專利名稱：：處理生物學(xué)樣品的方法處理生物學(xué)樣品的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及處理生物學(xué)樣品的方法，通過(guò)該方法獲得的生物學(xué)樣品，分析所處理生物學(xué)樣品的方法，處理生物學(xué)樣品的裝置，這些裝置的應(yīng)用、各種試劑盒以及組合物的應(yīng)用。長(zhǎng)期以來(lái)，科學(xué)家關(guān)注的只是生物學(xué)樣品的病理學(xué)和/或組織學(xué)研究。這些研究所用樣品的保存和/或穩(wěn)定通常只是將樣品置于甲醛溶液中和/或包埋在石蠟中。但為了保存目的，目前長(zhǎng)期實(shí)施的甚至是冷藏或冷凍生物學(xué)樣品。只有當(dāng)認(rèn)識(shí)到檢測(cè)生物學(xué)樣品的某些成分，例如核酸或蛋白質(zhì)有極大益處，特別是在醫(yī)學(xué)和臨床診斷領(lǐng)域時(shí)，才明白需要新穎的、更有效且更經(jīng)濟(jì)的保存和/或穩(wěn)定試劑和/或方法。在這些發(fā)展過(guò)程中，人們認(rèn)識(shí)到對(duì)于分子生物學(xué)研究至關(guān)重要的是新鮮樣品中各成分的狀態(tài)(基因表達(dá)或蛋白質(zhì)模式)即使在將樣品從其天然環(huán)境中取出后的短時(shí)間內(nèi)可能會(huì)迅速改變，因此，即使將樣品長(zhǎng)期保存于未處理狀態(tài)(例如由于運(yùn)輸?shù)綄?shí)驗(yàn)室期間意外延遲等所致的改變)也會(huì)使分子生物學(xué)分析不真實(shí)或者根本不可能進(jìn)行隨后的分析。隨著取樣和樣品分析之間時(shí)間流逝的增加，生物學(xué)樣品的核酸狀態(tài)確實(shí)會(huì)快速改變。特別是普遍存在的RNA酶導(dǎo)致核糖核酸(RNA)極快降解。同樣，核酸降解也伴有，例如對(duì)應(yīng)激基因(stressgene)的誘導(dǎo)，因而合成了可能極大改變樣品的轉(zhuǎn)錄模式的新mRNA分子。因此需要立即穩(wěn)定樣品，從而能保留所分析基因的表達(dá)分布模式。立即穩(wěn)定樣品不僅是分析核酸，也是進(jìn)行詳細(xì)的生物學(xué)樣品中蛋白質(zhì)組學(xué)研究所需，因?yàn)槿雍蟮鞍踪|(zhì)模式可能會(huì)立即改變。這首先是由于降解或從頭合成所致，但也可能極快發(fā)生蛋白質(zhì)修飾，例如磷酸化/脫磷酸化。由于蛋白質(zhì)-化學(xué)和分子生物學(xué)分析不僅用于醫(yī)學(xué)和臨床診斷領(lǐng)域，其在例如法醫(yī)學(xué)、藥學(xué)、食品分析、農(nóng)業(yè)、環(huán)境分析和許多研究項(xiàng)目等其它領(lǐng)域的應(yīng)用也日益增加，因此，保留樣品的分子結(jié)構(gòu)完整性和使它們立即穩(wěn)定(本文中)是所有這些領(lǐng)域中至關(guān)重要的前提。多年來(lái)，已開(kāi)發(fā)了多種極為不同的穩(wěn)定劑和/或方法來(lái)穩(wěn)定各種極為不同的生物學(xué)樣品。如上所述，早已知曉借助甲醛水溶液穩(wěn)定樣品，隨后包埋經(jīng)穩(wěn)定的樣品以進(jìn)行組織學(xué)研究。然而，在大多數(shù)情況中，這種穩(wěn)定方法不適用于分子生物學(xué)方法，因?yàn)楹怂岖@得的穩(wěn)定在于非常不充分，最多只能定性檢測(cè)存在的核酸或核酸片段，而不是定量檢測(cè)。此外，用交聯(lián)穩(wěn)定劑，例如甲醛水溶液進(jìn)行穩(wěn)定導(dǎo)致組織中提取的核酸或蛋白質(zhì)減少。甲醛水溶液還因毒理學(xué)原因而無(wú)法接受。例如US5.010,184、US5.300,545、WO-A-02/00599和WO-A-02/00600描述了用陽(yáng)離子洗滌劑等穩(wěn)定劑能非常好地定性檢測(cè)核酸，但只適用于含有單細(xì)胞或只含有單層細(xì)胞的樣品。然而，為穩(wěn)定致密組織片中的核酸，這種穩(wěn)定劑不夠格。此外，為定性檢測(cè)的目的而用于穩(wěn)定核酸的那些試劑和方法不適用于同時(shí)穩(wěn)定蛋白質(zhì)。另外，以此方式穩(wěn)定的樣品不可用于組織學(xué)研究，因?yàn)榉€(wěn)定劑保存的是(例如)核酸，而不是細(xì)胞或組織結(jié)構(gòu)。包含(例如)高濃度硫酸銨的其它穩(wěn)定劑(參見(jiàn)，例如US6,204,375)非常適用于穩(wěn)定不同組織中的核酸。然而，它們對(duì)于穩(wěn)定含細(xì)胞或不含細(xì)胞的體液，例如血液、血清或血漿很不適用，它們?cè)谀承╊愋偷慕M織，例如脂肪組織中的特性也不佳。上文均表明特別難于同時(shí)穩(wěn)定組織樣品中的RNA、DNA和蛋白質(zhì)為組織學(xué)研究保存組織樣品。此外，對(duì)細(xì)胞或生物學(xué)樣品的(穩(wěn)定)操作不一定能應(yīng)用于致密組織。與其它生物學(xué)樣品相比，穩(wěn)定致密組織樣品中的核酸特別困難。這種組織由數(shù)層構(gòu)成，并且其組成、成分和結(jié)構(gòu)不均勻。為穩(wěn)定致密組織樣品中的核酸，穩(wěn)定劑不僅必須作用于細(xì)胞表面或一層細(xì)胞，還應(yīng)深入多層樣品組織中。此外，在一份和同一生物學(xué)樣品中，人們往往要應(yīng)對(duì)類型極為不同的組織和/或細(xì)胞，它們?cè)诶缂?xì)胞結(jié)構(gòu)、膜構(gòu)造、區(qū)室構(gòu)造和諸如蛋白質(zhì)、碳水化合物和/或脂肪含量等生物分子上有所不同。本領(lǐng)域已知且頻繁使用的穩(wěn)定組織樣品(包括所有成分)的一種方法是冷凍或深凍樣品。在該方法中，樣品取出后立即用低于-80'C的液氮將其以天然環(huán)境冷凍。如此處理的樣品實(shí)際上可無(wú)限期地保存在約-7(TC，其完整性不會(huì)發(fā)生任何變化。然而，所有這些方法需要非常復(fù)雜的后勤要求，因?yàn)樵谶\(yùn)輸、保存期間或者各種目的和應(yīng)用期間必須防止樣品解凍。