專利名稱：樣品制備裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
技術(shù)領(lǐng)域為生物化學(xué)領(lǐng)域中的樣品制備裝置，尤其是使用用于樣品過濾、分離和 純化的多孔性單成體(monolith)過濾件的樣品制備裝置。
背景技術(shù)：
樣品中鹽、去垢劑和其它污染物的存在會不利于樣品的生物化學(xué)分析。在生物化 學(xué)領(lǐng)域中，已研制出許多樣品制備裝置，以從包含目標(biāo)分析物的液體樣品中去除溶劑、溶質(zhì) 和其它分子/物質(zhì)。例如，美國專利第6，048，457號和第6，200, 474號描述一種移液吸頭，該吸頭中帶 有用于純化蛋白質(zhì)和肽的層析介質(zhì)。所述層析介質(zhì)通常由帶有C4、C18或強(qiáng)陽離子性樹脂 如聚砜、聚醚砜、聚四氟乙烯、醋酸纖維素、聚苯乙烯、苯乙烯-丙烯腈共聚物和PVDF等的功 能化玻璃珠組成。美國專利第6，537，502號還描述一種樣品純化移液吸頭，該樣品純化移 液吸頭在移液吸頭的內(nèi)表面上具有用于樣品分離和純化的固體基體涂層。該固體基體由例 如聚四氟乙烯、聚砜、聚醚砜、聚苯乙烯、苯乙烯-丙烯腈共聚物和聚偏氟乙烯等聚合物組 成。然而，仍需要易于使用并可以以低成本生產(chǎn)的樣品制備裝置。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明公開了一種樣品制備裝置。該樣品制備裝置包括限定第一開口和第二開口 之間的通路的外殼；和占據(jù)所述通路的一區(qū)段的樣品過濾件。所述樣品過濾件包含可與核 酸特異性結(jié)合的單成體吸附劑。本發(fā)明還公開了包含涂覆有可與目標(biāo)分析物特異性結(jié)合的 捕獲劑的玻璃料(frit)的樣品過濾件，和包含帶有可裂解細(xì)胞膜的浸漬的化學(xué)物質(zhì)的親 水性基質(zhì)的樣品過濾件。本發(fā)明還公開了一種一體式樣品制備筒盒(cartridge)。所述一體式樣品制備筒 盒包括樣品制備裝置和筒盒基座。所述樣品制備裝置包括限定第一開口和第二開口之間的 通路的外殼和占據(jù)所述通路的一區(qū)段的樣品過濾件，所述樣品過濾件包含可與目標(biāo)分析物 特異性結(jié)合的吸附劑。所述筒盒基座包括經(jīng)構(gòu)造與所述樣品制備裝置界面接合的第一端 口、經(jīng)構(gòu)造與液體輸送裝置界面接合的第二端口和連接所述第一端口和第二端口的第一通 道。本發(fā)明還公開了一種樣品純化系統(tǒng)。所述樣品純化系統(tǒng)包括樣品制備裝置、筒盒 基座和液體輸送裝置。
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本發(fā)明還公開了從樣品中純化出分析物的方法。所述方法包括將樣品通過樣品裝 備裝置，所述樣品制備裝置包括限定第一開口和第二開口之間的通路的外殼和占據(jù)所述通 路的一區(qū)段的過濾件，其中，樣品過濾件包含可與所述分析物特異性結(jié)合的材料，所述樣品 在通過所述樣品制備裝置的同時通過所述樣品過濾件；和使用洗脫液洗脫結(jié)合于樣品過濾 件的分析物，其中，所述樣品和所述洗脫液通過同一開口進(jìn)出所述外殼。


下文將參照下列附圖進(jìn)行詳細(xì)的說明，其中，相同的附圖標(biāo)記表示相同的元件，附 圖中圖IA至ID是樣品制備裝置的多個實施方式的示意圖。圖2A至2C是一體式樣品制備裝置的一個實施方式的三維圖(圖2A)、頂視圖(圖 2B)和底視圖(圖2C)的示意圖。圖3示出了對從血樣中純化出的炭疽桿菌(Bacillus anthracis)核酸的實時PCR 分析。對照包括未經(jīng)處理的懸浮在水中濃度為IO4CfuAil的炭疽桿菌和NTC (無模板對照)。圖4示出了對從各種化膿鏈球菌(Sti^ptococcus pyogenes)濃度下的樣品中純 化出的化膿鏈球菌核酸的實時PCR分析。對照是未經(jīng)處理的懸浮在水中濃度為104CfU/ml 的化膿鏈球菌樣品和NTC(無模板對照)。圖5示出了對從鼻咽樣品中純化出的炭疽桿菌核酸的實時PCR分析。對照是未經(jīng) 處理的懸浮在水中濃度為104CfU/ml的炭疽桿菌。圖6示出了對從血樣中純化出的委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒核酸的實時PCR分析。對照 是未經(jīng)處理的懸浮在水中濃度為104pfu/ml的委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒和NTC(無模板對照)。 所有樣品測試2次。圖7是示出了 Flow Pro流體處理系統(tǒng)的樣品切換屏的截屏。圖8是示出了 Flow Pro流體處理系統(tǒng)(Global FIA Fox Island, WA)的實時PCR結(jié) 果屏的截屏。對照是未經(jīng)處理的懸浮在水中濃度為104Cfu/ml的鼠疫菌(Yersinia pestis) 和NTC (無模板對照)。
