專利名稱：：粒子的制作方法粒子
技術(shù)領(lǐng)域：
總體上本發(fā)明屬于粒子領(lǐng)域。更具體地講，本發(fā)明是關(guān)于色譜法中作為流動(dòng)固相的粒子。
背景技術(shù)：
：目前進(jìn)行分析分離的主要技術(shù)是色譜法。傳統(tǒng)上色譜法是通過使用泵來進(jìn)行的，所述泵使樣品和流動(dòng)相傳送通過含有固定相的柱子。此技術(shù)通常被稱為液體色譜法(LC)或高效能液體色譜法(HPLC)。此技術(shù)的主要類型之一使用由涂覆有疏水分子的二氧化硅粒子組成的疏水固定相，而流動(dòng)相是親水的。此技術(shù)的另一類型使用不同程度上結(jié)合有手性分子的手性固定相。樣品成分在此兩相之間的分配是分離的基礎(chǔ)。這樣，流動(dòng)相和固定相有不同的特性是很重要的。樣品分子從柱中洗脫以后，使用不同的方法收集或探測(cè)樣品分子。此傳統(tǒng)設(shè)置的一個(gè)主要問題是大多數(shù)樣品含有牢牢地粘在固定相上的化合物，因此，固定相被污染，發(fā)生性能改變。由于此污染最后將不得不交換此柱。以前，我們已經(jīng)研發(fā)了一項(xiàng)技術(shù)來解決這個(gè)問題，在該技術(shù)中，使用納米顆粒形式的一次性流動(dòng)固相(mobilesolidphase)來解決由于吸收樣品成分或樣品基體而污染固定相的問題。通過使用毛細(xì)管電色譜(CEC)的部分填充(partialfilling,PF)，在樣品進(jìn)入薄毛細(xì)管柱之前，先將一塞傳送液中的納米顆粒(漿液的形式)注入該薄毛細(xì)管柱中。當(dāng)電壓施加到該柱時(shí)，樣品成分開始穿過納米粒子漿料塞移動(dòng)，最終分離。最后，樣品成分在納米粒子塞之前被洗脫，然后使用如UV-檢測(cè)光學(xué)方法來檢測(cè)。然而，此技術(shù)的一個(gè)主要缺點(diǎn)是不能檢測(cè)到和納米粒子共洗脫的分析物。而且，此方法使用的兩個(gè)注入步驟阻礙了此技術(shù)的穩(wěn)定性和再現(xiàn)性。因而，需要這樣一項(xiàng)技術(shù)，其中粒子漿液被不斷注入毛細(xì)管柱，并且其中即使樣品成分和粒子共洗脫，樣品成分也能被檢測(cè)出。Bachmann等人(Backmann，K.，G6ttlicher，B,，Chromatographia，1997，vol.45，p.249-254)已經(jīng)描述了涂覆有10-羧基癸基二甲基硅垸的二氧化硅粒子在熒光化合物的電動(dòng)色譜分離中的應(yīng)用。惰性核的使用意味著僅有非常有限部分的流動(dòng)固相，即有限部分的涂層，參與分離，因此分離能力極大減小，因?yàn)楹头治鑫锵嗷プ饔玫拿娣e或體積嚴(yán)重減小。涂層的使用，既能促使樣品成分分離又能防止粒子沉降，限制了將粒子應(yīng)用到特定分離類型的可能性。Huang等人(Huang，M,R，Kuo，Y.-C,Huang，C,C，Chang，H,T，Anal.Chem.,2004，Vol.76，p.192-196)已經(jīng)描述了金水動(dòng)力涂覆聚(氧乙烯)納米粒子作為固定相使用毛細(xì)管電泳來分離脫氧核糖核酸(DNA)的用途。此類型粒子不適和作為流動(dòng)固相，因?yàn)橥繉記]有和核連接。另外，當(dāng)質(zhì)譜法用于檢測(cè)分離的分析物時(shí)，聚(氧乙烯)最可能漏進(jìn)質(zhì)譜儀而嚴(yán)重降低檢測(cè)限。最近，本發(fā)明的發(fā)明人己經(jīng)發(fā)明了一種方法，該方法為每次新分離使用新相，解決了上面提到的注入和洗脫限度的問題。該相稱為流動(dòng)固相，以傳輸流體中的納米粒子漿液的形式被持續(xù)注入到分離裝置中。因?yàn)楫?dāng)通過泵經(jīng)過柱子時(shí)，納米粒子漿液被連續(xù)更換，因此每次新的分析都是在新的未使用的固相上進(jìn)行的。用這種方法，可能損壞柱子的樣品成分的吸收就不再是問題。除了和樣品成分的相互作用，流動(dòng)固相應(yīng)該以和樣品成分不一樣的速度移動(dòng)。然后，和流動(dòng)固相結(jié)合的樣品成分將會(huì)以不同于未結(jié)合流動(dòng)固相的樣品成分速度的速度通過分離系統(tǒng)，那個(gè)速度和未結(jié)合的速度不一樣。這種遷移速度的差別是分離的基礎(chǔ)。和傳統(tǒng)方法相比，一個(gè)不同之處在于固相是流動(dòng)的，而不是固定在柱中的。來自毛細(xì)管的納米粒子的持續(xù)洗脫使得光學(xué)檢測(cè)方法如UV-檢測(cè)不可行。傳統(tǒng)的質(zhì)譜儀檢測(cè)也無效，因?yàn)橄疵摷{米粒子將嚴(yán)重地污染質(zhì)譜儀。為了促使和流動(dòng)固相共洗脫的樣品成分的檢測(cè)，需要在檢測(cè)前將流動(dòng)固相從樣品成分中分離。這可以通過例如角度(如直角)電噴射電離源(angledelectrosprayionizationsource)來實(shí)現(xiàn)，其中樣品成分被加速送入質(zhì)譜儀，而流動(dòng)固相被阻止進(jìn)入質(zhì)譜儀。因此，作為流動(dòng)固相的改進(jìn)的粒子將是有益的，特別是提高靈活性、成本有效性、改進(jìn)分離技術(shù)和改進(jìn)分析物和所述粒子之間的關(guān)系的粒子將是有益的。
發(fā)明內(nèi)容因此，本發(fā)明優(yōu)選試圖緩和、緩減或消除上述其中一個(gè)或多個(gè)現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)和不足，并解決至少之一上述問題，并通過提供用于樣品成分色譜分離的流動(dòng)固相中使用的粒子，其中所述粒子含有核和涂層，其中所述核與至少一種分析物相互作用，所述涂層實(shí)質(zhì)上預(yù)防絮凝或聚集。通過隨附的說明書、附圖和從屬要求，本發(fā)明的進(jìn)一步的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)將變得清楚。通過參照下面的附圖，本發(fā)明能夠?qū)崿F(xiàn)的這些或其他方面、特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)將變得清楚。其中圖1公開了電解液中乙腈濃度在分離鄰苯二甲酸二甲酯(▲)、鄰苯二甲酸二乙酯(■)和鄰苯二甲酸二丙酯()中的影響，其中說明了(A)由每米理論塔板的數(shù)量與電解液中乙腈濃度關(guān)系表示的分離，(B)保留因子的對(duì)數(shù)與電解液中乙腈濃度的曲線，(C)在乙腈不同濃度的電解液中鄰苯二甲酸二甲酯和鄰苯二甲酸二乙酯之間的分離度；圖2說明了顯示用DMSO(l)作為未保留EOF標(biāo)記物的同系列鄰苯二甲酸二垸基酯的RP-CFF-CEC-ESI-MS的電色譜，其中鄰苯二甲酸二甲酯(2)首先洗脫，緊接著的是鄰苯二甲酸二乙酯(3)和鄰苯二甲酸二丙酯(4)，并用30%(體積/體積)乙腈調(diào)整電解液；圖3說明了用于研究IE-CFF-CEC的胺的結(jié)構(gòu)(苯海拉明(1)，柳丁氨醇(2)，和咪唑(3))，使用(A)CE和(B)CFF-CEC來分離胺，由于非常強(qiáng)的保留而未能檢測(cè)到苯海拉明；圖4說明了再現(xiàn)性和懸浮穩(wěn)定性研究，其中研究了相對(duì)通過超聲波后的時(shí)間的保留因子(懸浮電解液碳酸銨(pH值8.2):乙腈(70:30(體積/體積))；圖5說明了在兩個(gè)不同樣品濃度下來自CFF-CEC分析的電色譜的急速上升，其中為易于比較，峰的高度己重新刻度，x軸的刻度對(duì)于兩個(gè)電色譜完全一樣(懸浮電解液碳酸銨(pH值8.2):乙腈(70:30(體積/體積))；圖6說明了分離系統(tǒng)和質(zhì)譜儀的正交界面；圖7說明了使用PEG900酯交換進(jìn)行的MAA-TRIM粒子0.5克/毫升的分離，其中電解液由65%10mM醋酸銨緩沖液(pH為5.4)和35%MeCN組成，并且流動(dòng)固相的濃度是變化的；圖8說明了(A)甲基-、乙基-、丙基-和丁基酯的自由區(qū)電色譜(FreeZoneelectrochromatography)，其中電解液由65%10mM的NH4Ac(pH為5.4)和35X的MeCN組成；禾B(B)使用持續(xù)滿填充法，用PEG卯0酯交換粒子漿液和0.5毫克/毫升粒子進(jìn)行的甲基-、乙基-、丙基-和丁基酯的分離，其中電解液由65^10mM的NH4Ac(pH為5.4)和35X的MeCN組成；圖9說明了使用持續(xù)滿填充法，用MeCN含量不同的硫酸化二乙烯基苯粒子分離甲基-、乙基-、丙基-和丁基酯，其中電解液由20-40X的MeCN和10mM的NH4Ac緩沖液(pH為5.4)組成。具體實(shí)施方式下面的描述將聚焦于根據(jù)本發(fā)明的能夠應(yīng)用于分離系統(tǒng)如色譜分離系統(tǒng)的粒子、方法、使用和研制方法的實(shí)施方式。本發(fā)明描述了能在傳輸流體中形成穩(wěn)定懸浮并與傳輸流體特性不一樣的粒子。而且，本發(fā)明描述了能通過與粒子的相互作用排除一個(gè)或多個(gè)樣品成分的粒子。本發(fā)明也描述了這些粒子在不同分離和分析應(yīng)用中的用途。術(shù)i吾"分離禾口分析綜合系統(tǒng)(integratedseparationandanalysissystem)，，指的是分離系統(tǒng)和分析系統(tǒng)，其中幾個(gè)元件有效連接，從而促使產(chǎn)生單一過程的系統(tǒng)。術(shù)語"質(zhì)量敏感檢測(cè)器"指能分析、檢測(cè)或分離涉及質(zhì)量、電荷或它們的結(jié)合的離子或分子的裝置。術(shù)語"質(zhì)量分析器"指分析或分離涉及質(zhì)量或電荷的離子或分子的裝置。因此，質(zhì)量分析器是質(zhì)量敏感檢測(cè)器的一部分。術(shù)語"電離源"指能由分子或離子形成離子的裝置。