǎng)H3環(huán)，如Barbasetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:4457-4461(1992)所述。人VK和V人區(qū)段已經(jīng)克隆和測(cè)序(WilliamsandWinter,Eur.J.Immunol.,23:1456-1461(1993》，而且可用于生成合成輕鏈全集。基于一系列VH和VL折疊結(jié)構(gòu)及L3和H3長(zhǎng)度的合成V基因全集將編碼具有數(shù)量可觀的結(jié)構(gòu)多樣性的抗體。擴(kuò)增編碼V基因的DNA后，依照HoogenboomandWinter,J.Mol.Biol.,227:381-388(1992)的方法，可以在體外重排種系V基因區(qū)段?？贵w片段全集可以如下構(gòu)建，即以數(shù)種方式將VH與VL基因聯(lián)合在一起?？梢栽诓煌d體中創(chuàng)建各個(gè)全集，并在體外重組載體，例如如Hogrefeetal.，Gene,128:119-126(1993)所述，或者在體外通過組合感染來(lái)重組載體，例如Waterhouseetal.，Nucl.AcidsRes.,21:2265-2266(1993)中記載的loxP系統(tǒng)。體內(nèi)重組方法利用Fab片段的雙鏈性質(zhì)來(lái)克服因大腸桿菌轉(zhuǎn)化效率施加的庫(kù)容量限制。分開克隆未免疫的VH和VL全集，一個(gè)克隆入噬菌粒，另一個(gè)克隆入噬菌體載體。然后通過用噬菌體感染含噬菌粒的細(xì)菌使得每個(gè)細(xì)胞包含一;種不同組合來(lái)聯(lián)合兩個(gè)文庫(kù)，庫(kù)容量只受細(xì)胞存在數(shù)的限制(約1012個(gè)克隆)。兩種載體都包含體內(nèi)重組信號(hào)，使得VH與VL基因重組到單一復(fù)制子上，并共包裝成噬菌體病毒粒。這些巨型文庫(kù)提供了大量的具有優(yōu)良親和力(KcT1為約l(T8M)的多樣性抗體?；蛘撸梢詫⑷来慰寺∪胪惠d體，例如如Barbasetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,88:7978-7982(1991)所述，或者通過PCR裝配到一起，然后克隆，如Clacksonetal.，Nature,352:624-628(1991)所述。PCR裝配還可用于將VH和VLDNA與編碼柔性肽間隔物的DNA連接以形成單鏈Fv(scFv)全集。在另一種技術(shù)中，"細(xì)胞內(nèi)PCR裝配"用于通過PCR在淋巴細(xì)胞內(nèi)聯(lián)合VH與VL基因，然后克隆所連接基因的全集，如Embletonetal.,Nucl.AcidsRes.,20:3831-3837(1992)所述。篩選文庫(kù)可以通過任何本領(lǐng)域已知技術(shù)來(lái)進(jìn)行。例如，RELT可用于包'被吸附板的孔，在附著至吸附板的宿主細(xì)胞上表達(dá)，或用于細(xì)胞分選，或者偶聯(lián)至生物素以用鏈霉親合素包被的珠捕捉，或者用于本領(lǐng)域已知的用于淘選噬菌體展示庫(kù)的任何其它方法。在適于至少部分噬菌體顆粒結(jié)合吸附劑的條件下，使噬菌體文庫(kù)樣品接觸固定化的RELT。正常情況下，選擇包括pH、離子強(qiáng)度、溫度等等的條件來(lái)模擬生理學(xué)條件。結(jié)合至固相的噬菌體進(jìn)行清洗，然后用酸洗脫，例如如Barbasetal.，Proc.Natl.Acad.SciUSA，88:7978-7982(1991)所述，或者用堿洗脫，例如如Marksetal.,J.Mol.Biol.，222:581-597(1991)所述，或者通過RELT抗原竟?fàn)幭疵?，例如在與Clacksonetal.,Nature,352:624-628(1991)的抗原竟?fàn)幏愃频囊?guī)程中。噬菌體在單輪選擇中可以富集20-l,000倍。此外，富集的噬菌體可以在細(xì)菌培養(yǎng)物中進(jìn)行培養(yǎng)，并進(jìn)行更多輪選擇。選擇的效率取決于許多因素，包括清洗過程中解離的動(dòng)力學(xué)，及單個(gè)噬菌體上的多個(gè)抗體片段是否能同時(shí)結(jié)合抗原。具有較快解離動(dòng)力學(xué)(和弱結(jié)合親和力)的抗體可以通過使用短時(shí)間的清洗、多價(jià)噬菌體展示、及固相中的高抗原包被密度來(lái)保留。高密度不僅通過多價(jià)相互作用而穩(wěn)定了噬菌體，而且有利于已解離的噬菌體的再結(jié)合。具有較慢解離動(dòng)力學(xué)(和強(qiáng)結(jié)合親和力)的抗體的選擇可以通過使用長(zhǎng)時(shí)間的清洗和單價(jià)噬菌體展示(如Bassetal.，Proteins,8:309-314(1990)和WO92/09690所述)及低抗原包被密度(如Marksetal.,Biotechnol.，10:779-783(1992)所述)來(lái)促進(jìn)。有可能在對(duì)RELT具有不同親和力的噬菌體抗體之間進(jìn)行選擇，甚至是親和力略有差異的。然而，選定抗體的隨機(jī)誘變(例如如有些上文所述親和-力成熟技術(shù)進(jìn)行)有可能產(chǎn)生許多突變體，多數(shù)結(jié)合抗原，少數(shù)具有更高的親和力。通過限制RELT，罕見的高親和力噬菌體能竟?fàn)巹俪?。為了保留所有較高親和力的突變體，可以將噬菌體與過量的生物素化RELT—起溫育，但是生物素化RELT的摩爾濃度低于RELT的目標(biāo)摩爾親和常數(shù)。然后用鏈霉親合素包被的順磁珠捕捉高親和力的結(jié)合噬菌體。此類"平衡捕捉"容許依照結(jié)合親和力來(lái)選擇抗體，其靈敏性容許從大大過量的低親和力噬菌體中分離出親和力只高出2倍的突變體克隆。還可以操作清洗結(jié)合至固相的噬菌體的條件來(lái)進(jìn)行基于解離動(dòng)力學(xué)的區(qū)分?？筊ELT克隆可以進(jìn)行活性選擇。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了在體內(nèi)施用時(shí)或在體外添加至MHCirDC前體細(xì)胞培養(yǎng)物時(shí)相對(duì)于cDC提高pDC生成的抗RELT抗體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了在體內(nèi)施用時(shí)提高IFN-a血清濃度或在體外添加至MHCII-DC前體細(xì)胞培養(yǎng)物時(shí)提高IFN-a分泌的抗RELT抗體。對(duì)應(yīng)于此類抗RELT抗體的Fv克隆可以如下選出(1)如上文B(I)(2)章節(jié)所述從噬菌體文庫(kù)分離抗RELT,并任選通過在合適的細(xì)菌宿主中培養(yǎng)來(lái)擴(kuò)增所分離的噬菌體克隆群；(2)選出分別期望阻斷和不阻斷其活性的RELT和第二蛋白質(zhì)；(3)使抗RELT噬菌體克隆吸附至固定化的RELT;(4)使用過量的第二蛋白質(zhì)來(lái)洗脫任何不想要的、識(shí)別RELT結(jié)合決定簇(其與第二蛋白質(zhì)的結(jié)合決定簇交疊或共享)的克?。徊?5)洗脫在步驟(4)后仍然吸附的克隆。任選的是，具有期望的阻斷/不阻斷特性的克隆可以通過一次或多次重復(fù)本文所述選擇規(guī)程來(lái)進(jìn)一步富集。編碼本發(fā)明Fv克隆的DNA易于使用常規(guī)規(guī)程分離和測(cè)序(例如通過使用設(shè)計(jì)成自雜交瘤或噬菌體DNA模板特異性擴(kuò)增感興趣的重鏈和輕鏈編碼區(qū)的寡核芬酸引物)。一旦分離，可將DNA置于表達(dá)載體中，然后將該表達(dá)載體轉(zhuǎn)染到原本不生成免疫球蛋白蛋白質(zhì)的宿主細(xì)胞中，諸如大腸桿菌細(xì)胞、猿猴COS細(xì)胞、中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞或骨髓瘤細(xì)胞，以在重組宿主細(xì)胞41中獲得所需單克隆抗體的合成。關(guān)于編碼抗體的DNA在細(xì)菌中的重組表達(dá)的綜述性論文包括Skerraetal.,Curr.OpinioninImmunol"5:256(1993)及Pluckthun,Immunol.Revs,130:151(1992)。編碼本發(fā)明Fv克隆的DNA可以聯(lián)合編碼重鏈和/或輕鏈恒定區(qū)的已知DNA序列(例如適宜的DNA序列可得自Kabatetal.,見上文)以形成編碼全長(zhǎng)或部分重鏈和/或輕鏈的克隆。應(yīng)當(dāng)領(lǐng)會(huì)，任何同種型的恒定區(qū)都可用于此目的，包括IgG、IgM、IgA、IgD和IgE恒定區(qū)，而且此類恒定區(qū)可以得自任何人或動(dòng)物物種。衍生自一種動(dòng)物(諸如人)物種的可變域DNA，然后與另、一動(dòng)物物種的恒定區(qū)DNA融合以形成"雜合的"全長(zhǎng)重鏈和/或輕鏈的編碼序列的Fv克隆包括在本文所用"嵌合"和"雜合"抗體的定義中。在一個(gè)實(shí)施方案中，衍生自人可變DNA的Fv克隆與人恒定區(qū)DNA融合以形成完全人的、全長(zhǎng)或部分重鏈和/或輕鏈的編碼序列。未免疫文庫(kù)(天然的或合成的)生成的抗體可具有中等親和力(Kd"為約106-107M")，但還可以如下在體外模擬親和力成熟，即構(gòu)建和再次選擇次生文庫(kù)(secondarylibrary),如Winteretal.(1994),見上文所述。例如，在Hawkinsetal.,J.Mol.Biol"226:889-896(1992)的方法或G腿etal"Proc.Natl.Acad.SciUSA,89:3576-3580(1992)的方法中，使用易錯(cuò)聚合酶在體外隨機(jī)引入突變(Leungetal.,Technique,1:11-15(1989))。另夕卜，可以通過隨機(jī)突變一個(gè)或多個(gè)CDR來(lái)進(jìn)行親和力成熟，例如在選定的各個(gè)Fv克隆中使用攜帶跨越感興趣CDR的隨機(jī)序列的引物進(jìn)行PCR并篩選更高親和力的克隆。WO9607754(公開于1996年3月14日)記載了用于在免疫球蛋白輕鏈的互補(bǔ)決定區(qū)中誘導(dǎo)誘變以創(chuàng)建輕鏈基因文庫(kù)的方法。另一種高效方法是將通過噬組合，并在數(shù)輪鏈改組中篩選更高親和力，如Marksetal.，Biotechnol.,10:779-783(1992)所述。此技術(shù)容許生成親和力在l()-9M范圍的抗體和抗體片段。生成抗RELT抗體的其它方法生成抗體和評(píng)估抗體親和力的其它方法是本領(lǐng)域眾所周知的，記載于例如Kohleretal"Nature256:495(1975);美國(guó)專利No.4,816,567;Goding，MonoclonalAntibodies:PrinciplesandPractice,pp.59-103(AcademicPress,1986;Kozbor，J.Immunol.,133:3001(1984);Brodeuretal"MonoclonalAntibodyProductionTechniquesandApplications,pp.51-63(MarcelDekker,Inc.,NewYork,1987;M謹(jǐn)onetal.，Anal.Biochem.,107:220(1980);Engelsetal.,Agnew.Chem.Int.Ed.Engl.，28:716-734(1989);Abrahmsenetal.,EMBOJ.,4:3901(1985);MethodsinEnzymology，vol.44(1976);Morrisonetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，81:6851-6855(1984)。通用技術(shù)一般而言，本發(fā)明提供了抗RELT抗體，其可用于治療RELT介導(dǎo)的病癥，:其中想要部分地或完全地阻斷一種或多種RELT活性。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗RELT抗體用于治療細(xì)胞增殖性病癥。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本.文中所提供的抗RELT抗體用于治療感染。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文中所提供的抗RELT抗體用于治療免疫性病癥，諸如上文所述的。本文中所提供的抗RELT抗體用于治療炎性病癥，諸如上文所述的。本文中所提供的抗RELT抗體用于治療其它的干擾素相關(guān)病癥。如本文所示，RELT是CD11+B220+CD11KCD45RB+類漿細(xì)胞樹突細(xì)胞(plasmacytoiddendriticcell)("pDC")的負(fù)調(diào)節(jié)物，但不是常規(guī)CD11c+B22(T樹突細(xì)胞("cDC")的調(diào)節(jié)物。如此，本發(fā)明的抗RELT抗體或是可以拮抗RELT的正常功能(由此提高由前體細(xì)胞生成IFN-a分泌性pDC)，或是可以激動(dòng)RELT的正常功能(由此降低由前體細(xì)胞生成IFN-a分泌性pDC),這取決于抗體所結(jié)合的表位。阻斷RELT結(jié)合其一種或多種天然配體的抗RELT抗體有可能對(duì)于RELT活性是拮抗性的。穩(wěn)定或提高RELT結(jié)合其一種或多種天然配體(即通過阻斷RELT結(jié)合一種或多種RELT遏制物或通過防止RELT降解但不干擾RELT結(jié)合其天然配體的能力)的抗RELT抗體有可能對(duì)于RELT活性是激動(dòng)性的。本發(fā)明設(shè)想了激動(dòng)性和拮抗性兩種抗體，如此提供了在體外和在體內(nèi)用本發(fā)明的抗RELT抗體提高(拮抗)或降低(激動(dòng))相對(duì)pDC和IFN-a水平的方法。另一方面，本發(fā)明的抗RELT抗體可用作檢測(cè)和分離RELT的試劑，諸如斗企測(cè)各種細(xì)胞類型和組織中的RELT,包括測(cè)定細(xì)胞群中和給定細(xì)胞內(nèi)的RELT密度和分布，及基于RELT的存在或量的細(xì)胞分選?？贵w相似的阻斷活性模式的RELT拮抗劑。例如，本發(fā)明的拮抗性抗RELT抗體可用于鑒定具有相同RELT結(jié)合特征和/或阻斷RELT介導(dǎo)途徑能力的其它抗體結(jié)合RELT的基本上相同抗原決定簇的其它抗RELT抗體，包括線性表位和構(gòu)象表位。篩選RELT的小分子拮抗劑，其在阻斷一種或多種結(jié)合配偶物結(jié)合RELT方面展示出相似藥理學(xué)效應(yīng)。如本文所示，刪除小鼠中的relt導(dǎo)致IFN-a分泌性pDC群增加，如此那些小鼠中的IFN-a血清水平總體升高。如此，阻斷性抗RELT抗體可用于篩選以鑒定RELT介導(dǎo)的pDC發(fā)育抑制的小分子拮抗劑。例如，可以在遏制從MHCII—DC前體細(xì)胞發(fā)育成pDC方面將一種或多種潛在小分子拮抗劑的活性與拮抗性抗RELT抗體的活性進(jìn)行比較。如本文所示，小鼠中relt的破壞導(dǎo)致從CDllc+MHCir細(xì)胞生成的pDC的量相對(duì)于cDC增加。如此，在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了通過抑制CDllc+MHCir細(xì)胞中的RELT表達(dá)和/或活性調(diào)控從CDllc+MHCir細(xì)胞生成的pDC與cDC的比例的方法。一方面，RELT表達(dá)和/或活性是通過破壞relt來(lái)抑制的。另一方面，RELT表達(dá)和/或活性是通過施用RELTDNA或RNA的反義寡核苷酸來(lái)抑制的。另一方面，RELT表達(dá)和/或活性是通過施用一種或多種拮抗RELT的抗體來(lái)抑制的。另一方面，RELT表達(dá)和/或活性是通過施用一種或多種本發(fā)明的抗體來(lái)抑制的。另一方面，RELT表達(dá)和/或活性是通過施用抗體H11來(lái)抑制的。另一方面，RELT表達(dá)和/或活性是在體外抑制的。另一方面，RELT表達(dá)和/或活性是在體內(nèi)抑制的。類似的，本發(fā)明提供了用于降低從CDllc+MHCir細(xì)胞生成的pDC相對(duì)于cDC細(xì)胞的比例的方法，包括刺激CDllc+MHCir細(xì)胞中的RELT表達(dá)和/或活性。一方面，RELT表達(dá)和/或活性是通過施用一種或多種激動(dòng)RELT的抗體來(lái)刺激的。另一方面，RELT表達(dá)和/或活性是在體內(nèi)刺激的。另一方面，RELT表達(dá)和/或活性是在體外刺激的。IFN-a已知主要由pDC生成，而且，如本文所示，體內(nèi)的系統(tǒng)性IFN-a水平主要?dú)w功于pDC的IFN-a生成。如此，本發(fā)明提供了通過抑制RELT表達(dá)和/或活性來(lái)提高IFN-a生成的方法。一方面，RELT表達(dá)和/或活性是通過破壞relt來(lái)抑制的。另一方面，RELT表達(dá)和/或活性是通過施用RELTDNA或RNA的反義寡核香酸來(lái)抑制的。另一方面，RELT表達(dá)和/或活性是通過施用一種或多種拮抗RELT的抗體來(lái)抑制的。另一方面，RELT表達(dá)和/或活性是通過施用一種或多種本發(fā)明的抗體來(lái)抑制的。另一方面，RELT表達(dá)和/或活性是通過施用抗體H11來(lái)抑制的。另一方面，RELT表達(dá)和/或活性是在體外抑制的。另一方面，RELT表達(dá)和/或活性是在體內(nèi)抑制的。類似的，本發(fā)明提供了通過刺激RELT表達(dá)和/或活性來(lái)降低IFN-a生成的方法。一方面，RELT表達(dá)和/或活性是通過施用一種或多種激動(dòng)RELT的抗體來(lái)刺激的。另一方面，RELT表達(dá)和/或活性是在體內(nèi)刺激的。另一方面，RELT表達(dá)和/或活性是在體外刺激的。'候選抗體的生成可以使用本領(lǐng)域常規(guī)技術(shù)來(lái)實(shí)現(xiàn)，包括本文中所記載的，諸如雜交瘤技術(shù)和篩選結(jié)合物分子的噬菌體展示庫(kù)。這些方法是本領(lǐng)域已經(jīng)確立的。簡(jiǎn)言之，本發(fā)明的抗RELT抗體可以通過施用組合庫(kù)來(lái)篩選具有期望活性的合成抗體克隆來(lái)制備。原則上，合成抗體克隆通過篩選噬菌體文庫(kù)來(lái)選擇，該噬菌體文庫(kù)所包含的噬菌體展示融合至噬菌體外殼蛋白的各種抗體可變區(qū)(Fv)片段。通過針對(duì)所需抗原的親和層析來(lái)淘選此類噬菌體文庫(kù)。表達(dá)能夠結(jié)合所需抗原的Fv片段的克隆吸附至抗原，如此與文庫(kù)中不結(jié)合性克隆分開。然后從抗原上洗脫下結(jié)合性克隆，并可通過抗原吸附/洗脫的更多循環(huán)來(lái)進(jìn)一步富集。本發(fā)明的任何抗RELT抗體可以如下獲得，即設(shè)計(jì)合適的抗原篩選規(guī)程以選擇感興趣噬菌體克隆，接著使用來(lái)自感興趣噬菌體克隆的Fv序列和以下文獻(xiàn)中記載的合適恒定區(qū)(Fc)序列構(gòu)建全長(zhǎng)抗RELT抗體克隆，Kabatetal.，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,FifthEdition,NIHPublication91-3242，BethesdaMD(1991)，vols.1-3。還可參見PCT公開號(hào)WO03/102157及其引用的參考文獻(xiàn)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗RELT抗體是單克隆的。本發(fā)明的范圍還涵蓋本文中所提供的抗RELT抗體的抗體片段，諸如Fab、Fab'、Fab'-SH和F(ab')2片段，及其變異。這些抗體片段可以通過傳統(tǒng)手段來(lái)創(chuàng)建，諸如酶促消化，或者可以通過重組技術(shù)來(lái)生成。此類抗體片段可以是嵌合的、人的或人源化的。這些片段可用于本文所列實(shí)驗(yàn)、診斷、和治療目的。單克隆抗體可以從基本上同質(zhì)的抗體群中獲得，即構(gòu)成群體的抗體個(gè)體是相同的，除了可能以極小量存在的可能的天然存在突變。如此，修飾語(yǔ)"單克隆"表明抗體不是不同的抗體的混合物的特征。本發(fā)明的抗RELT單克隆抗體可以使用多種本領(lǐng)域已知方法；來(lái)制備，包括首先由Kohleretal.,Nature,256:495(1975)記載的雜交瘤法，或者它們可以通過重組DNA法來(lái)制備(例如美國(guó)專利號(hào)4，816，567)。載體、宿主細(xì)胞和重組方法為了重組生產(chǎn)本發(fā)明的抗體，分離編碼它的核酸，并將其插入可復(fù)制載體，用于進(jìn)一步克隆(DNA擴(kuò)增)或表達(dá)?？墒褂贸Ｒ?guī)流程容易的分離編碼抗體的DNA并測(cè)序(如使用能夠與編碼抗體重鏈和輕鏈的基因特異性結(jié)合的寡核苦酸探針)?？衫迷S多載體。載體的選擇部分取決于將要使用的宿主細(xì)胞。宿主細(xì)胞包括但不限于原核或真核(通常是哺乳動(dòng)物)起源的。應(yīng)當(dāng)領(lǐng)會(huì)，任何同種型的恒定區(qū)可用于此目的，包括IgG、IgM、IgA、IgD和IgE恒定區(qū)，而且此類恒定區(qū)可以從任何人或動(dòng)物物種獲得。使用原核宿主細(xì)胞生成抗體載體構(gòu)建可使用標(biāo)準(zhǔn)重組技術(shù)來(lái)獲得編碼本發(fā)明抗體多肽構(gòu)件的多核苷酸序列?？蓮目贵w生成細(xì)胞諸如雜交瘤細(xì)胞分離期望的多核苷酸序列并測(cè)序?；蛘撸墒褂煤塑账岷铣蓛x或PCR技術(shù)合成多核苷酸。一旦得到，將編碼多肽的序列插入能夠在原核宿主中復(fù)制并表達(dá)異源多核苷酸的重組載體。為了本發(fā)明，可使用本領(lǐng)域可獲得的且知道的許多載體。適宜載體的選擇將主要取決于將要插入載體的核酸的大小和將要用載體轉(zhuǎn)化的具體宿主細(xì)胞。根據(jù)其功能(擴(kuò)增或表達(dá)異源多核苷酸，或二者兼之)及其與它在其中駐留的具體宿主細(xì)胞的相容性，每種載體含有多種構(gòu)件。載體構(gòu)件通常包括但不限于復(fù)制起點(diǎn)、選擇標(biāo)志基因、啟動(dòng)子、核糖體結(jié)合位點(diǎn)(RBS)、信號(hào)序列、異源核酸插入片段、和轉(zhuǎn)錄終止序列。一般而言，與宿主細(xì)胞一起使用的質(zhì)粒載體包含衍生自與這些宿主相容物種的復(fù)制子和控制序列。