專利名稱：：監(jiān)測(cè)、診斷和鑒定精神障礙的生物標(biāo)記的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及使用基于T-細(xì)胞的測(cè)定和生物標(biāo)記診斷或監(jiān)測(cè)精神障礙(特別是精神分裂性障礙)的方法。本發(fā)明還涉及包括T細(xì)胞剌激測(cè)定的生物標(biāo)記鑒定方法。而且，本發(fā)明還涉及鑒定在精神障礙治療中有用的試劑的方法。
背景技術(shù)：
：精神病是一種重度精神疾病的癥狀。雖然它并不專門地和任何特定的心理或生理狀態(tài)相關(guān)，但是它特別與精神分裂癥、雙相型障礙(躁狂抑郁)和重度臨床抑郁癥相關(guān)。這些病癥、其表征和分類(包括DSMIV診斷標(biāo)準(zhǔn))在PCT/GB2006/003870中記載，其內(nèi)容通過引用的方式納入本文。WO01/63295描述的方法和組合物用于神經(jīng)精神疾病或神經(jīng)病癥(包括雙相型情感障礙、精神分裂癥和血管性癡呆)的篩選、診斷和預(yù)后評(píng)定，以及用于監(jiān)測(cè)對(duì)這些疾病的治療有效性和用于藥物開發(fā)。基于額葉、顳葉和基底神經(jīng)節(jié)的細(xì)微改變的其他技術(shù)例如磁共振成像或正電子發(fā)射斷層成像對(duì)于個(gè)體患者的精神分裂性障礙的診斷、治療或預(yù)后價(jià)值不大，這是因?yàn)閳?bào)道的精神分裂癥個(gè)體和正常對(duì)照受試者之間這些差異的絕對(duì)大小通常很小，在兩組之間有明顯的重疊。這些神經(jīng)成像技術(shù)主要局限于排除可能伴隨于精神分裂性癥狀的其他病癥，例如腦部肺瘤或出血。驗(yàn)證可以檢測(cè)與精神障礙反轉(zhuǎn)或發(fā)展特別相關(guān)的早期變化的生物標(biāo)記，對(duì)于干預(yù)措施的監(jiān)測(cè)和優(yōu)化是必要的。作為預(yù)測(cè)物使用的這些生物標(biāo)記可以幫助鑒別高危個(gè)體和疾病亞群，他們可以作為化學(xué)干預(yù)試驗(yàn)的乾向群體；作為替代端點(diǎn)的生物標(biāo)記潛在地可用于評(píng)估預(yù)防性干預(yù)的效果和成本效益，其評(píng)估速度是現(xiàn)在以明顯精神障礙的發(fā)病作為端點(diǎn)所無法達(dá)到的。W02005/020784^S開了替代細(xì)胞基因表達(dá)標(biāo)記，通過一種最低4曼入的技術(shù)用于確定受試者的預(yù)后，或者確定對(duì)一種疾病、障礙或身體狀態(tài)敏感的受試者。已顯示有許多基因被調(diào)節(jié)，尤其是在精神病中(在實(shí)施例2中)。因此，需要鑒定靈敏和特異的方法和生物標(biāo)記以用于診斷并監(jiān)測(cè)例如精神分裂性障礙或雙相型障礙等精神障礙。此外，顯然需要一些方法、模型、測(cè)試和工具來鑒定和評(píng)估用于治療這些障礙的已有治療劑和新治療劑，并用來鑒定和評(píng)估用于診斷精神疾病的方法。T-細(xì)胞是在胸腺中發(fā)育并且在免疫系統(tǒng)中起重要作用的淋巴細(xì)胞。有兩種T-細(xì)胞亞群有CD4標(biāo)記的細(xì)胞被稱為輔助T-細(xì)胞，CD8+細(xì)胞是細(xì)胞毒性T-細(xì)胞。兩種T-細(xì)胞類型都具有用于抗原識(shí)別的T-細(xì)胞受體(TCR)。靜息T-細(xì)胞的刺激或激活的起始是通過TCR-CD3復(fù)合體與抗原呈遞細(xì)胞表面的抗原——n型MHC分子相互作用。該相互作用在T-細(xì)胞中啟動(dòng)包括基因轉(zhuǎn)錄激活在內(nèi)的級(jí)聯(lián)生物學(xué)事件，這最終導(dǎo)致T-細(xì)胞的生長、增殖和分化。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明至少部分地基于以下的發(fā)現(xiàn)，即在刺激或未刺激的T-細(xì)胞上進(jìn)行的測(cè)定可以提供關(guān)于受試者病癥的有價(jià)值的信息。T-細(xì)胞提供了研究細(xì)胞功能的一個(gè)好的模型，這是因?yàn)榉蛛x它們相對(duì)容易(例如從外周血中分離)，純度高并且可以以最低侵入的方式獲得。本發(fā)明的一個(gè)方面是一種診斷或監(jiān)測(cè)受試者的精神障礙的方法，包括a.提供一個(gè)來自所述受試者的測(cè)試T-細(xì)胞樣品；b.給予所述測(cè)試T-細(xì)胞樣品一種刺激；以及c.評(píng)估對(duì)所述刺激的反應(yīng)。該方法可以用于精神障礙的預(yù)后評(píng)估。它還可以用于監(jiān)測(cè)治療物質(zhì)在患有、疑似患有或者不易患有精神障礙的患者中的效果的方法中。本發(fā)明的第二方面是一種鑒定精神障礙的生物標(biāo)記的方法，包括a.提供來自患有精神障礙的受試者的測(cè)試T-細(xì)胞樣品；b.給予所述測(cè)試T-細(xì)胞樣品一種刺激；c.評(píng)估對(duì)所述刺激的反應(yīng)；d.將所述反應(yīng)與對(duì)照T-細(xì)胞樣品對(duì)刺激的反應(yīng)相比較；以及e.檢測(cè)所述反應(yīng)之間的任何差異，從而鑒定一種生物標(biāo)記。本發(fā)明的第三方面是一種測(cè)試用于治療精神障礙的潛在試劑的方法，所述方法包括a.提供來自患有精神障礙的受試者的測(cè)試T-細(xì)胞樣品；b.將所述測(cè)試T-細(xì)胞樣品與一種候選試劑相接觸；c.給予所述測(cè)試T-細(xì)胞樣品一種刺激；以及d.評(píng)估對(duì)所述刺激的反應(yīng)。本發(fā)明的第四方面是一種診斷或監(jiān)測(cè)受試者的精神障礙的方法，包括a.提供一個(gè)來自所述受試者的測(cè)試T-細(xì)胞樣品；以及b.比較所述測(cè)試樣品與一個(gè)對(duì)照樣品中的基因和/或蛋白表達(dá)。本發(fā)明的另一方面是一種傳感器，例如一種如下文所述的生物傳感器。在一種本發(fā)明的方法中，生物標(biāo)記的檢測(cè)可以使用包含以下組件的傳感器一種或多種酶、結(jié)合受體或轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、抗體、抗體片段、合成受體或適例如體和肽等其他選擇性的結(jié)合配體，以用于直接或間接地檢測(cè)生物標(biāo)記。所述傳感器的識(shí)別元件可以偶聯(lián)至電的、光的、聲的、磁的或熱的換能器，或者偶聯(lián)至與所述換能器連接的微型系統(tǒng)，或者偶聯(lián)至例如量子點(diǎn)或表面等離子顆粒等納米顆粒系統(tǒng)。具體實(shí)施方式為了避免爭議，本文使用的例如"反應(yīng)"、"對(duì)照，，和"樣品"等術(shù)語分別包括不只一個(gè)該反應(yīng)、一個(gè)該對(duì)照或一個(gè)該樣品的可能性。本文使用的術(shù)語"診斷"包括鑒定、證實(shí)和/或表征一種精神障礙，特別是一種精神分裂性障礙、雙相型障礙、相關(guān)的精神障礙或者是易患這些障礙的傾向。易患是指一個(gè)受試者現(xiàn)在沒有出現(xiàn)，所述障礙但在某個(gè)時(shí)間容易患有所述障礙。本發(fā)明的監(jiān)測(cè)方法可以被應(yīng)用于監(jiān)測(cè)一種精神障礙的發(fā)病、發(fā)展、穩(wěn)定、改善和/或減輕。本文使用的術(shù)語"精神障礙"是指精神病是可辨認(rèn)的癥狀的障礙，它包括神經(jīng)精神障礙(精神病性抑郁癥和其他精神病性發(fā)作)和神經(jīng)發(fā)育障礙(特別是泛自閉癥障礙(autisticspectrumdisorder))、神經(jīng)退行性障礙、抑郁、躁狂癥，并且特別是精神分裂性障礙(偏執(zhí)型、緊張型、錯(cuò)亂型、混合型和殘留型精神分裂癥)和雙相型障礙。優(yōu)選地，本發(fā)明涉及精神分裂性障礙。T-細(xì)胞樣品優(yōu)選從取自受試者的外周血中獲得。優(yōu)選地，T-細(xì)胞樣品是新分離的，即樣品在收集之后立即使用。本文中描述了T-細(xì)胞分離方法的一個(gè)實(shí)例(實(shí)施例1)。然而，技術(shù)人員應(yīng)了解也可以使用本領(lǐng)域中從例如外周血等生物樣品中獲得或分離T-細(xì)胞的其他已知方法。本文使用的術(shù)語"刺激"是指能夠誘導(dǎo)一種反應(yīng)的刺激，所述反應(yīng)優(yōu)選是與T-細(xì)胞受體-觸發(fā)相關(guān)的T-細(xì)胞增殖和應(yīng)答。體外T-細(xì)胞刺激可以被用作一種比較患者和對(duì)照細(xì)胞的功能反應(yīng)的方法，首先是用于研究精神分裂癥中的疾病過程的外周證據(jù)，并且還用于研究所述障礙的病理生理學(xué)中是否存在例如細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、基因轉(zhuǎn)錄、蛋白合成和運(yùn)輸?shù)燃?xì)胞過程中的全局性異?；蛉毕?。體內(nèi)T-細(xì)胞激活涉及T-細(xì)胞受體(TCR)通過相互作用與呈遞的MHC相關(guān)的特異性抗原的結(jié)合。所述TCR信號(hào)傳導(dǎo)復(fù)合體由大量的分子組成，包括CD3，它提供所述復(fù)合體的細(xì)胞質(zhì)信號(hào)傳導(dǎo)功能；CD45，它參與抑制性磷酸化酪氨^序的脫磷酸化；以及CD4或CD8，它們被認(rèn)為可以穩(wěn)定所述信號(hào)傳導(dǎo)復(fù)合體。為了獲得最佳的T-細(xì)胞反應(yīng)，優(yōu)選將共刺激用于初始信號(hào)的放大和調(diào)節(jié)。這由例如CD28、CD40、CD80/CD86和OX40L等分子提供。優(yōu)選地，利用單克隆抗體(抗CD3)，通過交聯(lián)細(xì)胞表面CD3來模擬一種TCR信號(hào)以在體外進(jìn)行對(duì)T-細(xì)胞的刺激。