本發(fā)明屬于生物技術(shù)與納米材料技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種磁性納米材料及其制備方法和在糖基化肽段富集與鑒定中應(yīng)用。

背景技術(shù)：

蛋白質(zhì)的糖基化是生命過程中最重要的翻譯后修飾之一，大約有超過50%的人類蛋白質(zhì)發(fā)生了糖基化修飾，在細(xì)胞信號傳導(dǎo)、分子識別、免疫反應(yīng)等生命活動中起到了重要的作用。因此，蛋白質(zhì)糖基化的全面研究對于理解人類的生命過程和疾病機理非常關(guān)鍵。但是目前的糖蛋白研究仍然遇到許多困難。由于發(fā)生糖基化修飾的蛋白質(zhì)是低豐度蛋白，而且離子化效率很低，所以極易受到豐度高、離子化效率高的非糖蛋白的干擾，使得糖蛋白質(zhì)譜檢測困難、靈敏度很低。因此，在進行質(zhì)譜分析鑒定之前，對于樣品中的糖蛋白或糖基化肽段進行預(yù)富集處理非常必要。

近年來發(fā)展了不少分離富集糖蛋白或糖肽的方法，其中親水相互作用色譜法（HILIC）由于廣泛的糖鏈特異性、富集條件簡便溫和、重現(xiàn)性高、質(zhì)譜兼容性好而得到廣泛應(yīng)用。半胱胺鹽酸鹽具有親水性氨基和巰基，對于糖肽有親水相互作用，可以用于HILIC材料的修飾。磁性微球由于快速分離、良好的生物相容性等特點在蛋白質(zhì)富集分離領(lǐng)域有廣泛應(yīng)用。

通過文獻調(diào)研可知，目前還沒有半胱胺鹽酸鹽直接修飾的四氧化三鐵磁性納米材料應(yīng)用在糖肽的富集研究中。結(jié)合四氧化三鐵磁性納米材料快速分離的特點和半胱胺對糖肽親水相互作用的特點，本發(fā)明首次設(shè)計合成了半胱胺鹽酸鹽直接修飾的四氧化三鐵磁性納米材料，應(yīng)用于糖基化肽段的分離富集。首先用傳統(tǒng)水熱法合成四氧化三鐵磁性納米顆粒，再利用鐵-硫相互作用在磁球表面充分修飾了親水性的半胱胺鹽酸鹽，形成了親水性磁性納米材料，合成方法十分簡便。所合成的材料對于糖基化肽段具有選擇性富集作用，大大提高了糖肽的質(zhì)譜檢測靈敏度，對于糖基化肽段的檢測限可達0.25 fmol/μL，檢測絕對量達到1ng。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的在于提供一種磁性納米材料及其制備方法和在富集分析糖基化肽段中的應(yīng)用。

本發(fā)明所提出的磁性納米材料，是一種半胱胺鹽酸鹽修飾的四氧化三鐵磁性納米材料，具有快速磁性分離能力以及優(yōu)異的親水性，制備的具體步驟如下：

（1）稱取六水合氯化鐵分散于乙二醇中，磁力攪拌混勻，往該混合液中加入無水醋酸鈉，繼續(xù)攪拌混均，超聲分散0.5-1小時后，把混合液轉(zhuǎn)移至聚四氟乙烯內(nèi)襯的不銹鋼反應(yīng)釜中，180-220℃條件下反應(yīng)14-16小時，隨后用去離子水和無水乙醇充分洗滌，在40-60℃下真空干燥，得到四氧化三鐵磁性納米顆粒；

（2）稱取步驟（1）所得四氧化三鐵磁性納米顆粒，分散到磷酸鹽緩沖液中，再加入半胱胺鹽酸鹽，超聲分散1-10分鐘，30-60℃水浴下機械攪拌1-5小時，在外磁場作用下將產(chǎn)物從反應(yīng)溶液中磁性分離，用去離子水充分洗滌，在40-60℃下真空干燥，得到半胱胺鹽酸鹽修飾的四氧化三鐵磁性納米材料。

