專利名稱：一種快速檢測食品、農(nóng)副產(chǎn)品中獸藥殘留物的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬有毒物質(zhì)檢測的技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種檢測農(nóng)副產(chǎn)品、食品中獸藥殘留物的檢測方法。
背景技術(shù)：
我國是農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)和消費大國，農(nóng)產(chǎn)品中獸藥殘留物的檢測直接關(guān)系到我國農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)、出口和居民食品消費安全。特別是我國農(nóng)產(chǎn)品出口因獸藥殘留物近年連續(xù)遭遇國外技術(shù)性貿(mào)易壁壘，僅浙江省農(nóng)產(chǎn)品一年出口被禁上億美元。近年來，食品安全問題已成為國家關(guān)注的重點內(nèi)容之一，因有毒殘留物質(zhì)超標造成的食品污染事件以及出口受阻頻頻發(fā)生，已引起了國家有關(guān)部門的高度重視，并連續(xù)啟動了無公害農(nóng)產(chǎn)品及食品安全等行動計劃以及農(nóng)產(chǎn)品市場準入制度，研制開發(fā)食品中各種有害物質(zhì)的快速檢測技術(shù)及產(chǎn)品成為很重要的需求。
檢測食品中獸藥殘留的方法，主要有微生物學方法，理化分析法(色譜法，色質(zhì)聯(lián)用、氣質(zhì)聯(lián)用法)，免疫學方法(放射免疫法、酶聯(lián)免疫法)等。微生物檢測方法費用低廉，但是操作復(fù)雜費時，結(jié)果容易誤判，特異性差。免疫學方法(酶免法)近年來有較多的應(yīng)用，基本符合操作簡便、高靈敏度的特點，且已經(jīng)有相關(guān)的試劑盒商品使用。理化分析方法主要用來確證實驗，需要昂貴的儀器配套。如中國專利申請(01105023.3)該專利申請涉及一種多指標并行檢測蛋白的方法，包括將結(jié)合了多個可與體內(nèi)指標特異性結(jié)合的蛋白B的固相載體與含目標蛋白A的待測液接觸，形成穩(wěn)定復(fù)合物B-A；進一步與多蛋白混合液中對應(yīng)標記的A的特異結(jié)合蛋白C-labelled反應(yīng)，形成穩(wěn)定B-A-C-labelled，標記是化學發(fā)光法的標記物；產(chǎn)生化學發(fā)光反應(yīng)及信號檢測。該專利申請還提供了一種蛋白芯片的制備方法，及用于多指標并行檢測的蛋白芯片、試劑盒。該專利申請主要是沿用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)的原理，存在著特異性弱、靈敏度低、應(yīng)用范圍窄、操作復(fù)雜的缺點。
又如中國專利申請(02137940.8)涉及一種氯霉素(CAP)酶免疫檢測試劑盒及其檢測方法，屬于酶免疫分析技術(shù)領(lǐng)域。該發(fā)明配制的試劑盒，采取酶免疫吸附(ELISA)競爭法檢測CAP，利用CAP和牛血清白蛋白(BSA)偶連物作為CAP抗原免疫小鼠，獲得含有CAP抗體的單克隆CAP抗血清，經(jīng)分離、提純、稀釋后包被在酶標板上，溫育、洗滌，加入樣品稀釋液及酶標抗原，使兩者進行反應(yīng)、洗滌，加酶底物顯色。雖然該專利對樣品前處理簡單，是一種簡便、快速、靈敏、準確、廉價的檢測方法，但是由于本身的局限性必然造成其檢測分析過程不能實現(xiàn)連續(xù)化、集成化、微型化、高通量的要求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)所用的檢測方法存在特異性差、靈敏度低、應(yīng)用范圍窄、操作復(fù)雜的缺點，提供一種樣品前處理簡單，檢測簡便、快速、靈敏、準確的檢測獸藥殘留的方法。
