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維生素k2類藥物中順式異構(gòu)體的檢測方法

文檔序號:6126824閱讀:681來源:國知局

專利名稱::維生素k2類藥物中順式異構(gòu)體的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域
:本發(fā)明涉及一種維生素K2類藥物雜質(zhì)的檢測方法,特別是涉及維生素K2類藥物中順式異構(gòu)體的檢測方法。
背景技術(shù)
:隨著人類壽命的延長,人口老齡化給人類健康帶來了新的問題。骨質(zhì)疏松癥及其引起的骨折在當(dāng)前常見疾病中位于第7位,嚴(yán)重威脅著中老年人的健康。經(jīng)研究確認(rèn),維生素K2類藥物具有成骨作用,促進(jìn)鈣代謝,同時還能抑制破骨細(xì)胞引起的骨吸收,從而增加骨密度,防治骨質(zhì)疏松。四烯曱萘醌作為維生素K2類藥物的一種,具有強(qiáng)效促凝血作用(1972年已批準(zhǔn)作為促凝血藥上市)。四烯曱萘醌也具有促進(jìn)成骨和抑制骨質(zhì)吸收兩方面作用,它不僅能活化成骨細(xì)胞、促進(jìn)鈣化,而且能抑制破骨細(xì)胞的分化,進(jìn)而抑制破骨細(xì)胞的骨質(zhì)吸收能力,從而抑制骨質(zhì)疏松,能夠作為改善骨組織代謝不均衡導(dǎo)致的骨質(zhì)疏松癥的藥物。順式異構(gòu)體作為維生素K2類藥物中的已知雜質(zhì),是該類藥品質(zhì)量控制中的重要指標(biāo)?,F(xiàn)有的檢測順式異構(gòu)體雜質(zhì)的方法多為薄層色譜法,如《曰本藥局方》中四烯曱萘醌順式異構(gòu)體的檢查就采用薄層色譜法。但是,該方法的局限性表現(xiàn)為專屬性差,精密度低,無法進(jìn)行準(zhǔn)確^r測和定量,因而無法準(zhǔn)確控制藥品中順式異構(gòu)體的含量。因此,在開發(fā)維生素K2類藥物的同時,需要建立更完善的檢測順式異構(gòu)體的方法。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是由下述技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的一種維生素K2類藥物中順式異構(gòu)體的高效液相色譜檢測方法,所述方法采用硅膠為填料的正相色語柱以及由一種選自正己烷、正戊烷、石油醚、環(huán)己烷、異辛烷和正庚烷中的低極性溶劑和一種選自正丁醚、異丙醇、正戊醇、四氫呋喃、二氯曱烷和乙醇中的高極性溶劑組成的流動相。在上述^r測方法中,所述維生素K2類藥物為具有下式所示結(jié)構(gòu)的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>其中,n的范圍為1-10,優(yōu)選為四烯曱萘醌(n=4)。在上述檢測方法中,所述流動相的組成為按體積比,低極性溶劑高極性溶劑=100-60:0-40;優(yōu)選地,按體積比,低極性溶劑高極性溶劑=99-70:1-30。所述流動相的組成可以為^安體積比,正己烷正丁醚=100-60:0-40;或者按體積比,石油醚正戊醇=99-70:1-30。所述檢測方法中采用二極管陣列4企測器,檢測波長為200nm-380nm,優(yōu)選為270nm。所采用的色譜柱可以是但不限于以下色譜柱中的任意一種迪馬公司硅膠柱InertsilSIL-100A(5pm4.6x250mm);迪馬公司氰基InertsilCN-3(5|um4.6x250mm);Therm/>司石圭月交柱HypersilSilica(5|um4.6x150mm)或安捷倫公司硅膠柱AgilentPrep-SIL(5|im4.6x250mm)。所述檢測方法應(yīng)采用避光操作,進(jìn)樣量小于0.8jug。本發(fā)明的檢測方法比《日本藥局方》中四烯曱萘醌順式異構(gòu)體的檢測方法具有更高的靈敏度和更好的專屬性。它使用市場上容易獲到的高效液相色i普儀和色譜柱,HPLC分析的操作程序和數(shù)據(jù)處理方法又是藥物分析技術(shù)人員所熟知的,因而便于推廣使用以及實(shí)驗(yàn)室間數(shù)據(jù)的比較與重現(xiàn),也有利于生產(chǎn)過程中對原料及制劑的質(zhì)量進(jìn)行監(jiān)控。圖1四烯曱萘醌反式異構(gòu)體和順式異構(gòu)體HPLC分離色譜圖。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1HPLC分析條件高效液相色譜分析采用配有二極管陣列檢測器的高效液相色語儀Waters2695—996,以及安捷倫公司的AgilentPrep-SIL(5|im4.6x250mm)硅膠柱。流動相為正己烷-正丁醚(體積比為95:5),檢測波長為270nm,使用自動進(jìn)樣器,每次進(jìn)樣20}il。各取四烯曱萘醌反式異構(gòu)體和順式異構(gòu)體適量,準(zhǔn)確稱重,用上述流動相配制成濃度為lmg/ml的溶液,采用上述儀器和條件進(jìn)行分析,獲得HPLC色譜圖,如圖l所示。在該色譜條件下,四烯曱萘醌反式異構(gòu)體的保留時間為22.863min,四烯曱萘醌順式異構(gòu)體的保留時間為19.958min,兩者的分離度大于1.5,可達(dá)到基線分離。