一種同時測定煙草或煙草制品中101種農(nóng)藥殘留的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種同時測定煙草或煙草制品中101種農(nóng)藥殘留的方法，其特征在于，該方法是將煙草樣品中加入無水硫酸鈉、內(nèi)標(biāo)和酸化乙腈后，渦旋提取，離心分層，取一定量萃取液過固相萃取小柱凈化，用體積比3：1的乙腈/甲苯混合液洗脫，將洗脫液濃縮，并以正己烷進(jìn)行溶劑交換，過有機(jī)相濾膜，用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行檢測。本發(fā)明簡化了煙草樣品前處理方法，縮短了樣品分析時間，同時得到干凈的上機(jī)溶液，減少儀器的維護(hù)頻率和使用成本。
【專利說明】一種同時測定煙草或煙草制品中101種農(nóng)藥殘留的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于農(nóng)藥殘留分析檢測【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及的農(nóng)藥殘留分析檢測方法，尤其涉 及一種同時測定煙草或煙草制品中101種農(nóng)藥殘留的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)化的發(fā)展，農(nóng)產(chǎn)品的生產(chǎn)越來越依賴于農(nóng)藥、抗生素和激素等化學(xué)、生物 制品。而這些物質(zhì)的不合理使用必將導(dǎo)致農(nóng)產(chǎn)品中的殘留超標(biāo)，影響消費(fèi)者食用安全，嚴(yán)重 時會造成消費(fèi)者致病、發(fā)育不正常，甚至直接導(dǎo)致中毒死亡?？刂妻r(nóng)藥殘留對人體的危害， 最為有效的方法之一是加強(qiáng)對化學(xué)、生物制品使用的監(jiān)管，為保障監(jiān)管必須提高食品中農(nóng) 藥殘留檢測的能力水平和效率。當(dāng)今世界農(nóng)藥殘留檢測向多殘留、快速分析發(fā)展，多殘留 檢測是農(nóng)殘分析的一個重要趨勢，具有"多"、"快"、"準(zhǔn)"三大優(yōu)勢。國內(nèi)自2006年開始到 2008年止，水果和蔬菜、糧谷、茶葉、果蔬汁和果酒、牛奶和奶粉、食用菌等農(nóng)產(chǎn)品相繼制訂 了同時測定100種以上農(nóng)藥的多殘留檢測標(biāo)準(zhǔn)。
[0003] 煙草作為特殊的經(jīng)濟(jì)作物，在生產(chǎn)過程中為了有效的控制病蟲害常使用各種類型 的農(nóng)藥，經(jīng)常發(fā)生農(nóng)藥殘留超標(biāo)現(xiàn)象，煙葉農(nóng)藥殘留已經(jīng)成為影響煙葉安全性的一個重要 因素，煙草行業(yè)于2011年發(fā)布了 3個煙草多農(nóng)殘檢測行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，該系列標(biāo)準(zhǔn)使用4種前處 理方法,3種分析方法，可以檢測146種農(nóng)藥。其中極性較大的73種農(nóng)藥采用QuEChERS凈 化后，使用LC/MS/MS進(jìn)行分析，非極性或中等極性的38種農(nóng)藥用QuEChERS方法處理后，過 硅膠和弗洛里硅土小柱進(jìn)行凈化，使用GC/MS和GC/ECD進(jìn)行分析，而有機(jī)氯及擬除蟲菊酯 類35種農(nóng)藥單獨(dú)作為一類，過固相萃取小柱后，使用GC/ECD進(jìn)行分析。使用上述行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 分析煙草中使用范圍較廣的幾種農(nóng)藥，如甲霜靈、仲丁靈、二甲戊靈、氟節(jié)胺、高效氯氟氰菊 酯、菌核凈（以上3個標(biāo)準(zhǔn)不含菌核凈）6種農(nóng)藥，同樣需要采用4種前處理方法，耗時耗力， 效率低下。
[0004] 為了縮短分析時間，提高檢測效率，中國煙草總公司在2014年又發(fā)布了一項(xiàng)煙草 及煙草制品多農(nóng)殘檢測的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，使用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀 檢測，其中氣質(zhì)串聯(lián)方法檢測169種農(nóng)藥，液質(zhì)串聯(lián)方法檢測141種農(nóng)藥。兩種方法均采用 QuEChERS方法進(jìn)行樣品前處理，串聯(lián)質(zhì)譜方法進(jìn)行分析。與之前的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)相比可大大提 高工作效率，減輕勞動負(fù)擔(dān)。
