專利名稱：一種改進(jìn)的用于對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類的試劑及方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及細(xì)胞分類所用的試劑及分類方法，特別是涉及一種對(duì)血液中的白細(xì)胞進(jìn)行分類時(shí)所用的試劑及分類方法。
背景技術(shù)：
在臨床檢查領(lǐng)域中，用患者的全血對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類計(jì)數(shù)工作，在診斷各種疾病時(shí)是極其常見并且非常重要的。
迄今為止，用于白細(xì)胞分類的裝置及方法的專利發(fā)表了許多。其中，中國(guó)專利CN95115317.X公開了一種通過兩種試劑完成白細(xì)胞的五分類的方法。該兩種試劑除都含有非離子表面活性劑和緩沖劑外，第一試劑至少含一種離子表面活性劑和一種帶陰離子的有機(jī)化合物，將血細(xì)胞分成淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸細(xì)胞以及嗜堿細(xì)胞加中性粒細(xì)胞四類，第二試劑至少含一種離子表面活性劑，將血細(xì)胞分成嗜堿細(xì)胞和其他細(xì)胞類群。該方法通過綜合兩種結(jié)果將白細(xì)胞五分類。檢測(cè)系統(tǒng)為激光散射法。
另外，美國(guó)專利5,677,183、5,618,733、5,731,206，以及申請(qǐng)?zhí)枮?8101677、審定號(hào)為CN1018586B的中國(guó)專利，均公開了利用光散射法結(jié)合兩個(gè)通道對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行5分類的方法。
但是，在利用這些現(xiàn)有方法對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類的過程中，單核細(xì)胞常常介于淋巴細(xì)胞與中性粒細(xì)胞之間，聚類性不明顯，與淋巴細(xì)胞及中性粒細(xì)胞的分界不明顯，導(dǎo)致分類結(jié)果與實(shí)際結(jié)果出現(xiàn)偏差。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是為了針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的問題，提供一種能在一個(gè)通道內(nèi)快速溶解紅細(xì)胞并對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類，并且提高單核細(xì)胞的聚類性，增強(qiáng)單核細(xì)胞分類效果，使分類結(jié)果更為準(zhǔn)確的試劑及方法。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案本發(fā)明公開了一種改進(jìn)的用于對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類的試劑，所述試劑包括a、可以溶解紅細(xì)胞，且使白細(xì)胞的細(xì)胞膜部分損失的表面活性劑，所述表面活性劑選自陽(yáng)離子表面活性劑、兩性表面活性劑以及它們的組合；b、含有苯環(huán)或雜環(huán)的有機(jī)化合物，并且當(dāng)所述表面活性劑為陽(yáng)離子表面活性劑時(shí)，所述有機(jī)化合物為帶有陰離子基團(tuán)的有機(jī)化合物，當(dāng)所述表面活性劑為兩性表面活性劑或者兩性表面活性劑與陽(yáng)離子表面活性劑的組合時(shí)，所述有機(jī)化合物為帶陰離子基團(tuán)或帶陽(yáng)離子基團(tuán)的有機(jī)化合物；c、調(diào)節(jié)pH值的緩沖劑。
所述試劑進(jìn)一步包括醇類，其在本發(fā)明的試劑中一方面發(fā)揮助溶劑的作用，另一方面對(duì)反應(yīng)的過程起到促進(jìn)與加速作用。
所述試劑進(jìn)一步包括酸性有機(jī)物或色素。
