專利名稱：一種檢測(cè)耐除草劑大豆中epsps基因的酶聯(lián)免疫試劑盒及其使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及酶聯(lián)免疫試劑盒領(lǐng)域，具體的說(shuō)，涉及一種檢測(cè)耐除草劑大豆中EPSPS基因的酶聯(lián)免疫試劑盒及其使用方法。
背景技術(shù)：
根據(jù)農(nóng)業(yè)生物技術(shù)應(yīng)用國(guó)際服務(wù)組織(ISAAA)的報(bào)告，2006年全球轉(zhuǎn)基因作物的種植面積達(dá)1.02億公頃。在已實(shí)現(xiàn)商品化生產(chǎn)的轉(zhuǎn)基因作物中，轉(zhuǎn)基因耐除草劑大豆種植面積最大。這種大豆由于轉(zhuǎn)入了5-烯醇丙酮酸莽草酸-3-磷酸合酶(5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase，EPSPS)基因，該基因編碼的酶是除草劑草甘磷的靶酶，從而使這種轉(zhuǎn)基因大豆能在除草劑草甘磷的環(huán)境中正常生長(zhǎng)。
隨著轉(zhuǎn)基因作物的商品化發(fā)展，許多國(guó)家(包括我國(guó))加強(qiáng)了對(duì)其安全性評(píng)估和風(fēng)險(xiǎn)性分析，并制定了相應(yīng)的管理法規(guī)。轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的檢測(cè)已納入國(guó)內(nèi)外檢驗(yàn)檢疫部門(mén)的檢測(cè)項(xiàng)目。由于大豆在食品加工中具有廣泛的應(yīng)用，因此有很有必要建立對(duì)轉(zhuǎn)EPSPS基因大豆的檢測(cè)技術(shù)。
目前對(duì)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的檢測(cè)主要有基于DNA水平的PCR方法和基于蛋白水平的免疫學(xué)檢測(cè)方法。PCR方法具有靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)，但同時(shí)也存在操作繁瑣(需要進(jìn)行復(fù)雜的DNA提取步驟)、對(duì)操作人員素質(zhì)要求較高、結(jié)果容易出現(xiàn)假陽(yáng)性、檢測(cè)成本較高等缺點(diǎn)。因此，PCR方法不適用于轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的快速大量檢測(cè)和口岸檢疫。
轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的免疫學(xué)檢測(cè)方法主要有試紙條法和酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。試紙條法雖可部分克服上述PCR方法的不足(如美國(guó)Envirologix Incorporated，Strategic Diagnostics，Inc.和重慶金標(biāo)生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的試紙條)，但試紙條只能進(jìn)行簡(jiǎn)單的定性檢測(cè)，無(wú)法實(shí)現(xiàn)定量，且檢測(cè)靈敏度較低。
酶聯(lián)免疫吸附法具有靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、可定量檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，現(xiàn)已成為常用的篩選方法。目前應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附方法檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大豆已有報(bào)道(Rogan G等1999，F(xiàn)ood Control 10407-414)，其設(shè)計(jì)原理是先在微孔條上包被針對(duì)EPSPS的單克隆抗體，然后加入標(biāo)準(zhǔn)品和待檢樣品，再加入兔抗EPSPS多克隆抗體，之后加入生物素標(biāo)記的鼠抗兔IgG，再加入HRP標(biāo)記的親合素，最后加底物顯色。操作過(guò)程太過(guò)繁瑣，檢測(cè)時(shí)間太長(zhǎng)，故根本無(wú)法應(yīng)用于實(shí)際工作中。另外，國(guó)外已經(jīng)商品化的轉(zhuǎn)基因大豆ELISA檢測(cè)試劑盒(美國(guó)Agdia公司)則無(wú)法實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)，且價(jià)格昂貴，使其推廣應(yīng)用受到限制。因此研制操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確高效、廉價(jià)的轉(zhuǎn)基因大豆ELISA檢測(cè)試劑盒非常有必要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種高特異性、高靈敏度、價(jià)格低廉、操作簡(jiǎn)單，能大批量快速檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大豆的酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒。