載體通常攜帶復(fù)制位點(diǎn)，以及能夠在轉(zhuǎn)化細(xì)胞中提供表型選擇的標(biāo)志序列。例如，通常用衍生自大腸桿菌物種的質(zhì)粒pBR322轉(zhuǎn)化大腸桿菌。pBR322包含編碼氨芐青霉素(Amp)和四環(huán)素(Tet)抗性的基因，由此提供輕松鑒定轉(zhuǎn)化細(xì)胞的手段。pBR322、其衍生物、或其它微生蛋白質(zhì)的啟動(dòng)子。Carteretal.,美國(guó)專利5，648,237中詳細(xì)記載了用于表達(dá)特定抗體的pBR322衍生物的實(shí)例。另外，可將包含與宿主微生物相容的復(fù)制子和控制序列的噬菌體載體用作這些宿主的轉(zhuǎn)化載體。例如，可使用噬菌體諸如XGEM.TM.-11來(lái)構(gòu)建可用于轉(zhuǎn)化易感宿主細(xì)胞諸如大腸桿菌LE392的重組載體。本發(fā)明的表達(dá)載體可包含兩種或多種啟動(dòng)子-順反子對(duì)，它們編碼每一種多肽構(gòu)件。啟動(dòng)子是位于順反子上游(5')的非翻譯調(diào)控序列，它調(diào)控順反子的表達(dá)。原核啟動(dòng)子通常分成兩類，誘導(dǎo)型的和組成性的。誘導(dǎo)型啟動(dòng)子指響應(yīng)培養(yǎng)條件的變化(如營(yíng)養(yǎng)物的存在與否或溫度變化)而啟動(dòng)受其控制的順反子的升高水平轉(zhuǎn)錄的啟動(dòng)子。眾所周知受到多種潛在宿主細(xì)胞識(shí)別的大量啟動(dòng)子。通過限制酶消化切下源DNA中的啟動(dòng)子并將分離的啟動(dòng)子序列插入本發(fā)明的載體，由此可將選#^的啟動(dòng)子與編碼輕鏈或重鏈的順反子DNA可操作連接。天然啟動(dòng)子序列和許多異源啟動(dòng)子都可用于指導(dǎo)靶基因的擴(kuò)增和/或表達(dá)。在有些實(shí)施方案中，使用異源啟動(dòng)子，因?yàn)榕c天然靶多肽啟動(dòng)子相比，它們通常容許所表達(dá)靶基因的更高轉(zhuǎn)錄和更高產(chǎn)量。適用于原核宿主的啟動(dòng)子包括PhoA啟動(dòng)子、(3-半乳糖苷酶和乳糖啟動(dòng)子系統(tǒng)、色氨酸(trp)啟動(dòng)子系統(tǒng)、和雜合啟動(dòng)子諸如tac或trc啟動(dòng)子。然而，在細(xì)菌中有功能的其它啟動(dòng)子(諸如其它已知的細(xì)菌或噬菌體啟動(dòng)子)也是合適的。它們的核普酸序列已經(jīng)發(fā)表，由此熟練工作人員能夠使用提供任何所需限制位點(diǎn)的接頭或銜接頭將它們與編碼耙輕鏈和重鏈的順反子可操作連接(Siebenlistetal.，Cell20:269(1980))。在本發(fā)明的一個(gè)方面，重組載體內(nèi)的每個(gè)順反子都包含指導(dǎo)所表達(dá)多肽穿膜轉(zhuǎn)運(yùn)的分泌信號(hào)序列構(gòu)件。一般而言，信號(hào)序列可以是載體的構(gòu)件，或者它可以是插入載體的靶多肽DNA的一部分。為了本發(fā)明而選擇的信號(hào)序列應(yīng)當(dāng)是受到宿主細(xì)胞識(shí)別并加工(即被信號(hào)肽酶切除)的信號(hào)序列。對(duì)于不識(shí)別并加工異源多肽的天然信號(hào)序列的原核宿主細(xì)胞，將信號(hào)序列用選自例如下組的原核信號(hào)序列替代4^性磷酸酶、青霉素酶、Ipp、或熱穩(wěn)定的腸毒素II(STII)前導(dǎo)序列、LamB、PhoE、Pe舊、OmpA和MBP。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，表達(dá)系統(tǒng)的兩個(gè)順反子中都使用的信號(hào)序列是STII信號(hào)序列或其變體。47在另一方面，依照本發(fā)明的免疫球蛋白的生成可在宿主細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中發(fā)生，因此不需要在每個(gè)順反子內(nèi)存在分泌信號(hào)序列。在那點(diǎn)上，免疫球蛋白輕鏈和重鏈在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)、折疊和裝配而形成功能性免疫球蛋白。某些宿主菌株(如大腸桿菌trxB-菌抹)提供有利于二硫鍵形成的細(xì)胞質(zhì)條件，從.而容許所表達(dá)蛋白質(zhì)亞基的正確折疊和裝配。ProbaandPluckthun，Gene159:203(1995))。本發(fā)明的抗體可使用如下表達(dá)系統(tǒng)來(lái)生成，其中所表達(dá)多肽構(gòu)件的數(shù)量比率可以受到調(diào)控，從而將分泌且正確裝配的本發(fā)明抗體的產(chǎn)量最大化。這種調(diào)控是至少部分通過同時(shí)調(diào)控多肽構(gòu)件的翻譯強(qiáng)度而實(shí)現(xiàn)的。Simmons等人，美國(guó)專利5,840，523中公開了用于調(diào)控翻譯強(qiáng)度的一種技術(shù)。它在順反子內(nèi)利用翻譯起始區(qū)(TIR)的變體。對(duì)于指定TIR，可創(chuàng)建具有一定范圍翻譯強(qiáng)度的一系列氨基酸或核苷酸序列變體，由此提供針對(duì)特定鏈的期望表達(dá)水平調(diào)節(jié)此因素的方便手段。可通過常規(guī)誘變技術(shù)導(dǎo)致能改變氨基酸序列的密碼子變化來(lái)生成TIR變體。在某些實(shí)施方案中，核苷酸序列中的變化是沉默的。TIR中的改變可包括例如Shine-Dalgarno序列的數(shù)目或間距的改變，及信號(hào)序列中的改變。用于生成突變型信號(hào)序列的一種方法是在編'碼序列的開端生成不改變信號(hào)序列氨基酸序列的"密碼子庫(kù)，，(即變化是沉默的)。這可通過改變每個(gè)密碼子的第三個(gè)核苷酸位置來(lái)實(shí)現(xiàn)；另外，有些氨基酸，諸如亮氨酸、絲氨酸、和精氨酸，具有多種第一個(gè)和第二個(gè)位置，這可在建庫(kù)中增加復(fù)雜性。Yansuraetal.,METHODS:ACompaniontoMethodsinEnzymol.4:151-158(1992)中詳細(xì)記載了這種誘變方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)于載體中的每個(gè)順反子，生成具有一定范圍TIR強(qiáng)度的一組載體。這個(gè)有限集合提供了每條鏈的表達(dá)水平以及期望抗體產(chǎn)物的產(chǎn)量在各種TIR強(qiáng)度組合下的比較。可通過量化報(bào)道基因的表達(dá)水平來(lái)測(cè)定TIR強(qiáng)度，Simmons等人，美國(guó)專利5，840,523中有詳細(xì)描述。根據(jù)翻譯強(qiáng)度的比較，選擇期望的各個(gè)TIR在本發(fā)明的表達(dá)載體構(gòu)建物中進(jìn)行組合。適于表達(dá)本發(fā)明抗體的原核宿主細(xì)胞包括古細(xì)菌(Archaebacteria)和真細(xì)菌(Eubacteria),諸如革蘭氏陰性或革蘭氏陽(yáng)性生物體。有用細(xì)菌的實(shí)例包括埃希氏菌屬(Escherichia)(如大腸埃希氏菌E.coli)、芽孢桿菌屬(Bacillus)(如枯草芽孢桿菌B.subtilis)、腸桿菌屬(Enterobacteria)、假單胞菌屬(Pseudomonas)(如銅綠假單胞菌Raeruginosa)物種、鼠傷寒沙門氏菌(Salmonellatyphimurium)、粘質(zhì)沙雷氏菌(Serratiamarcescans)、克雷伯氏菌屬(Klebsiella)、變形菌屬(Proteus)、志賀氏菌屬(Shigella),根瘤菌屬(Rhizobium)、透明顫菌屬(Vitreoscilla)、或副5求菌屬(Paracoccus)。在一個(gè)實(shí)施方案中，使用革蘭氏陰性細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施方案中，使用大腸桿菌細(xì)胞作為本發(fā)明的宿主。大腸桿菌菌抹的實(shí)例包括菌抹W3110(Bachmann，CellularandMolecularBiology,第2巻，Washington,D.C.，美國(guó)微生物學(xué)學(xué)會(huì)，1987，第1190-1219頁(yè)；ATCC保藏號(hào)27，325)及其衍生物，包括具有基因型W3110AfhuA(AtonA)ptr3lacIqlacL8AompTA(nmpc-fepE)degP41kanR的菌株33D3(美國(guó)專利號(hào)5，639,635)。其它菌抹及其衍生物，諸如大腸桿菌294(ATCC31,446)、大腸桿菌B、大腸桿菌入1776(ATCC31,537)和大腸桿菌RV308(ATCC31,608)也是合適的。這些實(shí)例只是例示而非限制。本領(lǐng)域知道用于構(gòu)建具有指定基因型的任何上述細(xì)菌衍生物的方法，參見例如Bassetal.,Proteins8:309-314(1990)。通常必需考慮復(fù)制子在細(xì)菌細(xì)胞中的可復(fù)制性來(lái)選擇適宜的細(xì)菌。例如，在^:用眾所周知的質(zhì)粒諸如pBR322、pBR325、pACYC177或pKN410來(lái)提供復(fù)制子時(shí)，大腸桿菌、沙雷氏菌屬、或沙門氏菌屬物種可能適于用作宿主。通常，宿主細(xì)胞應(yīng)當(dāng)分泌最小量的蛋白水解酶，而且可能希望在細(xì)胞培養(yǎng)中摻入額外的蛋白酶抑制劑?？贵w生成用上述表達(dá)載體轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，并在為了誘導(dǎo)啟動(dòng)子、選擇轉(zhuǎn)化子或擴(kuò)增編碼期望序列的基因而適當(dāng)改動(dòng)的常規(guī)營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。轉(zhuǎn)化即將DNA導(dǎo)入原核宿主，使得DNA能夠進(jìn)行復(fù)制，或是作為染色一體外元件或是通過染色體成分。根據(jù)所用宿主細(xì)胞，使用適于這些細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)進(jìn)行轉(zhuǎn)化。采用氯化鈣的鈣處理通常用于具有堅(jiān)固細(xì)胞壁屏障的細(xì)菌細(xì)胞。另一種轉(zhuǎn)化方法采用聚乙二醇/DMSO。使用的還有一種技術(shù)是電穿孔。在本領(lǐng)域知道的且適于培養(yǎng)選定宿主細(xì)胞的培養(yǎng)基中培養(yǎng)用于生成本發(fā)明多肽的原核細(xì)胞。合適培養(yǎng)基的實(shí)例包括添加了必需營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充物的LB培養(yǎng)基(Luriabroth)。在有些實(shí)施方案中，培養(yǎng)基還含有根據(jù)表達(dá)載體的構(gòu)建而選擇的選擇劑，以選擇性容許包含表達(dá)載體的原核細(xì)胞生長(zhǎng)。例如，向用于培養(yǎng)表達(dá)氨千青霉素抗性基因的細(xì)胞的培養(yǎng)基中添加氨卡青霉素。除了碳、氮、和無(wú)機(jī)磷酸鹽來(lái)源以外，還可含有適當(dāng)濃度的任何必需補(bǔ)充物，或是單獨(dú)加入或是作為與另一種補(bǔ)充物或培養(yǎng)基的混合物，諸如復(fù)合氮源。任選的是，培養(yǎng)基可含有一種或多種選自下組的還原劑谷胱甘肽、半胱氨酸、胱胺、巰基乙酸鹽/酯、二硫赤蘚糖醇和二硫蘇糖醇。在合適的溫度培養(yǎng)原核宿主細(xì)胞。例如，對(duì)于培養(yǎng)大腸桿菌，進(jìn)行培養(yǎng)的溫度范圍包括但不限于約20。C至約39。C、約25。C至約37。C、和約3(TC。主要取決于宿主生物體，培養(yǎng)基的pH可以是范圍為約5至約9的任何pH。對(duì)于大腸桿菌，pH可以是約6.8至約7.4、或約7.0。如果本發(fā)明的表達(dá)載體中使用誘導(dǎo)型啟動(dòng)子，那么在適于激活啟動(dòng)子的條件下誘導(dǎo)蛋白質(zhì)表達(dá)。在本發(fā)明的一個(gè)方面，使用PhoA啟動(dòng)子來(lái)控制多肽的轉(zhuǎn)錄。因此，為了誘導(dǎo)，在磷酸鹽限制培養(yǎng)基中培養(yǎng)經(jīng)過轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施方案中，磷酸鹽限制培養(yǎng)基是C.R.A.P培養(yǎng)基(參見例如Simmonsetal.，J.Immunol.Methods263:133-147(2002))。才艮據(jù)所采用的載體構(gòu)建物，可采用多種其它誘導(dǎo)物，正如本領(lǐng)域所知道的。在一個(gè)實(shí)施方案中，所表達(dá)的本發(fā)明多肽分泌到宿主細(xì)胞的周質(zhì)中并從中回收。蛋白質(zhì)回收通常牽涉破壞微生物，通常通過諸如滲壓震擾(osmoticshock)、超聲處理或裂解等手段。一旦細(xì)胞遭到破壞，可通過離心或過濾清除細(xì)胞碎片或整個(gè)細(xì)胞。可以通過例如親和樹脂層析進(jìn)一步純化蛋白質(zhì)?；蛘?，蛋白質(zhì)可能轉(zhuǎn)運(yùn)到培養(yǎng)液中并從中分離?？蓮呐囵B(yǎng)液清除細(xì)胞，并將培養(yǎng)物上清液過濾和濃縮，用于進(jìn)一步純化所生成蛋白質(zhì)?？墒褂闷毡橹赖姆椒ㄖT如聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)和Western印跡分析進(jìn)一步分離和鑒定所表達(dá)蛋白質(zhì)。在本發(fā)明的一個(gè)方面，通過發(fā)酵過程大量進(jìn)行抗體生產(chǎn)。多種大規(guī)模補(bǔ)料-分批發(fā)酵流程可用于生產(chǎn)重組蛋白。大規(guī)才莫發(fā)酵具有至少1000升的容量，例如約1,000至100，000升的容量。這些發(fā)酵罐使用攪拌器葉輪來(lái)分配氧和養(yǎng)分，尤其是葡萄糖(常用的碳源/能源)。小規(guī)^漠發(fā)酵通常指在體積容量不超過約100升的發(fā)酵罐中進(jìn)行的發(fā)酵，范圍可以是約1升至約100升。在發(fā)酵過程中，通常在將細(xì)胞在合適條件下培養(yǎng)至期望密度(如ODs50約180-220,在此階段細(xì)胞處于早期穩(wěn)定期)后啟動(dòng)蛋白質(zhì)表達(dá)的誘導(dǎo)。根據(jù)所采用的載體構(gòu)建物，可使用多種誘導(dǎo)物，正如本領(lǐng)域知道的和上文描述的?？稍谡T導(dǎo)前將細(xì)胞培養(yǎng)更短的時(shí)間。通常將細(xì)胞誘導(dǎo)約12-50小時(shí)，但是可使用更長(zhǎng)或更短的誘導(dǎo)時(shí)間。為了提高本發(fā)明多肽的產(chǎn)量和質(zhì)量，可修改多項(xiàng)發(fā)酵條件。例如，為了改善所分泌抗體多肽的正確裝配和折疊，可使用過度表達(dá)伴侶蛋白諸如Dsb蛋白(DsbA、DsbB、DsbC、DsbD和/或DsbG)或FkpA(具有伴侶活性的一種肽基脯氨酰-順式,反式-異構(gòu)酶)的額外載體來(lái)共轉(zhuǎn)化宿主原核細(xì)胞。已經(jīng)證明伴倡蛋白促進(jìn)在細(xì)菌宿主細(xì)胞中生成的異源蛋白質(zhì)的正確折疊和溶解度。Chenetal.，J.Biol.Chem.274:19601-19605(1999);Georgiou等人，美國(guó)專利6,083，715;Georgiou等人，美國(guó)專利6,027,888;BothmannandPluckthun,J.Biol.Chem.275:17100-17105(2000);RammandPluckthun,J.Biol.Chem.275;17106-17113(2000);Arieetal.，Mol.Microbiol.39:199-210(2001))。為了將所表達(dá)異源蛋白質(zhì)(尤其是對(duì)蛋白水解敏感的異源蛋白質(zhì))的蛋白水解降至最低，可將蛋白水解酶缺陷的某些宿主菌^^朱用于本發(fā)明。例如，可修飾宿主細(xì)胞菌抹，在編碼已知細(xì)菌蛋白酶的基因中進(jìn)行遺傳突變，諸如蛋白酶III、OmpT、DegP、Tsp、蛋白酶I、蛋白酶Mi、蛋白酶V、蛋白酶VI及其組合?？梢垣@得有些大腸桿菌蛋白酶缺陷菌抹，參見例如Jolyetal.，(1998)見上文；Georgiou等人，美國(guó)專利5,264,365;Georgiou等人，美國(guó)專利5,508,192;Haraetal.，MicrobialDrugResistance2:63-72(1996)。在一個(gè)實(shí)施方案中，在本發(fā)明的表達(dá)系統(tǒng)中使用蛋白水解酶缺陷且經(jīng)過過度表達(dá)一種或多種伴侶蛋白的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的大腸桿菌菌株作為宿主細(xì)胞。抗體純化在一個(gè)實(shí)施方案中，進(jìn)一步純化本文中生成的抗體蛋白質(zhì)以獲得基本上;同質(zhì)的制品，用于進(jìn)一步的測(cè)定和使用。可采用本領(lǐng)域知道的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)純化方法。下面的流程是合適純化流程的例示免疫親和或離子交換柱上的分餾、乙醇沉淀、反相HPLC、硅土或陽(yáng)離子交換樹脂諸如DEAE上的層析、層析聚焦、SDS-PAGE、碌L酸4耍沉淀、和使用例如SephadexG-75的凝膠過濾。在一個(gè)方面，將固定在固相上的蛋白A用于本發(fā)明抗體產(chǎn)物的免疫親和純化。蛋白A是來(lái)自金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureas)的41kD細(xì)月包壁'蛋白質(zhì)，它以高親和力結(jié)合抗體Fc區(qū)。Lindmarketal.,J.Immunol.Meth.62:1-13(1983))。蛋白A固定其上的固相可以是具有玻璃或石英表面的柱子，或者可控孔徑玻璃柱或石圭酸柱。在有些應(yīng)用中，柱子以諸如甘油等試劑包^^皮，用以有可能防止污染物的非特異粘附。作為純化的第一步，可以將衍生自如上所述細(xì)胞培養(yǎng)物的制備物施加到蛋白A固定化固相上，使得目的抗體特異性結(jié)合蛋白A。然后清洗固相以清除與固相非特異性結(jié)合的污染物。最后通過洗脫從固相回收目的抗體。使用真核宿主細(xì)胞生成抗體載體構(gòu)件通常包括但不限于如下一種或多種信號(hào)序列、復(fù)制起點(diǎn)、一種或多種標(biāo)志基因、增強(qiáng)子元件、啟動(dòng)子、和轉(zhuǎn)錄終止序列。(i)信號(hào)序列構(gòu)件在真核宿主細(xì)胞中使用的載體還可在目的成熟蛋白質(zhì)或多肽的N端包含信號(hào)序列或具有特異切割位點(diǎn)的其它多肽。一般選擇受到宿主細(xì)胞識(shí)別并加工(即被信號(hào)肽酶切除)的異源信號(hào)序列。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)中，可利用;哺乳動(dòng)物信號(hào)序列以及病毒分泌前導(dǎo)，例如單純皰滲病毒gD信號(hào)。將這些前體區(qū)的DNA連接到編碼抗體的DNA的讀碼框中。(ii)復(fù)制起點(diǎn)通常，哺乳動(dòng)物表達(dá)載體不需要復(fù)制起點(diǎn)構(gòu)件。例如，SV40起點(diǎn)通?？赡苤灰虬缙趩?dòng)子才使用。(iii)選擇基因構(gòu)件表達(dá)和克隆載體可包含選擇基因，也稱為選擇標(biāo)志。典型的選擇基因編碼如下蛋白質(zhì)(a)賦予對(duì)抗生素或其它毒素的抗性，如氨千青霉素、新霉素、曱氨蝶呤或四環(huán)素；(b)補(bǔ)足相應(yīng)的營(yíng)養(yǎng)缺陷；或(c)提供不能從復(fù)合培養(yǎng)基獲得的關(guān)鍵營(yíng)養(yǎng)物。選擇方案的一個(gè)實(shí)例利用藥物來(lái)阻滯宿主細(xì)胞的生長(zhǎng)。經(jīng)異源基因成功轉(zhuǎn)化的那些細(xì)胞生成賦予藥物抗性的蛋白質(zhì)，因而幸免于選擇方案。此類顯性選擇的實(shí)例使用藥物新霉素、霉酚酸和潮霉素。適于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的選擇標(biāo)志的另一個(gè)實(shí)例是能夠鑒定有能力攝取抗體核酸的細(xì)胞的選擇標(biāo)志，諸如DHFR、胸苷激酶、金屬硫蛋白I和II(例如靈長(zhǎng)類金屬硫蛋白基因)、腺苷脫氨酶、鳥氨酸脫羧酶等。例如，可以首先通過將所有轉(zhuǎn)化子在含有甲氨蝶呤(Mtx，DHFR的一種竟?fàn)幮赞卓箘?的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)來(lái)鑒定經(jīng)DHFR選擇基因轉(zhuǎn)化的細(xì)胞。在采用野生型DHFR時(shí)，適宜的宿主細(xì)胞包括例如DHFR活性缺陷的中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞系(如ATCCCRL-卯96)?；蛘?，可通過在含有針對(duì)選擇標(biāo)志的選擇劑諸如氨基糖苷抗生素如卡那霉素、新霉素或G418的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞來(lái)選擇經(jīng)編碼抗體、野生型DHFR52蛋白、和另一種選擇標(biāo)志諸如氨基糖苷3'-磷酸轉(zhuǎn)移酶(APH)的DNA^列轉(zhuǎn)化或共轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞(特別是包含內(nèi)源DHFR的野生型宿主)。參見美國(guó)專利4,965,199。(iv)啟動(dòng)子構(gòu)件表達(dá)和克隆載體通常包含受到宿主生物體識(shí)別的啟動(dòng)子，且與編碼感興趣多肽(例如抗體)的核酸可操作連接。已知真核細(xì)胞的啟動(dòng)子序列。事實(shí)上，所有真核基因都具有富含AT區(qū)，它位于起始轉(zhuǎn)錄的位點(diǎn)上游約25至30個(gè)堿基處。