專利名稱：改進(jìn)的色譜介質(zhì)的制備方法以及使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用來(lái)制備具有共價(jià)鍵合的聚合物鏈的多孔聚合介質(zhì)的方法。所述介質(zhì)可以用于色譜純化，獲得具有改進(jìn)的蛋白質(zhì)結(jié)合容量、動(dòng)力學(xué)性質(zhì)和選擇性的多孔基材，本發(fā)明還涉及所述介質(zhì)的制備和使用方法。
背景技術(shù)：
在現(xiàn)代衛(wèi)生保健當(dāng)中，由活性有機(jī)體制得的治療用蛋白質(zhì)的重要性在日益提高。 這些蛋白質(zhì)提供了很多優(yōu)于常規(guī)藥物的優(yōu)點(diǎn)，包括對(duì)目標(biāo)疾病的專一性和功效的提高。哺乳動(dòng)物的免疫系統(tǒng)使用很多蛋白質(zhì)來(lái)控制和消除疾病威脅。隨著基因和蛋白質(zhì)工程學(xué)的發(fā)展，人們能夠開發(fā)出許多“設(shè)計(jì)的”或者重組蛋白質(zhì)療法。這些療法可能基于單獨(dú)的蛋白質(zhì)、 化學(xué)改性的蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)片段或蛋白質(zhì)結(jié)合體。在這些生物藥物的生產(chǎn)中，人們廣泛地采用色譜分離。隨著工業(yè)日趨成熟，如果能夠采用新穎的/先進(jìn)的技術(shù)和方法來(lái)提高分離效果，將使得生物藥物制造商能夠?qū)⑦@些藥物以更低的價(jià)格提供給更多的病人。用來(lái)純化蛋白質(zhì)的常用色譜法包括親和色譜法、生物親和色譜法、離子交換色譜法、反相色譜法、疏水性相互作用色譜法、親水性相互作用色譜法、尺寸排阻色譜法和混合模式色譜法(包括樹脂的上述種類的組合)等。這些種類的色譜的應(yīng)用和效率取決于溶質(zhì)分子與色譜系統(tǒng)的固定相(色譜介質(zhì))之間的表面-表面相互作用的選擇性，所述溶質(zhì)分子和固定相各自都與液體流動(dòng)相發(fā)生相互作用。很多種固定相色譜載體材料可以在市場(chǎng)上購(gòu)得。將產(chǎn)品與雜質(zhì)成功分離的關(guān)鍵通常在于以下對(duì)象的正確組合固定相、基礎(chǔ)基質(zhì) (化學(xué)組成和孔結(jié)構(gòu))和配體性質(zhì)(配體種類、配體密度、配體分布、配體長(zhǎng)度和材料組成)，以及流動(dòng)相或者溶液性質(zhì)(緩沖劑種類、PH和電導(dǎo)性)?；A(chǔ)基質(zhì)和配體的具體設(shè)計(jì)得到了色譜介質(zhì)，色譜介質(zhì)的特征包括一些關(guān)鍵屬性，包括蛋白質(zhì)結(jié)合容量、選擇性、床滲透性、化學(xué)穩(wěn)定性或處理通量。純化方法包括主要結(jié)合產(chǎn)品(結(jié)合和洗脫)、主要結(jié)合雜質(zhì) (流過(guò))以及上述情況的組合(所謂的弱分配等)。在設(shè)計(jì)這些技術(shù)的時(shí)候，最關(guān)鍵的一點(diǎn)是控制上述色譜介質(zhì)的性質(zhì)，以便能夠進(jìn)行和確?？煽康姆蛛x，以得到純化的蛋白質(zhì)產(chǎn)品?？梢栽诤芏喾N多孔基材或基礎(chǔ)基質(zhì)上進(jìn)行蛋白質(zhì)分離。用于樹脂或珠粒結(jié)構(gòu)的常用材料包括多糖(瓊脂糖、纖維素)、合成聚合物(聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸酯和聚丙烯酰胺)以及陶瓷材料，例如二氧化硅、氧化鋯和孔受控的玻璃。薄膜和整體料也常用于色譜，特別是用于流通應(yīng)用。常規(guī)的薄膜組合物包括合成聚合物，例如聚偏二氟乙烯、聚乙烯、聚醚砜、尼龍和多糖，例如纖維素。