術(shù)語"角度電離源"指處于從傳輸系統(tǒng)出口到質(zhì)量分析器入口的可測(cè)量角度的電離源。術(shù)語"檢測(cè)器"指質(zhì)量敏感檢測(cè)器中存在的檢測(cè)器。此檢測(cè)器記錄或探測(cè)離子和分子。術(shù)語"固相"指粒子基固體材料。術(shù)語"流動(dòng)固相"描述了固相是可流動(dòng)的，即它能在傳輸流體中移動(dòng)或被傳輸流體攜帶。關(guān)于流動(dòng)相的術(shù)語"靜止"和"固定"可互換使用。術(shù)語"傳輸流體"指一種通過傳輸系統(tǒng)的流體或超臨界流體。含有樣品成分的樣品和流動(dòng)固相能通過傳輸系統(tǒng)被傳輸和/或移入傳輸流體中。術(shù)語"傳輸系統(tǒng)"指用來傳輸傳輸流體禾口/或流動(dòng)固相禾口/或樣品成分到、通過或進(jìn)入質(zhì)量敏感檢測(cè)器的設(shè)備或裝置。術(shù)語"選擇器"指對(duì)一個(gè)或多個(gè)樣品成分具有選擇性的單元。術(shù)語"在線"指?jìng)鬏斚到y(tǒng)中的一系列事件。術(shù)語"離線"指?jìng)鬏斚到y(tǒng)之外的一系列事件。術(shù)語"定性分離和/或分析"指為了根據(jù)它們的特性識(shí)別樣品中的一個(gè)或多個(gè)樣品成分而進(jìn)行的分離和/或分析。術(shù)語"樣品成分"指樣品成分中的一種。術(shù)語"分析物"指待分離和/或檢測(cè)的樣品成分。分離和分析系統(tǒng)所有的色譜技術(shù)依賴于流動(dòng)相(傳輸流體)和固定相之間特性的差異，為了促使固定相和樣品成分間的相互作用。但是隨著使用流動(dòng)固定相(movingstationaryphase)技術(shù)的應(yīng)用，這可能產(chǎn)生問題，因?yàn)檫@種差異將導(dǎo)致固定相在傳輸流體中不穩(wěn)定。例如，當(dāng)粒子用做流動(dòng)固定相時(shí)，這種不穩(wěn)定性將使流動(dòng)固定相絮凝或聚集(粒子間的特性相同)和沉降。為了產(chǎn)生固定相的穩(wěn)定懸浮，粒子需要擁有和傳輸流體相似的特性。這與傳統(tǒng)的用于色譜的流動(dòng)固定相的理論相悖為了進(jìn)行色譜法，固定相和傳輸流體之間的特點(diǎn)應(yīng)該有不同，但是與此同時(shí)，固定相需要和傳輸流體擁有類似的特點(diǎn)來形成穩(wěn)定懸浮。這個(gè)悖論被我們的發(fā)明解決。我們的粒子有具有與傳輸流體的特點(diǎn)不一樣(例如，核是疏水的而傳輸流體是含水的)的核，但是此核具有和傳輸流體相似的特性(例如，親水涂層和含水傳輸流體)的涂層。這使得能在傳輸流體中形成穩(wěn)定懸浮，但是仍然和能穿透涂層的樣品成分相互作用的粒子。至于用壓縮柱的傳統(tǒng)色譜法，為了促使與樣品成分的相互作用，流動(dòng)固相應(yīng)該和傳輸流體(流動(dòng)相)的特性不一樣。這樣的結(jié)果是在傳輸流體中產(chǎn)生流動(dòng)固相的穩(wěn)定漿液時(shí)存在問題。穩(wěn)定漿液意味著沒有或很少發(fā)生絮凝、聚集或沉降。例如，如果系統(tǒng)用于相反相分離，流動(dòng)固相是疏水的，則傳輸流體是親水的。傳輸流體漿液中粒子的穩(wěn)定性將會(huì)受限，由于疏水效應(yīng)造成的流動(dòng)固相絮凝、聚集或沉降。傳輸流體漿液中穩(wěn)定性不良的流動(dòng)固定相的結(jié)果是分離和分析能發(fā)生的條件非常有限。由于流動(dòng)固相和傳輸流體間特性的巨大不同產(chǎn)生的另一個(gè)問題是一些樣品成分能和流動(dòng)固相發(fā)生極其強(qiáng)烈的相互作用。如此強(qiáng)烈的相互作用的結(jié)果可能是導(dǎo)致非常不良色譜的慢的相互作用動(dòng)力學(xué)。這種相互作用的例子是蛋白質(zhì)和其它生物或合成聚合物通過多點(diǎn)相互作用與疏水性/離子交換基團(tuán)的相互作用。根據(jù)本發(fā)明的一種實(shí)施方式，本發(fā)明所使用的流動(dòng)固相由含有至少兩種不同材料的粒子組成。粒子的內(nèi)部稱為核，而粒子的外部稱為涂層。樣品成分可以與核和涂層相互作用。此粒子由不用表面活性劑和乳液穩(wěn)定劑制得的粒子制成，因此將這些粒子改性以在表面產(chǎn)生化學(xué)特性，用于偶聯(lián)涂層到粒子表面來形成粒子。核粒子的化學(xué)功能在核粒子的合成過程中引入。通過對(duì)合成方案的優(yōu)化，可以通過一步法獲得涂覆的核粒子。粒子的尺寸應(yīng)該使在傳輸流體中，粒子不會(huì)因?yàn)橹亓Χ恋?。粒子的典型尺寸是大約1納米到大約IO微米。粒子變得越大，沉淀的問題越大。為了達(dá)到最好的分離，優(yōu)選的尺寸為大約20納米以下，或大于20納米，以在測(cè)驗(yàn)之前簡(jiǎn)化粒子從樣品成分中的分離。在一種實(shí)施方式中，并不是所有的功能都可用于偶聯(lián)涂層。粒子的涂層應(yīng)該促進(jìn)傳輸流體中粒子漿液的穩(wěn)定。粒子的特性應(yīng)該是它們?cè)趥鬏斄黧w中不會(huì)絮凝、聚集或沉淀。因此，在一種實(shí)施方式中，涂層具有接近那些傳輸流體的化學(xué)特性。在另一種實(shí)施方式中，涂層具有促進(jìn)粒子間排斥力的特性。通過靜電斥力、空間效應(yīng)、溶解效應(yīng)或它們的結(jié)合，涂層能夠穩(wěn)定傳輸流體中的粒子漿液。通過形成具有電離功能或擁有恒定電荷功能的涂層可產(chǎn)生靜電斥力。粒子能避免由類似電荷粒子間鈮斥力(columbicrepulsion)產(chǎn)生的絮凝。傳輸流體漿液中粒子的穩(wěn)定性也可以通過使用鏈間或連接在核粒子表面聚合物間的空間斥力形成。空間斥力是由于熵?fù)p失(lossofentropy)造成的，當(dāng)兩個(gè)分子彼此接近時(shí)產(chǎn)生熵?fù)p失。熵?fù)p失是由于彼此接近的分子的阻礙運(yùn)動(dòng)和缺少形態(tài)自由造成的?？臻g斥力可以通過使用鏈狀分子、線性聚合物或支化聚合物共價(jià)涂覆核來實(shí)現(xiàn)。當(dāng)兩個(gè)粒子的表面彼此接近時(shí)，連接到該兩個(gè)表面的鏈彼此接近并損失熵。結(jié)果是粒子彼此分開。傳輸流體漿液中的粒子能通過溶解效應(yīng)而穩(wěn)定，意味著周圍傳輸流體擁有和粒子涂層非常相近的特性。這意味著粒子表面和周圍液體的化學(xué)特性沒有或幾乎沒有差異。流體不能將自身和粒子區(qū)分開。那么將沒有動(dòng)力來將粒子從周圍傳輸流體溶液中排出，這樣不會(huì)發(fā)生絮凝或聚集。這些特性可以基于親水性、疏水性或其它參數(shù)例如靜電或它們的結(jié)合。傳輸流體漿液中的粒子的穩(wěn)定性也基于混合類型穩(wěn)定性。具有混合類型穩(wěn)定性意味著靜電、空間或溶解效應(yīng)的任意結(jié)合。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，粒子是多孔的。多孔粒子具有較大的表面積，因此使用它們的分離系統(tǒng)將具有更大的樣品容量。而且，多孔粒子也能用于尺寸排除分離。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，粒子是高度交聯(lián)的。高度交聯(lián)粒子比低交聯(lián)度的粒子更加機(jī)械穩(wěn)定。這在處理這些粒子時(shí)是有益的。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，粒子具有低交聯(lián)度。低交聯(lián)度的粒子對(duì)于樣品成分具有更高的可及性(accessibility),因?yàn)樗鼈兡軘U(kuò)散到低交聯(lián)區(qū)。這樣相對(duì)于更高度交聯(lián)的粒子，這些粒子的容量和質(zhì)量傳輸都能得到改進(jìn)。因此，在系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，0-100摩爾。^例如0、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100摩爾％的單體是交聯(lián)單體。不同的交聯(lián)度對(duì)于系統(tǒng)的不同應(yīng)用以及不同單體和交聯(lián)單體以及它們的不同組合是有益的。在系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，交聯(lián)單體有2、3、4或5個(gè)能在聚合過程中發(fā)生反應(yīng)的乙烯基。交聯(lián)單體乙烯基的數(shù)量決定了單體生成鏈的數(shù)量。此參數(shù)能影響粒子的尺寸、形狀和形態(tài)。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，粒子是無孔的。無孔粒子在分析大樣品成分時(shí)是有益的。從傳輸流體到多孔粒子內(nèi)部的大分子質(zhì)量傳輸可能非常慢，導(dǎo)致色譜效應(yīng)不好。這種色譜效應(yīng)通過使用阻礙此類型擴(kuò)散的粒子即無孔粒子可以立即得到極大的提高。在另一種實(shí)施方式中，關(guān)于一些樣品成分粒子是無孔的，對(duì)于另一些樣品成分粒子是多孔的。這意味著只有選擇尺寸的樣品成分能擴(kuò)散到粒子中，而其它較大樣品成分被阻礙進(jìn)入粒子的內(nèi)部。在另一種實(shí)施方式中，粒子對(duì)于一些樣品成分是非滲透性的，而對(duì)于另一些樣品成分是滲透性的。這意味著只有具有選擇特性的樣品成分能擴(kuò)散到粒子中，而其它特性的樣品成分被阻礙進(jìn)入粒子的內(nèi)部。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，粒子可以是陽離子也可以是陰離子。