此外，特制的樣品容器和永久冷卻樣品增加了費(fèi)用，應(yīng)用液氮不僅非常復(fù)雜，而且要特別小心地操作。另外，隨后對(duì)冷凍樣品材料，特別是樣品各組分的分析是極難的嘗試。例如，保存、運(yùn)輸或加工期間樣品的解凍或初期解凍(incipientdefrosting)導(dǎo)致(特別是)RNA降解。這表示經(jīng)歷解凍或初期解凍的樣品不再獲得可重現(xiàn)的結(jié)果。此外，冷凍狀態(tài)的片狀組織肯定難以加工，例如難以手工分開(kāi)或只能借助復(fù)雜的技術(shù)設(shè)備。為減少加工冷凍樣品，特別是分離RNA的不利之處，現(xiàn)已描述了稱為過(guò)渡溶液(transitionsolution)的溶液。在該方法中，首先將冷凍組織轉(zhuǎn)移入預(yù)冷至-7(TC至-8(TC的溶液中，在該溶液中于約-20"C保存幾小時(shí)(至少16小時(shí))。然后將浸漬了過(guò)渡溶液的樣品短時(shí)(例如短于使樣品分開(kāi)所需的時(shí)間)加溫至-4"C到室溫的操作溫度，樣品中的核酸狀態(tài)不會(huì)發(fā)生改變。然而，不可能進(jìn)一步分析和保存樣品，特別是在室溫下。例如從WO-A-2004/72270處知曉這種過(guò)渡溶液主要由一元醇構(gòu)成。用慣常過(guò)渡溶液處理樣品的不足之處在于，在室溫下樣品只能保持穩(wěn)定很短的時(shí)間，這表示加工時(shí)間極其有限，特別是在加工許多樣品時(shí)很可能超時(shí)，特別是包括切割和切碎過(guò)程時(shí)。此外，過(guò)渡(過(guò)程)非常緩慢，從而不能直接進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，在大多數(shù)情況中要等一天。同樣，不能在室溫下運(yùn)輸如此處理的樣品而不損壞樣品，因?yàn)?，不僅過(guò)渡應(yīng)在^2(TC的溫度下進(jìn)行，而且隨后必須穩(wěn)定地保存樣品。樣品的運(yùn)輸也只能在^2(TC進(jìn)行，故要求在運(yùn)輸期間應(yīng)采用冷卻手段，例如干冰。此外，還必須考慮WO-A-2004/72270中所用的一元醇，例如甲醇、乙醇或異丙醇易燃、有揮發(fā)性或有毒，因此，必須有某些安全措施以備不時(shí)之需。雖然利用傳統(tǒng)的過(guò)渡溶液改善了樣品加工，例如切碎或切割成所需尺寸，但它們既未能減少設(shè)備需求(因?yàn)檫^(guò)渡溶液必須預(yù)冷到-70至-8(TC，因而需要合適的冷卻裝置)，也未能使過(guò)渡溶液處理的樣品在室溫下穩(wěn)定較長(zhǎng)時(shí)間。本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處。具體地說(shuō)，本發(fā)明的目的是提供穩(wěn)定生物學(xué)樣品的方法，所述方法利用含量盡可能低(如果有的話)的易燃、揮發(fā)性、致癌性、致畸性、環(huán)境有害或毒性物質(zhì)來(lái)獲得滿意的生物學(xué)樣品穩(wěn)定作用。此外，本發(fā)明的目的是提供穩(wěn)定生物學(xué)樣品的方法，借助所述方法可以使冷凍和新鮮的生物學(xué)樣品在中溫，例如室溫下盡可能穩(wěn)定，而不會(huì)對(duì)該生物學(xué)樣品的表達(dá)模式或蛋白質(zhì)組構(gòu)成產(chǎn)生不利影響。此外，穩(wěn)定生物學(xué)樣品的方法應(yīng)能對(duì)穩(wěn)定的生物學(xué)樣品進(jìn)行組織學(xué)分析并對(duì)該生物學(xué)樣品中的生物分子進(jìn)行分析。在本文中，穩(wěn)定方法應(yīng)對(duì)(尤其是)穩(wěn)定的生物學(xué)樣品中的蛋白質(zhì)和核酸均能進(jìn)行定性和定量分析。此外，對(duì)生物學(xué)樣品進(jìn)行穩(wěn)定操作對(duì)核酸和蛋白質(zhì)的質(zhì)量應(yīng)無(wú)不良影響(或者如果有只是輕微地影響)，因而可通過(guò)凝膠分析或進(jìn)行多輪PCR直至獲得一定量核酸來(lái)測(cè)定核酸的質(zhì)量，可通過(guò)合適的活性試驗(yàn)測(cè)定蛋白質(zhì)，例如酶的質(zhì)量。此外，穩(wěn)定生物學(xué)樣品的方法應(yīng)獲得穩(wěn)定的生物學(xué)樣品，該樣品不僅能在中溫，例如室溫下分析，如果合適的話還能在這種分析前后在這種中溫下保存盡可能長(zhǎng)的時(shí)間。在生物分子的情況中，術(shù)語(yǔ)"穩(wěn)定"應(yīng)理解為表示抑制生物分子活性的降解、修飾、誘導(dǎo)或改變。在生物學(xué)樣品的組織學(xué)分析的情況中，術(shù)語(yǔ)"穩(wěn)定"宜理解成表示防止樣品形態(tài)的實(shí)質(zhì)性改變。此外，本發(fā)明的目的在于提供某種裝置，借助該裝置并采用本發(fā)明的穩(wěn)定方法可以簡(jiǎn)單的方式穩(wěn)定生物學(xué)樣品。有助于實(shí)現(xiàn)上述目的的方法是處理生物學(xué)樣品的方法，包括以下方法步驟i)提供生物學(xué)樣品，和ii)使該生物學(xué)樣品與包含以下組分的組合物接觸(al)至少一種多元醇，其含量以重量計(jì)為1%到最多100%，特別優(yōu)選以重量計(jì)至少5%，更優(yōu)選以重量計(jì)至少10%，甚至更優(yōu)選以重量計(jì)至少25%，特別優(yōu)選以重量計(jì)至少35%，最優(yōu)選以重量計(jì)至少50%，例如以重量計(jì)至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98或99%和(a2)至少一種添加劑醇，其含量以重量計(jì)為0到99%，優(yōu)選以重量計(jì)至少0-95%，特別優(yōu)選以重量計(jì)0.1-50%，甚至更優(yōu)選以重量計(jì)0.5-25%,更優(yōu)選以重量計(jì)1--15%，最優(yōu)選以重量計(jì)2.5-10%，例如以重:量計(jì)最多0.1、0.2、