人們已經(jīng)由以下材料開發(fā)出了整體料聚苯乙烯、多糖、聚甲基丙烯酸酯和其他合成聚合物、多糖和陶瓷。薄膜和整體型色譜與珠粒的區(qū)別在于，前者將蛋白質(zhì)吸附在相同的“對(duì)流孔”中，所述對(duì)流孔控制薄膜和整體料的滲透性。常規(guī)的薄膜和整體型對(duì)流孔的孔徑約為0.6-10微米?？梢酝ㄟ^(guò)各種開發(fā)成熟的技術(shù)(包括本文件列出的那些)向這些基材添加配體。通過(guò)使用聚合配體“延伸物”改進(jìn)蛋白質(zhì)結(jié)合能力和改進(jìn)樹脂選擇性的做法包括例如通過(guò)接枝將功能聚合物鏈偶聯(lián)在基礎(chǔ)基質(zhì)上，所述配體從基礎(chǔ)基質(zhì)的表面延伸出來(lái)。配體延伸劑通常產(chǎn)生更大的結(jié)合容量，這是因?yàn)榕潴w延伸物增大了官能團(tuán)的可達(dá)性， 使得目標(biāo)分子的結(jié)合超過(guò)了表面上單層吸附的情況。該配體技術(shù)的一種這樣的應(yīng)用在US 2004/0059040中有描述。美國(guó)專利公開第2004/0059040號(hào)揭示了一種用于色譜法的吸附劑材料，其包含涂覆在載體上的聚合物，聚合物主鏈通過(guò)一種或多種連接基團(tuán)(包括一個(gè)或多個(gè)酰胺基)連接于載體。US 2004/0059040還揭示了聚合物與載體反應(yīng)，形成共價(jià)連接。該方法可以用來(lái)在顆粒表面上提供表面涂層，從而保護(hù)顆粒表面，使其不會(huì)與流動(dòng)相發(fā)生相互作用(例如防止二氧化硅顆粒被高PH值的流動(dòng)相溶解)。該方法允許將配體涂覆在顆粒(包括珠粒)的表面上，但是并未提供伸入孔內(nèi)的配體，以為生物分子提供高容量。通過(guò)將聚合物延伸劑添加到多孔材料表面提供了改進(jìn)的蛋白質(zhì)結(jié)合容量、結(jié)合動(dòng)力學(xué)性質(zhì)，以及蛋白質(zhì)選擇性的潛在的變化。但是，隨著蛋白質(zhì)分離的要求變得更高，人們更迫切需要開發(fā)出新的更高效的技術(shù)和方法，以制造新穎的聚合結(jié)構(gòu)。因此，人們希望開發(fā)出一種多孔聚合基材，其具有改進(jìn)的蛋白質(zhì)結(jié)合容量，以及在用于蛋白質(zhì)分離的時(shí)候具有改進(jìn)的或改良的蛋白質(zhì)選擇性。針對(duì)上述對(duì)用于蛋白質(zhì)分離的具有改進(jìn)的蛋白質(zhì)結(jié)合容量和樹脂選擇性的新的多孔聚合物基材的需求，我們開發(fā)了一種用來(lái)將聚合物延伸劑接枝到多孔聚合基材上的新方法，在此方法中，制得的聚合延伸劑配體具有能夠隨后與聚合載體發(fā)生反應(yīng)的官能端基。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及用來(lái)通過(guò)共價(jià)鍵將聚合物配體固定于聚合載體的方法。通過(guò)進(jìn)行本發(fā)明的方法，減少或盡可能減少在更常用的自由基接枝技術(shù)中發(fā)生的副反應(yīng)，從而改進(jìn)所得的官能化聚合基質(zhì)的穩(wěn)定性。本發(fā)明還涉及用來(lái)制備具有共價(jià)鍵合的聚合物配體鏈的大孔聚合介質(zhì)的方法。所述接枝可以用于色譜純化。在本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了一種用于色譜法的吸附劑材料，其包含固定在聚合載體上的聚合物配體，所述聚合物配體通過(guò)一種或多種連接基團(tuán)(包括一個(gè)或多個(gè)官能團(tuán))連接于聚合物載體。