專利名稱：測定設(shè)備和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及使用兩性分子聚合物來提高測定設(shè)備上的橫向流動(dòng)和試劑混合。尤其是，本發(fā)明涉及在包括設(shè)備的測定方法中使用兩性分子聚合物，以確定血清或血漿中的脂質(zhì)濃度。
背景技術(shù)：
橫向流動(dòng)測定設(shè)備和方法在現(xiàn)有技術(shù)中是已知的。先前，這種設(shè)備已被開發(fā)來測試易于大量獲得的試樣。然而，當(dāng)測試試樣是血液或血液成分時(shí)，大量試樣的收集不是總是可能的，尤其是在諸如醫(yī)生外科手術(shù)的治療點(diǎn)時(shí)。一般地，這些設(shè)備包括橫向流動(dòng)矩陣， 例如，硝化纖維膜及類似物。施加到矩陣的試樣沿矩陣流動(dòng)，并且一個(gè)或多個(gè)試樣內(nèi)的分析物與橫向流動(dòng)矩陣內(nèi)的一個(gè)或多個(gè)試劑起反應(yīng)。典型地，這些試劑中的至少一個(gè)在矩陣內(nèi)是固定不動(dòng)的，以允許與分析物的任何反應(yīng)能被檢測，例如，被可視地檢測。不幸地是，伴同試樣傳遞和試樣擴(kuò)散到膜而來的變化導(dǎo)致很大程度上不可控的且在到達(dá)測試區(qū)域之前不均勻的流動(dòng)。這是因?yàn)檫@種設(shè)備僅依靠流體的毛細(xì)管作用。這種建立在毛細(xì)管作用的依靠可能對設(shè)備的精度具有相反的影響，因?yàn)樵谡麄€(gè)測試區(qū)域的分析物的量和/或貼標(biāo)簽的量不是一致的。單獨(dú)的毛細(xì)血管作用的使用也意味著測定是慢的，因?yàn)椴豢煽康牧黧w毛細(xì)作用。測定也不適合小的流體試樣，諸如核酸檢測，其中，膜可在測定完成之前干燥，或者可能是不足量的流體穿過測試設(shè)備的長度。如此一來，現(xiàn)在就需要一種簡單而有效的技巧來改善橫向流動(dòng)測定，尤其是在使能夠執(zhí)行低體積測試的同時(shí)允許更快的測試。治療設(shè)備的橫向流動(dòng)點(diǎn)的一個(gè)區(qū)域?qū)?huì)在膽固醇和血脂測試的領(lǐng)域中有用。總所周知的是，血液中的不同脂蛋白的濃度與個(gè)人的形成中的動(dòng)脈硬化癥風(fēng)險(xiǎn)是有聯(lián)系的。動(dòng)脈硬化癥是一種影響動(dòng)脈血管的疾病，并同通常指動(dòng)脈的“硬化”或“鑲邊”。 它是由血管壁上的多個(gè)斑的行程而引起的，主要原因是巨噬白細(xì)胞的聚集和低密度脂蛋白的上升而引起的。在未能通過高密度脂蛋白(HDL)從巨噬細(xì)胞中充分地移除脂肪和膽固醇，慢性煽動(dòng)性響應(yīng)在動(dòng)脈壁內(nèi)逐步顯示出來。血漿中的大部分的循環(huán)膽固醇被發(fā)現(xiàn)為三類脂蛋白。膽固醇和膽固醇酯酶酯是不溶于水的物質(zhì)，因而被循環(huán)系統(tǒng)內(nèi)的那些脂蛋白攜帶，以最終被身體的細(xì)胞所使用。這些脂蛋白類的每一個(gè)攜帶不同量的膽固醇。因而，總的血清膽固醇是個(gè)復(fù)雜的平均量，其中，各個(gè)脂蛋白類均有助于血清的總的脂蛋白濃度。各個(gè)類的脂蛋白在動(dòng)脈硬化癥中起著不同的角色。高密度脂蛋白或HDL —般地被認(rèn)為是“好的膽固醇”，就是說，它們是抗致動(dòng)脈粥樣化的。相反地，低密度脂蛋白或LDL通常被認(rèn)為是“壞的膽固醇”，因?yàn)橐阎鼈兪歉叨戎聞?dòng)脈粥樣化的。另一類脂蛋白，極低密度脂蛋白或VLDL被認(rèn)為是輕度致動(dòng)脈粥樣化。就HDL膽固醇和動(dòng)脈硬化癥風(fēng)險(xiǎn)，例如心臟病發(fā)作之間的逆向關(guān)系而言，血液中的HDL的濃度已作過廣泛地研究。因而，如果HDL膽固醇的濃度被確定為低，個(gè)人可能有增加的發(fā)展動(dòng)脈硬化癥的風(fēng)險(xiǎn)。因而，這種風(fēng)險(xiǎn)可通過測定HDL膽固醇而估計(jì)。通過這些測定結(jié)果，可通過如下的方程來計(jì)算LDL膽固醇的大約含量LDL膽固醇=總膽固醇-1/5總膽固醇-HDL膽固醇為了確定不同膽固醇成分的膽固醇量，一般使用四種方法，其包括(1)超速離心法；(2)分餾沉淀法；(3)使用Friedewald方程計(jì)算；以及電泳分離和沉淀法。這些方法中的每一個(gè)均有不同的缺點(diǎn)。例如，超速離心法需要使用專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備并可花費(fèi)好幾天的時(shí)間來完成。分餾沉淀法、電泳分離和沉淀法都是耗時(shí)的，并再次需要專業(yè)設(shè)備。Friedewald方程是不準(zhǔn)確的，因?yàn)樗ㄟ^減去與其它類的脂蛋白相關(guān)的脂蛋白而估計(jì)LDL的濃度。因而，方程基于三個(gè)獨(dú)立的脂質(zhì)分析提供了非直接的估計(jì)，而獨(dú)立的脂質(zhì)分析提供了誤差的潛在源頭。作為這些缺點(diǎn)的結(jié)果，膽固醇測定的結(jié)果在幾個(gè)小時(shí)內(nèi)甚至幾天內(nèi)都是不可獲得的，并且不能在更小的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)或由外科手術(shù)中的醫(yī)生執(zhí)行。因而，需要一種執(zhí)行即簡單又廉價(jià)使用的膽固醇測定的設(shè)備和方法。同樣需要一種直接測量各類脂蛋白的濃度而無需根據(jù)簡介估計(jì)的測定。當(dāng)固態(tài)疏水分子被添加到水溶液或懸浮液中時(shí)，它們形成直接的沉淀物并且不進(jìn)入水相，因?yàn)樵撌杷肿印罢场痹谝黄鸲侨芙?。即便有力地?cái)噭?dòng)沉淀物，疏水分子和溶解分子之間的直接遭遇的次數(shù)是小的。這種相互作用也可能是熱動(dòng)力學(xué)上地不利的。現(xiàn)有技術(shù)中的方法涉及在混合水溶液或懸浮液之前將疏水分子溶解在適宜的水-易混合的有機(jī)溶劑中。一旦進(jìn)入水溶液中，疏水分子被單分散，從而增加與溶液中已有的分子相互作用的可能性。然而，這種方法的缺點(diǎn)是有機(jī)溶劑通常是有毒的或者可妨礙酶作用或熒光測量。這種方法一般地也不適合治療點(diǎn)使用，比如醫(yī)生外科手術(shù)或臨床診斷。

發(fā)明內(nèi)容
申請人:已經(jīng)獲得了令人驚奇的發(fā)現(xiàn)通過在測定系統(tǒng)中使用兩性分子聚合物，測定效率和/或者速度都獲得了明顯的提高。申請人的方法不僅可應(yīng)用到水溶液/懸浮液中的快速結(jié)合的疏水試劑中而且可應(yīng)用到諸如具有例如脂蛋白的分析物的發(fā)光體的混合物中，而不直接應(yīng)用有機(jī)溶劑。該方法使血液、食品及類似物中的脂蛋白含量通過測量熒光而被易于量化。這種方法的使用也使快速的、廉價(jià)的治療點(diǎn)膽固醇測定系統(tǒng)的開發(fā)成為可能。在本發(fā)明的第一方面，提供了一種用于檢測駐留在含水試樣中的分析物的存在性或數(shù)量的測定設(shè)備，該設(shè)備包括至少一個(gè)供含水試樣可穿過的流動(dòng)通道，其特征在于該至少一個(gè)流動(dòng)通道包括至少一個(gè)兩性分子聚合物，其中，在使用中，沿流動(dòng)通道的流體通路大于毛細(xì)血管作用單獨(dú)所預(yù)期的通路。兩性分子聚合物是一種既能處理親水又能處理疏水特性的聚合物。這種混合物也可稱之為兩性分子混合物或非電離親水聚合物。在特定實(shí)施例中，兩性分子聚合物是一種能溶于水和多種有機(jī)溶劑中的物質(zhì)。本發(fā)明涉及諸如聚乙二醇的兩性分子聚合物的使用，以提高和/或控制橫向流體流動(dòng)。本發(fā)明也可用來增加含水試樣和至少一個(gè)試劑之間的相互作用，優(yōu)選地是疏水發(fā)光體和脂蛋白的相互作用。優(yōu)選地，流動(dòng)通道涂覆有至少一個(gè)兩性分子聚合物。
驚喜地是，已然發(fā)現(xiàn)兩性分子聚合物可用來涂覆例如塑料或玻璃的表面以增強(qiáng)流體流動(dòng)以移動(dòng)和/或混合水溶液，例如將“干”成分組合在或當(dāng)作兩性分子聚合物的涂層之上或之下的層內(nèi)或?qū)印尚苑肿泳酆衔锏氖褂靡簿哂懈纳屏黧w橫向流動(dòng)的優(yōu)勢，比如相對于傳統(tǒng)的諸如US6485982所公開的“毛細(xì)作用，，多孔材料而言?，F(xiàn)有技術(shù)的毛細(xì)作用方法建立在支撐工具的使用，比如供流體通過毛細(xì)管作用抽吸的紙張或膜。兩性分子聚合物的使用移除了對單獨(dú)依靠毛細(xì)管作用的支撐工具的需要，并具有驚奇的效果相比較僅通過毛細(xì)管作用的多孔材料而言，液體可沿例如微管或表面?zhèn)鬏敻h(yuǎn)的距離或以更快的速度傳遞。如這里所使用的，術(shù)語“橫向流動(dòng)”指流體在表面上的運(yùn)動(dòng)，其中，流體在特定方向或沿特定通道流動(dòng)，例如橫向地。優(yōu)選地，流體以比單獨(dú)的毛細(xì)管作用在特定材料所觀測到的更大速度流動(dòng)或流動(dòng)更大的距離。應(yīng)當(dāng)注意的是，術(shù)語“橫向流動(dòng)”意味著描述性的而非限制性的，因?yàn)樵O(shè)備可以具有相同效果的其他方式配置，例如徑向或垂直流動(dòng)可易于設(shè)想使用與本發(fā)明相同的原理，而不脫離本發(fā)明的精神。在特定實(shí)施例中，流體與分析物一致地相互作用，并且容納在流體內(nèi)的分析物在其流動(dòng)或行進(jìn)時(shí)與不同的試劑反應(yīng)。設(shè)備包括至少一個(gè)流動(dòng)通道，含水試樣可沿流動(dòng)通道行進(jìn)，并且其特征在于該至少一個(gè)流動(dòng)通道包括至少一個(gè)兩性分子聚合物，其中，流體沿流動(dòng)通道的通路大于單獨(dú)的毛細(xì)管作用所期望的通路。相對于現(xiàn)有技術(shù)，設(shè)備不需要用于橫向流體流動(dòng)的多孔膜，相反地，流體可沿包括至少一個(gè)兩性分子聚合物的流動(dòng)通道行進(jìn)。驚喜地是，已然發(fā)現(xiàn)，流體沿包括兩性分子聚合物的流動(dòng)通道行進(jìn)的速度和/或距離比沿包括多孔材料的流動(dòng)通道行進(jìn)的速度和/或距離要快和/或大。在特定的實(shí)施例中，流動(dòng)通道含有至少一個(gè)兩性分子聚合物。因此，兩性分子聚合物可用來涂覆表面，比如管的內(nèi)部、毛細(xì)管、狹槽、凹坎、膜或類似物。顯而易見地是，兩性分子聚合物可用作涂層，該涂層可用于“標(biāo)準(zhǔn)”橫向流動(dòng)測定所用的膜中，以加速和/或提供對流體流更大的控制。在其他實(shí)施例中，流體通道通過至少一個(gè)兩性分子聚合物形成。疏水或兩性分子聚合物可打印和/或噴灑到表面上，比如平的表面，例如通過諸如是油墨噴射或泡沫噴射打印、描繪、噴灑或其它應(yīng)用方法的方法形成的“軌道”和/或?qū)?。兩性分子聚合物可具有薄膜的形式。在其他?shí)施例中，薄膜可磨碎成顆粒材料或者可形成為，例如細(xì)粒、小珠、小球、或微米球體、或納米球體或微微米球體。兩性分子聚合物自身可具有細(xì)粒、小珠、小球、或微米球體、或納米球體或微微米球體的形式。在再一個(gè)實(shí)施例中，兩性分子聚合物可壓印成納米_、微微米_、飛升液滴的一部分，或形成納米_、微微米_、飛升液滴的一個(gè)或多個(gè)陣列。優(yōu)選地，兩性分子聚合物包括至少一個(gè)探針、指示器或試劑。優(yōu)選地，指示器是疏水混合物或諸如發(fā)光體的試劑。