這最終導(dǎo)致進(jìn)入細(xì)胞周期，并且由于對(duì)T-細(xì)胞的刺激誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子的激活、基因轉(zhuǎn)錄、蛋白合成和蛋白運(yùn)輸，因此，本發(fā)明的方法是為了鑒定并跟蹤這些生理學(xué)過程中的任何異常和任何結(jié)果(例如，對(duì)刺激的反應(yīng)差異可以體現(xiàn)于mRM、蛋白、脂質(zhì)或其他4義謝物水平的差異或者與這些異常相關(guān)的比例差異)。優(yōu)選地，所述刺激是抗CD3抗體。還可以單獨(dú)使用其他試劑或?qū)⑺鼈兣cCD3結(jié)合使用進(jìn)行T-細(xì)胞的刺激，所述其他試劑例如伊屋諾霉素(ionomycin)和PMA。本文使用的術(shù)語"反應(yīng)"因此可以指靜息T-細(xì)胞對(duì)所述刺激/激活應(yīng)答中誘發(fā)的反應(yīng)。這種反應(yīng)包括增殖、轉(zhuǎn)錄因子激活或失活，以及對(duì)以下的一種或多種的調(diào)節(jié)基因表達(dá)、蛋白合成、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞因子合成、蛋白運(yùn)輸和蛋白轉(zhuǎn)換、代謝物或脂質(zhì)譜。優(yōu)選地，所述反應(yīng)包括增殖、對(duì)基因表達(dá)、蛋白合成和/或蛋白轉(zhuǎn)換的調(diào)節(jié)。因此，鑒定取自患有或易患精神障礙的患者的T-細(xì)胞樣品的反應(yīng)和未患或不易患精神障礙的正常受試者的刺激反應(yīng)之間的差異可以用于診斷或監(jiān)測(cè)精神疾病。本發(fā)明的方法可以包括比較來自受試者的測(cè)試T-細(xì)胞樣品中的反應(yīng)和對(duì)照中的刺激反應(yīng)。合適的對(duì)照包括源自未患或不易患精神障礙的個(gè)體的正常對(duì)照，以及源自患有精神障礙(優(yōu)選精神分裂性障礙)的個(gè)體的障礙對(duì)照。本發(fā)明的方法可以包括檢測(cè)所述測(cè)試樣品和對(duì)照樣品之間的反應(yīng)的差異。因此，本發(fā)明的方法可以包括比較測(cè)試T-細(xì)胞樣品的反應(yīng)和正常對(duì)照T-細(xì)胞樣品的反應(yīng)，其中反應(yīng)的差異表明患有或易患精神障礙例如精神分裂性障礙。反應(yīng)的差異可以被檢測(cè)為對(duì)于刺激的具體反應(yīng)的存在、不存在、增加或減少。另外或此外，本發(fā)明的方法可以包括比較測(cè)試T-細(xì)胞樣品的反應(yīng)與精神障礙對(duì)照T-細(xì)胞樣品的反應(yīng)，以使得所述測(cè)試T-細(xì)胞的反應(yīng)匹配于一種特定精神障礙的反應(yīng)特征的反應(yīng)；這種比較可用于具有相似或重疊臨床癥狀的精神障礙之間的鑒別診斷。如實(shí)施例2中所示，來自精神分裂癥患者的T-細(xì)胞與健康對(duì)照相比，在刺激后發(fā)現(xiàn)有顯著較低的增殖。因此，在這些所述反應(yīng)為增殖反應(yīng)的實(shí)施方案中，來自受試者的T-細(xì)胞樣品的增殖比正常對(duì)照T-細(xì)胞樣品的增殖低，則表明存在一種精神障礙特別是精神分裂癥。如實(shí)施例l中所示，增殖的評(píng)估可以通過將3[H]-脫氧胸腺嘧咬苷摻入子代細(xì)胞DNA來實(shí)現(xiàn)。來自患有或易患精神障礙個(gè)體的T-細(xì)胞和來自正常個(gè)體的T-細(xì)胞的反應(yīng)的差異還可以通過以下方式檢測(cè)評(píng)估對(duì)刺激暴露Jl應(yīng)中——優(yōu)選用于T-細(xì)胞增殖的刺激暴露反應(yīng)中一一的基因表達(dá)的調(diào)節(jié)。反應(yīng)差異的評(píng)估還可以通過考慮患有或易患精神障礙的受試者與未患有或不易患精神障礙的正常個(gè)體相比的差異基因表達(dá)的下游效應(yīng)而實(shí)現(xiàn)，例如代謝譜、脂質(zhì)鐠的差異，或者生物標(biāo)記水平或比率的差異。本文使用的術(shù)語"調(diào)節(jié)的"和"調(diào)節(jié)"的含義是基因表達(dá)的上調(diào)或下調(diào)，或者例如蛋白水平的增加或降低等蛋白質(zhì)組的差異。基因表達(dá)的調(diào)節(jié)可以通過檢測(cè)mRNA或蛋白水平的變化測(cè)定。蛋白水平的增加或降4氐可以通過簡單地確定蛋白是否存在或者通過使用定量的方法評(píng)估。確定基因表達(dá)水平的方法是本領(lǐng)域公知的。根據(jù)本發(fā)明的方法，表達(dá)調(diào)節(jié)的鑒定可以通過評(píng)估m(xù)RNA、衍生自mRM的核酸和從所述mRNA翻譯的蛋白的量或濃度來實(shí)現(xiàn)?；虮磉_(dá)可以通過評(píng)估m(xù)RNA水平進(jìn)行測(cè)定，使用的方法包括反轉(zhuǎn)錄和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)("RT-PCR")例如定量PCR(特別是實(shí)時(shí)定量PCR)，以及Northern印跡。在一種適宜于確定mRNA表達(dá)水平的方法中，從所述細(xì)胞獲得總RM樣品，從一個(gè)或多個(gè)目的基因的mRNA合成cDNA，并且將所述cDNA用于實(shí)時(shí)定量PCR分析，從而確定目的mRNA在所述樣品中的水平。用于實(shí)施這些方法的系統(tǒng)和試劑盒可通過市售的途徑獲得。陣列可用于評(píng)估多個(gè)基因或蛋白的表達(dá)，例如使用可用于蛋白的SELDI分析的弱陽離子交換(CM10)芯片，或者用于基因表達(dá)的CodelinkBioarrays。實(shí)施例3中顯示了用于評(píng)估基因表達(dá)的方法的一個(gè)實(shí)例。適合于確定蛋白表達(dá)水平或者鑒定蛋白生物標(biāo)記的方法的實(shí)例包括免疫學(xué)方法，它使用了能夠特異性結(jié)合目的蛋白的抗體或抗體片段。合適的免疫學(xué)方法包括夾心免疫測(cè)定，例如，使用兩種識(shí)別不同表位的抗體檢測(cè)所述肽的夾心ELISA;放射免疫測(cè)定(RIA)、直接或竟?fàn)幮悦嘎?lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)、酶免疫測(cè)定(EIA)、Western印跡、免疫沉淀和任何基于顆粒的免疫測(cè)定(如使用金、銀或膠乳顆粒；或磁性顆粒；或Q點(diǎn)(Q-dot))。免疫學(xué)方法可以在例如微量滴定板或條狀板上進(jìn)行?？梢杂糜诒景l(fā)明方法中的、例如用于檢測(cè)、鑒定和/或定量測(cè)定生物標(biāo)記(如對(duì)存在的核酸、蛋白、脂質(zhì)或代謝物的水平定量)的其他技術(shù)包括譜分析法，例如NMR語法或高分辨固R譜法(111NMR)、質(zhì)譜例如表面增強(qiáng)激光/解吸電離(SELDI)(-T0F)和/或MALDI(-T0F)、基于l-D凝膠的分析、基于2-D凝膠的分析、基于LC-MS的技術(shù)和iTRAQ。實(shí)施例4中顯示了用于蛋白分析的一個(gè)實(shí)例。iTRA(T技術(shù)涉及對(duì)胰蛋白酶蛋白消化產(chǎn)生的N-端肽進(jìn)行化學(xué)標(biāo)記?；旌献疃嘀?種的標(biāo)記樣品，用納升-LC(nano-LC)分級(jí)分離并通過串聯(lián)質(zhì)譜法分析。然后通過片段化數(shù)據(jù)的數(shù)據(jù)庫搜索完成蛋白鑒定。肽的相對(duì)量化通過所述化學(xué)標(biāo)簽的片段化實(shí)現(xiàn)，這會(huì)產(chǎn)生低分子量的報(bào)告離子。因?yàn)槭窃谝鹊鞍酌赶髽?biāo)記樣品，所以可以分析例如跨膜受體等高分子量蛋白，而且片段化標(biāo)簽的定量可以提供更加可信的蛋白鑒定和定量。根據(jù)本發(fā)明，適宜的患者和對(duì)照的群組可以選自于初發(fā)和/或經(jīng)最低限度治療的個(gè)體，并且將將他們與有更加確定臨床史的慢性疾病患者比較。這使得可以比較疾病發(fā)展和藥物治療的效果。膜結(jié)合蛋白和可溶蛋白可以從刺激的T-細(xì)胞中制備。因此，可以進(jìn)行來自精神病患者和對(duì)照的T-細(xì)胞的蛋白組作謙，提供在刺激后關(guān)于大分子量和小分子量蛋白(如磷蛋白)差異表達(dá)的信息。本發(fā)明的方法可以包括通過評(píng)估所述樣品的刺激反應(yīng)中一種或多種生物標(biāo)記的變化而比較樣品。所述術(shù)語"生物標(biāo)記"的含義是一個(gè)過程、事件或狀態(tài)的明顯的生物學(xué)指示物或生物學(xué)衍生指示物。生物標(biāo)記可以用于診斷(如臨床篩選)、預(yù)后評(píng)估的方法中；用于監(jiān)測(cè)治療的效果、鑒定最可能對(duì)具體療法有應(yīng)答的患者、藥物篩選和開發(fā)中。優(yōu)選地，所述生物標(biāo)記是基因、mRNA、蛋白或肽、脂質(zhì)或者代謝物。所述術(shù)語蛋白和肽在本文中可以互換使用?？梢詫?duì)所述生物標(biāo)記定量。生物標(biāo)記及其用途對(duì)新藥物治療的鑒定以及對(duì)于藥物治療的新靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)是有價(jià)值的。樣品中的生物標(biāo)記的定量可以包括確定所述肽生物標(biāo)記在所述樣品中的濃度。檢測(cè)和/或定量測(cè)定可以在所述樣品上直接進(jìn)行，或者在其提取物或稀釋物上間接進(jìn)行。檢測(cè)和/或定量測(cè)定可以通過任何適于鑒定具體蛋白在生物樣品中的存在和/或在生物樣品中的量的方法來進(jìn)行。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述對(duì)照樣品包括一個(gè)正常對(duì)照樣品。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述對(duì)照樣品包括一個(gè)精神障礙對(duì)照樣品。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法還可以包括將一個(gè)樣品增殖反應(yīng)分類為具有正常鐠、精神障礙鐠或者易患精神障礙譜。