在第二個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種制備用于色譜法的吸附劑材料的方法，所述方法包括將聚合物配體固定在聚合載體上，其中，所述聚合載體與包含聚合物主鏈的聚合物配體反應(yīng)，從而在聚合物主鏈和聚合載體之間形成一個(gè)或多個(gè)連接基團(tuán)，每個(gè)連接基團(tuán)包括一種或多種官能團(tuán)。在本發(fā)明的第三個(gè)方面，提供了一種用來(lái)從混合物分離化合物的方法，該方法包括使所述混合物與用于色譜法的吸附劑材料接觸，所述吸附劑材料包含固定在聚合載體上的聚合物配體，其中所述聚合物主鏈通過(guò)一個(gè)或多個(gè)連接基團(tuán)結(jié)合于所述載體，所述連接基團(tuán)包括一種或多種官能團(tuán)。
具體實(shí)施例方式如本文中所用，單數(shù)形式的“一個(gè)”、“一種”和“該”包括復(fù)數(shù)指代形式，除非文中另有明確說(shuō)明。
在本文中，術(shù)語(yǔ)“聚合物配體”和“聚合配體”是同義詞，術(shù)語(yǔ)“聚合載體”和“聚合物載體”也是同義詞。在本文中，術(shù)語(yǔ)“優(yōu)選”、“更優(yōu)選”和“最優(yōu)選”不是為了指出一定更佳的形式，而
是表示較寬的范圍或組之內(nèi)合適的更窄的范圍。在本文中，所有的范圍都包括端值且可以組合。在本文中，所謂“多孔的”表示材料能夠通過(guò)“擴(kuò)散孔”吸附蛋白質(zhì)，所述“擴(kuò)散孔” 的孔徑通常約為200人至3，000A。在本發(fā)明用來(lái)制備聚合樹脂顆粒的方法的一些實(shí)施方式中，成孔劑與后面全部單體的總重量的重量比大于或等于0. 1 ；大于或等于0. 25 ；或者大于或等于0. 5。在本發(fā)明用來(lái)制備聚合樹脂顆粒的方法的一些實(shí)施方式中，成孔劑與后面全部單體的總重量的重量比小于或等于10 ；小于或等于5 ；或者小于或等于2. 5。本發(fā)明的聚合載體包括任意聚合珠粒，所述聚合珠粒適合通過(guò)使單體混合物聚合來(lái)制備，所述單體混合物包含至少一種乙烯基單體，所述乙烯基單體具有至少一種活性基團(tuán)。合適的活性基團(tuán)的例子包括親電基團(tuán)，或者能夠轉(zhuǎn)化為親電基團(tuán)的基團(tuán)，或者親核基團(tuán)，或者能轉(zhuǎn)化為親核基團(tuán)的基團(tuán)。 本發(fā)明的聚合載體可以通過(guò)懸浮聚合、乳液聚合或分散聚合來(lái)制備。適合用來(lái)制備本發(fā)明的聚合載體的乙烯基單體包括但不限于具有單個(gè)乙烯基的乙烯基單體、具有多個(gè)乙烯基的乙烯基單體以及它們的混合物。一些合適的乙烯基單體包括例如乙烯基羧酸酯、 乙烯基氨基甲酸酯單體、乙烯基芳族單體、(甲基)丙烯酸酯、取代的(甲基)丙烯酸酯、(甲基)丙烯酰胺以及它們的混合物。乙烯基丙烯酸酯的一個(gè)合適的例子是乙酸乙烯酯。乙烯基氨基甲酸酯單體的一個(gè)合適的例子是三烯丙基異氰尿酸酯。合適的乙烯基芳族單體的例子包括苯乙烯、二乙烯基苯以及它們的取代形式(例如α-甲基苯乙烯)。一些合適的取代的(甲基)丙烯酸酯包括例如多元醇與(甲基)丙烯酸的酯，例如甲基丙烯酸縮水甘油酯、 二甲基丙烯酸乙二酯、甲基丙烯酸羥乙酯、二甲基丙烯酸甘油酯、甲基丙烯酸二甲基氨基乙酯，以及它們的混合物。一些合適的取代的(甲基)丙烯酰胺是鹽酸(3-氨基丙基)甲基丙烯酰胺和羥乙基甲基丙烯酰胺。所述聚合載體材料可以是顆粒材料，或者為小塊、片材、管狀、棒狀或毛細(xì)涂層的形式。較佳的是，所述載體材料是顆粒材料，其體均粒度適合約為0. 5-500微米，優(yōu)選約為0.7-200微米，最優(yōu)選約為10-120微米。所述顆粒優(yōu)選基本為球形。所述顆粒材料優(yōu)選包括孔。所述顆粒載體材料的孔徑、孔體積和比表面積可以根據(jù)使用的載體材料的種類、要連接到載體上的聚合物的特性以及使用時(shí)所需的分離特性變化。