[0005]QuEChERS方法是目前世界上公認(rèn)的簡單、快速的樣品前處理技術(shù)，在水果蔬菜上 的應(yīng)用較廣。QuEChERS方法中PSA具有一定的去除色素能力，但是相對偏弱，凈化后的上機(jī) 溶液中仍存在大量色素和其他雜質(zhì)，尤其是對一些基質(zhì)復(fù)雜的樣品如茶葉、煙草等，其凈化 效果還存在一定的局限性，只能使用抗干擾能力強(qiáng)的GC/MS/MS和LC/MS/MS串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行 檢測，隨著進(jìn)樣次數(shù)的增多，色素會污染襯管、色譜柱和檢測器，使得后期結(jié)果失真，增加維 護(hù)儀器的頻率，尤其是對活性農(nóng)藥檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性影響更大。因此在煙草的多農(nóng)殘檢測 工作中，尤其是大批量樣品分析時，干凈的上機(jī)溶液對于保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性尤為重要。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 鑒于現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于進(jìn)一步簡化煙草樣品前處理方法，縮短 樣品分析時間，同時得到干凈的上機(jī)溶液，減少儀器的維護(hù)頻率和使用成本，從而提供一種 準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好、適用范圍更廣的多農(nóng)殘同時檢測方法。
[0007] 為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，發(fā)明人通過大量試驗(yàn)研究并不懈探索，最終獲得了如下 技術(shù)方案：
[0008] -種同時測定煙草或煙草制品中101種農(nóng)藥殘留的方法，其特征在于，該方法是 將煙草樣品中加入無水硫酸鈉、內(nèi)標(biāo)和酸化乙腈后，渦旋提取，離心分層，取一定量萃取液 過固相萃取小柱凈化，用體積比3 :1的乙腈/甲苯混合液洗脫，將洗脫液濃縮，并以正己烷 進(jìn)行溶劑交換，過有機(jī)相濾膜，用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行檢測。
[0009] 優(yōu)選地，如上所述同時測定煙草或煙草制品中101種農(nóng)藥殘留的方法，其具體的 操作步驟如下：
[0010] ⑴內(nèi)標(biāo)混合溶液的配制：配制滅蟻靈和氯唑磷濃度均為5 y g/mL的正己烷內(nèi)標(biāo) 混合溶液；
[0011] (2)農(nóng)藥目標(biāo)物提取：稱取2. 000g煙末于50mL離心管中，加入5g無水硫酸鈉、 100UL步驟⑴配制的內(nèi)標(biāo)混合溶液，以及20mL 1%甲酸的乙腈溶液，渦旋震蕩3分鐘，以 4000r/min離心10分鐘，吸取5mL上清液到10mL離心管中，待凈化；
[0012] (3)固相萃取小柱活化：TPT固相萃取小柱中加入2cm高無水硫酸鈉，用5mL體積 比3 :1的乙腈/甲苯混合液活化柱子，棄去流出液；
[0013] (4)提取液的凈化：將步驟⑵得到的提取液轉(zhuǎn)移到步驟⑶活化后的固相萃取 小柱中，用2mL體積比3 :1的乙腈/甲苯混合液洗滌試管，重復(fù)兩次，并將洗滌液轉(zhuǎn)移至小 柱中，用10mL體積比3 :1的乙腈/甲苯混合液洗滌小柱，收集流出液至平底燒瓶中；
[0014] (5)洗脫液的濃縮、溶劑置換：將步驟⑷得到的流出液在40°C水浴的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 中濃縮近干，用5mL正己烷進(jìn)行溶劑置換，重復(fù)兩次，加入lmL正己烷，轉(zhuǎn)動燒瓶使壁上殘 留農(nóng)藥充分溶解，渦旋混勻，過〇.45 y m有機(jī)相濾膜，待測GC/MS ;
[0015] (6)標(biāo)準(zhǔn)儲備液配制：將待測的101種農(nóng)藥分成9組，每組10-13種農(nóng)藥，分別稱 取0. 0100g農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品，用體積比為9:1的正己烷/丙酮溶液定容于10mL容量瓶中，配制 成9組濃度為1000 ii g/mL的101種農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)儲備液；
