一種碳納米粒子及其制備方法和在血糖檢測(cè)中的應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種碳納米粒子及其制備方法和在血糖檢測(cè)中的應(yīng)用。該碳納米粒子的制備方法包括：將5g/L至飽和濃度的苯硼酸溶液調(diào)節(jié)pH值至7-9；向pH值為7-9的苯硼酸溶液中通入氮?dú)?，除去溶液中的氧氣，得到溶液M1；在160-200℃下，使所述溶液M1進(jìn)行水熱碳化反應(yīng)，得到溶液M2；將所述溶液M2冷卻，然后進(jìn)行離心分離，提取分離出的上清液M3；將所述上清液M3進(jìn)行透析，得到碳納米粒子。本發(fā)明還提供了通過(guò)上述制備方法得到的碳納米粒子及該碳納米粒子在血糖檢測(cè)中的應(yīng)用。本發(fā)明實(shí)現(xiàn)了以一種制作方法簡(jiǎn)單且綠色環(huán)保的碳納米粒子對(duì)血清中葡萄糖含量進(jìn)行定量檢測(cè)的方法。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種碳納米粒子及其制備方法和在血糖檢測(cè)中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物檢測(cè)領(lǐng)域，具體地，涉及一種碳納米粒子及其制備方法和在血糖檢測(cè)中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]葡萄糖在生物學(xué)領(lǐng)域具有重要地位，是活細(xì)胞的能量來(lái)源和新陳代謝的中間產(chǎn)物，是生物體內(nèi)主要的供能物質(zhì)，且對(duì)人體內(nèi)葡萄糖的含量檢測(cè)是醫(yī)學(xué)診斷的重要標(biāo)準(zhǔn)，頻繁的檢測(cè)和嚴(yán)格控制血糖水平是有效管理糖尿病和減少相關(guān)并發(fā)癥必不可少的手段。目前，人們已經(jīng)研制出多種光化學(xué)傳感法檢測(cè)葡萄糖，比如一些金屬半導(dǎo)(CdTe，Au, Ag納米粒子)，但是這些半導(dǎo)體納米材料的制作方法復(fù)雜、制備價(jià)格昂貴，且毒性較大，對(duì)環(huán)境危害大，因此限制了其應(yīng)用領(lǐng)域。
[0003]碳量子點(diǎn)被認(rèn)為具有優(yōu)越的發(fā)光性能、良好的生物相容性和化學(xué)穩(wěn)定性，且其具有制作方法簡(jiǎn)單、制備價(jià)格低廉和低細(xì)胞毒性等特征，故而此類(lèi)具有環(huán)境友好型的納米材料，已經(jīng)成為這兩年研究的熱點(diǎn)。目前，碳量子點(diǎn)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于細(xì)胞成像、光化學(xué)催化、光致發(fā)光/電致發(fā)光傳感器和生物醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域。雖然已有研究人員合成出了碳半導(dǎo)體材料用于葡萄糖傳感，但是這類(lèi)方法操作繁瑣，且不能應(yīng)用于檢測(cè)血清中的葡萄糖含量。因此，制備一種制作方法簡(jiǎn)單、綠色環(huán)保、且可應(yīng)用于對(duì)血清中葡萄糖的定量檢測(cè)的檢測(cè)試劑是本發(fā)明亟須解決的問(wèn)題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)中檢測(cè)試劑制作方法復(fù)雜、制備價(jià)格昂貴，且毒性較大，不能廣泛應(yīng)用于對(duì)血糖的檢測(cè)中，從而提供了一種碳納米粒子及其制備方法和在血糖檢測(cè)·中的應(yīng)用。
[0005]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種碳納米粒子的制備方法，其特征在于，該方法包括:
[0006](I)將5g/L至飽和濃度的苯硼酸溶液調(diào)節(jié)pH值至7-9 ；
[0007](2)向pH值為7-9的苯硼酸溶液中通入氮?dú)?，除去溶液中的氧氣，得到溶液Ml ；
[0008](3)在160-200°C下，使所述溶液Ml進(jìn)行水熱碳化反應(yīng)，得到溶液M2 ；
[0009](4)將所述溶液M2冷卻，然后進(jìn)行離心分離，提取分離出的上清液M3 ；
[0010](5)將所述上清液M3進(jìn)行透析，得到碳納米粒子。
[0011]本發(fā)明還提供了一種由上述制備方法制備的碳納米粒子。
[0012]本發(fā)明還提供了一種上述碳納米粒子在血糖檢測(cè)中的應(yīng)用。
[0013]本發(fā)明通過(guò)水熱碳化苯硼酸，從而直接制備帶有硼酸基團(tuán)的碳納米粒子，通過(guò)熒光強(qiáng)度表征出碳納米粒子和葡萄糖之間的反應(yīng)，利用熒光分光光度計(jì)對(duì)反應(yīng)結(jié)果進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)了以一種制作方法簡(jiǎn)單且綠色環(huán)保的碳納米粒子對(duì)血清中葡萄糖含量進(jìn)行定量檢測(cè)的方法。[0014]本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點(diǎn)將在隨后的【具體實(shí)施方式】部分予以詳細(xì)說(shuō)明。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0015]附圖是用來(lái)提供對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步理解，并且構(gòu)成說(shuō)明書(shū)的一部分，與下面的【具體實(shí)施方式】一起用于解釋本發(fā)明，但并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限制。在附圖中:
[0016]圖1是本發(fā)明提供的碳納米粒子的制備和應(yīng)用流程圖；
[0017]圖2是根據(jù)本發(fā)明提供的碳納米粒子的透射電鏡圖；
[0018]圖3是根據(jù)本發(fā)明提供的碳納米粒子紫外可見(jiàn)吸收光譜圖和熒光光譜圖；
[0019]圖4是根據(jù)本發(fā)明提供的碳納米粒子表面官能團(tuán)的紅外表征圖；
[0020]圖5是根據(jù)本發(fā)明提供的碳納米粒子X(jué)射線(xiàn)光電子能譜(XPS)表征圖；
[0021]圖6是實(shí)施例1提供的碳納米粒子與葡萄糖響應(yīng)的熒光光譜圖及濃度與光譜之間的對(duì)應(yīng)關(guān)系。
【具體實(shí)施方式】
[0022]以下結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解的是，此處所描述的【具體實(shí)施方式】?jī)H用于說(shuō)明和解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。
[0023]如圖1所示，本 發(fā)明提供了一種碳納米粒子的制備方法，其中，該方法包括:
[0024](I)將5g/L至飽和濃度的苯硼酸溶液調(diào)節(jié)pH值至7-9 ；
[0025](2)向pH值為7-9的苯硼酸溶液中通入氮?dú)?，除去溶液中的氧氣，得到溶液Ml ；
[0026](3)在160-200°C下，使所述溶液Ml進(jìn)行水熱碳化反應(yīng)，得到溶液M2 ；
[0027](4)將所述溶液M2冷卻，然后進(jìn)行離心分離，提取分離出的上清液M3 ；
[0028](5)將所述上清液M3進(jìn)行透析，得到碳納米粒子。
[0029]在所述制備方法中，為了使溶液達(dá)到pH值為7-9的要求，步驟(1)中，調(diào)節(jié)pH值采用PH值調(diào)節(jié)劑進(jìn)行，其中，所述pH值調(diào)節(jié)劑根據(jù)本發(fā)明pH值采用本領(lǐng)域常規(guī)使用的pH值調(diào)節(jié)劑，在本發(fā)明中優(yōu)選為NaOH