在許多基因的轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)上游70至80個(gè)堿基處發(fā)現(xiàn)的另一種序列是CNCAAT區(qū)，其中N可以是任何核芬酸。在大多數(shù)真核基因的3'端是AATAAA序列，它可能是向編碼序列的3'端添加聚腺苦酸(polyA)尾的信號(hào)。所有這些序列合適的插入真核表達(dá)載體中。在哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞中由載體轉(zhuǎn)錄抗體多肽可以受到例如從病毒(諸如多瘤病毒、禽痘病毒、腺病毒(諸如2型腺病毒)、牛乳頭瘤病毒、禽類肉瘤病毒、巨細(xì)胞病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、乙肝病毒、和猿猴病毒40(SV40))基因組獲得的、來(lái)自異源哺乳動(dòng)物啟動(dòng)子(如肌動(dòng)蛋白啟動(dòng)子或免疫球蛋白啟動(dòng)子)的、或來(lái)自熱休克啟動(dòng)子的啟動(dòng)子的控制，倘若這些啟動(dòng)子與宿主細(xì)胞系統(tǒng)相容的話。方便的以SV40限制性片段的形式獲得SV40病毒的早期和晚期啟動(dòng)子，該片段還包含SV40病毒復(fù)制起點(diǎn)。方便的以HindIIIE限制性片段的形式獲得人巨細(xì)胞病毒的立即早期啟動(dòng)子。美國(guó)專利4，419,446中公開了使用牛乳頭瘤病毒作為載體在哺乳動(dòng)物宿主中表達(dá)DNA的系統(tǒng)。美國(guó)專利4,601，978中記載了該系統(tǒng)的一種修改。關(guān)于在小鼠細(xì)胞中在來(lái)自單純皰滲病毒的胸苷激酶啟動(dòng)子的控制下表達(dá)人P-干擾素cDNA還可參見Reyesetal.,Nature297:598-601(1982)。或者，可使用勞氏肉瘤病毒長(zhǎng)末端重復(fù)序列作為啟動(dòng)子。0)增強(qiáng)子元件構(gòu)件常?？梢酝ㄟ^在載體中插入增強(qiáng)子序列來(lái)提高高等真核細(xì)胞對(duì)編碼本發(fā)明抗體多肽的DNA的轉(zhuǎn)錄。現(xiàn)在知道來(lái)自哺乳動(dòng)物基因(球蛋白、彈性蛋白酶、清蛋白、a-胎蛋白和胰島素)的許多增強(qiáng)子序列。然而，通常使用來(lái)自真核細(xì)胞病毒的增強(qiáng)子。實(shí)例包括SV40復(fù)制起點(diǎn)晚期側(cè)的增強(qiáng)子(bp100-270)、巨細(xì)胞病毒早期啟動(dòng)子增強(qiáng)子、多瘤病毒復(fù)制起點(diǎn)晚期側(cè)的增強(qiáng)子、和腺病毒增強(qiáng)子。關(guān)于激活真核啟動(dòng)子的增強(qiáng)元件還可參見Yaniv,Nature297:17-18(1982)。增強(qiáng)子可剪接到載體中，位于抗體多肽編碼序列的5'或3'位置，但是一般位于啟動(dòng)子的5'位點(diǎn)。(vi)轉(zhuǎn)錄終止構(gòu)件在真核宿主細(xì)胞中使用的表達(dá)載體通常還包含終止轉(zhuǎn)錄和穩(wěn)定mRNA所必需的序列。此類序列通?？蓮恼婧嘶虿《綝NA或cDNA非翻譯區(qū)的5'端和偶爾的3'端獲得。這些區(qū)域包含在編碼抗體的mRNA的非翻譯區(qū)中轉(zhuǎn)錄成聚腺香酸化片段的核香酸區(qū)段。一種有用的轉(zhuǎn)錄終止構(gòu)件是牛生長(zhǎng)激素聚腺苦酸化區(qū)。參見WO94/11026及其中公開的表達(dá)載體。(vii)宿主細(xì)胞的選擇和轉(zhuǎn)化'適于克隆或表達(dá)本文載體中的DNA的宿主細(xì)胞包括本文描述的高等真核細(xì)胞，包括脊推動(dòng)物宿主細(xì)胞。脊推動(dòng)物細(xì)胞在培養(yǎng)(組織培養(yǎng))中的繁殖已經(jīng)成為常規(guī)流程。有用哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞系的實(shí)例有經(jīng)SV40轉(zhuǎn)化的猴腎CV1系(COS-7，ATCCCRL1651)、人胚腎系(293細(xì)胞或?yàn)閼腋∨囵B(yǎng)而亞克隆的293細(xì)胞，Grahametal.，J.Gen.Virol.36:59(1977))、幼倉(cāng)鼠腎細(xì)胞(BHK，ATCCCCL10)、中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞ADHFR(CHO，Urlaubetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA77:4216(1980))、小鼠塞托利(Sertoli)細(xì)胞(TM4，Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980))、猴腎細(xì)胞(CVl，ATCCCCL70)、非洲綠猴腎細(xì)胞(VERO-76,ATCCCRL1587)、人宮頸癌細(xì)胞(HELA，ATCCCCL2)、犬腎細(xì)胞(MDCK，ATCCCCL34)、牛鼠(buffalorat)肝細(xì)胞(BRL3A，ATCCCRL1442)、人肺細(xì)胞(W138，ATCCCCL75)、人肝細(xì)胞(HepG2，HB8065)、小鼠乳瘤(MMT060562，ATCCCCL51)、TRI細(xì)胞(Matheretal.，AnnalsN.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982))、MRC5細(xì)胞、FS4細(xì)胞和人肝細(xì)胞瘤(hepatoma)系(HepG2)。為了生成抗體，用上文所述表達(dá)或克隆載體轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，并在為了誘導(dǎo)啟動(dòng)子、選擇轉(zhuǎn)化子或擴(kuò)增編碼期望序列的基因而適當(dāng)改動(dòng)的常規(guī)營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。(viii)宿主細(xì)胞的培養(yǎng)可在多種培養(yǎng)基中培養(yǎng)用于生成本發(fā)明抗體的宿主細(xì)胞。商品化培養(yǎng)基諸如Ham氏F10(Sigma)、極限必需培養(yǎng)基(MEM,Sigma)、RPMI-1640(Sigma)、和Dulbecco氏修改Eagle氏培養(yǎng)基(DMEM,Sigma)適于培養(yǎng)宿主細(xì)胞。另外，可使用下列文獻(xiàn)中記載的任何培養(yǎng)基作為宿主細(xì)胞的培養(yǎng)基Hametal"Meth.Enz.58:44(1979);Barnesetal.，Anal.Biochem.102:255(1980);美國(guó)專利4，767,704;4,657,866;4,927,762;4,560,655;5,122,469;WO90/03430;WO87/00195;或U.S.PatentRe.30,985。任何這些培養(yǎng)基可根據(jù)需要補(bǔ)充激素和/或其它生長(zhǎng)因子(諸如胰島素、運(yùn)鐵蛋白或表皮生長(zhǎng)因子)、鹽(諸如氯化鈉、鈣、鎂和磷酸鹽)、緩沖劑(諸如HEPES)、核苷酸(諸如腺苷和胸苷)、抗生素(諸如GENTAMYCINTM藥物)、痕量元素(定義為通常以微摩爾范圍的終濃度存在的無(wú)機(jī)化合物)、和葡萄糖或等效能源。還可'以適宜濃度含有本領(lǐng)域技術(shù)人員知道的任何其它必需補(bǔ)充物。培養(yǎng)條件諸如溫度、pH等即為表達(dá)而選擇的宿主細(xì)胞先前所用的，這對(duì)于普通技術(shù)人員是顯然的。(ix)抗體的純化在使用重組技術(shù)時(shí)，可在細(xì)胞內(nèi)生成抗體，或者直接分泌到培養(yǎng)基中。如果在細(xì)胞內(nèi)生成抗體，那么首先一般通過例如離心或超濾清除微粒碎片，或是宿主細(xì)胞或是裂解片段。如果抗體分泌到培養(yǎng)基中，那么通常首先使用商品化蛋白質(zhì)濃縮濾器(例如Amicon或MilliporePellicon超濾單元)濃縮來(lái)自這些表達(dá)系統(tǒng)的上清液?？稍谌魏紊鲜霾襟E中包括蛋白酶抑制劑諸如PMSF以抑制蛋白水解，而且可包括抗生素以防止外來(lái)污染物的生長(zhǎng)?？墒褂美缌u磷灰石層析、凝膠電泳、透析和親和層析(一般可接受的純化技術(shù)是親和層析)來(lái)純化從細(xì)胞制備的抗體組合物。親和試劑諸如蛋白A作為親和配體的適宜性取決于抗體中存在的任何免疫球蛋白Fc結(jié)構(gòu)域的種類和同種型。蛋白A可用于純化基于人yl、y2、或丫4重鏈的抗體(Lindmarketal.,J.Immunol.Meth.62:1-13(1983))。蛋白G推薦用于所有小鼠同種型和人(Gussetal.,EMBOJ.5:1567-1575(1986))。親和配體所附著的基質(zhì)最常用的是瓊脂糖，但是可使用其它基質(zhì)。物理穩(wěn)定的基質(zhì)諸如可控孔徑玻璃或聚(苯乙烯二乙烯)苯能獲得比瓊脂糖更快的流速和更短的加工時(shí)間。若抗體包含CH3結(jié)構(gòu)域，則可使用BakerbondABXTM樹脂(J.T.Baker,Phillipsburg，NJ)進(jìn)行純化。根據(jù)待回收的抗體，也可使用其它蛋白質(zhì)純化技術(shù)諸如離子交換柱上的分餾、乙醇沉淀、反相HPLC、硅土上的層析、肝素SEPHAROSEtm上的層析、陰離子或陽(yáng)離子交換樹脂(諸如聚天冬氨酸柱)上的層析、層析聚焦、SDS-PAGE和硫S臾銨沉淀。在任何初步純化步驟之后，可將含有目的抗體和污染物的混合物在必要時(shí)進(jìn)行進(jìn)一步的純化步驟，例如低pH疏水相互作用層析，使用pH約2.5-4.5的洗脫緩沖液，一4殳在低鹽濃度(如約0-0.25M鹽)進(jìn)行。應(yīng)當(dāng)注意，一般而言，用于制備供研究、測(cè)試和臨床使用的抗體的技術(shù)和方法是本領(lǐng)域已完善建立的，與上文是一致的和/或本領(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)為對(duì)于特定的感興趣抗體是適宜的?；钚詼y(cè)定法可通過本領(lǐng)域知道的多種測(cè)定法對(duì)本發(fā)明的抗體鑒定它們的物理/化學(xué)特性和生物學(xué)功能?？赏ㄟ^一系列測(cè)定法進(jìn)一步表征純化的抗體，包括但不限于N端測(cè)序、氨基酸分析、非變性大小排阻高壓液相層析(HPLC)、質(zhì)譜、離子交換層析和木瓜蛋白酶消化。在必要時(shí)，對(duì)抗體分析它們的生物學(xué)活性。在有些實(shí)施方案中，對(duì)本發(fā)明的抗體測(cè)試它們的抗原結(jié)合活性。本領(lǐng)域知道的且可用于本文的抗原結(jié)合測(cè)定法包括但不限于使用諸如Westem印跡、放射免疫測(cè)定法、ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法)、"三明治"免疫測(cè)定法、免疫沉淀測(cè)定法、焚光免疫測(cè)定法和蛋白A免疫測(cè)定法等技術(shù)的任何直接或竟?fàn)幮越Y(jié)合測(cè)定法。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明設(shè)想了具有一些但非所有效應(yīng)器功能的改良抗體，這使得它在抗體體內(nèi)半衰期是重要的但某些效應(yīng)物功能(諸如補(bǔ)體和ADCC)是不必要的或有害的許多應(yīng)用中成為期望的候選物。在某些實(shí)施方案中，測(cè)量抗體的Fc活性以確保只保留了期望的特性。可進(jìn)行體外和/或體內(nèi)細(xì)胞毒性測(cè)定法以確認(rèn)CDC和/或ADCC活性的降低/消減。例如，可進(jìn)行Fc受體(FcR)結(jié)合測(cè)定法以確認(rèn)抗體缺乏FcYR結(jié)合(因此有可能缺乏ADCC活性)但保留FcRn結(jié)合能力。介導(dǎo)ADCC的主要細(xì)胞，NK細(xì)胞，只表達(dá)FcYRIII，而單核細(xì)胞表達(dá)FcyRI、FcyRII和FcYRIII。RavetchandKinet，Annu.Rev.Immunol.9:457-92(1991)第464頁(yè)表3總結(jié)了造血細(xì)胞上的FcR表達(dá)。美國(guó)專利5,500，362或5,821,337中記載了用于評(píng)估目的分子的ADCC活性的體外測(cè)定然殺傷(NK)細(xì)胞。或者/另外，可在體內(nèi)評(píng)估目的分子的ADCC活性，如在動(dòng)物模型中，諸如Clynesetal.,PNAS(USA)95:652-656(1998)中所公開的。還可進(jìn)行Clq結(jié)合測(cè)定法以確認(rèn)抗體不能結(jié)合Clq且因此缺乏CDC活性。為了^H古4卜體5敫活，可進(jìn)4亍CDC觀'J定法，如H口^口Gazzano-Santoroetal.，J.Immunol.56Methods202:163(1996)中所述。還可使用本領(lǐng)域知道的方法進(jìn)行FcRn結(jié)合和體內(nèi)清除/半衰期測(cè)定?？贵w片段本發(fā)明涵蓋抗體片段。在某些情況中，使用抗體片段有優(yōu)勢(shì)，而不是完整抗體。片段的較小尺寸容許快速清除，而且可導(dǎo)致更易于接近實(shí)體瘤。已經(jīng)開發(fā)了用于生成抗體片段的多種技術(shù)。傳統(tǒng)上，通過蛋白水解消化完整抗體來(lái)衍生這些片段(參見例如Morimotoetal.,JournalofBiochemicalandBiophysicalMethods24:107-117(1992);Bren腿etal.，Science229:81(1985))。然而，現(xiàn)在可直4妻由重組宿主細(xì)月包生成這些片l殳。Fab、Fv和scFv抗體片段都可在大腸桿菌中表達(dá)及由大腸桿菌分泌，如此容許容易的生成大量的這些片段?？蓮纳衔挠懻摰氖删w抗體庫(kù)中分離抗體片段?；蛘?，可直接從大腸桿菌回收Fab'-SH片段并化學(xué)偶聯(lián)以形成F(ab')2片段(Carteretal.,Bio/Technology10:163-167(1992》。依照另一種方法，可直接從重組宿主細(xì)胞培養(yǎng)物分離F(ab')2片段。包含補(bǔ)救受體結(jié)合表位殘基、具有延長(zhǎng)的體內(nèi)半衰期的Fab和F(ab')2片段記載于美國(guó)專利No.5,869,046。用于生成抗體片段的其它技術(shù)對(duì)于熟練從業(yè)人員將是顯而易見的。在其它實(shí)施方案中，選擇的抗體是單鏈Fv片段(scFv)。參見WO93/16185;美國(guó)專利No.5,571,894;及5,587,458。Fv和sFv是具有完整結(jié)合位點(diǎn)、缺少恒定區(qū)的唯一類型；如此，它們適于在體內(nèi)使用時(shí)降低非特異性結(jié)合?？蓸?gòu)建sFv融合蛋白以生成效應(yīng)器蛋白質(zhì)在sFv的氨基或羧基末端的融合。參見AntibodyEngineering,Borrebaeck編，supra?？贵w片l殳還可以是"線性抗體"，例如如美國(guó)專利No.5,641,870中所記載的。此類線性抗體片段可以是單特異性的或雙特異性的。人源化抗體本發(fā)明涵蓋人源化抗體。本領(lǐng)域知道用于人源化非人抗體的多種方法。例如，人源化抗體可具有一個(gè)或多個(gè)從非人來(lái)源引入的氨基酸殘基。這些非人氨基酸殘基常常稱為"輸入"殘基，它們通常取自"輸入"可變區(qū)。基本上可遵循Winter及其同事的方法進(jìn)行人源化(Jonesetal.，Nature321:522-525(1986);Riechmannetal.,Nature332:323-327(1988);Verhoeyenetal"Science239:1534-1536(1988))，即用非人高變區(qū)序列替代人抗體的對(duì)應(yīng)序列。因此，此類"人源化"抗體是嵌合抗體(美國(guó)專利4,816,567)，其中顯著少于完整的人可變區(qū)用非人物種的相應(yīng)序列替代。在實(shí)踐中，人源化抗體通常是如下人抗體，其中有些高變區(qū)殘基和可能的有些FR殘基用嚙齒類抗體類似位點(diǎn)的殘基替代。用于制備人源化抗體的人輕鏈和重鏈可變區(qū)的選擇對(duì)于降低抗原性可能是非常重要的。依照所謂的"最適(best-fit)"方法，用嚙齒類抗體的可變區(qū)序列對(duì)已知人可變區(qū)序列的整個(gè)文庫(kù)進(jìn)行篩選。然后選擇與嚙齒類最接近的人序列作為人源化抗體的人框架(Simsetal.,J.Immunol.151:2296(1993);Chothiaetal.，J.Mol.Biol.196:901(1987))。另一種方法使用由特定輕鏈或重鏈亞類(subgroup)的所有人抗體的共有序列衍生的特定框架。相同框架可用于幾種不同的人源4b抗體(Carteretal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:4285(1992);Prestaetal.，J.Immunol.151:2623(1993))。一般進(jìn)一步希望抗體在人源化后保留對(duì)抗原的高親和力和其它有利的生物學(xué)特性。為了達(dá)到此目的，依照一種方法，通過使用親本序列和人源化序列的三維模型分析親本序列和各種概念性人源化產(chǎn)物的過程來(lái)制備人源化抗體。通?？色@得免疫球蛋白三維模型，這是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟悉的。還可獲得圖解和顯示所選候選免疫球蛋白序列的可能三維構(gòu)象結(jié)構(gòu)的計(jì)算機(jī)程序。通過檢查這些顯示圖像能分析殘基在候選免疫球蛋白序列發(fā)揮功能中的可能作用，即分析影響候選免疫球蛋白結(jié)合其抗原的能力的殘基。這樣，可以從受體序列和輸入序列中選出FR殘基并組合，從而得到期望的抗體特征，諸如對(duì)靶抗原的親和力升高。一般而言，高變區(qū)殘基直接且最實(shí)質(zhì)的牽涉對(duì)抗原結(jié)合的影響。人抗體本發(fā)明的人抗RELT抗體可以通過如上所述聯(lián)合選自人衍生噬菌體展示庫(kù)的Fv克隆可變域序列與已知的人恒定域序列來(lái)構(gòu)建?；蛘?，可以通過雜交瘤方法來(lái)生成本發(fā)明的人單克隆抗RELT抗體。用于生成人單克隆抗體的人骨髓瘤和小鼠-人異源骨髓瘤細(xì)胞系已有記載，例如KozborJ.Immunol.,133:3001(1984);Brodeuretal.，MonoclonalAntibodyProductionTechniquesandApplications,pp.51-63(MarcelDekker,Inc.,NewYork,1987);及Boerneretal.:J.Immunol.,147:86(1991).例如，現(xiàn)在有可能生成在缺乏內(nèi)源免疫球蛋白生成的情況下能夠在免疫后生成人抗體完整全集的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(例如小鼠)。例如，已經(jīng)記載了嵌合和種系突變小鼠中抗體重鏈連接區(qū)(JH)基因的純合刪除導(dǎo)致內(nèi)源抗體生成的完全抑制。在此類種系突變小鼠中轉(zhuǎn)移大量人種系免疫球蛋白基因?qū)?dǎo)致在抗原攻擊后生成人抗體。參見例如Jakobovitsetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:2551(1993);Jakobovitsetal.,Nature362:255-258(1993);Bruggermannetal.,YearinImmunol.7:33(1993)?；蚋慕M也可用于在體外自非人(例如嚙齒類)抗體衍生人抗體，其中人抗體具有與起始非人抗體相似的親和力和特異性。依照此方法，它也稱為"表位印記"(epitopeimprinting),如上所述通過噬菌體展示4支術(shù)得到的非人抗體片段的重鏈或輕鏈可變區(qū)用人V結(jié)構(gòu)域基因全集替換，產(chǎn)生非人鏈-人鏈scFv或Fab嵌合物群。用抗原進(jìn)行的選擇導(dǎo)致非人鏈/人鏈嵌合scFv或Fab的分離，其中人鏈在一級(jí)噬菌體展示克隆中消除相應(yīng)的非人鏈后恢復(fù)了抗原結(jié)合位點(diǎn)，即表位決定(印記，imprint)人鏈配偶體的選擇。在重復(fù)該過程以替換剩余非人鏈時(shí)，得到人抗體(參見PCTWO93/06213，7>開于1993年4月1全人的抗體，它們不含非人起源的FR架或CDR殘基。雙特異性抗體雙特異性抗體指對(duì)至少兩種不同抗原具有結(jié)合特異性的單克隆抗體。在某些實(shí)施方案中，雙特異性抗體是人抗體或人源化抗體。在某些實(shí)施方案中，結(jié)合特異性之一針對(duì)RELT，結(jié)合特異性之另一針對(duì)任何其它抗原。可將雙特異性抗體制備成全長(zhǎng)抗體或抗體片段(例如F(ab')2雙特異性抗體)。用于構(gòu)建雙特異性抗體的方法是本領(lǐng)域已知的。傳統(tǒng)的是，雙特異性抗體的重組生產(chǎn)基于兩對(duì)免疫球蛋白重鏈-輕鏈的共表達(dá)，其中兩種重鏈具有不同的特異性(MillsteinandCuello，Nature305:537(1983))。由于免疫球蛋白重鏈和輕鏈的隨機(jī)分配，這些雜交瘤(四源雜交瘤(quadroma))生成10種不同抗體分子的潛在混合物，其中只有一種具有正確的雙特異性結(jié)構(gòu)。通常通過親和層析步驟進(jìn)行的正確分子的純化相當(dāng)麻煩且產(chǎn)物產(chǎn)量低。類似的規(guī)程披露于1993年5月13日公開的WO93/08829及Trauneckeretal.，EMBOJ.10:3655(1991)。依照一種不同的實(shí)施方案，將具有期望結(jié)合特異性(抗體-抗原結(jié)合位點(diǎn))的抗體可變域與免疫球蛋白恒定域序列融合。例如，與包含至少部分鉸鏈、CH2和CH3區(qū)的免疫球蛋白重鏈恒定域進(jìn)行融合。在某些實(shí)施方案中，在至少一種融合物中存在包含輕鏈結(jié)合所必需的位點(diǎn)的第一重鏈恒定區(qū)(CH1)。