[0016] (7)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：將步驟（6)中標(biāo)準(zhǔn)儲備液各取0. lmL，等比例稀釋到10mL 容量瓶中，用正己烷定容，得到濃度為10Ug/mL的101種農(nóng)藥的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液；
[0017] (8)空白煙草樣品基質(zhì)的制備：稱量2. 0g不含目標(biāo)農(nóng)藥的煙草樣品，共五份，除不 添加內(nèi)標(biāo)溶液外，其他均按照步驟（2)、（3)、（4)和（5)進(jìn)行操作，制備空白煙草樣品基質(zhì)提 取液；
[0018] (9)基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：準(zhǔn)確移取步驟（7)中濃度為10yg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶 液2mL，置于10mL容量瓶中，用正己烷定容，配制成各農(nóng)藥濃度為2yg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液 I;準(zhǔn)確移取〇.〇125、0. 025、0. 0625、0. 125、0. 2mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液I，準(zhǔn)確移取50 iiL步驟 (1)中內(nèi)標(biāo)溶液，加到l.OmL的空白煙草樣品基質(zhì)提取液中，混勻，配成具有濃度梯度的目 標(biāo)農(nóng)藥的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，配制的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度分別為：〇. 025、0. 05、0. 125、 0. 25>0. 4 u g/mL；
[0019] (10)GC/MS測定：將步驟（9)中的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，過0.45ilm有機(jī)濾膜后，進(jìn) GC/MS進(jìn)行測定；
[0020] (11)農(nóng)藥殘留結(jié)果計(jì)算：采用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行農(nóng)藥目標(biāo)物的定量分析，即以農(nóng)藥和內(nèi) 標(biāo)物的定量離子峰面積比對其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，對提取后的樣品進(jìn) 行測定，測得檢出農(nóng)藥和內(nèi)標(biāo)物定量離子峰面積比值，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，求的樣品中農(nóng)藥的含 量。
[0021] 進(jìn)一步優(yōu)選地，如上所述同時測定煙草或煙草制品中101種農(nóng)藥殘留的方法，其 中步驟（10)中GC/MS測定時采用的色譜條件為：色譜柱DB-5MS彈性毛細(xì)管色譜柱，規(guī)格為 30mX0. 25_X0. 25iim;進(jìn)樣口 ：250°C;初始溫度 50°C，保持 5min，以 25°C/min速率升至 150°C，保持Omin，以3°C速率升至200°C，保持Omin，以8°C速率升至280°C，保持5min，以 10°C/min速率升至300°C，保持lOmin，總運(yùn)行時間為52-53min。
[0022] 進(jìn)一步優(yōu)選地，如上所述同時測定煙草或煙草制品中101種農(nóng)藥殘留的方法，其 中步驟（10)中GC/MS測定時采用的質(zhì)譜條件為：電子轟擊離子源，70ev，離子源溫度300°C; 接口溫度：280°C，四級桿溫度：180°C;溶劑延遲6min;掃描模式：選擇離子監(jiān)測。
[0023] 再進(jìn)一步優(yōu)選地，如上所述同時測定煙草或煙草制品中101種農(nóng)藥殘留的方法， 其中所述的101種農(nóng)藥包括：葉蟬散、庚烯磷、仲丁威、殘殺威、甲基內(nèi)吸磷、滅線磷、二溴 磷、氟樂靈、氟草胺、特丁硫磷、敵蟲硫磷、乙拌磷、敵稗、a-HCH、林丹、0-HCH、S-HCH、 op〃-DDE、pp〃-DDE、op〃-DDD、pp〃-DDD、op〃-DDT、pp〃-DDT、五氯硝基苯、七氯、艾氏劑、環(huán)氧 七氯、順式-氯丹、a-硫丹、反式-氯丹、狄試劑、異狄試劑、硫丹、硫丹硫酸酯、樂果、 克百威、磷胺E、磷胺Z、甲基毒死蜱、乙烯菌核利、甲基對硫磷、皮蠅硫磷、殺螟硫磷、馬拉硫 磷、溴硫磷、滅芽磷、亞胺硫磷、乙草胺、甲草胺、異丙甲草胺、敵草索、草乃敵、異丙樂靈、除 芽通、丁草胺、氟節(jié)胺、敵草胺、除草醚、異稻瘟凈、三唑酮、三唑醇、稻瘟靈、菌核凈、戊菌唑、 毒蟲畏、噻菌靈、滅菌丹、殺蟲畏、豐索磷、噁霜靈、七氟菊酯、聯(lián)苯菊酯、甲氧DDT、甲氰菊酯、 高效氯氟氰菊酯、順式_氯菊酯、反式_氯菊酯、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、四溴菊酯、順式-氟 氰菊酯、反式-氟氰菊酯、氰戊菊酯、順式-氟胺氰菊酯、反式-氟胺氰菊酯、s-氰戊菊酯、 溴氰菊酯、異菌脲、硫線磷、氯硝銨、水胺硫磷、苯霜靈、仲丁靈、二嗪磷、甲霜靈、毒死蜱、倍 硫磷、乙基對硫磷、付殺硫磷、谷硫磷、乙基谷硫磷。