陽離子粒子能用于陰離子的陰離子交換分離，也可以用于其中吸收和與陽離子樣品成分的離子相互作用應(yīng)該避免的分離。陰離子粒子可以用于分離陽離子樣品成分，和用于其中吸收和與陰離子樣品成分的相互作用應(yīng)該避免的分離。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，粒子是電中性的。中性粒子能用于其中離子相互作用應(yīng)該避免的分離。此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，粒子是兩性離子或含有陽離子和陰離子基團(tuán)。這些粒子能用于使用陽離子和陰離子交換分離的分離，和用于具有配位電荷(complexcharge)的樣品成分的分離。此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，粒子為大約1納米和大約20納米。更小的粒子有益于提高內(nèi)部粒子質(zhì)量傳輸。粒子越小，質(zhì)量傳輸越有效。此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，正如前面提到的，粒子為大約20納米和大約10微米。更大粒子尺寸的選擇能通過產(chǎn)量參數(shù)和系統(tǒng)要求激發(fā)。較大粒子可能具備流動(dòng)通孔，即貫穿粒子的孔，通過該孔，傳輸流體能流動(dòng)，而不僅僅是擴(kuò)散。此粒子可以用于分離大成分如細(xì)胞、細(xì)胞器(organell)等的這些應(yīng)用中。此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，粒子的質(zhì)荷比(m/z)是不同的，例如，大于至少一個(gè)分析物的質(zhì)荷比(m/z)。此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，根據(jù)分析物或興趣分析物選擇粒子尺寸。即，粒子應(yīng)當(dāng)基本大于一個(gè)或多個(gè)分析物。此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，根據(jù)興趣分析物和一個(gè)或多個(gè)樣品成分來選擇粒子尺寸，即，粒子應(yīng)該足夠的小，以給出足夠的分離樣品成分。此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，粒子的表面涂料的特性是多克隆的(polyclonal)。多克隆性可能是產(chǎn)生粒子上具有多克隆表面特性的制備步驟的結(jié)果。而且，在一些系統(tǒng)中，例如，為了研究或模仿多克隆系統(tǒng)，多克隆性是有益的。此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，粒子的表面涂料的特性是單克隆的。對(duì)絕大多數(shù)分離系統(tǒng)而言，粒子表面的單克隆性優(yōu)于多克隆性，由于樣品成分連接到粒子的位點(diǎn)能的分布窄得多，產(chǎn)生更窄的樣品成分區(qū)域(更高效)，因此更易分離。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，粒子具有均相表面涂層。均相表面涂層在系統(tǒng)中有益，因?yàn)槿菀酌枋鱿到y(tǒng)，并因?yàn)槟芙档彤a(chǎn)生多克隆性的風(fēng)險(xiǎn)，當(dāng)這不能保證的時(shí)候。均相表面涂層可以含有多于一個(gè)官能團(tuán)(ftmctionalities)，只要該官能團(tuán)隨機(jī)分布，并且至少這些官能團(tuán)之一在與樣品成分、傳輸流體和/或其它粒子間的相互作用方面領(lǐng)先。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，粒子具有多相表面涂層。多相表面涂層允許與樣品成分的很多不同類型的相互作用，以及許多使粒子在傳輸流體中懸浮穩(wěn)定的不同方式。這樣，粒子可用于更廣泛的分離，例如，不同分離類型和不同的樣品和樣品成分范圍。而且，傳輸流體組成和類型可能更不一樣，使相互作用類型和強(qiáng)度大大變化。多相表面涂層有很多不同的、可能或不可能隨機(jī)分布的化學(xué)官能團(tuán)。這些官能團(tuán)的一種以上可能和樣品成分、傳輸流體和其它粒子相互作用。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，粒子涂層的部分是均相的，但是該涂層的不同部分可以不同。所述部分含有一個(gè)或多個(gè)官能團(tuán)，該官能團(tuán)可能在所述表面部分隨機(jī)分布。不同部分可能與樣品成分、傳輸流體或其它粒子發(fā)生不同的相互作用。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，粒子是單分散的。單分散的粒子有利于產(chǎn)生均相系統(tǒng)。對(duì)于樣品成分進(jìn)入粒子的擴(kuò)散或流道長(zhǎng)度將相同，而與樣品成分遇到哪個(gè)粒子無關(guān)。多分散的結(jié)果是質(zhì)量傳輸限制分布，導(dǎo)致分離效率降低(更寬的樣品成分帶)。結(jié)果，單分散粒子可能產(chǎn)生更高的分離效率。此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，粒子是多分散的。多分散的粒子可能是生產(chǎn)方法的結(jié)果。此粒子的其它特性，例如和分析物的相互作用等仍然可能激發(fā)它們?cè)诜蛛x系統(tǒng)中的使用。此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，混合粒子被使用。這樣有不同核、不同涂層、不同尺寸、不同多孔性等的粒子的混合可以用來創(chuàng)建能處理一個(gè)分析中的幾個(gè)不同類型的分離的系統(tǒng)。對(duì)于一些樣品成分，粒子的核可能是惰性的，但和其它的樣品成分可能相互作用。核的性質(zhì)對(duì)于在檢測(cè)前從樣品成分中最終分離粒子來說可能是重要的。在系統(tǒng)的一種實(shí)施方式中，使用沉淀聚合合成粒子的核。在表面活性劑自由過程中沉淀聚合產(chǎn)生核粒子。由于從產(chǎn)品中除去表面活性劑很困難，因此制備中應(yīng)該避免表面活性劑。而且，由于電噴中電離的減弱，粒子上存有的少量表面活性劑將極大地降低測(cè)試系統(tǒng)中樣品成分的信號(hào)強(qiáng)度。在系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，使用表面活性劑或乳膠穩(wěn)定劑無乳化劑聚合(emulsionstabilizerfreeemulsionpolymerisation)合成粒子的核。用這禾中方法形成穩(wěn)定的分子，由于自由基引發(fā)劑和存在于分散相中的單體之間的相互作用。擇一地，穩(wěn)定分子可被直接加入系統(tǒng)中。這些穩(wěn)定分子然后被混合例如共價(jià)結(jié)合到產(chǎn)生的粒子中。因此粒子能被產(chǎn)生，并不含有任何自由穩(wěn)定表面活性分子(freestablesurfaceactivemolecule)。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，粒子的核是由石墨或氧化鈦制成的。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，粒子的核是由氧化鋁(鋁的氧化物)制成的。在堿性液體中，氧化鋁具有比二氧化硅更高的穩(wěn)定性。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，粒子的核是由瓊脂糖制成的。交聯(lián)瓊脂糖經(jīng)常在傳統(tǒng)的親和性色譜分析和凝膠色譜分析中使用。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，粒子的核與至少一個(gè)樣品成分相互作用。此核的特性可能被設(shè)計(jì)，旨在賦予其特性，該特性使它和不同分析物最理想或最不理想地相互作用。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，核的尺寸根據(jù)待檢測(cè)的樣品成分進(jìn)行選擇，即基本不同，例如，較大，以在檢測(cè)前提高粒子從樣品成分中的分離。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，選擇核的質(zhì)荷比，即使之與待檢測(cè)的樣品組分基本不同，例如，更大，以在檢測(cè)前提高粒子從樣品成分中的分離。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，粒子的核并不和樣品的全部成分相互作用。在一些分離系統(tǒng)中，核和樣品成分的一些但不是和全部發(fā)生相互作用。這樣，樣品成分的一些就不會(huì)彼此分離，但是和全部相互作用的樣品成分分離。這個(gè)安排可能在樣品清理程序中有用。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，粒子的核的表面含有來自單體、自由基引發(fā)劑或其它在核的合成期間或者合成后使用的單體的磷酸鹽基團(tuán)、膦酸、環(huán)氧化物、乙醛、羧酸、伯胺、仲胺、叔胺、季銨、酯、醚和/或羥基。單體或自由基引發(fā)劑也能為粒子的核的表面提供能與試劑反應(yīng)產(chǎn)生其它官能團(tuán)的官能團(tuán)。此過程也能在多步中在多個(gè)不同的官能團(tuán)上進(jìn)行。這些不同的表面基團(tuán)能被用于將涂料偶聯(lián)到粒子的核上，來穩(wěn)定在傳輸流體中的粒子，{足進(jìn)粒子的核或表面涂層的制備，或產(chǎn)生和樣品成分的相互作用。