專利名稱：糖尿病自身抗體免疫印跡試劑盒的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種糖尿病自身抗體免疫印跡試劑盒。
背景技術：
糖尿病是一組高血糖疾病的總稱，按病因和發(fā)病機理分為1型糖尿病型(T1DM)、2型糖尿病(T2DM)及其它類型。T1DM又稱免疫介導性糖尿病，是自身抗體破壞胰島細胞使胰島素合成和分泌減少而引起。T2DM是機體對胰島素抵抗，胰島素相對減低而引起，所以檢測糖尿病自身抗體對糖尿病準確分型是臨床糖尿病防治的主要依據(jù)，目前確認的糖尿病自身抗體有胰島細胞抗體(ICA)、胰島素抗體(IAA)和谷氨酸脫羧酶抗體(GADA)，常用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和放射免疫法(RIA)測定，由于檢測方法的限制，在不同的試驗室檢測結果差異較大。免疫印跡技術為國際上公認的確認試驗，我國衛(wèi)生部把此方法，推薦為艾滋病(HIV)等重大傳染性疾病的確認方法。我們發(fā)明了糖尿病自身抗體免疫印跡試劑盒對ICA、IAA、和GADA聯(lián)合檢測，以便臨床對糖尿病的診斷和分型。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種糖尿病自身抗體免疫印跡試劑盒，它能同時檢測糖尿病患者血清中的胰島素、谷氨酸脫羧酶和胰島細胞等多種自身抗體，用于糖尿病分型，同時為臨床糖尿病治療、預測、預防提供參考依據(jù)。
為了達到上述目的，本發(fā)明由以下的技術方法來實現(xiàn)。
一種糖尿病自身抗體免疫印跡試劑盒，其特征在于試劑盒的組成成份包括置反應槽內(nèi)的印跡膜條、酶聯(lián)試劑、顯色劑A、顯色劑B、終止液、濃縮洗滌液、標準區(qū)帶，將胰島細胞提取的混蛋白抗體含有胰島素、谷氨酸脫羧酶和胰島細胞的多種蛋白成份；利用蛋白質印跡技術，用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳PAGE，按分子量大小依次分開，再通過印跡技術轉移至印跡膜上，其印跡膜條上即含有按分子量大小不同排列的各種胰島細胞自身抗原成份，將其放入反應槽與待測血清反應，如待測血清含有自身抗體，將會分別與相應抗原結合，再加入酶聯(lián)免疫顯色試劑，就會在抗原、抗體結合位置出現(xiàn)顯色區(qū)帶，與標準帶對照即可判斷待測血清中含有何種抗體，其抗體的有無及抗體的種類和數(shù)量，對糖尿病分型診斷、預測、預防有重要的臨床意義。
具體實施例方式
下面的實施例和制劑實施例可更詳細地說明本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。
實施例1本試劑盒的組成成份包括置反應槽內(nèi)的印跡膜條5板每板8條、酶聯(lián)試劑0.5ml、顯色劑A25ml、顯色劑B25ml、終止液25ml、濃縮洗滌液25ml、標準區(qū)帶。靜脈取血2-5ml，置試管待凝固后離心分離血清，血清標本保存于2-8℃，在24小時內(nèi)不能測試的標本應放-20℃保存，嚴重溶血，有絮狀物或霉變的血清標本會影響測試。
測定步驟1、洗滌應用液的配制在2-8℃貯存的濃縮洗滌液會有結晶析出，將整瓶(25ml)濃縮洗滌用蒸餾水或去離子水稀釋至500ml，放入試劑瓶中，標簽上注明配制時間，保存于2-8℃，有效期6個月，如有絮狀物或霉變應廢棄。
2、在含有印跡膜條的反應槽中加入洗滌應用液1ml和待檢血清10ul。
3、置搖床上室溫下(20℃以上，37℃以下)搖動30分鐘。
4、棄去反應槽液體，在吸水紙上拍干，加入洗滌應用液1ml，洗滌1分鐘棄去反應槽液體，反復洗滌4次，最后在吸水紙上拍干液體。
5、在反應槽中加入洗滌應用液0.5ml和酶聯(lián)試劑10ul。
6、置搖床上室溫下(20℃以上，37℃以下)搖動30分鐘。
7、棄去反應槽液體，在吸水紙上拍干，加入洗滌應用液1ml，洗滌1分鐘棄去反應槽液體，反復洗滌4次，最后在吸水紙上拍干液體。
8、在反應槽中分別加入顯色劑A 0.5ml，顯色劑B 0.5ml。
9、在搖床上搖動2-10分鐘，顯色。
10、待質控帶和陽性區(qū)帶顯色清晰后加終止液0.5ml，在搖床上搖動2分鐘。
11、用自來水沖去槽中液體，取出印跡膜條，置吸水紙上，待干后與標準帶對照判斷結果。