為了將疏水混合物或試劑與聚合物結(jié)合起來，所述疏水混合物或試劑可首先溶解在易與兩性分子聚合物混合的諸如有機(jī)溶劑的溶劑中。兩性分子聚合物也溶解在諸如水的溶劑中，或者諸如二甲替甲酰胺或氯仿的更易揮發(fā)的溶劑中，盡管其它適宜的溶劑對本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的。疏水混合物或試劑以及兩性分子聚合物然后被組合，然后優(yōu)選地被干燥成薄膜。驚奇地是，本發(fā)明人依然發(fā)現(xiàn)一旦干燥，就不再有疏水混合物或試劑與聚合物的相分離。流動(dòng)通道可包括至少一個(gè)探針、指示器或試劑。流動(dòng)通道可容納探針、指示器或試劑。因而，至少一個(gè)疏水發(fā)光體和兩性分子聚合物的組合物可用來涂覆表面，比如管的內(nèi)部、毛細(xì)管、狹槽、凹坎、薄膜或類似物。在另一個(gè)實(shí)施例中，組合物可壓印到表面上，例如通過諸如油墨噴射或泡沫噴射打印、描繪、噴灑或其他應(yīng)用方法的壓印方法形成“軌道”。 探針、指示器或試劑可鄰接至少一個(gè)流動(dòng)通道?？蓚溥x地，探針、指示器或試劑可直接層壓在至少一個(gè)流動(dòng)通道之上后之下。因而，試劑本身可在流動(dòng)通道之內(nèi)，例如與兩性分子聚合物結(jié)合在一起，或者可布置成離散成或壓印成兩性分子聚合物上、下或旁邊的“點(diǎn)”。顯而易見地是，本發(fā)明的方法也可應(yīng)用到除疏水發(fā)光體之外的其他試劑，例如，諸如酶、阻塞試劑、化學(xué)藥品等。尤其是，兩性分子聚合物為具有分子量在大約1000到20000Da、更具體地在大約 1000到6000Da、以及更具體地在大約1000到3000Da的聚乙二醇(PEG)。特殊的PEG包括 PEG2000、PEG6000、PEG12000 和 PEG20000。聚乙二醇，也稱為聚環(huán)氧乙烷(PEO)或聚氧乙烯(POE)，是一種乙撐氧的低聚物或聚合物。PE(is的分子量可在300g/mol到10，000, 000g/mol的廣泛范圍內(nèi)。PEG具有下述的一般結(jié)構(gòu)HO- (CH2-CH2-O-) n-H數(shù)字通常包含在PEk的名字中，以指示它們的平均分子量。例如，具有η = 80的 PEG，將具有大約3500道爾頓的平均分子量，并且將標(biāo)記為PEG3500。一般地，PEk包括具有分子量分布的分子。盡管發(fā)現(xiàn)具有不同分子量的PEk 因其不同的物理特性(比如粘性)而用于不同的應(yīng)用中，它們的化學(xué)特性幾乎是完全一致的。不同形式的PEG根據(jù)其用于聚合過程的引發(fā)劑而可用，比如單功能的甲基醚 PEG (methoxypoly (ethylene glycol))，簡稱mPEG。PEk也因不同的幾何形狀而可用。有枝的PE(is具有3至10個(gè)源自中央芯基的PEG鏈。星形PEk具有10至100個(gè)源自中央芯基的PEG鏈。梳形PEk通常具有嫁接到聚合物基干的多個(gè)PEG鏈。PEk也在著名的 PEGylation過程中共價(jià)耦合到其他分子，這就可能在使用PEG的流體流動(dòng)特性以用于試劑混合時(shí)有利。進(jìn)一步的兩性分子聚合物可包括兩性分子多肽，就是說，具有二級結(jié)構(gòu)的多肽使得多肽具有親水面和疏水面。兩性分子肽結(jié)構(gòu)的設(shè)計(jì)(例如，α螺旋結(jié)構(gòu)的多肽)在現(xiàn)有技術(shù)中是已知的。例如，Grell 等.(2001) J Pept Sci 7(3) :146-51 ；Chen等· (2002) J Pept Res 59(1) :18-33 ；Iwata等.(1994) J boil Chem 269(7) :4928-33 ;Cornut等· (1994)FEBS Lett 340(1) J9-33 ;Negrete 等· (1998) Protein Sci 7(6) 1368-79 其他的兩性分子或非-電離聚合物包括聚乙烯醇(PVA) (Sigma Aldrich :360627_25G)，羧甲基纖維素(Sigma C-5678) ；0,0 ‘ -2 -氨基乙燒基)PEG2000(聚氧乙烯 2(胺))(Aldrich Chemistry 14501)以及 PEG 甲基醚 5000 (Aldrich Chemistry :81323_250G)以及其他電離聚合物。優(yōu)選地，設(shè)備進(jìn)一步包括至少一個(gè)用于含水試樣應(yīng)用的應(yīng)用區(qū)域。應(yīng)用區(qū)域是試樣應(yīng)用到到設(shè)備上的區(qū)域。優(yōu)選地，具有單應(yīng)用區(qū)域，從該應(yīng)用區(qū)域，多個(gè)但至少一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、或更多個(gè)能被試樣整除的個(gè)數(shù)可獲得以執(zhí)行根據(jù)本發(fā)明的方法?？蓚溥x地，可能具有單獨(dú)的應(yīng)用區(qū)域，以用于各個(gè)或試樣的整除個(gè)數(shù)。應(yīng)當(dāng)了解的是，在一些實(shí)施例中，設(shè)備可被設(shè)計(jì)，使得試樣可直接引入到測試區(qū)域而省略對應(yīng)用區(qū)域的需要。如本文所使用的術(shù)語“含水試樣”指任何液體試樣，優(yōu)選地是分析物可被檢測到的一個(gè)試樣。這種試樣的非限制性示例包括整個(gè)血液、血清或血漿試樣、尿、腦脊髓液(CSF)、 淋巴、漿狀分泌物或其他生物流體、動(dòng)物組織勻漿、蛋白質(zhì)組織勻漿、牛奶、原始蛋、發(fā)酵肉湯、動(dòng)物飼料、以及海產(chǎn)飼料。應(yīng)當(dāng)理解的是，試樣僅需要處于液體或含水形式，以用于測定的至少一實(shí)質(zhì)部分。因此，本領(lǐng)域技術(shù)人員可設(shè)想本測定也可在試樣的熔點(diǎn)之上的溫度執(zhí)行，比如，例如在室溫下通常是固體的蠟或脂。優(yōu)選地，設(shè)備進(jìn)一步包括至少一個(gè)測試區(qū)域，其中，含水試樣的部分和探針、指示器或試劑之間的反應(yīng)結(jié)果和/或過程被確定。用于分析物和探針、指示器或試劑之間的反應(yīng)結(jié)果和/或過程的測試區(qū)域和區(qū)域可被確定。測試區(qū)域可與激勵(lì)設(shè)備接觸。優(yōu)選地，至少一個(gè)流體通道與至少一個(gè)應(yīng)用區(qū)域和至少一個(gè)測試區(qū)域流體連通。 優(yōu)選地，設(shè)備包括多個(gè)流通通道以及測試區(qū)域。優(yōu)選地，流動(dòng)通道例如通過流通連通將應(yīng)用區(qū)域與至少一個(gè)測試區(qū)域連接起來。流動(dòng)通道可以是狹槽、凹槽、毛細(xì)管、軌道或通道等。優(yōu)選地，流動(dòng)通道包括兩性分子聚合物。兩性分子聚合物可以在通道的表面上具有涂層或膜的形式，或者可在流動(dòng)通道的腔內(nèi)具有粉末、小球、微米微粒、納米微粒、微微米微?；蛱畛湮锏男问健Ｔ趦尚苑肿泳酆衔锾畛湓谇粌?nèi)的地方，它可整個(gè)地填充腔，或者局部地填充，比如間隙?？蓚溥x地，兩性分子聚合物可以是例如設(shè)定為軌道或通路的流動(dòng)通道，例如壓印在沿流體橫向流動(dòng)發(fā)生的表面上。包括兩性分子聚合物的流動(dòng)通道可進(jìn)一步包括測定所需的其他試劑，例如至少一個(gè)疏水發(fā)光體和/或至少一個(gè)酶。不同的流動(dòng)通道可包括不同的試劑。流動(dòng)通道也可沿其長度包括不同的試劑，例如允許通過含水試樣的橫向流動(dòng)順序添加試劑。可備選地，流動(dòng)通道單獨(dú)包括兩性分子聚合物，導(dǎo)致包括兩性分子聚合物的測試區(qū)域與其它試劑結(jié)合起來。試劑本身可在流動(dòng)通道之內(nèi)，例如與兩性分子聚合物結(jié)合或可布置為兩性分子聚合物上方、下方、旁邊的層。優(yōu)選地，反應(yīng)的結(jié)果和/或過程借助光學(xué)設(shè)備確定?？蓚溥x地，反應(yīng)的結(jié)果和/或過程通過視覺觀察確定。更具體地，反應(yīng)的結(jié)果和/或過程借助熒光確定。優(yōu)選地是，測試區(qū)域被布置，使得其與激勵(lì)設(shè)備光接觸。測試區(qū)域應(yīng)當(dāng)被布置，使得產(chǎn)自測定的熒光可被檢測設(shè)備檢測到。對于相同測定或不同測定的不同方面，可具有分開的測試區(qū)域?！凹?lì)設(shè)備”是可操作地用來激勵(lì)試樣的設(shè)備，使得試樣的至少一個(gè)組分-通常是探針或指示器-發(fā)熒光。上文術(shù)語“接觸”的使用不是暗示或限于物理接觸，在本文的上下文中，術(shù)語僅意味著測試區(qū)域物理地移動(dòng)進(jìn)入光束的通道，或者測試區(qū)域被光束照亮/激勵(lì)。檢測設(shè)備是可操作地用來檢測試樣所發(fā)熒光的設(shè)備。在特定實(shí)施例中，測試可通過視覺檢測簡單地執(zhí)行。在這種情況下，激勵(lì)設(shè)備和檢測設(shè)備可能不是必需的。
在特殊實(shí)施例中，設(shè)備包括至少兩個(gè)單獨(dú)的部件。更具體的是，該至少兩個(gè)單獨(dú)的部件是閱讀器和測試盒。因而，設(shè)備可包括兩個(gè)或多個(gè)單獨(dú)的部件，例如閱讀器和適于與閱讀器功能連接的盒。優(yōu)選地，盒可插入、放置或連接到閱讀器。閱讀器可包括供盒插入、置放或連接的入塢設(shè)備。入塢設(shè)備可以是狹槽。因而，優(yōu)選地是，和可自閱讀器中移除。盒可采用不同的形式，例如，卡片、芯片或幻燈片，并且可由現(xiàn)有技術(shù)中已知的材料構(gòu)建，例如紙板、玻璃、硅、塑料等。優(yōu)選地，材料包括或是疏水材料或具有是疏水的區(qū)域。優(yōu)選地，測試盒包括至少一個(gè)流動(dòng)通道。優(yōu)選地，測試盒是一次性的，并且可以包含新的測定試劑的新盒取代。優(yōu)選地，閱讀器是可重用的部件。在優(yōu)選實(shí)施例中，設(shè)備是用于檢測駐留在含水試樣中的分析物的存在性或量的測定設(shè)備，其包括(i)至少一個(gè)適于將含水試樣應(yīng)用到設(shè)備的應(yīng)用區(qū)域；(ii)至少一個(gè)探針、指示器或試劑，其中在使用時(shí)，該至少一個(gè)探針、指示器或試劑能與駐留在含水試樣中的分析物起反應(yīng)；(iii)至少一個(gè)測試區(qū)域，其中，分析物和至少一個(gè)探針、指示器或試劑之間的反應(yīng)結(jié)果和/或過程可被確定；(iv)與該至少一個(gè)應(yīng)用區(qū)域和該至少一個(gè)測試區(qū)域流體連通的至少一個(gè)流動(dòng)通道；其特征在于該至少一個(gè)流動(dòng)通道包括至少一個(gè)兩性分子聚合物，并且其中，在使用中，沿該至少一個(gè)流動(dòng)通道的流體通路大于單獨(dú)的毛細(xì)管所用所期望的通路。在特定實(shí)施例中，設(shè)備包括單應(yīng)用區(qū)域和多個(gè)流動(dòng)通道，例如四個(gè)，導(dǎo)致多個(gè)，例如至少三個(gè)測試區(qū)域。優(yōu)選地，當(dāng)設(shè)備包括至少三個(gè)測試區(qū)域和至少三個(gè)流動(dòng)通道時(shí)，第一流動(dòng)通道與應(yīng)用區(qū)域和第一測試區(qū)域流體連通，第二流動(dòng)通道與應(yīng)用區(qū)域和第二測試區(qū)域流體連通， 并且第三流動(dòng)通道與應(yīng)用區(qū)域和第三測試區(qū)域流體連通。