具體實施例方式本說明書應(yīng)結(jié)合附圖來解讀，所述附圖應(yīng)被看作本發(fā)明的整個書面說明的一部 分。為清楚和簡潔目的，圖形不一定按比例繪制，本發(fā)明的某些特征可能以放大的比例顯 示，或者多少以示意的形式顯示。在說明書中，相對性術(shù)語如“前”、“后”、“上”、“下”、“頂”和 “底”及其衍生詞應(yīng)被解釋為是指之后所描述的取向或所討論的圖形中所顯示的方向。這些 相對術(shù)語是為了描述方便，通常不意圖要求特定方向。除非另有說明，否則涉及到附接和偶 聯(lián)等(例如“連接”和“附接”)的術(shù)語是指其中多個結(jié)構(gòu)通過中間結(jié)構(gòu)相互直接或間接固 定或附接的關(guān)系以及可拆卸附接或剛性附接或關(guān)系。在描述本發(fā)明實施方式時，為了清楚起見而采用特定的術(shù)語。然而，本發(fā)明不意圖 限于所選擇的特定術(shù)語。應(yīng)當(dāng)理解的是，每個特定元件包括以類似方式操作達(dá)到類似目的 的所有技術(shù)等同物。本發(fā)明的一個方面涉及樣品制備裝置。在一個實施方式中，所述樣品制備裝置包括限定二個開口之間的樣品通路的外殼；和嵌在所述通路的一區(qū)段的過濾件結(jié)構(gòu)，所述過 濾件結(jié)構(gòu)包括可與核酸特異性結(jié)合的單成體吸附劑。下文描述的實施方式中所用的術(shù)語“單成體吸附劑”或“單成體吸附劑材料”是指 單件形式的具有連續(xù)互連孔結(jié)構(gòu)的多孔性三維吸附劑材料。單成體例如通過將前體鑄造、 燒結(jié)或聚合到理想形狀的模具中來制得。術(shù)語“單成體吸附劑”或“單成體吸附劑材料”是 為了與填充到床構(gòu)造中或嵌入到多孔性基質(zhì)中的單吸附顆粒集合(其中最終產(chǎn)品包含單 吸附劑顆粒)區(qū)別開。術(shù)語“單成體吸附劑”或“單成體吸附劑材料”還意在與吸附纖維或 涂覆有吸附劑的纖維的集合(如濾紙或涂覆有吸附劑的濾紙)相區(qū)分。下文描述的實施方式中所用的術(shù)語“特異性結(jié)合”或“特異性的結(jié)合”是指吸附劑 與分析物(如核酸)的結(jié)合所具有的特異性足以將分析物與樣品的其他組分或污染物相區(qū) 分開。在一個實施方式中，吸附劑/配體復(fù)合體的解離常數(shù)小于約1X10_6M。本領(lǐng)域的普 通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解的是，可以通過結(jié)合和洗脫緩沖液配方控制分析物與吸附劑的結(jié)合和 洗脫的嚴(yán)格性。例如，可以使用KCl或NaCl通過鹽濃度控制核酸的洗脫嚴(yán)格性。核酸通過 其較高的負(fù)電荷而比蛋白質(zhì)更耐洗脫。溫度、PH和溫和去垢劑是可以用于選擇性結(jié)合和洗 脫的其它處理。采用熱塊(heat block)或水浴可以保持結(jié)合和洗脫的溫度一致性。對結(jié) 合緩沖液的操作是優(yōu)選的，這是因為需要評價改進(jìn)型洗脫緩沖液對下游分析器的影響。下文描述的實施方式中所用的術(shù)語“核酸”是指具有任意長度的單獨核酸和核酸 聚合鏈，包括天然存在的或人工合成的DNA和RNA(包括其類似物)或其修飾物，特別是那 些已知天然存在的修飾物。符合本發(fā)明的核酸長度的實例包括但不限于適合于PCR產(chǎn)物 (例如，約50至700個堿基對(bp))和人類基因組DNA(例如，約千堿基對(Kb)至十億堿 基對(Gb))的長度。因此應(yīng)當(dāng)理解的是，術(shù)語“核酸”包括單核酸以及小片段(例如表達(dá)序 列標(biāo)簽或遺傳片段)中的核苷酸段、核苷段(天然的或合成的和及其組合)、以及較大的鏈 (例如基因組材料，包括單個基因甚至是整條染色體)。現(xiàn)在參考圖1A，樣品制備裝置100的一個實施方式包括外殼10和樣品過濾件20。 外殼10限定了第一開口 14和第二開口 16之間的通路12。外殼10的形狀和尺寸沒有特別 的限制。優(yōu)選的外殼構(gòu)造基本為圓筒形，使得在操作過程中流動矢量(flow vector)基本 是直的，從而最小化或避免非圓筒形構(gòu)造可能發(fā)生的稀釋性清洗。在圖IA至ID所示的實 施方式中，外殼10具有移液吸頭(pipette tip)的幾何形狀，即第一開口 14的直徑大于所 述第二開口 16的直徑，第一開口 14在尺寸上與移液管的端部配合。樣品過濾件20緊鄰第 二開口 16設(shè)置，使得樣品通過第二開口 16被帶入到外殼10中以后馬上得到過濾。在一個 實施方式中，樣品過濾件20與第二開口 16鄰接。在另一個實施方式中，樣品過濾件20與 第二開口 16分隔Imm至20mm的距離。在另一個實施方式中，外殼10呈柱形幾何形狀。在一個實施方式中，外殼10具有約0. 1 μ 1至約IOml的容積。在另一個實施方式 中，外殼10具有5μ 1至約5ml的容積。適用于外殼10的材料沒有特別限制，這些材料包 括塑料(如聚乙烯、聚丙烯、聚苯乙烯)、玻璃和不銹鋼。樣品過濾件20由可與核酸特異性結(jié)合的任何多孔性單成體材料制成。所述多孔 性單成體材料的孔隙率取決于用途。一般來說，多孔性單成體材料應(yīng)該具有實現(xiàn)對于具體 用途所需的樣品流速的孔隙率。在一個實施方式中，樣品過濾件20由液體樣品可以通過的精細(xì)多孔性玻璃料制
