專利名稱:一種a組輪狀病毒抗原膠體金檢測試紙條的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明屬于生物檢測領(lǐng)域,具體涉及一種A組輪狀病毒(RV-group A)抗原檢測試紙條及其應(yīng)用。
背景技術(shù):
對于輪狀病毒(RV)感染的診斷,經(jīng)典方法是病毒分離和雙份血清呈4倍增高,至今仍是臨床診斷的金標(biāo)準?,F(xiàn)代生物技術(shù)的發(fā)展為RV感染的診斷提供了許多新的檢測方法,如電鏡或免疫電鏡從糞便提取物中檢測輪狀病毒顆??乖?;應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和核酸探針技術(shù)檢測病毒顆粒和抗原;采用聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)可直接檢測糞便提取物中的病毒RNA;應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)對輪狀病毒抗原進行檢測等。但以上方法均存在著操作復(fù)雜,時間長,需要昂貴的儀器、設(shè)備、需要專業(yè)人員在有條件的實驗室進行等,不適合流行病學(xué)調(diào)查和現(xiàn)埸檢測。
發(fā)明內(nèi)容
(一)、要解決的技術(shù)問題本發(fā)明的目的是提供一種方便、快捷地檢測A組輪狀病毒抗原的試紙條。
本發(fā)明再一個目的是提供所述試紙條在檢測A組輪狀病毒抗原中的應(yīng)用。
(二)、技術(shù)方案本發(fā)明為一種檢測試紙條,它包含(1)包被A組輪狀病毒單克隆抗體和抗鼠IgG二個條帶的硝酸纖維膜;(2)含有膠體金標(biāo)記A組輪狀病毒單克隆抗體的玻璃纖維膜。
本發(fā)明所述的試紙條,它還包含(1)反應(yīng)支持物;(2)吸水墊;
(3)金標(biāo)抗體保護膜。
本發(fā)明所述的試紙條,其中反應(yīng)支持物選用PVC板。
本發(fā)明所述的試紙條,其中吸水墊選用濾油紙。
本發(fā)明所述的試紙條,其中金標(biāo)抗體保護膜同時具有吸水功能,選用聚脂膜、玻璃纖維或濾紙纖維。
本發(fā)明還公開了所述試紙條在檢測A組輪狀病毒抗原中的應(yīng)用(見圖2)。留取患者糞便,放入裝有稀釋液的小瓶內(nèi),將試紙條“4”處插入瓶內(nèi)(直至觀察完結(jié)果后方可取出試紙條),樣品中的液體吸起上行,10-15分鐘判讀結(jié)果如含有A組輪狀病毒抗原,則與試紙條上膠體金標(biāo)記的A組輪狀病毒單克隆抗體形成相應(yīng)的復(fù)合物,上行與包被在硝酸纖維膜上的A組輪狀病毒單克隆抗體結(jié)合,形成紅色線條,即在“T”處形成紅色條帶。
無論是否含有相對應(yīng)的抗原,膠體金標(biāo)記單克隆抗體繼續(xù)向上爬行與包被在膜上的抗鼠IgG形成紅色沉淀線,即在“C”處形成紅色條帶。此線是質(zhì)控線,如膠體金失效,此線就不會出現(xiàn),說明試紙條失效。
陽性結(jié)果會出現(xiàn)2條紅色沉淀線,陰性結(jié)果出現(xiàn)1條紅色沉淀線,如不出現(xiàn)線條說明試紙條失效。
本發(fā)明的技術(shù)方案是采用純化的A組輪狀病毒單克隆抗體和抗鼠IgG分別固相于硝酸纖維膜上(NC膜),結(jié)合膠體金標(biāo)記的A組輪狀病毒單克隆抗體,應(yīng)用膜層析雙抗體夾心法的原理檢測糞便中的A組輪狀病毒。
(三)、有益效果用本發(fā)明試紙條檢測A組輪狀病毒抗原,方便、快速、簡捷,不需特殊儀器設(shè)備、不需專業(yè)培訓(xùn),結(jié)果清晰易辨;操作簡單,易于推廣,適合基層,適合于大批量檢測,適合流行病學(xué)調(diào)查,對A組輪狀病毒引起的嬰幼兒腹瀉的診斷起到輔助檢測作用。
圖1A本發(fā)明試紙條的正面示意圖;B本發(fā)明試紙條的側(cè)面示意圖;1吸水墊;2硝酸纖維膜(T包被A組輪狀病毒單克隆抗體的條帶;C包被抗鼠IgG的質(zhì)控條帶);3含有膠體金標(biāo)記A組輪狀病毒單克隆抗體的玻璃纖維膜;4金標(biāo)抗體保護膜;5反應(yīng)支持物。
圖2檢測結(jié)果示意圖;從左至右依次為T、C兩條線顯色為陽性;C一條線顯色為陰性;T、C兩條線未顯色為無效。
具體實施例方式
以下實施例用于說明本發(fā)明,但不用來限制本發(fā)明的范圍。