本發(fā)明的另一目的是提供上述酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒的使用方法。
一種檢測(cè)耐除草劑大豆中EPSPS基因的酶聯(lián)免疫試劑盒，包括抗EPSPS多克隆抗體、包被有抗EPSPS單克隆抗體的酶標(biāo)板、酶標(biāo)二抗。所述的包被有單克隆抗體的酶標(biāo)板所用的包被緩沖液為pH9.6、0.05mol/L碳酸鹽緩沖液。
在上述酶聯(lián)免疫試劑盒中，所述試劑盒還包括轉(zhuǎn)EPSPS基因大豆陽(yáng)性質(zhì)控品、非轉(zhuǎn)基因大豆陰性質(zhì)控品、顯色劑、濃縮洗滌液、終止液。所述濃縮洗滌液優(yōu)選0.01M，pH7.4，含有0.8～1.2％吐溫20和0.5％硫柳汞防腐劑的磷酸鹽緩沖液；所述終止液優(yōu)選1～2mol/L的硫酸或氫氧化鈉溶液；所述百分含量均為質(zhì)量百分含量。
當(dāng)標(biāo)記酶為辣根過(guò)氧化物酶時(shí)，顯色劑由顯色液A液和顯色液B液組成，顯色液A液為過(guò)氧化氫或過(guò)氧化脲，顯色液B為鄰苯二胺或四甲基聯(lián)苯胺，終止液為1～2mol/L的硫酸；當(dāng)標(biāo)記酶為堿性磷酸酯酶時(shí)，顯色液為4-硝基酚磷酸鹽緩沖液，終止液為1～2mol/L氫氧化鈉溶液。
在上述酶聯(lián)免疫試劑盒中，所述抗EPSPS多克隆抗體是由如下方法制備而成(1)制備抗原重組EPSPS蛋白通過(guò)PCR方法從轉(zhuǎn)基因大豆中擴(kuò)增出CP4-EPSPS基因，使其在大腸桿菌中表達(dá)，再經(jīng)Ni離子層析柱純化，最后經(jīng)過(guò)透析復(fù)性得到；(2)將得到的EPSPS蛋白免疫兔、雞、羊、或馬后，從動(dòng)物血液中分離抗血清，再經(jīng)過(guò)硫酸銨沉淀、脫鹽得到純化的抗EPSPS多克隆抗體。
在上述酶聯(lián)免疫試劑盒中，所述抗EPSPS單克隆抗體是由如下方法制備而成(1)制備抗原重組EPSPS蛋白通過(guò)PCR方法從轉(zhuǎn)基因大豆中擴(kuò)增出CP4-EPSPS基因，使其在大腸桿菌中表達(dá)，再經(jīng)Ni離子層析柱純化，最后經(jīng)過(guò)透析復(fù)性得到；(2)將得到的EPSPS蛋白免疫小鼠，取脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選雜交瘤細(xì)胞，克隆化后獲得穩(wěn)定的單克隆雜交瘤細(xì)胞株，再制備腹水，腹水經(jīng)過(guò)離心、硫酸銨沉淀、脫鹽、過(guò)Protein A親和層析柱得到純化的抗EPSPS單克隆抗體。
上述檢測(cè)耐除草劑大豆中EPSPS基因的酶聯(lián)免疫試劑盒的使用方法，包括以下步驟(1)加入待檢測(cè)樣品和系列標(biāo)準(zhǔn)品，使其中的EPSPS蛋白與固相載體上的單抗結(jié)合，洗去未結(jié)合的非特異性雜蛋白；(2)加入純化的多抗，使其與EPSPS蛋白結(jié)合，洗去未結(jié)合的多余抗體及雜蛋白；(3)加入酶標(biāo)二抗，使其與多抗結(jié)合，洗去未結(jié)合的酶標(biāo)抗體及雜蛋白；(4)加入底物，室溫作用，檢測(cè)酶標(biāo)記抗體的催化活性；(5)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出待檢樣品的轉(zhuǎn)基因含量。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果本發(fā)明建立的雙抗體夾心ELISA檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大豆中EPSPS蛋白可以達(dá)到1％的檢測(cè)限，并能達(dá)到定量檢測(cè)；本發(fā)明中免疫動(dòng)物的抗原是直接從轉(zhuǎn)基因大豆中克隆、體外表達(dá)并經(jīng)過(guò)復(fù)性，保證了免疫抗原與天然抗原的一致性，因而制備了高特異性的抗體；本發(fā)明的免疫檢測(cè)試劑盒對(duì)樣品的前處理要求低，能同時(shí)快速檢測(cè)大量樣品；本發(fā)明的試劑盒結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，攜帶便利，價(jià)格便宜，適合于大量樣品篩選的定性、定量檢測(cè)。