所述孔徑適合約為 20-4000 A ,優(yōu)選約為50-1500 A。對(duì)于灌注孔，所述孔徑適合約為2000-80000Α,優(yōu)選約為5000-50000 A。孔體積適合約為0. 1-4毫升/克，優(yōu)選約為0. 3-2毫升/克，最優(yōu)選約為0. 5-1. 5毫升/克。比表面積適合約為1-1000米7克，優(yōu)選約為25-700米7克，最優(yōu)選約為50-300米7克。聚合物配體的至少一種活性基團(tuán)共價(jià)鍵合于本發(fā)明的聚合載體。聚合物配體上能與本發(fā)明的聚合載體反應(yīng)的合適的活性基團(tuán)包括但不限于親電試劑，例如烷基鹵化物、芳基鹵化物、醛類、活性酯類、活性醇、環(huán)氧化物、碳酸酯類、碳正離子和合成等價(jià)物以及它們的組合，或者親核基團(tuán)，例如醇、胺、碳負(fù)離子和合成等價(jià)物、硫醇以及羧酸鹽/酯以及它們的組合，或者自由基受體，例如不飽和雙鍵。
聚合載體上能與本發(fā)明的聚合物配體反應(yīng)的合適的活性基團(tuán)包括但不限于親電試劑，例如烷基鹵化物、芳基鹵化物、醛類、活性酯類、活性醇、環(huán)氧化物、碳酸酯類、碳正離子和合成等價(jià)物以及它們的組合，或者親核基團(tuán)，例如醇、胺、碳負(fù)離子和合成等價(jià)物、硫醇以及羧酸鹽/酯以及它們的組合，或者自由基受體，例如不飽和雙鍵。包含可用于本發(fā)明的聚合配體的聚合物的例子包括但不限于丙烯酸類、甲基丙烯酸類、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺、多糖以及它們的混合物?？梢杂糜诒景l(fā)明的聚合配體上的官能團(tuán)包括但不限于離子交換基團(tuán)、疏水性相互作用基團(tuán)、親水性相互作用基團(tuán)、親硫性相互作用基團(tuán)、金屬親和性基團(tuán)、親和性基團(tuán)、生物親和性基團(tuán)以及混合模式的基團(tuán)(上述的組合)?？捎糜诒景l(fā)明的合適的官能聚合配體的例子包括但不限于強(qiáng)陽(yáng)離子性交換基團(tuán)，例如磺丙基、磺酸；強(qiáng)陰離子型交換基團(tuán)，例如氯化三甲基銨；弱陽(yáng)離子交換基團(tuán)，例如羧酸；弱陰離子交換基團(tuán)，例如N，N-二甲基氨基或 DEAE ；疏水性相互作用基團(tuán)，例如苯基、丁基、丙基、己基；以及親合性基團(tuán)，例如蛋白質(zhì)A、 蛋白質(zhì)G以及蛋白質(zhì)L和能夠進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為另外的官能團(tuán)的非官能單體或中間單體(例如甲基丙烯酸縮水甘油酯，其轉(zhuǎn)化為離子交換配體或親合性配體)，以及它們的混合物。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述官能聚合配體通過(guò)在存在雙官能鏈轉(zhuǎn)移劑的情況下，經(jīng)由官能單體的自由基聚合形成。加入鏈轉(zhuǎn)移劑影響聚合物配體的分子量，并使其與聚合載體的反應(yīng)。在聚合反應(yīng)過(guò)程中，雙官能鏈轉(zhuǎn)移劑與單體的反應(yīng)形成用官能端基封端的聚合配體。合適的雙官能鏈轉(zhuǎn)移劑同時(shí)包括兩種基團(tuán)，一種基團(tuán)允許自由基鏈傳遞，另一種官能團(tuán)適合用于所述聚合配體與聚合載體的反應(yīng)。合適的鏈轉(zhuǎn)移基團(tuán)包括例如鹵代甲烷、二硫化物、硫醇和金屬絡(luò)合物。另外的合適的鏈轉(zhuǎn)移劑包括各種包含至少一個(gè)容易被抽提的氫原子的其它化合物，以及它們的混合物。