優(yōu)選的，所述緩沖劑是能夠?qū)H值調(diào)整在2～6范圍內(nèi)的緩沖劑。
所述陽(yáng)離子表面活性劑優(yōu)選具有式I所示結(jié)構(gòu)的季銨鹽型陽(yáng)離子表面活性劑， 其中R1為C原子數(shù)6-14的烷基或鏈烯基，優(yōu)選辛基、癸基或月桂基；R2及R3為C原子數(shù)1-4的烷基或鏈烯基，優(yōu)選甲基、乙基或丙基；R4為C原子數(shù)為1-4的烷基或鏈烯基或芐基；X為鹵素原子。
所述兩性表面活性劑優(yōu)選具有式II所示結(jié)構(gòu)的兩性表面活性劑， 其中，R5為C原子數(shù)6-14的烷基或鏈烯基，優(yōu)選辛基、癸基或月桂基；R6及R7為原子數(shù)1-4的烷基或鏈烯基，優(yōu)選甲基、乙基或丙基。
本發(fā)明還公開了一種采用上述的試劑對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類的方法，所述方法包括步驟，將所述的試劑加入到全血樣本中，使白細(xì)胞分成與淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞分別對(duì)應(yīng)的3個(gè)集團(tuán)以及與中性粒細(xì)胞和嗜堿粒細(xì)胞相對(duì)應(yīng)的1個(gè)集團(tuán)共計(jì)4個(gè)集團(tuán)，然后通過測(cè)定細(xì)胞大小和形態(tài)信息對(duì)所分成的四個(gè)集團(tuán)進(jìn)行分類計(jì)數(shù)。
所述測(cè)定細(xì)胞大小信息利用激光散射法采用低角度散射光完成，測(cè)定角度為2-6度；所述測(cè)定細(xì)胞形態(tài)信息利用激光散射法采用高角度散射光完成，測(cè)定角度為8-20度。
由于采用了以上的方案，使本發(fā)明具備的有益效果在于
利用本發(fā)明的試劑及方法進(jìn)行白細(xì)胞分類時(shí)，不僅能夠?qū)准?xì)胞分成與淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸細(xì)胞分別對(duì)應(yīng)的3個(gè)集團(tuán)，以及與中性粒細(xì)胞和嗜堿細(xì)胞相對(duì)應(yīng)的1個(gè)集團(tuán)共計(jì)4個(gè)集團(tuán)，并且，所分出單核細(xì)胞集團(tuán)聚類性明顯，與淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞的分界清晰；試劑處理后的血樣經(jīng)散射光檢測(cè)后，對(duì)不同比例的單核細(xì)胞均能形成獨(dú)立的散點(diǎn)區(qū)，且位置固定，不受細(xì)胞核左(右)移的影響，使分類結(jié)果更符合實(shí)際情況。


圖1是利用本發(fā)明實(shí)施例1的試劑對(duì)A血樣進(jìn)行白細(xì)胞四分類計(jì)數(shù)時(shí)的低角度散射光及高角度散射光的散射圖。
圖2是利用本發(fā)明實(shí)施例2的試劑對(duì)B血樣進(jìn)行白細(xì)胞四分類計(jì)數(shù)時(shí)的低角度散射光及高角度散射光的散射圖。
圖3是利用本發(fā)明實(shí)施例3的試劑對(duì)C血樣進(jìn)行白細(xì)胞四分類計(jì)數(shù)時(shí)的低角度散射光及高角度散射光的散射圖。
圖4(A)(B)(C)是利用對(duì)比例中的試劑分別對(duì)A、B、C血樣進(jìn)行白細(xì)胞四分類計(jì)數(shù)時(shí)的低角度散射光及高角度散射光的散射圖。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明的試劑與方法不僅可用于對(duì)全血中的白細(xì)胞進(jìn)行四分類(將白細(xì)胞分成與淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸細(xì)胞分別對(duì)應(yīng)的3個(gè)集團(tuán)，以及與中性粒細(xì)胞和嗜堿細(xì)胞相對(duì)應(yīng)的1個(gè)集團(tuán)共計(jì)4個(gè)集團(tuán))，并且利用本發(fā)明的試劑和方法進(jìn)行白細(xì)胞分類時(shí)還能夠提高單核細(xì)胞分類結(jié)果的準(zhǔn)確性。