實(shí)施例2取3份四烯曱萘醌產(chǎn)品作為樣品,按照實(shí)施例1中的HPLC分析條件進(jìn)行分析,根據(jù)獲得的液相色譜圖中順式異構(gòu)體峰面積以及對照溶液峰面積,通過外標(biāo)法計算順式異構(gòu)體的含量。表1顯示了3份樣品的檢測結(jié)果。由表1可知,它們中的順式異構(gòu)體含量差別不大,但均低于《日本藥局方》中"四烯曱萘醌順式異構(gòu)體檢查"所要求的檢測限(2%)。表l樣品中的順式異構(gòu)體含量樣品順式體含量(%)10.41420.40330.444實(shí)施例3取lmg/ml的四烯曱萘醌樣品溶液,分別加鹽酸溶液、氫氧化鈉溶液、過氧化氫溶液進(jìn)行酸、堿、氧化破壞反應(yīng)。取lmg/ml的四烯曱萘醌樣品溶液,水浴加熱,進(jìn)行熱破壞反應(yīng)。取lmg/ml的四烯曱萘醌樣品溶液,光照若干小時,進(jìn)行光破壞反應(yīng)。采用實(shí)驗(yàn)例1中的HPLC分析條件,對上述反應(yīng)液進(jìn)行分析。本試驗(yàn)的目的是考察樣品對酸、堿、氧化、熱、光的敏感性及順式異構(gòu)體的含量變化,進(jìn)而確定所用色譜條件能否準(zhǔn)確檢測順式異構(gòu)體含量從而全面控制產(chǎn)品的質(zhì)量,試驗(yàn)結(jié)果見表2。由結(jié)果可知,四烯曱萘醌溶液在酸、堿、氧化和熱破壞反應(yīng)中穩(wěn)定,順式異構(gòu)體含量保持不變;但在光照破壞反應(yīng)中不穩(wěn)定,順式異構(gòu)體含量明顯增加。因此實(shí)驗(yàn)中應(yīng)謹(jǐn)慎避光操作,以免引起順式異構(gòu)體含量異常增加。5表2破壞反應(yīng)中順式異構(gòu)體含量變化<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>實(shí)施例4取同一個批號的四烯曱萘醌樣品,用無水乙醇配成lmg/ml的溶液5份,采用實(shí)驗(yàn)例1中的HPLC分析條件,在避光放置的24小時內(nèi)分別進(jìn)行測定。本試驗(yàn)的目的是考察樣品在常溫避光放置條件下的穩(wěn)定性和試驗(yàn)重復(fù)性,試驗(yàn)結(jié)果見表3。由結(jié)果可知,樣品溶液在24小時內(nèi)基本穩(wěn)定,重復(fù)性誤差約2%。表3穩(wěn)定性試驗(yàn)中順式體含量變化<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>實(shí)施例5取四烯曱萘醌順式異構(gòu)體樣品用無水乙醇配制成5個濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液,采用實(shí)驗(yàn)例1中的HPLC分析條件分別測定,根據(jù)峰面積和進(jìn)樣濃度進(jìn)4亍線性回歸。本試驗(yàn)的目的是考察四烯曱萘醌順式異構(gòu)體的測定濃度范圍,結(jié)果可知,在0-0.8jug進(jìn)樣濃度下,線性關(guān)系很好,回歸方程是y-666.35x-2.11,線性指數(shù)R=0.99997。實(shí)施例6本發(fā)明中所采用的四烯曱萘醌順式異構(gòu)體或反式異構(gòu)體,除了通過定向合成直接制備獲得之外,還可以利用液相制備的方法、由順反異構(gòu)體混合物分離得到,本試驗(yàn)即用該方法制得順式異構(gòu)體和反式異構(gòu)體,并對其進(jìn)行了結(jié)構(gòu)分析。操作步驟1、取四烯曱萘醌順、反式異構(gòu)體混合物以實(shí)施例1所述流動相配制成濃度為10~200mg/ml的溶液。根據(jù)按照實(shí)施例1中的HPLC分析條件獲得的HPLC色譜圖,分別收集對應(yīng)的色譜峰的洗脫液,揮干溶劑得兩份樣品。2、高效液相色譜/二極管陣列檢測器分析釆用配有二極管陣列檢測器的高效液相色語儀Waters2695_996,按實(shí)施例1中的HPLC分析條件,對步驟1中制備的樣品進(jìn)行測定。通過二極管陣列檢測器確定兩種樣品的吸收波長。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知,兩種樣品的紫外吸收譜線完全一致。3、高效液相色譜/質(zhì)譜檢測器分析儀器ThermoFinniganTSQQuantum液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀測定條件流動相為曱醇水(90:10);流速為0.4ml/min;ESI源,正離子檢測,噴射電壓4kv,毛細(xì)管柱溫度300°C;用曱醇溶解樣品,進(jìn)樣器進(jìn)樣10|Lll。測定結(jié)果在四烯曱萘醌反式異構(gòu)體樣品的一級質(zhì)i普圖中,m/z445是準(zhǔn)分子離子峰[M+H]+,出現(xiàn)了m/z462[M+NH4]+,m/z467[M+Na]+準(zhǔn)分子離子峰,在四烯曱萘醌的二級質(zhì)譜圖中,m/zl87是其主要碎片離子峰;在四烯曱萘醌順式異構(gòu)體樣品的一級質(zhì)譜圖中,m/z445是準(zhǔn)分子離子峰[M+H]+,出現(xiàn)了m/z462[MH4]+,m/z467[M+Na]+準(zhǔn)分子離子峰,在順式異構(gòu)體樣品的二級質(zhì)譜圖中,m/zl87是其主要碎片離子峰;與反式異構(gòu)體樣品的質(zhì)譜圖一致,參見表4。