將編碼免疫球蛋白重鏈融合物和，在需要時(shí)，免疫球蛋白輕鏈的DNA插入分開的表達(dá)載體，并共轉(zhuǎn)染到合適的宿主生物體中。在用于構(gòu)建的三種多肽鏈比例不等時(shí)提供最佳產(chǎn)量的實(shí)施方案中，這為調(diào)整三種多肽片段的相互比例提供了極大的靈活性。然而，在至少兩種多肽鏈以相同比例表達(dá)導(dǎo)致高產(chǎn)量時(shí)或在該比例沒有特別意義時(shí)，有可能將兩種或所有三種多肽鏈的編碼序列插入一個(gè)表達(dá)載體。在該方法的一個(gè)實(shí)施方案中，雙特異性抗體由一個(gè)臂上具有第一結(jié)合特異性的雜合免疫球蛋白重鏈，和另一個(gè)臂上的雜合免疫球蛋白重鏈-輕鏈對(duì)(提供第二結(jié)合特異性)構(gòu)成。由于免疫球蛋白輕鏈僅在半個(gè)雙特異性分子中的存在提供了便利的分離途徑，因此發(fā)現(xiàn)這種不對(duì)稱結(jié)構(gòu)便于將期望的雙特異性復(fù)合物與不想要的免疫球蛋白鏈組合分開。該方法披露于WO94/04690。關(guān)于生成雙特異性抗體的進(jìn)一步詳情參見例如Sureshetal.,MethodsinEnzymology121:210(1986)。依照另一種方法，可改造一對(duì)抗體分子間的界面，以將從重組細(xì)胞培養(yǎng)物回收的異二聚體的百分比最大化。界面包含至少部分抗體恒定域CH3結(jié)構(gòu)域。在該方法中，將第一抗體分子界面的一個(gè)或多個(gè)小氨基酸側(cè)鏈用較大側(cè)鏈(例如酪氨酸或色氨酸)替換。通過將大氨基酸側(cè)鏈用較小氨基酸側(cè)鏈(例如丙氨酸或蘇氨酸)替換，在第二抗體分子的界面上產(chǎn)生與大側(cè)鏈相同或相似大小的補(bǔ)償性"空腔"。這提供了較之其它不想要的終產(chǎn)物諸如同二聚體提高異二聚體產(chǎn)量的機(jī)制。雙特異性抗體包括交聯(lián)或"異源偶聯(lián)"抗體。例如，異源偶聯(lián)物中的一種抗體可與親合素偶聯(lián)，另一種抗體與生物素偶聯(lián)。例如，此類抗體已經(jīng)建議用于將免疫系統(tǒng)細(xì)胞靶向不想要的細(xì)胞(美國(guó)專利No.4,676,980)，及用于治療HIV感染(WO91/00360,WO92/00373和EP03089)?？墒褂萌魏伪憷慕宦?lián)方法來(lái)制備異源偶聯(lián)抗體。合適的交聯(lián)劑是本領(lǐng)域眾所周知的，連同許多交聯(lián)技術(shù)一起披露于美國(guó)專利No.4,676,980。文獻(xiàn)中還記載了由抗體片段生成雙特異性抗體的技術(shù)。例如，可使用化學(xué)連接來(lái)制備雙特異性抗體。Brennanetal.，Science229:81(1985)記載了通過蛋白水解切割完整抗體以生成F(ab')2片段的規(guī)程。將這些片段在存在二硫醇絡(luò)合劑亞砷酸鈉的情況下還原，以穩(wěn)定鄰近的二硫醇并防止分子間二硫鍵的形成。然后將產(chǎn)生的Fab，片段轉(zhuǎn)變?yōu)榱虼趸綍跛嵊现?TNB)衍生物。然后將Fab'-TNB衍生物之一通過巰基乙胺的還原重新恢復(fù)成Fab'-硫醇，并與等摩爾量的另一種Fab'-TNB衍生物混合，以形成雙特異性抗體。產(chǎn)生的雙特異性抗體可用作酶的選擇性固定化試劑。最新的進(jìn)展便于從大腸桿菌直接回收Fab'-SH片段，這些片段可化學(xué)偶聯(lián)以形成雙特異性抗體。Shalabyetal.，J.Exp.Med.175:217-225(1992)記載了完全人源化的雙特異性抗體F(ab')2分子的生成。由大腸桿菌分開分泌每種Fab'片段，并在體外進(jìn)行定向化學(xué)偶聯(lián)以形成雙特異性抗體。如此形成的雙特異性抗體能夠結(jié)合過表達(dá)HER2受體的細(xì)胞和正常人T細(xì)胞，以及觸發(fā)人細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞針對(duì)人乳腺腫瘤靶物的溶解活性。還記載了從重組細(xì)胞培養(yǎng)物直接生成和分離雙特異性抗體片段的多種技術(shù)。例如，已使用亮氨酸拉鏈生成雙特異性抗體。Kostelnyetal.，J.Immunol.148(5):1547-1553(1992)。將來(lái)自Fos和Jun蛋白的亮氨酸拉鏈肽通過基因融合與兩種不同抗體的Fab'部分連接?？贵w同二聚體在鉸鏈區(qū)還原以形成單體，然后重新氧化以形成抗體異二聚體。這種方法也可用于生成抗體同二聚體。Hollingeretal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:6444-6448(1993)記載的"雙抗體"技術(shù)提供了構(gòu)建雙特異性抗體片段的替代機(jī)制。該片段包含通過接頭相連的重鏈可變域(VH)和輕鏈可變域(VL),所述接頭太短使得同一條鏈上的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域之間不能配對(duì)。因此，迫使一個(gè)片段上的VH和VL結(jié)構(gòu)域與另一個(gè)片段上的互補(bǔ)VL和VH結(jié)構(gòu)域配對(duì)，由此形成兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。還報(bào)道了通過使用單鏈Fv(sFv)二聚體構(gòu)建雙特異性抗體片段的另一種策略。參見Gruberetal"J.Immunol.152:5368(1994)。設(shè)想了具有超過兩個(gè)效價(jià)的抗體。例如，可制備三特異性抗體。Tuttetal.,J.Immunol.147:60(1991)。多價(jià)抗體多價(jià)抗體可以比二價(jià)抗體更快的受到表達(dá)該抗體所結(jié)合抗原的細(xì)胞的內(nèi)在化(和/或異化)。本發(fā)明的抗體可以是可容易的通過編碼抗體多肽鏈的核酸的重組表達(dá)而生成的、具有三個(gè)或更多抗原結(jié)合位點(diǎn)(例如四價(jià)抗體)的多價(jià)抗體(IgM類別以外的)。多價(jià)抗體可包含二聚化結(jié)構(gòu)域和三個(gè)或更多抗原結(jié)合位點(diǎn)。二聚化結(jié)構(gòu)域包含(或由其組成)例如Fc區(qū)或鉸鏈區(qū)。在這種情況中，抗體將包含F(xiàn)c區(qū)及Fc區(qū)氨基末端的三個(gè)或更多抗原結(jié)合位點(diǎn)。在一個(gè)實(shí)施方案中，多價(jià)抗體包含(或由其組成)例如三個(gè)至約八個(gè)，或者四個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。多價(jià)抗體包含至少一條多肽鏈(例如兩條多肽鏈)，其中所述多肽鏈包含兩個(gè)或多個(gè)可變域。例如，多肽鏈可包含VDl-(Xl)n-VD2-(X2)n-Fc，其中VD1是第一可變域，VD2是第二可變域，F(xiàn)c是Fc區(qū)的一條多肽鏈，X1和X2代表氨基酸或多肽，而n是0或l。例如，多肽鏈可包含VH-CH1-柔性接頭畫VH畫CHl陽(yáng)Fc區(qū)鏈；或VH畫CH1-VH-CH1-Fc區(qū)鏈。本文中的多價(jià)抗體可進(jìn)一步包含至少兩條(例如四條)輕鏈可變域多肽。本文中的多價(jià)抗體可包含例如約兩條至約八條輕鏈可變域多肽。本文設(shè)想的輕鏈可變域多肽包含輕鏈可變域，且任選進(jìn)一步包含CL結(jié)構(gòu)域。抗體變體在有些實(shí)施方案中，設(shè)想了本文所述抗體的氨基酸序列修飾。例如，可能希望改進(jìn)抗體的結(jié)合親和力和/或其它生物學(xué)特性?？贵w的氨基酸序列變體是通過將適宜的核苷酸變化引入抗體核酸或通過肽合成制備的。此類修飾包括例如抗體氨基酸序列內(nèi)的殘基刪除和/或插入和/或替代。可進(jìn)行任何刪除、插入和替代組合以獲得最終的構(gòu)建物，倘若最終的構(gòu)建物具有期望的特征?？稍谥苽湫蛄袝r(shí)將氨基酸改變引入主題抗體氨基S臾序列?？捎糜阼b定抗體中作為優(yōu)選誘變位置的某些殘基或區(qū)域的方法有"丙氨酸掃描誘變"，如CunninghamandWells,Science244:1081-1085(1989)中所述。這里，鑒定一個(gè)殘基或一組靶殘基(如帶電荷的殘基，諸如精氨酸、天冬氨酸、組氨酸、賴氨酸和谷氨酸)并用中性或帶負(fù)電荷的氨基酸(例如丙氨酸或多聚丙氨酸)替代，以影響氨基酸與抗原的相互作用。然后通過在或?qū)μ娲稽c(diǎn)引入更多或其它變體，推敲對(duì)替代展示功能敏感性的氨基酸位置。由此，盡管用于引入氨基酸序列變異的位點(diǎn)是預(yù)先決定的，然而突變本身的本質(zhì)不必預(yù)先決定。例如，為了分析指定位點(diǎn)處突變的后果，在靶密碼子或區(qū)域進(jìn)行丙氨酸掃描或隨機(jī)誘變，并對(duì)所表達(dá)免疫球蛋白篩選期望的活性。氨基酸序列插入包括氨基和/或羧基末端的融合，長(zhǎng)度范圍由一個(gè)殘基至包含上百或更多殘基的多肽，以及單個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的序列內(nèi)插入。末端插入的例子包括具有N端曱硫氨酰殘基的抗體或與細(xì)胞毒性多肽融合的抗體?？贵w分子的其它插入變體包括將抗體的N或C端與酶(如用于ADEPT)或延長(zhǎng)抗體血清半衰期的多肽融合。另一類變體是氨基酸替代變體。這些變體在抗體分子中有至少一個(gè)氨基酸殘基用不同殘基替代。最有興趣進(jìn)行替代誘變的位點(diǎn)包括高變區(qū)，但是也設(shè)想了FR改變。表A中"優(yōu)選替代"欄顯示了保守替代。如果此類替代導(dǎo)致生物學(xué)活性變化，那么可導(dǎo)入表A中稱為"例示替代"的更實(shí)質(zhì)變化，或如下文參照氨基酸分類進(jìn)一步所述，并篩選產(chǎn)物。表A<table>tableseeoriginaldocumentpage63</column></row><table>對(duì)抗體生物學(xué)特性的實(shí)質(zhì)性修飾可通過選擇對(duì)維持以下方面的效果差異顯著的替代來(lái)實(shí)現(xiàn)(a)替代區(qū)域中多肽主鏈的結(jié)構(gòu)，例如(折疊)片或螺旋構(gòu)象，(b)靶位點(diǎn)處分子的電荷或疏水性，或(c)側(cè)鏈的體積。根據(jù)其側(cè)鏈特性的相似性，氨基酸可如下分組(A.L.Lehninger，《Biochemistry》，第2版，第73-75頁(yè)，WorthPublishers,NewYork,1975):(1)非極性的Ala(A)、Val(V)、Leu(L)、Ile(I)、Pro(P)、Phe(F)、Tip(W)、Met(M)(2)不帶電荷、極性的Gly(G)、Ser(S)、Thr(T)、Cys(C)、Tyr(Y)、Asn(N)、Gin(Q)(3)酸性的Asp(D)、Glu(E)(4)i威性的Lys(K)、Arg(R)、His(H)或者，根據(jù)共同的側(cè)鏈特性，天然發(fā)生殘基可如下分組(1)疏水性的正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、lie;(2)中性、親水性的Cys、Ser、Thr、Asn、Gin;(3)酸性的:Asp、Glu;(4)石威性的:His、Lys、Arg;(5)影響鏈取向的殘基Gly、Pro;(6)芳香族的Trp、Tyr、Phe。非保守替代需要用這些類別之一的成員替換另一個(gè)類別的。還可將此類替代殘基引入保守替代位點(diǎn)，或者引入剩余(非保守)位點(diǎn)。一類替代變體牽涉替代親本抗體(例如人源化或人抗體)的一個(gè)或多個(gè)高變區(qū)殘基。通常，選擇用于進(jìn)一步開發(fā)的所得變體相對(duì)于產(chǎn)生它們的親本抗體將具有改變(例如改進(jìn))的生物學(xué)特性。用于生成此類替代變體的一種便利方法牽涉使用噬菌體展示的親和力成熟。簡(jiǎn)而言之，將數(shù)個(gè)高變區(qū)位點(diǎn)(例如6-7個(gè)位點(diǎn))突變，在各個(gè)位點(diǎn)產(chǎn)生所有可能的氨基酸替代。如此生成的抗體展示在絲狀噬菌體顆粒上，作為與各個(gè)顆粒內(nèi)包裝的至少部分噬菌體外殼蛋白(例如M13基因m產(chǎn)物)的融合物。然后如本文所公開的對(duì)噬菌體展示的變體篩選其生物學(xué)活性(例如結(jié)合親和力)。為了鑒定用于修飾的候選高變區(qū)位點(diǎn)，可進(jìn)行掃描(例如丙氨酸掃描)誘變以鑒定對(duì)抗原結(jié)合具有重要貢獻(xiàn)的高變區(qū)殘基?；蛘?另外，分析抗原-抗體復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu)以鑒定抗體和抗原之間的接觸點(diǎn)可能是有益的。所述接觸殘基及鄰近殘基是依照本領(lǐng)域已知的技術(shù)(包括本文詳述的技術(shù))進(jìn)行替代的候選位點(diǎn)。一旦產(chǎn)生這樣的變體，使用本領(lǐng)域已知的技術(shù)(包括本文所述的技術(shù))對(duì)該組變體進(jìn)行篩選，可選擇在一種或多種相關(guān)測(cè)定法中具有優(yōu)良特性的抗體用于進(jìn)一步的開發(fā)。64編碼抗體氨基酸序列變體的核酸分子可通過本領(lǐng)域知道的多種方法來(lái)制備。這些方法包括但不限于從天然來(lái)源分離(在天然發(fā)生氨基酸序列變體的情況中)，或者通過對(duì)較早制備的變體或非變異型式的抗體進(jìn)行寡核苷酸介導(dǎo)的(或定點(diǎn))誘變、PCR誘變和盒式誘變來(lái)制備?？赡芟Ｍ诒景l(fā)明抗體的FC區(qū)中引入一處或多處氨基酸修飾，由此生成Fc區(qū)變體。Fc區(qū)變體可包括在一個(gè)或多個(gè)氨基酸位置(包括鉸鏈半胱氨酸)包含氨基酸修飾(如替代)的人Fc區(qū)序歹'J(如人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4Fc區(qū))。依照此描述和本領(lǐng)域的教導(dǎo)，設(shè)想了在有些實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體與野生型對(duì)應(yīng)抗體相比可在例如Fc區(qū)中包含一處或多處改變。與它們的野生型對(duì)應(yīng)物相比，這些抗體仍將基本上保留治療功效所需要的相同特性。例如，認(rèn)為可在Fc區(qū)中進(jìn)行將會(huì)導(dǎo)致Clq結(jié)合和/或補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)改變(即或是增強(qiáng)或是削弱)的某些改變，例如W099/51642中所述。還可參見關(guān)注Fc區(qū)變體其它實(shí)例的DuncanandWinter,Nature322:738-40(1988);美國(guó)專利5，648,260;美國(guó)專利5,624,821;及W094/29351。一方面，本發(fā)明提供了在包含F(xiàn)c區(qū)的Fc多肽的界面中包含修飾的抗體，其中所述修飾便于和/或促進(jìn)異二聚化。這些修飾包括在第一Fc多肽中引入隆起(protuberance)，在第二Fc多肽中引入空穴(cavity)，其中所述隆起可位于所述空穴中，從而促進(jìn)第一和第二Fc多肽的復(fù)合。用于生成具有這些修飾的抗體的方法是本領(lǐng)域已知的，例如美國(guó)專利No.5,731,168中所記載的。免疫偶聯(lián)物一方面，本發(fā)明提供了包含偶聯(lián)有細(xì)胞毒劑的抗體的免疫偶聯(lián)物或抗體-藥物偶聯(lián)物(ADC)，所述細(xì)胞毒劑諸如化療劑、藥物、生長(zhǎng)抑制劑、毒素(如細(xì)菌、真菌、植物或動(dòng)物起源的酶活性毒素或其片段)或放射性同位素(即放射偶聯(lián)物)?？贵w-藥物偶聯(lián)物在癌癥治療中用于局部遞送細(xì)胞毒制劑或抑制細(xì)胞試劑(即用于殺死或抑制腫瘤細(xì)胞的藥物)的用途(SyrigosandEpenetos,AnticancerResearch19:605-614(1999);Niculescu-DuvazandSpringer,Adv.Drg.Del.Rev.26:151-172(1997);美國(guó)專利4,975,278)容許將藥物部分靶向遞送至腫瘤，并在那兒進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)積累，而系統(tǒng)施用這些未經(jīng)偶聯(lián)的藥物試劑可能在試圖消除的腫瘤細(xì)胞以外導(dǎo)致不可接受的對(duì)正常細(xì)胞的毒性水平(Baldwinetal.,Lancet603-05(1986年5月15日)；Thorpe,"AntibodyCarriersOfCytotoxicAgentsInCancerTherapy:AReview",在《MonoclonalAntibodies'84:BiologicalAndClinicalApplications》中，A.Pinchera等人編，第475-506頁(yè)，1985)。由此試圖獲得最大功效及最小毒性。多克隆抗體和單克隆抗體皆有報(bào)道可用于這些策略(Rowlandetal.,CancerImmunol.Immunother.21:183-87(1986))。這些方法中所使用的藥物包括道諾霉素(daunomycin)、多柔比星(doxorubicin)、曱氨蟲萊口令(methotrexate)和長(zhǎng)春地辛(vindesine)(Rowlandetal.，1986,見上文)?？贵w-毒素偶聯(lián)物中所使用的毒素包括細(xì)菌毒素諸如白喉毒素、植物毒素諸如蓖麻毒蛋白、小分子毒素諸如格爾德霉素(geldanamycin)'(Mandleretal"Jour,oftheNat.CancerInst.92(19):1573-1581(2000);Mandleretal,，Bioorganic&Med.Chem.Letters10:1025-1028(2000);Mandleretal"BioconjugateChem.13:786-791(2002))、美登木素生物堿類(EP1391213;Liuetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA93:8618-8623(1996))、和加利車霉素(Lodeetal.，CancerRes.58:2928(1998);Hinmanetal.,CancerRes.53:3336-3342(1993))。毒素可通過包括微管蛋白結(jié)合、DNA結(jié)合或拓樸異構(gòu)酶抑制在內(nèi)的機(jī)制發(fā)揮其細(xì)胞毒作用和抑制細(xì)胞的效果。有些細(xì)胞毒藥物在與大的抗體或蛋白質(zhì)受體配體偶聯(lián)時(shí)趨于失活或活性降低。ZEVALIN(ibritumomabtiuxetan，Biogen/Idec)是由針對(duì)在正常和惡性B淋巴細(xì)胞表面上發(fā)現(xiàn)的CD20抗原的鼠IgGlK單克隆抗體與通過;克脲接頭-螯合劑所結(jié)合的1Hln或卯Y放射性同位素構(gòu)成的抗體-放射性同位素偶聯(lián)物(Wisemanetal"Eur.Jour.Nucl.Med.27(7):766-77(2000);Wisemanetal"Blood99(12):4336-42(2002);Witzigetal"J.Clin.Oncol.20(10):2453-63(2002);Witzigetal.，J.Clin.Oncol.20(15):3262-69(2002))。盡管ZEVALIN具有針對(duì)B細(xì)胞非何杰金氏(Hodgkin)淋巴瘤(NHL)的活性，然而施藥在大多數(shù)患者中導(dǎo)致嚴(yán)重且長(zhǎng)時(shí)間的血細(xì)胞減少。MYLOTARG(gemtuzumabozogamicin，WyethPharmaceuticals),即由人CD33抗體與加利車霉素連接而構(gòu)成的抗體-藥物偶聯(lián)物，在2000年批準(zhǔn)用于經(jīng)注射治療急性骨髓性白血病(DrugsoftheFuture25(7):686(2000);美國(guó)專利4970198;5079233;5585089;5606040;5693762;5739116;5767285;5773001)。Cantuzumabmertansine(ImmunogenInc.)，即由huC242抗體經(jīng)二硫化物接頭SPP與美登木素生物堿藥物部分DMl連接而構(gòu)成的抗體-藥物偶聯(lián)物，在測(cè)試用于治療表達(dá)CanAg的癌癥諸如結(jié)腸癌、胰腺癌、胃癌和其它癌。MLN-2704(MillenniumPharm.,BZLBiologies,ImmunogenInc.)，即由抗前列腺特異膜抗原(PSMA)單克隆抗體與美登木素生物堿藥物部分DMl連接而構(gòu)成的抗體-藥物偶聯(lián)物，在測(cè)試.用于前列腺腫瘤潛在治療。將多拉司他汀(dolastatin)的合成類似物auristatin肽、auristatinE(AE)和單曱基auristatin(MMAE)與嵌合單克隆抗體cBR96(對(duì),癌上的LewisY特異)和cAC10(對(duì)惡性血液腫瘤上的CD30特異)偶聯(lián),(Doroninaetal"NatureBiotechnology21(7):778-784(2003)),且正在進(jìn)行治:療性開發(fā)。本文中(上文)描述了可用于生成免疫偶聯(lián)物的化療劑?？墒褂玫拿富钚远舅丶捌淦伟ò缀矶舅谹鏈、白喉毒素的非結(jié)合活性片段、外毒素A鏈(來(lái)自銅綠有支單月包菌Pseudomonasaeruginosa)、蓖麻毒蛋白(ricin)A《連、相思豆毒蛋白(abrin)A鏈、蒴蓮根毒蛋白(modeccin)A鏈、a-帚曲霉素(sarcin)、油桐(Aleutitesfordii)毒蛋白、香石竹(dianthin)毒蛋白、美洲商陸(Phytolacaamericana)毒蛋白(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜(Momordicacharantia)抑制4勿、麻瘋杉于毒蛋白(curcin)、巴豆毒蛋白(crotin)、月巴急草(sapaonariaofficinalis)抑制物、白樹毒蛋白(gelonin)、絲林霉素(mitogellin)、局限曲菌素(restrictocin)、盼審素(phenomycin)、依i若審素(enomycin)禾口單端孑包菌素(trichothecenes)。