本發(fā)明中，步驟（1）中六水合氯化鐵、乙二醇和無水醋酸鈉的比為（1-5）g：（50-300）mL：（2.5-15）g。

本發(fā)明中，步驟（2）中四氧化三鐵磁性納米顆粒、磷酸鹽緩沖液和半胱胺鹽酸鹽的比為（1-50）mg：（1-120）mL：（3-200）mg。

由上述制備方法得到的半胱胺鹽酸鹽修飾的四氧化三鐵磁性納米材料，具有快速磁性分離能力以及優(yōu)異的親水性，可用于富集分析糖基化肽段，具體步驟為：

將上述磁性納米材料與糖基化肽段溶液加入到一定比例的乙腈/水/三氟乙酸混合液中混合，在酶解儀中孵育；其中，乙腈/水/三氟乙酸的比例范圍為(65-90)%/(34.5-10)%/(0-0.5)%。

在外磁場作用下分離磁性納米材料；然后用一定比例的乙腈/水/三氟乙酸混合液洗滌納米材料；再用一定比例的乙腈/水/甲酸混合液洗脫材料；其中，乙腈/水/三氟乙酸混合液中各種組分的比例范圍為(65-90)%/(34.5-10)%/(0-0.5)%；乙腈/水/甲酸混合液中各種組分的比例范圍為 (5-45)%/(54.5-95)%/(0-0.5)%。

取1-2.5μL洗脫液直接在MALDI-TOF MS的進樣靶板上點樣，干燥后再點加1-2μL濃度為20mg/mL的2，5-二羥基苯甲酸溶液，形成基質(zhì)結(jié)晶，進行質(zhì)譜分析。

本發(fā)明的有益效果在于：所提供的半胱胺鹽酸鹽修飾的四氧化三鐵磁性納米材料合成方法十分簡便，材料具有磁性方便快速分離，材料可以多次重復(fù)利用成本低廉，對于糖基化肽段具有較好的選擇性富集作用，大大提高了糖基化肽段的質(zhì)譜檢測靈敏度，對于糖基化肽段的檢測限可達0.25 fmol/μL，檢測絕對量達到1ng。

本方法操作簡單，靈敏迅速，成本低廉，被富集糖肽質(zhì)譜檢測信號大大提高，具有較好選擇性和較高靈敏度，十分適用于復(fù)雜生物樣品中的糖基化肽段的分析鑒定。

附圖說明

圖1為實施例1的透射電子顯微鏡照片，其中，(a)為四氧化三鐵磁性納米顆粒的照片，(b)為半胱胺鹽酸鹽修飾的四氧化三鐵磁性納米顆粒的照片。

圖2為實施例1的半胱胺鹽酸鹽修飾的四氧化三鐵磁性納米顆粒的掃描電子顯微鏡照片。

圖3為實施例1的半胱胺鹽酸鹽修飾的四氧化三鐵磁性納米顆粒的元素分析EDX譜圖。

圖4為實施例1的紅外光譜圖，其中，(a)為四氧化三鐵磁性納米顆粒的紅外光譜圖，(b)為半胱胺鹽酸鹽修飾的四氧化三鐵磁性納米顆粒的紅外光譜圖。

圖5為實施例2中125fmol/μL的HRP酶解液經(jīng)過半胱胺鹽酸鹽修飾的四氧化三鐵磁性納米材料富集前后的MALDI-TOF MS質(zhì)譜圖。其中，(a)為125fmol/μL的HRP酶解液富集前原液的質(zhì)譜圖，(b)為125fmol/μL的HRP酶解液富集后洗脫液的質(zhì)譜圖。

圖6為實施例2中更低濃度的HRP酶解液經(jīng)過半胱胺鹽酸鹽修飾的四氧化三鐵磁性納米材料富集前后的MALDI-TOF MS質(zhì)譜圖。其中，(a)為2.5fmol/μL的HRP酶解液富集前原液的質(zhì)譜圖，(b)為2.5fmol/μL的HRP酶解液富集后洗脫液的質(zhì)譜圖，(c)為0.25fmol/μL的HRP酶解液富集前原液的質(zhì)譜圖，(d)為0.25fmol/μL的HRP酶解液富集后洗脫液的質(zhì)譜圖。

圖7為實施例3中半胱胺鹽酸鹽修飾的四氧化三鐵磁性納米材料重復(fù)多次富集HRP酶解液的MALDI-TOF MS質(zhì)譜圖。其中，(a)為材料第一次富集125fmol/μL HRP酶解液的質(zhì)譜圖，(b)為材料經(jīng)充分洗脫后第三次富集125fmol/μL HRP酶解液的質(zhì)譜圖，(c)為材料經(jīng)充分洗脫后第五次富集125fmol/μL HRP酶解液的質(zhì)譜圖。