0.3、0.4、0,5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、11、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、41、4.2、4.3、4,4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5,4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6,6、6.7、6.8、6.9、7.0、71、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8,6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9,5、9.6、9.7、9.8、9.9、10.0、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、卯、91、92、93、94、95或99%,其中以重量計(jì)組分(al)和(a2)的總量為100%出乎意料的是，發(fā)現(xiàn)采用借助含多元醇的組合物可以穩(wěn)定新鮮分離的生物學(xué)樣品，并且可以制備冷凍的生物學(xué)樣品，例如在液氮中冷凍的生物學(xué)樣品以供組織學(xué)或分子生物學(xué)分析。此時(shí)無(wú)需將與組合物接觸的生物學(xué)樣品冷卻至0"C以下并在如此低溫下保存和分析該樣品，因而無(wú)需使用復(fù)雜的設(shè)備即可實(shí)施本發(fā)明方法，特別是無(wú)需使用冷卻設(shè)備或冷卻裝置。方法步驟i)中提供的生物學(xué)樣品可采取冷凍或非冷凍生物學(xué)樣品的形式，其中所用的生物學(xué)樣品可以是技術(shù)人員己知的任何生物學(xué)樣品。優(yōu)選的生物學(xué)樣品選自生物分子，例如天然分子，優(yōu)選分離的線形、分支或環(huán)形核酸，如RNA，特別是mRNA、siRNA、miRNA、snRNA、tRNA、hnRNA或核酶、DNA等，合成的或修飾的核酸，例如寡核苷酸，如PCR所用的引物、探針或標(biāo)準(zhǔn)品，洋地黃毒苷-、生物素-或熒光-標(biāo)記的核酸，或稱為PNA("肽核酸")的天然(優(yōu)選分離的)蛋白質(zhì)或寡肽，合成或修飾的蛋白質(zhì)或寡肽，例如偶聯(lián)有熒光標(biāo)記或酶的抗體，或激素，生長(zhǎng)因子，脂質(zhì)，寡糖，多糖，碳水化合物，蛋白葡聚糖(proteoglucan)，體液，例如血液、精液、腦脊液、唾液、痰或尿，加工血液所得的液體，例如血清或血漿，白細(xì)胞組分或"血沉棕黃層"，水蛭唾液(leechsaliva)，糞便，污跡(smears)，自來(lái)水(tapfluid)，頭皮屑，毛發(fā)，皮膚碎片，法醫(yī)學(xué)樣品，含有游離或結(jié)合的生物分子，特別是游離或結(jié)合的核酸的食品或環(huán)境樣品，或代謝產(chǎn)物和代謝物，完整的生物，優(yōu)選完整的非存活生物，組織或多細(xì)胞生物，優(yōu)選來(lái)自昆蟲(chóng)和哺乳動(dòng)物，特別是人，例如組織切片的形式，組織片段或器官，分離的細(xì)胞，例如貼壁依賴性或懸浮細(xì)胞培養(yǎng)液，細(xì)胞器，例如葉綠體或線粒體，囊泡、核或染色體，植物，植物各部分，植物組織或植物細(xì)胞，細(xì)菌，病毒，類病毒，朊病毒，酵母菌和真菌或真菌的各部分。本發(fā)明方法中方法步驟i)所用的非冷凍生物學(xué)樣品優(yōu)選新鮮制備的生物學(xué)樣品，例如活的或死生物體的新鮮組織樣品或新鮮分離的血細(xì)胞，或者在合成生物分子作為生物學(xué)樣品的情況中，非冷凍生物學(xué)樣品是新鮮合成的核酸或蛋白質(zhì)。按照本發(fā)明，"新鮮"的生物學(xué)樣品在本文中宜理解成表示樣品的獲取時(shí)間與接觸步驟ii)的組合物相距不到96小時(shí)，優(yōu)選不到48小時(shí)，特別優(yōu)選不到24小時(shí)，更優(yōu)選不到10小時(shí)，尤其優(yōu)選不到60分鐘，最優(yōu)選不到10分鐘，或者在合成生物分子的情況中，其合成的時(shí)間與接觸步驟ii)的組合物相距不到96小時(shí)，優(yōu)選不到48小時(shí)，特別優(yōu)選不到24小時(shí)，更優(yōu)選不到10小時(shí)，尤其優(yōu)選不到60分鐘，最優(yōu)選不到10分鐘。然而，術(shù)語(yǔ)"新鮮"的生物學(xué)樣品還包括在以上時(shí)間段內(nèi)獲取但在與所述組合物接觸前還用，例如常規(guī)固定劑(如甲醛水溶液)、染料(如曙紅)、抗體等作預(yù)處理的那些樣品。對(duì)于該目的，在本文中可通過(guò)技術(shù)人員已知的所有制備方法制備新鮮細(xì)胞或組織樣品，以組織樣品為例，可用外科手術(shù)刀，例如在手術(shù)期間或死后，以血細(xì)胞樣品為例，可通過(guò)離心新鮮獲取的血液，等等制備樣品。當(dāng)利用新鮮的生物學(xué)樣品時(shí)，方法步驟ii)中所用的組合物主要用作穩(wěn)定組合物。本發(fā)明方法的方法步驟i)中所用的冷凍生物學(xué)樣品優(yōu)選以下生物學(xué)樣品-用上述方式分離后首先冷卻至0'C或更低的溫度，優(yōu)選-2(TC或更低的溫度，最優(yōu)選-7(TC或更低的溫度，例如通過(guò)與液氮接觸，然后再與方法步驟ii)中的組合物接觸。如果本發(fā)明方法利用以此方式冷凍的生物學(xué)樣品，方法步驟ii)中所用的組合物主要用作過(guò)渡組合物(transitioncomposition)。組合物中所含的多元醇(al)優(yōu)選為二醇、三醇、四醇、五醇、六醇、七醇、八醇或九醇的形式，特別優(yōu)選二醇、三醇、四醇、五醇或六醇，更優(yōu)選二醇和三醇，最優(yōu)選三醇。此外，根據(jù)本發(fā)明，多元醇(al)優(yōu)選具有2-20個(gè)碳，因此可以是C2-多元醇、C3-多元醇、C4-多元醇、C5-多元醇、C6-多元醇、C7-多元醇、C8-多元醇、C9-多元醇、C10-多元醇、Cll-多元醇、C12-多元醇、C13-多元醇、C14-多元醇、C15-多元醇、C16-多元醇、C17-多元醇、C18-多元醇、C19-多元醇或C20-多元醇。