在一個(gè)實(shí)施例中，第一流動(dòng)通道和/或測試區(qū)域包括兩性分子聚合物以及第一疏水發(fā)光體和任意地至少一個(gè)酶。第二流動(dòng)通道和/或測試區(qū)域包括兩性分子聚合物以及第二疏水發(fā)光體和任意地至少一個(gè)酶。第三流動(dòng)通道和/或測試區(qū)域包括兩性分子聚合物以及第一、第二或第三疏水發(fā)光體和任意地至少一個(gè)酶。在使用中，應(yīng)用到應(yīng)用區(qū)域的試樣 (以水形式)沿至少一個(gè)流動(dòng)通道通過兩性分子聚合物所引起的橫向流動(dòng)被激勵(lì)入各自的測試區(qū)域。當(dāng)試樣沿至少一個(gè)流動(dòng)通道流動(dòng)時(shí)，其被顯現(xiàn)并與疏水發(fā)光體和/或其他試劑混合?？蓚溥x地，試樣在其到達(dá)測試區(qū)域時(shí)僅呈現(xiàn)為疏水發(fā)光體和/或其他試劑。優(yōu)選地， 隨橫向流流動(dòng)的試樣不需要外部力，比如泵，以移動(dòng)含水試樣。一旦含水試樣到達(dá)測試區(qū)域，可以進(jìn)行測量。在測定為油脂壓型測定的地方，探針、指示器或試劑可選自下列成分組成的組 Amplex Red、K37、Nile Red、膽固醇酯酶、膽固醇氧化酶或者辣根過氧化物酶。Amplex Red (10-乙?；?3，7_ 二羥基吩嗪)，可自 Invitrogen (目錄數(shù) A12222 和A22177)獲得，其與過氧化氫(H2O2)以1 1的理想配比起反應(yīng)，以產(chǎn)生高度熒光的 resorufin. K37 (4-二甲基胺基-4' - 二氟亞甲基-磺酰基-苯亞甲基-笨乙酮)被本發(fā)明人在其先前的國際專利申請PCT/GB2005/004757中公開。Nile Red，親脂性著色劑，也稱為Nile blue oxazone，其可自hvitrogen(目錄數(shù)附142)獲得，或者可通過煮沸Nile blue與硫酸的溶液而獲得。Nile red將細(xì)胞內(nèi)的脂滴染成紅色，并且加強(qiáng)熒光，在其處于富脂環(huán)境中時(shí)，發(fā)出強(qiáng)的金黃色。膽固醇酯酶(Steryl-esteracylhydrolase，注冊號=EC 3. 1. 1. 13)是一種催化膽固醇酯酶酯和別的一些留醇脂的水解作用的酶，以釋放膽固醇以及脂肪酸陰離子。膽固醇氧化酶(Cholesterol :oxygen oxidoreductase，注冊號EC1. 1. 3. 6)是一種酶，其在氧分子存在時(shí)將膽固醇氧化成4-Cholesten-3-one以及過氧化氫。辣根過氧化物酶(Sigma Aldrich，注冊號EC 1. 11. 1. 7)是一種過氧化氫氧化還原酶。其他等效的過氧化氫氧化還原酶是已知的，并可從例如大豆獲得。對于脂壓型，第一流動(dòng)通道包括Amplex Red，第二流動(dòng)通道包括K37，并且第三流動(dòng)通道包括Nile Red?？蓚溥x地，第一測試區(qū)域可包括Amplex Red，第二測試區(qū)域可包括 K37，第三測試區(qū)域可包括Nile Ited。然而更優(yōu)選地是，當(dāng)?shù)谝涣鲃?dòng)通道包括Amplex Red時(shí)， 第一流動(dòng)通道進(jìn)一步包括膽固醇酯酶、膽固醇氧化酶和辣根過氧化物酶。在備選實(shí)施例中， 第一測試區(qū)域可包括膽固醇酯酶、膽固醇氧化酶和辣根過氧化物酶。在再一個(gè)實(shí)施例中，應(yīng)用區(qū)域包括至少一個(gè)探針、指示器或選自下列成分組成的組的試劑=Amplex Red、K37、Nile Red、膽固醇酯酶、膽固醇氧化酶或辣根過氧化物酶。優(yōu)選地，探針、指示器或試劑是干的形式。有利地，設(shè)備可用來執(zhí)行快速和容易的測定，其可并行地同時(shí)操作，以確定來自生物流體的被分析物的存在/不存在或濃度。例如，兩性分子聚合物的使用將測定時(shí)間從幾個(gè)小時(shí)或者甚至幾天減少到小到一分鐘。在本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供一種測量含水生物試樣中的分析物的方法，其包括(i)將含水生物試樣與至少一個(gè)疏水發(fā)光體和至少一個(gè)兩性分子聚合物的組合物接觸，其中，至少一個(gè)疏水發(fā)光體結(jié)合到含水生物試樣中的至少一個(gè)分析物，并且此時(shí)在適當(dāng)?shù)募?lì)下結(jié)合后的發(fā)光體發(fā)熒光；(ii)以適當(dāng)?shù)募?lì)波長從步驟(i)激勵(lì)產(chǎn)品；(iii)在步驟(ii)后，以適當(dāng)?shù)臋z測波長測量熒光輻射。對本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見地是，適宜的激勵(lì)和輻射波長將依賴于所使用的特殊染料或發(fā)光體。適宜波長的選擇可通過使用標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)技巧或與染料或發(fā)光體相關(guān)的可獲得數(shù)據(jù)確定。在本發(fā)明的方法的有一個(gè)實(shí)施例中，含水生物試樣在與至少一個(gè)疏水發(fā)光體接觸之前與至少一個(gè)兩性分子聚合物接觸。在備選實(shí)施例中，含水生物試樣在其與至少一個(gè)疏水發(fā)光體接觸時(shí)大體上同時(shí)與至少一個(gè)兩性分子聚合物接觸。通過非限制性示例，生物試樣(以水形式)根據(jù)本發(fā)明的第一或第二方面被應(yīng)用到比如測試芯片或卡片上的應(yīng)用區(qū)域。應(yīng)用區(qū)域被連接到至少一個(gè)，優(yōu)選地三個(gè)、四個(gè)或更多個(gè)測試區(qū)域。區(qū)域之間的連接可以通過狹槽、毛細(xì)管、軌道等等。狹槽、毛細(xì)管等優(yōu)選地被涂覆有兩性分子聚合物。當(dāng)使用軌道時(shí)，它們可從兩性分子聚合物形成，例如壓印或放到表面上。兩性分子聚合物從應(yīng)用區(qū)域沿狹槽、毛細(xì)管、軌道等將含水試樣“吸取”或抽吸到至少一個(gè)測試區(qū)域。在使用多個(gè)狹槽、毛細(xì)管、軌道等的場合，在流體穿過它們時(shí)，試樣可被劃分成或被分割成被整除的數(shù)。通過這種方式，試樣可在無需手工處理的情況下通過兩性分子聚合物所引起的橫向流動(dòng)的使用而被分開。各狹槽、毛細(xì)管、軌道等可包括至少一個(gè)與兩性分子聚合物結(jié)合的發(fā)光體。在呈現(xiàn)的場合，各狹槽、毛細(xì)管、軌道等中的疏水發(fā)光體可以一樣或不同。各個(gè)不同的疏水發(fā)光體可結(jié)合到特殊類的或子類的脂蛋白，并且在結(jié)合時(shí)，在適當(dāng)?shù)募?lì)下修改熒光效應(yīng)，其是特殊類或子類的脂蛋白的濃度的指示。類似地，各狹槽、毛細(xì)管或軌道等也可包括至少一個(gè)酶或其他成分或試劑。通過這種方式，當(dāng)試樣沿狹槽等行進(jìn)或流動(dòng)(被吸)時(shí)，它被顯現(xiàn)并在無需手工處理步驟的情況下與其他成分或試劑混合。對本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見地是，結(jié)果是，不同的試劑量或試劑組合或者條件可施加到試樣的不同等分試樣，進(jìn)而導(dǎo)致各測試區(qū)域內(nèi)的待執(zhí)行和測量的不同測定。優(yōu)選地，至少一個(gè)疏水發(fā)光體是染料，更具體地是熒光染料，并且更具體是，是一種在其結(jié)合到分析物諸如脂成分時(shí)具有獨(dú)一無二的熒光的染料。人類血清血蛋白(HSA)是具有大約30_50mg/ml濃度的血清的主要成分。已知HSA 具有至少兩個(gè)結(jié)合位置，其能結(jié)合不同的配合基。第一種類型在本文是指“疏水域”，而第二種類型的域在本文是指“藥物結(jié)合域”。這些域?qū)Ρ绢I(lǐng)域技術(shù)人員是已知的，并且在自然結(jié)構(gòu)生物學(xué)(卷5，827頁(1998))上彼此不同。該論文獎(jiǎng)疏水區(qū)域看成脂肪酸可結(jié)合的區(qū)域，而藥物結(jié)合區(qū)域能將與HSA相關(guān)的多個(gè)藥物結(jié)合。本發(fā)明人已經(jīng)確定疏水發(fā)光體可結(jié)合到HSA的疏水結(jié)合位置/域，并可在結(jié)合到 HSA時(shí)發(fā)出熒光。因而，本發(fā)明人相信，額外的熒光可致使實(shí)質(zhì)的背景信號，潛在地扭曲測量，并導(dǎo)致在確定脂蛋白濃度中存在誤差。因此，當(dāng)含水試樣為血試樣時(shí)，疏水發(fā)光體可結(jié)合的HSA疏水結(jié)合位置被堵塞了。 因而，在分析試樣之前，配合基結(jié)合抑制劑被優(yōu)選地添加。配合基結(jié)合抑制劑可能是疏水的。抑制劑可以是兩性分子的。配合基結(jié)合抑制劑可包括脂肪酸或它的功能性衍生，以及其他疏水分子。脂肪酸的適宜衍生物的示例，其可阻塞HSA的疏水結(jié)合位置，可包括脂肪酸、脂、?；u、羧基酐或氨基化合物等。優(yōu)選的脂肪酸衍生物是脂肪酸酯。脂肪酸或其衍生物可包括C1-C20脂肪酸或其衍生物。優(yōu)選地是，脂肪酸或其衍生物可包括C3-C18脂肪酸或其衍生物，更具體地，C5-C14脂肪酸或其衍生物，甚至更優(yōu)選地， C7-C9脂肪酸或其衍生物。尤其優(yōu)選地是，配合基結(jié)合抑制劑包括辛酸(C8)或其衍生物，例如辛酸。優(yōu)選地，配合基結(jié)合抑制劑被添加為堿金屬辛酸，優(yōu)選地第I堿金屬基辛酸，例如辛酸鈉或辛酸鉀。優(yōu)選地，大約10_400mM之間的配合基結(jié)合抑制劑在分析之前被添加到試樣中，更優(yōu)選地，大約20-200mM之間的，大約30_80mM之間的抑制劑被添加。尤其優(yōu)選地是，大約 50mM的抑制劑被添加。因而，在方法的優(yōu)選實(shí)施例中，大約50mM的辛酸鈉可在分析之前添加到試樣中。用于HSA的藥物結(jié)合域的配合基包括藥物分子，比如甲狀腺素、布洛芬、安定、甾類激素和它們的衍生物(藥物)、血紅素、膽紅素、親脂性前體藥物、華法令阻凝劑、香豆素基藥物、麻醉學(xué)、安定、布洛芬和抗抑郁劑(例如，黃嘌呤)、安息香酸或它們的衍生物(例如，三氯苯甲酸或三碘苯甲酸)。可備選地，HSA結(jié)合域可通過使用HSA析取物質(zhì)，例如抗-HSA抗體被阻塞或被移除。在特殊的實(shí)施例中，含水試樣被用作“純的”，就是說，在使用之前未稀釋試樣。在其他實(shí)施例中，含水試樣可在使用之前被稀釋。例如，當(dāng)含水試樣源自血液時(shí)， 試樣的稀釋可以是期望的，例如在執(zhí)行測定前使用1 80稀釋。優(yōu)選地，稀釋劑是磷酸緩沖液鹽(PBS)，并包括至少一個(gè)配合基結(jié)合抑制劑。在特殊實(shí)施例中，稀釋劑包括兩個(gè)配合基結(jié)合抑制劑，一個(gè)用于疏水結(jié)合位置，并且另一個(gè)用于藥物結(jié)合位置。優(yōu)選地，配合基結(jié)合抑制劑包括安息香酸和辛酸?？蓚溥x地，試樣可以PBS稀釋，并且至少一個(gè)配合基結(jié)合抑制劑與兩性分子聚合物結(jié)合。因而，配合基結(jié)合抑制劑在其被橫向流動(dòng)，例如沿管、毛細(xì)管、 狹槽或軌道行進(jìn)時(shí)被添加并與含水試樣混合。在優(yōu)選方法中，多個(gè)、至少兩個(gè)或三個(gè)熒光測定在類似的條件下并行執(zhí)行。