專利名稱：分析方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及分析方法(例如分析樣品中的一種或多種被分析物)。

背景技術(shù)：
可以進行分析以確定樣品中一種或多種被分析物的存在。陣列可用于對樣品進 行多重分析(例如對于多種不同被分析物中的每種進行分析)。典型的陣列包括具有多個 空間分隔開的測試區(qū)的基質(zhì)，每個測試區(qū)具有不同的探針化合物，例如多核苷酸、抗體或蛋 白。在使用中，將陣列與樣品接觸，然后樣品與陣列的位點相互作用。對于每個位點來說， 相互作用可以包括例如相應(yīng)的被分析物與位點的探針化合物的結(jié)合，和/或相應(yīng)的被分析 物與探針化合物之間的化學反應(yīng)。反應(yīng)產(chǎn)生可檢測的產(chǎn)物(例如沉淀)。相互作用的存在 和程度取決于樣品中是否存在相應(yīng)的被分析物。 典型情況下，相互作用通過光學方法檢測(例如通過熒光)。例如，可以使用成像 檢測器(例如CCD)進行光學檢測，成像檢測器在至少一個(例如兩個)維度上具有多個彼 此分隔開的光敏元件(例如像素)。每個光敏元件被定位，以接收來自基質(zhì)的不同空間位置 的光。因此，由多個光敏元件同時檢測到的光可以組合起來，形成基質(zhì)的至少一個(例如兩 個)維度上的圖像數(shù)據(jù)?？梢詫D像數(shù)據(jù)進行評估，以確定陣列的多個位點上相互作用的 存在和/或程度。
發(fā)明簡述 本發(fā)明涉及分析方法(例如分析樣品中的多種被分析物)。
在一種情況下，方法包括 將空間分隔的測試區(qū)的陣列與液體樣品相接觸，測試區(qū)布置在微流體裝置的第一 基質(zhì)的內(nèi)表面與第二基質(zhì)的內(nèi)表面之間，至少一個基質(zhì)是撓性的，每個測試區(qū)含有探針化 合物，探針化合物被構(gòu)造用于參與靶被分析物的分析。 在對應(yīng)于測試區(qū)的位置減小第一和第二基質(zhì)的內(nèi)表面之間的距離，以及 在相應(yīng)位置處內(nèi)表面之間的距離被減小的多個測試區(qū)中的每個測試區(qū)上，連續(xù)地
光學測定相互作用的存在，每個測試區(qū)上的相互作用指示了樣品中靶被分析物的存在。
方法可以進一步包括，對于多個測試區(qū)中的每個，根據(jù)光學測定的相互作用確定 相應(yīng)被分析物的存在。 對于至少某些測試區(qū)中的每個來說，多個測試區(qū)的每個上的相互作用，可以是被 分析物與測試區(qū)的探針化合物之間的結(jié)合反應(yīng)。 光學測定可以包括使用零階檢測器檢測來自每個測試區(qū)的光。 使用零階檢測器檢測來自每個測試區(qū)的光，可以基本上由使用零階檢測器檢測光 構(gòu)成。 對于第一和第二基質(zhì)的內(nèi)表面之間的距離被減小的多個位置中的每個位置來說， 方法可以進一步包括在測試區(qū)進行光學測定的步驟之后，隨后增加內(nèi)表面之間的距離。
減小距離可以包括在對應(yīng)于測試區(qū)的位置連續(xù)地減小第一和第二基質(zhì)的內(nèi)表面 之間的距離。在該實施方案中，對于第一和第二基質(zhì)的內(nèi)表面之間的距離被減小的多個位 置中的每個位置來說，方法可以進一步包括在測試區(qū)光學測定結(jié)合的步驟之后，隨后增加 內(nèi)表面之間的距離。 光學測定可以包括連續(xù)地檢測在相應(yīng)位置處內(nèi)表面之間的距離被減小的多個測 試區(qū)中的每個上的相互作用。在一個實施方案中，光學檢測包括同時檢測來自不超過N個 測試區(qū)的光，其中N《5，或N《3，或N二 1?；蛘撸鈱W檢測包括使用零階檢測器檢測來自 每個測試區(qū)的光。使用零階檢測器檢測來自每個測試區(qū)的光，可以基本上由使用零階檢測 器檢測光構(gòu)成。 光學檢測可以包括將微流體裝置相對于用于進行光學測定的光學檢測器的光學 檢測區(qū)進行平移。 減小距離包括將微流體裝置相對于對微流體裝置施加壓力的元件進行平移。將微 流體裝置相對于元件平移可以包括旋轉(zhuǎn)元件的至少一部分。 每個測試區(qū)可以是細長的，并限定了長軸。此外，微流體裝置的平移可以包括沿著
與多個測試區(qū)中的每個的長軸大體垂直的平移軸平移裝置。例如，平移軸與多個測試區(qū)的
長軸是垂直的，偏離在IO。或以下，或甚至在5?；蛞韵?。 此外，平移軸與大多數(shù)或甚至所有測試區(qū)的長軸可以是大體垂直的。 在平移的步驟中，方法可以進一步包括讀取微流體裝置的參考碼中包含的信息，
并根據(jù)讀取的信息確定多個測試區(qū)中的每個的性質(zhì)。 對于多個測試區(qū)中的每個來說，測定可以包括測定指示測試區(qū)何時位于用于進行 光學檢測的光學檢測器的檢測區(qū)中的值。此外，測定可以包括測定微流體裝置的測試區(qū)的 生理化學性質(zhì)。例如，生理化學性質(zhì)指示可以通過多個測試區(qū)中的每個測定的被分析物。此 外，測定可以包括測定在使用前儲存在微流體裝置中的反應(yīng)物的身份。 沿著測試區(qū)的長軸的長度與沿著垂直維度上的寬度的比率，可以為至少2. 5或甚 至至少5。 在接觸步驟后，不用首先將測試區(qū)與不含樣品的液體相接觸，就可以進行光學檢 測步驟。 光學測定可以包括激發(fā)并檢測來自檢測區(qū)的熒光。
在另一種情況下，方法包括 將空間分隔的測試區(qū)的陣列與樣品相接觸，測試區(qū)布置在第一和第二表面之間，
8物，探針化合物被構(gòu)造用于參與相應(yīng)被分析物的分析。
在對應(yīng)于測試區(qū)的位置減小內(nèi)表面之間的距離，以及 在相應(yīng)位置處內(nèi)表面之間的距離被減小的多個測試區(qū)中的每個測試區(qū)上，連續(xù)地 光學測定分析的結(jié)果。 對于多個測試區(qū)中的每個來說，方法可以進一步包括根據(jù)分析的結(jié)果確定相應(yīng)被 分析物的存在。 對于至少某些測試區(qū)中的每個來說，分析的結(jié)果可以指示被分析物與測試區(qū)的探 針化合物之間的結(jié)合反應(yīng)。 光學測定可以包括使用零階檢測器檢測來自每個測試區(qū)的光。 使用零階檢測器檢測來自每個測試區(qū)的光，可以基本上由使用零階檢測器檢測光 構(gòu)成。 對于內(nèi)表面之間的距離被減小的多個位置中的每個來說，方法可以進一步包括在 測試區(qū)進行光學測定的步驟之后，隨后增加內(nèi)表面之間的距離。 減小距離可以包括在對應(yīng)于測試區(qū)的位置連續(xù)地減小內(nèi)表面之間的距離。
在另一種情況下，系統(tǒng)包含 微流體裝置讀數(shù)器，被構(gòu)造用于接收微流體裝置，微流體裝置含有空間分隔的測 試區(qū)的陣列，測試區(qū)布置在微流體裝置的第一基質(zhì)的內(nèi)表面與第二基質(zhì)的內(nèi)表面之間，至 少一個基質(zhì)是撓性的，每個測試區(qū)含有探針化合物，探針化合物被構(gòu)造用于參與靶被分析 物的分析， 光學檢測器，被構(gòu)造用于當至少一個測試區(qū)位于微流體裝置的檢測區(qū)內(nèi)時，檢測 來自至少一個檢測區(qū)的光， 平移器，被構(gòu)造用于將微流體裝置和光學檢測器的檢測區(qū)中的至少一個相對于彼 此進行平移， 擠壓器，被構(gòu)造用于在對應(yīng)于光學裝置的檢測區(qū)的位置上減小第一和第二基質(zhì)的 內(nèi)表面之間的距離， 處理器，被構(gòu)造用于接收來自光學檢測器的信號，信號指示了從測試區(qū)檢測到的 光。 系統(tǒng)可以被構(gòu)造用于連續(xù)地光學檢測來自不超過N個測試區(qū)的光，其中N《5，或 N《3，或N = 1。 檢測器可以是熒光檢測器。 在另一種情況下，分析裝置含有第一和第二基質(zhì)，它們限定了其間的通道，至少一
個基質(zhì)是撓性的，通道含有空間分隔開的測試區(qū)的陣列，每個測試區(qū)含有探針化合物，探針
化合物被構(gòu)造用于參與靶被分析物的分析。 在另一種情況下，制造的物件包括 基質(zhì)，以及 多個細長的測試區(qū)，每個測試區(qū)含有相應(yīng)的探針化合物，探針化合物被構(gòu)造用于 參與靶被分析物的分析，每個測試區(qū)限定了長軸以及與它垂直的寬度，測試區(qū)的長軸大體 上是平行的。 在另一種情況下，方法包括
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將液體樣品導入毛細管的孔，以及 通過降低作用在液體樣品的液體樣品-氣體界面上的壓力，將至少一部分液體樣 品導入微流體裝置的微流體網(wǎng)絡(luò)中。 在將液體樣品導入毛細管的孔的步驟之后，方法可以進一步包括將毛細管與微流 體裝置相連，液體樣品保留在毛細管中。 降低壓力可以通過擠壓至少一部分微流體網(wǎng)絡(luò)以從其中排出氣體，然后降低至少 一部分微流體網(wǎng)絡(luò)的壓力來進行。 微流體網(wǎng)絡(luò)可以至少部分由大體上為平面的第一和第二基質(zhì)所限定，并位于它們 之間，至少一種基質(zhì)在施加外部壓力擠壓至少一部分微流體網(wǎng)絡(luò)后是可變形的，并且該至 少一種基質(zhì)在釋放外部壓力使得至少一部分微流體網(wǎng)絡(luò)降壓后，傾向于恢復至其原來的位置。 此外，微流體網(wǎng)絡(luò)可以至少一部分由微流體通道所限定，該微流體通道包括入口 和與入口流體連通的檢測區(qū)，以及與檢測區(qū)流體連通的微流體流通路徑，其中微流體流通 路徑具有壁，它在施加外部壓力擠壓至少一部分微流體流通路徑后是至少可部分變形的， 并且在釋放外部壓力使得至少一部分微流體流通路徑降壓后，壁傾向于恢復至其原來的位置。 方法還可以包括將液體樣品與一種或多種反應(yīng)物在微流體網(wǎng)絡(luò)中混合，以形成混 合物?；旌衔锟梢园辽?0%被導入到微流體網(wǎng)絡(luò)中的液體樣品。 一種或多種反應(yīng)物包 括可檢測標記物，它與樣品反應(yīng)，形成了包含標記物和樣品中存在的被分析物的復合物。
方法還可以包括對指示了液體樣品的一部分中存在的復合物的量的信號進行光 學檢測，該一部分樣品存在于微流體裝置的檢測區(qū)中。 方法還可以包括從檢測區(qū)排出一部分液體樣品，并將不同部分液體樣品導入檢測
區(qū)，并對指示了該不同部分樣品中存在的復合物的量的信號進行光學檢測。排出一部分并
導入不同部分，可以通過擠壓至少一部分微流體網(wǎng)絡(luò)來進行，被擠壓的部分沿著網(wǎng)絡(luò)至少
部分偏離檢測區(qū)。擠壓至少一部分可以包括擠壓第一部分微流體網(wǎng)絡(luò)，不用首先完全釋放
這種壓力，將擠壓的位點沿著微流體網(wǎng)絡(luò)移動足以進行排出和導入步驟的量。 方法可以進一步包括不用首先完全釋放微流體網(wǎng)絡(luò)的壓力就對信號進行光學檢
測，該信號指示了不同部分樣品中存在的復合物的量。 在將液體樣品導入毛細管的孔和將至少一部分液體樣品導入微流體網(wǎng)絡(luò)的步驟 之間，方法還可以包括制止液體樣品流出毛細管的步驟。制止液體樣品流出毛細管可以包 括增加作用于液體樣品_氣體界面上的壓力。 在某些實施方案中，微流體網(wǎng)絡(luò)不支持液體樣品的毛細管流動。由第一和第二基
質(zhì)中的至少一個限定的微流體網(wǎng)絡(luò)的內(nèi)表面，可以是疏水的。 被分析物可以是顆粒，例如細胞。 方法還可以包括將微流體裝置和光學檢測器中的至少一個相對于彼此進行移動， 然后檢測指示了不同部分液體樣品中存在的復合物的量的光學信號。 毛細管可以是首尾相連的毛細管，含有第一個和第二個開口端，毛細管的孔構(gòu)成 了總體積V，導入至少一部分液體樣品的步驟包括將至少90X的液體樣品導入微流體網(wǎng) 絡(luò)。