本發(fā)明的技術(shù)問題是通過以下技術(shù)方案來解決的一種快速檢測食品、農(nóng)副產(chǎn)品中獸藥殘留物的檢測方法，包括以下步驟(1)、將多種獸藥偶聯(lián)抗原按照微陣列點在固相載體上并對其進行包被；其中固相基質(zhì)上固定著獸藥抗原；(2)、將經(jīng)過稀釋液稀釋的生物素化抗體和待測樣品混合，與固相載體上固定的多種獸藥包被抗原的進行競爭免疫反應(yīng)，洗滌液洗滌；反應(yīng)過程中如果待測樣品不含獸藥，則抗體和固相載體上固定的多種獸藥包被抗原結(jié)合；如果待測樣品含獸藥，則生物素標記的抗體會與待測樣品中的獸藥結(jié)合，而被洗脫；(3)、加入親和素標記的膠體金進行放大和染色，通過掃描儀獲得灰度結(jié)果。
本發(fā)明采用免疫競爭法的原理采用免疫競爭法檢測多種獸藥殘留，其工作原理是利用樣品中的殘留獸藥與固定在載體上的獸藥偶聯(lián)抗原針對抗體進行競爭免疫反應(yīng)，通過生物素一親和素放大系統(tǒng)并通過納米金染色對極微量的殘留獸藥作定量分析，其中被測的殘留獸藥與固定在基質(zhì)上的抗生素對標有生物素的抗體均具有相同的結(jié)合能力，所以在標有生物素的抗體有限時，這種結(jié)合就會出現(xiàn)相互競爭，彼此制約。具體反應(yīng)式如下 在標有生物素的抗體量一定時，固定在基質(zhì)上的獸藥和被測的殘留獸藥與標有生物素的抗體結(jié)合的量取決于二者濃度比，P1結(jié)合量，將隨著P2的增加而減少，這說明了被測的殘留獸藥抑制了固定在基質(zhì)上的獸藥與標有生物素的抗體的結(jié)合。由于抗體上標記有生物素，可與親和素結(jié)合，親和素上有膠體金，通過掃描儀(CCD)獲得灰度結(jié)果。圖像越黑則待測樣品的抗生素含量越低，反之，則越高！此外，還可以得到定量檢測的效果，其中通過標準樣本來考察三個指標的劑量-反應(yīng)曲線，并采用合適的數(shù)學模型擬合。濃度與灰度值之間的關(guān)系符合y＝a(x)b+c或者其他函數(shù)的模式，其中y和x分別表示指標輸出濃度和檢測灰度，a和b，c是常數(shù)，不同指標有各自的a、b值。劑量-反應(yīng)曲線的相關(guān)系數(shù)g2應(yīng)不低于0.97，將上述劑量-反應(yīng)曲線方程、種類、指標數(shù)量、指標信息等基本參數(shù)，設(shè)置在軟件的數(shù)據(jù)庫文件中，用光盤刻錄機將該文件刻錄在光盤上。檢測時，數(shù)據(jù)通過光盤由軟件自動調(diào)用，通過灰度即可知道濃度值，定量檢測抗生素濃度，實現(xiàn)了檢測分析過程連續(xù)化、集成化、微型化、高通量的優(yōu)點，而且檢測操作只需要10分鐘，膠體金結(jié)果比較熒光穩(wěn)定，減少環(huán)境污染。
在上述的檢測方法中，所述的經(jīng)過稀釋液稀釋的生物素化抗體與樣本的混合比例為2∶5～1∶6，其中經(jīng)過稀釋液稀釋的生物素化抗體與樣本混合后發(fā)應(yīng)的時間為5～20min，反應(yīng)的溫度為30℃～38℃。
表1生物素化抗體與樣本混合比例的優(yōu)化