根據(jù)本發(fā)明的第三方面，提供一種用于增強(qiáng)橫向流體流動(dòng)的過程，其包括涂覆表面，沿該表面，流體可隨兩性分子聚合物流動(dòng)。優(yōu)選地，在本發(fā)明的過程中，表面被管、毛細(xì)管、狹槽、凹坑、膜或類似物所限定。因而，兩性分子聚合物可用來涂覆例如管、毛細(xì)管、狹槽、凹坎、膜或類似物的內(nèi)部所限定的表面。顯而易見地是，兩性分子聚合物也可用作用于“標(biāo)準(zhǔn)”橫向流測定所用膜的涂層，以加速和提供對流體流的更大控制。疏水或兩性分子聚合物可被涂覆、壓印和/或噴灑到表面上，例如形成“軌道”和/或?qū)樱ㄟ^壓印方法，比如通過油墨噴射或泡沫噴射印制或其他應(yīng)用方法。在過程的特殊實(shí)施例中，兩性分子聚合物具有膜的形式。在其他實(shí)施例中，膜可磨碎成微粒材料，或可被形成例如小粒、小珠、小球、微米球、納米球或微微米球。至少一個(gè)兩性分子聚合物可具有小粒、小珠、小球、微米球、納米球或微微米球的形式。根據(jù)本發(fā)明的第四方面，提供fefqimt的使用，以穩(wěn)定蛋白質(zhì)，尤其是酶。驚奇地是，已然發(fā)現(xiàn)乙烯吡咯烷酮和二甲氨基異丁烯酸鹽的共聚物(被 International Speciality Products 以商標(biāo)名 Gafquat(RTM)賣出)是適宜的酶穩(wěn)定試劑。Gafquat (CAS注冊號=53633-54-8 ；7732-18-5)是一系列的水溶性共聚物比如 Polyquaternium-Il的名字。在許多頭發(fā)產(chǎn)品(比如摩絲、凝膠體、頭發(fā)定型劑)和特殊效應(yīng)化妝品中，它是主要的活性成分，但是以前從未用作穩(wěn)定酶或蛋白質(zhì)。用于穩(wěn)定fefqimt 的優(yōu)選酶包括膽固醇酯酶、膽固醇氧化酶和辣根過氧化物酶，盡管(iafquat可用作各種酶的穩(wěn)定劑。根據(jù)本發(fā)明的第五方面，提供測定中的本發(fā)明的設(shè)備、方法或過程的使用。本文所公開的所有特征(包括任何附加權(quán)利要求、摘要和附圖)和/或已公開的任何方法或過程的所有步驟，可以任何組合與上述方面中的任何一個(gè)組合，除非這種特征和/或步驟的至少一些是互斥的組合。


本發(fā)明將在以下圖形的幫助下進(jìn)行描述，盡管不限于圖形。應(yīng)當(dāng)了解的是，圖形僅用作演示目的，其中圖1示出了適于治療點(diǎn)使用的測試盒的實(shí)施例的部件；圖2和圖3圖示了測定設(shè)備的另一個(gè)實(shí)施例；
圖4圖示了限定應(yīng)用區(qū)域、流體流動(dòng)通道、檢測區(qū)域和阻止-流動(dòng)交叉點(diǎn)的毛細(xì)狹槽的實(shí)施例；圖5圖示了 PEG分子量對垂直流速的影響。誤差條表示+/-1標(biāo)準(zhǔn)偏差(未涂覆的毛細(xì)管和標(biāo)準(zhǔn)偏差的一階在零分子量處示出)。
具體實(shí)施例方式參考附圖中的圖1，測定設(shè)備(1)通常包括具有底座Oa)和蓋Ob)的外殼，該蓋 (2b)防止應(yīng)用區(qū)域(3)、流動(dòng)通道( 和測試區(qū)域(4)免受污染或損壞。設(shè)備具有脊形柄部(7)，其使外科大夫或臨床醫(yī)生把持設(shè)備。應(yīng)用區(qū)域C3)上的外殼包括凹坎(3a)，在這種情況下，具有斜邊以將試樣引導(dǎo)到應(yīng)用區(qū)域。窗口 Ga)提供到測試區(qū)域的入口，以允許確定測定的結(jié)果。在外殼QaiP 2b)內(nèi)是疏水塑料(6)的帶，其用來充當(dāng)PEG流動(dòng)通道的支撐件。 流動(dòng)通道( 被印制到支撐件，在此實(shí)施例中，該支撐件從應(yīng)用區(qū)域C3)導(dǎo)入四個(gè)測試區(qū)域 (4).過濾器( 被粘合到支撐件，以過濾來自含水試樣的微粒。在使用中，外科大夫或臨床醫(yī)生將含水試樣應(yīng)用到應(yīng)用區(qū)域(3)。來自含水試樣的流體沿流動(dòng)通道被橫向流引向并通過過濾器(8)。已涂覆有PEG的過濾器阻止試樣中的任何單元沿流動(dòng)通道進(jìn)一步行進(jìn)。一旦流體接近測試區(qū)域，形成在流動(dòng)通道內(nèi)的交叉點(diǎn)將試樣分成四個(gè)等份。當(dāng)在脂輪廓的制備中使用時(shí)，當(dāng)?shù)谝坏确衷嚇友亓鲃?dòng)通道5(a)行進(jìn)時(shí)，在流動(dòng)通道內(nèi)呈現(xiàn)并混合有與PEG結(jié)合的K37染色劑。第二等分試樣沿流動(dòng)通道5(b)行進(jìn)并混合有第二染色劑Nile Red。第三等分試樣沿流動(dòng)通道5 (c)行進(jìn)并當(dāng)如此時(shí)，它混合有三個(gè)干燥的酶、膽固醇酯酶、膽固醇氧化酶和辣根過氧化物酶以及染色劑Amplex Red。試樣的三個(gè)等分試樣中的每一個(gè)，與各自的染色劑混合，并流入并收集在測試區(qū)域內(nèi)。第四測試區(qū)域(5d)用作控制以測量背景熒光。設(shè)備被加載到閱讀器，其依次激勵(lì)測試區(qū)域中的每一個(gè)，并測量任意的隨后熒光輻射。閱讀器內(nèi)的處理芯片計(jì)算試樣內(nèi)的分析物(比如總的膽固醇、甘油三酸酯、HDL和其他的脂成分)的濃度，并將結(jié)果顯示在IXD顯示屏上。圖2和圖3示出了根據(jù)本發(fā)明的測定設(shè)備的另一個(gè)實(shí)施例，該測定設(shè)備例如可用作確定血液中的脂蛋白水平。在此實(shí)施例中，測定設(shè)備包括第一支撐表面(1)。支撐表面通常包括或由不透明材料組成，例如引入一定量色素(比如黑煙末)的塑料材料。在此情況下，支撐表面由可兼容熒光的、發(fā)光的或光的測量的醫(yī)療級聚合物形成。循環(huán)的石蠟聚合物具有極佳的機(jī)械特性、低自身熒光和高UV發(fā)射。適宜的聚合物包括循環(huán)石蠟共聚物，比如Topas COC(CAS號 26007-43-2)，Zeonor COP，Zeonex COP 或 Udel 聚砜(CAS 號 25135-51-7)。在此實(shí)施例中，支撐件由包括黑煙末的TOPAS COC制成。黑煙末的使用具有增加的優(yōu)點(diǎn)例如在激光焊期間，減少了功率需求，增加了設(shè)備制造的容易性，并保護(hù)處于反應(yīng)室內(nèi)的熱易損部件。黑煙末的使用也可具有與熱耗散/絕熱相關(guān)的好處。本實(shí)施例的支撐表面被鑄模，但可通過任何標(biāo)準(zhǔn)的鑄?；颥F(xiàn)有技術(shù)中已知的技巧形成。盡管它通常是平的，在凹下-凸起的此實(shí)施例(其在此情況下形成周向布置在應(yīng)用區(qū)域(4)周圍的四個(gè)毛細(xì)狹槽(3))中，其包括輪廓區(qū)域。在此種情況下，四個(gè)狹槽中的每一個(gè)以大約90度的角度彼此均等地間隔開。鑄模支撐表面形成應(yīng)用區(qū)域(4)、流動(dòng)通道( 和檢測區(qū)域(6)。最遠(yuǎn)離應(yīng)用區(qū)域的流體流動(dòng)通道(5)的各個(gè)末端的特征在于一個(gè)或多個(gè)毛細(xì)狹槽壁形成逐步變細(xì)的圓錐。該圓錐增加寬度和/或深度，并且通過延伸，毛細(xì)流動(dòng)狹槽的橫截面面積形成阻止流動(dòng)交叉點(diǎn)(7)，其防止進(jìn)一步的毛細(xì)流體流動(dòng)。此處，狹槽形成球根狀末端，但可采取多種其他形式。限定應(yīng)用區(qū)域、流體流動(dòng)通道、檢測區(qū)域和阻止-流動(dòng)交叉點(diǎn)的毛細(xì)狹槽的結(jié)構(gòu)在圖4得到更精細(xì)地顯示。對本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見地是，狹槽可以任何格式布置，或具有不同的外形以適合特殊的測定。例如，借助非限制性實(shí)施例， 狹槽可以是卵形的或“淚珠”形的、梯形、三角形、柱形的或管狀的。進(jìn)一步的示例在圖4中示出。對于醫(yī)院、實(shí)驗(yàn)室或大面積使用，可以設(shè)想10-20，20-40，40-60或50-100毛細(xì)狹槽可布置在測定設(shè)備上。圖4圖示了阻止流動(dòng)交叉點(diǎn)的進(jìn)一步的實(shí)施例。在此圖形中，流體流動(dòng)通道(5) 在變窄或收縮以形成朝遠(yuǎn)端縮減的橫截面面積(1 的流體流動(dòng)通道的截面之前，其沿整個(gè)長度維持一致的橫截面面積。流體流動(dòng)通道的截面繼而鄰接到室(14)并與室(14)流體連通。室被低壁或柵欄(1 分隔成區(qū)域一在此情況下，分隔成兩個(gè)部分(15a)和(1 )。 在使用中，流體進(jìn)入室(14)填充部分(lfe)。壁(15)，或更精確地作用在壁的區(qū)域內(nèi)的試樣流體上的毛細(xì)作用力阻止流體流入室的第二部分(1 )。在其他實(shí)施例中，壁被凸起部 (16)所替代。再者，作用在凸起部(16)的區(qū)域內(nèi)的試樣流體上的毛細(xì)作用力阻止毛細(xì)作用力防止流體填充整個(gè)室。本領(lǐng)域的技術(shù)人員將意識到，室(14)和壁(1 或凸起部(16)的配置(例如，尺寸、外形和高度)可采用多種形式，包括不同的幾何外形，比如圓形、梯形等。 置于室(15b)的第二部分或遠(yuǎn)端區(qū)域臨近的通風(fēng)口允許空氣從室內(nèi)運(yùn)動(dòng)到大氣中，以平衡設(shè)備的流體流動(dòng)通道內(nèi)的壓力。支撐表面也包括多個(gè)校準(zhǔn)柱(8)，以使支撐表面與第二表面-蓋元件( 對齊。蓋元件O)也有適宜的醫(yī)療級聚合物(比如上述的那些)形成。在此示例中，循環(huán)石蠟共聚物(Topas C0C)，043號沈007-43-2被再次使用，當(dāng)在此情況下不具有黑煙末。 結(jié)果，蓋元件為任意地清澈/透明-至少對于測定閱讀器的激勵(lì)/輻射波長是如此。蓋元件( 也被鑄模并通常是平的，其包括多個(gè)孔。該蓋元件可與支撐元件安裝， 可選擇地包括置于它們中間的墊圈或襯底?？?9)與應(yīng)用區(qū)域?qū)R，并允許用戶將流體試樣施加到應(yīng)用區(qū)域。另外一系列的更小的孔起通風(fēng)開口(10)的作用。在所示的實(shí)施例中，校準(zhǔn)洞(11)通過容納校準(zhǔn)柱(8)將蓋元件相對于支撐元件定向。在備選實(shí)施例中，孔和校準(zhǔn)洞設(shè)定在支撐元件之內(nèi)，蓋元件簡單地履行蓋的角色。校準(zhǔn)單元可借助相應(yīng)的校準(zhǔn)洞或槽被簡單地提起元件。支撐件和蓋元件可附連或粘結(jié)在一起，例如通過機(jī)械構(gòu)件，比如通過螺釘、鉚釘、螺桿或凸臺?？蓚溥x地，支撐件和蓋件可通過摩擦保持在一起。在其他實(shí)施例中，蓋和支撐件被粘結(jié)在一起，例如通過使用膠水、溶劑、膠帶和類似物。在此情況下，蓋和支撐元件通過使用熱合激光焊接結(jié)合在一起。支撐和蓋元件中的一個(gè)或兩個(gè)可包括識別設(shè)備，以提供唯一標(biāo)識符和/或提供用于測定閱讀器的構(gòu)件，例如以監(jiān)測測定設(shè)備已被用的次數(shù)或者試樣被應(yīng)用的時(shí)候，以便合適的測定時(shí)間經(jīng)過。這種識別設(shè)備也可包含指令或數(shù)據(jù)，比如校準(zhǔn)或數(shù)量控制數(shù)據(jù)。識別設(shè)備可采用不同的形式，包括但不限于文本、盲文、數(shù)字?jǐn)?shù)據(jù)、線性條形碼、2D條形碼、RFID 標(biāo)簽和類似物。