然而，特別優(yōu)選具有2-12個(gè)碳原子的多元醇，即C2-多元醇、C3-多元醇、C4-多元醇、C5-多元醇、C6-多元醇、C7-多元醇、C8-多元醇、C9-多元醇、C10-多元醇、Cll-多元醇或C12-多元醇；最優(yōu)選具有2-6個(gè)碳原子的多元醇，即C2-多元醇、C3-多元醇、C4-多元醇、C5-多元醇、C6-多元醇。原則上，所述多元醇可以是直鏈、支鏈或環(huán)形。以線形或支鏈多元醇為例，特別優(yōu)選該分子的最長(zhǎng)烴鏈末端之一連接有OH基團(tuán)的多元醇。根據(jù)本發(fā)明方法所用組合物的特別優(yōu)選實(shí)施方式，所述組合物包含熔點(diǎn)高于0。C，特別優(yōu)選高于5'C，更優(yōu)選高于1(TC，尤其優(yōu)選高于15'C，最優(yōu)選高于20。C的多元醇(od)，所述熔點(diǎn)優(yōu)選用林德斯特羅姆熔點(diǎn)儀(Lindstroemmelting-pointapparatus)在毛細(xì)管中測(cè)定。特別適用于本發(fā)明的多元醇選自(但不限于)1,2-乙二醇、1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、2陽(yáng)甲基匿l,3-丙二醇、2-甲基-l,2-丙二醇、2,2-二甲基-1,3-丙二醇、2,2-二乙基-1,3-丙二醇、2-甲基-2-丙基-l,3-丙二醇、2-丁基-2-乙基-l,3-丙二醇、二羥基丙酮、2，2-二丁基-1,3-丙二醇、3-甲氧基-l,3-丙二醇、3-甲氧基-1，2-丙二醇、3-甲氧基-2，3-丙二醇、2-甲氧基甲基-l,3-丙二醇、3-乙氧基-1,3-丙二醇、3-乙氧基-l,2-丙二醇、3-乙氧基-2,3-丙二醇、3-烯丙氧基-l,2-丙二醇、1,2-丁二醇、1，3-丁二醇、1，4-丁二醇、2,3-丁二醇、2，3-二甲基-2,3-丁二醇、3，3-二甲基-1,2-丁二醇、1，2-戊二醇、1,3-戊二醇、1,4-戊二醇、1,5-戊二醇、2，3-戊二醇、2，4-戊二醇、2-甲基-2,4-戊二醇、2，4-二甲基-2,4-戊二醇、2,2，4-三甲基-1,3-戊二醇、1,2-己二醇、1，3-己二醇、1，4-己二醇、1,5-己二醇、1,6-己二醇、2,3-己二醇、2,4-己二醇、2,5-己二醇、3,4-己二醇、2,5-二甲基-2,5-己二醇、2-乙基-l,3-己二醇、1，2-庚二醇、1,3-庚二醇、1,4-庚二醇、1,5-庚二醇、1,6-庚二醇、1,7-庚二醇、1，8-辛二醇、1,2-辛二醇、1，3-辛二醇，1,4-辛二醇、1，5-辛二醇、1,6-辛二醇、1，7-辛二醇、1，2-壬二醇、1，9-壬二醇、l，lO-癸二醇、1,2-癸二醇、1,2-H"^一烷二醇(undecanediol)、1,11-十一烷二醇、1，12-十二垸二醇(dodecanedio1)、1,2-十二垸二醇、二甘醇、雙丙甘醇、三乙二醇、三丙二醇、四乙二醇、四丙二醇、五乙二醇、五丙二醇、六乙二醇、六丙二醇、七乙二醇、七丙二醇、八乙二醇、八丙二醇、九乙二醇、九丙二醇、十乙二醇、十丙二醇、順-或反-l,2-環(huán)戊二醇、順或反-1,3-環(huán)戊二醇、順或反-l,2-環(huán)己二醇、順或反-l,3-環(huán)己二醇、順或反-l,4-環(huán)己二醇、順或反-l,2-環(huán)庚二醇、順或反-l,3-環(huán)庚二醇、順或反-l,4-環(huán)庚二醇、1，2,3-環(huán)戊三醇、1,2,4-環(huán)戊三醇、1,2,3-環(huán)己三醇、1,2,4-環(huán)己三醇、1,2,3-環(huán)庚三醇、1,2,4-環(huán)庚三醇、1,2,3-丙三醇、3-乙基-2-羥甲基-l，3-丙二醇、2-羥甲基-2-甲基-l,3-丙二醇、2-羥甲基-2-甲基-l,3-丙二醇、1,2,3-丁三醇、1,2,4-丁三醇、2-甲基-l，2，3-丁三醇、2-甲基-l，2,4-丁三醇、1，2,3-戊三醇、1,2,4-戊三醇、1,2,5-戊三醇、2,3,4-戊三醇、1,3,5-戊三醇、3-甲基-l,3,5-戊三醇、1,2,3-己三醇、1,2,4-己三醇、1，2,5-己三醇、1，2，6-己三醇、2，3，4-己三醇、2,3,5-己三醇、1,2,3-庚三醇、1,2，7-庚三醇、1,2，3-辛三醇、1，2,8-辛三醇、1，2，3-壬三醇、1，2，9-壬三醇、1,2,3-癸三醇、1,2,10-癸三醇、1,2,3-十一烷三醇、1，2，11-H"^—烷三醇、1,2,3-十二烷三醇、1,1,12-十二垸三醇、2,2,腸雙-(羥甲基)-l,3-丙二醇、1，2,3,4-丁四醇、1,2,3,4-戊四醇、1,2,3,5-戊四醇、1，2，3,4-己四醇、1,2,3，6-己四醇、1,2,3，4-庚四醇、1,2，3,7-庚四醇、1,2,3,4-辛四醇、1,2,3,8-辛四醇、1,2,3,4-壬四醇、1,2,3，9-壬四醇、1,2,3,4-癸四醇、1，2，3,10-癸四醇、三羥甲基丙醇、季戊四醇、糖醇(例如甘露醇、山梨糖醇或阿拉伯糖醇)、己六醇(hexanehexol)、1，2,3,4,5-戊五醇和1,2,3,4,5，6-己六醇。在本發(fā)明的組合物中，所述多元醇可以單獨(dú)存在或以兩種、三種、四種或五種不同多元醇的混合物形式存在，特別優(yōu)選兩種不同二醇的混合物、兩種不同三醇的混合物、兩種不同四醇的混合物、一種二醇和一種三醇的混合物、一種二醇和一種四醇的混合物以及一種三醇和一種四醇的混合物，最優(yōu)選兩種不同三醇的混合物作為多元醇混合物。該組合物中任選存在的添加劑(a2)為除多元醇以外的其它溶劑或添加劑的形式，所述其它溶劑或添加劑選自洗滌劑，抑制核酸或蛋白質(zhì)降解的抑制劑，如蛋白酶抑制劑PMSF或可商品化購(gòu)得的產(chǎn)品美國(guó)圣奧斯汀市安拜恩公司的抗-RNA酶(ANTI-Rnase，Ambion，St.Austin,USA)、RNAsecure(安拜恩公司)或DEPC，烷化劑，乙?；瘎?