在另一種情況下，方法包括 將液體樣品導入布置在微流體裝置的第一基質(zhì)的內(nèi)表面與第二基質(zhì)的內(nèi)表面之 間的微流體網(wǎng)絡(luò)，至少一個基質(zhì)是撓性的，液體樣品含有多種顆粒， 通過在微流體網(wǎng)絡(luò)的多個位置連續(xù)地減少第一和第二基質(zhì)的內(nèi)表面之間的距離， 形成了含有至少一部分液體樣品和光學標記物的混合物， 形成多種復合物，每種復合物包含多種顆粒中的一種和至少一種光學標記物，以 及 檢測在一部分混合物中存在的復合物。 方法還可以包括檢測混合物的多個不同部分的每個部分中存在的復合物。
多個不同部分的總體積可以為導入到微流體裝置的液體樣品的體積的至少90%。
方法還可以包括將總體積為V的液體樣品導入微流體裝置，其中混合物的總體積 為體積V的至少90X。 方法還可以包括檢測在至少90%的混合物總體積中存在的復合物。 顆粒可以是細胞。 光學標記物可以是熒光標記物。 在另一種情況下，方法包括 將總體積為V的液體樣品導入布置在微流體裝置的第一基質(zhì)的內(nèi)表面與第二基
質(zhì)的內(nèi)表面之間的微流體網(wǎng)絡(luò)，至少一個基質(zhì)是撓性的，液體樣品含有多種顆粒， 在微流體網(wǎng)絡(luò)中形成混合物，混合物含有體積V的液體樣品和光學標記物的至少
大約90%， 形成多種復合物，每種復合物包含多種顆粒中的一種和至少一種光學標記物，以 及 檢測在一部分混合物中存在的復合物。 混合物可以包含體積V的液體樣品的至少大約95 % 。 方法還可以包括檢測混合物的多個不同部分的每個中存在的復合物。 多個不同部分的總體積可以為導入到微流體裝置的液體樣品的體積的至少90%。 在另一種情況下，用于檢測被分析物的裝置包含具有微流體通道的盒
(cartridge)，該微流體通道包括入口和與入口流體連通的檢測區(qū)；具有至少部分可變形的
壁并與通道的檢測區(qū)流體連通的微流體流通路徑；以及具有密封元件的蓋子，它被構(gòu)造用
于密封入口 ，并形成包括入口 、微流體通道和微流體流通路徑的流體回路。 裝置的蓋子和盒可以被構(gòu)造成在形成流體回路后不可逆地關(guān)閉。 可選地，蓋子可以撓性連接在盒上。 此外，蓋子和盒可以被構(gòu)造成在第一個相對位置咬合使得蓋子可以除去，而在第 二個相對位置咬合，使得蓋子在形成流體回路后不可逆地關(guān)閉。 檢測區(qū)可以被盒的至少一個表面和蓋子的至少一個表面分界。蓋子可以包括覆蓋 在檢測區(qū)上的透明薄膜。此外，蓋子可以粘附到盒上。 在另一種情況下，用于檢測被分析物的裝置包含具有微流體通道的盒，該微流體 通道包括在內(nèi)表面上具有抗凝劑的毛細管入口 ，包含反應(yīng)物的腔室，以及與入口流體連通 的檢測區(qū)；具有至少部分可變形的壁并與通道的檢測區(qū)流體連通的微流體流通路徑；以及具有密封元件的蓋子，它被構(gòu)造用于密封入口 ，并形成包括入口 、微流體通道和微流體流通 路徑的流體回路。 在另一種情況下，熒光檢測器包含光源；獲得10°或以上的立體角的聚光鏡；以 及獲得10°或以上的立體角，并被構(gòu)造用于為微觀物體成像的物鏡。 聚光鏡和/或物鏡可以獲得10°到15°的立體角，例如12。到14° ，例如 13.5° 。 熒光檢測器還可以包括孔隙?？紫兜臉?gòu)造使得立體角可以為10°或以上(例如 10°到15° ，或12°到14° ，或13.5° )。 熒光檢測器還可以包含至少一個濾光片。濾光片可以根據(jù)預(yù)定的發(fā)射波長設(shè)置進 行選擇。例如，可以根據(jù)用于標記盒中的反應(yīng)物的染料的發(fā)射波長，來選擇一個濾光片用于 透過具有一種特定波長的光，以及選擇另一個濾光片用于透過具有不同特定波長的光。
在另一種情況下，用于檢測被分析物的系統(tǒng)包含 盒，具有包括入口和與入口流體連通的檢測區(qū)的微流體通道；具有至少部分可 變形的壁并與通道的檢測區(qū)流體連通的微流體流通路徑；以及具有密封元件的蓋子，它被 構(gòu)造用于密封入口 ，并形成包括入口 、微流體通道和微流體流通路徑的流體回路；以及包含 光源的熒光檢測器；獲得10°或以上的立體角的聚光鏡；以及獲得IO?；蛞陨系牧Ⅲw角的 物鏡。 熒光檢測器可以包括相機。 此外，熒光檢測器可以包括一種或多種可選擇的發(fā)射濾光片。
在另一種情況下，在液體樣品中檢測被分析物的方法包括 將液體樣品導入微流體通道，從而形成被通道封閉并被運輸流體在第一個末端分 界的連續(xù)液體段； 形成流體回路，使得運輸流體為液體段的第一個和第二個末端之間提供流體連 通；以及 經(jīng)運輸流體對液體段的第一個和第二個末端施加不同的壓力。
在另一種情況下，在液體樣品中檢測被分析物的方法包括 將液體樣品導入微流體通道，從而形成被通道封閉并被運輸流體在第一個末端分 界的連續(xù)液體段，液體樣品含有多種顆粒， 形成流體回路，使得運輸流體為液體段的第一個和第二個末端之間提供流體連 通， 通過經(jīng)運輸流體對液體段的第一個和第二個末端施加不同的壓力，形成含有至少 一部分液體樣品和光學標記物的混合物， 形成多種復合物，每種復合物含有多種顆粒中的一種以及至少一種光學標記物， 以及 檢測在混合物的一部分中存在的復合物。 接下來，將解釋裝置和方法(例如，用于檢測被分析物的裝置、系統(tǒng)和方法)的其 它示例性實施方案。 流體回路的一部分可以由可彈性變形的壁構(gòu)成。 向液體段的第一個和第二個末端施加不同的壓力可以包括擠壓可彈性變形的壁。
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液體樣品可以根據(jù)待測定的被分析物按照需要進行選擇。示例性的樣品包括水， 水溶液，有機溶液，無機溶液，人類和其它動物的體液，例如尿液、痰液、唾液、腦脊液、全血 和源自血的材料例如血漿和血清。 待測定的被分析物可以按照需要進行選擇。例如，被分析物可以與醫(yī)藥(例如診 斷學)、研究(例如藥物發(fā)現(xiàn))、工業(yè)(例如水或食品質(zhì)量監(jiān)測)或法醫(yī)學相關(guān)。示例性的 待測定被分析物包括生理學狀況例如疾病的標志物(例如診斷標志物或預(yù)測標志物)。這 些標志物包括心臟標志物(例如利尿鈉肽和肌鈣蛋白家族的成員)、癌癥標志物(例如核基 質(zhì)蛋白)、遺傳標志物(例如多核苷酸)、敗血病標志物、神經(jīng)學標志物，以及指示病原狀況 的標志物。被分析物可以指示病原體(例如細菌、病毒或真菌)的存在。
在典型的實施方案中，一種或多種被分析物包括顆粒，例如病毒、細菌、細胞、真菌 或孢子。例如，可以檢測在國際專利申請PCT/EP2006/068153(以其全文以為參考)中描述 的任何顆粒。天然存在的顆粒的例子包括尤其是原核細胞(例如細菌細胞，例如大腸埃希 氏桿菌(Escherichia coli)或枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis))、真核細胞(例如酵母 細胞，例如釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，昆蟲細胞例如Sf9或High 5細胞，永生 化的細胞株例如HeLa或Cos細胞，以及初級細胞例如哺乳動物血細胞)或病毒(例如噬菌 體粒子，例如M13或T7噬菌體)。在一個實施方案中，顆?？梢允羌毎?。
標記物或探針化合物或捕獲分子可以根據(jù)待測定的被分析物按照需要進行選擇。 用于測定被分析物的存在的適合的標記物或探針化合物描述在2006年9月22日提交的美 國臨時申請60/826， 678中，在此以其全文引為參考。標記物或捕獲分子或探針或探針分子 或分子探針，被理解為是指由于特定的特征性結(jié)合行為或特定的反應(yīng)性，用于檢測其它分 子的分子或復合物。示例性的探針化合物包括生物聚合物，例如肽、蛋白、抗原、抗體、碳水 化合物、核酸，和/或其類似物和/或上述生物聚合物的混合聚合物。 可以按照本發(fā)明使用的可檢測的標志物或標記物，包括在化學、物理或酶反應(yīng)中 直接或間接產(chǎn)生可檢測的化合物或信號的任何化合物。優(yōu)選情況下，標記物可以從尤其是 酶標記物、有色標記物、熒光標記物、生色標記物、發(fā)光標記物、放射性標記物、半抗原、生物 素、金屬復合物、金屬和膠體金中選擇，其中熒光標記物是特別優(yōu)選的。所有這些類型的標 記物在本技術(shù)領(lǐng)域中都是公知的。由這樣的標記物介導的物理反應(yīng)的例子是熒光的發(fā)射。 因此，光學標記物可以是熒光標記物。 方法還可以包括用第一光學標記物和第二光學標記物抗體標記被分析物，其中第
一和第二光學標記物是不同的。第一和第二光學標記物可以是具有不同的發(fā)射波長的第一
和第二熒光標記物。標記物可以是抗體。例如，方法還可以包括用第一光學標記物熒光抗
體和第二熒光抗體標記被分析物，其中第一和第二熒光抗體具有不同的發(fā)射波長。 檢測被分析物可以包括在第一熒光抗體的發(fā)射波長處記錄被分析物的第一個圖
像；在第二熒光抗體的發(fā)射波長處記錄被分析物的第二個圖像；以及比較第一和第二個圖像。 方法還可以包括檢測混合物的多個部分的每個中存在的復合物。例如，在微流體 裝置的每個混合物中，顆粒、如果存在的話，可以與可檢測標記物結(jié)合，形成復合物。在經(jīng)過 適合的溫育期以允許復合物形成后，檢測復合物的存在。復合物檢測的例子描述在國際專 利申請PCT/EP2006/068153中，在此以其全文引為參考。
多個不同部分的總體積可以為導入到微流體裝置中的液體樣品的體積的至少 90%。 方法還可以包括將總體積為V的液體樣品導入微流體裝置，其中混合物的總體積 可以為體積V的至少大約90%或至少大約95%。 方法還可以包括檢測混合物總體積的至少10 %中存在的復合物，例如混合物總體 積的10 %到90 % 、 15 %到50 %或20 %到30 %中存在的復合物。 微流體通道可以包含入口和與入口流體連通的檢測區(qū)。此外，微流體通道可以是 微流體裝置的微流體通道。 在將液體樣品導入微流體通道之前，方法還可以包括將液體樣品導入毛細管的孔 中。 毛細管典型情況下是標準毛細管(即首尾相接的毛細管，例如塑料毛細管)。首尾 相接的毛細管包含內(nèi)部孔和各在孔的一端的第一和第二個開口。毛細管的孔可以含有凝結(jié) 抑制劑，例如肝素。例如，毛細管可以用抗凝劑例如肝素涂層。 一般來說，毛細管的孔被構(gòu) 造成含有總體積為V的液體樣品。體積V —般為大約25微升或以下(例如大約20微升或 以下，大約15微升或以下，大約10微升或以下，大約5微升或以下)。 一般來說，體積V是 大約1微升或以上(例如大約3或5或7. 5微升或以上)。 在將液體樣品導入毛細管的孔和將液體樣品導入微流體通道的步驟之間，方法還 可以包括將毛細管與微流體裝置相連，液體樣品保留在毛細管中。 方法還可以包括對能夠指示液體樣品的一部分中存在的復合物的量的信號進行 光學檢測，該部分樣品存在于檢測區(qū)或微流體裝置的檢測區(qū)中。 在某些實施方案中，毛細管的出口開向具有預(yù)定體積的反應(yīng)腔室，例如大約5iiL、 10 ii L或20 ii L。在某些實施方案中，反應(yīng)腔室包含反應(yīng)物顆粒。反應(yīng)物顆?？梢园擞?物，例如用熒光染料標記的、并與樣品中待檢測的抗原具有親和性的抗體。例如，為了檢測 液體樣品中輔助性T細胞的數(shù)量，反應(yīng)物顆粒可以包含用第一熒光染料(例如藻紅蛋白) 標記的抗CD4+抗體、用第二熒光染料(例如藻紅蛋白-Cy5)標記的抗CD3+抗體、鹽和穩(wěn)定 化反應(yīng)物等。在某些實施方案中，第一個區(qū)域的內(nèi)表面覆蓋有加工樣品所必需的反應(yīng)物。用 于在液體樣品中檢測顆粒例如細胞的示例性分析方法，描述在例如W0 2007/051861中，在 此以其全文引為參考。正如在W0 2007/051861中描述的，檢測可以在微流體通道內(nèi)發(fā)生。 因此，微流體通道是至少部分透光的。例如，微流體通道可以由至少部分可透光的層覆蓋。