圖8為實施例4中不同質(zhì)量比HRP和牛血清蛋白BSA酶解液的混合溶液經(jīng)過半胱胺鹽酸鹽修飾的四氧化三鐵磁性納米材料富集前后的MALDI-TOF MS質(zhì)譜圖。其中，(a)為HRP和BSA酶解液質(zhì)量比為1：2的混合液富集前的質(zhì)譜圖，(b)為HRP和BSA酶解液質(zhì)量比為1：2的混合液富集后洗脫液的質(zhì)譜圖，(c)為HRP和BSA酶解液質(zhì)量比為1：100的混合液富集前的質(zhì)譜圖，(d)為HRP和BSA酶解液質(zhì)量比為1：100的混合液富集后洗脫液的質(zhì)譜圖。

表1為MALDI-TOF MS鑒定到的標(biāo)準(zhǔn)蛋白HRP的胰蛋白酶酶解肽段中糖基化肽段的具體信息列表。

具體實施方式

下面的實施實例是對本發(fā)明的進一步說明，而不是限制本發(fā)明的范圍。

實施例1：一種半胱胺鹽酸鹽修飾的四氧化三鐵磁性納米材料的合成。

（1）稱取2.6g六水合氯化鐵分散于145mL乙二醇中，磁力攪拌混勻，往該混合液中加入7.3g無水醋酸鈉，繼續(xù)攪拌混均，再用超聲分散0.5小時后，把混合液轉(zhuǎn)移至聚四氟乙烯內(nèi)襯的不銹鋼反應(yīng)釜中，200℃條件下反應(yīng)16小時，隨后用去離子水和無水乙醇充分洗滌，在50℃下真空干燥，得到四氧化三鐵磁性納米顆粒。

（2）稱取22mg步驟（1）所得四氧化三鐵磁性納米顆粒，分散到30mL 0.01M的磷酸鹽緩沖液中，再加入88mg半胱胺鹽酸鹽，超聲分散5分鐘，60℃水浴下機械攪拌3小時，在外磁場作用下將產(chǎn)物從反應(yīng)溶液中磁性分離，用去離子水充分洗滌，在50℃下真空干燥，得到半胱胺鹽酸鹽修飾的四氧化三鐵磁性納米材料。

圖1為透射電子顯微鏡照片，透射電鏡型號為JEOL-1400，將純化后的磁性納米顆粒的乙醇分散液滴在覆有碳膜的銅網(wǎng)上，干燥后進行透射電子顯微鏡觀察并拍照。其中(a)為四氧化三鐵磁性納米顆粒的照片，(b)為半胱胺鹽酸鹽修飾的四氧化三鐵磁性納米顆粒的照片，可以看到磁球尺寸在200nm左右，分散均勻，大小比較均一，小分子半胱胺鹽酸鹽修飾前后磁球形貌沒有明顯變化。

圖2為半胱胺鹽酸鹽修飾的四氧化三鐵磁性納米顆粒的掃描電子顯微鏡照片，掃描電鏡型號為Phenom Prox，將材料固定在載物臺的導(dǎo)電膠上，噴金后進行觀察并拍照。由圖片可以看出所合成的材料形貌為微球顆粒，分散均勻，大小均一。

圖3為半胱胺鹽酸鹽修飾的四氧化三鐵磁性納米顆粒的元素分析EDX譜圖，可以看出材料表面有鐵、氧、碳、硫元素的分布，表明半胱胺鹽酸鹽成功修飾在材料表面。

圖4為紅外光譜圖，紅外光譜儀為Thermo Fisher公司的Nicolet傅里葉光譜儀，將樣品干燥粉末與少量溴化鉀粉末混合研磨壓片，將樣品放入樣品槽中進行測試。其中(a)為四氧化三鐵磁性納米顆粒的紅外光譜圖，(b)為半胱胺鹽酸鹽修飾的四氧化三鐵磁性納米顆粒的紅外光譜圖。可以看到，570cm^-1的峰是Fe-O-Fe的特征峰，表明磁球四氧化三鐵的成功合成。（b）與（a）相比，570 cm^-1的峰明顯減弱，表明有一部分Fe-O-Fe中的Fe與S發(fā)生相互作用，（b）中3418 cm^-1 、1632cm^-1的峰是NH₂的吸收峰，2923 cm^-1 、2852cm^-1的峰是CH₂對稱和不對稱伸縮振動峰，這些都表明半胱胺鹽酸鹽通過Fe-S相互作用成功修飾在材料表面，合成了親水性目標(biāo)材料。