過濾器(12)被牢固地保持在支撐件和蓋件之間，并鄰接應(yīng)用區(qū)域(4)并與應(yīng)用區(qū)域、孔(9)和流體流動(dòng)通道流體連通。在使用中，未稀釋或稀釋的含水試樣經(jīng)由孔(9)被直接應(yīng)用到過濾器。試樣中的流體移動(dòng)通過過濾器，并當(dāng)如此時(shí)，大的顆粒通過被動(dòng)過濾被移除。就整個(gè)血液而言，這種微粒包括紅血球。結(jié)果，減少了這種大微粒的背景干涉。當(dāng)隨血液使用時(shí)，例如整個(gè)靜脈血液，過濾器可進(jìn)一步包括HSA析取設(shè)備，其包括前述的將HSA從試樣中移除的抗-HSA抗體，再次減少背景。血液可通過手指刺孔或就嬰兒而言腳跟刺孔獲得。這是一種開小傷口的方法，例如在指尖，其產(chǎn)生不超過幾滴的血液(小于50 μ 1，比如從大約10 μ 1到20 μ 1)。在血滴已經(jīng)形成之后，血滴可直接應(yīng)用到測定設(shè)備的應(yīng)用區(qū)域或通過吸液管吸取，然后被應(yīng)用。獲得血樣的其他方法在現(xiàn)有技術(shù)中是已知的。 使用例如手指刺孔所獲得的血的能力直接表現(xiàn)了相對于現(xiàn)有技術(shù)已知的測定的明顯優(yōu)勢?？蓚溥x地，測定設(shè)備可用來測試從血漿中獲得的試樣，其中，在情況a中，可執(zhí)行試樣的1 80稀釋。一般地，所使用的稀釋劑是磷酸緩沖鹽(PBS)，并且它可包括至少一個(gè)配合基結(jié)合抑制劑。稀釋劑也可包括兩個(gè)配合基結(jié)合抑制劑，一個(gè)用于疏水結(jié)合位置，一個(gè)用于藥物結(jié)合位置。流體經(jīng)由毛細(xì)作用從應(yīng)用區(qū)域(4)行進(jìn)到流體流動(dòng)通道(5)，應(yīng)用區(qū)域與該流體流動(dòng)通道流體連通。當(dāng)它以干的形式通過液體氫氧化物試劑時(shí)，比如熒光染料和酶，與它們混合。因而，通過毛細(xì)作用或橫向流動(dòng)移動(dòng)的試樣不需要施加外力，比如泵，以移動(dòng)含水試樣。兩性分子或非電離聚合物提高了毛細(xì)流動(dòng)和試劑混合的效率。術(shù)語“干燥的形式”的使用指以一定形式保持的成分，其中，它們通常大體上免于或耗盡于液體或濕氣。就是說，它們不被溶解，直到通過測定自身的性能重建為止，而非在測定程序和自測定程序隔離之前重建。因而，含水試樣自身重建干的試劑，從而消除對單獨(dú)的重建緩沖和步驟的需要。如上所述，兩性分子或非電離聚合物的使用有助于干試劑與含水試樣的混合。在使用酶或其他試劑的場合，尤其是以干的形式使用它們的場合，優(yōu)選地是，這種酶或其他試劑被穩(wěn)定。在本發(fā)明的上下文中，“穩(wěn)定試劑”是一種相對于例如儲存穩(wěn)定性、熱穩(wěn)定性等已經(jīng)改善穩(wěn)定性的試劑。因而，在特殊實(shí)施例中，所用的試劑包括穩(wěn)定劑。特定的穩(wěn)定方法在國際專利申請?zhí)朩090/005182和W091/014773中得以公開，其內(nèi)容通過參考引入到本文中。其他適宜的穩(wěn)定試劑包括乙烯吡咯烷酮和二甲氨基異丁烯酸鹽的共聚物(例如，被 International Speciality Products 以商標(biāo)名 Gafquat (RTM)賣出)。Gafquat (CAS 注冊號53633-54-8 ；7732-18-5)是一系列的水溶性共聚物比如聚季銨_11的名字。當(dāng)流體前向移動(dòng)時(shí)，等體積的空氣通過通風(fēng)口被替換處，以穩(wěn)定設(shè)備內(nèi)的壓力。一旦流體到達(dá)阻止-流動(dòng)交叉點(diǎn)，表面張力防止進(jìn)一步的毛細(xì)作用流動(dòng)。在此階段，設(shè)備可置于適宜的測定閱讀器之內(nèi)，并且，分析物比如膽固醇和血清的水平被測量。測定設(shè)備的外殼通常適于使設(shè)備布置成與測定閱讀器功能性連通。例如，測定設(shè)備可被插入、放置或連接到閱讀器，并且閱讀器可包括入塢構(gòu)件，比如槽，或者校準(zhǔn)構(gòu)件以使測定設(shè)備能夠被是當(dāng)?shù)夭迦?、放置或連接。在此實(shí)施例中，測定設(shè)備在蓋元件內(nèi)具有“V” 形切口，其便于測定設(shè)備與閱讀器的對準(zhǔn)。一般地，本發(fā)明的測定設(shè)備是一次性的，而閱讀器通常是可重用的。測定設(shè)備可用于不同的測定過程或反應(yīng)中，比如包括膽固醇、脂蛋白或甘油三酸酯測定的免疫測定和熒光測定。免疫測定是一種測量含水試樣例如血清或尿中的物質(zhì)濃度的生化測試。該測定利用抗體對抗原的特定結(jié)合利用抗體對抗原的反應(yīng)。優(yōu)選地，單克隆抗體因?yàn)槠浣Y(jié)合到特定分子的一個(gè)位置而被使用，以提供具體而精確的測試?？乖蚩贵w的存在性都可被測量，例如當(dāng)檢測傳染性時(shí)，可測量抗體的存在對病原體的影響。可備選地，當(dāng)測量比如激素和類似物的生化分子時(shí)，激素生物分子可起抗原作用。被測量的水性流體的響應(yīng)可與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較，比如在圖形上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過不同的方法，比如對抗原或抗體加標(biāo)簽， 可以獲得對抗體或抗原數(shù)量的檢測。通過非限制性示例，標(biāo)簽可包括酶(EIA或ELISA)，放射性同位元素比如1-125，磁標(biāo)簽或發(fā)光標(biāo)簽或熒光標(biāo)簽。有利地是，本發(fā)明的設(shè)備依賴毛細(xì)流動(dòng)，以通過兩性分子或非電離聚合物的幫助傳送低體積試樣的流體，因而不需要使用移動(dòng)部件。從而，設(shè)備克服了現(xiàn)有技術(shù)中所碰到的尺寸、經(jīng)濟(jì)、制造和機(jī)械故障的問題。用于本發(fā)明的測定設(shè)備的測定閱讀器可適于接收兩個(gè)或多個(gè)測定設(shè)備，例如從多個(gè)病人或從單個(gè)病人的含水試樣的多個(gè)測試。這種閱讀器可包括兩個(gè)(或更多)可與測定設(shè)備的檢測區(qū)域?qū)R的激勵(lì)構(gòu)件。“激勵(lì)構(gòu)件”可操作地用來激勵(lì)檢測中的試樣，例如，使得其發(fā)光。設(shè)備也可包括至少一個(gè)檢測構(gòu)件，該檢測構(gòu)件可操作地用來檢測例如檢測區(qū)的試樣所發(fā)出的熒光。一般地，激勵(lì)構(gòu)件包括可操作地用來以大約400納米-600納米照亮試樣的照明源。因此，光源是優(yōu)選地能在大約400納米-600納米之間照亮試樣。照明源可包括一個(gè)或多個(gè)燈泡，或者一個(gè)或多個(gè)LED，或者諸如一個(gè)或多個(gè)激光的其他源。激勵(lì)波長可通過使用至少一個(gè)干擾濾波器而變化。激勵(lì)構(gòu)件也可包括極化構(gòu)件，其可操作地用來極化照明源所產(chǎn)生的光。激勵(lì)構(gòu)件可進(jìn)一步包括適于將光聚焦到試樣上的聚焦構(gòu)件。該聚焦構(gòu)件可包括棱鏡或諸如纖維-光燈絲或光學(xué)燈膜(3M)的光導(dǎo)。檢測構(gòu)件可包括光電二極管、CCD或光電倍增管或光學(xué)傳感器(其優(yōu)選地是黃色-紅色敏感的)。試樣所散發(fā)的熒光可在一定范圍內(nèi)被檢測，包括大約440納米-650納米，這取決于所用的染料。檢測構(gòu)件應(yīng)能檢測以大約490nm、大約495nm、大約570nm、大約 600nm和大約eiOnm所發(fā)射的熒光。熒光可被第二棱鏡聚集，并可穿過偏振器。散射的激勵(lì)光可被截止濾波器或帶通濾波器移除。為了測量熒光亮度，來自光電二極管的電流或來自光電倍增管的計(jì)數(shù)速率可通過安培計(jì)、電壓計(jì)或定率模塊讀出。其他構(gòu)件對本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的。閱讀器也可包括激勵(lì)校正系統(tǒng)，使得光源中的波動(dòng)可得到解決。該設(shè)備可包括至少一個(gè)熒光標(biāo)準(zhǔn)，其可在確定分析物的濃度之前用于校準(zhǔn)。該標(biāo)準(zhǔn)可以是內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)。在特殊實(shí)施例中，測定閱讀器可配置成同時(shí)檢測和測量一個(gè)或多個(gè)測定中的熒光強(qiáng)度，或者反過來，當(dāng)測定設(shè)備進(jìn)入閱讀器時(shí)或在進(jìn)入閱讀器之后一段時(shí)間檢測和測量一個(gè)或多個(gè)測定中的熒光強(qiáng)度。
閱讀器也可包括適于基于所檢測的熒光確定試樣中的分析物的濃度的處理設(shè)備。閱讀器可進(jìn)一步包括用于顯示從試樣中確定的測量結(jié)果的顯示設(shè)備，優(yōu)選地作為讀出。例如，顯示設(shè)備可包括LCD屏，或可依賴計(jì)算機(jī)，以用于供電和/或計(jì)算和/或顯示。 以其最基本的形式，顯示設(shè)備可以是顯示指示或測量的簡單窗口。通常，測定閱讀器是可攜帶的，并且有利地，測定設(shè)備和閱讀器可用來簡單地、快速地和同時(shí)地執(zhí)行測定，以確定來自含水試樣(例如生物流體)的分析物的存在/缺乏或濃度。例如，知曉膽固醇、脂蛋白和HDL濃度的臨床醫(yī)生可使用設(shè)備以確定有效的治療過程。另外，測定設(shè)備和閱讀器是可攜帶的，并且可被GP使用，或者被攜帶家訪的護(hù)士使用， 或甚至作為家庭使用的測試包。在特殊實(shí)施例中，處理設(shè)備適于基于熒光分析直接確定一個(gè)或多個(gè)分析物，比如試樣中的膽固醇、甘油三酸酯、皿1^、0)^0^、101^的濃度?？蓚溥x地，處理設(shè)備可適于基于總的脂蛋白、膽固醇和HDL計(jì)算試樣中的LDL、VLDL、IDL的濃度。在膽固醇和液體分析中對設(shè)備的使用下述的示例描述了使用本發(fā)明的測定設(shè)備測量含水生物試樣中的脂蛋白的方法。在此示例中，流體流通通道涂覆有兩性分子聚合物PEG以加速流體傳送。對于油脂壓型，兩性分子聚合物也結(jié)合有熒光染料，比如Amplex Red、K37或Nile Red和/或其他試劑比如酶，放置或印制在流體流動(dòng)通道或檢測區(qū)域內(nèi)。熒光染料和/或其他試劑可印制成一個(gè)或多個(gè)微微升小滴陣列。適宜地，這種陣列可包括沿第一軸線大約150到4500個(gè)小滴，沿第二軸線大約25到100個(gè)小滴。陣列的微粒尺寸包括每平方毫米大約3400X65小滴，大約3000X65小滴、大約1500X65小滴、大約1900X65小滴、600X65小滴、400X65小滴、大約400X65小滴。對本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見地是，盡管這些小滴密度變化對測定性能僅有很少的效果，同樣顯而易見地是，相反地，這種密度也可被優(yōu)化以改善測定性能。例如，小滴也可應(yīng)用成納米-或飛升小滴，應(yīng)用為重疊陣列、將一個(gè)(或多個(gè))施加在另一個(gè)之上、應(yīng)用為離散單個(gè)陣列、間隔開或應(yīng)用為若干這列的塊以形成更大尺寸的陣列(即添加劑)。例如，陣列尺寸也可相對于特殊試劑或染料濃度被優(yōu)化。當(dāng)“印制”熒光染料的小滴可以大約0. ImM到3. OmM，更適宜地，在大約0. 3到 2. 5mM,以及更適宜地，在大約0. 5到2. OmM之間的濃度施加到設(shè)備?？蓚溥x地，當(dāng)設(shè)備用于稀釋血試樣時(shí)，熒光染料的濃度可在大約0. 8到1. 2mM之間。有用的的熒光染料濃度是 1. OmM，并且對于未稀釋血試樣，有用的濃度是大約2. OmM。染料在使用之前隨后被干燥。