將本發(fā)明的試劑加入全血中后，試劑中的成分能夠迅速溶解紅細(xì)胞，并使不同類型的白細(xì)胞發(fā)生形態(tài)與大小方面的差異，分成與淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞相對(duì)應(yīng)的3個(gè)集團(tuán)以及與中性粒細(xì)胞和嗜堿粒細(xì)胞相對(duì)應(yīng)的1個(gè)集團(tuán)共4個(gè)集團(tuán)。再使用激光散射法，采用低角度散射光測(cè)定細(xì)胞的大小信息以及采用高角度散射光測(cè)定細(xì)胞的形態(tài)信息，并通過對(duì)散射光進(jìn)行檢測(cè)，從而能夠?qū)λ膫€(gè)集團(tuán)的白細(xì)胞分別進(jìn)行分類計(jì)數(shù)。其中，所分出單核細(xì)胞集團(tuán)聚類性明顯，與淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞的分界清晰；試劑處理后的血樣經(jīng)散射光檢測(cè)后，對(duì)不同比例的單核細(xì)胞均能形成獨(dú)立的散點(diǎn)區(qū)，且位置固定，不受細(xì)胞核左(右)移的影響，分類結(jié)果更符合實(shí)際情況。
本發(fā)明試劑的主要成分包括a、可以溶解紅細(xì)胞，且使白細(xì)胞的細(xì)胞膜部分損失的表面活性劑，所述表面活性劑選自陽(yáng)離子表面活性劑、兩性表面活性劑以及它們的組合；
b、含有苯環(huán)或雜環(huán)的有機(jī)化合物，并且當(dāng)所述表面活性劑為陽(yáng)離子表面活性劑時(shí)，所述有機(jī)化合物為帶有陰離子基團(tuán)的有機(jī)化合物，當(dāng)所述表面活性劑為兩性表面活性劑或者兩性表面活性劑與陽(yáng)離子表面活性劑的組合時(shí)，所述有機(jī)化合物為帶陰離子基團(tuán)或帶陽(yáng)離子基團(tuán)的有機(jī)化合物；c、調(diào)節(jié)pH值的緩沖劑。
作為上述的陽(yáng)離子表面活性劑，優(yōu)選季銨鹽型表面活性劑，其結(jié)構(gòu)式可以如下式I所示 式I表示C原子總數(shù)為9-26的陽(yáng)離子表面活性劑，其中R1為C原子數(shù)6-14的烷基或鏈烯基；R2及R3為C原子數(shù)1-4的烷基或鏈烯基；R4為C原子數(shù)為1-4的烷基或鏈烯基或芐基；X為鹵素原子。作為R1的原子數(shù)6-14的烷基或鏈烯基，可以是己基、辛基、癸基、月桂基、十四烷基等，特別優(yōu)選辛基、癸基、月桂基等的直鏈烷基。作為R2及R3的C原子數(shù)1-4的烷基或鏈烯基可以是甲基、乙基、丙基、丁基、丁烯基等，特別優(yōu)選甲基、乙基、丙基。
作為上述的兩性表面活性劑，優(yōu)選具有式II所示結(jié)構(gòu)的兩性表面活性劑 其中，R5為C原子數(shù)6-14的烷基或鏈烯基；R6及R7為原子數(shù)1-4的烷基或鏈烯基。作為R5的原子數(shù)6-14的烷基或鏈烯基，可以是己基、辛基、癸基、月桂基、十四烷基等，特別優(yōu)選辛基、癸基、月桂基等的直鏈烷基。作為R6及R7的C原子數(shù)1-4的烷基或鏈烯基可以是甲基、乙基、丙基、丁基、丁烯基等，特別優(yōu)選甲基、乙基、丙基。
上述表面活性劑，其用量應(yīng)足以溶解紅細(xì)胞，并造成白細(xì)胞的細(xì)胞膜部分損失。表面活性劑在本發(fā)明的試劑系統(tǒng)中的具體用量為50-6000mg/L，優(yōu)選200-5000mg/L，最優(yōu)選500-4000mg/L。具體用量也可以根據(jù)使用的表面活性劑的種類作適當(dāng)調(diào)整。
這種組合能使單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞從大小上完全分離，且位置固定，同時(shí)從形態(tài)上和粒細(xì)胞完全分離并且方便對(duì)細(xì)胞的數(shù)量進(jìn)行識(shí)別。
表1列舉了能夠用于本發(fā)明的一些表面活性劑的種類及其最適用量。
表1表面活性劑的最適用量