在本發(fā)明的方法中，特別是用于診斷和監(jiān)測(cè)的方法中，T-細(xì)胞樣品可以在兩個(gè)或多個(gè)時(shí)機(jī)取自于一個(gè)測(cè)試受試者?？梢员容^在兩個(gè)或多個(gè)時(shí)機(jī)取自一個(gè)測(cè)試受試者的樣品之間的刺激反應(yīng)以鑒定在不同時(shí)機(jī)獲取的樣品的刺激反應(yīng)之間的差異。方法可以包括分析在兩個(gè)或多個(gè)時(shí)機(jī)取自一個(gè)測(cè)試受試者的樣品的刺激反應(yīng)，以對(duì)一種或多種生物標(biāo)記在所述生物樣品中的水平定量，以及比較所述一種或多種生物標(biāo)記在取自兩個(gè)或多個(gè)時(shí)期的樣品中的水平。本發(fā)明的診斷和監(jiān)測(cè)方法在以下方法中是有用的精神障礙的預(yù)后評(píng)估的方法；監(jiān)測(cè)一種給予的治療物質(zhì)在患有、疑似患有或易患精神障礙的受試者中的效果的方法；以及鑒定抗精神病或促精神病(pro-psychotic)的物質(zhì)的方法。這類方法可以包括比較一種或多種生物標(biāo)記在一個(gè)測(cè)試受試者的測(cè)試生物樣品中的水平與在給予所述物質(zhì)前取自所述測(cè)試受試者的一個(gè)或多個(gè)樣品中的水平，以及/或者與在所述物質(zhì)治療的早期階段取自所述測(cè)試受試者的一個(gè)或多個(gè)樣品中的水平。另外，這些方法可以包括檢測(cè)所述一種或多種生物標(biāo)記在于兩個(gè)或多個(gè)時(shí)機(jī)取自受試者的生物樣品中的水平的變化。根據(jù)本發(fā)明的診斷或監(jiān)測(cè)方法可以包括在取自一個(gè)測(cè)試受試者的測(cè)試生物樣品中對(duì)所述一種或多種生物標(biāo)記定量，并且比較所述一種或多種生物標(biāo)記在所述測(cè)試樣品與在一個(gè)或多個(gè)對(duì)照中的水平。所述對(duì)照可以選自正常對(duì)照和/或精神障礙對(duì)照。本發(fā)明的方法中使用的對(duì)照可以選自于來自于正常受試者的正常對(duì)照樣品中的生物標(biāo)記水平，即正常生物標(biāo)記水平；正常生物標(biāo)記范圍，即來自患有精神分裂性障礙、雙相型障礙、相關(guān)精神障礙或者確診的易患這些障礙的受試者的樣品中的水平；精神分裂性障礙標(biāo)記水平、雙相型障礙標(biāo)記水平、相關(guān)精神障礙標(biāo)記水平、精神分裂性障礙標(biāo)記范圍、雙相型障礙標(biāo)記范圍和相關(guān)精神障礙標(biāo)記范圍。反應(yīng)差異的檢測(cè)使得可以鑒定精神障礙的生物標(biāo)記。所述反應(yīng)的評(píng)估可以通過任何適宜的方法或方法組合來進(jìn)行，例如通過考慮mRNA和/或蛋白水平的基因表達(dá)，來檢測(cè)障礙和對(duì)照樣品之間的差異基因表達(dá)，可考慮蛋白水平(如在細(xì)胞裂解物中)、脂質(zhì)譜和/或代謝物譜。所述差異可以體現(xiàn)于是否存在一種生物標(biāo)記，或者生物標(biāo)記水平或一種或多種生物標(biāo)記比例的變化(增加或降低)?；虮磉_(dá)的差異可以通過mRNA或蛋白水平的調(diào)節(jié)來檢測(cè)。當(dāng)所述生物標(biāo)記為基因時(shí)，所述基因在所述障礙樣品中的表達(dá)與其在所述對(duì)照中的表達(dá)相比可能是被調(diào)節(jié)的，因此就可以檢測(cè)所述基因轉(zhuǎn)錄的mRNA的不同水平。例如，所述表達(dá)可以增加或降>(氐，或者可以檢測(cè)所述mRNA的不同剪接變體或者剪接變體的比例。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述生物標(biāo)記是一種蛋白，并且所述蛋白在所述樣品中的水平不同于其在所述對(duì)照樣品中的水平。例如，所述水平可以被調(diào)節(jié)從而增加或降低，或者可以發(fā)現(xiàn)蛋白切割產(chǎn)物的差異；這可以通過定量的方法評(píng)估或者通過所述蛋白是否存在而確定。在一個(gè)實(shí)施方案中檢測(cè)了一種或多種生物標(biāo)記的水平或比例。這可以使用傳感器例如生物傳感器進(jìn)行，所述生物傳感器包含一種或多種酶、結(jié)合蛋白、受體蛋白或轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、抗體、合成受體或其他選擇性結(jié)合分子，以用于直接或間接檢測(cè)所述生物標(biāo)記。所述傳感器為了檢測(cè)可以偶聯(lián)至電的、光的、聲的、磁的或熱的換能器。在該實(shí)施方案中使用的術(shù)語"抗體"包括但不限于多克隆抗體、單克隆抗體、雙特異性抗體、人源化抗體或嵌合抗體、單鏈抗體、Fab片段和F(ab，)2片段、由Fab表達(dá)文庫產(chǎn)生的片段、抗獨(dú)特型(anti-Id)抗體，以及上述任何一種的表位結(jié)合片段。本文所使用的術(shù)語"抗體"還指免疫球蛋白分子(即含有特異性結(jié)合抗原的抗原結(jié)合位點(diǎn)的分子)和免疫球蛋白分子的免疫活性部分。本發(fā)明的免疫球蛋白分子可為免疫球蛋白分子的任何類型(例如IgG、IgE、IgM、IgD和IgA)或任何亞類。使用本發(fā)明的方法鑒定的生物標(biāo)記可以用作精神障礙或易患精神障礙的生物標(biāo)記。因此它們?cè)诒O(jiān)測(cè)或診斷精神疾病的方法中是有用的。本發(fā)明可以用于鑒定用于預(yù)防、治療或改善精神障礙的潛在治療劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明包括比較刺M應(yīng)與對(duì)照樣品的反應(yīng)。具體地，可以比較暴露于候選治療劑的測(cè)試T-細(xì)胞樣品和正常對(duì)照的T-細(xì)胞樣品的反應(yīng)；如果一種或多種反應(yīng)在所述測(cè)試T-細(xì)胞樣品中被調(diào)節(jié)從而恢復(fù)正常的反應(yīng)，那么所述候選試劑就被鑒定為潛在治療劑。才艮據(jù)該方面，如果一種候選治療劑能夠調(diào)節(jié)患有精神障礙受試者T-細(xì)胞的反應(yīng)，特別是使得一種或多種反應(yīng)恢復(fù)為正常個(gè)體T-細(xì)胞的反應(yīng)特征，那么就鑒定出該候選治療劑。優(yōu)選地，所述反應(yīng)是增殖或基因表達(dá)的調(diào)節(jié)，后者即mRNA或蛋白水平的變化。所述反應(yīng)可以使用本文描述的方法評(píng)估，具體是通過評(píng)估如本文描述的所鑒定的反應(yīng)的生物標(biāo)記。增殖的變化可以通過比較存在和不存在所述候選治療劑時(shí)的T-細(xì)胞的增殖來評(píng)估。一個(gè)或多個(gè)基因的表達(dá)調(diào)節(jié)可以通過比較存在和不存在所述候選治療劑時(shí)所述一個(gè)或多個(gè)基因的表達(dá)水平(在mRNA水平或蛋白水平)來評(píng)估。蛋白水平的調(diào)節(jié)可以通過比較存在和不存在所述候選治療劑時(shí)所述一種或多種蛋白的水平來評(píng)估。其他合適的反應(yīng)生物標(biāo)記包括在障礙和正常對(duì)照樣品中發(fā)現(xiàn)不同的水平的脂質(zhì)和代謝物。如實(shí)施例5所示，通過使用CD28的共刺激可以恢復(fù)增殖反應(yīng)。因此，使用CD28的共刺激可以用作一個(gè)恢復(fù)增殖反應(yīng)的對(duì)照。使用CD28的共刺激還是一種用于分析精神障礙的病理生理學(xué)的有用方法。上文的詳細(xì)論述主要是關(guān)于T-細(xì)胞對(duì)刺激的反應(yīng)。在本發(fā)明的第四方面中，刺激不是必需的。相反，用一個(gè)對(duì)照通過例如鑒定基因表達(dá)調(diào)節(jié)和/或是否存在一種或多種蛋白可以診斷或監(jiān)測(cè)精神障礙。用于該目的的示例方法在上文中有描述。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的一種改變的轉(zhuǎn)錄物是與細(xì)胞周期相關(guān)的STAT1,它在精神分裂癥患者中是增加的。STAT1參與細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)并且與轉(zhuǎn)錄因子NFkB相互作用。在患者樣品中發(fā)現(xiàn)RBL2增加和RBL1表達(dá)降低，這些樣品中的增殖反應(yīng)顯著低。這些基因產(chǎn)物的功能受GSK3B催化的磷酸化的控制，GSK3B也被發(fā)現(xiàn)是上調(diào)的。肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白(dystonin)和異連蛋白(dystrobrevin)基因在精神分裂癥患者中的表達(dá)有所改變。dystonin作為細(xì)胞骨架連接蛋白與肌動(dòng)蛋白和微管相互作用并且功能是穩(wěn)定染色體。還發(fā)現(xiàn)CDCL5和NLK在精神分裂癥中也有所改變。雖然它們被歸為信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的類別，但是它們還參與細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)。涉及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的功能通路也是顯著改變的。谷胱甘肽過氧化物酶7、硫氧還蛋白2和鐵氧還蛋白還原酶出現(xiàn)差異表達(dá)，以下蛋白在精神分裂癥中的表達(dá)有所改變細(xì)胞色素c氧化酶Va亞基(在精神分裂癥中上調(diào))、細(xì)胞色素b-5(下調(diào))、特定是ACADVL(上調(diào))和ACAD9(下調(diào))。它們是涉及脂肪酸P-氧化的酰基輔酶A脫氫酶，而脂肪酸是在葡萄糖供給不足時(shí)被用作替代能量源。