在使用中，試樣流體與兩性分子聚合物進(jìn)行水化合，并且稀釋熒光染料，然后可結(jié)合到試樣中的脂蛋白。當(dāng)如此結(jié)合時(shí)，染料在適當(dāng)?shù)募?lì)下發(fā)熒光。試樣中的總的脂蛋白濃度可使用熒光分析確定。該方法通常包括(i)以至少一個(gè)染料或發(fā)光體和至少一個(gè)兩性分子聚合物接觸含水生物試樣，其中，該至少一個(gè)染料或發(fā)光體結(jié)合到含水生物試樣中的至少一個(gè)脂蛋白，并且當(dāng)結(jié)合時(shí)，在適當(dāng)?shù)募?lì)下發(fā)熒光；(ii)以大約400納米-620納米之間的激勵(lì)波長激勵(lì)來自步驟1的產(chǎn)品；(iii)緊接著步驟(ii)，以大約400納米-650納米之間的波長測量熒光輻射。
該方法可用來從含水生物試樣制備脂輪廓。術(shù)語“總的脂蛋白”的使用是意味著至少VLDL、HDL、LDL、IDL和乳糜微滴的聚集濃度，換句話說，試樣中的甘油三酸酯和總的膽固醇的濃度的和。術(shù)語“總的膽固醇”的使用是意味著試樣中的膽固醇的總濃度。術(shù)語“脂輪廓”的使用是意味著試樣中的脂成分(即總的脂蛋白和總的膽固醇和甘油三酸酯)的濃度和相對濃度。存在于血液或血清試樣中的大多數(shù)脂被結(jié)合到脂蛋白。在臨床試驗(yàn)室執(zhí)行的傳統(tǒng)測試不測量總的脂蛋白。因而，傳統(tǒng)地，需要首先確定，然后將膽固醇和膽固醇酯酶酯的濃度添加到甘油三酸酯，以確定總的脂蛋白濃度。臨床實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的甘油三酸酯的傳統(tǒng)測量經(jīng)受相當(dāng)大的誤差，因?yàn)樗蕾囋谘褐凶匀谎h(huán)的甘油的測量。有利地，由于脂蛋白微粒的數(shù)目(體積)被直接測量以確定總的脂蛋白的濃度(其等于總的脂濃度)，根據(jù)本發(fā)明的膽固醇測定不經(jīng)受這種誤差。因而，諸如試樣中的循環(huán)甘油引起的甘油三酸酯濃度中的誤差被排除。在他們之前的國際專利申請PCT/GB2005/004757(以W02006/061646公開)，本發(fā)明人基于K37的使用開發(fā)了簡化的測定，以測量生物大分子中的脂蛋白，這在臨床醫(yī)生希望快速和有效地得到脂輪廓時(shí)是尤其有用的。為了使用K37熒光測量確定血試樣中的總的脂蛋白(即，HDL、LDL、IDL和VLDL)濃度，本發(fā)明人意識到對于給定的總脂蛋白濃度，通過 K37結(jié)合到不同脂蛋白類的熒光響應(yīng)可被制作得大體上一樣，就是說，不管總的脂蛋白濃度 (即試樣中的HDL LDL IDL VLDL的比率)的成分。因而，優(yōu)選地是，K37以這種方式使用，使得在脂蛋白分子的濃度范圍內(nèi)，熒光強(qiáng)度響應(yīng)是大體上線性的，這在臨床測試中將碰到的試樣中是可期望的。不希望被任何假設(shè)所約束，可以相信地是，來自熒光染料的熒光強(qiáng)度依賴于其對試樣中的特殊脂蛋白分子(HDL、LDL、IDL或VLDL)的親和力。熒光的量子產(chǎn)額取決于脂蛋白分子配合物內(nèi)的環(huán)境，并且能量所引起的熒光熄火程度在緊密打包的探針分子之間傳遞。因而，在他們先前的申請中，發(fā)明人認(rèn)為有可能選擇適宜的探針物質(zhì)濃度以及激勵(lì)和輻射波長(可用來通過簡單的熒光測量獲得精確的總脂蛋白測量)。發(fā)明人進(jìn)一步認(rèn)識到， 探針的這種濃度將優(yōu)選地平衡HDL中的K37的更高量子產(chǎn)額，相比較VLDL、LDL而言，K37 具有對HDL的更高親合力，因而，HDL內(nèi)的更高程度的熄滅以在整個(gè)所有脂蛋白微粒上產(chǎn)生恒定的熒光信號響應(yīng)。本發(fā)明人已實(shí)施了一系列的實(shí)驗(yàn)，以研究對于各脂蛋白微粒類型(HDL、LDL、 VLDL)，在將在真實(shí)的血漿臨床試樣中將會(huì)碰到的整個(gè)脂蛋白濃度的范圍內(nèi)，是否可能在探針物質(zhì)K37和脂蛋白濃度之間獲得線性和相等的關(guān)系。出乎他們意外地是，他們發(fā)現(xiàn)具有限定的K37濃度以及特殊的激勵(lì)和輻射波長，在該波長處，在K37的熒光和脂蛋白濃度之間具有線性關(guān)系。因而，使用他們先前專利申請(PCT/GB2005/004757)的方法學(xué)，熟練的人員可識別其他適宜的染料，這也說明了這種與脂蛋白濃度的關(guān)系。在膽固醇測定中使用酶是有利的，因而膽固醇通常在酯化狀態(tài)中發(fā)現(xiàn)，從而優(yōu)選地，膽固醇酯酶用來將膽固醇酯酶酯水解成自由膽固醇。自由膽固醇然后可通過膽固醇氧化酶的作用轉(zhuǎn)換成膽留-4-烯-3-—酮，在過程中產(chǎn)生過氧化氫。有利地是，Amplex Red和過氧化氫通過辣根過氧化物酶被轉(zhuǎn)化成Resorufin和水。Resorufin然后可以大約563納米的吸收極值和587納米的峰值輻射波長檢測熒光化合物。總的膽固醇含量可在大約485納米處通過激勵(lì)試樣被測量，并且在大約600納米處測量合成熒光。當(dāng)酶被使用時(shí)，其可設(shè)定在某一水平許多次數(shù)，以超過測量例如酶Km所用的比率。相比較現(xiàn)有技術(shù)所用的比率，這種比率可能是極度地高，大約在1 1000左右。驚奇地是，設(shè)備的表面能中的差別組合，加上干的穩(wěn)定酶和任意的兩性分子聚合物的使用，使試樣和使用的試劑小得多的數(shù)量成為可能。不要希望被理論所束縛，可以相信地是，兩個(gè)至少局部正對的表面的表面能中的差別在含水試樣的層流中產(chǎn)生圓周運(yùn)動(dòng)，這導(dǎo)致更有效的混合。結(jié)果，這增加了效率，更大水平的酶可用于更小的反應(yīng)體積，這比現(xiàn)有技術(shù)的方法可導(dǎo)致更有效的、更快的反應(yīng)用于方法的第二步驟可包括(ii)以大約400納米-520納米之間的激勵(lì)波長激勵(lì)來自步驟(i)的產(chǎn)品。激勵(lì)波長可在大約420納米-480納米或在大約440納米-470納米之間。所使用的激勵(lì)波長將取決于用于測定中的具體熒光染料。對于Amplexred，激勵(lì)波長是大約480納米，對于K37，激勵(lì)波長是大約440納米，對于Nile Red，激勵(lì)波長是大約580納米。^^^HH/vif^ :A third step ofthe method comprises (iii)以大約490-650納米的波長測量熒光輻射?？蓚溥x地，熒光輻射可以用大約520納米-620納米之間的波長測量。在大約540 納米或更高的輻射波長，用于確定總脂蛋白濃度(即，HDL、IDL、LDL和VLDL的濃度，也指乳糜微滴的濃度，如果乳糜微滴存在的話)的更精確讀數(shù)可被觀察到。然而，被測量的優(yōu)選熒光輻射波長將取決于測定中所使用的熒光染料。對于Amplex red，熒光在大約600納米處測量，對于K37，熒光在大約495納米處測量，對于Nile Red，熒光在大約610納米處測量。應(yīng)當(dāng)了解的是，對于各個(gè)具體染料，激勵(lì)和輻射波長無需再最優(yōu)的波長處測量。波長可被選擇以給出最好的分離或性能，此時(shí)，染料要么組合使用或并行使用，例如當(dāng)在簡單的測定設(shè)備中同時(shí)執(zhí)行測定時(shí)。將顯而易見地是，步驟(ii)和(iii)，激勵(lì)和檢測，也可大體上同時(shí)地執(zhí)行。另外，甘油三酸酯的濃度可通過從總的脂蛋白濃度減去總的膽固醇濃度得到。因而，試樣的更詳細(xì)的脂輪廓被產(chǎn)生，其包括總的脂蛋白濃度、總的膽固醇濃度以及甘油三酸酯濃度，這對于臨床醫(yī)生是有用的。發(fā)明人先前已發(fā)現(xiàn)，多個(gè)染料將結(jié)合到脂蛋白，并展示不同的依賴于特殊脂蛋白結(jié)合的熒光響應(yīng)。這些染料的熒光測量使得有可能區(qū)分試樣中存在的脂蛋白類型。這可通過將脂蛋白混合物中的一種類型的脂蛋白所引起的增強(qiáng)或減少熒光與其他脂蛋白(在特殊特性化的脂蛋白存在時(shí))所期望的熒光相比較而完成，因?yàn)榭蓮男Ｕ€和總的脂蛋白含量的已知值確定。例如，熒光染料，NiIe Red，在HDL中顯示了比其他脂蛋白，比如LDL和 VLDL明顯高得多的熒光。因而，其他熒光染料(例如，Nile Red, K37或其他任何顯示特殊性的脂蛋白探針，或者向特殊脂蛋白增強(qiáng)或減少的熒光)可用來區(qū)別試樣中的脂蛋白的類或子類。因此，本發(fā)明的方法使能夠通過使用熒光分析確定試樣中的特殊類或子類脂蛋白的濃度。一般地，這包括通過使用第二和/或第三熒光染料將染料的熒光響應(yīng)轉(zhuǎn)入脂蛋白而確定特殊類或子類脂蛋白的濃度。經(jīng)由示例，為了通過使用Nile Red確定試樣中的HDL濃度，計(jì)算由因?yàn)镠DL的存在而從Nile Red獲得的過量熒光造成。首先，總的脂蛋白濃度(測量“A”)通過具有脂蛋白濃度(如步驟(i)所確定)的K37熒光的線性相關(guān)被測量。第二，Nile Red熒光然后在不同的濃度下校正LDL(和/或當(dāng)熒光到濃度響應(yīng)必須大體上一致)，以獲得具有斜率“X” 和截距“Y”的校準(zhǔn)曲線。熟練的技術(shù)人員將知道如何準(zhǔn)備LDL(和/或VLDL)的濃度范圍， 并且確定各濃度的各自熒光。校準(zhǔn)曲線可因一系列的HDL濃度和LDL的恒定濃度構(gòu)成，以給出斜率“Z”。從K37 測量“A”和未知試樣“B”的過量Nile Red熒光知道總的脂蛋白濃度。未知試樣中的HDL“C” 濃度可通過如下的方程確定C = (B-(AX-Y))/Z。應(yīng)當(dāng)了解的是，在實(shí)際中，預(yù)準(zhǔn)備或標(biāo)準(zhǔn)校正曲線可被使用。此外，本發(fā)明的測定設(shè)備或隨此設(shè)備使用的開發(fā)用來產(chǎn)生脂輪廓的測定閱讀器可包括國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)和/或具有允許脂蛋白的自動(dòng)計(jì)算而無需用戶干預(yù)的處理器件。因此，應(yīng)當(dāng)了解的是，熒光測量可用來確定HDL、VLDL(通過計(jì)算)、LDL(通過計(jì)算)、總的脂蛋白、甘油三酸酯(通過計(jì)算)以及總的膽固醇的濃度。所有這些參數(shù)可通過相似范圍內(nèi)的波長激勵(lì)和測量熒光被同時(shí)地、并行地確定。如上所述，這是相對于傳統(tǒng)測定相當(dāng)大的改善，傳統(tǒng)的測定必須單獨(dú)實(shí)施，并經(jīng)常在專門的實(shí)驗(yàn)室中，從而導(dǎo)致結(jié)果生成的延時(shí)。另外，多個(gè)脂參數(shù)可被同時(shí)測量的事實(shí)相當(dāng)程度地簡化了需要執(zhí)行測量的儀器設(shè)備。所產(chǎn)生的脂輪廓包括結(jié)合到試樣中的LDL的膽固醇的濃度的確定。尤其有利地是，知道LDL膽固醇濃度是高度導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣化的。因此，該方法提供至少三個(gè)、優(yōu)選地四個(gè)或五個(gè)、或試樣中的脂成分的更多參數(shù)的多個(gè)讀出。此外，有可能從甘油三酸酯濃度計(jì)算 /估計(jì)膽固醇-VLDL-膽固醇的濃度，因?yàn)橥ǔ＜俣ù蠖鄶?shù)的甘油三酸酯在VLDL中實(shí)施， 并且VLDL的膽固醇成分是20%。這在幫助臨床醫(yī)生決定適宜的治療過程是尤其有利的。示例本發(fā)明將參考以下示例進(jìn)行描述，示例描述了上述的本發(fā)明實(shí)施例的完整說明。示例1總的膽固醇測定測定使用能將膽固醇或膽固醇酯酶酯的一個(gè)分子轉(zhuǎn)化成過氧化氫(H2O2)的分子的三元酶系統(tǒng)。所產(chǎn)生的過氧化氫然后用來氧化染料AmplexRed (非-熒光)，以產(chǎn)生高度熒光產(chǎn)品Resorufin。酶到塑料上的穩(wěn)定總的膽固醇測定使用下述的酶和染料膽固醇酯酶(3.1. 1. 13)膽固醇氧化酶(1. 1.3.6)辣根過氧化物酶(1. 11. 1.7)Amplex Red :10_ 乙?；?_3，7_ 二羥基吩嗪通過使用Gafquat作為穩(wěn)定劑將酶穩(wěn)定到塑料上。該三種酶被添加到PH為7. 0 的0.01M磷酸鹽緩沖液中。各酶的最終活性在200U/ml的緩沖液中測量。溶液然后與 Gafquat (高度正充電的聚合物)以1 1配方稀釋，然后5ul的這種合成溶液被沉積到塑料表面，并在硅膠存在的情況下在30°C下干燥2小時(shí)。該過程導(dǎo)致干的酶生物-表面，并具有各種酶的0. 5U的沉積。測定稈序-使用1/80試樣稀釋