參'見例如1993年10月28日公開的WO93/21232。多種放射性核素可用于生成放射偶聯(lián)抗體。實(shí)例包括212Bi、1311、131In、90Y和186Re。抗體和細(xì)胞毒劑的偶聯(lián)物可使用多種雙功能蛋白質(zhì)偶聯(lián)劑來(lái)制備，諸如N-琥珀酰亞氨基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)、亞氨基硫烷(IT)、亞氨酸酯(諸如鹽酸己二酰亞氨酸二曱酯)、活性酯類(諸如辛二酸二琥珀酰亞氨基酯)、醛類(諸如戊二醛)、雙疊氮化合物(諸如雙(對(duì)-疊氮苯曱酰基)己二胺)、雙重氮衍生物(諸如雙(對(duì)-重氮苯曱?；?己二胺)、二異氰酸酯(諸如曱苯2,6-二異氰酸酯)、和雙活性氟化合物(諸如1，5-二氟-2,4-二硝基苯)的雙功能衍生物。例如，可如Vitettaetal.,Science238:1098(1987)中所述制備蓖麻毒蛋白免疫毒素。碳-14標(biāo)記的l-異硫氰酸苯曱基-3-曱基二亞乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)是用于將放射性核苷酸與抗體偶聯(lián)的例示性螯合劑。參見WO94/11026。本文還設(shè)想了抗體與一種或多種小分子毒素諸如加利車霉素(calicheamicin)、美登木素生物械類(maytansinoids)、dolostatins、aurostatins、單端孢霉素(trichothecene)和CC1065及這些毒素具有毒素活性的片段的偶聯(lián)物。美登素和美登木素生物堿類在有些實(shí)施方案中，免疫偶聯(lián)物包含偶聯(lián)有一個(gè)或多個(gè)美登木素生物石威分子的本發(fā)明抗體。美登木素生物堿類是通過抑制微管蛋白多聚化來(lái)發(fā)揮作用的有絲分裂:抑制劑。美登素最初從東非灌木齒葉美登木(Maytenusserrata)分離得到(美國(guó)專利3,896，111)。隨后發(fā)現(xiàn)某些微生物也生成美登木素生物堿類，諸如美登醇和C-3美登醇酯(美國(guó)專利4,151,042)。例如下列美國(guó)專利公開了合成美登醇及其衍生物和類似物4,137,230;4，248，870;4,256,746;4,260,608;4,265,814;4,294,757;4,307,016;4,308,268;4,308,269;4,309,428;4,313,946;4,315,929;4,317,821;4,322,348;4,331,598;4，361，650;4,364,866;4,424,219;4,450,254;4,362,663;及4，371，533。美登木素生物堿類藥物模塊在抗體藥物偶聯(lián)物中是有吸引力的藥物模塊，因?yàn)樗鼈?i)相對(duì)易于通過發(fā)酵或發(fā)酵產(chǎn)物的化學(xué)修飾、衍生化來(lái)制備；(ii)易于用適于通過非二硫化物接頭的偶聯(lián)的官能基衍生化；(iii)在血漿中穩(wěn)定；且(iv)有效針對(duì)多種腫瘤細(xì)胞系。美登木素生物石威類藥物才莫塊的例示性實(shí)施方案包括DM1、DM3和DM4。例如下列專利公開了包含美登木素生物堿類的免疫偶聯(lián)物及其制備方法和治療用途美國(guó)專利5,208,020;5,416,064;及歐洲專利EP0425235Bl，明確將其公開內(nèi)容收入本文作為參考。Liuetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA93:8618-8623(1996)記載了包含與針對(duì)人結(jié)腸直腸癌的單克隆抗體C242連接的稱為DM1的美登木素生物堿的免疫偶聯(lián)物。發(fā)現(xiàn)該偶聯(lián)物具有針對(duì)培養(yǎng)的結(jié)腸癌細(xì)胞的高度細(xì)胞毒性，而且在體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)測(cè)定法中顯示抗肺瘤活性。Charietal.，CancerResearch52:127-131(1992)記載了其中美登木素生物堿經(jīng)二硫化物接頭與結(jié)合人結(jié)腸癌細(xì)胞系上抗原的鼠抗體A7或結(jié)合HER-2/neu癌基因的另一種鼠單克隆抗體TA.1偶聯(lián)的免疫偶聯(lián)物。在體外在人乳癌細(xì)胞系SK-BR-3上測(cè)試了TA.l-美登木素生物堿偶聯(lián)物的細(xì)胞毒性，該細(xì)胞系每個(gè)細(xì)胞表達(dá)3xl()S個(gè)HER-2表面抗原。藥物偶聯(lián)物達(dá)到了與游離美登木素生物堿藥物相似的一定程度的細(xì)胞毒性，這可通過增加每個(gè)抗體分子偶聯(lián)的美登木素生物堿分子數(shù)目來(lái)提高。A7-美登木素生物堿偶聯(lián)物在小鼠中顯示低系統(tǒng)性細(xì)胞毒性。連接且不顯著削弱抗體或美登木素生物堿分子的生物學(xué)活性來(lái)制備。參見例如美國(guó)專利No.5,208,020,明確將其公開內(nèi)容收入本文作為參考。每個(gè)抗體分子偶聯(lián)平均3-4個(gè)美登木素生物堿分子在增強(qiáng)針對(duì)靶細(xì)胞的細(xì)胞毒性中顯示功效，且對(duì)抗體的功能或溶解度沒有負(fù)面影響，盡管預(yù)計(jì)甚至一個(gè)分子的毒素/抗體也將較之棵抗體的使用增強(qiáng)細(xì)胞毒性。美登木素生物堿類在本領(lǐng)域是眾所周知的，而且可通過已知技術(shù)合成或從天然來(lái)源分離。例如美國(guó)專利生物堿類。美登木素生物堿類包括但不限于美登醇和美登醇分子的芳香環(huán)或其它位置經(jīng)過修飾的美登醇類似物，諸如各種美登醇酯。本領(lǐng)域知道許多連接基團(tuán)可用于制備抗體-美登木素生物堿偶聯(lián)物，包括例如美國(guó)專利5，208,020或歐洲專利0425235Bl;Charietal,,CancerResearch52:127-131(1992);2004年10月9曰提交的美國(guó)專利申請(qǐng)No.10/960，602中所公開的，明確將其公開內(nèi)容收入本文作為參考。包含接頭構(gòu)件SMCC的抗體-美登木素生物堿類偶聯(lián)物可以如2004年10月8日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)No.10/960,602中所披露的來(lái)制備。連接基團(tuán)包括二硫化物基團(tuán)、硫醚基團(tuán)、酸不穩(wěn)定基團(tuán)、光不穩(wěn)定基團(tuán)、肽酶不穩(wěn)定基團(tuán)、或酯酶不穩(wěn)定基團(tuán)，正如上文所述專利中所公開的。本文中描述和例示了別的連接基團(tuán)?？墒褂枚喾N雙功能蛋白質(zhì)偶聯(lián)劑來(lái)制備抗體和美登木素生物堿的偶聯(lián)物，諸如N-琥珀酰亞氨基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)、琥珀酰亞氨基-4-(N-馬來(lái)酰亞氨基曱基)環(huán)己烷-l-羧酸酯(SMCC)、亞氨基硫烷(IT)、亞氨酸面旨(諸如鹽酸己二酰亞氨酸二曱酯)、活性酯類(諸如辛二酸二琥珀酰亞氨基酯)、醛類(諸如戊二醛)、雙疊氮化合物(諸如雙(對(duì)-疊氮苯曱酰基)己二胺)、雙重氮衍生物(諸如雙(對(duì)-重氮苯曱?；?-乙二胺)、二異氰酸酯(諸如曱苯2，6-二異氰酸酯)、和雙活性氟化合物(諸如l,5-二氟-2,4-二硝基苯)的雙功能衍生物。偶聯(lián)劑包括但不限于N-琥珀酰亞氨基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)(Carlssonetal.，Biochem.J.173:723-737(1978))和N-琥珀酰亞氨基—4-(2-吡啶基硫代)戊酸酯(SPP)，由此提供二硫鍵連接。根據(jù)連接的類型，可將接頭附著于美登木素生物堿分子的多個(gè)位置。例如，可使用常規(guī)偶聯(lián)技術(shù)通過與羥基的反應(yīng)來(lái)形成酯鍵。反應(yīng)可發(fā)生在具有羥基的C-3位置、經(jīng)羥曱基修飾的C-14位置、經(jīng)羥基修飾的C-15位置、和具有羥基的C-20位置。在一個(gè)實(shí)施方案中，在美登醇或美登醇類似物的C-3位置形成鍵連接。Auristatin和多4立司4也汀在有些實(shí)施方案中，免疫偶聯(lián)物包含與多拉司他汀類(dolastatins)或多拉司他汀肽類似物及衍生物、auristatin類偶聯(lián)的本發(fā)明抗體(美國(guó)專利No.5,635,483;5，780，588)。多拉司他汀類和auristatin類已經(jīng)顯示出干擾樣i管動(dòng)力學(xué)、GTP水解、及核和纟田胞分裂(Woykeetal(2001)Antimicrob.AgentsandChemother.45(12):3580-3584)且具有抗癌(US5，663，149)和抗真菌活性(Pettitetal(1998)Antimicrob.AgentsChemother.42:2961-2965)。多拉司他汀或auristatin藥物模塊可經(jīng)由肽藥物模塊的N(氨基)末端或C(羧基)末端附著于抗體(WO02/088172)。例示性的auristatin實(shí)施方案包括N-末端連接的單曱基auristatin藥物模塊DE和DF,披露于"MonomethylvalineCompoundsCapableofConjugationtoLigands",U.S.Ser.No.10/983,340,filedNov.5,2004,明確將其7>開內(nèi)容完整收入本文作為參考。例示性的auristatin實(shí)施方案包括MMAE和MMAF。包含MMAE或MMAF和各種接頭構(gòu)件(本文中進(jìn)一步描述的)的別的例示性的實(shí)施方案包括Ab-MC-vc-PAB-MMAF、Ab-MC-vc-PAB-MMAE、Ab-MC-MMAE和Ab-MC-MMAF。典型的是,基于肽的藥物模塊可通過在兩個(gè)或多個(gè)氨基酸和/或肽片段之間形成肽鍵來(lái)制備。此類肽鍵可依照例如肽化學(xué)領(lǐng)域眾所周知的液相合成法來(lái)制備(參見E.Schr6derandK.Liibke,ThePeptides,volume1，pp76-136,1965:AcademicPress)。auristatin/多拉司他汀藥物并莫塊可依照以下文獻(xiàn)中的方法來(lái)制備US5,635,483;US5,780,588;Pettitetal(1989)J.Am.Chem.Soc.111:5463-5465;Pettitetal(1998)Anti-CancerDrugDesign13:243-277;Pettit,GR.,etal.Synthesis,1996,719-725;Pettitetal(1996)J.Chem.Soc.PerkinTrans.15:859-863;及Doronina(2003)NatBiotechnol21(7):778-784;"MonomethylvalineCompoundsCapableofConjugationtoLigands",美國(guó)^fL7JC號(hào)No.10/983,340,2004年11月5日提交，將其完整收入本文作為參考(披露了例如制備諸如MMAE和MMAF偶聯(lián)至接頭的單曱基纈氨酸化合物的接頭和方法)。70加利車霉素在其它實(shí)施方案中，免疫偶聯(lián)物包含偶耳關(guān)有一個(gè)或多個(gè)加利車霉素分子的本發(fā)明抗體。加利車霉素抗生素家族能夠在亞皮摩爾濃度生成雙鏈DNA斷裂。關(guān)于加利車霉素家族偶聯(lián)物的制備參見美國(guó)專利5,712,374;5,714,586;5,739,116;5,767,285;5,770,701;5,770,710;5，773，001;和5,877，296(都授予美國(guó)Cyanamid公司)?？捎玫募永嚸顾亟Y(jié)構(gòu)類似物包括但不限于yl1、a21、a31、N-乙?；媦l1、PSAG和011(Hinmanetal.,CancerResearch53:3336-3342(1993);Lodeetal.,CancerResearch58:2925-2928(1998);及上述授予美國(guó)Cyanamid公司的美國(guó)專利)?？膳c抗體偶聯(lián)的另一種抗腫瘤藥物是QFA，它是一種抗葉酸藥物。加利車霉素和QFA都具有胞內(nèi)作用位點(diǎn)，且不易穿過質(zhì)膜。因此，這些試劑經(jīng)由抗體介導(dǎo)的內(nèi)在化的細(xì)胞攝取大大增強(qiáng)了它們的細(xì)胞毒效果。其它細(xì)胞毒劑可與本發(fā)明抗體偶聯(lián)的其它抗腫瘤劑包括BCNU、鏈佐星(streptozoicin)、長(zhǎng)春新堿(vincristine)、5-氟尿嘧啶、美國(guó)專利5，053,394、5，770,710中記載的統(tǒng)稱為L(zhǎng)L-E33288復(fù)合物的試劑家族、及埃斯波霉素類(esperamicins)(美國(guó)專利5,877,296)?？捎玫拿富钚远舅丶捌淦伟ò缀矶舅谹鏈、白喉毒素的非結(jié)合活性片,殳、夕卜毒素A4連(來(lái)自銅纟錄々i單月包菌Pseudomonasaeruginosa)、蓖麻毒蛋白(ricin)A鏈、相思豆毒蛋白(abrin)A鏈、蒴蓮才艮毒蛋白(modeccin)A4連、a-帚曲霉素(sarcin)、油桐(Aleutitesfordii)毒蛋白、香石竹(dianthin)毒蛋白、美洲商陸(Phytolacaamericana)毒蛋白(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜(Momordicacharantia)抑制物、麻瘋樹毒蛋白(curcin)、巴豆毒蛋白(crotin)、月巴皂草(sapaonariaofficinalis)4中制物、白初于毒蛋白(gelonin)、絲沖木霉素(mitogellin)、局卩艮曲菌素(restrictocin)、酚霉素(phenomycin)、依i若霉素(enomycin)牙口單端孢菌素(trichothecenes)。參見例如1993年10月28日公布的WO93/21232。本發(fā)明還設(shè)想了抗體和具有核酸降解活性的化合物(如核糖核酸酶或DNA內(nèi)切核酸酶，諸如脫氧核糖核酸酶；DNA酶)之間形成的免疫偶聯(lián)物。為了選擇性破壞腫瘤，抗體可包含高度放射性原子。多種放射性同位素可用于生成放射偶聯(lián)抗體。實(shí)例包括At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pbm和Lu的放射性同位素。在將偶聯(lián)物用于檢測(cè)時(shí)，可包含放射性原子用于閃爍照相研究，例如TC,或I123,或是包含自旋標(biāo)記物用于核磁共振(NMR)成像(也稱為磁共振成像，MRI)，諸如碘-123、碘-131、錮-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、禮、錳或鐵。可以已知方式將放射性或其它標(biāo)記物摻入偶聯(lián)物。例如，可生物合成肽，或是通過化學(xué)氨基酸合成法合成肽，其中使用牽涉例如氟-19代替氫的合適氨基酸前體。可經(jīng)肽中的半胱氨酸殘基來(lái)附著標(biāo)記物，諸如Tc""或I123、Re186、Re哪和In川?？梢越?jīng)賴氨酸殘基來(lái)附著釔-90。IODOGEN法(Frakeretal.(1978)Biochem.Biophys.Res.Commun.80:49-57)可用于摻入石典-123?！禡onoclonalAntibodiesinImmunoscintigraphy》(Chatal，CRCPress,1989)i羊纟田i己載了其它方法?？墒褂枚喾N雙功能蛋白質(zhì)偶聯(lián)劑來(lái)制備抗體和細(xì)胞毒劑的偶聯(lián)物，諸如N-琥珀酰亞氨基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)、琥珀酰亞氨基-4-(N-馬來(lái)酰亞氨基曱基)環(huán)己烷-l-羧酸酯(SMCC)、亞氨基硫烷(IT)、亞氨酸酯(諸如鹽酸己二酰亞氨酸二曱酯)、活性酯類(諸如辛二酸二琥珀酰亞氨基酯)、醛類(諸如戊二醛)、雙疊氮化合物(諸如雙(對(duì)-疊氮苯曱?；?己二胺)、雙重氮衍生物(諸如雙(對(duì)-重氮苯曱?；?-乙二胺)、二異硫氰酸酯(諸如曱苯2,6-二異氰酸酯)、和雙活性氟化合物(諸如l，5-二氟-2,4-二硝基苯)的雙功能衍生物。例如，可如Vitettaetal.，Science238:1098(1987)中所述制備蓖麻毒蛋白免疫毒素。碳-14標(biāo)記的l-異硫氰酸苯曱基-3-曱基二亞乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)是用于將放射性核苷酸與抗體偶聯(lián)的例示性螯合劑。參見WO94/11026。接頭可以是便于在細(xì)胞中釋放細(xì)胞毒藥物的"可切割接頭"。例如，可使用酸不穩(wěn)定接頭、肽酶敏感接頭、光不穩(wěn)定接頭、二曱基接頭、或含二硫化物接頭(Charietal.，CancerResearch52:127-131(1992);美國(guó)專利5，208,020)。本發(fā)明的化合物明確涵蓋但不限于用下列交聯(lián)劑制備的ADC:商品化(如購(gòu)自PierceBiotechnologyInc.,Rockford,IL,U.S.A.)的BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、sulfo-EMCS、sulfo-GMBS、sulfo-K固S、sulfo-MBS、sulfo-SIAB、sulfo-SMCC和sulfo-SMPB、和SVSB(琥珀酰亞胺基-(4-乙烯基砜)苯曱酸酯)。見2003-2004年度應(yīng)用手冊(cè)和產(chǎn)品目錄(ApplicationsHandbookandCatalog)第467-498頁(yè)。抗體-藥物偶聯(lián)物的制備在本發(fā)明的抗體-藥物偶聯(lián)物(ADC)中，將抗體(Ab)經(jīng)接頭(L)與一個(gè)或多個(gè)藥物部分(D)綴合，例如每個(gè)抗體偶聯(lián)約1個(gè)至約20個(gè)藥物部分。可采用本領(lǐng)域技術(shù)人員知道的有機(jī)化學(xué)反應(yīng)、條件和試劑通過數(shù)種路徑來(lái)制備通式r的ADC,包括(l)抗體的親核基團(tuán)經(jīng)共價(jià)鍵與二價(jià)接頭試劑反應(yīng)，形成Ab-L，隨后與藥物部分D反應(yīng)；和(2)藥物部分的親核基團(tuán)經(jīng)共價(jià)4建與二價(jià)接頭試劑反應(yīng)，形成D-L,隨后與抗體的親核基團(tuán)反應(yīng)。本文中描述了用于制備ADC的別的方法。Ab-(L-D)pI接頭可以由一種或多種接頭構(gòu)件構(gòu)成。例示性的接頭構(gòu)件包括6-馬來(lái)酰亞胺己酰基("MC")、馬來(lái)酰亞胺丙?；?"MP")、纈氨酸-瓜氨酸("va1-cit")、丙氨酸-苯丙氨酸("ala-phe")、對(duì)氨基節(jié)氧羰基("PAB")、4-(2-吡啶基硫代)戊酸N-琥珀酰亞氨基酯("SPP")、4-(N-馬來(lái)酰亞胺曱基)環(huán)己烷-l羧酸N-琥珀酰亞氨基酯("SMCC')、和(4-碘-乙?；?氨基苯曱酸N-琥珀酰亞氨基酯("SIAB")。本領(lǐng)域知道別的接頭構(gòu)件，本文也描述了一些。還可參見"MonomethylvalineCompoundsCapableofConjugationtoLigands",美國(guó)；克7JC號(hào)No.10/983,340,2004年11月5日提交，將其完整內(nèi)容收入本文作為參考。在有些實(shí)施方案中，接頭可包含氨基酸殘基。例示性的氨基酸接頭構(gòu)件包括二肽、三肽、四肽或五肽。例示性的二肽包括纈氨酸-瓜氨酸(vc或val-cit)、丙氨酸-苯丙氨酸(af或ala-phe)。例示性三肽包括甘氨酸-纈氨酸-瓜氨酸(gly-val-cit)和甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(gly-gly-gly)。構(gòu)成氨基酸接頭構(gòu)件的氨基酸殘基包括那些天然存在的氨基酸，以及次要的氨基酸和非天然存在的氨基酸類似物，諸如瓜氨酸。氨基酸接頭構(gòu)件可以在它們的特定酶(例如肺瘤相關(guān)蛋白酶，組織蛋白酶B、C和D,或纖溶酶蛋白酶)的酶促切割的選擇性方面進(jìn)行設(shè)計(jì)和優(yōu)化。例示性的接頭構(gòu)件結(jié)構(gòu)顯示如下(其中波浪線指示共價(jià)附著至ADC其它組分的位點(diǎn))別的例示性的接頭構(gòu)件和縮寫包括(其中描繪了抗體(Ab)和接頭，而且p為l到約8):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage74</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage75</formula>抗體的親核基團(tuán)包括但不限于(i)N末端氨基；(ii)側(cè)鏈氨基，如賴氨酸；(iii)側(cè)鏈巰基，如半胱氨酸；和(iv)糖基化抗體中糖的羥基或氨基。氨基、巰基、和羥基是親核的，能夠與接頭部分上的親電子基團(tuán)反應(yīng)而形成共價(jià)鍵，而接頭試劑包括(i)活性酯類，諸如NHS酯、HOBt酯、卣代曱酸酯、和酸性卣化物；(ii)烷基和苯曱基卣化物，諸如卣代乙酰胺；(iii)醛類、酮類、羧基和馬來(lái)酰亞胺基團(tuán)。某些抗體具有可還原的鏈間二硫鍵，即半胱氨酸橋?？赏ㄟ^還原劑諸如DTT(二硫蘇糖醇)處理使抗體具有與接頭試劑綴合的反應(yīng)活性。每個(gè)半胱氨酸橋理論上將形成兩個(gè)反應(yīng)性石克醇親核體?？山?jīng)由賴氨酸與2-亞氨基硫烷(Traut氏試劑)的反應(yīng)，導(dǎo)致胺轉(zhuǎn)變?yōu)榱虼?，從而將額外親核基團(tuán)引入抗體?？梢酝ㄟ^導(dǎo)入一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、或更多個(gè)半胱氨酸殘基(例如制備包含一個(gè)或多個(gè)非天然半胱氨酸氨基酸殘基的突變型抗體)而將反應(yīng)性硫醇基導(dǎo)入抗體(或其片段)。還可通過修飾抗體來(lái)生成本發(fā)明的抗體-藥物偶聯(lián)物，即引入可與接頭試劑或藥物上的親核取代基反應(yīng)的親電子部分。