通常與紅細(xì)胞球形細(xì)胞增多癥相關(guān)的細(xì)胞骨架元件錨蛋白1和錨蛋白2都是下調(diào)的。GADD45A在精神分裂癥中M現(xiàn)是上調(diào)的，它與延伸因子la相互作用并且實(shí)際上破壞細(xì)胞骨架的穩(wěn)定性。在另一方面，本發(fā)明涉及一種適合于實(shí)施本文所述方法的診斷試劑盒或監(jiān)測(cè)試劑盒。根據(jù)本發(fā)明的試劑盒可以包含選自于以下的一項(xiàng)或多項(xiàng)組件該試劑盒的使用說明書，一個(gè)或多個(gè)正常的和/或精神障礙的對(duì)照，一種適宜于和/或適合于檢測(cè)根據(jù)本發(fā)明的生物標(biāo)記的傳感器或生物傳感器，以及一種配體例如核酸、抗體、適體等，所述配體能夠特異性結(jié)合根據(jù)本發(fā)明的生物標(biāo)記或者特異性結(jié)合由所述生物標(biāo)記衍生或由其作用衍生的物質(zhì)。所述配體可以通過如下的方式被提供以例如適合于在本發(fā)明方法中使用的陣列形式固定于例如珠粒和表面等固體載體上。通過以下的實(shí)施例舉例說明本發(fā)明。實(shí)施例1T-細(xì)胞的分離涉及的所有實(shí)驗(yàn)在CD3+T-細(xì)胞(包括CD4+和CD8+細(xì)胞，激活狀態(tài)都是異質(zhì)的)上進(jìn)行。從精神分裂癥患者以及年齡、性別和人種匹配的對(duì)照的外周血中分離T-細(xì)胞。采用菲科中白克(Ficoll—paque)(Amersham)在50ml管中以750xg離心外周血20分鐘以分離外周血單核細(xì)胞(PBMC)。使用無菌巴斯德吸管從血漿/Ficoll界面取出PBMC并轉(zhuǎn)移至一個(gè)含有PBS的清潔的50ml管中。用PBS將這些細(xì)胞洗滌三次，然后用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)。使用MACS人T-細(xì)胞分離試劑盒(MiltenyiBiotech),依照廠商提供的方案從PBMC中純化T-細(xì)胞。然后用RPMI培養(yǎng)基(Sigma)將CD3+T-細(xì)胞洗滌兩次、計(jì)數(shù)并以2.5xl(je細(xì)胞/ml的濃度培養(yǎng)于完全T-細(xì)胞培養(yǎng)基(RPMI、10%胎牛血清、1%青霉素/鏈霉素/谷氨酰胺)中。實(shí)施例2T-細(xì)胞的體外刺激僅使用抗CD3(克隆0KT3)進(jìn)行體外T-細(xì)胞刺激。這是最簡單的體外刺激方法，由于該抗體的作用是集合TCR的所有組分以產(chǎn)生一個(gè)信號(hào)。進(jìn)行了用共刺激進(jìn)一步探究T-細(xì)胞反應(yīng)的后續(xù)實(shí)驗(yàn)，其中使用抗CD3+抗CD28、抗CD3+IL-2、抗CD3+PBMC，并且使用了PMA和伊屋i若霉素。在96-孔圓底組織培養(yǎng)板(Nunc)上用抗CD3體外刺激T-細(xì)胞，該培養(yǎng)板用含0、0.01、0.l和ljiig/ml0KT3的PBS在371C包被1小時(shí)。用PBS洗滌培養(yǎng)板，然后加入含有0.2x106T-細(xì)胞的200y1完全T-細(xì)胞培養(yǎng)基o通過將3[H]-脫氧胸腺嘧啶苷摻入子代細(xì)胞DNA中來測(cè)定針對(duì)刺激的增殖反應(yīng)。簡言之，在C02培養(yǎng)箱中將T-細(xì)胞在37TC下培養(yǎng)48小時(shí)，并且用每孔1uCi的'[H]-脫氧胸腺嘧啶苷施予脈沖24小時(shí)。將細(xì)胞收集到96孔濾板上以獲取標(biāo)記的DNA，并且將熒光閃爍液用于測(cè)定3[H]-脫氧胸腺嘧啶苷的摻入。從精神分裂癥患者獲取T-細(xì)胞。所述患者包括慢性的氯氮平治療的患者，即已經(jīng)接受氯氮平治療數(shù)年的患者；最低限度治療的患者，即接受非氯氮平治療不足2個(gè)月或者未接受治療的患者；以及未治療的、近期確診的精神分裂癥患者。所有患者的增殖反應(yīng)在每種抗CD3濃度下都顯著低于對(duì)照。這不僅提供了可以在外周組織中觀察到精神分裂癥患者和對(duì)照之間的外周差異的證據(jù)，而且還給出一個(gè)用于動(dòng)態(tài)研究細(xì)胞機(jī)能障礙在該障礙中的作用的模型。實(shí)施例3Codelink基因陣列分析從3x106個(gè)新分離的T-細(xì)胞和在1Mg/ml的抗CD3的存在下培養(yǎng)24小時(shí)的細(xì)胞制備患者和對(duì)照樣品。使用QIAampRNA血液小量試劑盒(Qiagen)從這些樣品中提取總RNA。使用Agilent芯片實(shí)驗(yàn)室(lab-on-a-chip)納米芯片檢查RNA質(zhì)量，并且使用Nanodrop系統(tǒng)定量。使用Codelink表達(dá)生物陣歹'J系統(tǒng)(CodelinkExpressionBioarraySystem),依照廠商提供的說明并使用推薦的試劑處理RM，以用于與Codelink基因陣列芯片雜交。簡言之，將1pg總RNA用于第一鏈合成，并且在第二M合成之后使用QIAquickPCR純化試劑盒(Qiagen)純化雙鏈cDNA。使用所述試劑盒中提供的體外轉(zhuǎn)錄試劑進(jìn)行生物素標(biāo)記的cRM的合成，然后用RNeasy小量試劑盒(Qiagen)純化。使用Nanodrop系統(tǒng)測(cè)定cRNA濃度并且使用Agilent芯片實(shí)驗(yàn)室檢查cRNA的質(zhì)量。依照廠商提供的方案將10jug生物素標(biāo)記的cRNA雜交于Codelink陣列芯片。洗滌芯片并使用GenePixPersonal4100A微陣列掃描儀掃描。實(shí)施例4差異蛋白表達(dá)在24孔組織培養(yǎng)板(Nunc)中以2.5x1(^細(xì)胞/ml的密度培養(yǎng)細(xì)胞48小時(shí)。然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至1.5ml的Microfuge管中并在用PBS洗滌一次后保存于-80X:。將5x106細(xì)胞/樣品裂解于250p1包含蛋白酶和磷酸酶抑制劑(羅氏完全抑制劑混合液(Rochecompleteinhibitorcocktail)、原釩酸鹽、焦磷酸鹽、磷酸甘油、NaF)的結(jié)合緩沖液(9M尿素、50mMHEPES、2%CHAPS，pH7)中。將樣品渦旋5秒鐘，然后置于冰上裂解10分鐘。再次渦旋樣品并且在41C下以13,000rpm離心5分鐘以去除細(xì)胞碎片。使用上文描述的pH7結(jié)合緩沖液，依照廠商提供的方案將40ji1等份的每個(gè)樣品加到CiphergenCM10弱陽離子交換芯片上。使芯片風(fēng)干并且在每個(gè)點(diǎn)加入l.2ml芥子酸(SPA)，然后用ProteinChipReader分析。為了鑒定在組之間有差異的峰進(jìn)行了特征提取和分類過程。所述特征提取由4步組成峰鑒定、峰對(duì)齊、開窗口和定量。峰鑒定涉及確定出現(xiàn)衍生物變化的位點(diǎn)。峰對(duì)齊需要鑒定在所有譜中都存在的最大峰。使所述譜整體移位使得這個(gè)峰在所有鐠出現(xiàn)在相同的位點(diǎn)上。這解釋為由校準(zhǔn)移位產(chǎn)生的整體移位。開窗口的進(jìn)行是通過在每個(gè)峰周圍居中定制一個(gè)窗口。重疊誤差通過以下途徑解釋考慮重疊窗口的組，然后鑒定該區(qū)域內(nèi)的最大峰，在該峰周圍居中定制一個(gè)窗口，然后在兩個(gè)方向上放置其他的窗口直至覆蓋原來區(qū)域。最后，對(duì)每個(gè)窗口進(jìn)行梯形積分并且這些值的集合被作為特征集。分類可以通過多種標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)例如線性判別分析、判別樹、boosting算法、支持向量機(jī)或人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行。在本實(shí)例中進(jìn)行偏最小二乘法判別分析(PLS-DA)以鑒定那些在組之間顯著不同的峰。PLS-DA分析使患者和對(duì)照組完全分開。使用該方法鑒定了幾個(gè)在患者和對(duì)照組之間以及在患者和對(duì)照反應(yīng)之間差異表達(dá)的峰。使用兩種方法進(jìn)行蛋白的鑒定。對(duì)于4kDa和小于4kDa的峰，使用SELDIMSMS直接進(jìn)行測(cè)序。大于4Kda的蛋白的鑒定通過皿電泳和LCMSMS測(cè)序進(jìn)行。對(duì)細(xì)胞裂解物進(jìn)行初始的疏水性蛋白或陽離子蛋白的分級(jí)分離以簡化蛋白組成。用10%ACN/0.1%TFA平衡50p1PLRP-S反相^N立(Polymer實(shí)驗(yàn)室)，離心并去除上清，同時(shí)將按上述制備的T-細(xì)胞裂解物調(diào)節(jié)為在400m1體積中含有濃度為10%ACN、0.1%TFA，并將其加至PLRP-S珠粒。在室溫下置于旋轉(zhuǎn)器上使蛋白與珠子結(jié)合30分鐘。然后將樣品以5000rpm離心1分鐘并去除上清，然后在10%ACN、0.1%TFA中洗滌3次。去除上清并且用400jil含2(W、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%和100%ACN的0.1%TFA連續(xù)洗脫蛋白級(jí)分。將每個(gè)級(jí)分收集至1.5ml的Microfuge管中并且使用NP20芯片依照廠商提供的方案取2pl作譜以得到需要的峰。根據(jù)所需峰的表達(dá)選擇級(jí)分，并且收集這些級(jí)分并在30X:下用Speedvac中濃縮2個(gè)小時(shí)直至完全干透。對(duì)組分進(jìn)行非變性凝膠電泳；將所需分子量的條帶切下、經(jīng)胰蛋白酶消化過夜并進(jìn)行LCMSMS測(cè)序。通過在4X:下將T-細(xì)胞裂解液(如前述)加到CM10柱(Ciphergen)上過柱2個(gè)小時(shí)將陽離子蛋白分級(jí)。這樣可以特異性結(jié)合使用CM10芯片(Ciphergen)初始作鐠的蛋白。使用裂解緩沖液洗滌柱兩次以去除未結(jié)合的蛋白，同時(shí)使用pHll的裂解緩沖液洗脫所需蛋白。