結果判斷將印跡膜上端起始線與標準帶起始線對齊，觀察陽性顯色區(qū)帶與對應的標準帶位置即可判斷顯色帶是何種自身抗體。根據(jù)自身抗體的有無或多少，對糖尿病診斷、分型、治療、預測、防治提供參考依據(jù)。糖尿病自身抗體免疫印跡標準帶使用前確認產(chǎn)品注冊號、批號、有效期、檢驗合格證是否齊全、有效；印跡膜鋁箔袋有無漏氣現(xiàn)象；試劑瓶有無漏液現(xiàn)象。操作環(huán)境溫度應不低于20℃，若環(huán)境溫度過低，應置于37℃溫箱中操作。待測標本宜用新鮮血清或全血，如當天不檢測，應置4℃保存；超過24小時以上，需置-20℃以下保存。判斷結果時，應首先觀察質控帶是否出現(xiàn)，如未出現(xiàn)，請及時與廠家聯(lián)系。不同批號的標準帶不能混用。本試劑盒僅用于體外診斷，置2-8℃冷藏，不宜冷凍。
權利要求
1.一種糖尿病自身抗體免疫印跡試劑盒，其特征在于試劑盒的組成成份包括置反應槽內(nèi)的印跡膜條、酶聯(lián)試劑、顯色劑A、顯色劑B、終止液、濃縮洗滌液、標準區(qū)帶，將胰島細胞提取的混合蛋白抗原(胰島素、谷氨酸脫羧酶和胰島細胞的多種蛋白成份)，利用蛋白印跡技術，通過SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)，按分子量大小依次分開，再轉移至印跡膜上，其印跡膜條上即含有按分子量大小不同排列的各種胰島細胞自身抗原成份，將其放入反應槽與待測血清反應，如待測血清含有自身抗體，將會分別與相應抗原結合，再加入酶聯(lián)免疫顯色試劑，就會在抗原、抗體結合位置出現(xiàn)顯色區(qū)帶，與標準帶對照即可判斷待測血清中含有何種抗體及抗體種類和數(shù)量。
2.根據(jù)權利要求1所述的糖尿病自身抗體免疫印跡試劑盒，其特征在于試劑盒和測定步驟①、洗滌應用液的配制在2-8℃貯存的濃縮洗滌液會有結晶析出，將整瓶(25ml)濃縮洗滌用蒸餾水或去離子水稀釋至500ml，放入試劑瓶中，標簽上注明配制時間，保存于2-8℃，有效期6個月，如有絮狀物或霉變應廢棄。②、在含有印跡膜條的反應槽中加入洗滌應用液1ml和待檢血清10ul。③、置搖床上室溫下(20℃以上，37℃以下)搖動30分鐘。④、棄去反應槽液體，在吸水紙上拍干，加入洗滌應用液1ml，洗滌1分鐘棄去反應槽液體，反復洗滌4次，最后在吸水紙上拍干液體。⑤、在反應槽中加入洗滌應用液0.5ml和酶聯(lián)試劑10ul。⑥、置搖床上室溫下(20℃以上，37℃以下)搖動30分鐘。⑦、棄去反應槽液體，在吸水紙上拍干，加入洗滌應用液1ml，洗滌1分鐘棄去反應槽液體，反復洗滌4次，最后在吸水紙上拍干液體。⑧、在反應槽中分別加入顯色劑A 0.5ml，顯色劑B 0.5ml。⑨、在搖床上搖動2-10分鐘，顯色。⑩、待質控帶和陽性區(qū)帶顯色清晰后加終止液0.5ml，在搖床上搖動2分鐘。(11)、用自來水沖去槽中液體，取出印跡膜條，置吸水紙上，待干后與標準帶對照判斷結果。
3.根據(jù)權利要求1所述的糖尿病自身抗體免疫印跡試劑盒，其特征在于將印跡膜上端起始線與標準帶起始線對齊，觀察陽性顯色區(qū)帶與對應的標準帶位置即可判斷顯色帶是何種自身抗體，根據(jù)自身抗體的有無或多少，對糖尿病診斷、分型、治療、預測、防治提供參考依據(jù)，利用糖尿病自身抗體免疫印跡標準帶對照。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種糖尿病自身抗體免疫印跡試劑盒，將胰島細胞提取的混合蛋白抗體含有胰島素、谷氨酸脫羧酶和胰島細胞的多種蛋白成份；利用蛋白印跡技術，通過SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)，按分子量大小依次分開，再轉移至印跡膜上，其印跡膜條上即含有按分子量大小不同排列的各種胰島細胞自身抗原成份，將其放入反應槽與待測血清反應，如待測血清含有自身抗體，將會與相應抗原結合，再加入酶聯(lián)和顯色試劑，就會出現(xiàn)顯色區(qū)帶，與標準帶對照即可判斷待測血清中是否含有胰島素抗體、谷氨酸脫羧酶抗體和胰島細胞抗體，對糖尿病分型診斷、預測、預防有重要的臨床意義。
文檔編號G01N21/78GK101042399SQ20071013567
公開日2007年9月26日 申請日期2007年3月12日 優(yōu)先權日2007年3月12日
發(fā)明者馬偉民, 張永頂 申請人:深圳市伯勞特生物制品有限公司