7成。多孔性玻璃料是始于粉碎珠子在熱壓機(jī)中形成單個的單成體結(jié)構(gòu)的燒結(jié)玻璃，是純化 核酸的優(yōu)異基質(zhì)。玻璃料的均勻結(jié)構(gòu)提供了玻璃料內(nèi)的可預(yù)見的液體流動，并允許洗脫液 在樣品流動時具有類似的流體動力學(xué)。所述可預(yù)見的液體流動也導(dǎo)致了在洗脫過程中的較 高回收。適合于本發(fā)明(包括本文所述的各種實施方式)使用的示例性的玻璃料孔徑為約 2微米至約220微米。在一個實施方式中，玻璃料的孔徑為約2微米至約100微米。在另一 個實施方式中，玻璃料的孔徑為約40微米至約75微米。在另一個實施方式中，玻璃料的孔 徑為約150微米至約200微米。在又一個實施方式中，玻璃料的孔徑為約2微米至約20微 米。對于涉及純化微生物DNA的用途，尺寸為約10微米至約15微米的玻璃料是適合的。在一個實施方式中，玻璃料的厚度為約Imm至約20mm。在另一個實施方式中，玻璃 料的厚度為約2mm至約5mm。在又一個實施方式中，玻璃料的厚度為約2mm至約3mm。在另一個實施方式中，玻璃料經(jīng)化學(xué)處理而使其表面功能化。例如，玻璃料可以用 氨基硅烷衍生化或以ChargeSwitch 技術(shù)(Invitrogen，Carlsbad，CA)處理以產(chǎn)生正電 荷，從而更好地吸附帶負(fù)電荷的核酸。雖然玻璃料是核酸的良好吸附劑，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)認(rèn)識到，玻璃料也可 用于吸附其他類型的分子。例如，玻璃料可以包被有抗體以從樣品中提取出其他目標(biāo)配體。 在一個實施方式中，玻璃料在聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)和環(huán)烯烴共聚物COC中用作為微 生物和毒素的捕獲部分的抗體進(jìn)行衍生化。在此使用的術(shù)語“抗體”取盡可能廣泛的含義， 并可以包括但不限于抗體、重組抗體、遺傳工程抗體、嵌合抗體、單特異性抗體、雙特異性抗 體、多特異性抗體、嵌合抗體、異種抗體、單克隆抗體、多克隆抗體、駱駝化抗體、脫免疫抗體 以及抗獨特型抗體。術(shù)語“抗體”還可以包括但不限于抗體片段，如完整抗體的至少一部 分，例如抗原結(jié)合可變區(qū)?？贵w片段的實例包括Fv、Fab、Fab'、F(ab' )、F(ab' )2、Fv片 段、雙鏈抗體(diabody)、線性抗體、單鏈抗體分子、多特異性抗體和/或抗體的其他抗原結(jié) 合序列。在另一個實施方式中，玻璃料包被有凝集素，該凝集素可結(jié)合見于細(xì)菌衣膜中的糖 類，并可以用來捕獲樣品中的細(xì)菌。在另一個實施方式中，樣品過濾件20由多孔性玻璃單成體、多孔性玻璃陶瓷或多 孔性單成體聚合物制成。多孔性玻璃單成體可以使用美國專利第4810674號和4765818號 (在此通過參考的方式將其引入本文)所述的溶膠凝膠法制備。多孔性玻璃陶瓷可以通過 多孔性玻璃單成體的受控結(jié)晶制備。多孔性單成體聚合物是在過去10年發(fā)展起來的一類新材料。與由非常小的珠子 組成的聚合物不同，單成體是使用簡單的成型工藝制備的聚合物單個連續(xù)件。在一個實施 方式中，外殼10用作多孔性單成體聚合物的模具。簡而言之，外殼10的通路12的一區(qū)段 填充有單體和致孔劑的液體混合物。接著，將具有紫外光非透性的掩模放置在填充區(qū)段上。 掩模具有暴露填充區(qū)段的一小部分的小狹口。最后，利用紫外光通過掩模上微小開口照射 填充區(qū)段的單體/致孔劑的混合物。UV照射觸發(fā)聚合過程，該過程在通路12的填充區(qū)段中 形成固體多孔性單成體材料。在又一個實施方式中，樣品過濾件20由帶有可裂解細(xì)胞膜、使蛋白質(zhì)變性或誘捕 核酸的浸漬化學(xué)物質(zhì)的親水基質(zhì)制成。在一個實施方式中，親水基質(zhì)是FTA 紙(Whatman， Florham Park，NJ)。將生物樣品施加到FTA 紙上，樣品中所含有的細(xì)胞在紙上裂解。將該紙洗滌以除去所有非DNA材料(DNA依然纏結(jié)在紙內(nèi))。然后洗脫DNA以用于后續(xù)的分 析。樣品過濾件20的形狀與通路12緊密配合，以防止樣品在操作過程中繞過過濾件 20旁流(channel)或旁通(bypass)。在一個實施方式中，過濾件20通過機(jī)械方式如卷曲、 壓配和熱收縮外殼10或其一部分而與通路12配合。在另一個實施方式中，過濾件20通過 粘合劑附接到通路12的內(nèi)部。在又一個實施方式中，玻璃料的側(cè)部隨通路12的輪廓而逐 漸變細(xì)(taper)。在圖IA至ID所示的實施方式中，外殼10具有截頭錐形移液吸頭的形狀， 第一開口 14在尺寸上與液體輸送系統(tǒng)(如手動移液器或電子移液設(shè)備)的端部配合。樣 品通過第二開口 16吸起，通過樣品過濾件20，然后保持在外殼10的高于樣品過濾件20的 區(qū)段中。在一個實施方式中，液體輸送系統(tǒng)是電子移液設(shè)備，如電子移液器或自動移液站。在一個實施方式中，樣品過濾件20包括至少包括兩個區(qū)段，即與核酸特異性結(jié)合 的第一區(qū)段22和與另一種目標(biāo)分析物如蛋白質(zhì)特異性結(jié)合的第二區(qū)段24 (圖1B)。在另一 個實施方式中，外殼10含有置于第二開口 16和樣品過濾件20之間的預(yù)過濾件30 (圖1C)。 預(yù)過濾件30具有大于樣品過濾件20的孔徑，并且不與核酸特異性結(jié)合。在又一個實施方 式中，外殼包含鄰近第一開口 14的氣溶膠過濾件40，以防止來自泵吸設(shè)備的污染(圖1D)。在另一個實施方式中，外殼10在樣品過濾件20和氣溶膠過濾件40之間的空間中 還包含多個機(jī)械裂解珠如玻璃珠。通過對整個樣品制備裝置100進(jìn)行渦旋，機(jī)械裂解珠可 用于破壞細(xì)胞和釋放核酸。在該實施方式中，在渦旋過程中第二開口 16可以蓋有蓋帽，以 防止液體從第二開口 16漏失。本發(fā)明的另一個方面涉及一體式樣品制備筒盒?，F(xiàn)在參考圖2A至2C，一體式品 制備筒盒的實施方式200包括基座50和樣品制備裝置100。