可用例如高碘酸鹽氧化劑氧化糖基化抗體的糖，從而形成可與接頭試劑或藥物部分的胺基團(tuán)反應(yīng)的醛或酮基團(tuán)。所得亞胺Schiff堿基可形成穩(wěn)定的鍵，或者可用例如硼氫化物試劑還原而形成穩(wěn)定的胺連接。在一個(gè)實(shí)施方案中，糖基化抗體的碳水化合物部分與半乳糖氧化酶或偏高碘酸鈉的反應(yīng)可在蛋白質(zhì)中生成羰(醛和酮)基團(tuán)，它可與藥物上的適宜基團(tuán)反應(yīng)(Hermanson，BioconjugateTechniques)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，包含N末端絲氨酸或蘇氨酸殘基的蛋白質(zhì)可與偏高碘酸鈉反應(yīng)，導(dǎo)致在第一個(gè)氨基酸處生成醛(Geoghegan&Stroh，Bio—ugateChem.3:138-146(1992);US5362852)。此類醛可與藥物部分或4妄頭親核體反應(yīng)。同樣，藥物部分上的親核基團(tuán)包括但不限于胺、硫醇、羥基、酰肼、將、肼、縮氨基硫脲、肼羧酸酯、和芳基酰肼基團(tuán)，它們能夠與接頭部分上的親電子基團(tuán)反應(yīng)而形成共價(jià)鍵，而接頭試劑包括(i)活性酯類，諸如NHS酯、HOBt酯、卣代甲酸酯、和酸性卣化物；(ii)烷基和苯曱基卣化物，諸如卣代乙酰胺；(iii)醛類、酮類、羧基、和馬來(lái)酰亞胺基團(tuán)。或者，可通過例如重組技術(shù)或肽合成來(lái)制備包含抗體和細(xì)胞毒劑的融合蛋白。DNA的長(zhǎng)度可包含各自編碼偶聯(lián)物兩個(gè)部分的區(qū)域，或是彼此毗鄰或.是由編碼接頭肽的區(qū)域分開，該接頭肽不破壞偶聯(lián)物的期望特性。在又一個(gè)實(shí)施方案中，可將抗體與"受體"(諸如鏈霉親和素)偶聯(lián)從而用于腫瘤預(yù)先靶向，其中對(duì)患者施用抗體-受體偶聯(lián)物，接著使用清除劑由循環(huán)中清除未結(jié)合的偶聯(lián)物，然后施用與細(xì)胞毒劑(如放射性核苷酸)偶聯(lián)的"配體"(如親合素)。(Ab)-MC-MMAE。用過量的100mM二硫蘇糖醇(DTT)處理溶于500mM硼酸鈉和500mM氯化鈉pH8.0的抗體。于37。C溫育約30分鐘后，通過SephadexG25樹脂上的洗脫更換緩沖液并用含lmMDTPA的PBS洗脫。通過溶液在280nm處的吸光度測(cè)定還原的抗體濃度，并通過與DTNB(Aldrich,Milwaukee,Wl)的反應(yīng)及412nm處的吸光度測(cè)定硫醇濃度，由此檢查硫醇/抗體值。使溶于PBS中的還原的抗體在冰上變冷。將溶于DMSO的藥物接頭試劑馬來(lái)酰亞胺己酰基-單曱基auristatinE(MMAE)即MC-MMAE在乙腈和水中稀釋至已知濃度，并加至冷卻的PBS中的還原的抗體2H9。約1小時(shí)后，加入過量的馬來(lái)酰亞胺以淬滅反應(yīng)并覆蓋任何未反應(yīng)的抗體硫醇基團(tuán)。通過離心超濾將反應(yīng)混合液濃縮，通過PBS中的G25樹脂的洗脫將2H9-MC-MMAE純化和脫鹽，在無(wú)菌條件下通過0.2pm濾器過濾，并冷凍供貯存。抗體-MC-MMAF可以遵循為制備Ab-MC-MMAE而提供的方案通過用MC-MMAF偶聯(lián)本文中提供的任何抗體來(lái)制備?？贵w-MC-val-cit-PAB-MMAE可以遵循為制備Ab-MC-MMAE而提供的方案通過用MC-val-cit-PAB-MMAE偶聯(lián)本文中提供的任何抗體來(lái)制備。抗體-MC-val-cit-PAB-MMAF可以遵循為制備Ab-MC-MMAE而提供的'方案通過用MC-val-cit-PAB-MMAF偶聯(lián)本文中提供的任何抗體來(lái)制備。如下用SMCC-DM1通過偶聯(lián)本文中提供的任何抗體來(lái)制備抗體-SMCC-DM1。將純化的抗體用4-(N-馬來(lái)酰亞胺曱基)環(huán)己烷-l-羧酸琥珀酰亞氨基酯(SMCC,PierceBiotechnology,Inc)衍生化以引入SMCC接頭。具體而言，用7.5個(gè)摩爾當(dāng)量的SMCC(20mM，在DMSO中，6.7mg/ml)處理50mM磷酸鉀/50mM氯化鈉/2mMEDTA,pH6.5中的20mg/ml抗體。在氬氣下于環(huán)境溫度攪動(dòng)2小時(shí)后，將反應(yīng)混合液通過用50mM磷酸鉀/50mM氯化鈉/2mMEDTA,pH6.5平衡的SephadexG25柱過濾。合并并測(cè)定含有抗體的級(jí)分。將如此制備的抗體-SMCC用50mM磷酸鉀/50mM氯化鈉/2mMEDTA，pH6.5稀釋至終濃度約10mg/ml，并與DM1在二曱基乙酰胺中的10mM溶液反應(yīng)。將反應(yīng)液在氬氣下于環(huán)境溫度攪動(dòng)16.5小時(shí)。然后將偶聯(lián)反應(yīng)混合液通過用lxPBSpH6.5平衡的SephadexG25凝膠過濾柱(1.5x4.9cm)過濾。根據(jù)252nm和280nm處的吸光度的測(cè)量，DM1藥物/抗體比率(p)可以是約2-5。如下用SPP-DMl通過偶聯(lián)本文中提供的任何抗體來(lái)制備Ab-SPP-DMl。將純化的抗體用4-(2-吡啶基硫代)戊酸N-琥珀酰亞氨基酯衍生化以引入二硫代p比咬基。用SPP(2.3ml乙醇中的5.3個(gè)摩爾當(dāng)量)處理44.7ml含NaCl(50mM)和EDTA(lmM)的50mM磷酸鉀緩沖液(pH6.5)中的抗體(376.0mg,8mg/mL)。在氬氣下于環(huán)境溫度溫育90分鐘后，將反應(yīng)混合液通過用35mM檸檬酸鈉，154mMNaCl和2mMEDTA緩沖液平衡的SephadexG25柱凝膠過濾。然后合并并測(cè)定含有抗體的級(jí)分?？贵w的修飾程度如上所述測(cè)定。將抗體-SPP-Py(約10jamol可釋放的2-硫代吡啶基團(tuán))用上文35mM檸檬酸鈉緩沖液pH6.5稀釋至終濃度約2.5mg/ml。然后向抗體溶液中加入3.OmM二甲基乙酰胺(DMA,在最終的反應(yīng)混合液中為3%v/v)中的DMl(1.7個(gè)當(dāng)量，17pmo1)。讓反應(yīng)在氬氣下于環(huán)境溫度進(jìn)行約20小時(shí)。將反應(yīng)液加載至用35mM檸檬酸鈉，154mMNaCl,pH6.5平衡的SephacrylS300凝膠過濾柱(5.0cmx90.0cm，1.77L)。流速可以為約5.0ml/min,收集了65份級(jí)分(各20.0ml)。合并并檢測(cè)各級(jí)分，其中通過測(cè)量252nm和280nm處的吸光度來(lái)測(cè)定每個(gè)抗體分子連接的DM1藥物分子的數(shù)目(p')，可以是每個(gè)2H9抗體約2-4個(gè)DM1藥物才莫塊。-BMPEO-DMl?？梢杂秒p馬來(lái)酰亞胺試劑BM(PE0)4(PierceChemical)修飾抗體，在抗體的表面上留下未反應(yīng)的馬來(lái)酰亞胺基團(tuán)。這可如下來(lái)實(shí)現(xiàn)，將BM(PEO)4在50。/。乙醇/水混合液中溶解至濃度10mM，以10倍摩爾過量加至在磷酸鹽緩沖鹽水中以大約1.6mg/ml(IO微摩爾)的濃度含有抗體的溶液，并讓其反應(yīng)1小時(shí)以形成抗體-接頭中間體，2H9-BMPEO。通過在30mM檸檬'酸鹽pH6及150mMNaCl緩沖液中凝膠過濾(HiTrapcolumn,Pharmacia)來(lái)除去過量的BM(PEO)4。將大約10倍摩爾過量的DM1溶于二曱基乙酰胺(DMA)并加至2H9-BMPEO中間體。也可采用二曱基曱酰胺(DMF)來(lái)溶解藥物模塊試劑。讓反應(yīng)混合液反應(yīng)過夜，然后在PBS中凝膠過濾或透析以除去未反應(yīng)的DM1。通過在PBS中的S200柱上凝膠過濾來(lái)除去高分子量聚集體并供應(yīng)純化的2H9-BMPEO-DM1。4元體書1"生物可進(jìn)一步修飾本發(fā)明的抗體以包含本領(lǐng)域知道的且易于獲得的額外非蛋白質(zhì)性質(zhì)部分。在一個(gè)實(shí)施方案中，適于抗體衍生化的部分是水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性實(shí)例包括但不限于聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纖維素、右旋糖苷、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1,3-二氧戊環(huán)、聚-l,3,6-三噁烷、乙烯/馬來(lái)酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或隨機(jī)共聚物)、和右旋糖苷或聚(n-乙烯吡咯烷酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物、環(huán)氧丙烷/環(huán)氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化多元醇(如甘油)、聚乙烯醇及其混合物。由于其在水中的穩(wěn)定性，聚乙二醇丙醛在生產(chǎn)中可能具有優(yōu)勢(shì)。聚合物可以是任何分子量，而且可以是分支的或不分支的。附著到抗體上的聚合物數(shù)目可以變化，而且如果附著了超過一個(gè)聚合物，那么它們可以是相同或不/或類型，包括但不限于待改進(jìn)抗體的具體特性或功能、抗體衍生物是否將用于指定條件下的治療等。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了抗體與可通過暴露于輻射而選擇性加熱的非蛋白質(zhì)性質(zhì)模塊的偶聯(lián)物。在一個(gè)實(shí)施方案中，該非蛋白質(zhì)性質(zhì)模塊是碳納米管(Kametal.,Proc.Natl.Acad.Sci.102:11600-11605(2005))。輻射可以是任何波長(zhǎng)的，包括但不限于對(duì)普通細(xì)胞無(wú)害但將非蛋白質(zhì)性質(zhì)模塊加熱至接近抗體-非蛋白質(zhì)性質(zhì)模塊的細(xì)胞被殺死的溫度的波長(zhǎng)。藥用配制劑可通過將具有期望純度的抗體與任選的生理學(xué)可接受載體、賦形劑或穩(wěn)定劑混合來(lái)制備包含本發(fā)明抗體的治療用配制劑，以水溶液、凍千或其它干燥劑型的形式貯存(《Remington'sPharmaceuticalSciences》，第16版，Osol，A.編，1980)。可接受的載體、賦形劑或穩(wěn)定劑在所采用的劑量和濃度對(duì)接受者是無(wú)毒的，而且包括緩沖劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽和其它有機(jī)酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸和甲硫氨酸；防腐劑(諸如氯化十八烷基二曱基千基銨；氯化己烷雙胺；苯扎氯銨、苯索氯銨；酚、丁醇或苯曱醇；對(duì)羥基苯曱酸烷基酯，諸如對(duì)羥基苯曱酸曱酯或丙酯；鄰苯二酚；間苯二酚；環(huán)己醇；3-戊醇；和間曱酚)；低分子量(少于約10個(gè)殘基)多肽；蛋白質(zhì)，諸如血清清蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，諸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、組氨酸、精氨酸或賴氨酸；單糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA;糖類，諸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成鹽反荷離子，諸如鈉；金屬?gòu)?fù)合物(如Zn-蛋白質(zhì)復(fù)合物)；和/或非離子表面活性劑，諸如TWEENTM、PLURONICStm或聚乙二醇(PEG)。本文中的配制劑還可含有超過一種所治療具體適應(yīng)癥所必需的活性化合物，包括但不限于活性互補(bǔ)且彼此沒有不利影響的。合適的是，此類分子以對(duì)于預(yù)定目的有效的量組合?；钚猿煞诌€可包載于例如通過凝聚技術(shù)或通過界面聚合制備的微膠嚢中(例如分別是羥甲基纖維素或明膠微膠囊和聚(曱基丙烯酸曱酉旨)微膠嚢)、在膠狀藥物傳遞系統(tǒng)中(例如脂質(zhì)體、清蛋白微球體、微乳劑、納米顆粒和納米月交嚢)、或在4且滴乳狀液中。此類4支術(shù)7A開于例如《Remington'sPharmaceuticalSciences》，第16版，Osol,A.編，1980。用于體內(nèi)施用的配制劑必須是無(wú)菌的。這可容易的通過使用無(wú)菌濾膜過濾來(lái)實(shí)現(xiàn)?？芍苽涑掷m(xù)釋放配制劑。持續(xù)釋放配制劑的合適例子包括含有本發(fā)明免疫球蛋白的固體疏水性聚合物半透性基質(zhì)，該基質(zhì)以定型產(chǎn)品的形式存在，如薄膜或微膠嚢。持續(xù)釋放基質(zhì)的例子包括聚酯、水凝膠(例如聚(2-羥乙基-曱基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚交酯(美國(guó)專利3，773,919)、L-谷氨酸和y-乙基-L-谷氨酸酯的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物諸如LUPRONDEPOT(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林構(gòu)成的可注射微球體)及聚-D-(-)-3-雍基丁酸。雖然諸如乙烯-乙酸乙烯和乳酸-乙醇酸等聚合物能夠持續(xù)釋放分子100天以上，但是某些水凝膠釋放蛋白質(zhì)的時(shí)間較短。當(dāng)膠嚢化抗體在體內(nèi)長(zhǎng)時(shí)間維持時(shí)，它們可能由于暴露于37。C的潮濕環(huán)境而變性或聚集，導(dǎo)致生物學(xué)活性損失和免疫原性可能改變。可根據(jù)相關(guān)機(jī)制來(lái)設(shè)計(jì)合理的穩(wěn)定化策略。例如，如果發(fā)現(xiàn)聚集機(jī)制是經(jīng)由硫醇-二硫化物互換而形成分子間S-S鍵，那么可通過修飾巰基殘基、由酸性溶液凍干、控制濕度、采用適宜添加劑和開發(fā)特定的聚合物基質(zhì)組合物來(lái)實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定。用途本發(fā)明的抗體可用于例如體外、回體Ojcv/vo)和體內(nèi)治療方法。本發(fā)明的抗體可用作拮抗劑，在體外、離體和/或體內(nèi)部分或完全阻斷特異抗原活性。此外，至少有些本發(fā)明抗體可中和來(lái)自其它物種的抗原活性。因此，本發(fā)明的抗體可用于抑制特異抗原活性，例如在含有抗原的細(xì)胞培養(yǎng)物中、在人受黑猩猩、狒狒、狨猴、獼猴和恒河猴、豬或小鼠)中。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體可用于抑制抗原活性，即使抗體接觸抗原，使得抗原活性受到抑制。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗原是人蛋白質(zhì)分子。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體可用于在患有某種紊亂的受試者中抑制抗原的方法，在所述紊亂中抗原活性是有害的，包括對(duì)受試者施用本發(fā)明的抗體，使得受試者中的抗原活性受到抑制。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗原是人蛋白質(zhì)分子且受試者是人受試者。或者，受試者可以是表達(dá)本發(fā)明抗體所結(jié)合的抗原的哺乳動(dòng)物。又或者，受試者可以是其中導(dǎo)入了抗原(如通過施用抗原或通過表達(dá)抗原轉(zhuǎn)基因)的哺乳動(dòng)物。可出于治療目的將本發(fā)明的抗體施用于人受試者。此外，可出于獸醫(yī)目的將本發(fā)明的抗體施用于表達(dá)抗體與之交叉反應(yīng)的抗原的非人哺乳動(dòng)物(如靈長(zhǎng)類、豬或小鼠)，或是人疾病的動(dòng)物模型。關(guān)于后者，此類動(dòng)物模型可用于評(píng)估本發(fā)明抗體的治療功效(如測(cè)試施藥的劑量和時(shí)程)。本發(fā)明的抗體可用于治療、抑制、延遲其發(fā)展、預(yù)防/延遲其復(fù)發(fā)、改善、或預(yù)防與RELT的異常表達(dá)和/或活性有關(guān)的疾病、紊亂或狀況，包括但不限于細(xì)胞增殖性病癥、感染、免疫病癥/炎性病癥、和其它干擾素相關(guān)病癥。一方面，本發(fā)明的阻斷性抗體特異性結(jié)合RELT，使得它通過阻斷或干擾RELT與一種或多種RELT配體之間的相互作用來(lái)抑制正常RELT活性，由此抑制相應(yīng)的信號(hào)傳導(dǎo)途經(jīng)和其它相關(guān)分子或細(xì)胞事件。在某些實(shí)施方案中，將包含與細(xì)胞毒劑偶聯(lián)的抗體的免疫偶聯(lián)物施用于患者。在有些實(shí)施方案中，免疫偶聯(lián)物和/或它所結(jié)合的抗原被細(xì)胞內(nèi)在化，導(dǎo)致免疫偶聯(lián)物殺傷它所結(jié)合的靶細(xì)胞的治療功效提高。在一個(gè)實(shí)施方案中，細(xì)胞毒劑靶向或干擾靶細(xì)胞中的核酸。此類細(xì)胞毒劑的實(shí)例包括本文所述任何化療劑(諸如美登木素生物堿或加利車霉素)、放射性同位素、或核4唐核酸酶或DNA內(nèi)切核酸酶。在治療中，本發(fā)明的抗體可單獨(dú)使用，或是聯(lián)合其它組合物。例如，本發(fā)明的抗體可與另一種抗體和/或輔助劑/治療劑(例如類固醇)聯(lián)合施用。'例如，本發(fā)明的抗體可以在治療方案中與抗炎劑(anti-inflammatory)和/或防腐齊'J(antiseptic)聯(lián)合，例如在治療任何本文所述疾病時(shí)，包括細(xì)胞增殖性病癥、感染、免疫性/炎性病癥、和其它干擾素相關(guān)病癥。上文所述此類聯(lián)合療法包括聯(lián)合施藥(當(dāng)相同或分開配制劑中包含兩種或多種藥劑時(shí))和分開施藥，在后一種情況中，本發(fā)明抗體的施用可發(fā)生在輔助療法的施用之前和/或之后。可通過任何合適手段來(lái)施用本發(fā)明的抗體(和輔助治療劑)，包括腸胃外、皮下、腹膜內(nèi)、肺內(nèi)和鼻內(nèi)，以及損傷部位內(nèi)(如果希望局部治療的話)施用。腸胃外輸注包括肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、腹膜內(nèi)或皮下施用。另夕卜，脈沖輸注抗體也是合適的，特別是抗體劑量衰減時(shí)?？赏ㄟ^任何合適^4圣服藥，例如通過注射，諸如靜脈內(nèi)或皮下注射，這部分取決于施藥是短期的還是長(zhǎng)期的。胞內(nèi)分子，則本發(fā)明的某些實(shí)施方案提供了將抗體或其抗原結(jié)合片段導(dǎo)入細(xì)胞中結(jié)合靶所在位置。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體可以胞內(nèi)表達(dá)成胞內(nèi)抗體(intrabody)。術(shù)語(yǔ)"胞內(nèi)抗體"在用于本文時(shí)指在胞內(nèi)表達(dá)且能夠選擇性結(jié)合把分子的抗體或其抗原結(jié)合部分，參見Marasco,GeneTherapy4:11-15(1997);Konte腿nn,Methods34:163-170(2004);美國(guó)專利號(hào)6,004,940和6,329,173;美國(guó)專利申請(qǐng)公開號(hào)2003/0104402;及PCT公開號(hào)WO2003/077945。胞內(nèi)抗體的胞內(nèi)表達(dá)可以如下實(shí)現(xiàn)，即將編碼期望抗體或的野生型前導(dǎo)序列和分泌信號(hào))導(dǎo)入靶細(xì)胞?？梢允褂脤⒑怂釋?dǎo)入細(xì)胞的任何標(biāo)準(zhǔn)方法，包括但不限于顯微注射，彈道注射，電穿孔，磷酸鈣沉淀，月旨質(zhì)體，及使用攜帶目的核酸的逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒、腺伴隨病毒和痘苗病毒載體的轉(zhuǎn)染?？梢詫⒕幋a整個(gè)或部分本發(fā)明抗RELT抗體的一種或多種核酸遞送至耙細(xì)胞，使得一種或多種胞內(nèi)抗體表達(dá)，其能夠胞內(nèi)結(jié)合RELT和調(diào)控一種或多種RELT介導(dǎo)的細(xì)胞途徑。；在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了內(nèi)在化抗體?？贵w可具有某些特征，或者經(jīng)過修飾后具有此類特征，以致于增強(qiáng)抗體進(jìn)入細(xì)胞的遞送。用于實(shí)現(xiàn)這一效果的技術(shù)是本領(lǐng)域已知的。例如，抗體的陽(yáng)離子化已知促進(jìn)其進(jìn)入細(xì)胞的攝取(參見例如美國(guó)專利號(hào)6，703,019)。脂轉(zhuǎn)染(lipofection)或脂質(zhì)體也可用于將抗體遞送入細(xì)胞。若使用抗體片段，則特異性結(jié)合靶蛋白質(zhì)的結(jié)合結(jié)構(gòu)域:的最小抑制性片段一般是有益的。例如，根據(jù)抗體的可變區(qū)序列，可以設(shè)計(jì)保留與靶蛋白質(zhì)序列結(jié)合能力的肽分子。此類肽可以化學(xué)合成和/或通過重組DNA才支術(shù)生成。參見例長(zhǎng)口Marascoetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:7889-7893(1993)。調(diào)控物多肽進(jìn)入靶細(xì)胞可通過本領(lǐng)域已知方法來(lái)增強(qiáng)。例如，某些序列，諸如那些書亍生自HIVTat或觸角(Antennapedia)同源i或蛋白(homeodomainprotein)的序列，能夠指導(dǎo)異源蛋白質(zhì)穿過細(xì)胞膜的高效攝取。參見例如Chenetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1999),96:4325-4329。若結(jié)合靶位于腦內(nèi)，則本發(fā)明的某些實(shí)施方案提供了抗體或其抗原結(jié)合片段穿越血腦屏障。