液體樣品的導入可以通過擠壓可彈性變形的壁來進行。擠壓可彈性變形的壁，可 以包括擠壓第一部分流體回路，并且不用首先完全釋放這種壓力，將擠壓的位點沿著流體 回路移動足以進行排出和導入步驟的量。 方法還可以包括首先完全釋放壓力，再進行指示了不同部分中存在的復合物的量 的信號的光學檢測的步驟。 在將液體樣品導入毛細管的孔和將至少一部分液體樣品導入微流體通道的步驟 之間，方法還可以包括制止液體樣品流出毛細管。 在某些實施方案中，微流體通道的檢測區(qū)不支持液體樣品的毛細管流動。
此外，微流體通道的內(nèi)表面的至少一部分可以是疏水的。 方法還可以包括將微流體裝置和光學檢測器中的至少一個相對于彼此進行移動，
14然后對指示了液體樣品的不同部分中存在的復合物的量的光學信號進行檢測。 附圖簡述

圖1描述了微流體裝置。
圖2是圖1的微流體裝置的側(cè)視圖。 圖3a顯示了圖1的微流體裝置的兩個測試區(qū)的頂視圖。
圖3b到3g描述了用于形成圖3a的測試區(qū)的方法。 圖4和5是被構(gòu)造用于操作圖1的微流體裝置的系統(tǒng)的側(cè)視圖；圖5僅僅是部分 側(cè)視圖。 圖6顯示了熒光強度數(shù)據(jù)作為沿著圖1的微流體裝置的通道的位置的函數(shù)。
圖7顯示了微流體裝置。 圖8a和8b各為圖7的微流體裝置的兩個測試區(qū)的頂視圖。
圖9顯示了微流體裝置。 圖10a是圖9的微流體裝置的橫截面?zhèn)纫晥D，也顯示了含有液體樣品材料的毛細管。 圖10b顯示了圖10a的微流體裝置，其中毛細管已經(jīng)與微流體裝置的入口相連，液 體樣品還沒有進入微流體裝置的微流體網(wǎng)絡(luò)。 圖10c顯示了圖10c的微流體裝置，其中一部分液體樣品已經(jīng)從樣品毛細管抽取 到微流體裝置的微流體網(wǎng)絡(luò)中。 圖10d顯示了圖10c的微流體裝置，其中從樣品毛細管抽取液體樣品到微流體裝 置的微流體網(wǎng)絡(luò)的步驟已經(jīng)完成。 圖10e顯示了圖10d的微流體裝置，其中一部分液體樣品沿著微流體網(wǎng)絡(luò)的長度 移動了距離Al。 圖10f顯示了圖10e的微流體裝置，以及在一部分液體樣品中存在的被分析物的 檢測。 圖11顯示了用于操作圖1、7和9任何一個的微流體裝置的操作系統(tǒng)。操作系統(tǒng)
可以包含圖4和5的操作系統(tǒng)的任何或所有特點。 圖12A-12D顯示了流體回路的示意圖。 圖13A-13B顯示了具有流體回路的盒的內(nèi)部剖視圖。 圖14A-14B顯示了熒光檢測器的內(nèi)部剖視圖。 圖15顯示了檢測器的光徑的設(shè)計圖。 圖16A-16B顯示了使用熒光檢測器進行細胞計數(shù)分析的圖解。 圖17顯示了使用熒光檢測器從細胞計數(shù)分析得到的兩張圖像的疊加。 詳細描述 用于分析樣品以確定多種被分析物的存在(例如定性地和/或定量地)的方法， 包括了將樣品導入微流體裝置的通道。微流體裝置可以具有單通道或多通道，這取決于分 析方法的設(shè)計和復雜性。在某些實施方案中，通道可以由裝置的第一和第二基質(zhì)的相對內(nèi) 表面限定。 —般來說，用于進行分析的裝置，可以包括被至少一個可變形表面界定的微流體 流通路徑。例如，微流體流通路徑被限定在裝置的第一和第二基質(zhì)的相對的內(nèi)表面之間，第二基質(zhì)與第一基質(zhì)相比，可以是相對撓性的。在另一個例子中，微流體流通路徑的一部分可 以包含可擠壓的區(qū)域?？蓴D壓區(qū)域可以是流體回路的長度，沿著該長度，回路的至少一個壁 是可擠壓的或可變形的。當對可變形表面施加局部壓力時，表面變形。在足夠的力下，可變 形的表面可以被擠壓到中斷微流體流通路徑的程度。相對于微流體流通路徑移動表面變形 的位置，可以移動微流體流通路徑中的液體，特別是當可變形表面被擠壓到中斷微流體流 通路徑的程度時。 在某些實施方案中，第二基質(zhì)與第一基質(zhì)相比可以相對有伸縮性。多個測試區(qū)可 以沿著通道空間分隔開。每個測試區(qū)包含固定化的探針化合物，它們被構(gòu)造用于參與相應(yīng) 被分析物的分析。典型情況下，每個分析包括探針化合物與相應(yīng)被分析物或包含被分析物 和反應(yīng)物(例如光學標記物)的相應(yīng)復合物的相互作用。 為了確定每個測試區(qū)的分析結(jié)果，可以對第二基質(zhì)的外表面施加局部壓力。壓力 引起第一和第二基質(zhì)的內(nèi)表面相隔的距離的局部減小。距離局部減小的位置與通道內(nèi)限定 的光學檢測區(qū)重疊。當距離減小時，流動物質(zhì)(例如樣品、未結(jié)合的光學探針和/或反應(yīng) 物)在檢測區(qū)從基質(zhì)之間被排出。將微流體裝置平移，使得測試區(qū)連續(xù)地通過檢測區(qū)。對 于每個測試區(qū)來說，當測試區(qū)經(jīng)過檢測區(qū)時，光學測定(例如通過熒光)分析的結(jié)果。根據(jù) 分析結(jié)果，確定了每種被分析物的存在(例如定量地和/或定性地)。 典型情況下，在將測試區(qū)與樣品接觸后，不用首先將測試區(qū)與洗滌溶液接觸，就可 以測定分析結(jié)果。 待測定的被分析物可以根據(jù)需要進行選擇。例如，被分析物可以與醫(yī)藥(例如診 斷學)、研究(例如藥物發(fā)現(xiàn))、工業(yè)(例如水或食品質(zhì)量監(jiān)測)或法醫(yī)學相關(guān)。示例性的 待測定被分析物包括生理學狀況例如疾病的標志物(例如診斷標志物或預(yù)測標志物)。這 些標志物包括心臟標志物(例如利尿鈉肽和肌鈣蛋白家族的成員)、癌癥標志物(例如核基 質(zhì)蛋白)、遺傳標志物(例如多核苷酸)、敗血病標志物、神經(jīng)學標志物，以及指示病原狀況 的標志物。被分析物可以指示病原體(例如細菌、病毒或真菌)的存在。
測試區(qū)的探針化合物可以根據(jù)待測定的被分析物按照需要進行選擇。示例性的探 針化合物包括多核苷酸、抗體和蛋白。 樣品液體可以根據(jù)待測定的被分析物按照需要進行選擇。示例性的樣品包括水， 水溶液，有機溶液，無機溶液，人類和其它動物的體液，例如尿液、痰液、唾液、腦脊液、全血 和源自血的材料例如血漿和血清。 參考圖1、2和4，微流體裝置100和操作系統(tǒng)500可用于對樣品進行分析，以確定 多種被分析物的存在(例如定性地和/或定量地)。微流體裝置100包含第一和第二基質(zhì) 102、104，限定了微流體網(wǎng)絡(luò)107，該網(wǎng)絡(luò)包括入口 106，以及與其連通的通道IIO和儲液器 108。在通道110中布置有多個空間分隔開的測試區(qū)112i。每個測試區(qū)112i含有一種或多 種反應(yīng)物(例如探針化合物)，被構(gòu)造用于參與被分析物的分析。通道110還包含參比區(qū) 117。裝置100還包含參比圖樣114，它含有多個標記116j。參比圖樣114提供了與測試區(qū) 112i的空間性質(zhì)有關(guān)的信息。 操作系統(tǒng)500包括外殼502，檢測器504，參比圖樣讀取器506，與檢測器504和圖 樣讀取器508相連的處理器。檢測器504是檢測樣品與測試區(qū)112i之間的相互作用的光 學熒光檢測器。檢測器504包含光源550 (例如發(fā)光二極管或激光二極管)，以及零階光敏檢測器552(例如光電倍增管或光電二極管，例如雪崩光電二極管)。在系統(tǒng)500運行過程 中，參比圖樣讀取器506讀取裝置100的參比圖樣114。
現(xiàn)在，我們更詳細地討論微流體裝置100和系統(tǒng)500。 典型情況下，第一基質(zhì)102，相對于用于激發(fā)和檢測來自熒光標記物的熒光的光的 波長來說，是透光的(例如透明的)。例如，第一基質(zhì)102可以透過至少大約75% (例如至 少大約85%，至少大約90% )的、大約350nm到大約800nm之間的至少一種波長的入射光。 第一基質(zhì)102可以由例如聚合物、玻璃或二氧化硅形成。第二基質(zhì)104典型地由可彎曲的 或撓性的材料(例如彈性聚合物)形成。第一基質(zhì)102可以比第二基質(zhì)104具有更低的撓 性。例如，第一基質(zhì)102可以是基本上剛性的(例如足夠剛性以便于裝置100的操作)。
通道110是毛細管通道。施加到入口 106的樣品113通過毛細作用力沿著通道 IIO遷移。通道110沿著長軸al定向。儲液器108包含排氣口 111以阻止氣體在樣品頂上 累積。 典型情況下，每個測試區(qū)112i包含反應(yīng)物(例如探針化合物)，被構(gòu)造用于在存 在被分析物的情況下提供可檢測的相互作用。相互作用可以包括例如相應(yīng)被分析物與測試 位點的探針化合物的結(jié)合，和/或相應(yīng)被分析物與探針化合物之間的化學反應(yīng)。反應(yīng)產(chǎn)生 可檢測的產(chǎn)物(例如沉淀)。示例性的探針化合物包括蛋白、抗體和多核苷酸。用于測定 被分析物的存在的適合的探針化合物，描述在2006年9月22日提交的美國臨時專利申請 60/826， 678中，以其全文引為參考。 還參考圖3a，每個測試區(qū)112i是細長的，具有長軸a2，其方向一般垂直于通道110 的長軸al。典型情況下，沿著長軸a2的長度與沿著測試區(qū)112的垂直方向的寬度w的比率 為至少2. 5 (例如至少5)。沿著a2的長度典型為至少大約200 y m(例如至少大約350微 米)，典型為大約2000 ii m或以下(例如大約1000 ii m或以下，大約750 y m或以下)。寬度 w典型為至少大約25 y m(例如至少大約50微米)，典型為大約500 ii m或以下(例如大約 250iim或以下，大約150iim或以下)。在示例性實施方案中，測試區(qū)112為大約500 y m長 和大約100iim寬。 在圖2中可以看到，沿著通道IIO，測試區(qū)112i與鄰近的測試區(qū)被相隔距離d7。測 試區(qū)112i之間的距離d7，將在下面與檢測器504的檢測區(qū)相關(guān)聯(lián)進一步討論。
可以根據(jù)需要形成測試區(qū)112i。 一般來說，反應(yīng)物可以與第一基質(zhì)接觸。然后，將 反應(yīng)物和基質(zhì)相對側(cè)移，以形成細長的測試區(qū)。 參考圖3b-3g，用于形成測試區(qū)112i的方法包括將反應(yīng)物從毛細管點樣器400分 發(fā)到第一基質(zhì)102上。在圖3b中，將一定量(例如大約2到8nl之間，大約3到5nl之間) 含有一種或多種探針化合物的反應(yīng)物溶液402導入毛細管點樣器的毛細管的遠端404。遠 端404典型情況下具有大約80到120 y m之間的直徑(例如大約100 y m)。反應(yīng)物溶液402 和基質(zhì)102最初相隔(例如不接觸)距離dl。典型情況下，dl為至少大約250 y m(例如大 約500 ii m)。 在圖3c中，將頂端404和基質(zhì)102帶到較小的分隔距離d2，使得反應(yīng)物溶液402 與基質(zhì)102的位置接觸。在較小的分隔距離d2處，遠端404靠近基質(zhì)102的位置(例如接 觸上，使得d2為零)。將遠端404和基質(zhì)102在鄰近的(例如接觸的)位置以分隔距離d2 維持一段時間(例如大約1秒或以下，大約0.5秒或以下，大約0. 25秒或以下)。在某些實施方案中，遠端402在鄰近(例如接觸的)位置維持的時間與零無法區(qū)分。