[0024] 再進(jìn)一步優(yōu)選地，如上所述同時測定煙草或煙草制品中101種農(nóng)藥殘留的方法， 其中步驟（6)中將101種農(nóng)藥分成如下9組：
[0025] 第1組13種：葉蟬散、庚烯磷、仲丁威、殘殺威、甲基內(nèi)吸磷、滅線磷、二溴磷、氟樂 靈、氟草胺、特丁硫磷、敵蟲硫磷、乙拌磷、敵稗；
[0026]第 2 組 10 種a-HCH、林丹、P-HCH、S-HCH、op//-DDE、pp//-DDE、op//-DDD、pp//_DDD、 op"-DDT、pp〃-DDT;
[0027] 第3組11種：五氯硝基苯、七氯、艾氏劑、環(huán)氧七氯、順式-氯丹、a-硫丹、反 式-氯丹、狄試劑、異狄試劑、3 -硫丹、硫丹硫酸酯；
[0028] 第4組13種：樂果、克百威、磷胺E、磷胺Z、甲基毒死蜱、乙烯菌核利、甲基對硫磷、 皮蠅硫磷、殺螟硫磷、馬拉硫磷、溴硫磷、滅芽磷、亞胺硫磷；
[0029] 第5組11種：乙草胺、甲草胺、異丙甲草胺、敵草索、草乃敵、異丙樂靈、除芽通、丁 草胺、氟節(jié)胺、敵草胺、除草醚；
[0030] 第6組12種：異稻瘟凈、三唑酮、三唑醇、稻瘟靈、菌核凈、戊菌唑、毒蟲畏、噻菌靈、 滅菌丹、殺蟲畏、豐索磷、 11 惡霜靈；
[0031] 第7組10種：七氟菊酯、聯(lián)苯菊酯、甲氧DDT、甲氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、順式-氯 菊酯、反式-氯菊酯、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、四溴菊酯；
[0032] 第8組10種：順式-氟氰菊酯、反式-氟氰菊酯、氰戊菊酯、順式-氟胺氰菊酯、反 式-氟胺氰菊酯、s-氰戊菊酯、溴氰菊酯、異菌脲、硫線磷、氯硝銨；
[0033] 第9組11種：水胺硫磷、苯霜靈、仲丁靈、二嗪磷、甲霜靈、毒死蜱、倍硫磷、乙基對 硫磷、付殺硫磷、谷硫磷、乙基谷硫磷。
[0034] 再進(jìn)一步優(yōu)選地，如上所述同時測定煙草或煙草制品中101種農(nóng)藥殘留的方法， 其中第1組農(nóng)藥以氯唑磷為內(nèi)標(biāo)進(jìn)行校正，第2-9組農(nóng)藥以滅蟻靈為內(nèi)標(biāo)進(jìn)行校正。
[0035] 本發(fā)明方法的檢測限：將不同濃度目標(biāo)農(nóng)藥的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)GC/MS，以3倍 信噪比（S/N)計(jì)算檢測限（L0D)，檢測限在0.001-0. 060iig/mL之間。
[0036] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明方法具有如下優(yōu)點(diǎn)和進(jìn)步性：
[0037] (1)前處理中使用兩種不同極性的內(nèi)標(biāo)進(jìn)行校正，可以滿足極性差異大的目標(biāo)物 如有機(jī)氯、菊酯類農(nóng)藥和有機(jī)磷農(nóng)藥的同時分析需求，保證了非極性和極性目標(biāo)物的回收 率。
[0038] (2)選用1%甲酸的乙腈作為提取溶劑，可以降低一些農(nóng)藥的降解（如N-三鹵代 乙基硫農(nóng)藥滅菌丹），增加目標(biāo)農(nóng)藥在乙腈中的穩(wěn)定性，提高回收率。
[0039] (3)采用本發(fā)明方法凈化后的上機(jī)溶液清澈透明，與現(xiàn)有技術(shù)得到的上機(jī)溶液相 t匕，共萃取基質(zhì)中色素等干擾組分大大減少（見圖4、5,兩種處理方法上機(jī)溶液的紫外-可 見吸收光譜圖，QuECHERS方法上機(jī)溶液在400-500nm和650nm處的可見區(qū)均有較強(qiáng)的吸收 峰，而本發(fā)明上機(jī)溶液無明顯吸收峰），減少了儀器的維護(hù)頻率，更適用于大批量樣品分析。
[0040] (4)本發(fā)明方法使用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行檢測，可以降低煙草多農(nóng)殘檢測 業(yè)務(wù)門檻。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0041]圖1:ioi種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品snu普圖；