使用截留分子量為5KDa的離心柱(spincolumn)將緩沖液更換成50mM的TrispH7。在30X:下用Speedvac濃縮洗脫液2個(gè)小時(shí)直至完全干透，并且在非變性SDS-PAGE凝膠上根據(jù)分子量分離所需蛋白。將所需分子量的條帶切下、經(jīng)胰蛋白酶消化過夜并進(jìn)行LCMSMS測(cè)序。實(shí)施例5共刺激還通過加入IOng/mlIL-2、抗CD28和PBMC對(duì)T-細(xì)胞進(jìn)行共刺激，目的是為了確定使用更加復(fù)雜的剌激方法能否恢復(fù)增殖反應(yīng)。將它們直接加入到上文所述的在經(jīng)抗CD3包被的板中培養(yǎng)的T-細(xì)胞中?？紤]到PBMC中有70%CD3+T-細(xì)胞，通過將PBMC(通過上文所述的采用菲科帕克的離心法分離)以0.2xl(f細(xì)胞/ml的濃度孵育在抗CD3包被的孔中，測(cè)試在存在B細(xì)胞和單核細(xì)胞抗原呈遞細(xì)胞上的所有共刺激分子時(shí)T-細(xì)胞的抗-CD3刺激。還測(cè)試了T-細(xì)胞激活的下游通路，該測(cè)試是通過用分別直接激活PKC和鈣流的50ng/ml乙酰肉豆蔻酸佛波酯(phorbo1邁yristateacetate,PMA)和500ng/ml伊屋諾霉素刺激培養(yǎng)物進(jìn)行。這也是在96孔板上以200p1的體積進(jìn)行的。在體外共刺激之后測(cè)定了如上文所述的T-細(xì)胞增殖。用抗CD3和抗CD28共刺激的患者的T-細(xì)胞反應(yīng)與健康對(duì)照的反應(yīng)相比沒有發(fā)現(xiàn)顯著的不同，這說明通過CD28的共刺激可以恢復(fù)患者的反應(yīng)。實(shí)施例6舉品炎菜外周血取自氯氮平治療的、滿足精神分裂癥診斷的DSM-IV標(biāo)準(zhǔn)的慢性疾病患者和確診為精神分裂癥的、以最低限度治療的患者(經(jīng)過少于4周的治療或者沒有接受藥物治療)。血液還取自初次精神病發(fā)作的未用藥的患者，其表現(xiàn)出符合精神分裂癥最終診斷的臨床癥狀。同步處理取自與每個(gè)患者的年齡、性別和人種匹配的對(duì)照的血液。人口統(tǒng)計(jì)學(xué)詳細(xì)信息示于表l中。<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>從精神分裂癥患者以及年齡、性別和人種匹配的對(duì)照的外周血中分離CD3+T-細(xì)胞。簡言之，使用含有EDTA的S-monovette血液收集系統(tǒng)(Sarstedt)取夕卜周血。采用菲科帕克(AmershamBiosciences,Amersham，UK)通過離心分離單核細(xì)胞(PBMC)，然后使用MACS人全T細(xì)胞(panT-cell)分離試劑盒結(jié)合LS分離柱(MiltenyiBiotech,UK)通過負(fù)選擇從中純化CD3+全T-細(xì)胞。通過流式細(xì)胞術(shù)(FACSCalibur，BectonDickinson)分析CD3-s的表達(dá)時(shí)T-細(xì)胞的純度通常在99%以上。需要指出，在371C下在含10%的胎牛血清和1%的青霉素、鏈霉素和谷氨酰胺(Sigma，UK)的RPMI培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞。通過將3H-脫氧胸腺嘧啶苷摻入子代細(xì)胞DNA中測(cè)定對(duì)刺激的增殖反應(yīng)。在包被有0、0.01、0.1和1"g/邁1抗CD3(克隆OKT3)的96孔板中以2x1()S細(xì)胞/ml的接種密度培養(yǎng)T-細(xì)胞48小時(shí)，以刺激其進(jìn)入細(xì)胞周期。用每孔0.037MBq(ljiCi)的311-脫氧胸腺嘧啶苷(AmershamBiosciences,UK)對(duì)細(xì)胞施予脈沖繼續(xù)24小時(shí)使之摻入DNA中，將細(xì)胞收集到96孔濾板(PerkinElmer)上以獲取標(biāo)記的DNA。使用閃爍計(jì)數(shù)器(TopCount,Packard)測(cè)定標(biāo)記的DNA，從而測(cè)定增殖。使用非參數(shù)曼-惠特尼U檢驗(yàn)確定統(tǒng)計(jì)顯著性，P-值小于0.05被認(rèn)為具有顯著性。C"在悉,希順7"-雄J:絲j^俯在存在或不存在ljug/ml的板結(jié)合的抗CD3時(shí)培養(yǎng)患者和對(duì)照T-細(xì)胞72小時(shí)。對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)并且用FACS緩沖液洗滌5x105細(xì)胞/樣品3次(PBS，2%的胎牛血清，Sigma,UK),并重新懸浮于100p1的含有綴合有Cy5的抗CD3的FACS緩沖液中。在41C孵育細(xì)胞20分鐘后再用FACS緩沖液洗滌。使用FACSCaliberandCellQuest軟件(BDBioscinces，UK)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。使用WinMDI(PurdueUniversity,Indiana)和Flowio(Treestar)分析數(shù)據(jù)。使用曼-惠特尼U檢驗(yàn)確定統(tǒng)計(jì)顯著性。7"-勿奴這使用CodeLinl^人全基因組生物陣列(GEHealthcare,UK)研究了來自6個(gè)最低限度治療的精神分裂癥患者和6個(gè)年齡、性別和人種相匹配的對(duì)照的T-細(xì)胞之間的差異基因表達(dá)。使用QIAampRNA血液小量試劑盒(Qiagen，UK)從新分離的T-細(xì)胞中提取總RNA并且用高分辨率電泳系統(tǒng)(AgilentTechnologies,PaloAlto,CA,USA)評(píng)估其質(zhì)量。依照廠商提供的方案從每個(gè)樣品生成生物素標(biāo)記的cRNA。使cRNA雜交至CodeLink全基因組微陣列芯片上，洗滌并且使用Cy5-鏈霉親和素(Ameraham，UK)檢測(cè)已雜交的cRNA種類。^使用GenePixPersonal4100A微陣列掃描儀(AxonInstruments)掃描芯片并且用CodeLink表達(dá)分析軟件分析芯片。凝萍/y炎凝W^^^^^^標(biāo)涼^首先過濾探針組以僅包括那些信號(hào)強(qiáng)于背景噪聲水平的探針組，使用為"好(good)"。這將分析中包括的探針數(shù)量從54000減少到12416。這些探針的點(diǎn)平均信號(hào)強(qiáng)度被讀入R統(tǒng)計(jì)程序(http:〃www.r-project.org/)中進(jìn)行進(jìn)一步的分析，如果適合則使用Bioconductor(l)軟件包。使用"分位數(shù)(quantile)"方法(2)將數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化并且進(jìn)行質(zhì)量控制(QC)流程以鑒定異常值的芯片。它們包括所有芯片標(biāo)準(zhǔn)化表達(dá)值的兩兩相關(guān)性的分析、所有芯片標(biāo)準(zhǔn)化表達(dá)值的盒形圖和每個(gè)芯片與一個(gè)偽中值芯片的比較。一個(gè)異常值被鑒定并在以后的分析中被去除。然后重新將剩余的樣品標(biāo)準(zhǔn)化。齊^庠^r-勿^^^^^f《迷差^^趁浙使用Limma軟件包(對(duì)微陣列數(shù)據(jù)用線性模型)在患者和對(duì)照之間進(jìn)行成對(duì)t-檢驗(yàn)以鑒定差異表達(dá)(2，3)。用"q值(qvalue)"軟件包(4)對(duì)多次測(cè)試進(jìn)行校正，q小于0.05的探針被認(rèn)為是差異表達(dá)的。使用Onto-Express進(jìn)行通路分析以表征與對(duì)照相比精神分裂癥患者的新分離T-細(xì)胞中顯著改變的基因。首先使用Onto-Translate(5)將顯著的探針組對(duì)映到相應(yīng)的EntezID,并且將該輸出提交到Onto-Express。以Codelink人全基因組作為參照陣列使用缺省設(shè)置。選擇校正的p小于0.05并且含有多于2個(gè)基因的生物過程類別作為所述疾病狀態(tài)中受影響的最重要的通路。襲逸琳#窗使用一種內(nèi)部的算法進(jìn)行染色體作圖和分析，該算法最初是為在Affymetrix數(shù)據(jù)上4吏用而該:計(jì)的。因此首先4吏用0nto-Translate(5)將Codelink探針I(yè)D對(duì)映到Affymetrix探針I(yè)D。該分析的主要步驟是(i)為每個(gè)基因選擇一個(gè)代表性的探針組，將探針組對(duì)映到其對(duì)齊區(qū)域并且如果該區(qū)域與該耙基因的位置不符就去掉該探針組；(ii)使用滑動(dòng)窗口在基因組上評(píng)估差異表達(dá)的基因的分布；(iii)根據(jù)二項(xiàng)式分布為每個(gè)窗口賦一個(gè)分值，從而使高分值對(duì)應(yīng)于包含過多差異表達(dá)基因的區(qū)域；(iv)鑒定具有高比例差異表達(dá)基因的染色體區(qū)域，這些區(qū)域可能具有生物學(xué)顯著性。C"微^絲X^4橫粉襲癥'悉,9^,翻采用311-脫氧胸腺嘧啶苷摻入法測(cè)定來自39個(gè)患者和32個(gè)對(duì)照的、用0、0.01、0.1和1jug/ml抗CD3處理的外周血T-細(xì)胞的增殖。使用非參數(shù)曼-惠特尼U檢驗(yàn)分析時(shí)，發(fā)現(xiàn)精神分裂癥患者對(duì)于所有濃度抗CD3的刺激都具有顯著更低的反應(yīng)(0.01pg/mlCD3抗體p=0.0007、0.1mg/mlCD3抗體p=0.001、lpg/ml抗CD3p=0.001)。這些樣品取自于抗精神藥物治療的慢性患者、最低限度治療的患者、未接受藥物治療的個(gè)體和初次精神病發(fā)作的未用藥的患者的組合。為了排除增殖反應(yīng)的降低是藥物效應(yīng)的可能性，分別測(cè)試了未用藥的和最低限度治療的個(gè)體中的變化。