圖1為EPSPS蛋白的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線圖；圖2為轉(zhuǎn)基因大豆的檢測(cè)結(jié)果圖。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1 本發(fā)明的檢測(cè)試劑盒的建立過(guò)程一、抗原的制備(1)從轉(zhuǎn)基因大豆中克隆CP4-EPSPS基因根據(jù)已公開(kāi)的轉(zhuǎn)基因大豆中CP4-EPSPS基因的序列，從基因的開(kāi)放閱讀框架兩端設(shè)計(jì)引物，并分別加上HindIII和SalI酶切位點(diǎn)，設(shè)計(jì)的引物序列為引物F5’TTTGTCGACATGTCGCACGGTGCAAGGAGC 3’引物R5’AAAGCTTCAGGCAGCCTTCGTATGGGAG 3’按CTAB法從轉(zhuǎn)基因大豆幼苗葉中抽提總DNA，以其作為模板，利用上述引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增以克隆CP4-EPSPS基因。PCR反應(yīng)參數(shù)為94℃預(yù)變性5min，然后按94℃30sec——62℃30sec——72℃1.5min循環(huán)35次，最后72℃10min。PCR產(chǎn)物連接到PMD-T18載體中，轉(zhuǎn)化大腸桿菌，對(duì)陽(yáng)性克隆進(jìn)行測(cè)序。
(2)CP4-EPSPS基因在大腸桿菌中表達(dá)及純化經(jīng)測(cè)序確定正確的克隆，抽提質(zhì)粒，用HindIII和SalI雙酶切，切出目的片段，純化，連接入PQE-9表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌M15菌株。通過(guò)堿裂解法初步鑒定陽(yáng)性克隆，質(zhì)粒酶切法進(jìn)一步鑒定，最后對(duì)陽(yáng)性克隆進(jìn)行測(cè)序以確認(rèn)。
挑取陽(yáng)性克隆入3ml LB液體培養(yǎng)基，37℃搖菌過(guò)夜，再轉(zhuǎn)入300ml LB液體培養(yǎng)基，37℃搖至菌液OD600值為0.6，加入IPTG使其終濃度為1μmol/L，37℃誘導(dǎo)4小時(shí)。誘導(dǎo)后取1ml菌液在2％SDS中變性裂解，用SDS-PAGE電泳檢測(cè)蛋白質(zhì)表達(dá)水平。表達(dá)后的菌液在8mol尿素的條件下裂解、取上清，過(guò)Ni離子親和層析柱，在pH 5.9條件下洗脫目標(biāo)蛋白質(zhì)。
(3)EPSPS蛋白的復(fù)性采用透析去除尿素的方法對(duì)EPSPS蛋白進(jìn)行復(fù)性。按照尿素濃度8mol/L、6mol/L、4mol/L、2mol/L、0mol/L的梯度進(jìn)行透析，每一濃度在4℃下透析12小時(shí)。復(fù)性產(chǎn)物離心去沉淀，上清部分用SDS-PAGE電泳檢測(cè)純度，再用BCA法檢測(cè)蛋白濃度。
二、單克隆抗體的制備(1)動(dòng)物免疫采用Balb/c小鼠為免疫動(dòng)物，以純化復(fù)性的EPSPS蛋白為免疫原，免疫劑量為50ug/只，首免時(shí)將免疫原與等量弗氏完全佐劑混合成乳化劑，皮下多點(diǎn)注射，間隔2周取相同劑量免疫原加等量弗氏不完全佐劑混合乳化，加強(qiáng)免疫一次，四免后腹腔加強(qiáng)免疫一次，3天后取脾細(xì)胞。
(2)細(xì)胞融合與克隆化取免疫Balb/c小鼠脾細(xì)胞，按5～10∶1比例與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞融合，采用間接ELISA測(cè)定細(xì)胞上清液，篩選陽(yáng)性孔。利用有限稀釋法對(duì)陽(yáng)性孔進(jìn)行克隆化，直到得到穩(wěn)定分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。
(3)雜交瘤細(xì)胞核型分析與單抗亞型鑒定在雜交瘤細(xì)胞中加入秋水仙素(終濃度為0.1～0.4ug/ml)，經(jīng)低滲處理、甲醇-冰醋酸固定、制片和Giemsa染色后，在油鏡下計(jì)數(shù)100個(gè)分散較好且完整的中期分裂相細(xì)胞的染色體數(shù)目，求其均值。
利用HBT公司提供的單克隆抗體亞類(lèi)測(cè)定試劑盒，檢測(cè)雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清，以確定Ig類(lèi)別和亞類(lèi)。
(4)細(xì)胞凍存和復(fù)蘇取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的雜交瘤細(xì)胞用凍存液制成1～5×106個(gè)/ml的細(xì)胞懸液，分裝于凍存管，在液氮中長(zhǎng)期保存。復(fù)蘇時(shí)取出凍存管，立即放入37℃水浴中速融，離心去除凍存液后，移入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)。