[0030]在所述制備方法中，為了使溶液中氧氣得到更充分的去除，其中，在步驟(2)中，通入氮?dú)獾臅r(shí)間為0.5-2小時(shí)，優(yōu)選為1-1.5小時(shí)。
[0031]在所述制備方法中，為了使所述反應(yīng)釜能確保在達(dá)到所述160°C _200°C的反應(yīng)溫度時(shí)仍能正常運(yùn)行從而確保溶液能得到更充分的反應(yīng)其中，在步驟(3)中，所述水熱碳化反應(yīng)在聚四氟乙烯反應(yīng)釜中進(jìn)行，水熱碳化反應(yīng)的時(shí)間為6-10小時(shí)，優(yōu)選為7-9小時(shí)。
[0032]在所述制備方法中，為了使透析過(guò)程能得到我們需要的粒徑的碳納米粒子，其中，在步驟(5)中，所述透析的過(guò)程使用截留分子量為100-2000的透析袋進(jìn)行，所述透析的時(shí)間為20-30小時(shí)；
[0033]優(yōu)選地，所述透析袋的截留分子量為500-1000，所述透析的時(shí)間為23_27小時(shí)。
[0034]如圖2、3、4和5所示，本發(fā)明還提供了一種由上述制備方法制備的碳納米粒子。
[0035]如圖1和6所示，本發(fā)明還提供了一種上述碳納米粒子在血糖檢測(cè)中的應(yīng)用，所述應(yīng)用通過(guò)檢測(cè)添加了待測(cè)試樣的碳納米粒子的熒光強(qiáng)度與葡萄糖濃度關(guān)系來(lái)推算待測(cè)試樣中葡萄糖的濃度。
[0036]在所述碳納米粒子在血糖檢測(cè)中的應(yīng)用中，其中，待測(cè)試樣為血清樣本時(shí)，為了使檢測(cè)結(jié)果更為清晰準(zhǔn)確，檢測(cè)過(guò)程包括:
[0037](I)將所述血清樣本進(jìn)行離心，除去其中的大分子物質(zhì)和蛋白質(zhì)，得到上清液NI ；
[0038](2)將所述上清液NI進(jìn)行稀釋?zhuān)玫交旌衔颪I ；
[0039](3)將所述碳納米粒子與所述混合物NI混合接觸，檢測(cè)混合接觸后得到的混合物的熒光強(qiáng)度，然后通過(guò)該熒光強(qiáng)度與葡萄糖濃度關(guān)系推算血糖含量。
[0040]在所述應(yīng)用中，為了使得到的上清液更為符合檢測(cè)的需要且使血清樣本能夠更為便于檢測(cè)又不影響檢測(cè)結(jié)果，步驟(1)中的離心過(guò)程在超濾離心管中進(jìn)行，步驟(2)中的稀釋過(guò)程的稀釋倍數(shù)為100-300倍，優(yōu)選為160-240倍。
[0041]在所述應(yīng)用中，為了對(duì)檢測(cè)試劑進(jìn)行保護(hù)，確保結(jié)果的精確度，其中，在步驟(3)中，檢測(cè)過(guò)程還包括在混合接觸后得到的混合物中加入磷酸緩沖鹽溶液，所述磷酸緩沖鹽溶液為使用本領(lǐng)域常規(guī)使用的磷酸緩沖鹽溶液配制方法進(jìn)行配制，所述磷酸緩沖鹽溶液的濃度為 0.005-0.015mol/L，優(yōu)選為 0.008-0.012mol/L。 [0042]如圖1所示，根據(jù)本發(fā)明的一種優(yōu)選的實(shí)施方式包括:
[0043]( I)配置飽和的苯硼酸溶液；
[0044](2 )用NaOH將所述飽和苯硼酸溶液pH值為7_9 ；
[0045](3)向所述pH值為7-9的飽和苯硼酸溶液中通入氮?dú)?-1.5小時(shí)，除去溶液中的氧氣，得到溶液Ml ；
[0046](4)將所述溶液Ml置于聚四氟乙烯反應(yīng)釜中，加熱至160°C -200°C同時(shí)使溶液Ml在反應(yīng)釜中反應(yīng)7-9小時(shí)得到溶液M2 ；
[0047](5)將溶液M2冷卻至室溫后將所述溶液M2離心并提取上清液M3 ；