以相同的方法對(duì)11個(gè)未治療/最低限度治療的患者和12個(gè)匹配的對(duì)照進(jìn)行剌激，并測(cè)定311-脫氧胸腺嘧啶苷的摻入，以下兩個(gè)濃度的抗CD3的刺激也顯示了較低的增殖反應(yīng)O.ljug/ml(p=0-034)和1jLig/ml(p=0.034)。橫#為、*癥7"-敘磁尹袞/4e^^C^^不義袞錄CW^t這^潛采使用綴合有Cy5的抗CD3s抗體在刺激之前和之后測(cè)定來自患者和對(duì)照的T-細(xì)胞中的CD3表達(dá)。未刺激的T-細(xì)胞和用抗CD3處理的T-細(xì)胞上的CD3表達(dá)在患者和對(duì)照之間都沒有顯著差異，這說明患者較低的增殖反應(yīng)不是較低CD3表達(dá)的結(jié)果。^《###襲癥,悉者々巡應(yīng)對(duì)厲W齊^庠抗CD3刺激的T-細(xì)胞增殖反應(yīng)可以受多種因素的影響。T-細(xì)胞激活中涉及的過程包括細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、基因轉(zhuǎn)錄、蛋白合成和運(yùn)輸、細(xì)胞周期進(jìn)入和細(xì)胞因子分泌。它們中任一種的功能障礙都可能導(dǎo)致觀察到的患者較低的增殖反應(yīng)。最初進(jìn)行了初步研究以考察上游信號(hào)傳遞，即用抗CD3刺激T-細(xì)胞后的5分鐘。該研究是通過使用針對(duì)總磷酸酪氨酸而產(chǎn)生的抗體對(duì)T-細(xì)胞裂解液進(jìn)行Western印跡分析。酪氨酸磷酸化模式在患者和對(duì)照之間沒有出現(xiàn)明顯差異，說明產(chǎn)生低增殖反應(yīng)的缺陷存在于T-細(xì)胞刺激之后的下游事件。在T-細(xì)胞刺激后也研究了細(xì)胞因子一一具體而言，是驅(qū)動(dòng)T-細(xì)胞增殖的IL-2—一的產(chǎn)生，它在患者和對(duì)照之間沒有顯示出顯著的差異(文稿準(zhǔn)備中)。將CodeLinl^人全基因組微陣列用于對(duì)來自患者和對(duì)照的外周血T-細(xì)胞中的基因表達(dá)作譜，目的是鑒定可能導(dǎo)致患者中較低增殖反應(yīng)的改變的基因表達(dá)。在雜交和掃描后過濾數(shù)據(jù)集以使其僅包括那些在所有為陣列芯片上都被標(biāo)記為"好"或都存在的基因。然后將成對(duì)t-檢驗(yàn)用于鑒定顯著性差異表達(dá)的基因，在多重檢驗(yàn)校正后得到399個(gè)q小于0.05的顯著的探針。在精神分裂癥中320個(gè)(80%)探針降低，79個(gè)增加。U^歡^W掙求參一《處^^將0ntoExpress用于對(duì)被顯著改變的基因指定功能類，并且用于鑒定在顯著的基因的列表中過表達(dá)的通路。該項(xiàng)分析發(fā)現(xiàn)5個(gè)與細(xì)胞周期相關(guān)的顯著的類，包括細(xì)胞周期(p-O.0005)、細(xì)胞周期阻滯(p-O.0007)、細(xì)胞周期負(fù)調(diào)控(P-O.001)、有絲分裂(p-0.005)和細(xì)胞周期調(diào)控(p-0.039)(表2)。與細(xì)胞周期相關(guān)的類在新分離的未刺激T-細(xì)胞中是顯著改變的。許多涉及細(xì)胞周期進(jìn)程控制的轉(zhuǎn)錄物M現(xiàn)是失調(diào)的；它們包括STAT1、RBLl(pl07)、RBL2(pl30)、Cul2和GADD45A,其在^研究中^JL現(xiàn)是上調(diào)的，它是細(xì)胞周期檢查點(diǎn)基因，在UV損傷(6)后負(fù)責(zé)G2/M進(jìn)程的停滯。通過功能作鐠鑒定了涉及胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)的4個(gè)類，它們可能通過影響上游通路千擾抗CD3的增殖反應(yīng)。胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)是細(xì)胞的最基本的功能，對(duì)包括能量利用、生長因子響應(yīng)和神經(jīng)遞質(zhì)信號(hào)傳導(dǎo)在內(nèi)的大部分細(xì)胞過程是至關(guān)重要的。與細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)相關(guān)的4個(gè)通路是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)(p-O.0009)、細(xì)胞-細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)(p=0.012)、蛋白氨基酸磷酸化(p-O.015)、胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)級(jí)聯(lián)(p-O.050)。見表3。其他顯著改變的信號(hào)傳導(dǎo)轉(zhuǎn)錄物為CDC2L5和NLK(分別下調(diào)1.42倍和l.54倍)。它們也都與細(xì)胞周期相關(guān)。MAPM1的轉(zhuǎn)錄物在精神分裂癥患者中下調(diào)1.37倍。在T-細(xì)胞刺激中，通過T-細(xì)胞受體(TCR)的激活最終導(dǎo)致基因轉(zhuǎn)錄和增殖，涉及MAPK等許多信號(hào)傳導(dǎo)通路的交互聯(lián)絡(luò)并激活I(lǐng)L-2基因轉(zhuǎn)錄和蛋白激酶C家族(PKC)的成員。新PKC家族的兩個(gè)成員PKC6和PKCs的激活需要DAG而非鈣，它們?cè)诰穹至寻Y中分別上調(diào)1.24倍和下調(diào)1.47倍。OntoExpress顯示被顯著改變的其他類包括對(duì)氧化應(yīng)激的反應(yīng)(p=0.0003)、電子傳遞(p-O.OOl)和代謝(p-O.013)。見圖4。這些功能類的成員顯示了在精神分裂癥患者T-細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)的傾向。總的來說，80%的轉(zhuǎn)錄物被下調(diào)，這影射出來自前額皮質(zhì)死后腦研究的蛋白表達(dá)中的變化，顯示了與線粒體和氧化應(yīng)激(9)相關(guān)的蛋白主要是下調(diào)的?？寡趸瘎┕入赘孰倪^氧化物酶7、硫氧還蛋白2和鐵氧還蛋白還原酶的表達(dá)增加。硫氧還蛋白還原酶2被觀察到下調(diào)。蛋氨酸亞砜還原酶的下調(diào)也被鑒定。它是一種蛋白修復(fù)酶，負(fù)責(zé)還原蛋白中氧化的蛋氨酸側(cè)鏈，這可能損害正常功能。抗氧化劑和自由基捕獲劑表達(dá)的改變可以作為氧化應(yīng)激的指示。為了進(jìn)一步了解精神分裂癥患者和對(duì)照之間基因表達(dá)的差異，生成了一個(gè)熱圖，顯示出了差異表達(dá)基因的染色體位置。在患者和對(duì)照的新分離的T-細(xì)胞中顯著變化的基因簇被鑒定在染色體區(qū)域lp36、lq42、4ql2、6p22、9q22和10q26,lp36、lq42和6p22是精神分裂癥(OMIM)的強(qiáng)敏感位點(diǎn)。在本實(shí)施例中，在15個(gè)精神分裂癥患者和15個(gè)匹配的健康對(duì)照上進(jìn)行了T-細(xì)胞的SELDI蛋白質(zhì)組作讒。從未刺激的T-細(xì)胞制備裂解液并且將抗CD3剌激的T-細(xì)胞培養(yǎng)48小時(shí)，以比較各自的反應(yīng)。使用具有弱陽離子交換表面的CM10芯片對(duì)裂解液作鐠。使用很嚴(yán)格的結(jié)合條件(9M尿素、50mMHEPES、2%CHAPS,pH7)。這確保了在pH7下僅結(jié)合強(qiáng)陽離子的蛋白(在較低pH下嚴(yán)格度降低)。這僅能夠研究一小部分的蛋白質(zhì)組但是會(huì)增加蛋白鑒定的可能性。PCA分析顯示了能夠?qū)?duì)照組和患者組區(qū)分開的差異表達(dá)的峰。它們包括(括號(hào)內(nèi)顯示可能的產(chǎn)物)3242Da(-組蛋白1.4)、3450Da(-oc防衛(wèi)素l)、3374Da(-oc防衛(wèi)素l)、10918Da、13791Da和6700Da。按如下進(jìn)行峰鑒定*<4KDa，直接進(jìn)行芯片測(cè)序SELDITOFTOF(CiphergenCA)*>4KDa,用LCMSMS測(cè)序?yàn)榱诉M(jìn)行LCMSMS鑒定，大的蛋白必須進(jìn)行蛋白水解處理。因?yàn)檫@會(huì)生成每種蛋白的肽混合物，所以為了將肽關(guān)聯(lián)回原來的蛋白，需要;f艮簡單的蛋白混合物。已知防衛(wèi)素含有3個(gè)二疏鍵。使用10mMDTT可以觀察到幾乎完全還原以及一個(gè)6KDa的移位證實(shí)了這一點(diǎn)。實(shí)施例7表2細(xì)胞周期G0JD/基因縮寫功能名稱/基'因名細(xì)滟周期C酬染色M聚相關(guān)SMC關(guān)聯(lián)蛋白1鵬視兩摸母細(xì)胞裙樣2(pl3fl)清選蛋白2(cullin2)隨應(yīng)桂三聯(lián)組氨酸基因RAD21同源妝(裂殖酵母(S.proaibe))PFP2.RET措蛋白2HDAC4,組蛋白脫乙跌嗥4,'G0加D7咖細(xì)胞周期阻滯卿D45A生長押制和卵A損傷涂導(dǎo)基因，a:,,清選蛋白2DST肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白NO[CH'Notch蛋白同源物2(絲(Drosophila))GO:加45786細(xì)應(yīng)周期負(fù)調(diào)控BBL2視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤樣2(p130)RBL1:枧網(wǎng)膜母細(xì)胞痏樣l(plD7)鹿性三聯(lián)組氨酸基因RBT指蛋白2GO加(加67有絲分裂.CNAR1染色體凝聚相關(guān)SMC關(guān)聯(lián)蛋白1RAD21同源物(裂殖酵母),.基質(zhì)抗原lGO則00074細(xì)胞周期調(diào)控，、.信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子與轉(zhuǎn)錄激活因子l,91kDa蝻磷蛋白9胎盤生長園子，血管內(nèi)皮生長因子相關(guān)蛋白4.