兩種方法被采用a)膽固醇試樣(血漿)與試樣中的干燥酶和AmplexRed的反應(yīng)； b)膽固醇試樣與干燥酶和干燥的穩(wěn)定Amplex Red染料的反應(yīng)；(a)膽固醇試樣(血漿)與溶液中的干燥酶和Amplex Red的反應(yīng)。稀釋緩沖液A :4. 16mM Amplex Red，1，OmM 膽汁酸，pH 為 7. 2 的 0. 2% 的 Triton X-100Dulbecco磷酸緩沖鹽。被測定的試樣首先將1份稀釋成80份的稀釋緩沖液A，然后50ul的這種稀釋試樣被用來重建和激活試樣測定室中的干燥三-酶混合物(如上所述，之前被穩(wěn)定化的)。通過在480納米處激勵(lì)試樣并在600納米處測量合成的熒光測量膽固醇含量。膽固醇濃度通過對40秒后的穩(wěn)定狀態(tài)熒光或Vmax (培養(yǎng)基產(chǎn)生的最大速率)的測量便可直接地確定。各個(gè)評價(jià)通過參考測定標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)而進(jìn)行。(b)膽固醇試樣(血漿)與干燥酶和干Amplex Red的反應(yīng)。稀釋緩沖液B IOmM膽汁酸，pH為7.2的0.2%的Triton X-lOODulbecco磷酸緩沖鹽。該程序類似于上述的過程。然而，在此過程中，Amplex Red染料在流動(dòng)通道中與三-酶混合物一起被干燥。首先，測定室的一個(gè)限定區(qū)域被涂覆有如上所描述的0. 5U的膽固醇酯酶(3. 1. 1. 13),0. 5U膽固醇氧化酶(1. 1.3. 6)和0. 5U辣根過氧化物酶(1. 11. 1.7)。 測定室中的第二單獨(dú)區(qū)域然后被涂覆有10 μ 1的Amplex Red/PEG2000溶液，并在硅膠存在的情況下在30°C下干燥2小時(shí)。染料涂覆溶液由5. 35mg/ml的Amplex Red、5% w/v的 PEG2000/ 二甲亞砜(DMSO)。被測定的試樣首先將1份稀釋成80份的稀釋緩沖液B，然后50ul的這種稀釋試樣被用來重建和激活試樣測定室中的干燥Amplex Red染料和三-酶混合物。通過在480納米處激勵(lì)試樣并在600納米處測量合成的熒光測量膽固醇含量。膽固醇濃度再次通過對40秒后的Vmax(培養(yǎng)基產(chǎn)生的最大速率)或穩(wěn)定狀態(tài)熒光或的測量便可直接地確定。各個(gè)評價(jià)通過參考測定標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)而進(jìn)行。兩種測定被確定能決定2-llmM的臨床相關(guān)的膽固醇水平。測定稈序-使用未稀釋試樣純生物試樣通過將試樣應(yīng)用到位于可消費(fèi)設(shè)備內(nèi)的充滿抗-HSA抗體的硼硅酸鹽過濾器而被測定，該過濾器用來過濾試樣并將試樣導(dǎo)入適當(dāng)?shù)?00 μ m深讀取或檢測區(qū)域。 讀取區(qū)域首先預(yù)先涂覆有每平方毫米400X65的微微-升的酶試劑小滴，然后是每平方毫米每平方毫米600X65的微微-升的染料試劑小滴以及每平方毫米450X65的微微-升的抑制劑小滴，這便于試樣快速流入讀取區(qū)域。試樣在480納米(10納米的帶寬)處的隨后激勵(lì)產(chǎn)生可通過600納米(10納米的帶寬)過濾器檢測的熒光，以允許試樣的總的膽固醇含量通過參考適宜的標(biāo)準(zhǔn)測量而被確定。酶試劑膽固醇酯酶、膽固醇氧化酶和辣根過氧化物酶，各個(gè)試劑以每ml 200單位的比例溶解在Gafquat穩(wěn)定混合物中。清潔劑溶液1.63克的酸、10克的聚乙二醇2000、800μ 1的Triton X-100和 253. 3ul的馬來酸二乙酯被溶解在二甲基甲酰胺(DMF)，以及最終的體積調(diào)整到40ml。染料試劑5毫克的Ampliflu Red固體添加到480 μ 1的清潔劑溶液。抑制劑試劑260毫克的疊氮化鈉以及912. 92毫克的磷酸氫二鉀三水合物被溶解在水中，并且最終的體積被調(diào)整到40ml。示例2-總的脂測定K37染料被溶解在DMF中，直到LOmM的最終濃度。下一步，5%w/vPEG 2000被溶入染料溶液中，并且60納升的合成溶液被沉積到塑料表面上，并在真空下1小時(shí)在黑暗中的室溫下移除溶劑而被干燥。測定稈序-使用稀釋試樣待測定的試樣(血漿)首先將1份稀釋成80份的容納50mM辛酸鈉的PH為7. 4 的磷酸緩沖鹽液。5μ 1的稀釋血漿試樣被應(yīng)用到與水自然結(jié)合的干燥染料中?？偟闹瑵舛韧ㄟ^在 440納米(10納米的帶寬)處激勵(lì)試樣并穿過495納米過濾器(10納米帶寬)測量合成的熒光而被測量。總的脂含量通過參考已知標(biāo)準(zhǔn)而經(jīng)驗(yàn)地確定。測定稈序-使用未稀釋試樣純生物試樣通過將試樣應(yīng)用到位于可消費(fèi)設(shè)備內(nèi)的充滿抗-HSA抗體的硼硅酸鹽過濾器而被測定，該過濾器用來過濾試樣并將試樣導(dǎo)入適當(dāng)?shù)?00 μ m深讀取區(qū)域。讀取區(qū)域預(yù)先涂覆有每平方毫米3000X65個(gè)的DMF內(nèi)的2mM K37/5% (w/v)PEG2000的微微-升小滴，這便于試樣快速流入讀取區(qū)域，并且將染料自然劃分成容納在試樣中的脂蛋白。試樣在440納米(10納米的帶寬)處的隨后激勵(lì)產(chǎn)生可通過600納米(10納米的帶寬)過濾器檢測的熒光，以允許試樣的總的脂含量通過參考適宜的標(biāo)準(zhǔn)測量而被確定。示例3-HDL膽固醇測定Nile Red被溶解在DMF中，直到0.5mM的最終濃度。下一步，5%w/vPEG 2000被溶入染料溶液中，并且60納升的合成溶液被沉積到塑料表面上，并在真空下1小時(shí)在黑暗中的室溫下移除溶劑而被干燥。測定稈序-使用稀釋試樣待測定的試樣(血漿)首先將1份稀釋成80份的容納50mM辛酸鈉的PH為7. 4 的磷酸緩沖鹽液。5μ 1的稀釋血漿試樣被應(yīng)用到與水自然結(jié)合的干燥染料中。HDL膽固醇濃度通過在580納米(10納米的帶寬)處激勵(lì)試樣并通過測量穿過610納米過濾器(10納米帶寬) 的熒光而被測量?？偟闹客ㄟ^參考已知標(biāo)準(zhǔn)而經(jīng)驗(yàn)地確定。HDL膽固醇濃度通過使用主說明書描述的算法而計(jì)算。等效的測定也可通過使用整個(gè)未稀釋血液而執(zhí)行。測定稈序-使用未稀釋試樣純生物試樣通過將試樣應(yīng)用到位于可消費(fèi)設(shè)備內(nèi)的充滿抗-HSA抗體的硼硅酸鹽過濾器而被測定，該過濾器用來過濾試樣并將試樣導(dǎo)入適當(dāng)?shù)?00 μ m深讀取區(qū)域。讀取區(qū)域預(yù)先涂覆有每平方毫米；3400X65個(gè)的DMF內(nèi)的0. 5mM Nile Red/5% (w/v)PEG20002mM 的微微-升小滴，這便于試樣快速流入讀取區(qū)域，并且將染料自然劃分成容納在試樣中的脂蛋白。試樣在580納米(10納米的帶寬)處的隨后激勵(lì)產(chǎn)生可通過610納米(10納米的帶寬)過濾器檢測的熒光，以允許試樣的HDL-c含量通過參考適宜的標(biāo)準(zhǔn)測量而被確定。操作來自示例1、2或3中所描述的測試的數(shù)據(jù)提供如下描述總的膽固醇的測量-即測試(1)總的脂濃度的測量-即測試O)
HDL膽固醇的測量-即測試(3)甘油三酸酯的計(jì)算值-即測試(2)減去測試(1)VLDL的計(jì)算值-即甘油三酸酯的值/2. 2LDL的計(jì)算值-即由Friedwald方程確定示例4-使用PEG來增強(qiáng)近水平毛細(xì)管的橫向流體流動(dòng)100毫米長并具有2毫米、1毫米和0. 5毫米的內(nèi)直徑的玻璃毛細(xì)管或者是未處理的、去污處理的或涂覆有PEG。去污處理的毛細(xì)管通過以Virkon和1TritonX 1005%的溶液沖洗并隨后干燥而準(zhǔn)備。PEG處理的毛細(xì)管通過5% (w/v)的氯仿PEG流過毛細(xì)管而準(zhǔn)備， 其允許過量物排出后接下來進(jìn)行干燥。處理的和未處理的毛細(xì)管被固定在近水平的位置(大約10°的向上流動(dòng)角)，并且毛細(xì)管的尖端沉浸在水中。測量水在各毛細(xì)管的行進(jìn)距離或行進(jìn)速率未處理毛細(xì)管2mm-在 30 秒內(nèi)達(dá)到 20mmImm-在 15 秒內(nèi)達(dá)到 90mm0. 5mm-在18秒內(nèi)到達(dá)管的末端(IOOmm)去污處理的毛細(xì)管2mm-在 20 秒內(nèi)達(dá)到 20mmImm-在 12 秒內(nèi)達(dá)到 90mm0. 5mm-在15秒內(nèi)到達(dá)管的末端(IOOmm)PEG-涂覆的毛細(xì)管
2mm-在 20 秒內(nèi)達(dá)到 80mmImm-在1-2秒內(nèi)達(dá)到末端0. 5mm-在1-2秒內(nèi)到達(dá)管的末端(IOOmm)這些數(shù)據(jù)說明，在PEG-涂覆的毛細(xì)管內(nèi)的毛細(xì)流體流動(dòng)是去污處理的毛細(xì)管內(nèi)的流動(dòng)的大約四倍，是未處理的毛細(xì)管內(nèi)的流動(dòng)的大約6倍。通過含硅劑(二甲基氯硅烷)的處理并在120°C烘焙，可使毛細(xì)管變得疏水性。水不進(jìn)入這些毛細(xì)管的內(nèi)腔。以PEG(如上述的)涂覆疏水毛細(xì)管相比較未硅烷基化的PEG 涂覆毛細(xì)管而言存儲了流體流動(dòng)條件。在一些實(shí)驗(yàn)中，涂覆PEG的表面是不連續(xù)的，流體在 PEG涂層的間斷處停止流動(dòng)。示例5-使用PEG來增強(qiáng)垂直毛細(xì)管的流體流動(dòng)100毫米長并具有2毫米、1毫米和0. 5毫米的內(nèi)直徑的玻璃毛細(xì)管作上述的處理。毛細(xì)管被固定在垂直位置，并且毛細(xì)管的尖端沉浸在水中。測量水在垂直毛細(xì)管內(nèi)所能達(dá)到的高度未處理管2mm 直徑-9mmImm 直徑-22mm0.5mm 直徑-51mm去污處理管2mm 直徑-IOmm