[0042] 圖2:煙葉空白樣本添加101種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品SM譜圖；
[0043] 圖3:煙葉空白樣本SM譜圖；
[0044] 圖4:本發(fā)明上機(jī)溶液紫外-可見吸收光譜圖；
[0045] 圖5 :QuECHERS方法上機(jī)溶液紫外-可見吸收光譜圖。

【具體實(shí)施方式】
[0046] 實(shí)施例1:樣品A煙末中101種農(nóng)藥殘留量檢測
[0047] 1、儀器與試劑：
[0048] 農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：葉蟬散、庚烯磷、仲丁威、殘殺威、甲基內(nèi)吸磷、滅線磷、二溴磷、氟樂 靈、氟草胺、特丁硫磷、敵蟲硫磷、乙拌磷、敵稗、a-HCH、林丹、P-HCH、S-HCH、op〃-DDE、 pp〃-DDE、op〃-DDD、pp〃-DDD、op〃-DDT、pp〃-DDT、五氯硝基苯、七氯、艾氏劑、環(huán)氧七氯、順 式-氯丹、a-硫丹、反式-氯丹、狄試劑、異狄試劑、硫丹、硫丹硫酸酯、樂果、克百威、 磷胺E、磷胺Z、甲基毒死蜱、乙烯菌核利、甲基對硫磷、皮蠅硫磷、殺螟硫磷、馬拉硫磷、溴硫 磷、滅芽磷、亞胺硫磷、乙草胺、甲草胺、異丙甲草胺、敵草索、草乃敵、異丙樂靈、除芽通、丁 草胺、氟節(jié)胺、敵草胺、除草醚、異稻瘟凈、三唑酮、三唑醇、稻瘟靈、菌核凈、戊菌唑、毒蟲畏、 噻菌靈、滅菌丹、殺蟲畏、豐索磷、噁霜靈、七氟菊酯、聯(lián)苯菊酯、甲氧DDT、甲氰菊酯、高效氯 氟氰菊酯、順式-氯菊酯、反式-氯菊酯、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、四溴菊酯、順式-氟氰菊 酯、反式-氟氰菊酯、氰戊菊酯、順式-氟胺氰菊酯、反式-氟胺氰菊酯、s-氰戊菊酯、溴氰 菊酯、異菌脲、硫線磷、氯硝銨、水胺硫磷、苯霜靈、仲丁靈、二嗪磷、甲霜靈、毒死蜱、倍硫磷、 乙基對硫憐、付殺硫憐、谷硫憐、乙基谷硫憐，
[0049] 內(nèi)標(biāo)：滅蟻靈、氯唑磷，均為標(biāo)準(zhǔn)品；乙腈、甲酸、丙酮、正己烷、甲苯、均為色譜純， 無水硫酸鈉為分析純；蒸餾水，符合GB/T6682中一級水的要求。
[0050] 美國安捷倫7890A-5975C氣相色譜-質(zhì)譜儀；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士步琦公司）； BS214S分析天平（德國Sartorius公司）；上海安亭高速離心機(jī)。
[0051] 2、樣品處理：
[0052] (1)稱取2. 0g煙末（樣品A:精確至0? 001g)于50mL離心管中，加入5g無水硫 酸鈉、100yL內(nèi)標(biāo)（滅蟻靈、氯唑磷混標(biāo)），20mL1 %甲酸乙腈溶液，渦旋震蕩3分鐘，以 4000r/min離心10分鐘，吸取5mL上清液到10mL離心管中，待凈化。
[0053] (2)固相萃取小柱活化：TPT固相萃取小柱中加入2cm高無水硫酸鈉，用5mL乙腈 /甲苯（體積比3:1)活化柱子，棄去流出液。
[0054] (3)提取液的凈化：將步驟2中提取液轉(zhuǎn)移到活化后的固相萃取小柱中，用2mL乙 腈/甲苯（體積比3 :1)洗滌試管，重復(fù)兩次，并將洗滌液轉(zhuǎn)移至小柱中，用10mL乙腈/甲 苯（體積比3 :1)洗滌小柱，收集流出液至平底燒瓶中。
[0055] (4)洗脫液的濃縮、溶劑置換：將步驟3中流出液在40°C水浴的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮 近干，用5mL正己烷進(jìn)行溶劑置換，重復(fù)兩次，加入lmL正己烷，轉(zhuǎn)動燒瓶使壁上殘留農(nóng)藥 充分溶解，渦旋混勻，過〇. 45iim有機(jī)相濾膜，待測（GC/MS)。
[0056] 采用上述樣品處理方法凈化后的上機(jī)溶液清澈透明，與現(xiàn)有技術(shù)得到的上機(jī)溶液 相比，共萃取基質(zhì)中色素等干擾組分大大減少（見圖4、圖5,兩種處理方法上機(jī)溶液的紫 外-可見吸收光譜圖，QuECHERS方法上機(jī)溶液在400-500nm和650nm處的可見區(qū)均有較強(qiáng) 的吸收峰，而本發(fā)明上機(jī)溶液無明顯吸收峰），減少了儀器的維護(hù)頻率，更適用于大批量樣 品分析。
[0057] 3、準(zhǔn)備混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：
[0058] 將本發(fā)明涉及101種農(nóng)藥分成如下9組：
[0059] 第1組13種：葉蟬散、庚烯磷、仲丁威、殘殺威、甲基內(nèi)吸磷、滅線磷、二溴磷、氟樂 靈、氟草胺、特丁硫磷、敵蟲硫磷、乙拌磷、敵稗；