在圖3d中，將遠端404和基質(zhì)102移動到中間分隔距離d3，其中遠端404和基 質(zhì)通過遠端404的反應(yīng)物溶液402保持連通。典型情況下，中間分隔距離d3為至少大約 5 ii m(例如至少大約10 ii m，大約30 y m或以下，大約25 y m或以下)。在示例性實施方案 中，中間分隔距離d3是大約20 ii m。 在圖3e中，將遠端404和基質(zhì)102在中間分隔距離d3維持一段溫育時間，使得至 少某些(例如至少大約10%，至少大約25%，至少大約40%)遠端的反應(yīng)物溶液402蒸發(fā)， 使得反應(yīng)物溶液402的僅僅剩余部分402'保留下來。通常，僅僅大約75%或者更少的(例 如，大約50%或者更少)的反應(yīng)溶液402蒸發(fā)，使得溶液402'保留下來。溫育時間取決于 溶液402的本質(zhì)(例如探針化合物濃度和溶劑蒸汽壓)和遠端404的環(huán)境(例如相對濕度 和溫度)。典型的溫育時間比遠端和基質(zhì)在鄰近位置d2處保持的時間長(例如至少5倍 長、至少10倍長、至少20倍長、至少35倍長)。示例性的溫育時間是至少大約5秒(例如 至少大約10秒，至少大約20秒，至少大約25秒)。 在圖3f中，在中間分隔距離d3的溫育時間后，遠端404和基質(zhì)102中的至少一個 相對于另一個側(cè)向移動，用于將反應(yīng)物溶液402'沿著長軸a2分配。在圖3g中，在側(cè)向移 動完成時，遠端402和基質(zhì)102分開，使得它們不再通過反應(yīng)物溶液相連。例如，可以將遠 端404和基質(zhì)102返回到初始的分隔距離dl。可以重復方法(例如使用不同的反應(yīng)物溶 液)，以便分配到基質(zhì)的多個位置中的每個處的細長測試區(qū)上。 —般來說，遠端和基質(zhì)的垂直分隔距離可以通過相對于基質(zhì)移動遠端來改變。一 般來說，遠端和基質(zhì)的側(cè)向平移通過相對于遠端平移基質(zhì)來進行。示例性的反應(yīng)物溶液、探 針化合物和分配裝置，描述在2006年9月22日提交的美國臨時專利申請60/826， 678中， 在此以其全文引為參考。 在圖3a中可以看出，也可以參考圖8a和8b，用于生產(chǎn)細長測試區(qū)112i的方法，與 省略了遠端和基質(zhì)的側(cè)向移動步驟的分配方法相比，提供了探針化合物的更均勻的分布。 測試區(qū)112i包括第一部分119和第二部分121。第一部分119與第二部分121或不使用側(cè) 向移動步驟制備的測試區(qū)312i中相比，探針化合物的分布更加均勻。 回到圖l，參比區(qū)117不依賴于樣品中任何被分析物的存在而產(chǎn)生了可以被檢測 器504檢測的響應(yīng)。參比區(qū)117典型情況下包含熒光介質(zhì)(例如聚合物或固定化的熒光分 子)。參比區(qū)117將在下面涉及系統(tǒng)500的操作時進一步討論。 參比圖樣114的標記116j被構(gòu)造成可以被系統(tǒng)500的參比圖樣讀取器506讀取。 標記116j由磁性材料(例如磁性墨水)構(gòu)成。圖樣讀取器506可以檢測標記116j的存在。 參比圖樣114將在下面涉及系統(tǒng)500的操作時進一步討論。 回到圖4，操作系統(tǒng)500的外殼502包括用于接收裝置100的開口 510，含有壓輥 516和支撐輥518、520的擠壓系統(tǒng)，以及含有阻尼彈簧514的平移傳動器512。當裝置100 被接收到外殼500中時，檢測器504在通道110中限定了光學檢測區(qū)524。在使用中，裝置 100相對于檢測區(qū)524平移。測試區(qū)112i連續(xù)地進出檢測區(qū)。檢測器504連續(xù)地檢測樣品 和連續(xù)的測試區(qū)112i之間的相互作用。檢測器504也感應(yīng)參比區(qū)117。
參考圖6，檢測器504輸出信號600，作為裝置100所平移的距離(相對或絕對) 的函數(shù)。信號600包括指示了參比區(qū)117的峰617和指示了在每個區(qū)112i的相互作用的
18峰612i。同時，圖樣讀取器506輸出了指示標記116i的信號602，作為裝置100所平移的 距離的函數(shù)。因為標記116i與測試區(qū)112i在空間上相關(guān)，處理器508可以確定檢測區(qū)524 何時與特定的檢測區(qū)重合，即使測試區(qū)不顯示信號(例如對于測試區(qū)112a來說，表現(xiàn)出的 信號612a不能與零分辨開)。參比區(qū)117和相應(yīng)的信號617可以交替使用，或與信號602 組合使用，用于確定信號600的哪個區(qū)域?qū)?yīng)于特定的測試區(qū)。 接下來，我們討論擠壓系統(tǒng)。在使用中，擠壓系統(tǒng)擠壓裝置100，以減小通道110中 基質(zhì)102、104之間的距離。當裝置100被接收到外殼502中時，第一基質(zhì)102的外表面132 朝向支撐輥518、520，第二基質(zhì)104的外表面134朝向擠壓輥516。支撐輥518、520與擠壓 輥516之間的距離d4，小于裝置100的厚度tl (圖5)。因為第二基質(zhì)104與第一基質(zhì)102 相比相對撓性，擠壓輥516擠壓第二基質(zhì)104，引起第二基質(zhì)104的內(nèi)表面103與第一基質(zhì) 102的內(nèi)表面105之間的距離d6的局部減小。 在松弛狀態(tài)下(例如未擠壓狀態(tài))(圖2)，距離d6典型為至少大約25 y m(例如至 少大約50 ii m，至少大約75 ii m)。在未擠壓狀態(tài)下，距離d6典型為大約500 y m或以下(例 如大約250 ii m或以下)。在距離局部減小的狀態(tài)下(例如局部擠壓狀態(tài))(圖4中的測試 區(qū)112e)，距離d6典型為大約15iim或以下(例如大約10 y m或以下，大約5 y m或以下，例 如大約2. 5 ii m或以下)。在被距離減小狀態(tài)分開的表面之間進行的熒光檢測的例子，描述 在國際專利申請PCT/EP2005/004923的美國連續(xù)案中，在此以其全文引為參考。
正如在圖4和5中所見，擠壓系統(tǒng)在通道110的僅僅一部分長度上減小通道110 中的距離d8。典型情況下，距離d8比測試區(qū)112i相隔的距離d7長大約5倍或以下(例如 長大約3倍或以下，大約長2倍或以下，大約同樣長)。 典型情況下，距離d7足夠大，使得由檢測器504限定的光學檢測區(qū)524不能覆蓋 通道110中所有的測試區(qū)112i (例如5個或以下，3個或以下，2個或以下)。在示例性實施 方案中，d7足夠大，使得檢測區(qū)524沿著通道110的長軸al的寬度不能同時接觸超過3個 (例如不超過2個，不超過1個)測試區(qū)112i。檢測區(qū)524垂直于通道110的長軸al的寬 度典型與測試區(qū)112i沿著其軸a2的長度大約相同或更小(例如不超過其75%，不超過其 50%，不超過其30% )。 在使用中，樣品液體被施加到入口 106。毛細作用力將樣品沿著通道110拉向儲 液器108。樣品液體沿著通道110與測試區(qū)112i接觸。樣品中的被分析物與測試區(qū)中的 探針化合物相互作用。在適當?shù)臏赜龝r間后，將裝置100插入外殼500，以壓緊平移傳動器 512的彈簧514。在插入裝置100的過程中，擠壓輥516和支撐輥520是空間分隔的，使得 裝置100沒有被擠壓。 一旦裝置100完全插入后，檢測區(qū)524的位置與參比區(qū)117大體重 疊。擠壓輥516局部擠壓通道110(圖5)。 當樣品的被分析物與測試區(qū)112i之間的相互作用準備好用于測定時(例如在溫 育期后)，平移傳動器512相對于檢測器504的檢測區(qū)524平移裝置100 (圖4)。測試區(qū) 112i連續(xù)地通過檢測區(qū)524，并被來自光源的光照射。擠壓輥516的安置使得距離d6的局 部減小在空間上對應(yīng)于檢測區(qū)524。因此，光檢測器連續(xù)地檢測來自測試區(qū)112i的光，其 中每個測試區(qū)都在距離局部減小的狀態(tài)(例如局部擠壓的狀態(tài))(圖4中的測試區(qū)112e)。 從每個測試區(qū)產(chǎn)生的熒光被透鏡收集，并被光檢測器檢測。持續(xù)進行距離d6的連續(xù)局部減 小和光學測定，直到每個測試區(qū)都已經(jīng)平移通過檢測區(qū)524。
除了每個測試區(qū)的探針化合物和被分析物之外，在通道110中，在第二基質(zhì)104的內(nèi)表面103與第一基質(zhì)102的內(nèi)表面105之間還存在其它的物質(zhì)。這樣的物質(zhì)的例子包括樣品附隨物和反應(yīng)物(例如未結(jié)合的或未反應(yīng)的光學探針)。這些物質(zhì)典型地產(chǎn)生背景發(fā)射(例如熒光或散射光)，它們與樣品和測試區(qū)112i的相互作用無關(guān)。背景發(fā)射的強度一般與對應(yīng)于檢測區(qū)524的位置處內(nèi)表面之間剩余的這些物質(zhì)的量成正比。但是，指示了每個測試區(qū)中的相互作用的光學信號的強度，在空間上位于該測試區(qū)附近。光檢測器接收并檢測了指示相互作用和背景發(fā)射的熒光。 參考圖9、 10a和ll，微流體裝置700和操作系統(tǒng)500'可用于分析樣品，以確定一種或多種被分析物的存在(例如定性地和/或定量地)。在典型的實施方案中， 一種或多種被分析物含有顆粒，例如病毒、細菌、細胞、真菌或孢子。例如，可以檢測在國際專利申請PCT/EP2006/068153(以其全文引為參考)中描述的任何顆粒。 微流體裝置700包括第一和第二基質(zhì)702、704，它們限定了微流體網(wǎng)絡(luò)707，該微流體網(wǎng)絡(luò)包含入口 706和與其連通的多個通道710a、710b、710c，各具有相應(yīng)的儲液器708a、 708b、 708c 。每個儲液器包含反應(yīng)物物質(zhì)709a、 709b、 709c (例如探針化合物)，它們被構(gòu)造用于參與被分析物的分析。裝置700可以包含參比圖樣114，包含了多個標記116j(沒有在圖9、10a、11中顯示)，它們可以與上面討論的相同。 操作系統(tǒng)500'包括外殼502'、檢測器504'、參比圖樣讀取器(未顯示)，以及與檢測器504'和圖樣讀取器504相連的處理器。檢測器504是檢測含有被分析物(例如顆粒)與可檢測標記物(例如光學標記物)的復合物的光學熒光檢測器。適合的標記物的例子描述在國際專利申請PCT/EP2006/068153中，在此以其全文引為參考。檢測器504'包含光源550'(例如發(fā)光二極管或激光二極管)，以及光學檢測器552'(例如一階檢測器，例如二極管陣列或多維檢測器(例如成像檢測器，例如電荷耦合檢測器))。光學檢測器典型地并空間選擇性地檢測來自微流體裝置的每個通道中限定的相應(yīng)檢測區(qū)的光。