合適的活性基團(tuán)包括但不限于親電試劑，例如烷基鹵化物、芳基商化物、醛類、活性酯類、活性醇、環(huán)氧化物、碳酸酯類、碳正離子和合成等價(jià)物以及它們的組合，或者親核基團(tuán)，例如醇、胺、碳負(fù)離子和合成等價(jià)物、硫醇以及羧酸鹽/酯以及它們的組合，或者自由基受體，例如不飽和雙鍵。鏈轉(zhuǎn)移劑可以一次或多次加入，或者以線性或非線性的形式連續(xù)加入，可以在大部分或整個(gè)反應(yīng)期間加入，或者在反應(yīng)期間的有限的部分加入?？梢詫㈡溵D(zhuǎn)移劑以0.01% _5%、更優(yōu)選0. 1% -1%的量加入反應(yīng)中?？梢詫⒔宦?lián)劑、支化劑和非官能單體連接于聚合配體，用來(lái)控制聚合配體的形貌或相互作用。但是，這些交聯(lián)劑或支化劑在聚合配體上的量很低，優(yōu)選< 5%，更優(yōu)選 < 1 %。合適的交聯(lián)劑或支化劑包括但不限于單體，例如二甲基丙烯酸乙二酯、二乙烯基苯、 三甲基丙烯酸三甲基丙酯和亞甲基二丙烯酸酯，或者多官能鏈轉(zhuǎn)移劑。可以用于本發(fā)明的“自由基引發(fā)劑”的例子包括但不限于能夠與乙烯基單體反應(yīng)而形成聚合配體的任意自由基引發(fā)劑，例如過(guò)氧化物，如氫過(guò)氧化叔丁基、氫過(guò)氧化枯烯； 過(guò)乙酸化物，例如過(guò)乙酸、氯過(guò)苯甲酸；過(guò)硫酸鹽，例如過(guò)硫酸銨、過(guò)硫酸鈉、過(guò)二硫酸鉀； 偶氮引發(fā)劑，例如4，4’ -偶氮二 (4-氰基戊酸)、Irgacure ^59[紐約州霍桑市汽巴-嘉吉公司(Ciki-Geigy，Hawthorn，N. Y.)]、鹽酸2，2'-偶氮二(2-脒基-丙烷)，等等，以及它們的混合物。所述接枝反應(yīng)可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的方法引發(fā)，優(yōu)選采用熱引發(fā)(加熱)或紫外輻射。所述自由基引發(fā)劑可以是水溶性或油溶性的。將自由基引發(fā)劑以0. 01% -15%、 更優(yōu)選0. 1% -2%的量加入反應(yīng)中。所述聚合物配體能夠適當(dāng)?shù)嘏c聚合載體共價(jià)鍵合。所述聚合物配體適于以溶液形
6式加入聚合載體的懸浮液中。然后優(yōu)選通過(guò)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的方法，適當(dāng)?shù)貙⒕酆吓潴w過(guò)濾、洗滌和交替干燥。反應(yīng)過(guò)程中的溫度適合約為25-90°C，優(yōu)選約為50-80°C。在一個(gè)實(shí)施方式中，混合物保持在惰性氣氛下。本發(fā)明還包括在色譜分離法中將吸附劑材料用于色譜。所述色譜分離方法可以是例如離子交換色譜、疏水性相互作用色譜、親水性相互作用色譜、親硫性相互作用色譜、金屬親合性色譜、親合性色譜、生物親合性色譜以及混合模式(上述情況的組合)，超臨界流體色譜(SFC)和以及模擬移動(dòng)床(SMB)。本發(fā)明還包括在色譜分離法中將吸附劑材料用于色譜。這些色譜分離法可以是例如低壓液相色譜、中壓液相色譜、HPLC、超臨界流體色譜(SFC)和模擬移動(dòng)床(SMB)。本發(fā)明還包括一種從混合物分離化合物的方法，該方法包括使所述混合物與本發(fā)明的用于色譜的吸附材料接觸。本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)是利用預(yù)先制備的聚合物配體接枝形成高容量離子交換樹脂， 該樹脂用于分子(更具體來(lái)說(shuō)是生物分子)的色譜俘獲和/或純化。實(shí)施例實(shí)施例中包含的材料由以下來(lái)源獲得。