[0060]第 2 組 10 種a-HCH、林丹、P-HCH、S-HCH、op"-DDE、pp"-DDE、op"-DDD、pp"-DDD、 op"-DDT、pp〃-DDT;
[0061] 第3組11種：五氯硝基苯、七氯、艾氏劑、環(huán)氧七氯、順式-氯丹、a-硫丹、反 式-氯丹、狄試劑、異狄試劑、3 -硫丹、硫丹硫酸酯；
[0062] 第4組13種：樂果、克百威、磷胺E、磷胺Z、甲基毒死蜱、乙烯菌核利、甲基對硫磷、 皮蠅硫磷、殺螟硫磷、馬拉硫磷、溴硫磷、滅芽磷、亞胺硫磷；
[0063] 第5組11種：乙草胺、甲草胺、異丙甲草胺、敵草索、草乃敵、異丙樂靈、除芽通、丁 草胺、氟節(jié)胺、敵草胺、除草醚；
[0064] 第6組12種：異稻瘟凈、三唑酮、三唑醇、稻瘟靈、菌核凈、戊菌唑、毒蟲畏、噻菌靈、 滅菌丹、殺蟲畏、豐索磷、 11 惡霜靈；
[0065] 第7組10種：七氟菊酯、聯(lián)苯菊酯、甲氧DDT、甲氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、順式-氯 菊酯、反式-氯菊酯、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、四溴菊酯；
[0066] 第8組10種：順式-氟氰菊酯、反式-氟氰菊酯、氰戊菊酯、順式-氟胺氰菊酯、反 式-氟胺氰菊酯、s-氰戊菊酯、溴氰菊酯、異菌脲、硫線磷、氯硝銨；
[0067] 第9組11種：水胺硫磷、苯霜靈、仲丁靈、二嗪磷、甲霜靈、毒死蜱、倍硫磷、乙基對 硫磷、付殺硫磷、谷硫磷、乙基谷硫磷。
[0068] 分別稱取0. 010g農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品（結(jié)果精確至0.lmg)，用體積比為9:1的正己烷/丙 酮溶液定容于10mL容量瓶中，配制成9組濃度為1000yg/mL的農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。標(biāo)準(zhǔn) 儲備液避光〇°C-4°C保存，可使用1年。
[0069] 將上述9組標(biāo)準(zhǔn)儲備液各取0.lmL，等比例稀釋到10mL容量瓶中，用正己烷定容， 得到濃度為10ug/mL的101種農(nóng)藥的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)溶液避光0°C-4°C保存，可 使用1個月。
[0070] 第1組農(nóng)藥以氯唑磷為內(nèi)標(biāo)進(jìn)行校正，第2-9組農(nóng)藥以滅蟻靈為內(nèi)標(biāo)進(jìn)行校正。 101種目標(biāo)農(nóng)藥和內(nèi)標(biāo)的保留時間和質(zhì)譜參數(shù)見附表1。101種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品SIM色譜圖見 圖1，煙葉空白樣本SM色譜圖見圖2,煙葉空白樣本添加101種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品SM色譜圖見 圖3。
[0071] 表1 :1〇1種農(nóng)藥及內(nèi)標(biāo)的保留時間及質(zhì)譜參數(shù)
[0072]

【權(quán)利要求】
1. 一種同時測定煙草或煙草制品中101種農(nóng)藥殘留的方法，其特征在于，該方法是將 煙草樣品中加入無水硫酸鈉、內(nèi)標(biāo)和酸化乙腈后，渦旋提取，離心分層，取一定量萃取液過 固相萃取小柱凈化，用體積比3 :1的乙腈/甲苯混合液洗脫，將洗脫液濃縮，并以正己烷進(jìn) 行溶劑交換，過有機(jī)相濾膜，用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行檢測。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述同時測定煙草或煙草制品中101種農(nóng)藥殘留的方法，其特征在 于，其具體的操作步驟如下： (1) 內(nèi)標(biāo)混合溶液的配制：配制滅蟻靈和氯唑磷濃度均為5 y g/mL的正己烷內(nèi)標(biāo)混合 溶液； (2) 農(nóng)藥目標(biāo)物提?。悍Q取2. 