艦'04,'0,043Z5職0:049S47幼O:M,10.0405340O鵬卿.fi細(xì)卿.鵬,0細(xì)1卿6汰P47737:'.O卿鄉(xiāng)0.0啦S6724W)3K幼133,o鄉(xiāng)鵬0.04843'郷-表3胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)GOiP/基因縮寫功能名稱/基因名GO:加07165倌號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)OR7B35R嗅覺受體，家族7，亞家族E,成員35錄因胡g腦和生殖器官4it(TNF8SPU調(diào)制因子)■FEZ2成東和延伸蛋白C2(推骨蛋白(zygin)II)MGST2微粒體谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移錄2'SAMHDTsam結(jié)構(gòu)域和肪結(jié)構(gòu)域jDTNA,異連蛋白，aNPA^..神經(jīng)元PAS結(jié)構(gòu)域蛋白2MW3PP幼.MAS相關(guān)的GPR,成員X3鄰AQ鳥嗜呤核香酸結(jié)M白(G蛋白)'q多狀,幽細(xì)胞粘附W>GR胎盤生長因子，血管內(nèi)皮生長園子相關(guān)蛋白ANK，錨蛋白l,紅細(xì)胞〃/凝蛋白l,紅細(xì)胞(JGI:5趁化因子((h;基序)配體5itpr1肌醇-1，4,5-三褲酸受體，I型ANK2:銀蛋白2,神經(jīng)元GM&,烏嘌呤核華酸結(jié)合蛋白(G蛋白)，3多肽1p胡D4.半胱天冬酶募集域家族，成員4M/W^lfl絲裂原活化蛋白激醉激酵1GO:加a267細(xì)胞-細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)M(SST2微粒體谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移琺2-DU3AP1'Discs,大(果蠅)同源物關(guān)聯(lián)蛋白lDHH沙漠猬(deserthedgehog)同源物(果錄)胎盤生長因子，血管內(nèi)皮生長園子相關(guān)蛋白ccls趨化因子(C-C基序)配體5GO:加06站8蛋白M酸褲酸化p剛cq蛋白激酶c,eGSK3B.糖原合酵激膝3efTK2PTK2蛋白眵氨酸激酶2叫k咖0#激酵PPKGS蛋白激歐'e''(DC2L5.'細(xì)胞分裂周期2樣5(mS旨錄相關(guān)細(xì)胞分裂調(diào)控因子)'M^P2K1絲IU活化蛋白激酵激醉1GO:0007242胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo);^平丁AT1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子與轉(zhuǎn)錄活化因子l,91kDaPFJKCQ蛋白激斷，ePflKCE蛋白激斷，sUSH1C烏謝爾綜合癥1C(常染色體隱性，重度)校正的P-SL/Q值0,02—272425-0,P38抑敏,0.03933329.0.022^04*0,02^91:.0,0227242aO30S23T7a0116411溢0,949^7676.銀027238250.018267307.a62232細(xì)、.0.627柳.1S0'0312被9'0.卿049S0.04鵬鵬,0卿08招.0.047紐73j變她數(shù)鄉(xiāng)幼忽努站鄰，々效""說.激激g,K-將逸g，wJ5膝，4將幼斜絲站，4%，％SSw"s,表4氧化應(yīng)激GOIO/基因縮寫功能名稱/基因名變化倍數(shù)校正的P-tt/QltGO:加0柳9對(duì)氣化應(yīng)激的響應(yīng)273E-04<3PX7.谷胱甘舦過氧化物酶71.310.03486187MSRA蛋氨酸亞^a^蘇A1.310,02934341CCL5趁化因子(C"C基序)配體5.1加0X357鵬C10ori120染色體10開放閱讀框120-1.300細(xì)03鵬GO:0加6118電子傳遞TXN21忽0,02465963FDXR鐵氣還蛋白還原酵1<260.0319溢4C0X5A細(xì)胞色素C氣M亞基Va1.230.03933328ACADVLibiJi醉A脫氫醉，極長鏈1.200.04鵬鄰ACAD9絲輔睞A脫氬睞家族，成員9-1.410.01947636CY助細(xì)胞色素b-5"220.03586909TXNRD2破氧還蛋白a蘇2-1.390.037990^ER01LBBR01樣3(酸酒酵母)-1.350.04342341GO:加081溢代謝o細(xì)加oaiODPR接式二氛嚷咬還原酶1.250.03339055HSDL2羥基類固醇脫氣酵樣2■!250.03636975CBR1破敞還原蘇l1>280.047737CDYL染色質(zhì)域(chroioodoraaiti)蛋白，Y樣"!■240.04979975ATP8A1ATP酵，氨鱗脂轉(zhuǎn)運(yùn)體(APLT)，l類，8A型，成員l!370.02232591ANK2錨蛋白2，神經(jīng)元3.030.043258S2參考文獻(xiàn)1Gentlemanetal'GenomeBiol2004;5(10):R80.2.Smythetal，Methods2003;31(4):265-73.3.Smythetal,StatApplGenetMolBiol2004;3(1):Article3.4.Storeyetal，ProcNatlAcadSciUSA2003;100(16):9440-5.5.Draghicietal,NucleicAcidsRes2003;31(13〉:3775-81.6.Guptaetal,Oncogene2005;24(48):7170-9.7.Marquesetal，BiochemBiophysResCommun2000;279(3):832-7.8.Brottetal,ProcNatlAcadSciUSA1998;95(3):963-8.9.Prabakaranetal，MolPsychiatry2004;9(7):684-97，643.10.Marchbanksetal，SchizophrRes2003;65(1):33-8.11.Zhangetal，JPsychiatrRes2002;36(5):331-6.12.Mulleretal，EurArchPsychiatryClinNeurosci1999;249SuppI4:62-8.13.Reifetal'MolPsychiatry2006;11(5):514-22.14.Regisetal,TrendsImmunol2006:27(2):96-101.15.Xietal，JNatlCancerInst2006;98(3):181-9.16.Litovchicketal,MolCellBiol2004;24(20):8970-80.17.Smithetal，CellGrowthDiffer1998;9(4):297-303.18.Garciaetal，Science2000;288(5474):2226-30.19.Dudleyetal,Science2003;301(5631):379-83.20.Rutteretal,Science2001;293(5529):510-4.21.Grimaetal，SchizophrRes2003;62(3):213-24.22.Koerkampetal,MolBiolCell2002;13(8):2783-94.23.Carlstenetal,JCompNeurol2001;432(2):155-68.24.Weickertetal，ArchGenPsychiatry2004;61(6):544-55.25.Talbotetal，JClinInvest2004;113(9):1353-63.26.Benitez-Kingetal，CurrDrugTargetsCNSNeurolDisord2004;3(6):515-33.27.Gareyetal，JNeurolNeurosurgPsychiatry1998;65(4):446-53.28.Glantzetal,ArchGenPsychiatry2000;57(1):65-73.29.vanWoerkom,MedHypotheses1990;31(1):7-15.30.Leviteetal，EurJImmunol2001;31(12):3504-12.權(quán)利要求1.一種診斷或監(jiān)測(cè)一個(gè)受試者的精神障礙的方法，包括a.提供一個(gè)來自所述受試者的測(cè)試T-細(xì)胞樣品；b.給予所述測(cè)試T-細(xì)胞樣品一種刺激；以及c.評(píng)估對(duì)所述刺激的反應(yīng)。2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，還包括比較所述反應(yīng)與一個(gè)對(duì)照樣品中的刺激M。3.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中所述對(duì)照樣品包,神障礙對(duì)照T-細(xì)胞樣品。4.根據(jù)權(quán)利要求2或3的方法，其中所述對(duì)照樣品包括正常T-細(xì)胞對(duì)照樣品o5.根據(jù)權(quán)利要求4的方法，包括檢測(cè)所述測(cè)試T-細(xì),品和所itJt常對(duì)照T-細(xì)胞樣品之間的反應(yīng)的差異。6.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中所述評(píng)估包括分析T-細(xì)胞增殖。7.根據(jù)權(quán)利要求4-6的方法，其中所述測(cè)試T-細(xì)胞樣品與一個(gè)正常對(duì)照T-細(xì)胞樣品相比具有較低的增殖時(shí)，指示存在或易患一種精神障礙。8.^4t權(quán)利要求2-7任一項(xiàng)的方法，還包括將一個(gè)測(cè)試樣品反應(yīng)分類成具有正常鐠、精神障礙譜或者易患精神障礙諳。9.根據(jù)前a利要求任一項(xiàng)的方法，其中所述評(píng)估包括分析基因表達(dá)。10.根據(jù)前i^K利要求任一項(xiàng)的方法，其中所述評(píng)估包括分析mRNA和/或蛋白和/或酶活性。11.祁4t權(quán)利要求10的方法，其中通過RT-PCR或QRT-PCR分析mRNA。12.