由以上結(jié)果表明，0ppb和6.25ppb的反應(yīng)結(jié)果灰度差異明顯的為生物素化抗體與樣本混合比例為2∶5～1∶6。
表2生物素化抗體與樣本混合后的反應(yīng)時間對灰度的影響


以上結(jié)果表明在5～20min之間整體的灰度值差異不太大，所以采用的溫育5～20min，采用的溫育溫度一般為37℃。但是在30℃～38℃之間處理整體的灰度值差異也不大。
其中所述的經(jīng)過稀釋液稀釋的生物素化抗體的標記方法為用DMF將BNHS配成0.8～1.2mg/mL溶液，用0.08～0.12mol/L，pH8.2～9.2NaHCO3將純化的抗體稀釋為1～3mg/mL，按BNHS∶IgG的容積比為1∶8～1∶15混合，室溫攪拌下反應(yīng)1～5h，裝入透析袋，加入0.01mol/L～1mol/L，pH7.0～7.6PBS溶液，4℃透析過夜。結(jié)合物內(nèi)加等體積甘油，小量分裝，-30℃凍存?zhèn)溆谩?br> 在上述的檢測方法中，所述的生物素化抗體的標記方法優(yōu)化配方為用DMF將BNHS配成1mg/mL溶液，用0.1mol/L，pH9.0NaHCO3將純化的抗體稀釋為2mg/mL，按BNHS∶IgG的容積比為1∶10，室溫攪拌下反應(yīng)2～4h，裝入透析袋，加入0.05mol/L，pH7.2PBS溶液，4℃透析過夜。
其中親和素標記方法(樣品洗滌液配方)為
①用0.08～0.12mol/L碳酸鹽調(diào)節(jié)金溶膠的pH為8.5～9.5；②于金溶膠中加入(按體積百分比)為1％～4％蛋白質(zhì)溶液，攪拌1～4分鐘；③加入(按體積百分比)4.5％～5.5％的濃度為0.8～1.2％PEG20000溶液；④于轉(zhuǎn)速為10000g～100000g的超速離心機中離心30～60分鐘，吸去上清液；⑤將沉淀懸浮于含0.2～0.5mg/ml PEG20000的緩沖液中，轉(zhuǎn)速為10000g～100000g的超速離心機離心沉淀后，再用同一緩沖液恢復(fù)，濃度以A 1cm/540nm＝1.5左右為宜，以0.2～0.8mg/ml疊氮鈉防腐，置4℃保存。
在上述的檢測方法中，所述的親和素標記方法步驟一中碳酸鹽為碳酸鉀。
在上述的檢測方法中，所述的親和素標記方法步驟一為用0.08mol/L～0.12mol/L K2CO3調(diào)節(jié)金溶膠pH至8.8～9.2。
在上述的檢測方法中，在金溶膠中加入最佳標記量的蛋白質(zhì)溶液按體積百分比為2％～3％，攪拌2～3分鐘。
在上述的檢測方法中，加入的PEG20000溶液為總體積的4.8％～5.2％，其濃度為1％。
在上述的檢測方法中，將沉淀懸浮于一定體積含0.2～0.3mg/ml PEG20000的緩沖液中，轉(zhuǎn)速為10000g～100000g的超速離心機離心沉淀后，再用同一緩沖液恢復(fù)，濃度以A1cm/540nm＝1.5為宜，以0.3～0.6mg/ml疊氮鈉防腐，置4℃保存。
本發(fā)明采用免疫競爭法檢測與現(xiàn)有技術(shù)的檢測相比，主要有以下優(yōu)點(1)靈敏度高，現(xiàn)有技術(shù)檢出極限為mg，ug水平，而采用免疫競爭法檢測分析通常為ng，pg，甚至可達到ag水平；(2)特異性強，能分辨出化學結(jié)構(gòu)上非常相似的物質(zhì)，甚至能識別立體結(jié)構(gòu)；(3)操作簡便，免疫競爭法檢測所需試劑品種少，加樣程序簡單，反應(yīng)時間短，測量和數(shù)據(jù)處理易于實現(xiàn)自動化。
具體實施例方式