該基座50包含在頂部表面61 上的第一樣品端口 51和第二樣品端口 52、在底部表面62上的第三樣品端口 53和第四樣品 端口 54、將第一樣品端口 51和第三樣品端口 53連接的第一通道55、將第二樣品端口 52和 第四樣品端口 54連接的第二通道56、和將第一通道55和第二通道56連接的第三通道57。第一樣品端口 51構(gòu)造成收納樣品制備裝置100，使得樣品制備裝置100(不管是柱 形構(gòu)造還是移液吸頭構(gòu)造)能夠容易地插入到第一樣品端口 51中并與基座50形成不漏液 體的密封。在附接到第一樣品端口 51后，樣品制備裝置100就保持豎直位置。樣品可以從第 一開口 14 (即沿著樣品通路12下行)或第二開口 16 (即沿著樣品通道12上行)裝載到樣 品制備裝置100。作為另一種選擇，樣品制備裝置100可以帶有預(yù)裝載樣品而附接到第一樣 品端口 51上。第二樣品端口 52還可以用來將液體導(dǎo)入一體式樣品制備筒盒200中或從一體式 樣品制備筒盒200中取出液體。第二樣品端口 52構(gòu)造成收納液體輸送裝置(如移液器 或自動移液站)的端部26。在一個實施方式中，第二樣品端口 52是包含能夠被移液吸頭 刺穿并且在取出吸頭后密封的密封件58的自密封入口。這種用于移液管的自密封進(jìn)入端 口允許容易地導(dǎo)入樣品而不存在蓋子打開(常常是導(dǎo)致污染的因素)的風(fēng)險。在一個實 施方式中，密封件58是來自Abgene (Epsom, UK)的Multisip 拼合式隔栓(splits印turn plug)。在另一個實施方式中，密封件58是配流閥(port valve)，例如來自Minivalve International (Yellow Springs,OH)鴨嘴閥和圓頂閥。在另一個實施方式中，第一樣品端口 51還含有可容納樣品制備裝置100的自密封裝置，例如圓頂閥或隔件。在另一個實施方式中，第一樣品端口 51和/或第二樣品端口 52可以用螺絲帽或 壓合蓋(press fit cap)密封，以允許導(dǎo)入和取出樣品。該端口也可以用膠帶封條密封，以 防止在自動化加工過程中泄漏。第一通道55、第二通道56、第三個通道57將第一樣品端口 51與第二樣品端口 52 連接，使得核酸純化過程可以在一體式樣品制備筒盒200中完成。第三樣品端口 53和第四 樣品端口 54可以連接到廢物瓶，以收集來自樣品制備裝置100的流通物。一體式樣品制備筒盒200可構(gòu)造成與流體控制系統(tǒng)如Flow Pro流體處理系統(tǒng) (Flow Pro Fluidic Handling System, Global FIA, Fox Island, WA)相容。在一個實施 方式中，第一樣品出口 53和第二樣品出口 54與魯爾激活閥(Luer-activated valve)59配 合。魯爾激活閥59是通常關(guān)閉、只有在插入魯爾式配件(luer-type fitting)時才可以打 開的閥。魯爾激活閥59允許容易地插入流體控制系統(tǒng)，并在樣品制備筒盒200從流體控制 系統(tǒng)取出后防止樣品從樣品制備筒盒200泄漏。在一個實施方式中，一體式樣品制備筒盒 200設(shè)計成可塞進(jìn)流體控制系統(tǒng)而無需緊固螺絲或調(diào)節(jié)螺栓。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，一體式樣品制備筒盒200的總體布局允許其 他樣品導(dǎo)入和洗脫抽取策略。在一個實施方式中，樣品制備筒盒200連接到流體控制系統(tǒng)。 樣品制備裝置100插入第一樣品端口 51。樣品通過第二樣品端口 52引入一體式樣品制備 筒盒200，所述第二樣品端口 52在導(dǎo)入樣品后密閉。離液劑(chaotrophe)如胍通過流體控 制系統(tǒng)經(jīng)第四樣品端口 54導(dǎo)入一體式樣品制備筒盒200，并與一體式樣品制備筒盒200內(nèi) 的樣品混合。然后樣品/離液劑混合物從樣品制備裝置100的第二開口 16被推入樣品制 備裝置100中，通過過濾件20，進(jìn)入外殼10的高于樣品過濾件20的區(qū)段。然后樣品/離液 劑混合物從一體式樣品制備筒盒200經(jīng)第二樣品端口 54取出并作為廢物棄掉。通過流體 控制系統(tǒng)經(jīng)第三樣品端口 53將洗滌緩沖液導(dǎo)入一體式樣品制備筒盒200中。類似于樣品 /離液劑混合物的運動，使洗滌緩沖液強(qiáng)制進(jìn)入樣品制備裝置100然后從中取出，在該過程 中通過過濾件20兩次。洗滌步驟可以重復(fù)若干次。最后，洗脫緩沖液經(jīng)第二開口 16導(dǎo)入 到樣品制備裝置100中，將所結(jié)合的核酸洗脫到外殼10的高于樣品過濾件20的區(qū)段中，并 從此處將洗脫物移出以作進(jìn)一步的分析。在另一個實施方式中，樣品經(jīng)與第一樣品端口 51附接的樣品制備裝置100的第一 開口 14導(dǎo)入，并從第二樣品端口 52移出洗脫物。在另一個實施方式中，樣品經(jīng)與第一樣品 端口 51附接的樣品制備裝置100的第一開口 14導(dǎo)入，并從樣品制備裝置100的第一開口 14移出洗脫物。在另一個實施方式中，樣品經(jīng)第二樣品端口 52導(dǎo)入到與第一樣品端口 51 附接的樣品制備裝置100，并從第二樣品端口 52移出洗脫物。在另一個實施方式中，樣品預(yù) 裝載到樣品制備裝置100中，然后將樣品制備裝置100插入到一體式樣品制備筒盒200的 第一樣品端口 51中。經(jīng)過洗滌和洗脫步驟，從第二樣品端口 52移出洗脫物。在又一個實 施方式中，樣品預(yù)裝載到樣品制備裝置100中，然后將樣品制備裝置100插入到一體式樣品 制備筒盒200的第一樣品端口 51中。在洗滌步驟后，將與樣品過濾件20結(jié)合的分析物洗 脫到樣品制備裝置100中，然后樣品制備裝置100從第一樣品端口 51取出，樣品過濾件20 和氣溶膠過濾件40之間的空間內(nèi)是洗脫緩沖液中的經(jīng)純化的分析物。一體式樣品制備筒盒200易于使用。首先，該裝置不需要離心，從而免除了與將樣