，鹵化劑，核苷酸，核苷酸類似物，氨基酸，氨基酸類似物，粘度調(diào)節(jié)劑，著色劑，特別是專門(mén)染色某些細(xì)胞結(jié)構(gòu)的著色劑，緩沖化合物，例如HEPES、MOPS或TRIS，防腐劑，絡(luò)合劑，如EDTA或EGTA，還原劑，如2-巰基乙醇、二硫蘇糖醇(DTT)、喋呤、硫化氫、抗壞血酸、NADPH、三羧基乙膦(tricarboxyethylphosphine)(TCEP)和六甲基磷酰三胺(phosphorictriamide)(Me2N)3P，氧化劑，如5,5，-二硫雙(2-硝基苯甲酸)(DTNB)，提高細(xì)胞通透性的物質(zhì)，如DMSO或DOPE,離液物質(zhì)，如異硫氰酸胍或鹽酸胍，固定劑，如甲醛或戊二醛(glutardialdehyde)，交聯(lián)添加劑，如低聚甲醛，和這些添加劑中的至少兩種、至少三種、至少四種、至少五種或至少六種的混合物。除多元醇以外的溶劑可以為水，或者除多元醇以外的有機(jī)溶劑形式，所述有機(jī)溶劑優(yōu)選一元醇、酮、二甲基亞砜、芳族烴、鹵化的烴、醚、羧酸、羧酰胺、腈、硝基烷和酯，其中合適的溶劑可以選自甲醇、乙醇、l-丙醇、2-丙醇、乙腈、丙酮、茴香醚、芐腈、l-甲氧基-2-丙醇、喹啉、環(huán)己酮、甘油二乙酸酯、二氯甲垸、氯仿、乙醚、甲醚、甲苯、二甲酮、二乙酮、己二酸二甲酯、碳酸二甲酯、亞硫酸二甲酯、二嗯烷、二甲基亞砜、乙酸甲酯、乙酸乙酯、苯甲酸、苯甲酸甲酯、苯甲酸乙酯、乙基苯(ethylbenzene)、甲酰胺、甘油三乙酸酯、乙酰乙酸乙酯、乙酰乙酸甲酯、N,N-二乙基乙酰胺、N-甲基-N-乙基乙酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基-N-乙基甲酰胺、N,N-二乙基甲酰胺、N,N-二甲基硫代甲酰胺、N，N-二乙基硫代甲酰胺、N-甲基-N-乙基硫代甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基-N-乙基乙酰胺、N，N-二乙基乙酰胺、硝基乙垸、硝基甲基甲苯(nitromethyltoluene)和磷酸三乙酯。優(yōu)選將組分(al)和(a2)簡(jiǎn)單混合來(lái)制備這兩種組分的組合物。如果多元醇(ocl)的熔點(diǎn)高于室溫，優(yōu)選先將該多元醇加熱至熔點(diǎn)，再將其與添加劑混合。然而，如果制備組合物時(shí)組分(al)或(a2)之一是固體形式而另一種是液體形式，也可將固體組分溶于液體組分中。因此，例如可將固體多元醇溶于液體添加劑中，或可將固體添加劑溶于液體多元醇中。適用于本發(fā)明的組合物是，例如具有以下組成的組合物(除非另有表述，所有的百分比是體積比。此外，除非另有表述，各組分的所有體積百分比相當(dāng)于市售可得的最高濃度之一的相應(yīng)化合物量)5。/。N,N-二甲基乙酰胺+10%甲醇+20%丙酮+25%DMSO+40%二甘醇，25%1，2-丙二醇+75%丙酮，25%1,2-丙二醇+75%二甘醇，25%1,2-丙二醇+75%DMSO，25%1,2-丙二醇+75%乙醇，25%1,2-丙二醇+75%乙二醇，25%1，3-丙二醇+75%1,2-丙二醇，25%1,3-丙二醇+75%丙酮，25%1，3-丙二醇+75%二甘醇，25%1，3-丙二醇+75%DMSO，25%1,3-丙二醇+75%乙醇，25%1，3-丙二醇+75%乙二醇，25%丙酮+75%甲醇，25%二甘醇+75%丙酮，25%二甘醇+75%DMSO，25%二甘醇+75%乙醇，25%二甘醇+75%甲醇，25%二甘醇+75%N,N-二甲基乙酰胺，25%二羥基丙酮+75%1,2-丙二醇，25%二羥基丙酮+75%1,3-丙二醇，25%二羥基丙酮+75%二甘醇，25%二羥基丙酮+75%乙二醇，25%二羥基丙酮+75%三乙二醇，25%乙二醇+75%二甘醇，25%乙二醇+75%DMSO，25%乙二醇+75%乙醇，25%1，2,3-丙三醇+75%1,2-丙二醇，25%1,2,3-丙三醇+75%1,3-丙二醇，25%1,2,3-丙三醇+75%二甘醇，25%1,2,3-丙三醇+75%二羥基丙酮，25%1,2,3-丙三醇+75%DMSO，25%1,2,3-丙三醇+75%乙二醇，25%1,2,3-丙三醇+75。/。N,N-二乙基乙酰胺，25%1,2，3-丙三醇+75%三乙二醇，25。/。N,N-二乙基乙酰胺+75%1,3-丙二醇，25%N,N-二乙基乙酰胺+75%1,2-丙二醇，25。/。N,N-二乙基乙酰胺+75%二甘醇，25。/。N,N-二乙基乙酰胺+75%乙二醇，25。/。N,N-二乙基乙酰胺+75%三乙二醇，25%三乙二醇+75%1,2-丙二醇，25%三乙二醇+75%1,3-丙二醇，25%三乙二醇+75%丙酮，25%三乙二醇+75%二甘醇，25%三乙二醇+75%DMSO，25%三乙二醇+75%乙醇，25%三乙二醇+75%乙二醇，50。/oN,N-二乙基乙酰胺+50%1,3-丙二醇，50%1,2-丙二醇+50%丙酮，50%1,2-丙二醇+50%二甘醇，50%1,2-丙二醇+50%DMSO，50%1，2-丙二醇+50%乙醇，50%1,2-丙二醇+50%乙二醇，50%1,3-丙二醇+50%1,2-丙二醇，50%1,3-丙二醇+50%丙酮，50%1,3-丙二醇+50%二甘醇，50%1,3-丙二醇+50%DMSO，50%1,3-丙二醇+50%乙醇，50%1,3-丙二醇+50%乙二醇，50%二甘醇+50%丙酮，50%二甘醇+50%DMSO，50%二甘醇+50%甲醇，50%二甘醇+50%N,N-二甲基乙酰胺，50%二羥基丙酮+50%1,2-丙二醇，50%二羥基丙酮+50%1,3-丙二醇，50%二羥基丙酮+50%二甘醇，50%二羥基丙酮+50%乙醇，50%二羥基丙酮+50%乙二醇，50%二羥基丙酮+50%三乙二醇，50%乙二醇+50%丙酮，50%乙二醇+50%二甘醇，50%乙二醇+50°/。DMSO，50%乙二醇+50%乙醇，50%1,2,3-丙三醇+50%1,2-丙二醇，50%1,2,3-丙三醇+50%1，3-丙二醇，50%1,2,3-丙三醇+50%二甘醇，50%1,2,3-丙三醇+50%二羥基丙酮，50%1,2,3-丙三醇+50%DMSO，50%1,2,3-丙三醇+50%乙二醇，50%1,2,3-丙三醇+50。/。N,N-二乙基乙酰胺，50%1，2,3-丙三醇+50%三乙二醇，50。/。N,N-二乙基乙酰胺+50%1，2-丙二醇，50。/。N,N-二乙基乙酰胺+50%二甘醇，50。/。