實施例1蜂蜜樣品的前處理取1g蜂蜜，放入離心管中，加入2mL蒸餾水溶解；加2mL乙酸乙酯振蕩10min；室溫3000g離心10min；移取1mL上層乙酸乙酯(相當于0.5g樣品)至另一試管中，60℃下N2吹干；殘留物用0.5mL緩沖液1溶解；取50uL分析。過的樣品，放入離心管中，加入6mL乙酸乙酯振蕩10min；室溫3000g離心10min；取出2mL上層乙酸乙酯(相當于1g樣品)60℃下N2吹干。
洗滌液的配制Tris54g，硼酸27.5g，用少量DD-H20溶解，加入20ml 0.5mol/L EDTA-Na2(PH8.0)，加DD-H2O定容至1000ml。加入200ml飽和(NH4)2SO4溶液，40ml Tween-20及480ml DD-H2O，混勻。
試劑生物素化抗體的制備取生物素1g，混懸于12mlN，N二甲基甲酰胺DMF，加入0.6g N-羥基丁二酰亞胺HOSU和0.8g的二環(huán)己基炭二亞胺DCC，置于密閉容器中，室溫磁力攪拌作用過夜。過濾液經(jīng)過過旋轉(zhuǎn)蒸干。加10ml乙醚洗滌，繼而加入200ml異丙醇結(jié)晶，獲得白色粉末狀活化生物素晶體。用DMF將BNHS配成0.8mg/mL溶液；將待標記抗體用0.08mol/L，PH值為8.2的碳酸氫鈉溶液稀釋至1mg/ml，透析后，以1mg/ml BNHS待標記抗體＝1∶8的比例混合，不時振搖1小時。置透析袋中加入0.01mol/L，pH7.0PBS溶液，4℃透析過夜，使用時稀釋至工作濃度。
試劑親和素膠體金制備①用0.08mol/L碳酸鉀調(diào)節(jié)1ml膠體金溶液的pH為8.5；②將待標記的蛋白質(zhì)儲存液作系列稀釋后，分別取0.1ml(含蛋白質(zhì)5～40ug)加到1ml膠體金溶液中，攪拌1分鐘；③加入(按體積百分比)4.5％的濃度為0.8％PEG20000溶液；④在轉(zhuǎn)速為10000g的超速離心機中離心60分鐘，吸去上清液；⑤將沉淀懸浮于含0.2mg/ml PEG20000的緩沖液中，轉(zhuǎn)速為10000g的超速離心機離心沉淀后，再用同一緩沖液恢復(fù)，以0.2mg/ml疊氮鈉防腐，置4℃保存。使用時另設(shè)一管不加蛋白質(zhì)的對照管，5分鐘后加入0.1ml 10％NaCl溶液，混勻后靜置2小時，不穩(wěn)定的金溶膠將發(fā)生聚沉，能使膠體金穩(wěn)定的最適蛋白量再加10％即為最佳標記蛋白量。
取抗體濃度為5.94mg/ml，將抗體生物素化，生物素化抗體原濃度為1.67mg/ml，用PBS稀釋液至0.02mg/ml，取100ul生物素化抗體(0.02mg/ml)與500ul待測樣品充分混勻后于30度溫育20min，加入洗滌液4滴于上述包被有多種獸藥偶聯(lián)抗原按照微列陣排列的固相載體上，加入親和素標記的膠體金溶液500ml，充分反應(yīng)后，加入洗滌液六滴，通過掃描儀上讀取結(jié)果，其中灰度值和獸藥殘留量的換算關(guān)系見表3表3灰度值和獸藥殘留量的換算關(guān)系


以上是本發(fā)明人通過長期研究而自制的灰度值和獸藥殘留量的換算關(guān)系，其中通過質(zhì)譜分析抗生素標準液的濃度(ng/ml)與現(xiàn)有技術(shù)提供的標準液抗生素的含量相差無幾。
實施例2樣品的前處理和洗滌液的配制同實施例1試劑生物素化抗體的制備取生物素1g，混懸于12ml N，N二甲基甲酰胺DMF，加入0.6g N-羥基丁二酰亞胺HOSU和0.8g的二環(huán)己基炭二亞胺DCC，置于密閉容器中，室溫磁力攪拌作用過夜。過濾液經(jīng)過旋轉(zhuǎn)蒸干。加10ml乙醚洗滌，繼而加入200ml異丙醇結(jié)晶，獲得白色粉末狀活化生物素晶體。用DMF將BNHS配成1mg/mL溶液；將待標記抗體用0.10mol/L，PH值為9.0的碳酸氫鈉溶液稀釋至2mg/ml，透析后，以1mg/ml BNHS∶待標記抗體＝1∶10的比例混合，不時振搖3小時。置透析袋中加入0.05mol/L，pH7.4PBS溶液，4℃透析過夜，使用時稀釋至工作濃度。