現(xiàn)在，我們更詳細地討論微流體裝置700和系統(tǒng)500'。 典型情況下，第一基質(zhì)702，對于用于激發(fā)和檢測來自熒光標記物的熒光的光的波長來說，是透光的(例如透明的)。例如，第一基質(zhì)702可以透過至少大約75% (例如至少大約85%，至少大約90% )的、大約350nm到大約800nm之間的至少一種波長的入射光。第一基質(zhì)702可以由例如聚合物、玻璃或二氧化硅形成。第二基質(zhì)704典型地由可彎曲的或撓性的材料(例如彈性聚合物)形成。第一基質(zhì)702可以比第二基質(zhì)704具有更低的撓性。例如，第一基質(zhì)702可以是基本上剛性的(例如足夠剛性以便于裝置700的操作)。
通道710a-710c典型情況下支持其中液體樣品的移動，但典型情況下不是毛細管通道(即典型情況下液體不通過毛細管用力在裝置700的通道中移動)。例如，通道的一個或多個內(nèi)表面可以是疏水的，以抑制液體樣品的毛細管移動。任選地或此外，通道的內(nèi)部尺寸可能太大而不允許毛細作用力驅(qū)動其中樣品的實質(zhì)性移動。當然，在某些實施方案中，通道可以是毛細管通道。 顯示的裝置700具有3個通道和相應(yīng)的儲液器，但是一般來說具有N個通道和相應(yīng)的儲液器，其中N至少為l，典型情況下小于20。 典型情況下，每個儲液器708i含有反應(yīng)物735i (例如可檢測標記物，例如光學標記物)，它們被構(gòu)造用于在存在被分析物的情況下提供可檢測的相互作用。相互作用可以包括例如相應(yīng)被分析物與標記物的結(jié)合，從而形成含有被分析物和一種或多種標記物的復合物。這樣的復合物的例子描述在國際專利申請PCT/EP2006/068153中(以其全文引為參考)。典型情況下，每種反應(yīng)物被構(gòu)造成允許檢測不同的被分析物。 參考圖10b-10f，裝置700可以操作如下。將一定量液體樣品738(例如生物學液體例如血液、唾液或尿液)導入毛細管736。毛細管736典型情況下是標準毛細管(例如首尾相接的毛細管，例如塑料毛細管)。首尾相接的毛細管包含內(nèi)部孔和各在孔的一端的第一和第二個開口。毛細管可以用抗凝劑例如肝素涂層。適合的毛細管的例子包括20ii 1肝素涂層的毛細管，可以從Kabe Labortechnik獲得(Niirnbrecht-Elsenroth，
Deutschland ;http://www. kabe-labortechnik. de/index. php 7 sprache = de&akt—seite
=startseite—produkte. php)。 一般來說，毛細管的孔被構(gòu)造成含有總體積為V的液體樣品。體積V—般為大約25微升或以下(例如大約20微升或以下，大約15微升或以下，大約10微升或以下)。 一般來說，體積V是大約5微升或以上(例如大約7. 5微升或以上)。
正如在圖10b中看到的，裝置700的入口 706被構(gòu)造成容納毛細管736。典型情況下，在施加導入力之前，樣品737保留在毛細管736中，不進入微流體裝置。
正如在圖10c中看到的，可以通過減小基質(zhì)702、704的內(nèi)表面之間的距離以減小微流體網(wǎng)絡(luò)中的體積，來對樣品737施加導入力。例如，圖10c顯示了沿著微流體網(wǎng)絡(luò)的一部分移動的輥子。典型情況下，擠壓導致相對的內(nèi)表面互相接觸。當通道的給定區(qū)域降壓后，通道內(nèi)的體積增加時，作用于液體樣品737的內(nèi)表面739上的氣體壓力的降低，迫使樣品進入微流體網(wǎng)路。擠壓和減壓可以在輥子716沿著微流體網(wǎng)絡(luò)的單一連續(xù)運動中進行，或者可以多個步驟連續(xù)進行，如同在蠕動形式中那樣。 正如在圖10d中看到的，基本上所有(例如至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、基本上所有)體積V的液體樣品737被抽取到微流體網(wǎng)絡(luò)中。在示例性實施方案中，體積V的至少90%被抽取到網(wǎng)絡(luò)中。 微流體網(wǎng)絡(luò)中的液體樣品進入每個通道710i和儲液器708i，并將反應(yīng)物在每個儲液器中移動，形成了混合物。典型情況下，混合物的形成幫助引起了液體樣品在微流體網(wǎng)絡(luò)中的牽連移動(bulk motion)。這種牽連移動典型情況下通過擠壓和減壓微流體裝置以減小基質(zhì)702、704之間的內(nèi)部距離所引起。擠壓和降壓可以蠕動的方式，通過將輥子716和微流體裝置700中的至少一個相對于彼此進行重復移動來進行。 —般來說，在裝置700的N個通道中通過混合反應(yīng)物735i形成的混合物的總體積，包括了導入裝置700的液體樣品量的至少大約70% (例如至少大約80%，至少大約90%，至少大約95%，基本上所有)。在示例性的實施方案中，在裝置700的N個通道中通過混合反應(yīng)物735i形成的混合物的總體積，包括了導入裝置700的液體樣品量的至少大約90%。 在微流體裝置的每個混合物中，顆粒，如果存在的話，與可檢測標記物混合，形成了復合物。在允許復合物形成的適當?shù)臏赜诤?，檢測復合物的存在。每種反應(yīng)物735i典型地被構(gòu)造成允許檢測不同的被分析物。復合物檢測的例子描述在國際專利申請PCT/EP2006/068153中，以其全文引為參考。 參考圖10f，檢測典型地發(fā)生在裝置中每種混合物的一部分中。 一般來說，檢測可以在每種混合物的多個不同部分中進行。例如，每種混合物的不同部分，可以通過在擠
21壓狀態(tài)下移動輥子716以便將一部分新鮮的混合物移動到每個檢測區(qū)中，來移動通過檢測區(qū)。這可以進行多次，以便可以對基本上所有(例如至少70%，至少80%，至少90%，至少95%，基本上所有)的每種混合物進行檢測。在該實施方案中，檢測使用輥子716在擠壓狀態(tài)下進行。已經(jīng)進行過檢測的混合物進入毛細管736，它用作廢液容器。
在某些實施方案中，檢測通過相對于光學檢測器掃描裝置700來進行，以便每次檢測連續(xù)地包含不同部分的溶液。這可以進行多次，以便可以對基本上所有(例如至少70 % ，至少80 % ，至少90 % ，至少95 % ，基本上所有)的每種混合物進行檢測。在該實施方案中，檢測使用輥子716在降壓狀態(tài)下進行。 已經(jīng)描述了用于進行分析的方法和裝置。接下來將討論其它實施方案的例子。
盡管入口 106被描述為無障礙的開口，但其它構(gòu)型也是可能的。例如，入口可以被構(gòu)造成帶有注射器接頭(例如氣密性接頭)，用于連接注射器?？蛇x地，入口可以構(gòu)造成密封墊，樣品可以通過它用針頭導入。另一種選擇，入口可以裝有單向閥，允許樣品導入但不能流出。另一種選擇，入口可以構(gòu)造成接收標準毛細管(例如首尾相接的毛細管，例如塑料毛細管)。毛細管可以用抗凝劑例如肝素涂層。適合的毛細管的例子包括20iU肝素涂層的毛細管，可以從KabeLabortechnik獲得(Niirnbrecht-Elsenroth，Deutschland :htto:〃www.kabe_labortechnik.de/index.php sprache = de&akt seite = startseiteprodukte. php)。 盡管微流體裝置被描述成通過毛細作用填充，但其它實施方案也可以使用。例如，可以對系統(tǒng)500進行設(shè)計，以便在將樣品施加到入口之前減小微流體網(wǎng)絡(luò)的體積。當樣品加入時，內(nèi)部體積增加，從而將樣品抽入。這樣的體積減小可以使用例如擠壓輥516來實現(xiàn)。例如，微流體裝置可以接收在外殼502中，使得平移傳動器512的阻尼彈簧514處于擠壓狀態(tài)。擠壓輥516的位置使得在對應(yīng)于儲液器108的位置擠壓裝置100。這種擠壓減小了儲液器108的內(nèi)部體積。體積的減小與裝置100中將接收的樣品的體積大約同樣大(例如大至少大約25% ，大至少50% )。當儲液器108在擠壓狀態(tài)下時， 一定體積的樣品被施加到裝置100的入口 106。將擠壓輥516從入口 106朝向裝置100的相反末端137撤回。當輥子516從儲液器108移開時，儲液器壓力降低，從而增加了微流體網(wǎng)絡(luò)的內(nèi)部體積。體積的增加產(chǎn)生了真空，將樣品吸入到裝置中。 盡管描述了具有開口毛細管通道的微流體裝置，但其它實施方案也可以使用。例如，通道可以包含介質(zhì)，介質(zhì)沿著通道的至少一部分長度占據(jù)了通道的至少某些(例如大部分或所有)橫截面。典型情況下，介質(zhì)是其上可以固定化多種探針化合物的介質(zhì)，以便限定相應(yīng)的空間分隔的測試區(qū)(例如捕獲體積)，每個測試區(qū)具有三維上布置的捕獲位點。介質(zhì)上的孔或洞使液體沿著通道滲透(例如通過毛細作用)。液體沿著通道的運動，可以由例如上面描述的在通道內(nèi)產(chǎn)生真空來輔助或誘導。典型情況下，探針化合物固定在多孔介質(zhì)上，沿著通道限定空間分隔的測試區(qū)。被分析物與測試區(qū)的探針化合物的相互作用，可以如對于裝置100的測試區(qū)112i所述進行連續(xù)測定。因為每個測試區(qū)三維布置，因此減小通道的相對內(nèi)表面之間的距離，就減小了測試區(qū)的固定探針化合物所占據(jù)的捕獲體積。光學檢測使用測試區(qū)在減小體積(即減小距離)的狀態(tài)下進行。 盡管測試區(qū)112i已經(jīng)被顯示為細長的，但是其它構(gòu)造也可以使用。例如，參考圖7，微流體裝置300包含了多個測試區(qū)312i，每個具有通常為圓形的構(gòu)型。除了形狀的差異之外，測試區(qū)312i可以與裝置100的測試區(qū)112i相同。除了測試區(qū)中的差異之外，裝置100和300是相同的。 盡管用于形成測試區(qū)112i的方法已經(jīng)被描述為將遠端404和基質(zhì)102從初始的分隔距離dl(圖3b)移動到鄰近的分隔距離d2(圖3c)，并移動到中間的分隔距離d3(圖3d)，然后開始遠端404和基質(zhì)102的側(cè)向移動(圖3f)，但是也可以進行其它實施方案。例如，可以當遠端404和基質(zhì)102處于鄰近分隔d2時，將遠端404和基質(zhì)102側(cè)向移動。在該實施方案中，分隔d2典型地大于零。 盡管形成測試區(qū)112i的方法已經(jīng)被描述為包含了將遠端404和基質(zhì)102在中間分隔距離d3處維持一段溫育時間，直到只有反應(yīng)物溶液402的剩余部分402'保留的步驟，但也可以進行其它的實施方案。例如，遠端404和基質(zhì)102的側(cè)向移動，可以在遠端404和基質(zhì)102從鄰近分隔距離d2(圖3c)移動到分隔距離d3(圖3d)時立即開始。換句話說，溫育時間可能與零不能分辨。作為另一個例子，在溫育過程中，蒸發(fā)反應(yīng)物溶液可以用將附加的反應(yīng)物溶液導入毛細管末端來代替。因此，在溫育過程中，在毛細管末端處反應(yīng)物的總量增加。 盡管用于形成測試區(qū)112i的方法已經(jīng)被描述為包括在將遠端404和基質(zhì)102在分隔距離d3維持一段溫育時間，但是也可以進行其它的實施方案。例如，在溫育期間，分隔距離d3可以改變。例如，在溫育期間，末端404可以相對于基質(zhì)102側(cè)向或垂直振動。任選地或另外，在側(cè)向移動過程中，末端404可以相對于基質(zhì)102側(cè)向或垂直振動。這樣的振動在溫育或側(cè)向移動過程中，可以增強探針分子向第一基質(zhì)的運輸。 盡管用于形成測試區(qū)112i的方法已經(jīng)被描述為使用了毛細管點樣器，但是其它的點樣器也可以使用。例如，材料可以從實心點樣器(例如實心桿)點樣。