某些神經(jīng)變性疾病與血腦屏障通透性升高有關(guān)，使得抗體或其抗原結(jié)合片段可以容易地導(dǎo)入腦內(nèi)。若血腦屏障保持完整，則有數(shù)種本領(lǐng)域已知方法可用于運(yùn)輸分子穿過它，包括但不限于物理方法、基于脂質(zhì)的方法、及基于受體和通道的方法。規(guī)避(circumventing)血腦屏障，或者通過在血腦屏障中創(chuàng)建開口。規(guī)避法包4舌^旦不限于直^妄注射入腦(參見例如Papanastassiouetal.,GeneTherapy9:398-406(2002))和在腦中植入遞送裝置(參見例如Gi11etal.,NatureMed.9:589-595(2003);GliadelWafers,GuildfordPharmaceutical)。在屏障中創(chuàng)建開口的方法包括但不限于超聲波(參見例如美國(guó)專利公開號(hào)2002/0038086)、滲透壓(例如通過施用高;參甘露醇(Neuwelt,E.A.，ImplicationoftheBlood-BrainBarrieranditsManipulation,Vols1&2,PlenumPress,N.Y.(1989》)、通過例^口緩激肽(bradykinin)或透化劑(permeabilizer)A-7的透化(參見例如美國(guó)專利號(hào)5,112,596;5,268,164;5,506,206;5,686,416)、及用包含編碼抗體或抗原結(jié)合片段的基因的載體轉(zhuǎn)染跨騎(straddle)血腦屏障的神經(jīng)元(參見例如美國(guó)專利公開號(hào)2003/0083299)。運(yùn)輸抗體或抗原結(jié)合片段穿越血腦屏障的基于脂質(zhì)的方法包括但不限于將抗體或抗原結(jié)合片段封裝在脂質(zhì)體中，該脂質(zhì)體偶聯(lián)有結(jié)合血腦屏障的血管內(nèi)皮上受體的抗體結(jié)合片段(參見例如美國(guó)專利申請(qǐng)公開號(hào)20020025313),及在低密度脂蛋白顆粒(參見例如美國(guó)專利申請(qǐng)開號(hào)20040204354)或載脂蛋白E(參見例如美國(guó)專利申請(qǐng)公開號(hào)20040131692)中包被抗體或抗原結(jié)合片段。運(yùn)輸抗體或抗原結(jié)合片段穿越血腦屏障的基于受體和通道的方法包括但不限于使用糖皮質(zhì)激素阻斷劑來(lái)提高血腦屏障的通透性(參見例如美國(guó)專利申請(qǐng)7>開號(hào)2002/0065259;2003/0162695;2005/0124533);活化鉀通道(參見例如美國(guó)專利申請(qǐng)公開號(hào)2005/0089473);抑制ABC藥物轉(zhuǎn)運(yùn)物(參見例如美國(guó)專利申請(qǐng)公開號(hào)2003/0073713);用運(yùn)鐵蛋白包被抗體并調(diào)控一種或多種運(yùn)鐵蛋白受體的活性(參見例如美國(guó)專利申請(qǐng)公開號(hào)2003/0129186);及使抗體陽(yáng)離子化(參見例如美國(guó)專利號(hào)5，004,697)?？梢耘c優(yōu)良醫(yī)學(xué)實(shí)踐一致的方式配制、確定劑量和施用本發(fā)明的抗體組合物。在此內(nèi)容中考慮的因素包括所治療的具體紊亂、所治療的具體哺乳動(dòng)物、患者個(gè)體的臨床狀況、病癥的起因、遞送藥劑的部位、施藥的方法、施藥的日程安排、和醫(yī)學(xué)從業(yè)人員知道的其它因素。不是必需而是任選將抗體與目前用于預(yù)防或治療所討論病癥的一種或多種藥劑一起配制。此類其它藥劑的有效量取決于配制劑中存在的本發(fā)明抗體的量、病癥或治療的類型、和上文討論的其它因素。這些通常是以與上文所用相同劑量和施用路徑使用，或是本文所述劑量的大約1-99%，或是憑經(jīng)驗(yàn)/在臨床上確定為適宜的任何劑量和4壬^P各徑。對(duì)于疾病的預(yù)防或治療，本發(fā)明抗體的適宜劑量(在單獨(dú)使用或聯(lián)合其它藥劑諸如化療劑時(shí))將取決于待治療疾病的類型、抗體的類型、疾病的嚴(yán)重程度和進(jìn)程、施用抗體是出于預(yù)防還是治療目的、先前的療法、患者的臨床病史和對(duì)抗體的響應(yīng)、及主治醫(yī)師的判斷。合適的是，一次性或通過一系列治療將抗體施用于患者。根據(jù)疾病的類型和嚴(yán)重程度，施用于患者的初始候選劑量可以是約1iug/kg至15mg/kg(如O.1mg/kg-1Omg/kg)抗體，例如或是通過一次或多次分開施藥或是通過連續(xù)輸注。根據(jù)上文所述因素，典型日劑量的范圍可以是約llig/kg至100mg/kg或更多。對(duì)于持續(xù)數(shù)天或更長(zhǎng)的重復(fù)施藥，根據(jù)狀況，通常持續(xù)治療直至疾病癥狀發(fā)生期望的抑制。抗體的例示劑量的范圍可以是約0.05mg/kg至約10mg/kg。由此，可對(duì)患者施用約0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg或10mg/kg(或其任意組合)的一劑或多劑。這些劑量可間歇施用，例如每周或每三周(例如使得患者接受約2劑至約20劑，例如約6劑抗體)?？墒┯靡粍┹^高的初始加載劑量，后續(xù)一劑或多劑較低劑量。例示性劑量給藥方案包括施用一劑約4mg/kg抗體的初始加載劑量，后續(xù)每周一劑約2mg/kg的維持劑量。然而，其它劑量方案也可能是有用的。這種療法的進(jìn)程易于通過常規(guī)技術(shù)和測(cè)定法來(lái)監(jiān)測(cè)。制品在本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了包含可用于治療、預(yù)防和/或診斷上文所述紊亂的物質(zhì)的制品。制品包括容器和貼在所述容器上或與其相關(guān)的標(biāo)簽或包裝插頁(yè)。合適的容器包括例如瓶子、小管、注射器等。容器可用各種材料制成，諸如玻璃或塑料。容器中裝有其自身或在聯(lián)合其它組合物時(shí)有效治療、預(yù)防和/或診斷疾患的組合物，而且可具有無(wú)菌存取口(例如容器可以是具有皮下注射針頭可刺穿的塞子的靜脈內(nèi)溶液袋或小管)。組合物中的至少一種活性劑是本發(fā)明的抗體。標(biāo)簽或包裝插頁(yè)指示該組合物用于治療選擇的疾患。此外，制品可包括(a)其中裝有組合物的第一容器，其中所述組合物包含本發(fā)明的抗體；和(b)其中裝有組合物的第二容器，其中所述組合物包含其它細(xì)胞毒劑或其它治療劑。本發(fā)明此實(shí)施方案中的制品還可包括指示組合物可用于治療特定疾患的包裝插頁(yè)?；蛘?另外，制品還可包括第二(或第三)容器，其中裝有藥學(xué)可接受的緩沖劑，諸如注射用抑菌水(BWFI)、磷酸鹽緩沖鹽水、林格氏(Ringer)溶液和右旋糖溶液。它還可包括商業(yè)和用戶立場(chǎng)上所需的其它物質(zhì)，包括其它緩沖劑、稀釋劑、濾器、針頭和注射器。下面是本發(fā)明方法和組合物的實(shí)施例。應(yīng)當(dāng)理解，根據(jù)上文提供的一般描述，可實(shí)施各種其它實(shí)施方案。實(shí)施例實(shí)施例l:抗RELT單克隆抗體的生成和表征(a)文庫(kù)篩選如先前所述(Leeetal.，J.Mol.Biol.340:1073-1093(2004)和美國(guó)已公開的專利申請(qǐng)?zhí)?005-0106667)，對(duì)表達(dá)人源化Fab'2文庫(kù)的噬菌體展示克隆篩選其結(jié)合RELT-Fc融合蛋白的能力。噬菌體展示抗體庫(kù)在所有3個(gè)重鏈CDR中包含隨機(jī)化氨基酸，并基于人源化抗體4D5。圖1和2分別顯示一般的重鏈和輕鏈可變區(qū)共有框架，圖3顯示4D5抗體的框架區(qū)。4D5框架序列的某些變體也是已知的，如圖4所示。4輪篩選后，分離出8個(gè)陽(yáng)性克隆。通過PCR擴(kuò)增相關(guān)片段，并將它們剪接入IgGl構(gòu)建體以產(chǎn)生完整人IgGl，重定型成噬菌體Fab'2。然后從CHO細(xì)胞上清液純化出8種抗RELTmAb,并用生物素(Pierce)標(biāo)記。這8個(gè)CHO細(xì)胞抹的生產(chǎn)力在大約8,000ng/mL到大約18,000ng/mL之間變化，其中mAbH7的生成量最低而mAbF4的生成量最高。對(duì)每種mAb的重鏈和輕鏈進(jìn)行測(cè)序。重鏈的CDR如圖5所示。每種mAb的輕鏈與經(jīng)過修飾的人單克隆抗體4D5-8的輕鏈序列(SEQIDNO:2)相同。(b)抗RELTmAb的表征(1)細(xì)胞表面的結(jié)合評(píng)估每種抗體與在細(xì)胞表面表達(dá)RELT的細(xì)胞的結(jié)合。將經(jīng)模擬物(對(duì)照)或鼠RELTcDNA轉(zhuǎn)染的幼倉(cāng)鼠腎(BHK)細(xì)胞分別用每種抗RELT抗體在冰上染色30分鐘。將細(xì)胞用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)清洗，隨后與PE標(biāo)記的抗人IgG抗體一起溫育。通過FACSCalibur(BDScience)繼之以CellQuest(BDScience)分析來(lái)評(píng)定細(xì)胞的焚光強(qiáng)度。8種抗體無(wú)一特異性結(jié)合對(duì)照BHK細(xì)胞，但每種抗體特異性結(jié)合經(jīng)RELTcDNA轉(zhuǎn)染的BHK細(xì)胞(見圖6)。利用與上文關(guān)于BHK細(xì)胞轉(zhuǎn)染和結(jié)合所述相同的方案，還觀察到8種抗體中的5種(F4、C10、H7、H9和H11)特異性結(jié)合表達(dá)RELT的小鼠脾細(xì)胞(圖7)。與小鼠表達(dá)RELT脾細(xì)胞結(jié)合最強(qiáng)的3種抗RELTmAb(H7、H9和H11)不結(jié)合來(lái)自w/f/-小鼠的小鼠脾細(xì)胞(圖7，底行)。(2)抗RELT抗體與NF-kB活化的關(guān)系評(píng)估抗RELT抗體對(duì)NF-kb活化的影響。將HEK293細(xì)胞用指定劑量的RELT-xedarcDNA(鼠RELT的胞外結(jié)構(gòu)域和xedar的胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域)轉(zhuǎn)染。12小時(shí)后，向分開的培養(yǎng)物中添加濃度為10嗎/mL的每種抗RELT抗體，將細(xì)胞繼續(xù)溫育24小時(shí)。利用雙重報(bào)道物測(cè)定試劑盒(Dual-LuciferaseReporterAssaySystems)(Promega)測(cè)量螢光素酶活性。每種抗RELT抗體以劑量依賴性方式刺激細(xì)胞中的NF-kB生成(圖8)，只是程度不同。觀察到F4抗RELT抗體具有最小的刺激(對(duì)于5ngRELT-xedar為大約7倍，對(duì)于25ngRELT-xedar為大約22倍)，觀察到CIO、H9和H11mAb具有最強(qiáng)的刺激(對(duì)于5ngRELT-xedar為大約20倍，對(duì)于25ngRELT-xedar為大約50-60倍)。(3)抗RELT抗體對(duì)鼠RELT的親和力為了測(cè)定每種抗RELT抗體對(duì)RELT的親和力，對(duì)每種克隆進(jìn)行在滴定量:鼠RELT存在的條件下每種固定化抗RELT抗體的基于噬菌體的竟?fàn)幮越Y(jié)合;.ELISA。將96孔Maxisorp免疫板(NUNC)用溶于PBS、濃度為2嗎/mL的鼠RELT于4。C包^皮過夜，用含0.5%BSA和0.05。/。Tween20的PBS("PBT")于室溫封閉2小時(shí)。將展示抗RELT抗體的噬菌體在PBT中的系列稀釋液在抗原包被板上于室溫溫育15分鐘。將板用含0.05。/。Tween20的PBS("PBST，，)清洗。用在PBT中l(wèi):5000稀釋的、辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗M13單克隆抗體(AmershamPharmacia)檢測(cè)結(jié)合的噬菌體，用3,3'，5,5'-四曱基聯(lián)苯胺底物(TMB,Kirkegaard&PerryLabs，Ga池ersburg,MD)顯色大約5分鐘，用1.OMH3P04^滅，在450nm分光光度法讀數(shù)?？贵w親和力的范圍為4nM(mAbHI1)到250nM(mAbH7)，如表B所示。表B:抗RELT抗體親和力數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage86</column></row><table>(4)BIAcore⑧分析利用BIAcore⑧3000(BIAcore,Inc.,Piscataway，NJ)通過表面等離振子共振(SRP)分析進(jìn)一步評(píng)估抗RELT單克隆抗體H11對(duì)RELT的親和力。將羧曱基化右旋糖芬生物傳感器芯片(CM5，BIAcoreInc.)根據(jù)供應(yīng)商的說(shuō)明書用鹽酸N-乙基-N'-(3-二曱基氨丙基)-碳化二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活化。將抗RELT抗體Hll用10mM醋酸鈉，pH4.8稀釋至5iiig/mL的濃度。將稀釋的Hll抗體以5nL/min流速注射流過衍生化CM5芯片表面，直到大約500個(gè)響應(yīng)單位(responseunit,RU)的抗體偶4關(guān)至流通池表面。通過注射1M乙醇胺來(lái)封閉未反應(yīng)的基團(tuán)。將鼠帶組氨酸標(biāo)簽的RELT在含0.05。/。Tween20的PBS中的系列稀釋液(7.5nM到500nM)以25pL/min流速和25。C恒溫注射流過H11固定化流通池。利用簡(jiǎn)單一對(duì)一朗格繆爾(Langmuir)結(jié)合模型(BIAcoreEvaluationSoftwareversion3.2)由所觀察到的結(jié)合曲線推導(dǎo)結(jié)合(k加)和解離(k。ff)速率。平衡解離常數(shù)(Kd)以k。fl/k。n的比率來(lái)計(jì)算。抗RELT抗體Hll-小鼠RELT相互作用的速率如下:k。。為1.52x105M-V1;k。ff為1.24xl(T3s";而Kd為8.13乂10。(5)抗RELT抗體與人RELT的交叉反應(yīng)性評(píng)估H11抗RELT抗體特異性識(shí)別人RELT的能力。將HEK293細(xì)胞用對(duì)照載體或人RELTcDNA轉(zhuǎn)染。溫育48小時(shí)后，收集轉(zhuǎn)染細(xì)胞，用生物素化抗RELT抗體H11在冰上染色30分鐘。將細(xì)胞用PBS清洗，并用親合素-PE和指定的FITC-或APC-標(biāo)記的抗體染色。通過FACS分析(FACSCalibur(BDScience)繼之以CellQuest分析(BDScience))來(lái)評(píng)定細(xì)胞的熒光強(qiáng)度。如圖10A和10B所示，抗體H11特異性識(shí)別人RELT(比較圖IOA與圖10B)。實(shí)施例2:RELT在免疫細(xì)胞上的表達(dá)使用抗RELT抗體H11作為工具來(lái)鑒定來(lái)自小鼠的不同野生型免疫細(xì)胞上的RELT表達(dá)程度，所述免疫細(xì)胞包括T細(xì)胞、B細(xì)胞和脾細(xì)胞。利用^f茲珠(Miltenyi)從C57/BL6小鼠脾純化T細(xì)胞，與抗CD3和抗CD28(10)ig/mL)、IFN-a(100ng/mL)、IFN-y(100ng/mL)、IL-2(100U/mL)、IL-4(100ng/mL)、IL-6(100ng/mL)、或IL-12和IL-18(100ng/mL)—起培養(yǎng)48小時(shí)以誘導(dǎo)分化成不同T細(xì)胞亞型(見圖ll)。然后將細(xì)胞與生物素化抗RELT抗體H11—起在冰上溫育30分鐘。將細(xì)胞用PBS清洗，并與親合素-PE—起溫育。利用FACSCalibur(BDScience)繼之以CellQuest(BDScience)分析來(lái)評(píng)定細(xì)胞的熒光強(qiáng)度?？沟腡細(xì)胞表達(dá)RELT。利用磁珠(Miltenyi)從C57/BL6小鼠脾純化B細(xì)胞，與抗IgM(10嗎/mL)、抗CD40(10(ig/mL)、LPS(10嗎/mL)、或IL-4(100ng/mL)—起培養(yǎng)48小時(shí)以誘導(dǎo)分化成不同B細(xì)胞群(見圖12)。然后將細(xì)胞與生物素化抗RELT抗體Hll一起在冰上溫育30分鐘。將細(xì)胞用PBS清洗，并與親合素-PE—起溫育。利用FACSCalibur(BDScience)繼之以CellQuest(BDScience)分析來(lái)評(píng)定細(xì)胞的熒光強(qiáng)度?？贵wH11不特異性結(jié)合天然B細(xì)胞或任一種經(jīng)過處理的B細(xì)胞群，表明B細(xì)胞和分化的B細(xì)胞均不表達(dá)RELT。從C57/BL6小鼠分離脾細(xì)胞，用生物素化抗RELT抗體H11在冰上染色30分鐘。將細(xì)胞用PBS清洗，并用親合素-PE加上指定的FITC-或APC-標(biāo)記的抗體(抗CD3、抗B220、抗CDllb和/或抗Gr-l)染色。利用FACSCalibur(BDScience)繼之以CellQuest(BDScience)分析來(lái)評(píng)定細(xì)胞的熒光強(qiáng)度。結(jié)果顯示于圖13?？贵wH11結(jié)合T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，表明這些細(xì)胞群表達(dá)RELT。未觀察到H11與B細(xì)胞、NK細(xì)胞或嗜中性粒細(xì)胞的強(qiáng)結(jié)合，表明這些細(xì)胞群不表達(dá)RELT。實(shí)施例3:小鼠中RELT的耙向破壞和RELT破壞對(duì)免疫細(xì)胞發(fā)育的影響(a)RELT遭到破壞的小鼠的產(chǎn)生利用設(shè)計(jì)成消除編碼RELT氨基酸17-210的外顯子II-V的靶向載體產(chǎn)生RELT缺陷小鼠(見圖14A)。利用從129/SvJ文庫(kù)(IncyteGenomics)分離的基因組^//克隆構(gòu)建耙向載體，電穿孔入129R1胚胎干(ES)細(xì)胞。通過Southern印跡鑒定出雜合ES細(xì)胞克隆18B7，顯微注射入C57BL/6N胚泡。將嵌合子代與C57BL/6N小鼠回交。小鼠保留PGK-neo選擇盒。通過PCR、Southern印跡(圖14B)和T淋巴細(xì)胞流式細(xì)胞術(shù)分析(圖11C)來(lái)確認(rèn)種系/f破壞。利用ExpandLongTemplatePCRSystem試齊寸盒(Roche)、5，引物AGTAGAAGGTGGCGCGAAGG(SEQIDNO:69)和3，引物CTGCCCACAGACAAGATGGTAATCTC(SEQIDNO:70)按照制造商的說(shuō)明書進(jìn)行PCR。通過經(jīng)SspI和NotI消化的DNA與圖14A所示纟笨針的雜交進(jìn)行Southern印跡，所述探針結(jié)合靶向構(gòu)建體的5'序列。圖14B中觀察到的12.9和7.1kbDNA片段分別對(duì)應(yīng)于野生型和突變型w&等位基因。如上文實(shí)施例1(b)(1)所述進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)分析。wWi到破壞的小鼠能夠存活，能夠繁殖，并且以預(yù)期的孟德爾頻率出生。所有后續(xù)實(shí)驗(yàn)按照Genentech學(xué)會(huì)審查委員會(huì)(institutionalreviewboard)批準(zhǔn)的方案利用6到14周齡^/-/-和陽(yáng)/&/+小鼠進(jìn)行。(b)RELT遭到破壞的小鼠中T、B和NK細(xì)胞發(fā)育的分析已知天然T淋巴細(xì)胞表達(dá)RELT(見圖ll、圖15B)。因此調(diào)查^/^/-丁淋巴細(xì)胞的特性。根據(jù)先前的報(bào)道(Nakanoetal.,J.Exp.Med.194:1171-1178(2001))，將^仏/-和/汁/+'J、鼠的脾被切碎，并用1mg/mL膠原酶A(Roche)消,化。為了表面RELT表達(dá)的流式細(xì)胞術(shù)分析，通過與20mMEDTA-PBS—起溫育30分鐘來(lái)制備脾細(xì)胞，以避免抗RELTmAb表位的蛋白水解降解。將細(xì)胞用抗CD16/32(2.4G2)封閉，然后用下列抗體的不同組合進(jìn)行雙重或三重染色CD3(145-2C11)、CD4(脂4-5)、CD8(53-6.7)、CDllb(M1〃0)、CDllc(HL3)、CD45RB(16A)、CD80(IG10)、CD86(GL1)、I-Ab(AF6-120.1)、B220(RA3-6B2)和DX5(都來(lái)自BDPharMingen)。通過添加鏈霉親合素-PE(BDPharmingen)來(lái)揭示生物素化抗體的結(jié)合。碘化丙咬用于排除死細(xì)胞。利用FACSCaliber系統(tǒng)(BDScience)來(lái)分對(duì)斤細(xì)胞。沒有觀察到通常w//-/-與^/+/+小鼠之間T細(xì)胞數(shù)目或其在脾免疫細(xì)胞中比例代表的明顯差異。"/-/-和"/汁/+小鼠之間胸腺、淋巴結(jié)和脾中的T細(xì)胞數(shù)是可比的(見圖15A)。用針對(duì)CD4、CD8、CD25和CD44的抗體染色的細(xì)胞的流式細(xì)胞術(shù)分析揭示了各種T細(xì)胞子集的豐度沒有差異(見圖15C)。通過氚標(biāo)記的胸苷摻入測(cè)定法評(píng)估來(lái)自和^/汁/+細(xì)胞的丁淋巴細(xì)胞響應(yīng)抗CD3的增殖。將來(lái)自野生型和"/纟-/-小鼠的純化丁細(xì)胞單獨(dú)用指定量的抗CD3抗體(圖15D，左圖)或者和抗CD28抗體一起(圖15D，右圖)進(jìn)行培養(yǎng)，所述抗CD28抗體在包被溶液中以10pg/mL的濃度應(yīng)用于板。通過^H]-胸脊摻入測(cè)量細(xì)胞響應(yīng)抗體或抗體組合的增殖(Coligenetal.,eds.，CurrentProtocolsinImmunology,NewYork:Wiley,1991)。纟吉果顯示//~/-T纟田胞的增殖類似于野生型T細(xì)胞。^/-/-和&+/+T淋巴細(xì)胞還展示IL-2和IFN-y的生成沒有差異。