無論使用哪一種表面活性劑，其對(duì)白細(xì)胞的溶解力，只要能使白細(xì)胞膜開孔到胞質(zhì)可以部分溢出，與陽(yáng)離子結(jié)合的有機(jī)化合物能夠進(jìn)入的程度即可，最好使用遠(yuǎn)遠(yuǎn)少于使細(xì)胞完全裸核時(shí)的用量。表面活性劑的溶血效果與所帶側(cè)鏈(陽(yáng)離子表面活性劑中的R1、兩性表面活性劑中的R5)的鏈長(zhǎng)是成正比的，側(cè)鏈的C原子數(shù)越多，溶血能力越強(qiáng)，所需要的濃度就越低。
本發(fā)明的主要成分除表面活性劑外，還包括一種含有苯環(huán)或雜環(huán)的有機(jī)化合物，并且當(dāng)所用的表面活性劑為陽(yáng)離子表面活性劑時(shí)，該有機(jī)化合物選用帶有陰離子基團(tuán)的有機(jī)化合物，當(dāng)所用的表面活性劑為兩性表面活性劑或者兩性表面活性劑與陽(yáng)離子表面活性劑的組合時(shí)，該有機(jī)化合物可以選用帶陰離子基團(tuán)有機(jī)化合物，也可以選用帶陽(yáng)離子基團(tuán)的有機(jī)化合物。所述的雜環(huán)為C原子數(shù)大于6的雜環(huán)。
本發(fā)明中使用的陰離子或陽(yáng)離子有機(jī)化合物，可以和細(xì)胞內(nèi)不同離子結(jié)合導(dǎo)致細(xì)胞類群間形態(tài)差異。這種有機(jī)化合物，帶有苯環(huán)或C原子數(shù)大于6的雜環(huán)，以及陰離子基團(tuán)(如羧基、磺酸基等)或陽(yáng)離子基團(tuán)(如N+，NH4+等)。陽(yáng)離子有機(jī)化合物如吡啶、吡咯、2-吡啶基硫尿、2-萘胺等，陰離子有機(jī)化合物如1-萘乙酸、1，4，5，8-萘四甲酸、對(duì)苯二甲酸、鄰苯二甲酸、鉻變酸、萘磺酸及其衍生物和鹽類等。有機(jī)化合物在本發(fā)明的試劑系統(tǒng)中的使用量通常為50-1000mg/L，優(yōu)選100-500mg/L。
本發(fā)明中，還含有調(diào)整PH用的緩沖劑。對(duì)于緩沖劑的種類沒有特定的要求，可以為常用緩沖體系如甲酸、鄰苯二甲酸、乙酸、磷酸、TRIS、硼酸、碳酸等。本發(fā)明中PH范圍對(duì)四分類也沒有絕對(duì)影響，但通過調(diào)節(jié)PH可以改變單核細(xì)胞的分類效果。在本發(fā)明中，分類單核細(xì)胞的最適PH為2-6。緩沖劑的使用量為10-200mM。
此外，本發(fā)明中還可以含有一定量的醇類。醇類在本發(fā)明的試劑中一方面發(fā)揮助溶劑的作用，另一方面對(duì)反應(yīng)的過程起到促進(jìn)與加速作用。本發(fā)明對(duì)醇類的種類沒有特別要求，甲醇、乙醇、異丙醇、2-苯氧乙醇等均可用于本發(fā)明。醇類占本發(fā)明的試劑的體積百分比濃度通常為0.05-5％左右。
此外，為了改善將嗜酸細(xì)胞從粒細(xì)胞中分離出來的效果，在本發(fā)明的試劑系統(tǒng)中加入一定量的酸性有機(jī)物或色素如酸性藍(lán)系列、直接藍(lán)、酸性綠、酸性黃、酸性橙、甲基紅、甲基橙、苯胺藍(lán)、茜素黃等。使用量為50-1000mg/L，優(yōu)選100-500mg/L。
在本發(fā)明的試劑系統(tǒng)中，還可以加入一定量的NaCl以調(diào)整溶液的滲透壓至合適范圍。
本發(fā)明的試劑系統(tǒng)可以配制為一種試劑，也可以配制為兩種試劑組合使用。作為兩種試劑組合使用時(shí)，兩種試劑的pH值可以相同，也可以不同。
利用本發(fā)明的方法對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類的具體過程包括，將本發(fā)明的上述試劑加入全血中混合一定時(shí)間后，檢測(cè)細(xì)胞的形態(tài)和大小信息，根據(jù)細(xì)胞形態(tài)與大小的不同將細(xì)胞分成與淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸細(xì)胞相對(duì)應(yīng)的3個(gè)集團(tuán)以及與中性粒細(xì)胞和嗜堿細(xì)胞相對(duì)應(yīng)的1個(gè)集團(tuán)共4個(gè)集團(tuán)，檢測(cè)系統(tǒng)同時(shí)對(duì)四類細(xì)胞進(jìn)行分類計(jì)數(shù)。