盡管用于形成測試區(qū)112i的方法已經(jīng)被描述為將一定量的反應(yīng)物溶液導入到毛細管上樣器(圖3b)的毛細管遠端，并將末端和基質(zhì)帶到較小的分隔距離d2，以便反應(yīng)物溶液402與基質(zhì)102的位置相接觸，但是也可以進行其它的實施方案。例如，可以僅僅在遠端和基質(zhì)被帶到較小的分隔距離后(例如在遠端與基質(zhì)接觸后)才將反應(yīng)物溶液導入遠端。
盡管已經(jīng)描述了用于連續(xù)減小通道的內(nèi)表面之間的距離的方法和微流體裝置讀取器，但是其它構(gòu)造也是可能的。例如，微流體裝置讀取器可以被構(gòu)造成同時沿著大多數(shù)(例如基本上所有或所有)通道減小內(nèi)表面之間的距離。然后，讀取器沿著通道平移檢測器的檢測區(qū)，使得不同的測試區(qū)被連續(xù)讀取。 盡管已經(jīng)描述了具有第一種相對剛性的基質(zhì)和第二種相對撓性的基質(zhì)的微流體裝置，但其它的實施方案也可以使用。例如，限定通道的兩個相對內(nèi)表面的基質(zhì)可以都是撓性的。在這樣的實施方案中，光學檢測器的一部分可以構(gòu)成擠壓系統(tǒng)的一部分。例如，微流體裝置可以在擠壓輥和檢測器的光學元件之間平移。 盡管參比圖樣已經(jīng)被描述為提供了與微流體裝置的測試區(qū)的空間性質(zhì)有關(guān)的信息，但參比圖樣也可以提供附加的或可替換的信息。例如，參與圖樣可以提供與微流體裝置的測試區(qū)的生理化學性質(zhì)有關(guān)的信息。這樣的性質(zhì)包括了測試區(qū)被構(gòu)造用于分析的被分析物。其它性質(zhì)包括儲存在裝置上的反應(yīng)物的身份和性質(zhì)，以及裝置的數(shù)據(jù)信息(例如產(chǎn)品有效期)。 盡管已經(jīng)描述了含有磁性標記的參比圖樣，但是其它標記也可以使用。例如，標記可以形成與周圍的物質(zhì)相比具有不同光學密度或反射率的區(qū)域。參比圖樣讀取器是光學讀取器，典型情況下被構(gòu)造用于通過透射或反射讀取標記。 在其它實施方案中，第一基質(zhì)可以包含例如通過注模形成的通道。通道具有顯著大于其第二和第三維(即寬度和深度)的第一個維度(長度)。通道可以具有長方形、v形(三角形)、U形或其它形狀的橫截面。在某些實施方案中，沿著通道的長度，通道的橫截面的形狀和/或維度可以變化。第二基質(zhì)可以通過粘合劑附著在第一基質(zhì)上。第二基質(zhì)可以由例如透明帶形成。第二基質(zhì)(例如帶)可以具有機械剛性，使得與第二基質(zhì)(例如帶)的外表面的機械接觸，基本上不使第二基質(zhì)的內(nèi)表面變形。 在某些實施方案中，通道可以由管、導管、毛細管等的內(nèi)表面限定。通道可以具有長方形、V形(三角形)或其它形狀的橫截面。在某些實施方案中，沿著通道的長度，通道的橫截面的形狀和/或維度可以變化。通道的一部分可以是透光的。 在某些實施方案中，通道包含一種或多種參比和/或比對標記，例如被構(gòu)造可以用分析所使用的檢測系統(tǒng)檢測的確定的結(jié)構(gòu)或固定的分子。比對標記包括例如固定化的熒光珠、固定化的熒光聚合物、蛋白、核酸等。比對標記還可以包括物理結(jié)構(gòu)例如微觀結(jié)構(gòu)等。
裝置可以被構(gòu)造成在將樣品導入通道后，形成流體回路。流體回路將液體樣品封閉在無限循環(huán)中。當液體樣品封閉在流體回路中時，液體樣品的體積小于流體回路的總體積，流體回路中剩余的體積可以被運輸流體占據(jù)。運輸流體可以是與樣品液體基本上不混溶的液體(例如借助親水性/疏水性，或密度的差異)。運輸流體可以是氣體，例如空氣。典型情況下，液體樣品將在流體回路中作為連續(xù)的液段存在。 流體回路的一部分包括可擠壓的區(qū)域?？蓴D壓的區(qū)域可以是一段流體回路，沿著它回路的至少一個壁是可擠壓的或可變形的。當向可擠壓區(qū)域施加局部壓力時，壁變形。在足夠的力下，壁可以被擠壓到中斷流體回路的程度。最通常情況下，流體回路將在預(yù)定的位置中斷，在那里通道被填滿運輸流體。 —旦流體回路被中斷，流體回路中流體樣品的位置，可以通過相對于流體回路的剩余部分移動中斷點的位置來操縱。移動中斷點，減少了中斷點一側(cè)的運輸流體的體積，相應(yīng)地增加了中斷點另一側(cè)的運輸流體的體積。體積的變化導致液體樣品兩端(即液體樣品和運輸流體相會的地點)的壓力差。液體樣品作出響應(yīng)，通過在流體回路中移動來使壓力平衡。 —個或多個測試區(qū)可以沿著通道空間分隔開。典型情況下，每個分析包括探針化合物與相應(yīng)的被分析物、或與包含被分析物和反應(yīng)物(例如光學標記物)的相應(yīng)復合物的相互作用。 通道中樣品的位置可以通過傳動器或輥子來控制，它們可以被構(gòu)造成對可擠壓區(qū)域的一部分施加局部壓力。將微流體裝置相對于傳動器或輥子平移，使得樣品移動到通道中的目標位置?？蛇x地，輥子可以移動，而裝置保持靜止。 圖12A顯示了封閉狀態(tài)下的流體回路10。流體回路10包括第一個區(qū)1、微流體通道2、第二個區(qū)3和入口 4。在封閉狀態(tài)下，第二個區(qū)3與入口4緊密相連。圖12B顯示了開放狀態(tài)下并準備在入口 4接收液體樣品5的流體回路10。液體樣品5與入口 4接觸后，毛細管作用將液體樣品5吸入第一個區(qū)1。圖12C-12D顯示了已施加樣品后封閉狀態(tài)下的流體回路。輥子6位于第二個區(qū)3，使得第二個區(qū)或者處于未擠壓狀態(tài)(如圖12C中)，或
24者處于擠壓狀態(tài)(如圖12D中)?？梢酝ㄟ^定位輥子6，使得第二個區(qū)3處于擠壓狀態(tài)，并且在維持擠壓狀態(tài)的同時，相對于第二個區(qū)3移動輥子6 (如圖12D中的箭頭所示)，來調(diào)整流體回路10中液體樣品5的位置。因為流體回路是封閉的，輥子6的移動在輥子的兩側(cè)產(chǎn)生了壓力差；壓力差誘導了液體樣品的移動，從而恢復相等的壓力。流體回路可以被構(gòu)造成在盒中工作。在某些實施例中，流體回路可以具有能夠通過變形進行擠壓的微流體流通路徑、包含檢測區(qū)的微流體通道、以及可以可逆地或不可逆地形成封閉流體回路的密封元件。
圖13A-13B顯示了示例性的盒100的內(nèi)部剖視圖。盒100包含基質(zhì)101，蓋子102，以及包含第一個區(qū)103、導管108、通道105、第二個區(qū)104和入口 /密封連接件109的流體回路。通道105可以由至少部分可透光的層覆蓋。第一個區(qū)103可以是例如毛細管，被選擇用于容納所需的樣品體積(例如1 y L到20 ii L， 2到10 ii L，或大約5 ii L)。毛細管在其內(nèi)表面上可以用抗凝劑涂層。毛細管的入口 109被構(gòu)造用于接收樣品106。在某些實施方案中，毛細管的出口開向反應(yīng)腔室110，腔室具有預(yù)定的體積，例如大約5 ii L、 10 ii L或20 ii L。在某些實施方案中，反應(yīng)腔室IIO包含反應(yīng)物顆粒107。反應(yīng)物顆?？梢园ㄓ脽晒馊玖蠘擞浀?、并與樣品中待檢測的抗原具有親和性的抗體。例如，為了檢測液體樣品中輔助T細胞的數(shù)量，反應(yīng)物顆?？梢园玫谝粺晒馊玖?例如藻紅蛋白)標記的抗CD4+抗體、用第二熒光染料(例如藻紅蛋白_Cy5)標記的抗CD3+抗體、鹽和穩(wěn)定化反應(yīng)物等。在某些實施方案中，第一個區(qū)域的內(nèi)表面覆蓋有加工樣品所必需的反應(yīng)物。用于在液體樣品中檢測顆粒例如細胞的示例性分析方法，描述在例如W02007/051861中，在此以其全文引為參考。與反應(yīng)腔室110流體連通的導管108，將反應(yīng)腔室與通道105的第一個末端相連。正如在W02007/051861中描述的，檢測可以在通道內(nèi)發(fā)生。因此，通道是至少部分透光的。例如，通道105可以由至少部分可透光的層覆蓋。通道105的第二個末端通過導管108與第二個區(qū)104的第一個末端相連。第二個區(qū)是至少部分撓性的，使得第二個區(qū)的內(nèi)徑可以減小到零。例如，第二個區(qū)可以是彈性硅酮管等。第二個區(qū)的第二個末端固定在蓋子102中，蓋子適合于施加到基質(zhì)上并支撐第二個區(qū)。通過打開蓋子，第一和第二個區(qū)之間的密封連接件109被打開，通過關(guān)閉蓋子，第一和第二個區(qū)之間的密封連接件109被關(guān)閉。
在運輸條件下，裝置可以被關(guān)閉，即第二個區(qū)在連接件109處與第一個區(qū)形成密封連接。可選地，裝置可以在打開狀態(tài)下運輸。在某些實施方案中，裝置包含(例如為了安全的目的)機械裝置，它被構(gòu)造用于阻止盒在首先關(guān)閉后打開。當蓋子102中的密封元件與毛細管103的末端形成不透流體的連接時，連接件109是關(guān)閉的。在操作中，用戶打開蓋子，從而打開了第一個區(qū)的第一個末端。用戶將打開的第一個區(qū)的末端與樣品液體、例如通過手指針剌產(chǎn)生的血滴相接觸。因此，毛細管103充滿樣品。用戶關(guān)閉蓋子，從而關(guān)閉了第一和第二個區(qū)之間的連接件109。這時，流體回路在反應(yīng)腔室、導管、通道和第二個區(qū)中包含連續(xù)的、預(yù)定體積的樣品液體、反應(yīng)物顆粒、以及連續(xù)體積的運輸流體(例如空氣)。用戶將裝置放置在被設(shè)計用于操作裝置的機器中。機器包括被構(gòu)造用于擠壓第二個區(qū)的傳動器、檢測器和控制器。傳動器擠壓第二個區(qū)，在擠壓點將其直徑減小到零。當裝置和傳動器在處于擠壓狀態(tài)的同時相對彼此移動時，在樣品體積的一端，運輸流體中的壓力將增加，同時在樣品體積的另一端，壓力將降低。樣品體積將在流體回路中移動，直到樣品體積每一端上的壓力相等。 通道105可以是疏水的，使得當不施加外力時樣品將不移動到通道105中。在某些實施方案中，反應(yīng)物顆粒107附近的壁也可以是疏水的。當使用親水材料時，與疏水材料相比，反應(yīng)物顆粒的長期穩(wěn)定性將變壞。 在一個實施方案中，傳動器被固定在機器中，裝置相對于工具移動，以進行擠壓。正如在W0 2007/051861中描述的，傳動器是例如輥子。 裝置可以在機器中移動，使得樣品移動至反應(yīng)腔室中，從而將反應(yīng)物顆粒溶解在該腔室中。抗體將與樣品中相應(yīng)的抗原結(jié)合。根據(jù)樣品的類型，抗原可以位于懸浮在樣品液體中的顆粒上(例如在血液樣品中細胞的表面上)。因為抗體是標記的(例如用熒光染料)，一旦與它們相應(yīng)的抗原結(jié)合后，抗原也被標記。參見例如W0 2007/051861。通過相對機器在同樣的方向上進一步移動裝置，樣品被移動到通道中。 一旦通道被填滿，檢測就發(fā)生了。 理想情況下，檢測器是小的、廉價的、通用的；即除了本文描述的單一應(yīng)用之外，它還適合于其它應(yīng)用。檢測器可以是熒光顯微鏡，優(yōu)選為相對于盒來說具有非常小的外部尺寸和低的高度的熒光顯微鏡。檢測器可以能夠?qū)Τ叽鏭 5 ii m的物體進行成像，并被構(gòu)造用于檢測由分析中使用的熒光染料所發(fā)射的波長的信號。光源可以是高功率LED，它發(fā)射的光在適合于激發(fā)分析中使用的熒光染料的光譜范圍內(nèi)。如果使用不同的染料，例如至少兩種發(fā)射兩種不同波長的光的染料，在至少兩種不同波長的每種處，都可能進行檢領(lǐng)"檢測器可以包含聚焦機械裝置和照相機。 通常情況下，熒光顯微術(shù)使用非常強的光源，因為具有幾乎平行的光束，只有一小部分發(fā)射光被使用上(空間角 2° )。通過使用聚光鏡和檢測器透鏡收集從光源發(fā)射的較大部分的光，可以使用功率較小的光源(例如LED)。熒光顯微術(shù)傳統(tǒng)上在光學保真性方面具有非常高的價值；就此而言，本領(lǐng)域教導了與使用聚光鏡的高的空間角相背離。事實上，本領(lǐng)域傾向于教導使用相對重的、體積大的、復雜的光學系統(tǒng)來獲得高的光學保真性。