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中所述評(píng)估包括分析脂質(zhì)和/或代謝物鐠。13.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中所述評(píng)估包括通過一種選自于以下的方法的分析iTRAQ、質(zhì)譜、SELDI(-TOF)和/或MALDI(-TOF)、基于l-D凝膠的分析、基于2-D凝膠的分析、基于LC-MS的技術(shù)、無標(biāo)記定量LC-MS/MS、一種免疫學(xué)技^NMR。14.根據(jù)權(quán)利要求6-13任一項(xiàng)的方法，其中所述分析A^量的。15.根據(jù)前狄利要求任一項(xiàng)的方法，其中所述刺^tA對(duì)T-細(xì)胞增殖的刺激。16.根據(jù)前g利要求任一項(xiàng)的方法，其中所述刺^bl—種抗CD3抗體。17.—種精神障礙的預(yù)后評(píng)估或診斷的方法，包括一種根據(jù)前ii^利要求任一項(xiàng)的方法。18.—種監(jiān)測(cè)一種治療物質(zhì)在患有、疑似患有或者易患精神障礙的受試者中的效果的方法，包括一種才Mt前i^利要求任一項(xiàng)的方法。19.一種鑒定精神障礙的生物標(biāo)記的方法，包括a.提供來自一個(gè)患有精神障礙的受試者的一個(gè)測(cè)試T-細(xì)胞樣品；b.給予所述測(cè)試T-細(xì)胞樣品一種刺激；c.評(píng)估對(duì)所述刺激的反應(yīng)；d.將所述反應(yīng)與一個(gè)對(duì)照T-細(xì)胞樣品對(duì)刺激的反應(yīng)相比較；以及e.檢測(cè)所iiA應(yīng)之間任何的差異從而鑒定一種生物標(biāo)記。20.根據(jù)權(quán)利要求19的方法，其中所述刺^jl一種對(duì)T-細(xì)胞增殖的刺激。21.根據(jù)權(quán)利要求19或權(quán)利要求20的方法，其中所i^'J^bl抗CD3抗體。22.根據(jù)權(quán)利要求19-21任一項(xiàng)的方法，其中所述測(cè)試T-細(xì)胞樣品來自于患有一種第4神障礙的受試者，所i^照T-細(xì)M品來自于患有一種第二精神障礙的受試者。23.根據(jù)權(quán)利要求19-22任一項(xiàng)的方法，其中所述對(duì)照T-細(xì)胞樣品來自于一個(gè)正常受試者。24.根據(jù)權(quán)利要求19-23任一項(xiàng)的方法，其中所述評(píng)估包括分析基因表達(dá)。25.根據(jù)權(quán)利要求24的方法，其中基因表達(dá)差異的檢測(cè)是通過鑒定所述測(cè)試樣品與所述對(duì)照樣品之間的差異基因表達(dá)來進(jìn)行。26.根據(jù)權(quán)利要求24或權(quán)利要求25的方法，其中所述差異是一個(gè)基因在所述測(cè)試樣品中的表達(dá)比所述基因在所述對(duì)照樣品中的表達(dá)低。27.根據(jù)權(quán)利要求24-26任一項(xiàng)的方法，其中所述差異是一個(gè)基因在所述測(cè)試樣品中的表達(dá)比所述基因在所述對(duì)照樣品中的表達(dá)高。28.根據(jù)權(quán)利要求24-27任一項(xiàng)的方法，其中所述差異被檢測(cè)為mRNA和/或蛋白和/或酶活性水平的調(diào)節(jié)。29.根據(jù)權(quán)利要求19-28任一項(xiàng)的方法，其中所述評(píng)估包括基因表^蛋白水平的定量分析。30.根據(jù)權(quán)利要求24-29任一項(xiàng)的方法，其中通過RT-PCR或QRT-PCR分析所4因表達(dá)。31.根據(jù)權(quán)利要求24-30任一項(xiàng)的方法，其中使用一個(gè)陣列評(píng)估基因表達(dá)。32.根據(jù)權(quán)利要求19-31任一項(xiàng)的方法，其中所述評(píng)估包括通過一種選自于以下的方法的分析iTRAQ或質(zhì)語、NMR、SELDI(-T0F)和/或MALDI(-TOF)、基于l-D皿的分析、基于2-D凝膠的分析、基于LC-MS的技術(shù)、無標(biāo)記定量LC-MS/MS、一種免疫學(xué)技#腿。33.—種測(cè)試一種用于治療精神障礙的潛在試劑的方法，所述方法包括a.提供來自一個(gè)患有精神障礙的受試者的一個(gè)測(cè)試T-細(xì)胞樣品；b.將所述測(cè)試T-細(xì)胞樣品與一種候選試劑相接觸；c.給予所述測(cè)試T-細(xì)胞樣品一種刺激；以及d.評(píng)估對(duì)所述刺激的反應(yīng)。34.根據(jù)權(quán)利要求33的方法，還包括比較所述反應(yīng)與一個(gè)對(duì)照樣品中的刺^L^應(yīng)，并且如果在所述測(cè)試樣品中的M被調(diào)節(jié)，那么所述候選試劑被鑒定為潛在治療劑。35.根據(jù)權(quán)利要求34的方法，其中所iW照樣品包括精神障礙樣品。36.根據(jù)權(quán)利要求34或權(quán)利要求35的方法，其中所述對(duì)照樣品包括正常對(duì)照樣品。37.根據(jù)權(quán)利要求33-36任一項(xiàng)的方法，其中所i^'j^^對(duì)T-細(xì)胞分化的刺激。38.根據(jù)權(quán)利要求33-37任一項(xiàng)的方法，其中所^'j^bl抗CD3抗體。39.根據(jù)權(quán)利要求33-38任一項(xiàng)的方法，其中所述反應(yīng)包括T-細(xì)胞增殖。40.根據(jù)權(quán)利要求39的方法，其中所述T-細(xì)胞增殖的評(píng)估是通過將3[H]-脫，腺嗜咬苷摻入子代細(xì)胞DM中來實(shí)現(xiàn)。41.根據(jù)權(quán)利要求39或權(quán)利要求40的方法，其中所述評(píng)估包括分析一種或多種蛋白的水平。42.根據(jù)權(quán)利要求33-41任一項(xiàng)的方法，其中所述反應(yīng)包括基因表達(dá)的調(diào)節(jié)。43.根據(jù)權(quán)利要求42的方法，其中所述評(píng)估包括RT-PCR或QT-PCR。44.根據(jù)權(quán)利要求33-43任一項(xiàng)的方法，其中所述評(píng)估包括分析是否存在一種或多種蛋白或酶活性。45.根據(jù)權(quán)利要求33-44任一項(xiàng)的方法，其中所i^應(yīng)響應(yīng)于所述候選劑處理而恢復(fù)至正常。46.—種診斷或監(jiān)測(cè)一個(gè)受試者中的精神障礙的方法，包括a.提供一個(gè)來自所述受試者的測(cè)試T-細(xì)胞樣品；以及b.比較所述測(cè)試樣品與一個(gè)對(duì)照樣品中的基因和/或蛋白表達(dá)。47.根據(jù)權(quán)利要求46的方法，其中所述對(duì)照樣品包,神障礙對(duì)照T-細(xì)胞樣品。48.根據(jù)權(quán)利要求46或權(quán)利要求47的方法，其中所述對(duì)照樣品包括正常T-細(xì)胞對(duì)照樣品。49.根據(jù)權(quán)利要求46-48任一項(xiàng)的方法，包括檢測(cè)所述測(cè)試T-細(xì)胞樣品和所述正常對(duì)照T-細(xì)胞樣品之間的反應(yīng)的差異。50.根據(jù)權(quán)利要求46-49任一項(xiàng)的方法，還包括將一個(gè)測(cè)試樣品的反應(yīng)分類為具有正常譜、精神障礙鐠或者易患精神障礙譜。51.根據(jù)前ii^利要求任一項(xiàng)的方法，其中所述評(píng)估包括分析基因表達(dá)。52.根據(jù)權(quán)利要求51的方法，其中所述基因如表2-4的任一個(gè)中所示。53.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中所述評(píng)估包括分析mRNA和/或蛋白和/或酶活性。54.才艮據(jù)權(quán)利要求53的方法，其中通過RT-PCR或QRT-PCR分析mRNA。55.根據(jù)權(quán)利要求53的方法，其中所述蛋白是在以下處顯示出峰的一種或多種蛋白3242、3450、3374、10918、13791和6700Da。56.根據(jù)權(quán)利要求46-55任一項(xiàng)的方法，其中所述評(píng)估包括分析脂質(zhì)和/或代謝物譜。57.根據(jù)權(quán)利要求46-56任一項(xiàng)的方法，其中所述評(píng)估包括通過一種選自于以下的方法的分析iTRAQ、質(zhì)謙、SELDI(-T0F)和/或MALDI(-T0F)、基于l-D皿的分析、基于2-D凝膠的分析、基于LC-MS的技術(shù)、無標(biāo)記定量LC"MS/MS、一種免疫學(xué)技^NMR。58.根據(jù)權(quán)利要求51-57任一項(xiàng)的方法，其中所述分析是定量的。59.—種精神障礙的預(yù)后評(píng)估的方法，包括一種#^權(quán)利要求46-58任一項(xiàng)的方法。60.—種監(jiān)測(cè)一種治療物質(zhì)在患有、疑似患有或者易患精神障礙的受試者中的效果的方法，包括一種根據(jù)權(quán)利要求46-58任一項(xiàng)的方法。61.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中所錄神障礙是精神分裂性障礙。62.根據(jù)權(quán)利要求61的方法，其中所*神分裂性障礙選自于偏執(zhí)型、緊張型、辦L型、混合型和殘留型精神分裂癥。63.根據(jù)權(quán)利要求l-60任一項(xiàng)的方法，其中所iiift神障礙是xM目型障礙。全文摘要一種刺激的或未刺激的T-細(xì)胞樣品可以用于診斷或監(jiān)測(cè)一種精神障礙，用于鑒定一種生物標(biāo)記，或者用于測(cè)試一個(gè)候選試劑作為潛在治療劑。文檔編號(hào)G01N33/50GK101336372SQ200680051802公開日2008年12月31日申請(qǐng)日期2006年12月4日優(yōu)先權(quán)日2005年12月2日發(fā)明者R·M·克拉多克,S·巴恩申請(qǐng)人:劍橋企業(yè)有限公司