GE 衛(wèi)生保健公司(GE healthcare) :Q_S印harose 費(fèi)舍爾科學(xué)公司(Fisher Scientific) :HC1，三(羥甲基)氨基甲烷西格瑪-艾爾德里奇公司(Sigma-Aldrich) =BSA,注射過(guò)濾器，(3_丙烯酰氨丙基)三甲基銨，鹽酸-2-氨基乙硫醇，2，2’ -偶氮二甲基丙脒)實(shí)施例1-聚合配體的制備在獨(dú)立的稱量皿中稱取0. 111克鹽酸2-氨基乙硫醇(AET -HC1)和0. 186克二鹽酸-2，2’ -偶氮二 O-甲基丙脒)(ABMPA· 2HC1)，加入250毫升的圓底燒瓶中，用38克水淋洗。將30克氯化(3-丙烯酰氨丙基)三甲基銨(AAPTMAC)和32克水直接稱取加入燒瓶中。將溫度計(jì)和水冷凝器(帶有隊(duì)鼓泡器)與燒瓶連接安裝。將組分加入燒瓶中，然后反應(yīng)混合物在78°C攪拌5小時(shí)。實(shí)施例2-吸收劑材料的生成(聚合配體與聚合載體的反應(yīng))將90克冷卻的實(shí)施例1形成的聚合物配體溶液和10. 6克聚GMA-GlyDMA濕餅加入圓底燒瓶中。在隊(duì)氣氛下，在65°C，用頂掛式攪拌器QOOrpm)將漿狀溶液攪拌16小時(shí)。 對(duì)所得的冷卻的懸浮液進(jìn)行過(guò)濾，用水洗滌GX200mL)。陰離子交換樹脂以漿狀液水溶液的形式儲(chǔ)存。陰離子交換樹脂的牛血清白蛋白(BSA)容量為155毫克/毫升。用于吸收劑材料的BSA容量測(cè)試溶液1 (50mM Tris/HCl, pH 8. 61)的制備將12. 1克三(羥甲基)氨基甲烷加入2升的容量瓶中。然后將N/100HC1溶液加入容量瓶中至2升的刻度。給容量瓶蓋上蓋子，對(duì)其中的物料進(jìn)行振搖。將溶液靜置5分鐘，然后再次檢查溶液體積。再加HC1，將體積調(diào)節(jié)到2升的刻度。檢測(cè)pH，為8.61。溶液放入冰箱，貼標(biāo)簽(溶液1)。溶液2 O毫克/毫升BSA溶液)的制備在玻璃廣口瓶中稱取0. 806克BSA，將其加入403克溶液1中。手工輕輕混合該物料，使其溶解。溶液靜置0. 5小時(shí)，以確保BSA完全溶解。給該溶液貼上標(biāo)簽(溶液2)。
將1毫升去離子水緩慢地加入一個(gè)Bio-Rad Poly-Pr印色譜柱中，以免夾雜空氣。 使用永固油墨筆標(biāo)記水的高度。將端塞從柱子取下。在通風(fēng)櫥中將所述柱子與總管相連。 向所述柱子中加入更多的去離子水，對(duì)柱子施加輕度真空，直至柱子底部保留1-2厘米的水，以免夾雜空氣。將漿狀陰離子交換樹脂溶液加入所述柱子中。始終在樹脂上方保持水頭。用移液管緩慢地加入稀樹脂漿液，直至填充床達(dá)到1毫米高度，從而在柱子中量出1毫升的樹脂。 施加輕度真空，除去樹脂上方的溶液，僅在樹脂上方留下1-2厘米的溶液。當(dāng)樹脂水平位置落至低于1毫升標(biāo)記以下的時(shí)候，在施加額外的真空的條件下，加入更多的樹脂漿液。注意不要將空氣引入樹脂床(在床接觸空氣之前解除真空)。根據(jù)需要使用更多的去離子水，保持樹脂珠粒不與空氣接觸。填充的1毫升樹脂用大約10毫升的去離子水淋洗，以代替漿狀溶液，使液體排掉，直至水平面高出填充床1-2厘米。然后填充的1毫升的樹脂用10毫升的溶液1沖洗。施加真空，以使溶液1從柱子抽出，使得空氣被抽過(guò)整個(gè)柱子1分鐘。將包含濕餅的一次性柱子從總管取下。用刮刀將從柱子中取出的濕餅轉(zhuǎn)移到8盎司的玻璃瓶中，加入200毫升BSA溶液 2(來(lái)自下一步)。將200毫升2毫克/毫升的BSA溶液2轉(zhuǎn)移到玻璃瓶中。將蓋子固定在玻璃瓶上。用帕拉膜(Parafilm)密封該玻璃瓶。將所述玻璃瓶水平放置在振蕩器上，將樣品輕輕振蕩18小時(shí)。18小時(shí)之后，將樣品從振蕩器取出，使得樹脂沉淀15分鐘。15分鐘后，打開所述 8盎司的玻璃瓶，用5毫升的注射器從玻璃瓶取出3毫升樣品。將0. 22um的過(guò)濾器放置在注射器上，然后對(duì)注射器施加壓力，將BSA溶液緩慢地壓過(guò)過(guò)濾器，使其進(jìn)入一次性UV比色皿中。在培養(yǎng)18小時(shí)之后，測(cè)量過(guò)濾后的上清液BSA溶液在278納米處的紫外吸收結(jié)果， 來(lái)測(cè)定BSA結(jié)合容量。