試劑親和素膠體金制備①用0.10mol/L碳酸鉀調(diào)節(jié)1ml膠體金溶液的pH為9.0②將待標記的蛋白質(zhì)儲存液作系列稀釋后，分別取0.2ml(含蛋白質(zhì)5～40ug)加到1ml膠體金溶液中攪拌2分鐘③加入(按體積百分比)5.0％的濃度為1％PEG20000溶液。④在轉(zhuǎn)速為50000g的超速離心機中離心45分鐘，吸去上清液。⑤將沉淀懸浮于含0.4mg/ml PEG20000的緩沖液中，轉(zhuǎn)速為50000g的超速離心機離心沉淀后，再用同一緩沖液恢復(fù)，以0.4mg/ml疊氮鈉防腐，置4℃保存。使用時另設(shè)一管不加蛋白質(zhì)的對照管，5分鐘后加入0.1ml 10％NaCl溶液，混勻后靜置2小時，不穩(wěn)定的金溶膠將發(fā)生聚沉，能使膠體金穩(wěn)定的最適蛋白量再加10％即為最佳標記蛋白量。
取抗體濃度為6.54mg/ml，將抗體生物素化，生物素化抗體原濃度為1.76mg/ml，用PBS稀釋液至0.04mg/ml，取100ul生物素化抗體(0.02mg/ml)與600ul待測樣品充分混勻后于37度溫育10min，加入洗滌液4滴于上述包被有多種獸藥偶聯(lián)抗原按照微列陣排列的固相載體上，加入親和素標記的膠體金溶液500ml，充分反應(yīng)后，加入洗滌液六滴，通過掃描儀上讀取結(jié)果。
實施例3樣品的前處理和洗滌液的配制同實施例1試劑生物素化抗體的制備取生物素1g，混懸于12mlN，N二甲基甲酰胺DMF，加入0.6g N-羥基丁二酰亞胺HOSU和0.8g的二環(huán)己基炭二亞胺DCC，置于密閉容器中，室溫磁力攪拌作用過夜。過濾液經(jīng)過過旋轉(zhuǎn)蒸干。加10ml乙醚洗滌，繼而加入200ml異丙醇結(jié)晶，獲得白色粉末狀活化生物素晶體。用DMF將BNHS配成1.2mg/mL溶液；將待標記抗體用0.12mol/L，PH值為9.2的碳酸氫鈉溶液稀釋至32mg/ml，透析后，以1mg/ml BNHS∶待標記抗體＝1∶15的比例混合，不時振搖5小時。置透析袋中加入0.1mol/L，pH7.6PBS溶液，4℃透析過夜，使用時稀釋至工作濃度。
試劑親和素膠體金制備①用0.12mol/L碳酸鉀調(diào)節(jié)1ml膠體金溶液的pH為9.5；②將待標記的蛋白質(zhì)儲存液作系列稀釋后，分別取0.4ml(含蛋白質(zhì)5～40ug)加到1ml膠體金溶液中攪拌4分鐘；③加入(按體積百分比)5.5％的濃度為1.2％PEG20000溶液；④在轉(zhuǎn)速為100000g的超速離心機中離心30分鐘，吸去上清液；⑤將沉淀懸浮于含0.5mg/ml PEG20000的緩沖液中，轉(zhuǎn)速為100000g的超速離心機離心沉淀后，再用同一緩沖液恢復(fù)，以0.8mg/ml疊氮鈉防腐，置4℃保存。使用時另設(shè)一管不加蛋白質(zhì)的對照管，5分鐘后加入0.1ml 10％NaCl溶液，混勻后靜置2小時，不穩(wěn)定的金溶膠將發(fā)生聚沉，能使膠體金穩(wěn)定的最適蛋白量再加10％即為最佳標記蛋白量。