10品從試管轉(zhuǎn)移到離心柱有關(guān)的復(fù)雜性，并且簡化了所需要的儀器。另外，移液器的自密封進(jìn) 入端口允許容易地導(dǎo)入樣品而不存在蓋子打開(常常為導(dǎo)致污染的因素)的風(fēng)險。此外， 魯爾激活閥使筒盒插入和取出簡單而方便，而又不存在過程完成后由于泄漏而損失樣品的 風(fēng)險。此外，樣品制備裝置100的豎直取向迫使氣泡從樣品過濾件20上升至設(shè)備的頂 部，從而改善流體控制并促進(jìn)分析物的結(jié)合和洗脫。此外，樣品過濾件20的小孔將大氣團(tuán) (air bolus)減小成可移行到樣品通路12內(nèi)部的液柱的頂部的小氣泡，產(chǎn)生離液劑與樣品 的振動混合效果。應(yīng)當(dāng)注意的是，樣品制備裝置100的移液吸頭構(gòu)造允許樣品/清洗液/ 洗脫液經(jīng)過樣品過濾件20雙向流動，而大多數(shù)樣品制備方法依賴于在僅一個方向上經(jīng)過 過濾件的流動。雙向流動特征不僅允許樣品液體被吸取到樣品制備裝置100中并經(jīng)同一開 口(例如第二開口 16)從樣品制備裝置100洗脫出來，而且允許使用者上下吸取樣品多個 循環(huán)，因此提供了處理大于樣品制備裝置100的容積的樣品的能力。在一個實施方式中，通道55、56和57設(shè)計成具有盡可能短的長度以減少不必要的 生物分子(核酸)與一體式樣品制備筒盒200內(nèi)表面的吸附。通道也可以進(jìn)行表面涂覆，以 減少不必要的生物分子吸附。在一個實施方式中，通道55、56和57的直徑為0. Imm至5mm， 以減少表面與體積的比率，從而減少不必要的核酸吸附。在除去洗脫物后，一體式樣品制備筒盒200從流控站取出并棄掉。一體式樣品制備筒盒200的基座50可由對樣品溶解/洗滌/洗脫過程中常用的 化學(xué)物質(zhì)耐受的任何材料制成。在一個實施方式中，基座50由透明材料制成?；?0的 材料的實例包括但不限于聚碳酸酯和聚丙烯。所述流體控制系統(tǒng)可以是能夠提供一體式樣品制備筒盒200中所需流速的任何 流體控制系統(tǒng)。在一個實施方式中，流體控制系統(tǒng)是GlobalFIA (Fox Island，WA)的Flow Pro流體處理系統(tǒng)。
實施例實施例1 利用 2. Oml Rainin 過濾移液吸頭(filtered pipette tip)和 3mm 的 玻璃料從含有炭疽桿菌的血樣中純化核酸在這個實驗中，采用如下程序，利用2.0ml Rainin過濾移液吸頭和3mm的玻璃料 (ROBU Glasfilter-Geraete GmbH，德國)從含有炭疽桿菌的血樣中純化核酸1、將1個15ml錐形管標(biāo)記為流通物；并將4個1. 5ml離心管標(biāo)記為乙醇1、乙 醇2、乙醇3和洗脫物。2、在流通物管內(nèi)將360 μ 1的血液與40 μ 1的炭疽桿菌(IO5集落形成單位(cfu)/ ml，在水中)混合(終濃度為104cfu/ml)。3、將1120 μ 1 QiagenAL裂解緩沖液添加到混合物中。4、添加 80 μ 1 蛋白酶 K(20mg/ml)。5、添加400 μ 1的溶菌酶，旋渦并離心(spin down)。6、將樣品混合物在55 °C溫浴1小時。7、將2000 μ 1 96%至100%的乙醇添加到流通物管中。將混合物渦旋并脈沖離 心。
8、將100 μ 1洗脫緩沖液(IOmM的Tris，pH 8. 0)分取到洗脫物管中。將試管放在 設(shè)為70°C的熱塊上(洗脫緩沖液必須在70°C加熱至少5分鐘。將緩沖液保持在熱塊上直 到步驟13)。9、向3個乙醇管的每一根管中分取Iml 70%乙醇。10、通過Rainin電子移液器用玻璃料吸頭(中等孔隙率)將樣品混合物吸取到流 通物管中。吸打5個循環(huán)(循環(huán)=吸入+打出)。11、使用Rainin電子移液器，通過吸打乙醇1管中的70%乙醇10個循環(huán)來洗滌所 結(jié)合的核酸。以乙醇2管和乙醇3管中的70%乙醇重復(fù)所述洗滌(共三次洗滌)。12、通過吸打空氣20個循環(huán)，將乙醇從玻璃料吸頭吹除。如果留有可見量的乙醇， 則擦拭該吸頭的外部并輕柔振敲該吸頭。13、通過吸打步驟8的70°C的洗脫緩沖液10個循環(huán)來洗脫玻璃料上的核酸。緩沖 液可能開始起泡，但是繼續(xù)吸打并且在結(jié)束時將微型離心管離心。確保所有的緩沖液已從 吸頭吹除。14、收集洗脫物，并棄掉玻璃料吸頭。15、通過實時PCR量化所洗脫的核酸。如圖3所示，在洗脫物中檢測到來自炭疽桿菌的核酸。實施例2 利用2. Oml Rainin過濾移液吸頭和2mm的玻璃料從化膿鏈球菌中純化