權(quán)利要求
1.一種用于色譜法的吸附劑材料，所述吸附劑材料包含固定在聚合載體上的聚合物配體，所述聚合物配體通過(guò)一種包括一個(gè)或多個(gè)官能團(tuán)的連接基團(tuán)連接于所述聚合物載體。
2.如權(quán)利要求1所述的吸附劑材料，其特征在于，所述聚合載體是通過(guò)使包含以下組分的單體混合物聚合而制備的至少一種乙烯基單體，其包含能夠與聚合載體反應(yīng)的基團(tuán)以及一種或多種官能團(tuán)。
3.如權(quán)利要求2所述的吸附劑材料，其特征在于，所述能夠與聚合載體反應(yīng)的基團(tuán)包括親電試劑，例如烷基鹵化物、芳基鹵化物、醛類、活性酯類、活化的醇、環(huán)氧化物、碳酸酯類、碳正離子和合成等價(jià)物以及它們的組合，或者親核基團(tuán)，例如醇、胺、碳負(fù)離子和合成等價(jià)物、硫醇以及羧酸鹽/酯以及它們的組合，或者自由基受體，例如不飽和雙鍵。
4.如權(quán)利要求1所述的吸附劑材料，其特征在于，所述聚合載體的體均粒度約為 0. 5-500 微米。
5.一種制備用于色譜法的吸附劑材料的方法，所述方法包括將聚合物配體固定在聚合載體上，其中，所述聚合載體與包含聚合物主鏈的聚合物配體反應(yīng)，從而在聚合物主鏈和聚合載體之間形成一個(gè)連接基團(tuán)，每個(gè)連接基團(tuán)包括一種或多種官能團(tuán)。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述聚合物配體是在存在雙官能鏈轉(zhuǎn)移劑的情況下，使包含以下組分的單體混合物聚合而制備至少一種乙烯基單體，其包含能夠與所述聚合載體反應(yīng)的基團(tuán)以及一種或多種官能團(tuán)。
7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述能夠與聚合載體反應(yīng)的基團(tuán)包括親電試劑，例如烷基鹵化物、芳基鹵化物、醛類、活性酯類、活化的醇、環(huán)氧化物、碳酸酯類、碳正離子和合成等價(jià)物以及它們的組合，或者親核基團(tuán)，例如醇、胺、碳負(fù)離子和合成等價(jià)物、硫醇以及羧酸鹽/酯以及它們的組合，或者自由基受體，例如不飽和雙鍵。
8.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述聚合載體的體均粒度約為0.5-500微米。
9.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，將所述聚合物配體以溶液的形式加入所述聚合載體的懸浮液中。
10.一種用來(lái)從混合物分離化合物的方法，該方法包括使所述混合物與用于色譜法的吸附劑材料接觸，所述吸附劑材料包含固定在聚合載體上的聚合物配體，其中聚合物主鏈通過(guò)一個(gè)連接基團(tuán)結(jié)合于所述載體，所述連接基團(tuán)包括一種或多種官能團(tuán)。
全文摘要
本發(fā)明涉及用來(lái)制備具有共價(jià)鍵合的季銨聚合物鏈的大孔聚合介質(zhì)的方法。所述介質(zhì)可以用于色譜純化，獲得具有改進(jìn)的蛋白質(zhì)結(jié)合容量和樹脂選擇性的多孔基材，本發(fā)明還涉及所述介質(zhì)的制備和使用方法。
文檔編號(hào)B01J20/30GK102343256SQ20111022275
公開日2012年2月8日 申請(qǐng)日期2011年7月27日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月28日
發(fā)明者J·J·邁克納, M·J·迪茲 申請(qǐng)人:羅門哈斯公司