取抗體濃度為6.74mg/ml，將抗體生物素化，生物素化抗體原濃度為1.78mg/ml，用PBS稀釋液至0.03mg/ml，取200ul生物素化抗體(0.02mg/ml)與500ul待測樣品充分混勻后于38度溫育5min，加入洗滌液4滴于上述包被有多種獸藥偶聯(lián)抗原按照微列陣排列的固相載體上，加入親和素標記的膠體金溶液500ml，充分反應(yīng)后，加入洗滌液六滴，通過掃描儀上讀取結(jié)果。
本文中所描述的具體實施例僅僅是對本發(fā)明精神作舉例說明。本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員可以對所描述的具體實施例做各種各樣的修改或補充或采用類似的方式替代，但并不會偏離本發(fā)明的精神或者超越權(quán)利要求書所定義的范圍。
權(quán)利要求
1.一種快速檢測食品、農(nóng)副產(chǎn)品中獸藥殘留物的檢測方法，包括以下步驟(1)、將多種獸藥偶聯(lián)抗原按照微陣列點在固相載體上并對其進行包被；其中固相基質(zhì)上固定著獸藥抗原；(2)、將經(jīng)過稀釋液稀釋的生物素化抗體和待測樣品混合，與固相載體上固定的多種獸藥包被抗原的進行競爭免疫反應(yīng)，洗滌液洗滌；反應(yīng)過程中如果待測樣品不含獸藥，則抗體和固相載體上固定的多種獸藥包被抗原結(jié)合；如果待測樣品含獸藥，則生物素標記的抗體會與待測樣品中的獸藥結(jié)合，而被洗脫；(3)、加入親和素標記的膠體金進行放大和染色，通過掃描儀獲得灰度結(jié)果。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測食品、農(nóng)副產(chǎn)品中獸藥殘留物的檢測方法，其特征在于，所述的經(jīng)過稀釋液稀釋的生物素化抗體與樣本的混合比例為2∶5～1∶6，其中經(jīng)過稀釋液稀釋的生物素化抗體與樣本混合后發(fā)應(yīng)的時間為5～20min，反應(yīng)的溫度為30℃～38℃。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種快速檢測食品、農(nóng)副產(chǎn)品中獸藥殘留物的檢測方法，其特征在于，所述的經(jīng)過稀釋液稀釋的生物素化抗體的標記方法為用DMF將BNHS配成0.8～1.2mg/mL溶液，用0.08～0.12mol/L，pH8.2～9.2NaHCO3將純化的抗體稀釋為1～3mg/mL，按BNHS∶IgG的容積比為1∶8～1∶15混合，室溫攪拌下反應(yīng)1～5h，裝入透析袋，加入0.01mol/L～1mol/L，pH7.0～7.6PBS溶液，4℃透析過夜。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種快速檢測食品、農(nóng)副產(chǎn)品中獸藥殘留物的檢測方法，其特征在于，所述的生物素化抗體的標記方法優(yōu)化配方為用DMF將BNHS配成1mg/mL溶液，用0.1mol/L，pH9.0NaHCO3將純化的抗體稀釋為2mg/mL，按BNHS∶IgG的容積比為1∶10，室溫攪拌下反應(yīng)2～4h，裝入透析袋，加入0.05mol/L，pH7.2PBS溶液，4℃透析過夜。