000g煙末于50mL離心管中，加入5g無水硫酸鈉、100ii L 步驟（1)配制的內(nèi)標(biāo)混合溶液，以及20mL 1%甲酸的乙腈溶液，渦旋震蕩3分鐘，以4000r/ min離心10分鐘，吸取5mL上清液到10mL離心管中，待凈化； ⑶固相萃取小柱活化：TPT固相萃取小柱中加入2cm高無水硫酸鈉，用5mL體積比3 :1的乙腈/甲苯混合液活化柱子，棄去流出液； (4) 提取液的凈化：將步驟（2)得到的提取液轉(zhuǎn)移到步驟（3)活化后的固相萃取小柱 中，用2mL體積比3 :1的乙腈/甲苯混合液洗滌試管，重復(fù)兩次，并將洗滌液轉(zhuǎn)移至小柱中， 用10mL體積比3 :1的乙腈/甲苯混合液洗滌小柱，收集流出液至平底燒瓶中； (5) 洗脫液的濃縮、溶劑置換：將步驟⑷得到的流出液在40°C水浴的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃 縮近干，用5mL正己烷進(jìn)行溶劑置換，重復(fù)兩次，加入lmL正己烷，轉(zhuǎn)動燒瓶使壁上殘留農(nóng) 藥充分溶解，渦旋混勻，過〇. 45 ii m有機(jī)相濾膜，待測GC/MS ; (6) 標(biāo)準(zhǔn)儲備液配制：將待測的101種農(nóng)藥分成9組，每組10-13種農(nóng)藥，分別稱取 0. 0100g農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品，用體積比為9:1的正己烷/丙酮溶液定容于10mL容量瓶中，配制成9 組濃度為1000 U g/mL的101種農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)儲備液； (7) 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：將步驟（6)中標(biāo)準(zhǔn)儲備液各取0. lmL，等比例稀釋到10mL容量 瓶中，用正己烷定容，得到濃度為10 U g/mL的101種農(nóng)藥的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液； (8) 空白煙草樣品基質(zhì)的制備：稱量2. 0g不含目標(biāo)農(nóng)藥的煙草樣品，共五份，除不添加 內(nèi)標(biāo)溶液外，其他均按照步驟（2)、（3)、（4)和（5)進(jìn)行操作，制備空白煙草樣品基質(zhì)提取 液； (9) 基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：準(zhǔn)確移取步驟（7)中濃度為10 y g/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液 2mL，置于10mL容量瓶中，用正己烷定容，配制成各農(nóng)藥濃度為g/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液 I ;準(zhǔn)確移取〇. 〇125、0. 025、0. 0625、0. 125、0. 2mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液I，準(zhǔn)確移取50 ii L步驟 (1)中內(nèi)標(biāo)溶液，加到l.OmL的空白煙草樣品基質(zhì)提取液中，混勻，配成具有濃度梯度的目 標(biāo)農(nóng)藥的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，配制的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度分別為：〇. 025、0. 05、0. 125、 0.25>0.4 u g/mL ； (10) GC/MS測定：將步驟（9)中的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，過0.45iim有機(jī)濾膜后，進(jìn)GC/MS 進(jìn)行測定； (11) 農(nóng)藥殘留結(jié)果計(jì)算：采用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行農(nóng)藥目標(biāo)物的定量分析，即以農(nóng)藥和內(nèi)標(biāo)物 的定量離子峰面積比對其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，對提取后的樣品進(jìn)行測 定，測得檢出農(nóng)藥和內(nèi)標(biāo)物定量離子峰面積比值，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，求的樣品中農(nóng)藥的含量。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述同時測定煙草或煙草制品中101種農(nóng)藥殘留的方法，其特征在 于，步驟（10)中GC/MS測定時采用的色譜條件為：色譜柱DB-5MS彈性毛細(xì)管色譜柱，規(guī)格 為3011^0.25111111\0.2511111;進(jìn)樣口：2501：;初始溫度501：，保持5111111，以251：/111111速率升 至150°C，保持Omin，以3°C速率升至200°C，保持Omin，以8°C速率升至280°C，保持5min， 以10°C /min速率升至300°C，保持lOmin，總運(yùn)行時間為52-53min。