Imm 直徑-22mm0. 5mm 直徑-53mmPEG-涂覆的管2mm 直徑-IlmmImm 直徑-25mm0. 5mm 直徑-54mm水根本不進(jìn)入疏水硅烷基化的毛細(xì)管。以PEG涂覆硅烷基化毛細(xì)管，毛細(xì)管流動(dòng)高度被存儲，并類似那些未硅烷基化PEG-涂覆的毛細(xì)管。在海平面的理論最大高度可使用方程h = 2 YCos θ/pgr得到，其中，h是高度 (m) ；Y是表面張力；θ是接觸角；ρ是密度；g因重心引起的加速度；并且r是管的半徑，其中在 2mm ID 是 14mm在 ImmM 是 ^mm在 0. 5mm ID 是 56mm示例6-傳遞的再現(xiàn)以及長期穩(wěn)定疏水分子(即染料)/兩性分子聚合物混合物的傳遞再現(xiàn)和長期穩(wěn)定性按照如下方式測量具有2000Da分子量的PEG在二甲基甲酰胺中以5% w/v的濃度被溶解成疏水染料 (Nile Red或者K37)的溶液。PEG/染料膜通過將25 μ 1的PEG/染料溶液沉積在5毫升玻璃瓶的DMF中而制成。溶液遍布在小瓶的底部，然后置于真空室內(nèi)1小時(shí)以蒸發(fā)溶劑。傳遞重現(xiàn)通過將添加到脂蛋白溶液的DMF中的染料的熒光強(qiáng)度與相等的脂蛋白溶液(其中，染料/PEG膜被重新溶解的)的熒光強(qiáng)度進(jìn)行比較而被測量。通過從脂蛋白溶液的10個(gè)染料/PEG膜獲得熒光強(qiáng)度的變化系數(shù)(CV)計(jì)算重現(xiàn)。通過將膜放置成長期存儲并測量這些膜的熒光強(qiáng)度而評估摁釘性，此時(shí)在改變存儲時(shí)間后重新溶解在脂蛋白溶液中。膜在條件范圍內(nèi)被存儲在黑暗中不具有干燥劑的空氣中、存在硅膠的空氣中、以及存在硅膠的真空中。膜在這些條件下在20°C和37°C的溫度下存儲。用于溶解在DMF或PEG膜中的脂蛋白溶液中的染料的熒光強(qiáng)度被確定
權(quán)利要求
1.一種用于檢測駐留在含水試樣中的分析物的存在性或數(shù)量的測定設(shè)備，該設(shè)備包括至少一個(gè)供含水試樣穿過的流動(dòng)通道，其特征在于所述至少一個(gè)流動(dòng)通道包括至少一個(gè)兩性分子聚合物，其中，在使用中，沿流動(dòng)通道的流體通路大于單獨(dú)的毛細(xì)血管作用所預(yù)期的通路。
2.如權(quán)利要求1所述的設(shè)備，其特征在于，所述流動(dòng)通道涂覆有至少一個(gè)兩性分子聚合物。
3.如權(quán)利要求1所述的設(shè)備，其特征在于，所述流動(dòng)通道包括至少一個(gè)兩性分子聚合物。
4.如權(quán)利要求1或2所述的設(shè)備，其特征在于，所述流體通道通過至少一個(gè)兩性分子聚合物形成。
5.如權(quán)利要求4所述的設(shè)備，其特征在于，包括至少一個(gè)兩性分子聚合物的至少一個(gè)流動(dòng)通道通過印制和/或噴灑形成。
6.如權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的設(shè)備，其特征在于，所述至少一個(gè)兩性分子聚合物具有薄膜的形式。
7.如權(quán)利要求3所述的設(shè)備，其特征在于，所述至少一個(gè)兩性分子聚合物具有細(xì)粒、小珠、小球、或微米球體、或納米球體或微微米球體的形式。
8.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的設(shè)備，其特征在于，所述至少一個(gè)流動(dòng)通道包括至少一個(gè)探針、指示器或試劑。
9.如權(quán)利要求8所述的設(shè)備，其特征在于，所述至少一個(gè)流動(dòng)通道包括至少一個(gè)探針、 指示器或試劑。
10.如權(quán)利要求10所述的設(shè)備，其特征在于，所述至少一個(gè)探針、指示器或試劑直接層壓在所述至少一個(gè)流動(dòng)通道之上或之下。
11.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的設(shè)備，進(jìn)一步包括至少一個(gè)用于含水試樣應(yīng)用的應(yīng)用區(qū)域。
12.如權(quán)利要求12所述的設(shè)備，進(jìn)一步包括至少一個(gè)測試區(qū)域，其中，含水試樣的部分和探針、指示器或試劑之間的反應(yīng)結(jié)果和/或過程被確定。
13.如權(quán)利要求13所述的設(shè)備，其特征在于，所述至少一個(gè)流體通道與所述至少一個(gè)應(yīng)用區(qū)域和所述至少一個(gè)測試區(qū)域流體連通。
14.如權(quán)利要求13或14所述的設(shè)備，其特征在于，反應(yīng)的結(jié)果和/或過程借助光學(xué)設(shè)備確定。
15.如權(quán)利要求13或14所述的設(shè)備，其特征在于，反應(yīng)的結(jié)果和/或過程通過視覺觀察確定。
16.如權(quán)利要求13或14或15所述的設(shè)備，其特征在于，反應(yīng)的結(jié)果和/或過程借助熒光確定。
17.如權(quán)利要求17所述的設(shè)備，其特征在于，所述設(shè)備包括至少兩個(gè)單獨(dú)的部件。
18.如權(quán)利要求18所述的設(shè)備，其特征在于，所述至少兩個(gè)單獨(dú)的部件是閱讀器和測試盒。
19.如權(quán)利要求19所述的設(shè)備，其特征在于，所述閱讀器包括激勵(lì)器件和檢測器件。
20.如權(quán)利要求20所述的設(shè)備，其特征在于，所述激勵(lì)器件可操作地用來激勵(lì)試樣，使得試樣發(fā)熒光，并且檢測器件可操作地用來檢測試樣所發(fā)出的熒光。
21.如權(quán)利要求19或20或21所述的設(shè)備，其特征在于，所述測試盒包括至少一個(gè)流動(dòng)通道。
22.如權(quán)利要求19至22所述的設(shè)備，其特征在于，所述測試盒是一次性的。
23.如權(quán)利要求19至23所述的設(shè)備，其特征在于，所述閱讀器是可重用的。
24.如權(quán)利要求15至M中任一項(xiàng)所述的設(shè)備，其特征在于，所述反應(yīng)是免疫測定。
25.如權(quán)利要求25所述的設(shè)備，其特征在于，所述反應(yīng)是ELISA。
26.如權(quán)利要求15至M中任一項(xiàng)所述的設(shè)備，其特征在于，所述反應(yīng)是熒光測定。
27.如權(quán)利要求27所述的設(shè)備，其特征在于，所述熒光測定是膽固醇測定。
28.如權(quán)利要求27所述的設(shè)備，其特征在于，所述測定是脂蛋白測定。
29.如權(quán)利要求27所述的設(shè)備，其特征在于，所述測定是甘油三酸酯測定。
30.一種用于檢測駐留在含水試樣中的分析物的存在性或數(shù)量的測定設(shè)備，其包括(i)至少一個(gè)適于將含水試樣應(yīng)用到設(shè)備的應(yīng)用區(qū)域；( )至少一個(gè)探針、指示器或試劑，其中，在使用時(shí)，所述至少一個(gè)探針、指示器或試劑能與駐留在含水試樣中的分析物起反應(yīng)；(iii)至少一個(gè)測試區(qū)域，在使用中，分析物和至少一個(gè)探針、指示器或試劑之間的反應(yīng)結(jié)果和/或過程可被確定；(iv)與所述至少一個(gè)應(yīng)用區(qū)域和所述至少一個(gè)測試區(qū)域流體連通的至少一個(gè)流動(dòng)通道；其特征在于所述至少一個(gè)流動(dòng)通道包括至少一個(gè)兩性分子聚合物，并且其中，在使用中，沿所述至少一個(gè)流動(dòng)通道的流體通路大于單獨(dú)的毛細(xì)管所用所期望的通路。
31.如權(quán)利要求31所述的設(shè)備，其包括至少三個(gè)測試區(qū)域和至少三個(gè)流動(dòng)通道，其特征在于，第一流動(dòng)通道與應(yīng)用區(qū)域和第一測試區(qū)域流體連通，第二流動(dòng)通道與應(yīng)用區(qū)域和第二測試區(qū)域流體連通，并且第三流動(dòng)通道與應(yīng)用區(qū)域和第三測試區(qū)域流體連通。
32.如權(quán)利要求31或32所述的設(shè)備，其特征在于，所述至少一個(gè)探針、指示器或試劑可選自下列成分組成的組AmpleX Red、K37、Nile Red、膽固醇酯酶、膽固醇氧化酶或者辣根過氧化物酶。
33.如權(quán)利要求33所述的設(shè)備，其特征在于，第一流動(dòng)通道包括AmplexRed，第二流動(dòng)通道包括K37，并且第三流動(dòng)通道包括Nile Red。
34.如權(quán)利要求33所述的設(shè)備，其特征在于，第一測試區(qū)域包括AmplexRed，第二測試區(qū)域包括K37，第三測試區(qū)域可包括Nile Red。
35.如權(quán)利要求33所述的設(shè)備，其特征在于，第一流動(dòng)通道進(jìn)一步包括膽固醇酯酶、膽固醇氧化酶和辣根過氧化物酶。
36.如權(quán)利要求33和34所述的設(shè)備，其特征在于，第一測試區(qū)域進(jìn)一步包括膽固醇酯酶、膽固醇氧化酶和辣根過氧化物酶。
37.如權(quán)利要求33所述的設(shè)備，其特征在于，應(yīng)用區(qū)域包括至少一個(gè)探針、指示器或試劑，其選自下列成分組成的組AmpleX Red、K37、Nile Red、膽固醇酯酶、膽固醇氧化酶或辣根過氧化物酶。
38.如權(quán)利要求8至38中任一項(xiàng)所述的設(shè)備，其特征在于，所述至少一個(gè)探針、指示器或試劑是干的形式。
39.如權(quán)利要求39所述的設(shè)備，其特征在于，所述至少一個(gè)探針、指示器或試劑包括穩(wěn)定劑。
40.如權(quán)利要求40所述的設(shè)備，其特征在于，所述穩(wěn)定劑是Gafquat。
41.一種測量含水生物試樣中的分析物的方法，其包括(i)將含水生物試樣與至少一個(gè)疏水發(fā)光體和至少一個(gè)兩性分子聚合物的組合物接觸，其中，至少一個(gè)疏水發(fā)光體結(jié)合到含水生物試樣中的至少一個(gè)分析物，并且此時(shí)在適當(dāng)?shù)募?lì)下結(jié)合后的發(fā)光體發(fā)熒光；( )以大約400納米-520納米之間的激勵(lì)波長激勵(lì)來自步驟(i)的產(chǎn)品；(iii)在步驟(ii)后，以大約490納米-650納米之間的波長測量熒光輻射。
42.如權(quán)利要求42所述的方法，其特征在于，含水生物試樣在與至少一個(gè)疏水發(fā)光體接觸之前與至少一個(gè)兩性分子聚合物接觸。
43.如權(quán)利要求42所述的方法，其特征在于，含水生物試樣在其與至少一個(gè)疏水發(fā)光體接觸時(shí)大體上同時(shí)與至少一個(gè)兩性分子聚合物接觸。
44.一種用于增強(qiáng)橫向流體流動(dòng)的過程，其包括涂覆表面，沿該表面，流體可隨兩性分子聚合物流動(dòng)。
45.如權(quán)利要求45所述的過程，表面被管、毛細(xì)管、狹槽、凹坑、膜或類似物所限定。
46.使用feifquat以用于酶的穩(wěn)定。
47.在測定中使用如權(quán)利要求1-41中任一項(xiàng)所述的設(shè)備。
全文摘要
本發(fā)明涉及使用兩性分子聚合物來提高測定設(shè)備上的橫向流動(dòng)和試劑混合。更具體地，本發(fā)明涉及在包括設(shè)備的測定方法中使用兩性分子聚合物，以確定血清或血漿中的脂質(zhì)濃度。
文檔編號B01L3/00GK102202790SQ200980136120
公開日2011年9月28日 申請日期2009年7月15日 優(yōu)先權(quán)日2008年7月15日
發(fā)明者加雷斯·瓊斯, 勞拉·加西亞, 安東尼·尼古拉斯, 戴維·克拉克, 馬克·哈德森 申請人:L3技術(shù)有限公司