核酸在這個實驗中，采用如下程序，利用2.0ml Rainin過濾移液吸頭和2mm的玻璃料 (ROBU Glasfilter-Geraete GmbH，德國)從各種濃度的化膿鏈球菌懸浮液中純化核酸1、將3個1. 5ml離心管標(biāo)記為樣品+胍、乙醇和洗脫物。2、通過用玻璃珠渦旋進(jìn)行裂解。3、通過渦旋，將500 μ 1的化膿鏈球菌樣品與500 μ 1的6Μ胍(ρΗ 6. 5)混合。保 留等份的未經(jīng)處理的(即胍處理前(pre-guanidine)的化膿鏈球菌作為步驟10中的實時 PCR分析的對照。4、將100 μ 1洗脫緩沖液(ImM NaOH)分取到洗脫物管中。使用玻璃料吸頭(中 度孔隙率)和Rainin電子移液器吸打樣品/胍混合物。吸打5個循環(huán)(循環(huán)=吸入+打 出)。5、使用Rainin電子移液器吸打Iml 70%乙醇5個循環(huán)以洗滌所結(jié)合的核酸。6、采用電子移液器使空氣通過玻璃料吸頭以吹除乙醇。重復(fù)吸打20個循環(huán)以除 去痕量的乙醇。如果留有可見量的乙醇，則輕柔振敲玻璃料吸頭。使用Kimwipe 除去吸 頭外部的乙醇。7、使用來自步驟4的70°C洗脫緩沖液，通過吸打10個循環(huán)，從玻璃料上洗脫核酸。 確保所有的洗脫緩沖液已從該尖部吹除。8、收集洗脫物，并棄掉玻璃料吸頭。9、通過實時PCR量化所洗脫的核酸。如圖4所示，在通過玻璃料吸頭制備的樣品中檢測到化膿鏈球菌的核酸。實施例3 利用2. Oml Rainin過濾移液吸頭和2mm的玻璃料從含有炭疽桿菌的鼻
咽樣品中純化核酸
12
在這個實驗中，采用如下程序，利用2.0ml Rainin過濾移液吸頭和2mm的玻璃料 (ROBU Glasfilter-Geraete GmbH，德國)從含有炭疽桿菌的鼻咽樣品中純化核酸1、將3個1. 5ml離心管標(biāo)記為樣品+胍、乙醇和洗脫物。2、通過在樣品+胍管中將450 μ 1的鼻咽物與50 μ 1炭疽桿菌(IO5集落形成單位 (cfu)/ml，在水中)混合(終濃度為104cfu/ml)制備鼻咽樣品。保留一份等分試樣的鼻咽 樣品作為步驟11的實時PCR分析中的對照。3、將500 μ 1的6M胍(ρΗ 6. 5)添加到樣品+胍管中并渦旋。4、將100 μ 1洗脫緩沖液(IOmM Tris, ρΗ8. 0)分取到洗脫物管中。將試管放于設(shè) 在70°C的熱塊上(洗脫緩沖液必須在70°C加熱至少5分鐘)。將試管保持在熱塊上直到步 驟9。5、使用玻璃料吸頭(中度孔隙率)以Rainin電子移液器吸打樣品/胍混合物。吸 打5個循環(huán)(循環(huán)=吸入+打出)。6、使用Rainin電子移液器吸打Iml 70%乙醇以洗滌所結(jié)合的核酸。7、采用電子移液器使空氣通過玻璃料吸頭以吹除乙醇。重復(fù)吸打20個循環(huán)以除 去痕量的乙醇。如果留有可見量的乙醇，則輕柔振敲玻璃料吸頭。使用Kimwipe 除去吸 頭外部的乙醇。8、使用來自步驟4的70°C洗脫緩沖液，通過吸打10個循環(huán)，從玻璃料上洗脫核酸。 確保所有的洗脫緩沖液已從吸頭吹除。9、收集洗脫物，并棄掉玻璃料吸頭。10、通過實時PCR量化所洗脫的核酸。如圖5所示，在洗脫物中檢測到來自炭疽桿菌的核酸。實施例4 利用1. 2ml Gilson過濾移液吸頭和5mm的玻璃料從含有委內(nèi)瑞拉馬腦 炎病毒的血樣中純化核酸在這個實驗中，采用如下程序，利用2.0ml Rainin過濾移液吸頭和5mm的玻璃料 (ROBU Glasfilter-Geraete GmbH，德國)從含有委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒的血樣中純化核酸1、將6個1. 5ml離心管標(biāo)記為流通物、乙醇1、乙醇2、乙醇3、洗脫物1和洗脫物 2。2、在流通物管內(nèi)將90 μ 1的血液與10 μ 1的委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒(IO5菌斑形成 單位(pfu)/ml，在水中)混合(終濃度為104pfu/ml)。3、將280 μ 1 QiagenAL裂解緩沖液添加到混合物中。4、添加 40μ 1 蛋白酶 K(20mg/ml)。5、添加100 μ 1的溶菌酶，旋渦并離心。6、將樣品混合物在55 °C溫浴1小時。7、將500 μ 1 96%至100%的乙醇添加到流通物管中。將混合物渦旋并脈沖離心。8、將100 μ 1洗脫緩沖液(IOmM的Tris，pH 8. 0)分取到洗脫物管中。將試管放于 設(shè)在70°C的熱塊上(洗脫緩沖液必須在70°C加熱至少5分鐘。將試管保持在熱塊上直到 步驟13)。9、將Iml 70%乙醇分取到3個乙醇管的每一根管中。10、通過Gilson電子移液器用玻璃料吸頭(中等孔隙率)將樣品混合物吸取到流通物管中。吸打5個循環(huán)(循環(huán)=吸入+打出)。使用電子移液器，吸打乙醇1管中的70% 乙醇10個循環(huán)來洗滌所結(jié)合的核酸。以乙醇2管和在乙醇3管中的70%乙醇重復(fù)所述洗 滌(共三次洗滌)。通過吸打空氣20個循環(huán)，將乙醇從玻璃料吸頭吹除。如果留有可見量 的乙醇，則擦拭吸頭的外部并輕柔地振敲吸頭。11、通過吸打步驟8的70°C的洗脫緩沖液10個循環(huán)來洗脫玻璃料上的核酸。在這 些循環(huán)結(jié)束后，將洗脫緩沖液從熱塊上拿下。確保所有的緩沖液已從吸頭吹除。12、在洗脫物1管中收集洗脫物。13、采用相同的玻璃料吸頭重復(fù)步驟13，在洗脫物2管中收集洗脫物，并棄掉玻璃 料吸頭。14、通過實時PCR量化所洗脫的核酸。如圖6所示，在第一洗脫物和第二洗脫物中都檢測到來自委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒的 核酸。不過，第一洗脫物所含委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒核酸的濃度高得多。實施例5 利用流體控制系統(tǒng)和一體式樣品制備系統(tǒng)進(jìn)行自動化樣品制備將如圖2A所示的一體式樣品制備裝置原型連接到Flow Pro流體處理系統(tǒng) (Global FIA, Fox Island, WA) 0采用如下程序從鼠疫菌懸浮液中純化核酸1、將2個1. 5ml離心管標(biāo)記為樣品和洗脫物。2、將150 μ 1的ImM NaOH分取到位于Global FIA系統(tǒng)上的標(biāo)記為“洗脫緩沖液”