綜合起來(lái)，所有上述測(cè)定法的結(jié)果表明RELT不是正常T細(xì)胞發(fā)育和增殖所需要的。15B的中圖和右圖、圖12和圖13)。根據(jù)流式細(xì)胞術(shù)分析的測(cè)量(圖15A),re/f-/-和^/汁/+小鼠脾中8淋巴細(xì)胞和服細(xì)胞的數(shù)目相似。用針對(duì)CD25、CD44、B220、IgM、CD5、CDllb、CD21、CD23和CD43的抗體染色后，對(duì)來(lái)自骨髓、脾、淋巴結(jié)和腹膜腔的細(xì)胞的廣泛流式細(xì)胞術(shù)分析揭示^/-/-與&+/+小鼠之間沒有差異。結(jié)果表明RELT在體液免疫中不起關(guān)鍵作用。(c)RELT遭到破壞的小鼠中抗體生成的分析對(duì)小鼠進(jìn)行評(píng)估以確定一種或多種抗體亞型的產(chǎn)生是否因?yàn)閞W的破壞而受到損害。將〃^-/-和/汁/+小鼠用T依賴性抗原2，4-二硝基酚偶聯(lián)的卵清蛋白(DNP-OVA)免疫。制備兩毫升注射液，所述注射液在PBS中包含0.1。/。氫氧化鋁吸附凝膠(#8000-01,IntergenCompany)和0.09975mg/mLDNP-OVA溶液，將溶液混合30分鐘以確保鋁對(duì)抗原的有效吸附。第0天將野生型和w/f敲除小鼠(每只重大約20g)腹膜內(nèi)免疫100nL注射液，第10天用第二次100^L注射加強(qiáng)。第0天和第14周從接受注射的小鼠采集血清樣品，在DNP-BSA包被的多孔板上進(jìn)行特定抗體滴度的ELISA分析。兩個(gè)小鼠群產(chǎn)生相等量的抗原特異性IgGl、IgG2a、IgG3、IgM和IgE抗體(見圖16A-16E)，表明RELT在體液免疫的發(fā)展過程中不起關(guān)鍵作用。(d)RELT遭到破壞的小鼠中樹突細(xì)胞發(fā)育的分析在缺乏RELT的條件下的T、B和NK細(xì)胞發(fā)育中沒有觀察到明顯異常。如此，檢查別的免疫細(xì)胞群，特別是樹突細(xì)胞。如上所述，將w/P/-和^/什/+小鼠的脾切碎，并用lmg/mL膠原酶A(Roche)消化。用生物素化抗CDllc和抗生物素MACS珠子(Miltenyi)來(lái)鑒定樹突細(xì)胞。經(jīng)膠原酶處理的脾細(xì)胞被針對(duì)CDllc(CDllc樹突細(xì)胞的一種表面標(biāo)志物)的抗體的染色揭示rW-/-小鼠中的樹突細(xì)胞群比^/+/+同窩對(duì)照顯著更大(圖17A)。統(tǒng)計(jì)分析也支持w/f-/-小鼠中樹突細(xì)胞數(shù)的增加(圖17B)。根據(jù)CDllb和B220的細(xì)胞表面表達(dá)，CDllc+DC可以分為兩個(gè)亞群cDC(CDllb+B220一)和pDC(CDllb—B220+)(Hochreinetal.，Hum.Immunol.63:1103-10(2002);Nakanoetal"J.Exp.Med.194:1171-8(2001);Asselin畫Patureletal.,Nat.Immunol.2:1144-50(2001))。將如上所述制備的脾細(xì)胞用生物素化抗CD1lb和抗B220染色，并用MACS珠子(Miltenyi)去除以富集pDC和cDC。使用FACSVantage(BDScience)分揀來(lái)進(jìn)一步純化pDC(CD1lc+B220+)和cDC(CDllc+B220—)群。流式細(xì)胞術(shù)分析和細(xì)胞計(jì)數(shù)表明^/-/-小鼠具有的脾pDC數(shù)目大約是^/什/+小鼠的兩倍(圖3A和3B)。^/汁/+與^^-/-小鼠之間脾。0€的數(shù)目沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異(圖3A和3B),雖然通過流式細(xì)胞術(shù)分析在pDC和cDC中均檢測(cè)到RELT表達(dá)(圖3C)。在w/f-/-小鼠的胸腺中發(fā)現(xiàn)比&+/+小鼠多大約1.8倍的pDC。為了確認(rèn)擴(kuò)w/f-/-脾細(xì)胞中增的CDllc+B220+CDllb—群代表"典型的"pDC，用針對(duì)II型MHC、pDC標(biāo)志物CD45RB(Hochreinetal.，Hum.Immunol.63:1103-10(2002);Asselin-Patureletal.,Nat.Immunol.2:1144-50(2001))或共刺激分子諸如CD80或CD86的抗體染色后，通過流式細(xì)胞術(shù)來(lái)分析/^/-和CDllc+B220+脾細(xì)胞(圖17D)。來(lái)自w/r/-和小鼠的CDllc+B220+細(xì)胞表達(dá)相似量的這些表面標(biāo)志物，表明^//-/-小鼠具有增加數(shù)目的pDC。(e)RELT遭到破壞的小鼠中CD11c+MHCII—細(xì)胞的分析外周血CDllc+MHCn—細(xì)胞已經(jīng)顯示具有分化成pDC的潛能(delHoyoetal.,Nature415:1043-7(2002))。因此調(diào)查^//-/-小鼠中的該pDC前體群。如圖18A所示，^/-小鼠中CDllc+MHC^—子集比^/+/+小鼠多大約3倍。該結(jié)果表明陽(yáng)/纟-/-小鼠中的？0(:分化在外周血口0(:前體期或早于外周血？0(:前體期受到影響。流式細(xì)胞術(shù)分析揭示了CDllc+MHCir細(xì)胞上有少量但顯著水平的RELT表達(dá)(圖18B)。實(shí)施例4:RELT遭到破壞的小鼠中的IFN-a表達(dá)在它們作為抗原呈遞細(xì)胞的作用中，遭遇未曱基化病毒或細(xì)菌DNA的pDC產(chǎn)生大量IFN-a。類似地，在感染小鼠的過程中，鼠巨細(xì)胞病毒(MCMV)優(yōu)先結(jié)合pDC上的Toll樣受體9，導(dǎo)致IFN-a的生成(Dalodetal.,J.Exp.Med.195:517-528(2002);Asselin-Patureletal.,Nat.Immunol.2:1144-1150(2001);Krugetal.，Immunity21:107-119(2004))。為了確定RELT是否影響正常的pDC功能，測(cè)量來(lái)自"/-/-或^/,+/+小鼠的脾細(xì)胞的IFN-a生成。將來(lái)自或^//+/+小鼠的脾細(xì)胞與未曱基化的硫代磷酸酯骨架D型CpG-ODN(D19，GGTGCATCGATGCAGGGGGG(SEQIDNO:71))—起培養(yǎng)并按照先前所述測(cè)量(Hemmietal"J.Immunol.170:3059-64(2003);Krugetal.,Eur.J.Immunol.31:2154-63(2001))。^&-/-衍生的脾細(xì)胞比^/汁/+衍生的脾細(xì)胞分泌大約多4倍的IFN-a(圖19，左圖)。IFN-a分泌的這種增加與"/fV-培養(yǎng)物與re/HV+培養(yǎng)物相比pDC數(shù)目的增加一致(見圖17B)。那些脾細(xì)胞培養(yǎng)物中的IFN-a分泌歸因于樹突細(xì)胞，因?yàn)楫?dāng)刺激前從脾細(xì)胞中去除CDllc+樹突細(xì)胞時(shí)未檢測(cè)到IFN-a(圖19,左圖)。當(dāng)比較相等數(shù)目的pDC時(shí)，&-/-和^/+/+衍生的脾細(xì)胞之間就IFN-(X生成而言沒有差異(圖19,右圖)。與先前的報(bào)告一致(Hemmietal.，J.Immunol.170:3059-64(2003))，用CpG-ODN刺激純化的CDllc+B220—cDC產(chǎn)生極少的IFN-a(圖19，右圖)，與pDC是該細(xì)胞因子的主要來(lái)源一致。如此，對(duì)于pDC的正常IFN-a生成而言，RELT似乎不是必需的，而且在^/-/-小鼠中觀察到的擴(kuò)增CD1lc+B220+群包括IFN-a生成性pDC。實(shí)施例5:RELT遭到破壞的骨髓細(xì)胞的分析調(diào)查RELT缺陷對(duì)骨髓細(xì)胞的影響。將野生型和^//-/-小鼠暴露于單次IOGy劑量的全身照射。然后給照射過的小鼠靜脈內(nèi)注射來(lái)自未處理的^/+/+和^/^/—小鼠的4(106個(gè)骨髓細(xì)胞。8周后分析嵌合小鼠的樹突細(xì)胞群。對(duì)重建受體動(dòng)物的脾pDC和外周血CDllc+MHCir細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。"&-/-供體骨髓細(xì)胞總是比re/NV+供體骨髓細(xì)胞產(chǎn)生更多的CDllc+MHCH—細(xì)胞和pDC，不管受體的基因型(w/f-/-或/什/+)(圖20)。相反，當(dāng)野生型供體細(xì)胞用于接種^&-/-或^/汁/+受體時(shí)，產(chǎn)生相等數(shù)目的pDC和CDllc+MHCI廠細(xì)胞(圖20)。上述結(jié)果表明w/f-/-中擴(kuò)增的pDC和CDllc+MHCII—群反映了w/f-/-骨髓衍生細(xì)胞中的細(xì)月包自發(fā)缺陷(cell隱autonomousdefect)。先前的一項(xiàng)細(xì)胞轉(zhuǎn)移研究表明pDC可以從骨髓內(nèi)的淋巴樣和髓樣前體細(xì)胞分化而來(lái)(Shigematsuetal.，Immunity21:43-53(2004))。如此，pDC和/或那些祖細(xì)胞群上表達(dá)的RELT可能直接調(diào)節(jié)樹突細(xì)胞個(gè)體發(fā)育。T細(xì)胞是表達(dá)RELT配體和抑制pDC發(fā)育的候選物。將人外周血T細(xì)胞在不同刺激物存在的條件下培養(yǎng)24小時(shí)，然后用帶標(biāo)記物的蛋白質(zhì)進(jìn)行FACS分析，所述帶標(biāo)記物的蛋白質(zhì)包含人RELT胞外結(jié)構(gòu)域(氨基酸1-128，具有如下序列PWGVPRVPCQPCSWAPLGTHGCDEWGRRA(SEQIDNO:72))，且其融合至人IgGlFc區(qū)(可溶性RELT-Fc)。用PMA和伊屋諾霉素刺激的人T細(xì)胞特異性(盡管微弱的)結(jié)合人RELT融合蛋白，與先前的才艮告一致(Sicaetal.,Blood97:2702-2707(2001))。權(quán)利要求1.一種特異性結(jié)合RELT的分離的抗體。2.如權(quán)利要求l所述的抗體，其包含至少一種選自分別為SEQIDNO:42-49、51-58和60-67中任一種的HVR-Hl、HVR-H2和HVR-H3的高變(HVR)序列。3.如權(quán)利要求2所述的抗體，其包含至少一種選自HVR-H1、HVR-H2、HVR-H3的序列，其中HVR-Hl包含氨基酸序列abcdefghij，其中氨基酸a是甘氨酸；氨基酸b是苯丙氨酸；氨基酸c是蘇氨酸；氨基酸d是異亮氨酸；氨基酸e選自蘇氨酸、絲氨酸和天冬酰胺；氨基酸f選自天冬酰胺、甘氨酸、絲氨酸和天冬氨酸；氨基酸g選自蘇氨酸、絲氨酸和天冬酰胺；氨基S臾h選自色氨酸、酪氨酸和絲氨酸；氨基酸i是異亮氨酸；而氨基酸j是組氨酸；其中HVR-H2包含氨基酸序列klmnopqrstuvwxyza'b'，其中氨基酸k選自甘氨酸和丙氨酸；氨基酸l選自苯丙氨酸、精氨酸、色氨酸、甘氨酸、天冬酰胺和酪氨酸；氨基酸m是異亮氨酸；氨基酸n選自絲氨酸、酪氨酸、蘇氨酸和天冬酰胺；氨基酸o是脯氨酸；氨基酸p選自絲氨酸、天冬酰胺、酪氨酸和丙氨酸；氨基酸q選自甘氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸和絲氨酸；氨基酸r是甘氨S臾；氨基酸s選自酪氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸和絲氨酸；氨基酸t(yī)是蘇氨酸；氨基酸u選自天冬酰胺、酪氨酸和天冬氨酸；氨基酸v是酪氨酸；氨基S交w是丙氨酸；氨基酸x是天冬氨酸；氨基酸y是絲氨酸；氨基酸z是纈氨酸；氨基酸a'是賴氨酸；而氨基酸b'是甘氨酸；其中HVR-H3包含氨基酸序列c，d，e，f，g，h，i，j，k，l，m，n，o，p，q，r，s，t，u，v，，其中氨基酸c'選自精氨酸和賴氨酸；氨基酸d'選自苯丙氨酸、色氨酸、絲氨酸、甘氨酸、亮氨酸和天冬氨酸；氨基酸e'選自亮氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、絲氨酸和精氨酸；氨基酸f選自絲氨酸、酪氨酸、甘氨酸、色氨酸和組氨酸；氨基酸g'選自天冬氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、丙氨酸、色氨酸和纈氨酸；氨基酸h'選自甘氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、色氨酸、丙氨酸、蘇氨酸和組氨酸；氨基酸i'選自丙氨酸、甘氨酸、曱硫氨酸、色氨酸、天冬氨酸和谷氨酸；氨基S臾j'選自酪氨酸、色氨酸、天冬酰胺、纈氨酸、甘氨酸和谷氨酸；氨基酸k'選自丙氨酸、纈氨酸、甘氨酸、組氨酸、谷氨酸和精氨酸；氨基酸l'選自精氨酸、酪氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸和甘氨酸；氨基酸m'選自天冬氨酸、蘇氨酸、曱硫氨酸、谷氨酸、酪氨酸和精氨酸；氨基酸n'選自酪氨酸、絲氨酸、谷氨酸、丙氨酸、天冬氨酸和脯氨酸，或者不存在；氨基酸o'選自丙氨酸、酪氨酸、曱硫氨酸、色氨酸和纈氨酸，或者不存在；氨基酸p'選自曱硫氨酸、丙氨酸、纈氨酸和甘氨酸，或者不存在；氨基酸q'選自精氨酸、纈氨酸、曱硫氨酸和天冬氨酸，或者不存在；氨基酸r'選自酪氨酸和曱硫氨酸，或者不存在；氨基酸s'是纈氨酸，或者不存在；氨基酸t(yī)'是曱硫氨酸，或者不存在；氨基S吏u'是天冬氨酸；而氨基酸v'是酪氨酸。4.如權(quán)利要求l所述的抗體，其包含HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3序列，所述序列對(duì)應(yīng)于圖5A和5B中針對(duì)克隆C21、CIO、E5/E7、F4、F5、H7、H9和H11所列的那些序列。5.如權(quán)利要求l所述的抗體，其包含SEQIDNO:49的HVR-H1序列、SEQIDNO:58的HVR-H2序列和SEQIDNO:67的HVR-H3序列。6.如權(quán)利要求2-5中任一項(xiàng)所述的抗體，其還包含選自SEQIDNO:1和SEQIDNO:2的輕鏈高變序列。7.—種分離的抗體，其與權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的抗體結(jié)合RELT上相同的抗原性決定簇。8.—種分離的抗體，其與權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的抗體竟?fàn)幗Y(jié)合RELT。9.如權(quán)利要求l-8中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體特異性結(jié)合人RELT。10.如權(quán)利要求l-9中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體抑制RELT與至少一種RELT配體的結(jié)合。11.如權(quán)利要求l-9中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體抑制至少一種RELT介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑。12.如權(quán)利要求l-9中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體刺激至少一種RELT介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑。13.如權(quán)利要求l-9中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體刺激表達(dá)RELT細(xì)胞的NF-kB生成。14.如權(quán)利要求l-9中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體是RELT的激動(dòng)劑。15.如權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體是RELT的拮抗劑。16.—種核酸分子，其編碼如權(quán)利要求l-9中任一項(xiàng)所述的抗體。17.—種載體，其包含如權(quán)利要求16所述的核酸。18.—種宿主細(xì)胞，其包含如權(quán)利要求17所述的載體。19.一種細(xì)胞系，其能夠產(chǎn)生如權(quán)利要求l-9中任一項(xiàng)所述的抗體。20.—種生產(chǎn)如權(quán)利要求l-9中任一項(xiàng)所述抗體的方法，包括在產(chǎn)生抗體的條件下培養(yǎng)包含編碼抗體的核酸分子的宿主細(xì)胞。21.—種組合物，其包含有效量的如權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)所述的抗體和藥學(xué)上可接受的載體。22.—種測(cè)定懷疑含有RELT多肽的樣品中RELT多肽存在的方法，包括將所述樣品暴露于至少一種如權(quán)利要求l-9中任一項(xiàng)所述的抗體，并測(cè)定所述至少一種抗體與所述樣品中RELT多肽的結(jié)合。23.—種治療患者中因IFN-a引起、惡化或延長(zhǎng)的疾病或疾患的方法，所述方法包括給患者施用有效量的至少一種如權(quán)利要求l-9中任一項(xiàng)所述的抗體。24.如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述疾病或疾患是由于患者中的IFN-a水平相對(duì)于沒有所述疾病或疾患時(shí)的IFN-a水平降低而引起、惡化或延長(zhǎng)的。25.如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述疾病或疾患是由于患者中的IFN-a水平相對(duì)于沒有所述疾病或疾患時(shí)的IFN-a水平升高而引起、惡化或延長(zhǎng)的。26.—種治療患者中與IFN-a相關(guān)的疾病或疾患的方法，所述方法包括給患者施用有效量的可溶形式的RELT。27.如權(quán)利要求23-26中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述患者是哺乳動(dòng)物患者。28.如權(quán)利要求27所述的方法，其中所述患者是人。29.如權(quán)利要求23-26中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述疾病或疾患選自至少一種細(xì)胞增殖性病癥、感染、免疫性/炎性病癥、和干"l尤素相關(guān)病癥。30.如權(quán)利要求29所述的方法，其中所述免疫性/炎性病癥選自狼瘡、嗜喘和變應(yīng)性鼻炎。31.如權(quán)利要求29所述的方法，其中所述感染選自微生物感染、病毒感染和真菌感染。32.如權(quán)利要求29所述的方法，其中所述細(xì)胞增殖性病癥選自骨髓增生異常綜合征(MDS)和癌癥。33.—種使CDllc+MHCn—細(xì)胞產(chǎn)生的類漿細(xì)胞樹突細(xì)胞(pDC)相對(duì)于常規(guī)樹突細(xì)胞(cDC)的比例升高的方法，包括抑制CD11c+MHCir細(xì)胞中的RELT表達(dá)。34.—種使CDllc+MHCir細(xì)胞產(chǎn)生的類漿細(xì)胞樹突細(xì)胞(pDC)相對(duì)于常規(guī)樹突細(xì)胞(cDC)的比例升高的方法，包括抑制CDllc+MHCir細(xì)胞中的RELT活性。35.如權(quán)利要求33或34所述的方法，其中所述抑制RELT表達(dá)或活性包括破壞CDllc+MHCir細(xì)胞中的RELT。36.如權(quán)利要求33或34所述的方法，其中所述抑制RELT表達(dá)或活性包括給CD1lc+MHCII—細(xì)胞施用對(duì)RELT反義的寡核香酸。37.如權(quán)利要求33或34所述的方法，其中所述抑制RELT表達(dá)或活性包括給CD1lc+MHCn—細(xì)胞施用抑制RELT與其正常配體結(jié)合的抗體。38.如權(quán)利要求33-37中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述抑制RELT表達(dá)或活性發(fā)生在體內(nèi)。39.如權(quán)利要求33-37中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述抑制RELT表達(dá)或活性發(fā)生在體外。40.—種使CD11c+MHCir細(xì)胞產(chǎn)生的類漿細(xì)胞樹突細(xì)胞相對(duì)于常規(guī)樹突細(xì)胞的比例降低的方法，包括刺激CDllc+MHCir細(xì)胞中的RELT表達(dá)。41.一種使CDllc+MHCir細(xì)胞產(chǎn)生的類漿細(xì)胞樹突細(xì)胞相對(duì)于常規(guī)樹突細(xì)胞的比例降低的方法，包括刺激CD11c+MHCir細(xì)胞中的RELT活性。42.如權(quán)利要求40或41所述的方法，其中所述刺激RELT表達(dá)或活性包括給CDllc+MHCH—細(xì)胞施用激動(dòng)RELT的抗體。43.—種增加哺乳動(dòng)物中IFN-a生成的方法，包括抑制所述哺乳動(dòng)物中的RELT表達(dá)。44.一種增加哺乳動(dòng)物中IFN-a生成的方法，包括抑制所述哺乳動(dòng)物中的RELT活性。45.—種減少哺乳動(dòng)物中IFN-a生成的方法，包括刺激所述哺乳動(dòng)物的CDllc+MHCII—細(xì)胞中的RELT表達(dá)。46.—種減少哺乳動(dòng)物IFN-a生成的方法，包4舌刺激所述哺乳動(dòng)物的CD11c+MHCir細(xì)胞中的RELT活性。47.—種i貪斷哺乳動(dòng)物中與異常IFN-a水平相關(guān)的疾病或疾患的方法，包括檢測(cè)所述哺乳動(dòng)物中表達(dá)的RELT的量。48.如權(quán)利要求47所述的方法，其中所述疾病或疾患選自至少一種細(xì)胞增殖性病癥、感染、免疫性/炎性病癥、和干^t無(wú)素相關(guān)病癥。全文摘要本發(fā)明提供了抗RELT單克隆抗體和使用該抗體的方法。還提供了利用RELT多肽和核酸調(diào)控免疫細(xì)胞發(fā)育和調(diào)控細(xì)胞因子生成的方法。文檔編號(hào)G01N33/564GK101432306SQ200780013379公開日2009年5月13日申請(qǐng)日期2007年2月12日優(yōu)先權(quán)日2006年2月13日發(fā)明者雁吳,榧垣伸彥,維什瓦·迪克西特申請(qǐng)人:健泰科生物技術(shù)公司