N,N-二乙基乙酰胺+50%乙二醇，500/()N,N-二乙基乙酰胺+50%三乙二醇，50%三乙二醇+50%1,2-丙二醇，50%三乙二醇+50%1,3-丙二醇，50%三乙二醇+50%丙酮，50%三乙二醇+50%二甘醇，50%三乙二醇+50%DMSO，50%三乙二醇+50%乙醇，50%三乙二醇+50%乙二醇，75%1,2-丙二醇+25%丙酮，75%1,2-丙二醇+25%二甘醇，75%1,2-丙二醇+25%DMSO，75%1.2-丙二醇+25%乙醇，75%1,2-丙二醇+25%乙二醇，75%1,3-丙二醇+25%1,2-丙二醇，75%1,3-丙二醇+25°/。丙酮，75%1,3-丙二醇+25%二甘醇，75%1,3-丙二醇+25%DMSO，75%1,3-丙二醇+25%乙醇，75%1.3-丙二醇+25%乙二醇，75%二甘醇+25%丙酮，75%二甘醇+25%DMSO，75%二甘醇+25%甲醇，75%二甘醇+25%N,N-二甲基乙酰胺，75%二羥基丙酮+25%乙醇，75%二羥基丙酮+25%1,2-丙二醇，75%二羥基丙酮+25%1,3-丙二醇，75%二羥基丙酮+25%二甘醇，75%二羥基丙酮+25%乙二醇，75%二羥基丙酮+25%三乙二醇，75%乙二醇+25%丙酮，75%乙二醇+25%二甘醇，75%乙二醇+25%DMSO，75%1,2，3-丙三醇+25%1，2-丙二醇，75%1，2，3-丙三醇+25%1，3-丙二醇，75%1,2,3-丙三醇+25%二甘醇，75%1，2,3-丙三醇+25%二羥基丙酮，75%1,2,3-丙三醇+25%DMSO，75%1，2，3-丙三醇+25%乙醇，75%1,2,3-丙三醇+25%乙二醇，75%1,2,3-丙三醇+25%>^，1^-二乙基乙酰胺，75%1，2，3-丙三醇+25%三乙二醇，75。/。N,N-二乙基乙酰胺+25%1,3-丙二醇，750/oN,N-二乙基乙酰胺+25%1,2-丙二醇，75%N，N-二乙基乙酰胺+25%二甘醇，75。/。N,N-二乙基乙酰胺+25%乙二醇，75。/。N,N-二乙基乙酰胺+25%三乙二醇，75%三乙二醇+25%1,2-丙二醇，75%三乙二醇+25%1,3-丙二醇，75%三乙二醇+25%丙酮，75%三乙二醇+25%二甘醇，75%三乙二醇+25%DMSO，75%三乙二醇+25%乙醇，75%三乙二醇+25%乙二醇，卯％1，3-丙二醇+10%甲醇，90%二羥基丙酮+10%甲醇，90%乙二醇+10%甲醇，90%1,2,3-丙三醇+10%甲醇，90%三乙二醇+10%甲醇，95%1,2-丙二醇+5。/。N,N-二甲基乙酰胺，95%1,3-丙二醇+5%]^，^二甲基乙酰胺，95%乙二醇+5%^仆二甲基乙酰胺，95%1，2，3-丙三醇+5%1^,>^二甲基乙酰胺，95%三乙二醇+5%^^二甲基乙酰胺，以重量計(jì)》96%的1,2,6-己三醇，以重量計(jì)^99.5%的1,2,3-丙三醇，以重量計(jì)^80%的3-甲基-l,3,5-戊三醇，以重量計(jì)2卯％的1,2,4-丁三醇，75%1,2，3-丙三醇+25%1,2，6-己三醇(96%，以重量強(qiáng)度計(jì)(byweightstrength)),50%1,2,3-丙三醇+50%1,2，6-己三醇(96%，以重量強(qiáng)度計(jì))，25%1,2,3-丙三醇+75%1,2,6-己三醇(96%，以重量強(qiáng)度計(jì))，75%1,2,3-丙三醇+25%3-甲基-1，3，5-戊三醇(80%，以重量強(qiáng)度計(jì))，50%1,2,3-丙三醇+50%3-甲基-1,3,5-戊三醇(80%，以重量強(qiáng)度計(jì))，25%1,2,3-丙三醇+75%3-甲基-1,3，5-戊三醇(80%，以重量強(qiáng)度計(jì))，75%1，2,6-己三醇(96%，以重量強(qiáng)度計(jì))+25%3-甲基-l,3,5-戊三醇(80%，以重量強(qiáng)度計(jì))，50%1，2,6-己三醇(96%，以重量強(qiáng)度計(jì))+50%3-甲基-1,3，5-戊三醇(80%，以重量強(qiáng)度計(jì))，25%1,2,6-己三醇(96%，以重量強(qiáng)度計(jì))+75%3-甲基-1,3,5-戊三醇(80%，以重量強(qiáng)度計(jì))，4.72M1,2,3,4,5,6-己六醇和1，2,3,4,5-戊五醇(飽和水溶液)。優(yōu)選將生物學(xué)樣品浸泡在組合物中以實(shí)現(xiàn)生物學(xué)樣品與組合物的接觸，接觸操作時(shí)該組合物優(yōu)選為液體形式，從而能使整個(gè)樣品浸泡在此組合物中。如果所用的生物學(xué)樣品是流體或分離的細(xì)胞或者例如顆粒狀樣品，可混合生物學(xué)樣品與此組合物或?qū)⑸飳W(xué)樣品懸浮在此組合物中實(shí)現(xiàn)接觸?；蛘撸蓪⒃谒x擇溫度下是固體的組合物直接溶于液體生物學(xué)樣品(例如，血液、血漿、尿液或唾液)中。還優(yōu)選在與生物學(xué)樣品的接觸操作期間此組合物是流體，優(yōu)選液體形式，其中20"C測(cè)定的此組合物粘度通常為1-1000000mPa，優(yōu)選1-100000mPa，特別優(yōu)選1-10000mPa。然而，此組合物也可以是固體，從而可與液體生物學(xué)樣品接觸。根據(jù)本發(fā)明方法的具體實(shí)施方式，生物學(xué)樣品與此組合物的接觸優(yōu)選在以下溫度范圍內(nèi)進(jìn)行-80°。至+80°(:，優(yōu)選0。C至+8(TC，甚至更優(yōu)選2、3、4、5、6、7或8。C至+80。C，更優(yōu)選18。C至+80。C，例如至少-20。C、-19°C、-18°C、-17°C、-16°C、-15°C、-14°C、-13°C、-12°C、-11。C、-10°C、-9。C、-8°C、-7°C、-6°C、-5°C、-4。C、-3°C、-2°C、-1°C、0°C、1°C、2°C、3°C、4°C、5°C、6°C、7°C、8°C、9°C、10°C、11°C、12°C、13°C、14。C、15°C、16°C、17。C、18°C、19°C、20°C、21°C、22°C、室溫、23°C、24°C、25°C、26°C、27°C、28°C、29°C、30°C、31°C、32。C、33°C、34°C、35。C、36。C、37°C、38。C、39°C、40°C、41。C、42°C、43°C、44°C、45°C、46。C、47°C、48。