血樣與本發(fā)明試劑的混合比例沒有特別的限制，但通常按照血樣與本發(fā)明試劑的體積比為1∶10～100的比例混合。通常在兩者混合10～30秒后就可以進(jìn)行檢測(cè)。
本發(fā)明檢測(cè)細(xì)胞的形態(tài)和大小信息的方法優(yōu)選使用激光檢測(cè)法。該方法可以采用測(cè)定角度為2-6度的低角度散射光來測(cè)定細(xì)胞的大小信息，并采用測(cè)定角度為8-20度的高角度散射光測(cè)定細(xì)胞的形態(tài)信息。而散射光的檢測(cè)可以通過常用的光電二極管傳感器完成。
下面列舉具體的實(shí)施例。
實(shí)例1一種用于白細(xì)胞四分類的試劑，該試劑包括以下成分NaCl 0.3g乙醇 2.0g丙三醇 0.75g癸基三甲基溴化銨 6.1g1-萘乙酸 0.4g乙酸 1.95g酸性藍(lán) 0.15g補(bǔ)水到 1LPH 3.8按上述配方配制的試劑將PH調(diào)整到3.8，滲透壓120mOsm。
取A血樣30μl，在其中加入0.98ml上述試劑?；旌?3秒后開始用激光檢測(cè)法檢測(cè)白細(xì)胞。采用測(cè)定角度為2-6度的低角度散射光測(cè)定細(xì)胞的大小信息，并采用測(cè)定角度為8-20度的高角度散射光測(cè)定細(xì)胞的形態(tài)信息。
結(jié)果如圖1所示，單核細(xì)胞能形成獨(dú)立的散點(diǎn)區(qū)，且位置固定，聚類性明顯，與淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞的分界清晰；同時(shí)白細(xì)胞被分成淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸細(xì)胞及中性粒細(xì)胞+嗜堿細(xì)胞四類。
實(shí)例2一種用于白細(xì)胞四分類的試劑，該試劑包括以下成分NaCl 0.2g十二烷基谷氨酸 1g十二烷基三甲基氯化銨 2.8g2-苯氧乙醇 3g鄰苯二甲酸 1g酸性藍(lán) 0.4g補(bǔ)水到 1L
PH 2.5按上述配方配制的試劑將PH調(diào)整到2.5，滲透壓100mOsm。
取B血樣30μl，在其中加入2ml上述試劑?；旌?5秒后開始用激光檢測(cè)法檢測(cè)白細(xì)胞。采用測(cè)定角度為2-6度的低角度散射光測(cè)定細(xì)胞的大小信息，并采用測(cè)定角度為8-20度的高角度散射光測(cè)定細(xì)胞的形態(tài)信息。
所得到結(jié)果如圖2所示，單核細(xì)胞能形成獨(dú)立的散點(diǎn)區(qū)，且位置固定，聚類性明顯，與淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞的分界清晰；同時(shí)白細(xì)胞被分成淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸細(xì)胞及中性粒細(xì)胞+嗜堿細(xì)胞四類。
實(shí)例3一種用于白細(xì)胞四分類的試劑，該試劑包括以下成分NaCl 0.3g十二烷基甘氨酸 1g甲醇 5g2-萘胺 0.5g磷酸二氫鈉 2.9g磷酸氫二鈉 2.3g酸性藍(lán) 0.4g補(bǔ)水到 1LPH 5.8按上述配方配制的試劑將PH調(diào)整到5.8，滲透壓200mOsm。
取C血樣30μl，在其中加入1.5ml上述試劑。混合18秒后開始用激光檢測(cè)法檢測(cè)白細(xì)胞。采用測(cè)定角度為2-6度的低角度散射光測(cè)定細(xì)胞的大小信息，并采用測(cè)定角度為8-20度的高角度散射光測(cè)定細(xì)胞的形態(tài)信息。
所得到結(jié)果如圖3所示，單核細(xì)胞能形成獨(dú)立的散點(diǎn)區(qū)，且位置固定，聚類性明顯，與淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞的分界清晰；同時(shí)白細(xì)胞被分成淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸細(xì)胞及中性粒細(xì)胞+嗜堿細(xì)胞四類。