的試管中。3、將500μ1 70%乙醇分取到位于Global FIA系統(tǒng)上的洗滌管中。4、在“樣品”管(步驟1)內(nèi)將500μ1的鼠疫菌懸浮液(104cfU/ml，在水中)與 500 μ 1的6Μ胍(ρΗ 6. 5)混合并渦旋。保留一些未混合的樣品用于隨后的分析。5、使用Rainin電子移液器將樣品/胍混合物吸取到玻璃料吸頭(中等孔隙率)中。6、將玻璃料吸頭(內(nèi)含樣品)放在位于Global FIA設(shè)備上的樣品制備筒盒上。7、使用FloLV軟件進(jìn)行“玻璃料吸頭樣品切換(toggle) ”流程(圖7)。8、使用FloLV軟件進(jìn)行“玻璃料吸頭乙醇洗滌”流程。9、使用FloLV軟件進(jìn)行“玻璃料吸頭乙醇干燥”流程。10、使用FloLV軟件進(jìn)行“玻璃料吸頭洗脫”流程。11、一旦流程結(jié)束，即從Global FIA系統(tǒng)上取下玻璃料吸頭，將該玻璃料吸頭附接 到Rainin電子移液器上，并將洗脫物分配到標(biāo)記為“洗脫物”的1.5ml的離心管中。11、棄掉該玻璃料吸頭。12、通過實時PCR量化所洗脫的核酸。如圖8所示，在洗脫物中檢測到來自鼠疫菌的核酸。在此使用的術(shù)語和描述僅以示例(而非用作限定)的方式提供。本領(lǐng)域的技術(shù)人 員應(yīng)當(dāng)認(rèn)識到，在所附權(quán)利要求書中限定的本發(fā)明及其等同方式的精神和范圍內(nèi)可以有很 多改變，其中除非另有說明，否則所有術(shù)語均按它們的盡可能廣泛的含義來理解。
權(quán)利要求
一種樣品制備裝置，所述樣品制備裝置包括限定第一開口和第二開口之間的通路的外殼；和占據(jù)所述通路的一區(qū)段的樣品過濾件，所述樣品過濾件包含特異性結(jié)合核酸的單成體吸附劑。
2.如權(quán)利要求1所述的樣品制備裝置，其中，所述樣品過濾件經(jīng)化學(xué)處理而產(chǎn)生正電荷。
3.如權(quán)利要求1所述的樣品制備裝置，其中，所述單成體吸附劑選自由玻璃料、多孔性 玻璃單成體、和多孔性單成體聚合物組成的組。
4.如權(quán)利要求3所述的樣品制備裝置，其中，所述單成體吸附劑包含玻璃料。
5.如權(quán)利要求3所述的樣品制備裝置，其中，所述單成體吸附劑包含多孔性玻璃單成體。
6.如權(quán)利要求3所述的樣品制備裝置，其中，所述單成體吸附劑包含多孔性單成體聚 合物。
7.如權(quán)利要求1所述的樣品制備裝置，其中，所述樣品過濾件包含特異性結(jié)合核酸的 第一區(qū)段和特異性結(jié)合目標(biāo)分析物的第二區(qū)段。
8.如權(quán)利要求7所述的樣品制備裝置，其中，所述目標(biāo)分析物是蛋白質(zhì)。
9.如權(quán)利要求1所述的樣品制備裝置，其中，所述第一開口的直徑大于所述第二開口 的直徑，并且其中所述樣品過濾件緊鄰所述第二開口設(shè)置。
10.如權(quán)利要求9所述的樣品制備裝置，其中，所述玻璃料的側(cè)部隨所述通路的輪廓而 逐漸變細(xì)。
11.如權(quán)利要求1所述的樣品制備裝置，其中，所述外殼進(jìn)一步包含緊鄰所述第一樣品 過濾件設(shè)置的第二樣品過濾件。
12.如權(quán)利要求1所述的樣品制備裝置，其中，所述外殼進(jìn)一步包含鄰近所述第一開口 設(shè)置的氣溶膠過濾件。
13.如權(quán)利要求1所述的樣品制備裝置，其中，所述外殼呈移液吸頭的構(gòu)造。
14.一種一體式樣品制備筒盒，所述樣品制備筒盒包含 樣品制備裝置，所述樣品制備裝置包含限定第一開口和第二開口之間的通路的外殼；和占據(jù)所述通路的一區(qū)段的樣品過濾件，所述樣品過濾件包含特異性結(jié)合目標(biāo)分析物的 吸附劑；和筒盒基座，所述筒盒基座包含 經(jīng)構(gòu)造與所述樣品制備裝置界面接合的第一端口； 經(jīng)構(gòu)造與液體輸送裝置界面接合的第二端口 ；和 將所述第一端口與第二端口連接的第一通道。
15.如權(quán)利要求14所述的一體式樣品制備筒盒，其中，所述筒盒基座由選自由聚碳酸 酯、聚苯乙烯和聚丙烯組成的組的材料制成。
16.如權(quán)利要求14所述的一體式樣品制備筒盒，其中，所述液體輸送裝置是流控站。
17.如權(quán)利要求14所述的一體式樣品制備筒盒，其中，所述第二端口包含魯爾激活閥。
18.如權(quán)利要求14所述的一體式樣品制備筒盒，其中，所述筒盒基座進(jìn)一步包含第三端口 ；和將所述第三端口與所述第一端口連接的第二通道。
19.如權(quán)利要求18所述的一體式樣品制備筒盒，其中，所述第三端口是自密封端口。
20.權(quán)利要求18所述的一體式樣品制備筒盒，其中，所述第三端口包含隔件或單向閥。
21.一種筒盒基座，所述筒盒基座包含 具有頂側(cè)和底側(cè)的座體；第一端口，該第一端口形成在所述座體的所述頂側(cè)上，并經(jīng)構(gòu)造與樣品制備裝置界面 接合；第二端口，該第二端口形成在所述座體的所述底側(cè)上，并經(jīng)構(gòu)造與液體輸送裝置界面 接合；和第一通道，該第一通道將所述第一端口與所述第二端口連接。