(5)腹水制備采用體內(nèi)誘生法，將Balb/c小鼠(8周齡)腹腔注射滅菌石蠟油0.5ml/只，7～14天后腹腔注射雜交瘤細(xì)胞約5×106個(gè)/只，7～10天后采集腹水。
(6)抗體純化腹水先經(jīng)4℃12000rpm離心15分鐘，去除雜質(zhì)，再經(jīng)50％、33％硫酸銨沉淀。沉淀物通過(guò)透析除鹽，過(guò)Protein A親和層析柱，用pH4.0的枸椽酸緩沖液洗脫IgG，并用適量固體Tris直接中和含有IgG的洗脫液。純化抗體小量分裝后放-20℃保存。
三、多克隆抗體的制備采用新西蘭大白兔為免疫動(dòng)物，以純化并復(fù)性的EPSPS蛋白為免疫原，免疫劑量為1mg/只，首免時(shí)將免疫原與等量弗氏完全佐劑混合成乳化劑，皮下多點(diǎn)注射，間隔2周取相同劑量免疫原加等量弗氏不完全佐劑混合乳化，加強(qiáng)免疫三次，四免后對(duì)兔子進(jìn)行頸動(dòng)脈采血，血液37℃下放置2小時(shí)，4℃過(guò)夜后離心得到抗血清。
抗體血清經(jīng)過(guò)50％硫酸銨沉淀一次、33％硫酸銨沉淀兩次后透析脫鹽，小量分裝后放-20℃保存。
四、酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)體系的建立及使用(1)包被用pH9.5碳酸鹽緩沖液稀釋前述純化單克隆抗體(終濃度1.25ug/ml)，100ul/孔，4℃包被過(guò)夜。
(2)封閉每孔加入5％脫脂奶粉200ul，放37℃2小時(shí)，洗板。
(3)加樣取100ul待檢樣品和系列標(biāo)準(zhǔn)品加入反應(yīng)孔，放37℃2小時(shí)，洗板。
(4)加入前述純化兔多克隆抗體(1∶3000)，100ul/孔。樣品稀釋液1％脫脂奶粉，37℃作用1小時(shí)，洗板。
(5)加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔抗體(1∶10000)，100ul/孔，洗板。
(6)加底物，底物中含0.1M檸檬酸緩沖液、0.01％TMB(W/V)、0.002％過(guò)氧化氫尿素(W/V)，室溫反應(yīng)10分鐘，加入2M H2SO4終止反應(yīng)，50ul/孔。測(cè)定OD450，空白孔調(diào)零。
(7)根據(jù)每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度和吸光度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出待檢樣品的轉(zhuǎn)基因含量。參見(jiàn)圖1、圖2。
實(shí)施例2轉(zhuǎn)基因大豆酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒的精密度、準(zhǔn)確度和保存期實(shí)驗(yàn)一、精密度實(shí)驗(yàn)取轉(zhuǎn)基因大豆與非轉(zhuǎn)基因大豆混合成10％、5％、2.5％三個(gè)濃度(w/w)，分別取實(shí)施例1制備的三個(gè)不同批次的試劑盒各三個(gè)，每個(gè)濃度重復(fù)5次，分別計(jì)算變異系數(shù)。結(jié)果如下，批內(nèi)變異系數(shù)為5.12％，批間變異系數(shù)為10.3％。
二、準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)取三個(gè)濃度的EPSPS蛋白標(biāo)準(zhǔn)品(50ug/L、100ug/L、200ug/L)，添加到非轉(zhuǎn)基因大豆樣品中，進(jìn)行添加回收實(shí)驗(yàn)，每個(gè)濃度做5個(gè)重復(fù)，分別計(jì)算準(zhǔn)確度。結(jié)果表明，試劑盒回收率范圍在80.7～110.2％之間。
三、保存期實(shí)驗(yàn)將試劑盒在37℃條件下放置4天，進(jìn)行加速老化實(shí)驗(yàn)，然后對(duì)2％、5％、10％的轉(zhuǎn)基因大豆進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定結(jié)果表明試劑盒各項(xiàng)指標(biāo)符合要求。按通常法則，生物試劑在37℃每放置一天，相當(dāng)于4～8℃保存一個(gè)半月。因此，試劑盒在4～8℃條件下至少可保存6個(gè)月。