表4高效液相色譜/質(zhì)譜檢測器分析物質(zhì)準(zhǔn)分子離子峰碎片離子(歸屬)四烯曱萘醌反式異構(gòu)體445[M+H]+462[M+NH4]+467[M+Na]+m/z363、295、253、225、187、149、135、109等一系列碎片離子峰,m/zl87是基峰。四烯甲萘醌順式異構(gòu)體445[M+H]+462[MH4]十467[M^rm/z363、295、253、227、187、149、135、109等一系列碎片離子峰,m/zl87是基峰。4、高分辨質(zhì)i普分析儀器Bruker公司APEXII型傅立葉變換離子回旋共振質(zhì)譜儀(FT-ICR-MS)質(zhì)語方法P-SIMS(正離子二次離子質(zhì)譜),基質(zhì)為甘油或間-硝基千醇。測試單位北京質(zhì)譜中心測定結(jié)果在四烯曱萘醌反式異構(gòu)體的質(zhì)譜圖中,m/z446是準(zhǔn)分子離子峰[M+2H]+,分子式為C31H4202,分子量為446.32,m/zl86、187是其主要碎片離子峰;在其順式異構(gòu)體的質(zhì)譜圖中,m/z446是準(zhǔn)分子離子峰[M+2H]+,m/zl86、187是其主要碎片離子峰,與反式異構(gòu)體的質(zhì)譜圖一致。見表5。表5高分辨質(zhì)譜分析<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>權(quán)利要求1.一種維生素K2類藥物中順式異構(gòu)體的高效液相色譜檢測方法,其特征在于,所述方法采用硅膠為填料的正相色譜柱以及由一種選自正己烷、正戊烷、石油醚、環(huán)己烷、異辛烷和正庚烷中的低極性溶劑和一種選自正丁醚、異丙醇、正戊醇、四氫呋喃、二氯甲烷和乙醇中的高極性溶劑組成的流動相。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法,其特征在于,所述維生素K2類藥物為具有下式所示結(jié)構(gòu)的化合物其中,n的范圍為1-10。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的檢測方法,其特征在于,所述維生素K2類藥物為四烯甲萘醌。4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的檢測方法,其特征在于,所述流動相的組成為按體積比,低極性溶劑高極性溶劑=100-60:0-40;優(yōu)選地,按體積比,低極性溶劑高極性溶劑=99-70:1-30。5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的檢測方法,其特征在于,所述流動相的組成為4要體積比,正己烷正丁醚=100-60:0-40。6.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的檢測方法,其特征在于,所述流動相的組成為4姿體積比,石油醚正戊醇=99-70:1-30。7.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的檢測方法,其特征在于,所述檢測方法中采用二極管陣列檢測器。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測方法,其特征在于,所述檢測方法的檢測波長為200nm-380nm,優(yōu)選為270nm。9.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的檢測方法,其特征在于,所述檢測方法采用避光操作。10.根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的檢測方法,其特征在于,所述檢測方法的進(jìn)樣量小于0.8jug。全文摘要本發(fā)明提供一種維生素K2類藥物中順式異構(gòu)體的高效液相色譜檢測方法,所述方法采用硅膠為填料的正相色譜柱以及由一種選自正己烷、正戊烷、石油醚、環(huán)己烷、異辛烷和正庚烷中的低極性溶劑和一種選自正丁醚、異丙醇、正戊醇、四氫呋喃、二氯甲烷和乙醇中的高極性溶劑組成的流動相。該方法具有更高的靈敏度和更好的專屬性,操作程序簡便,重現(xiàn)性好,有利于生產(chǎn)過程中對原料及制劑的質(zhì)量控制。文檔編號G01N30/00GK101470104SQ20071006052公開日2009年7月1日申請日期2007年12月28日優(yōu)先權(quán)日2007年12月28日發(fā)明者謹(jǐn)劉,疆吳,夏錦輝,孫歆慧,宋麗明,蔣慶峰,蔡振華,鄒美香,金松子申請人:天津康鴻醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司
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