實施例2：將實施例1得到的半胱胺鹽酸鹽修飾的四氧化三鐵磁性納米材料應(yīng)用于低濃度辣根過氧化物酶HRP酶解液的富集與MALDI-TOF MS檢測。

（1）準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)蛋白酶解液：準(zhǔn)確稱取1mg HRP標(biāo)準(zhǔn)蛋白，用25 mM碳酸氫銨溶液配成濃度為10mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液，煮沸5分鐘；再用25mM碳酸氫銨溶液稀釋使HRP終濃度為1mg/mL，按照質(zhì)量比為1:40的胰蛋白酶與標(biāo)準(zhǔn)蛋白的比例，加入胰蛋白酶(trypsin)，37°C孵育16小時，可以得到1mg/mL的HRP胰蛋白酶解液。

（2）樣品的富集：配制體積分?jǐn)?shù)為85%乙腈/14.9%水/0.1%三氟乙酸的上樣液，用上樣液配制10 mg/mL半胱胺鹽酸鹽修飾的四氧化三鐵磁性納米材料的分散液。在0.6mL的離心管內(nèi)加入0.25μg HRP酶解液和90μL上樣液，混勻后加入10μL的10 mg/mL的材料溶液，37℃下震蕩富集15分鐘；在磁鐵作用下分離材料，吸去上清液，用上樣液洗滌材料三遍，然后加入10μL體積分?jǐn)?shù)為30%乙腈/69.9%水/0.1%甲酸的洗脫液，37℃震蕩洗脫30分鐘，磁性分離材料，吸出洗脫液備用。

用上樣液逐步稀釋HRP酶解液至更低濃度，按照以上步驟加入材料富集洗脫，洗脫液備用。

（3）點靶：取1μL步驟（2）所述的洗脫液點到MALDI-TOF MS進樣靶板上，干燥后再點加1 μL濃度為20mg/mL的2,5-二羥基苯甲酸（DHB）溶液于該液滴上，形成基質(zhì)結(jié)晶，干燥后再進行質(zhì)譜分析。

（4）利用質(zhì)譜分析以半胱胺鹽酸鹽修飾的四氧化三鐵磁性納米材料富集得到的糖基化肽段并與富集前的原液質(zhì)譜圖作對比。

1mg/mL的HRP酶解液在材料富集的反應(yīng)體系中終濃度為125fmol/μL，經(jīng)過半胱胺鹽酸鹽修飾的四氧化三鐵磁性納米材料富集后，用Applied Biosystems公司的5800 MALDI-TOF MS質(zhì)譜儀進行檢測。圖5為125fmol/μL的HRP酶解液在材料富集前后的質(zhì)譜圖，(a)為富集前原液的質(zhì)譜圖，(b)為富集后洗脫液的質(zhì)譜圖；表1為MALDI-TOF MS鑒定到的標(biāo)準(zhǔn)蛋白HRP的胰蛋白酶酶解肽段中糖基化肽段的具體信息列表。從質(zhì)譜圖(a)中可以看出，富集前的HRP酶解液原液中只檢測到8條糖基化肽段（峰標(biāo)號分別為1，2，6，11，14，17，19，21），并且肽段信號的強度很弱。經(jīng)過材料富集之后，洗脫液中檢測出21條糖基化肽段（具體信息見圖5(b)和表1），與富集前原液相比，不僅糖肽數(shù)量顯著增加而且肽段信號的強度大大增強?？梢宰C明，所合成的半胱胺鹽酸鹽修飾的四氧化三鐵磁性納米材料對于糖基化肽段的確有顯著的富集效果。