上述實(shí)施例中所用的A、B、C三份血樣分別含有不同比例單核細(xì)胞，上述實(shí)施例表明，利用本發(fā)明的試劑及方法進(jìn)行白細(xì)胞分類時(shí)，不僅能夠?qū)准?xì)胞進(jìn)行四分類，并且，對(duì)不同比例的單核細(xì)胞均能形成獨(dú)立的散點(diǎn)區(qū)，且位置固定，不受細(xì)胞核左(右)移的影響，使分類結(jié)果更符合實(shí)際情況。
對(duì)比例一種用于白細(xì)胞四分類的試劑，該試劑由以下成分組成NaCl 0.2g甲醇 3g聚氧乙烯(23)十六烷基醚(Brij 35)(非離子表面活性劑) 1.4g十二烷基磺酸鈉(SDS)(陰離子表面活性劑) 1.2g甲酸 1.3g酸性藍(lán) 0.15g補(bǔ)水到 1LPH 3.8按上述配方配制的試劑將PH調(diào)整到3.8，滲透壓130mOsm。
取上述實(shí)施例中所用的A、B、C三份血樣各30μl，分別在其中加入1.5ml上述試劑。混合15秒后開始用激光檢測(cè)法檢測(cè)白細(xì)胞。采用測(cè)定角度為2-6度的低角度散射光測(cè)定細(xì)胞的大小信息，并采用測(cè)定角度為8-20度的高角度散射光測(cè)定細(xì)胞的形態(tài)信息。
結(jié)果如圖4中(A)、(B)、(C)所示，圖中顯示雖然白細(xì)胞被分成淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸細(xì)胞及中性粒細(xì)胞+嗜堿細(xì)胞四類，但單核細(xì)胞介于淋巴細(xì)胞與中性粒細(xì)胞之間，聚類性不明顯，與淋巴細(xì)胞及中性粒細(xì)胞的分界不明顯，且位置不穩(wěn)定。
權(quán)利要求
1.一種改進(jìn)的用于對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類的試劑，其特征在于所述試劑包括a、可以溶解紅細(xì)胞，且使白細(xì)胞的細(xì)胞膜部分損失的表面活性劑，所述表面活性劑選自陽(yáng)離子表面活性劑、兩性表面活性劑以及它們的組合；b、含有苯環(huán)或雜環(huán)的有機(jī)化合物，并且當(dāng)所述表面活性劑為陽(yáng)離子表面活性劑時(shí)，所述有機(jī)化合物為帶有陰離子基團(tuán)的有機(jī)化合物，當(dāng)所述表面活性劑為兩性表面活性劑或者兩性表面活性劑與陽(yáng)離子表面活性劑的組合時(shí)，所述有機(jī)化合物為帶陰離子基團(tuán)或帶陽(yáng)離子基團(tuán)的有機(jī)化合物；c、調(diào)節(jié)pH值的緩沖劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種改進(jìn)的用于對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類的試劑，其特征在于所述試劑進(jìn)一步包括醇類。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種改進(jìn)的用于對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類的試劑，其特征在于所述試劑進(jìn)一步包括酸性有機(jī)物或色素。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種改進(jìn)的用于對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類的試劑，其特征在于所述緩沖劑是能夠?qū)H值調(diào)整在2～6范圍內(nèi)的緩沖劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求1～4任意一項(xiàng)所述的一種改進(jìn)的用于對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類的試劑，其特征在于所述陽(yáng)離子表面活性劑為具有式I所示結(jié)構(gòu)的季銨鹽型陽(yáng)離子表面活性劑， 其中R1為C原子數(shù)6-14的烷基或鏈烯基；R2及R3為C原子數(shù)1-4的烷基或鏈烯基；R4為C原子數(shù)為1-4的烷基或鏈烯基或芐基；X為鹵素原子。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種改進(jìn)的用于對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類的試劑，其特征在于所述R1為辛基、癸基或月桂基，所述R2及R3為甲基、乙基或丙基。