C、49°C、50°C、51°C、52°C、53°C、54°C、55°C、56°C、57°C、58°C、59。C或60。C。述及"生物學(xué)樣品與此組合物接觸"在"-8(TC至+8(TC的溫度范圍內(nèi)"或在上述其它溫度之一進(jìn)行，表示生物學(xué)樣品與此組合物接觸后獲得的混合物溫度在上述溫度(范圍)以內(nèi)。因此，生物學(xué)材料的形式可以是在低于-20'C冷凍的樣品，例如保存于液氮中的樣品，此時(shí)利用一定量的組合物，或具有某種溫度的組合物可以使冷凍生物學(xué)樣品與該組合物接觸后所得混合物的溫度(因此也是生物學(xué)樣品的溫度)處于上述溫度范圍內(nèi)。根據(jù)本發(fā)明方法的具體實(shí)施方式，在方法步驟ii)中與此組合物接觸后(優(yōu)選在上述溫度條件下)，還優(yōu)選在方法步驟ii)后的方法步驟iii)中將生物學(xué)樣品再保存在以下溫度范圍內(nèi)-80°。至+80"，優(yōu)選0。C至+80'C，甚至更優(yōu)選2、3、4、5、6、7或8"最高到+80。C，更優(yōu)選18。C至+8(TC，例如至少-20。C、-19°C、-18°C、-17°C、-16。C、-15°C、-14°C、-13°C、-12°C、-.irc、-10°C、-9°C、-8。C、-7。C、-6°C、-5°C、--4。C、-3°C、-2。C、■■rc、o°c、rc、2。c、3。C、4°C、5°C、6°C、7°C、8。C、9°C、10°C、ire、12°C、13°C、14°C、15°C、16°C、17°C、18°C、19°C、20°C、21°C、22°C、室溫、23°C、24°C、25°C、26°C、27°C、28°C、29°C、30。C、31°C、32°C、33。C、34°C、35°C、36°C、37。C、38°C、39。C、40°C、41°C、42°C、43°C、44°C、45°C、46°C、47°C、48°C、49°C、50。C、51°C、52°C、53°C、54。C、55°C、56°C、57°C、58°C、59'C或60。C，其中這種保存可進(jìn)行至少一天，優(yōu)選至少2天，更優(yōu)選至少3天，任選至少1周、至少2周、至少1個(gè)月、至少3個(gè)月、至少6個(gè)月或至少12個(gè)月。本發(fā)明方法可將經(jīng)處理的生物學(xué)樣品保存在室溫下、冷藏溫度下或甚至更高的溫度下，而不會(huì)發(fā)生生物學(xué)樣品中的生物分子，例如核酸或蛋白質(zhì)明顯降解。這明顯優(yōu)于傳統(tǒng)的穩(wěn)定方法，因?yàn)闊o(wú)需使用液氮或冷卻裝置即可實(shí)施該方法，而穩(wěn)定樣品的保存也無(wú)需使用液氮或冷卻裝置。按照本發(fā)明處理后，如果合適，還可在可能的保存步驟iii)前或后將經(jīng)處理的生物學(xué)樣品包埋在合適的包埋物質(zhì)，例如石蠟等中，隨后可通過(guò)簡(jiǎn)單的方式從該生物學(xué)樣品制備適于組織學(xué)研究的組織切片。根據(jù)本發(fā)明方法的具體實(shí)施方式，還優(yōu)選在方法步驟i)和ii)后實(shí)施方法步驟iv)組織學(xué)分析與此組合物接觸的生物學(xué)樣品，或者分析與此組合物接觸的生物學(xué)樣品中的生物分子，如果合適，還可在上述方法步驟iii)保存之前或之后實(shí)施該方法步驟iv)。組織學(xué)研究宜理解成適于分析組織、組織切片、細(xì)胞的形態(tài)或亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的任何研究方法，例如借助顯微鏡，如果合適可采用技術(shù)人員己知的染色或標(biāo)記技術(shù)?？梢苑治龅暮线m生物分子是技術(shù)人員已知的所有生物分子，特別是天然、修飾或合成的核酸，天然、修飾或合成的蛋白質(zhì)或寡肽，激素，生長(zhǎng)因子，代謝物，脂質(zhì)，寡糖或蛋白葡聚糖。合適的核酸是技術(shù)人員已知的所有核酸，特別是核糖核酸(RNA)，例如mRNA、siRNA、miRNA、snRNA、t-RNA、hnRNA或核酶，或脫氧核糖核酸(DNA)。原則上，它們可以是任何類型的多核苷酸，即嘌呤或嘧啶堿基的N-糖苷或C-糖苷。所述核酸可以是單鏈、雙鏈或多鏈、線形、分支或環(huán)形的。它可對(duì)應(yīng)于細(xì)胞中產(chǎn)生的分子，例如DNA或信使RNA(mRNA)或者可在體外產(chǎn)生，例如互補(bǔ)DNA(cDNA)、反義RNA(aRNA)或合成的核酸。所述核酸可由少許亞單位，至少兩個(gè)亞單位，優(yōu)選8個(gè)或更多個(gè)亞單位構(gòu)成，例如寡核苷酸，可由幾百個(gè)亞單位到最多幾千個(gè)亞單位構(gòu)成，例如某些表達(dá)載體，或更多個(gè)亞單位構(gòu)成，例如基因組DNA。所述核酸優(yōu)選包含與調(diào)控序列功能相連的某多肽的編碼信息，從而能在引入了或天然存在該核酸的細(xì)胞中表達(dá)該多肽。因此，所述核酸的優(yōu)選實(shí)施方式是表達(dá)載體。在另一實(shí)施方式中，所述核酸是pDNA(質(zhì)粒DNA)、siRNA、siRNA雙鏈體(duplices)或siRNA異質(zhì)雙鏈體(heteroduplices)，其中術(shù)語(yǔ)"siRNA"應(yīng)理解成表示用"切酶"切割雙鏈RNA(dsRNA)而產(chǎn)生并引入此酶復(fù)合體"RISC"(RNA-誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體)中長(zhǎng)度約22個(gè)核苷酸的核糖核酸。在本文中，述及"分析與組合物接觸的生物學(xué)樣品中的生物分子"表示該項(xiàng)分析可在原位和離體進(jìn)行，即，例如從生物學(xué)樣品分離生物分子后。如果為分析目的而分離生物學(xué)樣品的生物分子，優(yōu)選(特別是在細(xì)胞、組織或其它復(fù)雜或致密樣品的情況中)首先勻漿樣品，可采用機(jī)械裝置，例如借助套管、研缽、轉(zhuǎn)子-定子勻漿器、球磨機(jī)等，或采用化學(xué)方法，例如使用通常含洗滌劑和/或離液物質(zhì)的合適裂解緩沖液，或通過(guò)酶解方法，例如使用蛋白酶，或聯(lián)用這些手段勻漿樣品。