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，粒子的核含有由一個(gè)或多個(gè)下面的單體聚合得到的疏水性聚合物甲基丙烯酸酯、乙烯基吡啶、丙烯酸酯、苯乙烯、二乙烯基苯或硅烷。此粒子的疏水核在反相分離中是有用的，在所述反相分離中，分離基于樣品成分和粒子的相互作用，取決于樣品成分的疏水性。粒子的核中的聚合物類型的不同使得粒子具有不同的特點(diǎn)，例如尺寸、多孔性、形態(tài)和樣品成分之間的相互作用。在此系統(tǒng)的一種實(shí)施方式中，粒子的核含有由一個(gè)或多個(gè)由下面單體聚合而成的親水性聚合物甲基丙烯酸酯、乙烯基吡啶、丙烯酸酯、苯乙烯、二乙烯基苯或硅烷。取決于例如它們的親水性，例如具有一些極性官能團(tuán)的親水性物質(zhì)，親水性核在分離樣品成分系統(tǒng)中是有用的。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，粒子的核是非手性的或手性的。手性核在其中手性樣品成分應(yīng)該被分離的應(yīng)用中是有用的。對(duì)于其它類型的分離，例如，對(duì)于非手性樣品成分的分離，并不需要手性核。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，手性核能和手性樣品成分相互作用。這些相互作用是手性分離的基礎(chǔ)。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，手性核能和非手性樣品成分相互作用。這些相互作用可能是樣品成分特定或基團(tuán)特定，產(chǎn)生具有廣泛選擇性的分離。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，粒子的手性核是由手性單體產(chǎn)生的。從手性單體產(chǎn)生粒子的核使得一步法產(chǎn)生粒子的手性核，從制備的角度看這是有益的。而且，如此合成的反應(yīng)產(chǎn)率很可能比多步反應(yīng)的更高。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，粒子的手性核是由非手性單體得到的。通過在粒子核的制備過程中使用手性分子或溶劑，無需手性單體即可制得粒子的手性核。這對(duì)在沒有發(fā)現(xiàn)合適的手性單體的系統(tǒng)的情況中是有益的。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，通過和手性試劑反應(yīng)將粒子的核制成手性。手試試劑可以是陰離子、陽離子、中性、兩性離子或帶電荷的分子或聚合物?？赡苁堑鞍踪|(zhì)、大環(huán)抗生素、環(huán)糊精、冠醚、氨基酸、合成分子、聚冠醚、多肽和/或聚環(huán)糊精。粒子的涂層對(duì)使粒子穩(wěn)定懸浮在傳輸流體中是重要的。涂層可能是惰性的或者能和樣品成分相互作用。涂層也能限制一些類型的分子或樣品成分進(jìn)入粒子的核。在此系統(tǒng)的一種實(shí)施方式中，涂層和至少一個(gè)樣品成分相互作用。涂層可以和樣品成分相互作用來產(chǎn)生分離，或者能和樣品成分相互作用來阻礙它們進(jìn)入粒子的核。當(dāng)分離非常慢地?cái)U(kuò)散到粒子的核或從粒子的核非常慢地?cái)U(kuò)散出的大分子時(shí)，和涂層的相互作用是有益的。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，涂層并沒有和樣品成分相互作用?？赡苤皇菫榱耸沽Ｗ臃€(wěn)定懸浮在傳輸流體中而合成涂層。因?yàn)樗挥幸粋€(gè)任務(wù)即穩(wěn)定粒子懸浮，因此這種涂層的合成被簡(jiǎn)化了。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，使用酸性氯化物調(diào)整反應(yīng)(addchloridemediatedreaction)、碳二亞胺調(diào)整反應(yīng)、EDAC(l-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)碳二亞胺)調(diào)整反應(yīng)、酯交換、醛基調(diào)整反應(yīng)、還原氨基化、共價(jià)結(jié)合到活化胺、共價(jià)結(jié)合到活化羧酸基等使涂層聚合物和粒子的核的表面共價(jià)結(jié)合?；诖潭ǖ耐繉宇愋停梢允褂貌煌墓潭Ｊ?。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，涂層聚合物和粒子表面的官能團(tuán)共價(jià)結(jié)合，所述官能團(tuán)來源于用于引發(fā)聚合反應(yīng)的自由基引發(fā)劑。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，涂層聚合物和粒子表面的官能團(tuán)共價(jià)結(jié)合，所述官能團(tuán)來源于單體。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，涂層含有親水性聚合物，例如聚乙二醇、聚丙二醇、聚乙烯醇、聚乙烯亞胺。和疏水性粒子的核結(jié)合的親水性聚合物對(duì)于反相應(yīng)用是有用的，因?yàn)樗鼈兡軌蚴沽Ｗ臃€(wěn)定懸浮在極性傳輸流體中。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，涂層含有固定到核粒子上的小分子。小分子的分子量在10克/摩爾到10000克/摩爾范圍內(nèi)。小分子應(yīng)該有一個(gè)或多個(gè)以下官能團(tuán)酯、醚、伯胺、仲胺、叔胺、季銨、環(huán)氧化物、硫酸、磺酸、羧酸、羥基、磷酸根(phosphategroup)、膦酸、酰胺。小分子也可以是烴或氟代烴。小的極性分子可以通過被高回收(recovery)固定來穩(wěn)定如粒子的疏水性核，產(chǎn)生高表面覆蓋度。彼此強(qiáng)烈排斥的小分子，例如，磺酸等，也能夠以較低覆蓋度使用。在疏水性介質(zhì)中，小的疏水分子也能用于穩(wěn)定粒子的親水核。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，涂層聚合物為直鏈、支化、交替共聚物、嵌段共聚物，含有一個(gè)或多個(gè)以下官能團(tuán)酯、醚、磷酸根、膦酸、伯胺、仲胺、叔胺、季銨、環(huán)氧化物、羧酸、磺酸和羥基。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，涂層可能含有一個(gè)或多個(gè)下述基團(tuán)大分子、蛋白質(zhì)、脫氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)、纖維素、淀粉、再生纖維、改性淀粉、改性纖維。這些中的一些自然產(chǎn)生的聚合物和分子與生物樣品具有相容性。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，粒子的表面涂層是手性或非手性的。當(dāng)傳輸流體和粒子的特性沒有必要差異大時(shí)，手性涂層對(duì)于手性分子的分離是有用的。對(duì)于涉及非手性樣品成分的分離，手性涂層能引入選擇性相互反應(yīng)的基團(tuán)或物質(zhì)。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，通過可以是陰離子、陽離子、中性、兩性離子或帶電的手性分子或手性聚合物與表面涂層之間的反應(yīng)，將粒子的涂層制成手性。涂層本身也可以是手性的?？梢允褂玫氖中苑肿踊蚓酆衔餅榈鞍踪|(zhì)、大環(huán)抗生素、環(huán)糊精、冠醚、氨基酸、合成分子、多冠醚、多肽和/或聚環(huán)糊精。粒子在電解液中懸浮的穩(wěn)定性被不同的機(jī)制控制。促進(jìn)其漿料在傳輸流體中的穩(wěn)定性的粒子的特性與涂層有關(guān)，并選擇性地與粒子的核有關(guān)。在此系統(tǒng)的一種實(shí)施方式中，傳輸流體漿液中粒子的穩(wěn)定性被粒子間的靜電斥力控制。由于在涂層上以及可選擇性的在粒子的核表面上或者粒子的核中存在陰離子基團(tuán)或者在涂層上存在陽離子基團(tuán)，可能產(chǎn)生靜電斥力，所述陰離子來源于一個(gè)或幾個(gè)下述基團(tuán)磺酸、磷酸、膦酸、羧酸，所述陽離子來源于一個(gè)或幾個(gè)下述基團(tuán)伯胺、仲胺、叔胺和/或季銨。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，傳輸流體漿液中粒子的穩(wěn)定性被粒子間空間斥力控制。由于作為涂層的聚合鏈的存在，可能在核粒子表面形成粒子間空間斥力。這些聚合物鏈可以是陰離子的、陽離子的、中性的、帶電的或中性的。離子涂層可能在排除具有與涂層相同的電荷的帶電樣品成分進(jìn)入粒子的核時(shí)有用。這個(gè)排除機(jī)制作為一體化樣品清理步驟是有用的。在此系統(tǒng)的另一種實(shí)施方式中，傳輸流體中粒子漿液的穩(wěn)定性由傳輸流體粒子的溶解性控制，這可能是由于粒子表面涂層和傳輸流體間的極性相似性，也可能是由于粒子的小尺寸。這種涂層在其中核應(yīng)該進(jìn)入樣品中所有的樣品成分的分離中很有用。之后就不能在傳輸流體相和涂料之間區(qū)分樣品成分，這樣應(yīng)該限制對(duì)粒子核的傳質(zhì)限制。此發(fā)明的一種實(shí)施方式是具有帶電疏水核和中性親水表面的粒子基于離子-離子相互作用色譜(離子互換色譜法)和/或疏水效應(yīng)(相反相或疏水相互作用色譜法)用于分離樣品成分的用途。首先，粒子應(yīng)該帶有電荷，為了使它們有不同于傳輸流體的遷移率(這對(duì)于中性樣品成分的分離是很重要的)。充電的樣品成分能和粒子核上的電荷相互作用，并依賴于相互作用的強(qiáng)度能被分開。只有電荷與核上電荷相反的樣品成分才能和粒子發(fā)生積極的相互作用。具有和核相同電荷的樣品成分與粒子相互排斥。