7.根據(jù)權(quán)利要求1～4任意一項(xiàng)所述的一種改進(jìn)的用于對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類的試劑，其特征在于所述兩性表面活性劑為具有式II所示結(jié)構(gòu)的兩性表面活性劑， 其中，R5為C原子數(shù)6-14的烷基或鏈烯基；R6及R7為原子數(shù)1-4的烷基或鏈烯基。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種改進(jìn)的用于對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類的試劑，其特征在于所述R5為辛基、癸基或月桂基，所述R6及R7為甲基、乙基或丙基。
9.一種采用權(quán)利要求1～4中任意一項(xiàng)所述的試劑對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類的方法，其特征在于所述方法包括步驟，將所述的試劑加入到全血樣本中，使白細(xì)胞分成與淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞分別對(duì)應(yīng)的3個(gè)集團(tuán)以及與中性粒細(xì)胞和嗜堿粒細(xì)胞相對(duì)應(yīng)的1個(gè)集團(tuán)共計(jì)4個(gè)集團(tuán)，然后通過測(cè)定細(xì)胞大小和形態(tài)信息對(duì)所分成的四個(gè)集團(tuán)進(jìn)行分類計(jì)數(shù)。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的一種對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類的方法，其特征在于所述測(cè)定細(xì)胞大小信息利用激光散射法采用低角度散射光完成，測(cè)定角度為2-6度；所述測(cè)定細(xì)胞形態(tài)信息利用激光散射法采用高角度散射光完成，測(cè)定角度為8-20度。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種改進(jìn)的用于對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類的試劑，所述試劑包括a.選自陽(yáng)離子表面活性劑、兩性表面活性劑以及它們的組合的表面活性劑；b.含苯環(huán)或其他雜環(huán)的有機(jī)化合物，且當(dāng)表面活性劑為陽(yáng)離子表面活性劑時(shí)，有機(jī)化合物帶有陰離子基團(tuán)，當(dāng)表面活性劑為兩性表面活性劑或兩性與陽(yáng)離子表面活性劑的組合時(shí)，有機(jī)化合物帶陰離子或帶陽(yáng)離子基團(tuán)；c.調(diào)節(jié)pH值的緩沖劑。本發(fā)明的試劑及方法不僅能進(jìn)行白細(xì)胞的四分類，并且，所分出單核細(xì)胞集團(tuán)聚類性明顯，分界清晰；試劑處理后的血樣經(jīng)散射光檢測(cè)后，對(duì)不同比例的單核細(xì)胞均能形成獨(dú)立的散點(diǎn)區(qū)，位置固定。
文檔編號(hào)G01N33/49GK101078720SQ200610021028
公開日2007年11月28日 申請(qǐng)日期2006年5月22日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月22日
發(fā)明者許文娟, 劉牧龍 申請(qǐng)人:深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司