實施例1 A組輪狀病毒抗原檢測試紙條(參見圖1)反應(yīng)支持物為6.5cm×0.4cm PCV板;吸水墊為2cm×0.4cm的濾油紙;1.8cm×0.4cm的硝酸纖維膜依次包被抗鼠IgG、A組輪狀病毒單克隆抗體;含有0.4cm×0.4cm膠體金標(biāo)記的A組輪狀病毒單克隆抗體玻璃纖維膜;金標(biāo)抗體保護膜為2.7cm×0.4cm的聚脂膜;即形成了A組輪狀病毒抗原檢測試紙條。
實施例2 A組輪狀病毒抗原檢測試紙條(參見圖1)反應(yīng)支持物為6.5cm×0.4cm PCV板;吸水墊為2cm×0.4cm的濾油紙;1.8cm×0.4cm的硝酸纖維膜依次包被抗鼠IgG、A組輪狀病毒單克隆抗體;含有0.4cm×0.4cm膠體金標(biāo)記的A組輪狀病毒單克隆抗體玻璃纖維膜;金標(biāo)抗體保護膜為2.7cm×0.4cm的玻璃纖維;即形成了A組輪狀病毒抗原檢測試紙條。
實施例3 A組輪狀病毒抗原檢測試紙條(參見圖1)反應(yīng)支持物為6.5cm×0.4cm PCV板;吸水墊為2cm×0.4cm的濾油紙;1.8cm×0.4cm的硝酸纖維膜依次包被抗鼠IgG、A組輪狀病毒單克隆抗體;含有0.4cm×0.4cm膠體金標(biāo)記的A組輪狀病毒單克隆抗體玻璃纖維膜;金標(biāo)抗體保護膜為2.7cm×0.4cm的濾紙纖維;即形成了A組輪狀病毒抗原檢測試紙條。
實施例4 檢測方法(參見圖2)留取患者糞便,放入裝有稀釋液的小瓶內(nèi),將實施例1試紙條“4”處插入瓶內(nèi)(直至觀察完結(jié)果后方可取出試紙條),樣品中的液體吸起上行,10-15分鐘判讀結(jié)果如含有A組輪狀病毒抗原,則與試紙條上膠體金標(biāo)記的A組輪狀病毒單克隆抗體形成相應(yīng)的復(fù)合物,上行與包被在硝酸纖維膜上的A組輪狀病毒單克隆抗體結(jié)合,形成紅色線條,即在“T”處形成紅色條帶。
無論是否含有相對應(yīng)的抗原,膠體金標(biāo)記單克隆抗體繼續(xù)向上爬行與包被在膜上的抗鼠IgG形成紅色沉淀線,即在“C”處形成紅色條帶。此線是質(zhì)控線,如膠體金失效,此線就不會出現(xiàn),說明試紙條失效。
陽性結(jié)果會出現(xiàn)2條紅色沉淀線,陰性結(jié)果出現(xiàn)1條紅色沉淀線,如不出現(xiàn)線條說明試紙條失效。
實驗例1 臨床檢測結(jié)果經(jīng)檢測186例患有腹瀉嬰幼兒患者糞便標(biāo)本,A組輪狀病毒感染,出現(xiàn)兩條帶92例,占49.5%。試紙條法(T2)與目前應(yīng)用的ELISA(T1a)和PAGE(T1b)法相比較,靈敏度為99%,特異度100%。
ELISA(T1a)和PAGE(T1b)法與試紙條法(T2)對比實驗統(tǒng)計表
權(quán)利要求
1.一種檢測試紙條,其特征在于,它包含(1)包被A組輪狀病毒單克隆抗體和抗鼠IgG二個條帶的硝酸纖維膜;(2)含有膠體金標(biāo)記A組輪狀病毒單克隆抗體的玻璃纖維膜。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述試紙條,它還包含(1)反應(yīng)支持物;(2)吸水墊;(3)金標(biāo)抗體保護膜。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述試紙條,其中反應(yīng)支持物選用PVC板。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述試紙條,其中吸水墊選用濾油紙。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述試紙條,其中金標(biāo)抗體保護膜選用聚脂膜、玻璃纖維或濾紙纖維。
6.權(quán)利要求1-5之任一所述試紙條在檢測A組輪狀病毒抗原中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種檢測試紙條,它包含1)包被A組輪狀病毒單克隆抗體和抗鼠IgG二個條帶的硝酸纖維膜;2)含有膠體金標(biāo)記A組輪狀病毒單克隆抗體的玻璃纖維膜,應(yīng)用膜層析雙抗體夾心法的原理檢測糞便中的A組輪狀病毒。應(yīng)用本發(fā)明試紙條檢測,減少了許多繁瑣的程序,且方便快捷,特異準確,10-15分鐘判讀結(jié)果,不需特殊儀器也不需專業(yè)培訓(xùn),適合醫(yī)院等基層單位,適合大規(guī)模的流行病學(xué)調(diào)查及應(yīng)對突發(fā)事件。
文檔編號G01N33/558GK1963519SQ20051008685
公開日2007年5月16日 申請日期2005年11月10日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月10日
發(fā)明者劉明 申請人:北京莊笛浩禾生物醫(yī)學(xué)科技有限公司