[0048](6)將所述上清液M3置于分子截流量為500-1000的透析袋中透析23_27小時(shí)，得到純凈的碳納米粒子；
[0049](7)將所述血清樣本置于超濾離心管中進(jìn)行離心；
[0050](8)將所述離心后且除去大分子物質(zhì)和蛋白質(zhì)的血清樣本稀釋160-240倍，得到混合物NI ；
[0051](9)用步驟(6)中制備的碳納米粒子對(duì)所述混合物NI中血糖含量進(jìn)行檢測(cè)。
[0052]以下通過(guò)具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。其中，所述苯硼酸為市售分析純苯硼酸，所述磷酸緩沖鹽溶液為使用本領(lǐng)域常規(guī)使用的磷酸緩沖鹽溶液配置方法進(jìn)行配制。
[0053]實(shí)施例1
[0054]如圖1所示，在20°C的室溫條件下，將Sg苯硼酸加入到500ml蒸餾水中進(jìn)行攪拌，至苯硼酸固體不再溶解后靜置2小時(shí)，將上層清液過(guò)濾后得到飽和的苯硼酸溶液；用NaOH對(duì)得到的飽和苯硼酸進(jìn)行酸度調(diào)節(jié)，得到pH值為7.8的飽和苯硼酸溶液；將上述飽和苯硼酸溶液置于密閉容器中，向容器底部通入氮?dú)馔ㄈ隝小時(shí)，充分排盡溶液中的氧氣，得到溶液Ml ;將所述溶液Ml置于聚四氟乙烯反應(yīng)釜中，加熱到175°C反應(yīng)7.5小時(shí)，得到溶液M2 ;將112冷卻至室溫后置于離心機(jī)中進(jìn)行離心,提取上清液M3 ;將所述上清液M3置于分子截流量為500的透析袋中透析24小時(shí)，得到碳納米粒子；將20 μ L的碳納米粒子和150 μ L0.01mol/L的磷酸緩沖鹽溶液置于5ml的玻璃管內(nèi)，向玻璃管內(nèi)加入不同濃度的葡萄糖溶液至玻璃管中溶液總量為2ml，將玻璃管中溶液進(jìn)行震蕩混勻，放置I小時(shí)，使玻璃管中物質(zhì)充分反應(yīng)。用熒光分光光度計(jì)對(duì)玻璃管中物質(zhì)進(jìn)行熒光強(qiáng)度測(cè)定，如圖6所示，得到不同濃度葡萄糖下熒光強(qiáng)度的數(shù)值，并根據(jù)該數(shù)值做出葡萄糖濃度與熒光強(qiáng)度的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
[0055]實(shí)施例2
[0056]使用實(shí)施例1中得到的碳納米粒子；將需要進(jìn)行檢測(cè)的血清樣品置于超濾離心管中進(jìn)行離心；將離心后且除去大分子物質(zhì)和蛋白質(zhì)的血清樣本稀釋180倍，得到混合物NI ；將20 μ L的碳納米粒子和150 μ L0.01mol/L的磷酸緩沖鹽溶液置于5ml的玻璃管內(nèi)，向玻璃管內(nèi)加入混合物NI至玻璃管中溶液總量為2ml，將玻璃管中溶液進(jìn)行震蕩混勻，放置I小時(shí)，使玻璃管中物質(zhì)充分反應(yīng)。用熒光分光光度計(jì)對(duì)玻璃管中物質(zhì)進(jìn)行熒光強(qiáng)度測(cè)定，根據(jù)熒光強(qiáng)度參照標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)推算出血清中葡萄糖含量，從而得出血糖的含量。
[0057]實(shí)施例3
[0058]如圖1所示，在20°C的室溫條件下，將4g苯硼酸加入到500ml蒸餾水中進(jìn)行攪拌，至苯硼酸固體完全溶解后得到苯硼酸溶液；用NaOH對(duì)得到的苯硼酸溶液進(jìn)行酸度調(diào)節(jié)，得到PH值為7.2的苯硼酸溶液；將上述苯硼酸溶液置于密閉容器中，向容器底部通入氮?dú)馔ㄈ?.2小時(shí)，充分排盡溶液中的氧氣，得到溶液Ml ;將所述溶液Ml置于聚四氟乙烯反應(yīng)釜中，加熱到190°C反應(yīng)8.5小時(shí)，得到溶液M2 ;將M2冷卻至室溫后置于離心機(jī)中進(jìn)行離心，提取上清液M3 ;將所述上清液M3置于分子截流量為1000的透析袋中透析27小時(shí)，得到碳納米粒子；將需要進(jìn)行檢測(cè)的血清樣品置于超濾離心管中進(jìn)行離心；將離心后且除去大分子物質(zhì)和蛋白質(zhì)的血清樣本稀釋230倍，得到混合物NI ;將20 μ L的碳納米粒子和150 μ L0.01mol/L的磷酸緩沖鹽溶液置于5ml的玻璃管內(nèi)，向玻璃管內(nèi)加入混合物NI至玻璃管中溶液總量為2ml，將玻璃管中溶液進(jìn)行震蕩混勻，放置I小時(shí)，使玻璃管中物質(zhì)充分反應(yīng)。