22.如權(quán)利要求21所述的筒盒基座，其中，所述筒盒基座進(jìn)一步包含 一個或多個另外的端口 ；和將所述一個或多個另外的端口與所述第一端口連接的一條或多條另外的通道。
23.一種樣品制備裝置，所述樣品制備裝置包含 限定第一開口和第二開口之間的通路的外殼；和占據(jù)所述通路的一區(qū)段的玻璃料，所述玻璃料涂覆有特異性結(jié)合目標(biāo)分析物的捕獲劑。
24.如權(quán)利要求23所述的樣品制備裝置，其中，所述捕獲劑是抗體。
25.如權(quán)利要求23所述的樣品制備裝置，其中，所述捕獲劑是凝集素。
26.一種樣品制備裝置，所述樣品制備裝置包含 限定第一開口和第二開口之間的通路的外殼；和占據(jù)所述通路的一區(qū)段的過濾件，所述過濾件包含帶有裂解細(xì)胞膜的浸漬的化學(xué)物質(zhì) 的親水性基質(zhì)。
27.如權(quán)利要求26所述的樣品制備裝置，其中，所述親水性基質(zhì)為FTA紙 。
28.一種從液體樣品中純化分析物的方法，所述方法包括 將所述液體樣品放到容器中；將所述液體樣品的至少一部分抽取到樣品制備裝置中，所述樣品制備裝置包括 限定第一開口和第二開口之間的通路的外殼；和占據(jù)所述通路的一區(qū)段的過濾件，所述樣品過濾件包含特異性結(jié)合所述分析物的材料，其中，所述部分液體樣品經(jīng)由所述第一開口被抽取到所述外殼中并通過所述過濾件， 并且其中所述分析物在通過所述過濾件的同時與所述過濾件結(jié)合；使所述部分液體樣品經(jīng)由所述第一開口從所述樣品制備裝置中排出，其中所述部分液 體樣品在離開所述樣品制備裝置的同時再一次通過所述過濾件；和通過將洗脫緩沖液經(jīng)所述第一開口抽取到所述樣品制備裝置中并經(jīng)所述第一開口從 所述樣品制備裝置排出所述洗脫緩沖液，從而由所述過濾件洗脫所述分析物，其中，所述洗 脫緩沖液在進(jìn)入和離開所述樣品制備裝置的同時通過所述過濾件。
29.如權(quán)利要求28所述的方法，其中，所述方法進(jìn)一步包括將洗滌緩沖液經(jīng)所述第一開口抽取到所述樣品制備裝置中并經(jīng)所述第一開口將所述 洗滌緩沖液從所述樣品制備裝置排出，從而洗滌所述過濾件，其中，所述洗滌緩沖液在進(jìn)入 和離開所述樣品制備裝置的同時通過所述過濾件。
30.如權(quán)利要求29所述的方法，其中，所述洗滌步驟重復(fù)兩次或多于兩次。
31.如權(quán)利要求28所述的方法，其中，重復(fù)所述樣品抽取和樣品排出步驟直至所有所 述液體樣品通過所述過濾件至少一次。
32.如權(quán)利要求28所述的方法，其中，所述分析物是核酸并且所述過濾件包含玻璃料。
33.如權(quán)利要求28所述的方法，其中，所述樣品制備裝置具有移液吸頭構(gòu)造。
34.如權(quán)利要求28所述的方法，其中，所述抽取、排出和洗脫步驟由電子移液器控制。
35.如權(quán)利要求28所述的方法，其中，所述抽取、排出和洗脫步驟由自動移液站控制。
36.一種從樣品中純化分析物的方法，所述方法包括 使所述樣品通過樣品制備裝置，所述樣品制備裝置包括 限定第一開口和第二開口之間的通路的外殼；和 占據(jù)所述通路的一區(qū)段的過濾件，其中，所述樣品過濾件包含特異性結(jié)合所述分析物的材料，并且所述樣品在通過所述 樣品制備裝置的同時通過所述樣品過濾件；和使用洗脫溶液洗脫結(jié)合在所述樣品過濾件上的分析物，其中，所述樣品和所述洗脫溶液通過同一開口進(jìn)入和離開所述外殼。
37.如權(quán)利要求36所述的方法，其中，所述樣品制備裝置附接在筒盒基座上，所述筒盒 基座包含構(gòu)造用于收納所述樣品制備裝置的第一端口和構(gòu)造用于收納液體輸送裝置的第 二端口。
38.如權(quán)利要求36所述的方法，所述方法進(jìn)一步包括使用洗滌溶液洗滌所述過濾件，其中，所述洗滌溶液通過同一開口進(jìn)入和離開所述外tJXi O
39.一種樣品純化系統(tǒng)，所述樣品純化系統(tǒng)包括 樣品制備裝置，所述樣品制備裝置包括限定第一開口和第二開口之間的通路的外殼；和占據(jù)所述通路的一區(qū)段的樣品過濾件，所述樣品過濾件包含特異性結(jié)合目標(biāo)分析物的 單成體吸附劑；筒盒基座，所述筒盒基座包含構(gòu)造用于收納所述樣品制備裝置第一端口；構(gòu)造用于收納液體輸送裝置的第二端口；將所述第一樣品端口與所述第二樣品端口連接的通道；和連接于所述筒盒基座的液體輸送裝置，所述液體輸送裝置控制所述樣品制備裝置和所 述筒盒基座中的流體流動。
40.如權(quán)利要求39所述的樣品純化系統(tǒng)，其中，所述液體輸送裝置通過所述外殼上的 同一開口將液體輸送到所述樣品制備裝置中并將液體從所述樣品制備裝置中移除。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種樣品制備裝置。所述樣品制備裝置包括限定第一開口和第二開口之間的通路的外殼；和占據(jù)所述通路的一區(qū)段的樣品過濾件。所述樣品過濾件含有可與核酸特異性結(jié)合的單成體吸附劑。本發(fā)明還公開了包含包被有可與目標(biāo)分析物特異性結(jié)合的捕獲劑的玻璃料的樣品過濾件、包含帶有裂解細(xì)胞膜的浸漬的化學(xué)物質(zhì)的親水性基質(zhì)的樣品過濾件、筒盒基座和一體式樣品制備筒盒。
文檔編號B01L3/00GK101883619SQ200880119131
公開日2010年11月10日 申請日期2008年6月25日 優(yōu)先權(quán)日2007年10月31日
發(fā)明者克里斯多佛·G·庫尼, 菲爾·貝爾格萊德 申請人:阿考尼生化系統(tǒng)公司