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種快速檢測食品、農(nóng)副產(chǎn)品中獸藥殘留物的檢測方法，其特征在于，所述的親和素標記方法為①用0.08～0.12mol/L碳酸鹽調(diào)節(jié)金溶膠的pH為8.5～9.5；②于金溶膠中加入(按體積百分比)為1％～4％蛋白質(zhì)溶液，攪拌1～4分鐘；③加入(按體積百分比)4.5％～5.5％的濃度為0.8～1.2％PEG20000溶液；④于轉(zhuǎn)速為10000g～100000g的超速離心機中離心30～60分鐘，吸去上清液；⑤將沉淀懸浮于含0.2～0.5mg/ml PEG20000的緩沖液中，轉(zhuǎn)速為10000g～100000g的超速離心機離心沉淀后，再用同一緩沖液恢復(fù)，濃度以A 1cm/540nm＝1.5左右為宜，以0.2～0.8mg/ml疊氮鈉防腐，置4℃保存。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種快速檢測食品、農(nóng)副產(chǎn)品中獸藥殘留物的檢測方法，其特征在于，所述的親和素標記方法步驟一中碳酸鹽為碳酸鉀。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種快速檢測食品、農(nóng)副產(chǎn)品中獸藥殘留物的檢測方法，其特征在于，所述的親和素標記方法步驟一為用0.08mol/L～0.12mol/L K2CO3調(diào)節(jié)金溶膠pH至8.8～9.2。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種快速檢測食品、農(nóng)副產(chǎn)品中獸藥殘留物的檢測方法，其特征在于，在金溶膠中加入最佳標記量的蛋白質(zhì)溶液按體積百分比為2％～3％，攪拌2～3分鐘。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種快速檢測食品、農(nóng)副產(chǎn)品中獸藥殘留物的檢測方法，其特征在于，加入的PEG20000溶液為總體積的4.8％～5.2％，其濃度為1％。
10.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種快速檢測食品、農(nóng)副產(chǎn)品中獸藥殘留物的檢測方法，其特征在于，將沉淀懸浮于一定體積含0.2～0.3mg/ml PEG20000的緩沖液中，轉(zhuǎn)速為10000g～100000g的超速離心機離心沉淀后，再用同一緩沖液恢復(fù)，以0.3～0.6mg/ml疊氮鈉防腐，置4℃保存。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種檢測農(nóng)副產(chǎn)品、食品中獸藥殘留物的檢測方法，屬有毒物質(zhì)檢測的技術(shù)領(lǐng)域。本快速檢測食品、農(nóng)副產(chǎn)品中獸藥殘留物的檢測方法包括以下步驟將多種獸藥偶聯(lián)抗原按照微陣列點在固相載體上并對其進行包被；其中固相基質(zhì)上固定著獸藥抗原；將經(jīng)過稀釋液稀釋的生物素化抗體和待測樣品混合，與固相載體上固定的多種獸藥包被抗原的進行競爭免疫反應(yīng)，洗滌液洗滌；加入親和素標記的膠體金進行放大和染色，通過掃描儀獲得灰度結(jié)果。本發(fā)明采用免疫競爭法檢測與現(xiàn)有技術(shù)的檢測相比，主要具有靈敏度高、特異性強、操作簡便的特點。免疫競爭法檢測所需試劑品種少，加樣程序簡單、反應(yīng)時間短；同時，測量和數(shù)據(jù)處理易于實現(xiàn)自動化。
文檔編號G01N1/28GK1715922SQ20051002648
公開日2006年1月4日 申請日期2005年6月6日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月6日
發(fā)明者王華全, 林榮業(yè) 申請人:臺州金芯生物工程有限公司