圖6為更低濃度的HRP酶解液在材料富集前后的質(zhì)譜圖，(a)為2.5fmol/μL的HRP酶解液富集前原液的質(zhì)譜圖，(b)為2.5fmol/μL的HRP酶解液富集后洗脫液的質(zhì)譜圖，(c)為0.25fmol/μL的HRP酶解液富集前原液的質(zhì)譜圖，(d)為0.25fmol/μL的HRP酶解液富集后洗脫液的質(zhì)譜圖。2.5fmol/μL的HRP酶解液在富集前沒有檢測出糖基化肽段，經(jīng)材料富集后檢測出9條糖肽（峰標(biāo)號為6，10，11，12，14，17，18，19，21）而且糖肽峰的信號強度大大增加；當(dāng)HRP酶解液稀釋到0.25fmol/μL時，富集前檢測不到糖基化肽段，經(jīng)材料富集后依然可以檢測出2條糖肽（峰標(biāo)號為14，21）。因此，所合成的磁性納米材料對于糖基化肽段的檢測限可達到0.25fmol/μL，檢測絕對量達到1ng。

實施例3：將實施例1得到的半胱胺鹽酸鹽修飾的四氧化三鐵磁性納米材料經(jīng)多次富集洗脫，再次應(yīng)用于低濃度辣根過氧化物酶HRP酶解液的富集與MALDI-TOF MS檢測。

（1）準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)蛋白酶解液：準(zhǔn)確稱取1mg HRP標(biāo)準(zhǔn)蛋白，用25 mM碳酸氫銨溶液配成濃度為10mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液，煮沸5分鐘；再用25mM碳酸氫銨溶液稀釋使HRP終濃度為1mg/mL，按照質(zhì)量比為1:40的胰蛋白酶與標(biāo)準(zhǔn)蛋白的比例，加入胰蛋白酶(trypsin)，37°C孵育16小時，可以得到1mg/mL的HRP胰蛋白酶解液。

（2）樣品的富集：配制體積分?jǐn)?shù)為85%乙腈/14.9%水/0.1%三氟乙酸的上樣液，用上樣液配制10 mg/mL半胱胺鹽酸鹽修飾的四氧化三鐵磁性納米材料的分散液。在0.6mL的離心管內(nèi)加入0.25μg HRP酶解液和90μL上樣液，混勻后加入10μL的10 mg/mL的材料溶液，37℃下震蕩富集15分鐘；在磁鐵作用下分離材料，吸去上清液，用上樣液洗滌材料三遍，然后加入10μL體積分?jǐn)?shù)為30%乙腈/69.9%水/0.1%甲酸的洗脫液，37℃震蕩洗脫30分鐘，磁性分離材料，吸出洗脫液備用。

（3）材料充分洗脫再富集：步驟（2）中的材料再加入30ul體積分?jǐn)?shù)為30%乙腈/69.9%水/0.1%甲酸的洗脫液充分洗脫，再次按照步驟（2）對HRP酶解液進行富集，洗脫液備用。

多次重復(fù)以上步驟，洗脫液備用。

（4）點靶：取1μL步驟（2）、步驟（3）所述的洗脫液點到MALDI-TOF MS進樣靶板上，干燥后再點加1 μL濃度為20mg/mL的2,5-二羥基苯甲酸（DHB）溶液于該液滴上，形成基質(zhì)結(jié)晶，干燥后再進行質(zhì)譜分析。

（5）利用質(zhì)譜分析半胱胺鹽酸鹽修飾的四氧化三鐵磁性納米材料重復(fù)多次富集得到的糖基化肽段。

圖7為半胱胺鹽酸鹽修飾的四氧化三鐵磁性納米材料重復(fù)多次富集HRP酶解液的MALDI-TOF MS質(zhì)譜圖。其中，(a)為材料第一次富集125fmol/μL HRP酶解液的質(zhì)譜圖，(b)為材料經(jīng)充分洗脫第三次富集125fmol/μL HRP酶解液的質(zhì)譜圖，(c)為材料經(jīng)充分洗脫第五次富集125fmol/μL HRP酶解液的質(zhì)譜圖。由質(zhì)譜圖可以看出，材料第三次和第五次重復(fù)富集的HRP酶解液無論是糖肽數(shù)量還是信號強度都和第一次富集效果相似，材料經(jīng)多次富集洗脫過程的重復(fù)性較好，合成一批材料可以多次重復(fù)利用，成本低廉。