有正電荷和負(fù)電荷的樣品成分也能和核相互作用。除了這些，樣品成分和粒子間的相互作用也可能被樣品成分和核或粒子涂覆間的疏水效應(yīng)(也指疏水相互作用)控制。因此由于離子-離子間相互作用或疏水性相互作用或它們的組合(混合模式保留)，出現(xiàn)了樣品成分的分離。基于離子互換和/或疏水效應(yīng)的分離是所有分離中絕大多數(shù)的，因此此種粒子在大多數(shù)分離中是有用的。此發(fā)明的另一種實(shí)施方式是具有中性疏水核和帶電親水表面的粒子的使用。根據(jù)與上面直接描述的實(shí)施方式類似的解釋，這樣的固定流動(dòng)相也能通過樣品成分和粒子間的離子相互作用和/或疏水相互作用分離樣品成分。此發(fā)明的一種實(shí)施方式是通過使用具有在手性聚合物或具有手性涂層的粒子中制得的核的粒子分離具有不同手性例如對(duì)映體的樣品成分。例如，人體是由手性筑塊(chimlbuildingblocks)(分子)構(gòu)成，因此人體將和分子的兩個(gè)對(duì)映體形式產(chǎn)生不同的反應(yīng)。這在制藥業(yè)和研究中這是極為重要的，因?yàn)榉肿拥囊粋€(gè)對(duì)映體形式將作為人體的藥物起作用，而另一種形式對(duì)身體有毒。因此手性分離在制藥業(yè)生產(chǎn)線和研究實(shí)驗(yàn)室中是至關(guān)重要的。此發(fā)明的另一種實(shí)施方式是樣品成分從復(fù)雜基質(zhì)樣品(例如，但并不限于，血、血漿、尿、沉積物(sediment)或組織樣品)中的分離和分析。分離柱中新粒子的持續(xù)再填充將確保固定相或準(zhǔn)固定相的污染物不影響下一次分離。每個(gè)樣品輸入是在未使用的固定流動(dòng)相上進(jìn)行的。本發(fā)明的另一種實(shí)施方式是通過使用具有與樣品基質(zhì)分子作用多于與其它樣品分子的表面或核的粒子從復(fù)雜基質(zhì)樣品中分離和分析樣品成分。因此，基質(zhì)分子將通過流動(dòng)固定相首先在分離中保留，這樣在分析中避免和阻礙與其它樣品分子的干擾。這種實(shí)施方式和樣品純化技術(shù)的應(yīng)用有關(guān)，所述樣品純化是目前分析化學(xué)的一個(gè)重要部分。在本發(fā)明的另一種實(shí)施方式中，通過使用角度電噴射電離界面，粒子被阻礙進(jìn)入質(zhì)譜儀。該角度能夠在1度至359度范圍內(nèi)變化。在本發(fā)明的另一種實(shí)施方式中，通過使用在分離系統(tǒng)和質(zhì)譜儀間的直角電噴射界面，粒子被排除進(jìn)入質(zhì)譜儀。根據(jù)本發(fā)明的另一種實(shí)施方式，通過使用滲析粒子被排除進(jìn)入監(jiān)測(cè)器或質(zhì)譜儀。在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，通過使用分離系統(tǒng)和質(zhì)譜儀間的高場(chǎng)反對(duì)稱波形離子移動(dòng)分光術(shù)(FAIMS)界面，粒子被排除進(jìn)入監(jiān)測(cè)器或質(zhì)譜儀。通過在色譜分離中使用粒子作為移動(dòng)流動(dòng)相，為了從粒子中監(jiān)測(cè)，色譜分離遵循分離興趣分析物的需要。在質(zhì)量分光檢測(cè)中，試圖阻止粒子進(jìn)入質(zhì)譜儀是非常重要的，因?yàn)榱Ｗ訉?dǎo)致污染和增加噪音。我們的實(shí)施方式之一是使用角度電噴質(zhì)譜儀(ESI-MS)，例如，直角ESI-MS。在分離系統(tǒng)和質(zhì)譜儀之間的這種界面中，粒子經(jīng)常被鞘流液(liquidsheath-flow)和霧化氣(nebulizinggas)幫助，以與樣品成分方向不同的方向(樣品成分朝著質(zhì)譜儀入口的方向)電噴出。因此，粒子和分析物間的特性很不相同，通過這種方式，一種或多種分析物和粒子相分離，這對(duì)于持續(xù)滿填充技術(shù)是很必要的。作用于離開分析系統(tǒng)的樣品的力，是本研究很感興趣的，也是(i)來自霧狀氣體的力和(2)在分離系統(tǒng)出口和質(zhì)譜儀入口間電壓不同產(chǎn)生的作用于帶電樣品上的電力。大樣品比小樣品受到更大程度的霧狀氣體流影響，重樣品并不如輕樣品被電場(chǎng)這樣影響(和輕樣品相比加速重樣品需要更大的力)。而且，樣品含有的凈電荷越多，電場(chǎng)的影響將越大。結(jié)果，含有較少凈電荷的又大又重的樣品并不如具有大量?jī)綦姾傻挠中∮州p的樣品那么容易被傳至質(zhì)譜儀入口。也就是說，是質(zhì)荷比(m/z)定義樣品如何被影響的。這在從粒子中分離分析物是非常重要的。為了用流動(dòng)固定相成功分離，要分析的分析物需要有比粒子更小的m/z。對(duì)于預(yù)測(cè)或決定粒子的尺寸(例如通過掃描電子顯微鏡)和然后使用它們的密度算出粒子質(zhì)量是可能的。分析物的質(zhì)量應(yīng)該被決定，例如通過分子式或通過質(zhì)譜儀研究。電荷依賴于樣品上的化學(xué)基團(tuán)和電噴離子步驟。例如鞘流液的pH值和傳輸流體能極大地影響樣品上電荷的數(shù)量和質(zhì)譜議參數(shù)的設(shè)置。而且，操作者控制之外的任意過程影響了樣品上的電荷。而且，霧狀氣體的參數(shù)例如壓強(qiáng)和容積流，對(duì)于從粒子中分離樣品成分有很大的影響。這意味著這種分離系統(tǒng)的使用者很可能協(xié)調(diào)系統(tǒng)。對(duì)于絕大多數(shù)分析，粒子將有遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于樣品中的分析物的尺寸和m/z，因而在分離中具有大的分離度。但是當(dāng)非常的小粒子和非常大的樣品分子一起使用時(shí)，必須注意。使用這些討論，作為流動(dòng)固定相使用的粒子能被定義為如下粒子的m/z應(yīng)該不同于(更大)將要在質(zhì)譜儀中檢測(cè)的樣品成分的m/z，因此通過角度ESI-MS界面的分離機(jī)制可以分離。實(shí)施例實(shí)施例1MilliQ水(MQ)用MilliQ系統(tǒng)(Millipore,Bedford,MA，USA)凈化。丙酮、醋酸銨、甲酸銨和醋酸來自于Merck，Darmstadt,Germany。過硫酸鈉、苯乙烯和DVB由PolymerChemistry,LundUniversity捐贈(zèng)。鄰苯二甲酸二甲酯和鄰苯二甲酸二乙酯來源于SigmaALDrich，St.Louise,MO，USA。鄰苯二甲酸二丙酯和碳酸銨來自ALdrich，Gillingham，UK。乙腈來自Merck，Hohenbrunn，Germany,甲基丙烯酸月桂酯(LMA)來自于Fluka，Buchs，Germany,氮?dú)鈦碜訟GA，Sundbyberg，Sweden,蟻酸來自Riedel-deHaen，Seelze，Switzerland。在圓底燒瓶中將自由基引發(fā)劑(過硫酸鈉)(15毫克和6毫克)溶解在水中(A9.6毫升和B5.9毫升)。加入單體(DVB(A16.7微升和B6.7微升)、LMA(A250微升和B100微升)、苯乙烯(A250微升和B100微升)和和共溶齊U(丙酮(A0微升或B3.9毫升))，并將溶液超聲處理一分鐘，通過氮?dú)饬髅摎馕宸昼?。然后將燒瓶和李比?Libig)冷卻器相連，在氮?dú)夥諊性跀噭?dòng)條件下在60°C(A)或90°C(B)進(jìn)行聚合反應(yīng)四小時(shí)。通過滲析使用?？p脊為8-12.000Da的再生纖維素薄膜(SpectrumEuropeB.V.Breda，Netherlands)將獲得的粒子懸浮液從剩余的引發(fā)劑、單體和小的低聚物中純化出來，使用連續(xù)的去離子水流進(jìn)行72小時(shí)。純化的粒子懸浮液被儲(chǔ)存在8t:的玻璃試管中，直到使用時(shí)。通過使用傳輸電子顯微鏡(TEM)(JEOL3000F場(chǎng)放射傳輸電子顯微鏡，JEOL，Tokyo,Japan)或者使用配有AxioCamMR.5計(jì)算機(jī)控制照相機(jī)(CarlZeissAG，Gottingen，德國)的CarZeissAxioImagerMlm的光學(xué)顯微鏡。毛細(xì)管電色譜法CFF-CEC實(shí)驗(yàn)是在具有用于數(shù)據(jù)處理的ChemStation軟件(V.B01.03)的HP3DCE系統(tǒng)上完成的(AgilentTechnologies,Waldbronn，Germany)。得自PolymicroTechnologies(Phoenix，AZ，USA)的熔凝硅石毛細(xì)管(87厘米，50微米i.d.，375微米o(hù).d.)用于所有實(shí)驗(yàn)。電解液由50毫摩爾/升pH為8.2的碳酸銨和0到40%(體積/體積)的乙腈制得。在CFF-CEC實(shí)驗(yàn)中使用的電解液懸浮液中粒子的含量是3.8毫克/毫升在50毫摩爾/升碳酸銨pH為8.2和0到40%(體積/體積)的乙腈。分離是在20KV(230伏/厘米)在環(huán)境溫度下進(jìn)行。在當(dāng)日的第一個(gè)分析之前，所有的溶液和粒子懸浮液通過超聲脫氣大約10分鐘。在每次分析之前，用0.1摩爾/升的氫氧化鉸(1分鐘在1巴)、水(1分鐘在1巴)和電解液(2分鐘在1巴)沖洗毛細(xì)管。最后，用粒子懸浮液填充和調(diào)節(jié)毛細(xì)管(2分鐘在1巴)。制備鄰苯二甲酸二甲酯(24.2克/升；0.125摩爾/升)、鄰苯二甲酸二乙酯(21.89克/升；0.098摩爾/升)、鄰苯二甲酸二丙酯(20.6克/升；0.0825摩爾/升)和DMSO(66克/升；0.85摩爾/升)在甲醇中的原料樣品溶液。此原料溶液用水稀釋(1:1000體積/體積)，得到125微摩爾/升的鄰苯二甲酸二甲酯、98微摩爾/升的鄰苯二甲酸二乙酯、82.5微摩爾/升的鄰苯二甲酸二丙酯和850微摩爾/升的DMSO的樣品溶液。在5秒鐘內(nèi)在50巴下流體動(dòng)力學(xué)地注入樣品。