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述同時測定煙草或煙草制品中101種農(nóng)藥殘留的方法，其特征 在于，步驟（10)中GC/MS測定時采用的質(zhì)譜條件為：電子轟擊離子源，70ev，離子源溫度 300°C ;接口溫度：280°C，四級桿溫度：180°C ;溶劑延遲6min ;掃描模式：選擇離子監(jiān)測。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述同時測定煙草或煙草制品中101種農(nóng)藥殘留的方法，其特 征在于，所述的101種農(nóng)藥包括：葉蟬散、庚烯磷、仲丁威、殘殺威、甲基內(nèi)吸磷、滅線磷、二 溴磷、氟樂靈、氟草胺、特丁硫磷、敵蟲硫磷、乙拌磷、敵稗、a-HCH、林丹、P-HCH、S-HCH、 op〃-DDE、pp〃-DDE、op〃-DDD、pp〃-DDD、op〃-DDT、pp〃-DDT、五氯硝基苯、七氯、艾氏劑、環(huán)氧 七氯、順式-氯丹、a-硫丹、反式-氯丹、狄試劑、異狄試劑、￠-硫丹、硫丹硫酸酯、樂果、 克百威、磷胺E、磷胺Z、甲基毒死蜱、乙烯菌核利、甲基對硫磷、皮蠅硫磷、殺螟硫磷、馬拉硫 磷、溴硫磷、滅芽磷、亞胺硫磷、乙草胺、甲草胺、異丙甲草胺、敵草索、草乃敵、異丙樂靈、除 芽通、丁草胺、氟節(jié)胺、敵草胺、除草醚、異稻瘟凈、三唑酮、三唑醇、稻瘟靈、菌核凈、戊菌唑、 毒蟲畏、噻菌靈、滅菌丹、殺蟲畏、豐索磷、噁霜靈、七氟菊酯、聯(lián)苯菊酯、甲氧DDT、甲氰菊酯、 高效氯氟氰菊酯、順式_氯菊酯、反式_氯菊酯、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、四溴菊酯、順式-氟 氰菊酯、反式-氟氰菊酯、氰戊菊酯、順式-氟胺氰菊酯、反式-氟胺氰菊酯、s-氰戊菊酯、 溴氰菊酯、異菌脲、硫線磷、氯硝銨、水胺硫磷、苯霜靈、仲丁靈、二嗪磷、甲霜靈、毒死蜱、倍 硫磷、乙基對硫磷、付殺硫磷、谷硫磷、乙基谷硫磷。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述同時測定煙草或煙草制品中101種農(nóng)藥殘留的方法，其特征在 于，步驟（6)中將101種農(nóng)藥分成如下9組： 第1組13種：葉蟬散、庚烯磷、仲丁威、殘殺威、甲基內(nèi)吸磷、滅線磷、二溴磷、氟樂靈、氟 草胺、特丁硫磷、敵蟲硫磷、乙拌磷、敵稗； 第 2 組 10 種 a -HCH、林丹、0 -HCH、S -HCH、op〃-DDE、pp〃-DDE、op〃-DDD、pp〃-DDD、 op"-DDT、pp〃-DDT ; 第3組11種：五氯硝基苯、七氯、艾氏劑、環(huán)氧七氯、順式-氯丹、a-硫丹、反式-氯丹、 狄試劑、異狄試劑、3 -硫丹、硫丹硫酸酯； 第4組13種：樂果、克百威、磷胺E、磷胺Z、甲基毒死蜱、乙烯菌核利、甲基對硫磷、皮蠅 硫磷、殺螟硫磷、馬拉硫磷、溴硫磷、滅芽磷、亞胺硫磷； 第5組11種：乙草胺、甲草胺、異丙甲草胺、敵草索、草乃敵、異丙樂靈、除芽通、丁草胺、 氟節(jié)胺、敵草胺、除草醚； 第6組12種：異稻瘟凈、三唑酮、三唑醇、稻瘟靈、菌核凈、戊菌唑、毒蟲畏、噻菌靈、滅菌 丹、殺蟲畏、豐索磷、噁霜靈； 第7組10種：七氟菊酯、聯(lián)苯菊酯、甲氧DDT、甲氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、順式-氯菊 酯、反式-氯菊酯、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、四溴菊酯； 第8組10種：順式-氟氰菊酯、反式-氟氰菊酯、氰戊菊酯、順式-氟胺氰菊酯、反式-氟 胺氰菊酯、s-氰戊菊酯、溴氰菊酯、異菌脲、硫線磷、氯硝銨； 第9組11種：水胺硫磷、苯霜靈、仲丁靈、二嗪磷、甲霜靈、毒死蜱、倍硫磷、乙基對硫磷、 付殺硫憐、谷硫憐、乙基谷硫憐。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述同時測定煙草或煙草制品中101種農(nóng)藥殘留的方法，其特征在 于，第1組農(nóng)藥以氯唑磷為內(nèi)標(biāo)進(jìn)行校正，第2-9組農(nóng)藥以滅蟻靈為內(nèi)標(biāo)進(jìn)行校正。
【文檔編號】G01N30/02GK104458947SQ201410714665
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年11月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月28日
【發(fā)明者】曹建敏, 郭承芳, 于衛(wèi)松, 邱軍, 方松, 魯世軍, 王允白 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院煙草研究所