權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)耐除草劑大豆中EPSPS基因的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于包括抗EPSPS多克隆抗體、包被有抗EPSPS單克隆抗體的酶標(biāo)板、酶標(biāo)二抗。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于所述試劑盒還包括轉(zhuǎn)EPSPS基因大豆陽(yáng)性質(zhì)控品、非轉(zhuǎn)基因大豆陰性質(zhì)控品、顯色劑、濃縮洗滌液、終止液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于所述抗EPSPS多克隆抗體是由如下方法制備而成(1)制備抗原重組EPSPS蛋白通過(guò)PCR方法從轉(zhuǎn)基因大豆中擴(kuò)增出CP4-EPSPS基因，使其在大腸桿菌中表達(dá)，再經(jīng)Ni離子層析柱純化，最后經(jīng)過(guò)透析復(fù)性得到；(2)將得到的EPSPS蛋白免疫兔、雞、羊、或馬后，從動(dòng)物血液中分離抗血清，再經(jīng)過(guò)硫酸銨沉淀、脫鹽得到純化的抗EPSPS多克隆抗體。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于所述抗EPSPS單克隆抗體是由如下方法制備而成(1)制備抗原重組EPSPS蛋白通過(guò)PCR方法從轉(zhuǎn)基因大豆中擴(kuò)增出CP4-EPSPS基因，使其在大腸桿菌中表達(dá)，再經(jīng)Ni離子層析柱純化，最后經(jīng)過(guò)透析復(fù)性得到；(2)將得到的EPSPS蛋白免疫小鼠，取脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選雜交瘤細(xì)胞，克隆化后獲得穩(wěn)定的單克隆雜交瘤細(xì)胞株，再制備腹水，腹水經(jīng)過(guò)離心、硫酸銨沉淀、脫鹽、過(guò)Protein A親和層析柱得到純化的抗EPSPS單克隆抗體。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于所述濃縮洗滌液為0.01M，pH7.4，含有0.8～1.2％吐溫20和0.5％硫柳汞防腐劑的磷酸鹽緩沖液；所述終止液為1～2mol/L的硫酸或氫氧化鈉溶液；所述百分含量均為質(zhì)量百分含量。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于當(dāng)標(biāo)記酶為辣根過(guò)氧化物酶時(shí)，顯色劑由顯色液A液和顯色液B液組成，顯色液A液為過(guò)氧化氫或過(guò)氧化脲，顯色液B為鄰苯二胺或四甲基聯(lián)苯胺，終止液為1～2mol/L的硫酸；當(dāng)標(biāo)記酶為堿性磷酸酯酶時(shí)，顯色液為4-硝基酚磷酸鹽緩沖液，終止液為1～2mol/L氫氧化鈉溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于所述的包被有單克隆抗體的酶標(biāo)板所用的包被緩沖液為pH9.6、0.05mol/L碳酸鹽緩沖液。
8.權(quán)利要求1所述酶聯(lián)免疫試劑盒的使用方法，包括以下步驟(1)加入待檢測(cè)樣品和系列標(biāo)準(zhǔn)品，使其中的EPSPS蛋白與固相載體上的單抗結(jié)合，洗去未結(jié)合的非特異性雜蛋白；(2)加入純化的多抗，使其與EPSPS蛋白結(jié)合，洗去未結(jié)合的多余抗體及雜蛋白；(3)加入酶標(biāo)二抗，使其與多抗結(jié)合，洗去未結(jié)合的酶標(biāo)抗體及雜蛋白；(4)加入底物，室溫作用，檢測(cè)酶標(biāo)記抗體的催化活性；(5)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出待檢樣品的轉(zhuǎn)基因含量。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種檢測(cè)耐除草劑大豆中EPSPS基因的酶聯(lián)免疫試劑盒及其使用方法。該試劑盒包括抗EPSPS多克隆抗體、包被有抗EPSPS單克隆抗體的酶標(biāo)板、酶標(biāo)二抗、轉(zhuǎn)基因大豆標(biāo)準(zhǔn)品、非轉(zhuǎn)基因大豆標(biāo)準(zhǔn)品、濃縮洗滌液、顯色液、終止液。該試劑盒的制備方法是從轉(zhuǎn)基因大豆中克隆CP4－EPSPS基因并在大腸桿菌中表達(dá)，再經(jīng)過(guò)蛋白純化復(fù)性，以重組EPSPS蛋白為抗原免疫動(dòng)物，獲得特異性的單克隆抗體與多克隆抗體，建立雙抗體夾心酶聯(lián)免疫體系檢測(cè)待檢樣品，以確定其中的EPSPS蛋白含量。
文檔編號(hào)G01N33/543GK101042403SQ20071002771
公開(kāi)日2007年9月26日 申請(qǐng)日期2007年4月25日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月25日
發(fā)明者梅曼彤, 許少鵬, 趙均良, 姚涓, 穆虹, 周峰, 姜大剛 申請(qǐng)人:華南農(nóng)業(yè)大學(xué)