用熒光分光光度計(jì)對(duì)玻璃管中物質(zhì)進(jìn)行熒光強(qiáng)度測(cè)定，根據(jù)熒光強(qiáng)度參照標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)推算出血清中葡萄糖含量，從而得出血糖的含量。
[0059]實(shí)施例4`[0060]如圖1所示，在20°C的室溫條件下，將3g苯硼酸加入到500ml蒸餾水中進(jìn)行攪拌，至苯硼酸完全溶解后得到苯硼酸溶液；用NaOH對(duì)得到的苯硼酸溶液進(jìn)行酸度調(diào)節(jié)，得到pH值為8.8的苯硼酸溶液；將上述苯硼酸溶液置于密閉容器中，向容器底部通入氮?dú)馔ㄈ?.5小時(shí)，充分排盡溶液中的氧氣，得到溶液Ml ;將所述溶液Ml置于聚四氟乙烯反應(yīng)釜中，加熱到160°C反應(yīng)7小時(shí),得到溶液M2 ;將M2冷卻至室溫后置于離心機(jī)中進(jìn)行離心,提取上清液M3 ;將所述上清液M3置于分子截流量為1000的透析袋中透析26小時(shí)，得到碳納米粒子；將需要進(jìn)行檢測(cè)的血清樣品置于超濾離心管中進(jìn)行離心；將離心后且除去大分子物質(zhì)和蛋白質(zhì)的血清樣本稀釋200倍，得到混合物NI ;將20 μ L的碳納米粒子和150 μ L0.01mol/L的磷酸緩沖鹽溶液置于5ml的玻璃管內(nèi)，向玻璃管內(nèi)加入混合物NI至玻璃管中溶液總量為2ml，將玻璃管中溶液進(jìn)行震蕩混勻，放置I小時(shí)，使玻璃管中物質(zhì)充分反應(yīng)。用熒光分光光度計(jì)對(duì)玻璃管中物質(zhì)進(jìn)行熒光強(qiáng)度測(cè)定，根據(jù)熒光強(qiáng)度參照標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)推算出血清中葡萄糖含量，從而得出血糖的含量。
[0061]實(shí)施例5
[0062]如圖1所示，在20°C的室溫條件下，將Sg苯硼酸加入到500ml蒸餾水中進(jìn)行攪拌，至苯硼酸固體不再溶解后靜置2小時(shí)，將上層清液過(guò)濾后得到飽和的苯硼酸溶液；用NaOH對(duì)得到的飽和苯硼酸進(jìn)行酸度調(diào)節(jié)，得到PH值為8.1的飽和苯硼酸溶液；將上述飽和苯硼酸溶液置于密閉容器中，向容器底部通入氮?dú)馔ㄈ隝小時(shí)，充分排盡溶液中的氧氣，得到溶液Ml ;將所述溶液Ml置于聚四氟乙烯反應(yīng)釜中，加熱到180°C反應(yīng)9小時(shí)，得到溶液M2 ;將M2冷卻至室溫后置于離心機(jī)中進(jìn)行離心，提取上清液M3 ;將所述上清液M3置于分子截流量為500的透析袋中透析23小時(shí)，得到碳納米粒子；將需要進(jìn)行檢測(cè)的血清樣品置于超濾離心管中進(jìn)行離心；將離心后且除去大分子物質(zhì)和蛋白質(zhì)的血清樣本稀釋170倍，得到混合物NI ;將20 μ L的碳納米粒子和150 μ L0.01mol/L的磷酸緩沖鹽溶液置于5ml的玻璃管內(nèi)，向玻璃管內(nèi)加入混合物NI至玻璃管中溶液總量為2ml，將玻璃管中溶液進(jìn)行震蕩混勻，放置I小時(shí)，使玻璃管中物質(zhì)充分反應(yīng)。用熒光分光光度計(jì)對(duì)玻璃管中物質(zhì)進(jìn)行熒光強(qiáng)度測(cè)定，根據(jù)熒光強(qiáng)度參照標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)推算出血清中葡萄糖含量，從而得出血糖的含量。