制備柳丁氨醇、苯海拉明和咪唑各自以1毫克/毫升在甲醇中的原料樣品溶液。分析前，用電解液將此原料溶液稀釋至所需的濃度。質(zhì)譜分析在裝備有以正電離方式操作的直角ESI界面的安捷倫科技(AgilentTechnologies)LC/MSD離子阱SL質(zhì)譜儀上進(jìn)行檢測(cè)。電噴電壓為4千伏(毛細(xì)管的出口維持在地面電位(groundpotential))。將由0.5%(體積/體積)在水中的甲酸和甲醇(1/1體積/體積)組成的鞘流液通過AgilentTechnologies系列1100四元泵以0.120毫升/分鐘抽吸，并且通過固定分隔板(fixedsplitter)以1:20進(jìn)行分流。使用AgilentTechnologies三管同軸霧化器(tripletubecoaxialnebulizer)將CE設(shè)備與EST界面連接。結(jié)果和討論肥皂自由乳液聚合是傳統(tǒng)乳液聚合的一個(gè)變體。乳液穩(wěn)定性是由親水引發(fā)劑、離子引發(fā)劑、親水共單體或離子共單體的合并控制。在本研究中，將離子水溶性引發(fā)劑過硫酸鈉與疏水性單體苯乙烯和LMA—起使用。當(dāng)這些成分在水中混合時(shí)，產(chǎn)生兩相系統(tǒng)，其中一個(gè)為引發(fā)劑富水相，另一個(gè)為單體相。在水相中引發(fā)劑和單體間的反應(yīng)產(chǎn)生小的表面活性基團(tuán)低聚物。使用攪拌來產(chǎn)生有效地俘獲表面活性低聚物基團(tuán)的小單體液滴。因此，產(chǎn)生的低聚物基團(tuán)在水和單體相之間的界面聚集，因此乳化此系統(tǒng)。獲得的粒子懸浮液含有污染物，例如，未反應(yīng)的或分解的自由基引發(fā)劑和單體和無機(jī)陽離子(例如，來自自由基引發(fā)劑的Na+)，它們潛在地可能對(duì)分離和檢測(cè)產(chǎn)生負(fù)面效應(yīng)。針對(duì)去離子水的連續(xù)流、使用高截留分子量膜的滲析被用來純化。第一個(gè)粒子(A)的平均直徑為910納米(相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為19%，n=89)。用低總體單體含量、高聚合溫度和作為共溶劑的丙酮制備的粒子(B)的平均直徑為157納米(SSD是22X，n=60)。粒子(A禾卩B)具有由苯乙烯和LMA組成的疏水核以及含有強(qiáng)的陽離子交換硫酸根的親水表面。電解液中乙腈的含量在0到40%間變化(體積/體積)，并且研究了乙腈濃度對(duì)保留因子(k，)、溶解度(ig和效率(N)的影響，就像圖1所顯示的。直線的斜率遵循和分析物的對(duì)數(shù)P值相同的順序，鄰苯二甲酸二丙酯最高，緊跟著的是鄰苯二甲酸二甲酯和鄰苯二甲酸二乙酯。從圖l也可以看出，溶解度隨乙腈含量降低以指數(shù)方式增長(zhǎng)，這有望于RP分離。鄰苯二甲酸酯的RP-CFF-CEC分離在圖2中顯示。本研究中所使用的粒子有高的負(fù)移動(dòng)，導(dǎo)致寬的遷移時(shí)窗(在未保留EOF標(biāo)記物洗脫和粒子洗脫之間的時(shí)間)。因?yàn)楦叩姆蛛x效度和寬的遷移時(shí)窗，此技術(shù)的峰-容量很好，潛在能溶解超過100個(gè)峰。對(duì)粒子對(duì)于分析物信號(hào)和基線噪音的影響進(jìn)行了簡(jiǎn)單研究。基線噪音和分析物信號(hào)都沒有受大大的影響，當(dāng)粒子含量提高一倍(從3.6到7.2毫克/毫升)時(shí)。這個(gè)效應(yīng)是由于粒子從直角電噴界面的分析物中的有效分離。粒子有強(qiáng)的陽離子交換表面，使它們能夠用作強(qiáng)離子交換吸附劑。三個(gè)模型復(fù)合物，短效的32腎上腺素受體拮抗劑柳丁氨醇、抗阻胺藥苯海拉明和芳香咪唑，被用于研究IE-CFF-CEC中粒子的用途。分析物的堿性對(duì)于柳丁氨醇是最高的(pK^9.22土0.47)，其次是苯海拉明(pKa-8.76士0.28)和咪唑(pKa=7.18±0.61)。分析物的親水性遵循下述順序苯海拉明(logP二3.662士0.369)、柳丁氨醇(logP-0.015士0.301)和咪唑(logP-0.161士0.241)。使用AdvancedChemistryDevelopmentSoftwareV8.14(ACDLabs，Toronto,力口拿大)計(jì)算該值。最初的研究發(fā)現(xiàn)苯海拉明被最強(qiáng)地保留下來，接下來是苯海拉明和咪唑。因此保留遵循分析物的疏水性。圖3顯示了胺的CE分離和CFF-CEC分離。顯然CFF-CEC分離已經(jīng)改變了和CE分離相比的洗脫順序。苯海拉明被最強(qiáng)地保留下來，因此沒有被檢測(cè)到。從圖3還可見基線噪音和分析物信號(hào)都沒有很大地受粒子存在的影響。為了調(diào)查疏水性對(duì)保留的影響，通過改變粒子懸浮液中乙腈的濃度而進(jìn)行了一系列的分離。然而，在40%乙腈時(shí)檢測(cè)到苯海拉明，雖然苯海拉明被很強(qiáng)地保留。用CFF-CEC的胺的分離很可能由于混合方式保留機(jī)制，加上離子相互作用和疏水效應(yīng)的貢獻(xiàn)。也可以發(fā)現(xiàn)，k，不隨電解液pH發(fā)生明顯變化。對(duì)于鄰苯二甲酸二甲酯、鄰苯二甲酸二乙酯和鄰苯二甲酸二丙酯，k，與pH函數(shù)回歸線的斜率各自為0.0005、0.0002和0.0027。對(duì)于鄰苯二甲酸二甲酯、鄰苯二甲酸二乙酯和鄰苯二甲酸二丙酯，k，在不同pH下的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSDs)各自為8.5%、2.8%和5.3%。這些結(jié)果顯示獲得了在上述研究范圍內(nèi)不取決于pH的優(yōu)秀的RP保留和懸浮液穩(wěn)定性。對(duì)于懸浮物是穩(wěn)定情況下的寬pH范圍使此技術(shù)既適用于具有高pKj直的RP分析物的分離，也適用于具有低pKa值的RP分析物的分離。為了進(jìn)一步測(cè)試粒子懸浮液的穩(wěn)定性，分離進(jìn)行超過九小時(shí)。新近制備的懸浮液在時(shí)間0進(jìn)行超聲處理。在這個(gè)時(shí)間段，沒有看到k'的大的變化(圖4)。對(duì)于k，的RSDs是7.4%(鄰苯二甲酸二甲酯)、6.0%(鄰苯二甲酸二乙酯)和7.0%(鄰苯二甲酸二丙酯)。選擇時(shí)間段來提高正常工作曰對(duì)于CFF-CEC的使用。制備3批相同的粒子(A)。各批之間沒有顯著差異(95%置信區(qū)間)。對(duì)于研究的鄰苯二甲酸酯，3批之間的k'的RSD在3X和11%間變化，僅稍高于在6.0%禾口7.4%之間變化的重復(fù)性。商業(yè)RP-HPLC柱的再生能力一般較低，大約為2-4%。為了研究樣品的負(fù)載容量，注入6種濃度在10微摩爾/升到1毫摩爾/升間變化的分析物溶液，計(jì)算鄰苯二甲酸二甲酯和鄰苯二甲酸二乙酯在10%峰高所得的峰值不對(duì)稱因子。發(fā)現(xiàn)鄰苯二甲酸二甲酯和鄰苯二甲酸二乙酯的不對(duì)稱因子是在理想的1甚至高達(dá)0.5毫摩爾/升附近，當(dāng)樣品含量接近1亳摩爾/升(注入的最高含量)時(shí)，不對(duì)稱因子達(dá)到約1.5，這對(duì)于量化目標(biāo)仍然是可以接受的。圖5說明了對(duì)于10微摩爾/升和1毫摩爾/升樣品含量獲得的電色譜(含量增加1000%)。這些結(jié)果表明CFF-CEC技術(shù)能被有效地用于非常寬含量范圍的量化目標(biāo)。在最低研究樣品含量獲得的數(shù)據(jù)(io微摩爾)，對(duì)于鄰苯二甲酸二甲酯、鄰苯二甲酸二乙酯、鄰苯二甲酸二丙酯，LOD計(jì)算值各自為約0.7、1.1和0.9微摩爾。作為評(píng)估，將5納升樣品注入50微升i.d.毛細(xì)管中，導(dǎo)致注入量的LOD為約3、5和4fmo1。在信噪比(S/Ns)為2時(shí)計(jì)算LOD。在最低研究含量下，獲得很好的分離率，對(duì)于鄰苯二甲酸二甲酯為超出1.1百萬理論塔板/米?？偨Y(jié)為基于CFECEC-ESI-MS使用粒子可以進(jìn)行非常有效的反相和混合方式分離(反相和離子交換)。分離能重復(fù)和再生地進(jìn)行，樣品負(fù)載范圍很大。直角電噴界面的使用使得與流動(dòng)固定相共洗脫的分析物能夠被檢測(cè)出。PEG-900酯交換粒子將甲基丙烯酸(MAA)0.109M、三羥甲基丙烷三甲基丙烯酸酯(TRIM)0.109M、AIBN8毫克和乙腈4毫升加入帶磨口蓋的硼硅酸鹽玻璃試管中，用超聲處理脫氣10分鐘，然后放入-26'C冷凍箱中，其中通過在350納米下UV-輻照引發(fā)聚合反應(yīng)4小時(shí)。使用的化學(xué)物質(zhì)與前面實(shí)施例中所用的具有相同的來源。因此，通過在3000rpm下離心IO分鐘萃取粒子，隨后使用超聲浴用甲醇中:乙酸(9:1，體積/體積)再懸浮兩次，并用甲醇再懸浮一次，每次20分鐘。將PEG900Aldrich(Gillingham，英國)(1毫升，2.5毫摩爾)加入到甲醇中的CH3ONa(0.5M，l毫升)溶液中，接著在45"C下減壓濃縮來形成堿性PEG。粒子(5.6毫克)被懸浮在CH2C12中(0.6毫升)，并在室溫?cái)嚢柘录尤雺A性PEG溶液(150微升，0.5MMalkalinePEG900)。將反應(yīng)進(jìn)行一夜，通過在3000rpm離心10分鐘萃取粒子，并在甲醇HAc(9:l,(體積/體積))中再懸浮兩次(超聲處理十分鐘)和在甲醇中再懸浮一次。粒子在室溫下儲(chǔ)存直到使用。分析前聚乙二醇化粒子在電解液中洗一次。毛細(xì)管電色譜(CEC)CEC實(shí)驗(yàn)是在HP3DCE系統(tǒng)(AgilentTechnologies,Waldbronn，德國)中進(jìn)行的，并使用ChemStation軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)加工。