參考圖14，示例性的檢測器500包括主體501，它包括第一個光徑502和第二個光徑503。在某些例子中，每個光徑可以獨立地具有一般為圓柱的形狀或其它適合的構(gòu)型。第一個光徑502代表激發(fā)光徑；第二個光徑503代表檢測光徑。 第一個光徑502將光源505和盒516連接。光源505可以是高功率LED(例如Platinum Dragon LED (Osram))，具有455nm、470nm和528nm的發(fā)射波長，視角為120° (朗伯發(fā)射器)。當使用熒光染料時，光源按照在分析中使用的熒光染料的激發(fā)波長進行選擇。例如，當使用藻紅蛋白和藻紅蛋白-075時，選擇發(fā)射具有大約52011111波長的光的光源，當使用藻紅蛋白和PerCP時，選擇發(fā)射大約480nm的光的光源。聚光鏡506 (例如由topaz制造，折射率為1. 533)將LED發(fā)射的光聚集到第一個光徑502中?？紫?02a被構(gòu)造成允許最大空間角為13.5°或以下，用于照射分色鏡504。光徑502還包含帶通濾光片507 (激發(fā)濾光片)，允許波長在505nm到530nm之間的光通過。因此，剩余的激發(fā)波長為大約528nm。 光徑503經(jīng)分色鏡504將CMOS照相機與物體516相連，并被構(gòu)造成相對光徑502成一定角度(在圖14中顯示為90° )。光徑503還包括第一個發(fā)射濾光片510。在某些實施方案中，濾光片510被固定在濾光片轉(zhuǎn)換器512上。濾光片轉(zhuǎn)化器512可以含有附加的發(fā)射濾光片，例如濾光片513。發(fā)射濾光片510和513可以根據(jù)預(yù)定的發(fā)射波長設(shè)置進行選擇，例如盒中用于標記反應(yīng)物的熒光染料的發(fā)射波長。例如，濾光片510和513可以被選擇為分別透過具有590nm和685nm波長的光，這些波長對應(yīng)于藻紅蛋白和藻紅蛋白_Cy5的發(fā) 射波長。光徑503包含孔隙503a，被構(gòu)造以允許分色鏡504上的最大空間角為13. 5° 。
分色鏡504被構(gòu)造用于將檢測光徑503與激發(fā)光徑502分開。在某些實施方案中， 它是短程分色鏡，允許波長小于等于568nm的光通過，而波長大于568nm的光被反射。因此， 分色鏡504允許來自激發(fā)光徑的光通過，而將來自物體516的光反射到檢測光徑中。同樣， 分色鏡504的物理性質(zhì)，根據(jù)在分析中使用的標記物(例如熒光標記物)進行選擇。
在某些實施方案中，檢測器還包含聚焦機械裝置514，它允許以5mm或以下，例如1 或2mm連續(xù)地改變檢測透鏡508與物體的距離。 在某些實施方案中，檢測透鏡508被構(gòu)造成具有0. 4或以下、例如0. 2的檢測光孔 隙，以及0. 5或以下、例如0. 4的激發(fā)光孔隙。 檢測器也可以包含數(shù)字成像裝置，例如8比特灰度值的CMOS照相機，分辨率為例 如640X480像素。在其它實施方案中，數(shù)字成像裝置可以具有更高的分辨率，和/或可以 是彩色CMOS照相機。 在某些實施方案中，檢測系統(tǒng)的復制比例在i : i到i : io之間，例如i : 3、 i : 4或i : 5。 在某些實施方案中，物體516與檢測透鏡508之間的距離在2mm到20mm之間，例 如8mm、9mm或10mm。 參考圖15，在操作中，從光源505發(fā)射的光通過透鏡506聚集，并通過激發(fā)濾光片 507過濾。它通過孔隙502a、分色鏡504、檢測透鏡508、孔隙509，并激發(fā)物體601。在某些 實施方案中，物體516是填充有樣品液體、例如血液的通道，液體含有大量顆粒，例如待檢 測的輔助性T細胞?？梢杂靡环N或多種熒光染料結(jié)合的抗體標記。在其它實施方案中，物 體是通道，它包含用一種或多種熒光染料標記，并結(jié)合到固定化在通道的一個表面上的探 針分子或探針分子陣列上的靶分子。染料在來自LED的激發(fā)光的影響下發(fā)射熒光。從熒光 染料發(fā)射的光通過孔隙509、檢測透鏡508，經(jīng)過分色鏡504被反射到檢測光徑503中。在 那里，它通過檢測濾光片510 (或513，取決于濾光片轉(zhuǎn)換器512的位置)，濾光片適用于允 許具有從熒光染料發(fā)射的光的波長的光通過。光通過濾光片后，被連接的CMOS照相機511 的CMOS芯片收集。 圖16A-16B圖示了可以如何使用檢測器來檢測例如血液樣品中存在的輔助性T細 胞的數(shù)量。關(guān)于裝置和反應(yīng)的詳細情況可以在上面以及WO 2007/051861中發(fā)現(xiàn)，該專利申 請以其全文引為參考。在討論的例子中，制備了具有兩種標記抗體的盒藻紅蛋白標記的抗 CD4抗體，和藻紅蛋白_Cy5標記的抗CD3抗體。因為輔助性T細胞在其表面上顯示兩種抗 原，因此將用兩種熒光染料標記輔助性T細胞。在其表面上只顯示兩種抗原中的一種的其 它細胞，也可以存在于樣品中。這些細胞將只用相應(yīng)的熒光染料標記。
在與相應(yīng)的熒光染料標記的抗體反應(yīng)后，將含有熒光細胞712的液體樣品移動到 檢測通道711中。在第一個位置(圖16A)，檢測器710檢測了第一個圖像714，代表了在通 道711的部分713上的視圖。部分713代表預(yù)定體積的樣品，例如100nL。圖像714使用 第一個濾光片獲取，該濾光片被構(gòu)造成允許樣品中存在的藻紅蛋白標記的抗CD4+抗體發(fā) 射的光通過，并阻斷由藻紅蛋白<75標記的抗003+抗體發(fā)射的光。同樣位置的第二個圖 像715使用第二個濾光片獲取，該濾光片被構(gòu)造成允許由藻紅蛋白_Cy5標記的抗CD3+抗體發(fā)射的光通過，并阻斷由藻紅蛋白標記的抗CD4+抗體發(fā)射的光。圖像714和715可以顯 示部分713中不同數(shù)量的信號。此外，由于光學系統(tǒng)的像差，圖像714和715可能相對于彼 此不能重合。 可以使用軟件(例如Clondiag的Iconoclust)來校準圖像714和715，例如使用 通道中的比對標記(未顯示)，或通過對在兩張圖片中都存在的信號之間的關(guān)系進行分析。 此外，軟件識別并標記在兩張圖片中都檢測到的信號(716)。在圖16A中，三個信號被鑒定 為在兩張圖中都存在。這意味著在部分713中發(fā)現(xiàn)了3個具有兩種抗原的細胞。結(jié)果可以 被顯示，用于進一步計算或統(tǒng)計，或可以儲存用于進一步處理。 檢測器710和通道711相對于彼此移動，以觀察通道711的另一個部分717 (圖 16B)，并重復檢測步驟。使用第一和第二個濾光片，分別記錄了圖像718和719。軟件識別 并標記在兩張圖片中都檢測到的信號(720)。 檢測可以在檢測通道的其它部分中重復，產(chǎn)生了一組值，它們代表了每個部分中 細胞的數(shù)量。從該組值，可以計算出樣品中存在的細胞的數(shù)量，以及相應(yīng)的統(tǒng)計參數(shù)。例如， 每100nL平均3個細胞，對應(yīng)于在5 ii L的樣品體積中150個細胞的總量。
圖17顯示了在使用血液作為液體樣品的T細胞計數(shù)實驗過程中檢測到的兩張圖 像的疊加。使用了兩個不同的檢測濾光片兩張圖像都在通道的相同位置檢測(例如圖5中 的714和715)。 801和802代表使用兩種不同的檢測濾光片成像的一個比對標記。兩張圖 像之間的錯位可以清楚地檢測到，并使用所述標記進行校正。803和804代表了與例如比對 標記801和802錯位了同樣距離的單個細胞。因為該細胞在兩張圖像中都出現(xiàn)，因此可以 確定，該細胞被兩種抗體標記，因此是輔助性T細胞。805代表了只可以在疊加的兩張圖像 的一張中檢測到的細胞。因此可以推導，該細胞在其表面上不顯示兩種抗原，因此不是輔助 性T細胞。在圖像中也可以看見其它血液細胞。因為它們沒有被任何熒光抗體標記，它們 只能作為陰影(806)被看見。 其它的實施方案在權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
一種用于檢測被分析物的裝置，包括盒，具有包括入口和與入口流體連通的檢測區(qū)的微流體通道；具有至少部分能變形的壁并與通道的檢測區(qū)流體連通的微流體流通路徑；以及蓋子，具有被構(gòu)造用于密封入口，并形成包括入口、微流體通道和微流體流通路徑的流體回路的密封元件。
2. 權(quán)利要求1的裝置，其中蓋子和盒被構(gòu)造成在形成流體回路后不可逆地關(guān)閉。
3. 權(quán)利要求1的裝置，其中蓋子撓性連接在盒上。
4. 權(quán)利要求l的裝置，其中蓋子和盒被構(gòu)造成在第一個相對位置咬合，使得蓋子能夠 被除去，而在第二個相對位置咬合，使得蓋子在形成流體回路后不可逆地關(guān)閉。
5. 權(quán)利要求l的裝置，其中檢測區(qū)被盒的至少一個表面和蓋子的至少一個表面分界。
6. 權(quán)利要求5的裝置，其中蓋子包括覆蓋在檢測區(qū)上的透明薄膜。
7. 權(quán)利要求6的裝置，其中蓋子粘附在盒上。
8. —種用于檢測被分析物的系統(tǒng)，包括 盒，具有包括入口和與入口流體連通的檢測區(qū)的微流體通道；具有至少部分能變形的壁并與通道的檢測區(qū)流體連通的微流體流通路徑；以及 蓋子，具有被構(gòu)造用于密封入口 ，并形成包括入口 、微流體通道和微流體流通路徑的 流體回路的密封元件；以及 熒光檢測器，包括 光源；獲得10°或以上的立體角的聚光鏡；以及 獲得10°或以上的立體角的物鏡。
9. 權(quán)利要求8的系統(tǒng)，其中熒光檢測器包括相機。
10. 權(quán)利要求8的系統(tǒng)，其中熒光檢測器包括一種或多種可選擇的發(fā)射濾光片。
11. 一種用于檢測被分析物的方法，包括將液體樣品導入微流體通道，從而形成被通道封閉并被運輸流體分界在第一個末端的 連續(xù)液體段；形成流體回路，使得運輸流體為液體段的第一個和第二個末端之間提供流體連通；以及經(jīng)運輸流體對液體段的第一個和第二個末端施加不同的壓力。
12. 權(quán)利要求ll的方法，其中一部分流體回路由能彈性變形的壁形成。
13. 權(quán)利要求12的方法，其中對液體段的第一個和第二個末端施加不同的壓力包括擠 壓能彈性變形的壁。
14. 權(quán)利要求ll的方法，還包括用第一熒光抗體和第二熒光抗體標記被分析物，其中 第一和第二熒光抗體具有不同的發(fā)射波長。
15. 權(quán)利要求14的方法，其中檢測被分析物包括在第一熒光抗體的發(fā)射波長處記錄被 分析物的第一個圖像；在第二熒光抗體的發(fā)射波長處記錄被分析物的第二個圖像；以及比 較第一和第二個圖像。
16. —種方法，包括將液體樣品導入微流體通道，從而形成被通道封閉并被運輸流體分界在第一個末端的連續(xù)液體段，液體樣品含有多種顆粒，形成流體回路，使得運輸流體為液體段的第一個和第二個末端之間提供流體連通，通過經(jīng)運輸流體對液體段的第一個和第二個末端施加不同的壓力，形成含有至少一部分液體樣品和光學標記物的混合物，形成多種復合物，每種復合物含有多種顆粒中的一種以及至少一種光學標記物，以及檢測在混合物的一部分中存在的復合物。
17. 權(quán)利要求16的方法，其中一部分流體回路由能彈性變形的壁形成。
18. 權(quán)利要求17的方法，其中對液體段的第一個和第二個末端施加不同的壓力包括擠壓能彈性變形的壁。