實施例4：將實施例1得到的半胱胺鹽酸鹽修飾的四氧化三鐵磁性納米材料用于HRP酶解液和牛血清白蛋白（BSA）酶解液的混合溶液的富集與MALDI-TOF MS檢測。

（1）準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)蛋白酶解液：準(zhǔn)確稱取1mg HRP標(biāo)準(zhǔn)蛋白，用25 mM碳酸氫銨溶液配成濃度為10mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液，煮沸5分鐘；再用25mM碳酸氫銨溶液稀釋使HRP終濃度為1mg/mL，按照質(zhì)量比為1:40的胰蛋白酶與標(biāo)準(zhǔn)蛋白的比例，加入胰蛋白酶(trypsin)，37°C孵育16小時，可以得到1mg/mL的HRP胰蛋白酶解液。同樣方法酶解得到5mg/mL的BSA胰蛋白酶解液。

（2）樣品的富集：配制體積分?jǐn)?shù)為85%乙腈/14.9%水/0.1%三氟乙酸的上樣液，用上樣液配制10 mg/mL半胱胺鹽酸鹽修飾的四氧化三鐵磁性納米材料的分散液。在0.6mL的離心管內(nèi)加入0.25μg HRP酶解液，分別按照HRP和BSA的質(zhì)量比為1:2和1:100加入BSA酶解液，隨后加入上樣液使總體積為40μL，混勻后加入10μL的10 mg/mL的材料溶液，37℃下震蕩富集15分鐘；在磁鐵作用下分離材料，吸去上清液，用上樣液洗滌材料三遍，然后加入5μL體積分?jǐn)?shù)為30%乙腈/69.9%水/0.1%甲酸的洗脫液，37℃震蕩洗脫30分鐘，磁性分離材料，吸出洗脫液備用。

（3）點靶：取1μL步驟（2）所述的洗脫液點到MALDI-TOF MS進樣靶板上，干燥后再點加1 μL濃度為20mg/mL的2,5-二羥基苯甲酸（DHB）溶液于該液滴上，形成基質(zhì)結(jié)晶，干燥后再進行質(zhì)譜分析。

（4）利用質(zhì)譜分析以半胱胺鹽酸鹽修飾的四氧化三鐵磁性納米材料富集混合酶解液得到的糖基化肽段并與富集前的原液質(zhì)譜圖作對比。

圖8為不同質(zhì)量比HRP和牛血清蛋白BSA酶解液的混合溶液經(jīng)過半胱胺鹽酸鹽修飾的四氧化三鐵磁性納米材料富集前后的MALDI-TOF MS質(zhì)譜圖。其中，(a)為HRP和BSA酶解液質(zhì)量比為1：2的混合液富集前的質(zhì)譜圖，(b)為HRP和BSA酶解液質(zhì)量比為1：2的混合液富集后洗脫液的質(zhì)譜圖，(c)為HRP和BSA酶解液質(zhì)量比為1：100的混合液富集前的質(zhì)譜圖，(d)為HRP和BSA酶解液質(zhì)量比為1：100的混合液富集后洗脫液的質(zhì)譜圖。圖(a)和圖(c)的混合酶解液原液質(zhì)譜圖中，大量的非糖基化肽段的峰嚴(yán)重干擾了糖肽的檢測，經(jīng)材料富集分離之后，圖(b)和圖(d)中非糖基化肽段大大減少，糖肽被選擇性富集出來。HRP和BSA酶解液質(zhì)量比為1：2時，富集前的原液中僅檢測出4條糖肽，而且被非糖肽的信號大大壓制；經(jīng)材料富集之后有17條糖肽被檢測出來，信號大大增強，非糖肽信號相對很微弱。甚至在HRP和BSA酶解液質(zhì)量比為1：100時，即使非糖肽的干擾大大增強，仍然可以檢測出7條糖肽，大部分非糖肽被有效除去。以上可以證明所合成的親水性磁性納米材料對于糖肽具有較好的選擇性富集效果，在背景復(fù)雜的實際樣品中具有很好的應(yīng)用前景。

表1MALDI-TOF MS鑒定到的標(biāo)準(zhǔn)蛋白HRP的胰蛋白酶酶解肽段中糖肽的具體信息

Fuc為α-L-巖藻糖，Xyl為α-D-木糖，Man為α-D-甘露糖，GlcNAc為N-乙酰氨基葡萄糖。