獲自PolymicroTechnologies(Phoenix,AZ)的熔凝硅石毛細(xì)管(70厘米長(zhǎng)，50微米i.d.和375微米o(hù).d.)用于所有的實(shí)驗(yàn)。通過將鄰苯二甲酸二甲酯、鄰苯二甲酸二乙酯、鄰苯二甲酸二丙酯和鄰苯二甲酸丁酯以0.10毫克/毫升的濃度溶解在電解液中以及將5-羥基多巴胺、腎上腺素、間羥異丙基腎上腺素、特布他林分別以50微克/毫升、30微克/毫升、10微克/毫升和4微克/毫升的濃度溶解在水中來制備樣品溶液。以流體動(dòng)力學(xué)法將樣品注入毛細(xì)管(5秒，50毫巴)中，分離電壓是20千伏(286伏/厘米)。所有的分離在環(huán)境溫度下進(jìn)行。分析前，所有的溶液和粒子懸浮液都通過超聲處理脫氣，用0.1摩爾/升的NaOH(5分鐘，1巴)、水(5分鐘，1巴)和電解液(5分鐘，1巴)淋洗毛細(xì)管。電解液由10mM乙酸銨緩沖液pH5.4和濃度在20X到40X之間變化的乙腈組成。粒子(0.5毫克/毫升)被懸浮在電解液中來形成穩(wěn)定漿液。兩種不同方法被用來建立實(shí)驗(yàn)，即部分填充技術(shù)和持續(xù)滿填充技術(shù)(fUUfillingtechnique)。在注入樣品之前，使用部分填充技術(shù)，以流體動(dòng)力學(xué)法將粒子漿液在50毫巴壓強(qiáng)下注入毛細(xì)管中。填充毛細(xì)管所需的時(shí)間確定為10分鐘，因此用于部分填充實(shí)驗(yàn)的注入時(shí)間更短。持續(xù)滿填充實(shí)驗(yàn)是通過使連續(xù)的粒子漿液經(jīng)過毛細(xì)管來進(jìn)行的。使用這個(gè)設(shè)置，樣品被注入填有漿液的毛細(xì)管中，將漿液作為電解液進(jìn)行分析。質(zhì)譜檢測(cè)使用裝備有以正電離方式運(yùn)行的直角ESI界面AgilentTechnologiesLC/MSD離子阱SL質(zhì)譜儀進(jìn)行,檢測(cè)，掃描在m/z50和300間，最大離子積累時(shí)間在50到75毫秒之間，總的離子電流(TIC)目標(biāo)在7S000到100000之間。由0.1%在水中的蟻酸和甲醇(1/1體積/體積)組成的鞘流液流通過AgilentTechnologies系列1100四元泵以0.180毫升/分鐘進(jìn)行抽取，并且通過固定分隔板以1:30進(jìn)行分流。使用AgilentTechnologies三連管同軸霧化器將CE設(shè)備連接到EST界面。直角界面阻止在持續(xù)慢填充分析中粒子進(jìn)入質(zhì)譜儀，如圖8所示。結(jié)果和討論研究了具有低濃度有機(jī)改性劑即濃度在20-40%之間的乙腈的電解液的疏水效應(yīng)。使用的樣品成分為同系列的不同鄰苯二甲酸垸基酯。這些分子沒有電荷，因此將不會(huì)有任何與負(fù)電荷流動(dòng)固定相的靜電相互作用。為了在不同分析中將內(nèi)滲透流(endoosmoticflow,EOF)的差異減至最小，保留時(shí)間必須向EOF標(biāo)記、DMSOD6的保留時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)化。此后標(biāo)準(zhǔn)化的保留時(shí)間將在整個(gè)文章中使用。重構(gòu)的離子色譜圖(RIC)將被用于識(shí)別哪個(gè)峰和那個(gè)樣品分子對(duì)應(yīng)。前面已經(jīng)顯示樣品分子的保留時(shí)間和注入毛細(xì)管中粒子的數(shù)量成比例。如圖7所示，用未帶電樣品成分進(jìn)行該反相研究的情況也是如此。有趣的觀察是，當(dāng)通過流動(dòng)固定相時(shí)，樣品分子的信號(hào)強(qiáng)度并沒有被影響，如圖8所示。實(shí)施例3磺化二乙烯基苯粒子使用前面描述的沉淀聚合協(xié)議在帶有磨口蓋的硼硅酸鹽玻璃試管中制備粒子(參見實(shí)施例2)，但使用二乙烯基苯(0.109摩爾/升)作為單體。當(dāng)粒子達(dá)到它們的由于分子量增加導(dǎo)致的溶解度限度時(shí)，粒子開始沉淀。聚合后通過在3000rpm下離心IO分鐘來萃取粒子，隨后在甲醇和乙酸溶液(9:1，體積/體積)中再懸浮2次，和在甲醇中再懸浮l次。將粒子(16毫克)懸浮在吐溫80(10毫克，O.OIOM，2毫升)水溶液中。加入(NH4)2S2O8水溶液(0.20毫升，8.8微摩爾)，并將反應(yīng)混合物在8(TC下加熱72小時(shí)。通過在3000rpm離心10分鐘來萃取衍生粒子，接著在甲醇和H20(l:l(體積/體積》溶液和甲醇中分別再懸浮(超聲處理十分鐘)兩次和一次。將粒子在室溫儲(chǔ)存直到使用。分析前，將粒子在電解液中洗滌一次。毛細(xì)管電色譜(CEC)CEC實(shí)驗(yàn)是在HP3DCE系統(tǒng)(AgilentTechnologies,Waldbronn，德國)中進(jìn)行的，并用ChemStation軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)加工。獲自PolymicroTechnologies(Phoenix，AZ)的熔凝硅石毛細(xì)管(70厘米長(zhǎng)，50微米i.d.和375微米o(hù).d.)。通過將鄰苯二甲酸二甲酯、鄰苯二甲酸二乙酯、鄰苯二甲酸二丙酯和鄰苯二甲酸丁酯以0.10毫克/毫升的濃度溶解在電解液中來制備樣品溶液。以流體動(dòng)力學(xué)法將樣品注入毛細(xì)管(5秒，50mbar)中，分離電壓是20千伏(286伏/厘米)。所有的分離在環(huán)境溫度下進(jìn)行。分析前，所有的溶液和粒子懸浮液都通過超聲處理脫氣，用0.1摩爾/升的NaOH(5分鐘，1巴)、水(5分鐘，1巴)和電解液(5分鐘，1巴)淋洗毛細(xì)管。電解液由10mM乙酸銨緩沖液pH5.4和濃度在20%到40%之間變化的乙腈組成。持續(xù)滿填充實(shí)驗(yàn)是通過使連續(xù)的粒子槳液流經(jīng)過毛細(xì)管來進(jìn)行的。使用這個(gè)設(shè)置，樣品被注入填有漿液的毛細(xì)管中，將漿液作為電解液進(jìn)行分析。使用由20%10mM醋酸銨pH5.4和80X甲醇組成的電解液以及在電解液中的由2.5毫克/毫升磺化二乙烯基苯粒子懸浮液來評(píng)價(jià)離子交換色譜法(離子色譜法、離子-離子相互作用色譜法)中的空間效應(yīng)。質(zhì)譜檢測(cè)使用裝備有以正電離方式運(yùn)行的直角ESI界面AgilentTechnologiesLC/MSD離子阱SL質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測(cè)，掃描在m/z50和300間，最大離子積累時(shí)間在50到75毫秒之間，總的離子電流(TIC)目標(biāo)在75000到100000之間。由0.1%在水中的蟻酸和甲醇(1:1體積/體積)組成的鞘流液通過AgilentTechnologies系列1100四元泵以0.180毫升/分鐘泵出，并且通過固定分隔板以1:30進(jìn)行分流。使用AgilentTechnologies三連管同軸霧化器將CE設(shè)備連接到EST界面。直角界面阻止在持續(xù)慢填充分析中粒子進(jìn)入質(zhì)譜儀。結(jié)果和討論沉淀聚合草案有利于不使用穩(wěn)定表面活性劑(stabilisingsurfactant)合成球形顆粒。由于表面活性劑降低ESI-MS中的信號(hào)強(qiáng)度，這是很重要的，因此阻止檢測(cè)可能性。由于表面活性劑可能影響粒子的衍生化并將質(zhì)疑是否提高的懸浮液穩(wěn)定性是由于衍生步驟，因而這種技術(shù)也是受歡迎的。通過使用高度稀釋高錳酸鉀溶液滴定磺化顆粒，定量確定了反應(yīng)碳碳雙鍵的轉(zhuǎn)化率。使用磺化DVB粒子分離的各個(gè)鄰苯二甲酸酯的標(biāo)準(zhǔn)化保留時(shí)間如圖9所示。為了使不同分析的內(nèi)滲透流(EOF)的差異最小化，保留時(shí)間必須向EOF標(biāo)記、DMSOD6的保留時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)化。重構(gòu)的離子色譜圖(RIC)將被用于識(shí)別哪個(gè)峰和那個(gè)樣品分子對(duì)應(yīng)。從圖9可以看出，乙腈濃度高于40%時(shí)，疏水性效應(yīng)消失。乙腈濃度較低的電解液中的相互作用較強(qiáng)。實(shí)施例4臟復(fù)合樣品基質(zhì)傳統(tǒng)分離系統(tǒng)的一個(gè)嚴(yán)重的缺點(diǎn)是固定相的污染，特別是，來自臟樣品或復(fù)合樣品基質(zhì)中的樣品。流動(dòng)固相的使用解決了這些問題。在本實(shí)施例中，通過尿樣品對(duì)食物產(chǎn)生的致癌化合物進(jìn)行量化。傳統(tǒng)上，分析尿需要實(shí)驗(yàn)樣品制備來除去樣品基質(zhì)成分，以保證固定相。在本實(shí)施例中，尿被直接注入分離柱。材料和方法使用懸浮在緩沖液中的具有親水性涂料的疏水性粒子作為流動(dòng)固定相。75厘米長(zhǎng)、內(nèi)徑50微米的毛細(xì)管用于分離。使用部分填充和持續(xù)滿填充技術(shù)引入流動(dòng)固定相。50納升用PhlP攙合(spiked)到濃度為100微摩爾/升的尿被用作樣品，并注射到負(fù)載有流動(dòng)固定相的毛細(xì)管中。盡管樣品基質(zhì)極端復(fù)雜和臟，致癌物PhIP仍被成功量化。在柱上進(jìn)行了超過100次的注射，對(duì)分離度沒有任何影響，盡管是復(fù)合基質(zhì)并缺少樣品前處理。如果用傳統(tǒng)CEC柱或HPLC柱進(jìn)行這些分析，柱將被樣品基質(zhì)分子嚴(yán)重污染。實(shí)施例5臟復(fù)合樣品基質(zhì)如實(shí)施例4所描述的進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但是分析的是血漿(樣品基質(zhì)是血漿)而不是尿。