19. 權(quán)利要求16到18任一項的方法，還包括檢測混合物的多個不同部分的每個中存在的復合物。
20. 權(quán)利要求19的方法，其中多個不同部分的總體積為導入到微流體裝置中的液體樣品的體積的至少90%。
21. 權(quán)利要求16到20任一項的方法，包括將總體積為V的液體樣品導入微流體裝置，其中混合物的總體積為體積V的至少90% 。
22. 權(quán)利要求21的方法，其中混合物包含至少大約95X體積V的液體樣品。
23. 權(quán)利要求20的方法，包括檢測混合物總體積的至少10%中存在的復合物。
24. 權(quán)利要求16到23任一項的方法，其中顆粒是細胞，光學標記物是熒光標記物。
25. 權(quán)利要求11到24任一項的方法，其中微流體通道包含入口以及與入口流體連通的檢測區(qū)，并且是微流體裝置的微流體通道。
26. 權(quán)利要求11到25任一項的方法，在將液體樣品導入微流體通道之前，還包括將液體樣品導入毛細管的孔。
27. 權(quán)利要求26的方法，在將液體樣品導入毛細管的孔和將液體樣品導入微流體通道的步驟之間，還包括將毛細管與微流體裝置相連，液體樣品保留在毛細管中。
28. 權(quán)利要求11到27任一項的方法，還包括對指示液體樣品的一部分中存在的復合物的量的信號進行光學檢測，該液體樣品的一部分存在于微流體裝置的檢測區(qū)中。
29. 權(quán)利要求11到28任一項的方法，其中將液體樣品導入微流體通道，通過擠壓能彈性變形的壁來進行。
30. 權(quán)利要求29的方法，其中擠壓能彈性變形的壁，包括擠壓第一部分流體回路，并且不用首先完全釋放這種壓力，將擠壓的位點沿著流體回路移動足以進行導入步驟的量。
31. 權(quán)利要求11到30任一項的方法，包括首先完全釋放壓力，再進行指示該部分中存在的復合物的量的信號的光學檢測步驟。
32. 權(quán)利要求11到31任一項的方法，其中液體樣品是血液。
33. 權(quán)利要求26到32任一項的方法，其中毛細管孔含有凝結(jié)抑制劑。
34. 權(quán)利要求26到33任一項的方法，在將液體樣品導入毛細管的孔和將至少一部分液體樣品導入微流體通道的步驟之間，還包括制止液體樣品流出毛細管。
35. 權(quán)利要求11到34任一項的方法，其中微流體通道的檢測區(qū)不支持液體樣品的毛細管流動。
36. 權(quán)利要求11到35任一項的方法，其中微流體通道的內(nèi)表面的至少一部分是疏水的。
37. 權(quán)利要求25到36任一項的方法，還包括將微流體裝置和光學檢測器中的至少一個相對于彼此進行移動，然后對指示液體樣品的不同部分中存在的復合物的量的光學信號進行檢測。
38. 權(quán)利要求26到37任一項的方法，其中毛細管是首尾相接的毛細管，包括第一和第二個開口端，毛細管的孔總體積為V，并且導入至少一部分液體樣品的步驟包括將至少90 %的液體樣品導入微流體通道。
39. 被構(gòu)造用于進行權(quán)利要求11到38任一項的方法的裝置。
40. —種用于檢測被分析物的裝置，包括盒，具有微流體通道，包括在其內(nèi)表面上具有抗凝劑的毛細管入口 ，包含反應(yīng)物的腔室，以及與入口流體連通的檢測區(qū)；微流體流通路徑，具有至少部分能變形的壁，并與通道的檢測區(qū)流體連通；以及蓋子，具有密封元件，它被構(gòu)造用于密封入口 ，并形成包括入口 、微流體通道和微流體流通路徑的流體回路。
41. 一種熒光檢測器，包括光源；獲得10°或以上的立體角的聚光鏡；以及獲得10°或以上的立體角，并被構(gòu)造用于為微觀物體成像的物鏡。
42. —種方法，包括將液體樣品導入毛細管的孔，以及通過降低作用在液體樣品的液體樣品-氣體界面上的壓力，將至少一部分液體樣品導入微流體裝置的微流體網(wǎng)絡(luò)中。
43. 權(quán)利要求42的方法，在將液體樣品導入毛細管的孔的步驟之后，進一步包括將毛細管與微流體裝置相連，液體樣品保留在毛細管中。
44. 權(quán)利要求42或43的方法，其中降低壓力通過擠壓至少一部分微流體網(wǎng)絡(luò)以從其中排出氣體，然后降低至少一部分微流體網(wǎng)絡(luò)的壓力來進行。
45. 權(quán)利要求42到44任一項的方法，其中微流體網(wǎng)絡(luò)至少部分由大體為平面的第一和第二基質(zhì)所限定，并位于它們之間，至少一種基質(zhì)在施加外部壓力擠壓至少一部分微流體網(wǎng)絡(luò)后是能變形的，并且該至少一種基質(zhì)在釋放外部壓力使得至少一部分微流體網(wǎng)絡(luò)降壓后，傾向于恢復至其原來的位置。
46. 權(quán)利要求42到44任一項的方法，其中微流體網(wǎng)絡(luò)至少部分由微流體通道所限定，該微流體通道包括入口和與入口流體連通的檢測區(qū)，以及與檢測區(qū)流體連通的微流體流通路徑，其中微流體流通路徑具有壁，它在施加外部壓力擠壓至少一部分微流體流通路徑后是至少能部分變形的，并且在釋放外部壓力使得至少一部分微流體流通路徑降壓后，壁傾向于恢復至其原來的位置。
47. 權(quán)利要求42到46任一項的方法，還包括將液體樣品與一種或多種微流體網(wǎng)絡(luò)中存在的反應(yīng)物混合，以形成混合物。
48. 權(quán)利要求47的方法，其中混合物包含至少90%被導入到微流體網(wǎng)絡(luò)中的液體樣<formula>formula see original document page 5</formula>
49. 權(quán)利要求47或48的方法，其中一種或多種反應(yīng)物包括能檢測標記物，它與樣品反應(yīng)，形成了包含標記物和樣品中存在的被分析物的復合物。
50. 權(quán)利要求47到49任一項的方法，還包括對指示液體樣品的一部分中存在的復合物的量的信號進行光學檢測，該一部分樣品存在于微流體裝置的檢測區(qū)中。
51. 權(quán)利要求50的方法，還包括從檢測區(qū)排出該一部分液體樣品，并將不同部分液體樣品導入檢測區(qū)，并對指示該不同部分樣品中存在的復合物的量的信號進行光學檢測。
52. 權(quán)利要求51的方法，其中排出該一部分并導入不同部分液體樣品，通過擠壓至少一部分微流體網(wǎng)絡(luò)來進行，被擠壓的部分沿著網(wǎng)絡(luò)至少部分偏離檢測區(qū)。
53. 權(quán)利要求52的方法，其中擠壓至少一部分微流體網(wǎng)絡(luò)包括擠壓第一部分微流體網(wǎng)絡(luò)，不用首先完全釋放這種壓力，將擠壓的位點沿著微流體網(wǎng)絡(luò)移動足以進行排出和導入步驟的量。
54. 權(quán)利要求53的方法，包括不用首先完全釋放微流體網(wǎng)絡(luò)的壓力就對信號進行光學檢測的步驟，該信號指示不同部分樣品中存在的復合物的量。
55. 權(quán)利要求42到54任一項的方法，其中液體樣品是血液。
56. 權(quán)利要求55的方法，其中毛細管的孔含有凝結(jié)抑制劑。
57. 權(quán)利要求42到56任一項的方法，在將液體樣品導入毛細管的孔和將至少一部分液體樣品導入微流體網(wǎng)絡(luò)的步驟之間，還包括制止液體樣品流出毛細管。
58. 權(quán)利要求57的方法，其中制止液體樣品流出毛細管包括增加作用于液體樣品_氣體界面上的壓力。
59. 權(quán)利要求42到58任一項的方法，其中微流體網(wǎng)絡(luò)不支持液體樣品的毛細管流動。
60. 權(quán)利要求59的方法，其中由第一和第二基質(zhì)中的至少一個限定的微流體網(wǎng)絡(luò)的內(nèi)表面是疏水的。
61. 權(quán)利要求42到60任一項的方法，其中被分析物是顆粒。
62. 權(quán)利要求61的方法，其中顆粒是細胞。
63. 權(quán)利要求49的方法，還包括將微流體裝置和光學檢測器中的至少一個相對于彼此進行移動，然后檢測指示不同部分液體樣品中存在的復合物的量的光學信號。
64. 權(quán)利要求42到63任一項的方法，其中毛細管是首尾相連的毛細管，包含第一個和第二個開口端，毛細管的孔構(gòu)成了總體積V，導入至少一部分液體樣品的步驟包括將至少90%的液體樣品導入微流體網(wǎng)絡(luò)。
65. 被構(gòu)造用于進行權(quán)利要求42到64任一項的裝置。
66. —種方法，包括將液體樣品導入布置在微流體裝置的第一基質(zhì)的內(nèi)表面與第二基質(zhì)的內(nèi)表面之間的微流體網(wǎng)絡(luò)，至少一個基質(zhì)是撓性的，液體樣品含有多種顆粒，通過在微流體網(wǎng)絡(luò)的多個位置連續(xù)地減少第一和第二基質(zhì)的內(nèi)表面之間的距離，形成了含有至少一部分液體樣品和光學標記物的混合物，形成多種復合物，每種復合物包含多種顆粒中的一種和至少一種光學標記物，以及檢測在一部分混合物中存在的復合物。
67. 權(quán)利要求66的方法，還包括檢測混合物的多個不同部分的每個中存在的復合物。
68. 權(quán)利要求66或67的方法，其中多個不同部分的總體積，為導入到微流體裝置的液體樣品的體積的至少90%。
69. 權(quán)利要求66到68任一項的方法，包括將總體積為V的液體樣品導入微流體裝置，其中混合物的總體積為體積V的至少90% 。
70. 權(quán)利要求68的方法，包括檢測在至少90%的混合物總體積中存在的復合物。
71. 權(quán)利要求66到70任一項的方法，其中顆粒是細胞，光學標記物是熒光標記物。
72. —種方法，包括將總體積為V的液體樣品導入布置在微流體裝置的第一基質(zhì)的內(nèi)表面與第二基質(zhì)的內(nèi)表面之間的微流體網(wǎng)絡(luò)，至少一個基質(zhì)是撓性的，液體樣品含有多種顆粒，在微流體網(wǎng)絡(luò)中形成混合物，混合物含有體積V的至少大約90%的液體樣品和光學標記物，形成多種復合物，每種復合物包含多種顆粒中的一種和至少一種光學標記物，以及檢測在一部分混合物中存在的復合物。
73. 權(quán)利要求72的方法，其中混合物含有體積V的至少大約95%的液體樣品。
74. 權(quán)利要求72或73的方法，還包括檢測混合物的多個不同部分的每個中存在的復合物。
75. 權(quán)利要求74的方法，其中多個不同部分的總體積為導入到微流體裝置的液體樣品的體積的至少90%。
76. 被構(gòu)造用于進行權(quán)利要求66到75的任一項的方法的裝置。
全文摘要
本發(fā)明描述了用于對樣品中多個被分析物中的每個進行分析的方法。該方法包括將空間分隔的測試區(qū)的陣列與液體樣品(例如全血)相接觸。測試區(qū)布置在微流體裝置的通道中。通道由至少一個撓性的壁和第二個可以是也可以不是撓性的壁所限定。每個測試區(qū)含有特異性針對相應(yīng)靶被分析物的探針化合物。擠壓微流體裝置以減小通道的厚度，該厚度是通道中壁的內(nèi)表面之間的距離。通過在相應(yīng)位置處內(nèi)表面之間的距離被減小的多個測試區(qū)中的每個測試區(qū)上，對相互作用進行光學檢測，確定每種被分析物的存在。每個測試區(qū)上的相互作用指示了樣品中靶被分析物的存在。
文檔編號B01L3/00GK101743063SQ200880014595
公開日2010年6月16日 申請日期2008年5月5日 優(yōu)先權(quán)日2007年5月3日
發(fā)明者亞歷山大·范申克楚施魏因斯貝格, 克勞斯-彼得·默比烏斯, 尤金·埃曼特勞特, 延斯·圖赫舍雷爾, 托爾斯滕·舒爾茨, 托馬斯·烏利希, 托馬斯·凱澤 申請人:科隆迪亞戈有限公司