[0063]檢測(cè)結(jié)果如下表所示:
[0064]表1:
【權(quán)利要求】
1.一種碳納米粒子的制備方法，其特征在于，該方法包括: (1)將5g/L至飽和濃度的苯硼酸溶液調(diào)節(jié)pH值至7-9； (2)向pH值為7-9的苯硼酸溶液中通入氮?dú)?，除去溶液中的氧氣，得到溶液Ml； (3)在160-20(TC下，使所述溶液Ml進(jìn)行水熱碳化反應(yīng)，得到溶液M2； (4)將所述溶液M2冷卻，然后進(jìn)行離心分離，提取分離出的上清液M3; (5)將所述上清液M3進(jìn)行透析，得到碳納米粒子。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其中，在步驟(1)中，調(diào)節(jié)pH值采用pH值調(diào)節(jié)劑進(jìn)行；優(yōu)選地，所述pH值調(diào)節(jié)劑為NaOH。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其中，在步驟(2)中，通入氮?dú)獾臅r(shí)間為0.5-2小時(shí)，優(yōu)選為1-1.5小時(shí)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其中，在步驟(3)中，所述水熱碳化反應(yīng)在聚四氟乙烯反應(yīng)釜中進(jìn)行，水熱碳化反應(yīng)的時(shí)間為6-10小時(shí)，優(yōu)選為7-9小時(shí)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其中，在步驟(5)中，所述透析的過(guò)程使用截留分子量為100-2000的透析袋進(jìn)行，所述透析的時(shí)間為20-30小時(shí)； 優(yōu)選地，所述透析袋的截留分子量為500-1000，所述透析的時(shí)間為23-27小時(shí)。
6.由權(quán)利要求1-5中任意一項(xiàng)所述的方法制備的碳納米粒子。
7.權(quán)利要求6所述的碳納米`粒子在血糖檢測(cè)中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其中，待測(cè)試樣為血清樣本時(shí)，檢測(cè)過(guò)程包括: (1)將所述血清樣本進(jìn)行離心，除去其中的大分子物質(zhì)和蛋白質(zhì)，得到上清液NI； (2)將所述上清液NI進(jìn)行稀釋?zhuān)玫交旌衔颪I； (3)將所述碳納米粒子與所述混合物NI混合接觸，檢測(cè)混合接觸后得到的混合物的熒光強(qiáng)度，然后通過(guò)該熒光強(qiáng)度與葡萄糖濃度關(guān)系推算血糖含量。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其中，步驟(1)中的離心過(guò)程在超濾離心管中進(jìn)行，步驟(2)中的稀釋過(guò)程的稀釋倍數(shù)為100-300倍，優(yōu)選為160-240倍。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其中，在步驟(3)中，檢測(cè)過(guò)程還包括在混合接觸后得到的混合物中加入磷酸緩沖鹽溶液,所述磷酸緩沖鹽溶液的濃度為0.005-0.015mol/L，優(yōu)選為 0.008-0.012mol/L。
【文檔編號(hào)】B82Y30/00GK103663413SQ201310676840
【公開(kāi)日】2014年3月26日 申請(qǐng)日期:2013年12月11日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月11日
【發(fā)明者】夏云生, 沈鵬飛, 楊光, 譚康慧, 陳輝德 申請(qǐng)人:安徽師范大學(xué)