根據(jù)污染的分子，血漿是比尿更復(fù)雜的基質(zhì)。傳統(tǒng)上，為了除掉污染分子，血漿的分析需要固定相萃取，但是在這個(gè)實(shí)施例中，血漿被直接注入柱中，結(jié)果很好。通過使用在分離系統(tǒng)和檢測(cè)器(質(zhì)譜儀)之間的FAIMS界面提高檢測(cè)靈敏性迄今，使用電噴質(zhì)譜儀檢測(cè)的持續(xù)滿填充技術(shù)已經(jīng)被應(yīng)用，其中電噴使用鞘流和霧化氣，能促進(jìn)樣品成分從粒子中分離。鞘流的不足是它會(huì)稀釋從柱中洗脫出的樣品成分。由于與質(zhì)譜儀聯(lián)用的電噴電離是濃度敏感檢測(cè)技術(shù)(REF)，這種對(duì)樣品成分的稀釋使檢測(cè)靈敏度下降(稀釋相當(dāng)于減小濃度)。為了解決這個(gè)問題，質(zhì)譜儀使用者己經(jīng)使用缺鞘電噴多年了(REFFinn)，經(jīng)常和低流動(dòng)毛細(xì)管基分離技術(shù)結(jié)合。迄今，滿填充技術(shù)已經(jīng)依賴于鞘流液的使用(如上所述)。然而，隨著分離系統(tǒng)和質(zhì)譜儀間FAIMS電噴界面的使用，不需要鞘流液，因此得到更高的檢測(cè)靈敏度。這將極大地提高持續(xù)滿填充技術(shù)，不僅是靈敏度而且提高應(yīng)用數(shù)量和樣品類型。簡(jiǎn)言之，在FAIMS界面中，樣品成分通過調(diào)整電場(chǎng)中的通道從流動(dòng)固定相中分離。實(shí)施例7使用涂覆有環(huán)狀糊精惰性粒子的手性分離傳統(tǒng)上，通過溶解環(huán)狀糊精在毛細(xì)管電泳分離系統(tǒng)的電解液中，將環(huán)狀糊精用于手性分離。當(dāng)分析物(例如，對(duì)映體對(duì)A和B)通過毛細(xì)管傳輸時(shí)，A和B將被分離，因?yàn)樗鼈兣c手性環(huán)狀糊精的相互作用不同。然而，檢測(cè)將遇到環(huán)狀糊精分子提高背景噪音的問題。本實(shí)施例顯示解決了這個(gè)問題。在我們發(fā)明的這個(gè)實(shí)施例中，環(huán)狀糊精分子作為惰性粒子上的涂層被固定化。此流動(dòng)固相的惰性核確?？焖儋|(zhì)量遷移，因?yàn)锳和B僅僅和環(huán)狀糊精涂層相互作用，并不是和粒子核。對(duì)于此系統(tǒng)，增加的背景噪音將不是問題，因?yàn)樵跈z測(cè)前，粒子從分析物(A和B)中分離。和傳統(tǒng)技術(shù)相比這是個(gè)很大的優(yōu)點(diǎn)。實(shí)施例8通過使用涂覆在粒子上的垸基二醇(alkylediole)作為限進(jìn)材料(restrictedaccessmaterial)(RAM)的粒子通過使疏水粒子和烷基二醇反應(yīng)，產(chǎn)生的粒子適合存在于富蛋白質(zhì)基質(zhì)中的分子的分析。蛋白質(zhì)被排除通過這個(gè)涂層來到達(dá)粒子核以相互作用。將甲基丙烯酸(MAA)0.0505M、三羥甲基丙烷三甲基丙烯酸酯(TRIM)0.0505M、AIBN8毫克和乙腈4毫升加入到帶有磨口蓋的硼硅酸鹽玻璃試管中，超聲處理10分鐘并在氮?dú)饬飨旅摎?分鐘，放入-26t:的冷凍箱中，其中通過在350納米下UV-輻照引發(fā)聚合反應(yīng)4小時(shí)。使用的化學(xué)物質(zhì)與前面實(shí)施例中所用的具有相同的來源。此后，通過在3000rpm下離心10分鐘萃取粒子，隨后使用超聲浴用甲醇:乙酸(9'.1，體積/體積)再懸浮兩次，并用甲醇再懸浮一次，每次20分鐘。將所得的粒子在乙腈中再次懸浮，將手性丙烯酸單體和自由基引發(fā)劑一起加入。使用熱水浴(6(TC)引發(fā)聚合反應(yīng)過夜。本發(fā)明實(shí)施方式的要素和成分可以在物理上、功能上和邏輯上以任何適當(dāng)?shù)姆绞綄?shí)現(xiàn)。確實(shí)，官能團(tuán)應(yīng)該以單個(gè)單元、多個(gè)單元或作為其它官能團(tuán)單元的部分來實(shí)現(xiàn)。同樣地，本發(fā)明可以以單個(gè)單元或者可以物理地和功能地分布在不同的單元間來實(shí)現(xiàn)。盡管參照具體實(shí)施方式已經(jīng)在上面描述了本發(fā)明，但本發(fā)明并不是局限于在此闡明的特定的形式。更合適的，本發(fā)明僅受隨附的權(quán)利要求的限制，與上面的具體實(shí)施方式不同的其它實(shí)施方式也一樣可能在這些隨附的權(quán)利要求的范圍內(nèi)。在權(quán)利要求書中，術(shù)語"包含"并不排除其它成分或步驟的存在。而且，雖然單個(gè)列出，多個(gè)方式、成分和方法步驟也可能實(shí)現(xiàn)。另外，雖然在不同的權(quán)利要求中可能包括單個(gè)特征，但這些特征也可以組合在一起，不同權(quán)利要求中的包含物并不暗示這些特征的結(jié)合不是可行的和/或有利的。另外，單個(gè)參照并不排除多元性。術(shù)語"一"、"第一"、"第二"等并不排除多個(gè)。在權(quán)利要求中提供的參考標(biāo)記僅僅作為澄清實(shí)施例，并不是以任何方式限制權(quán)利要求范圍的。權(quán)利要求1、樣品成分的色譜分離中的流動(dòng)固相中所用的粒子，其特征在于，所述粒子含有核和涂層，其中所述核與至少一種分析物相互作用，所述涂層本質(zhì)上預(yù)防絮凝或聚集。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的粒子，其中，所述核實(shí)質(zhì)上是疏水的，所述涂層實(shí)質(zhì)上是親水的。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的粒子，其中，所述涂層實(shí)質(zhì)上是疏水的，所述核實(shí)質(zhì)上是親水的。4、根據(jù)權(quán)利要求l所述的粒子，其中，所述粒子是多孔的。5、根據(jù)權(quán)利要求l所述的粒子，其中，所述粒子是無孔的。6、根據(jù)權(quán)利要求1所述的粒子，其中，所述粒子是中性的、陽離子的、陰離子的或兩性離子的。7、根據(jù)權(quán)利要求l所述的粒子，其中，所述粒子是單克隆或多克隆的。8、根據(jù)權(quán)利要求l所述的粒子，其中，所述涂層是多相的或均相的。9、根據(jù)權(quán)利要求1所述的粒子，其中，所述粒子是單分散的或多分散的。10、根據(jù)權(quán)利要求1所述的粒子，其中，所述粒子是手性的或非手性的。11、根據(jù)權(quán)利要求l所述的粒子，其中，所述核含有石墨、鈦氧化物、瓊脂糖、氧化鋁、聚合物，所述聚合物是由選自由甲基丙烯酸酯、乙烯基吡啶、丙烯酸酯、苯乙烯、二乙烯基苯和硅垸組成的組中的一種或多種單體聚合形成的。12、根據(jù)權(quán)利要求l所述的粒子，其中，所述核的表面含有磷酸根、膦酸、羧酸、醛、環(huán)氧化物、伯胺、仲胺、叔胺、季銨、酯、醚和/或羥基。13、根據(jù)權(quán)利要求l所述的粒子，其中，所述涂層含有線性聚合物、支化聚合物、交替共聚物和/或嵌段共聚物。14、根據(jù)權(quán)利要求13所述的粒子，其中，所述聚合物和/或共聚物選自由聚乙二醇、聚丙二醇、聚乙烯醇和/或聚乙烯亞胺所組成的組中。15、根據(jù)權(quán)利要求13所述的粒子，其中，所述聚合物和/或共聚物含有選自由醚、酯、磷酸根、膦酸、伯胺、仲胺、叔胺、季銨、環(huán)氧化物、羧酸、磺酸和羥基所組成的組中的一種或幾種官能團(tuán)。16、根據(jù)權(quán)利要求1所述的粒子，其中，所述涂層含有含選自由酯、醚、伯胺、仲胺、叔胺、季銨、環(huán)氧化物、硫酸酯、磺酸、羧酸、羥基、磷酸根、膦酸和/或酰胺所組成的組中的一種或幾種官能團(tuán)的小分子。17、根據(jù)權(quán)利要求16所述的粒子，其中，所述小分子的分子量在10克/摩爾到10000克/摩爾之間的范圍內(nèi)。18、根據(jù)權(quán)利要求17所述的粒子，其中，所述小分子為烴或氟代烴。19、根據(jù)權(quán)利要求1所述的粒子，其中，所述涂層含有一個(gè)或多個(gè)選自由蛋白質(zhì)、脫氧核糖核酸、核糖核酸、纖維素、淀粉、再生纖維素、改性淀粉和/或改性纖維素所組成的組中的物質(zhì)。20、根據(jù)權(quán)利要求1所述的粒子，其中，所述核是帶電的，所述涂層是中性的。21、根據(jù)權(quán)利要求l所述的粒子，其中，所述核是中性的，所述涂層是帶電的。22、根據(jù)權(quán)利要求l所述的粒子，其中，所述核或涂層是手性的。23、根據(jù)權(quán)利要求l所述的粒子，其中，所述粒子是交聯(lián)的。24、根據(jù)權(quán)利要求l所述的粒子，其中，所述粒子具有比至少一種分析物更大的質(zhì)荷比m/z。25、制備權(quán)利要求1所述粒子的方法，其中，所述核是聚合物，該方法包括一個(gè)或幾個(gè)以下的步驟將單體聚合形成核；對(duì)聚合物的取代基進(jìn)行改性；對(duì)核的表面進(jìn)行改性；對(duì)所述核進(jìn)行衍生；和用另一種聚合物涂覆所述核。26、權(quán)利要求1到24中任意一項(xiàng)所述的粒子在用于從其它樣品成分中進(jìn)行至少一種分析物的色譜分離以及檢測(cè)至少一種分析物中的用途，其中，所述檢測(cè)是通過使用具有角度電離源的質(zhì)量分析器來實(shí)現(xiàn)的。全文摘要在此公開了樣品成分的色譜分離中的流動(dòng)固相中所用的粒子。這些粒子含有核和涂層，其中所述核與至少一種分析物相互作用，所述涂層實(shí)質(zhì)上預(yù)防絮凝或聚集。文檔編號(hào)G01N30/72GK101336133SQ200680048662公開日2008年12月31日申請(qǐng)日期2006年11月9日優(yōu)先權(quán)日2005年11月9日發(fā)明者P·斯佩格爾,P·維貝里申請(qǐng)人:納諾瑟公司