為組織學(xué)分析生物學(xué)樣品或分析該生物學(xué)樣品中的生物分子，可采用技術(shù)人員已知并認(rèn)為適合的所有分析方法，優(yōu)選以下方法光學(xué)顯微術(shù)、電子顯微術(shù)、共聚焦激光掃描顯微術(shù)、激光顯微切割、掃描電子顯微術(shù)、蛋白質(zhì)印跡、Sourthern印跡、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)、免疫沉淀、親和層析、突變分析、聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)(特別是二維PAGE)、HPLC、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)、RFLP分析(限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析)、SAGE分析(基因表達(dá)系列分析)、FPLC分析(快速蛋白質(zhì)液相層析)、質(zhì)譜法(如MALDI-TOF質(zhì)譜法或SELDI質(zhì)譜法)、微陣列分析、液相芯片(LiquiChip)分析、酶活性分析、HLA分型、測(cè)序、WGA(全基因組擴(kuò)增)、RT-PCR、實(shí)時(shí)PCR或?qū)崟r(shí)RT-PCR、RNA酶保護(hù)分析或引物延伸分析。根據(jù)本發(fā)明方法的具體實(shí)施方式，方法步驟iv)包括組織學(xué)分析生物學(xué)樣品和分析該生物學(xué)樣品中的生物分子。根據(jù)本發(fā)明方法的另一具體實(shí)施方式，方法步驟iv)包括分析生物學(xué)樣品中的核酸和分析生物學(xué)樣品中的蛋白質(zhì)。通過(guò)本發(fā)明方法處理的生物學(xué)樣品也有助于實(shí)現(xiàn)上述目的。處理生物學(xué)樣品的第一種裝置也有助于實(shí)現(xiàn)上述目的，其包括以下組件(Pl)具有至少一個(gè)端口的至少一個(gè)容器，能接收流體最多至裝填高度h，((32)用于密封所述至少一個(gè)端口的至少一個(gè)蓋子，(P3)與至少一個(gè)所述蓋子(l32)相連的至少一個(gè)浸液助器(immersionaid),和((34)混合器件，其繞軸L可旋轉(zhuǎn)地安裝并裝有導(dǎo)流葉片(guidevane)以混合所述至少一個(gè)容器(P1)中的流體。如果用本發(fā)明組合物處理生物學(xué)樣品，可能導(dǎo)致以下問(wèn)題，首先是難以將樣品浸入所述組合物中，第二是難以充分混合此組合物，而這對(duì)于樣品浸入組合物后產(chǎn)生的不均勻性有利，特別是在生物學(xué)樣品的本身環(huán)境中(hnmediateenvironment),其原因在于組合物的粘度高，而粘度取決于組合物中存在的多元醇的類型和含量。利用本發(fā)明的第一種裝置可克服這些困難，因?yàn)榻褐?(33)能使生物學(xué)樣品浸入此組合物中，而所述混合器件②4)能混合該組合物，因而組合物能均勻滲透入樣品。所用的容器((31)可以是技術(shù)人員已知并且適合于該目的的任何容器形式。本發(fā)明優(yōu)選的容器是US6,602,718和US2004/0043505Al中披露的，例如參考號(hào)12的容器；US2005/0160701Al中披露的，例如參考號(hào)14的容器；US2003/0086830Al中披露的，例如參考號(hào)152的容器；US2003/0087423Al中披露的，例如參考號(hào)12的容器；或WO2005/014173Al中披露的，例如參考號(hào)100的容器。這些出版物中關(guān)于接收生物學(xué)樣品的合適容器的內(nèi)容通過(guò)引用的方式納入本文并構(gòu)成本
發(fā)明內(nèi)容的一部分。如果利用圓柱形容器作為容器(P1)，則容器(J31)的直徑優(yōu)選5-500mm,特別優(yōu)選10-200mm，最優(yōu)選10-30mm。所用的蓋子(p2)可以是技術(shù)人員已知并且適于該目的的任何蓋子形式。本發(fā)明優(yōu)選的蓋子是US6,602,718和US2004/0043505Al中披露的，例如參考號(hào)22的蓋子；US2005/0160701Al中披露的，例如參考號(hào)40的蓋子；US2003/0086830Al中披露的，例如參考號(hào)14的蓋子；US2003/0087423Al中披露的，例如參考號(hào)14的蓋子；或WO2005/014173Al中披露的，參考號(hào)22的蓋子。這些出版物中關(guān)于密封用于接收生物學(xué)樣品的容器的合適蓋子的內(nèi)容也通過(guò)引用的方式納入本文并構(gòu)成本
發(fā)明內(nèi)容的一部分。根據(jù)本發(fā)明第一種裝置的具體實(shí)施方式，裝填高度h是容器(pi)總高度H的20-99%，特別優(yōu)選40-90%，最優(yōu)選50-80%。除了容器(卩l(xiāng))和蓋子(p2)，本發(fā)明的第一種裝置還包括浸液助器(p3)。原則上，該浸液助器(p3)可以是適于將樣品完全浸入液體中的任何器件形式，當(dāng)蓋子G32)關(guān)閉時(shí)，樣品例如處在容器(P1)中液體的表面，或者如果浸液助器(P3)裝有生物學(xué)樣品接收器，樣品位于該浸液助器((33)內(nèi)或其上。在最簡(jiǎn)單的情況中，該浸液助器(P3)可以是柱塞形式，其橫截面大致對(duì)應(yīng)于容器(P1)的橫截面。此處，優(yōu)選浸液助器(P3)的至少一部分中有開(kāi)口，關(guān)閉蓋子((33)后容器(pl)中的液體可經(jīng)這些開(kāi)口溢出，從而關(guān)閉蓋子不會(huì)壓迫流體。因此，浸液助器((33)的至少一部分優(yōu)選由網(wǎng)格樣或篩孔樣材料制成。在浸液助器033)沒(méi)有允許液體溢出的開(kāi)口的情況中，可在浸液助器(P3)之下應(yīng)用作為浸液助器(P3)和樣品之間間隔的突出物，從而使得液體和樣品完全接觸，但在這種情況中，浸液助器②3)的橫截面應(yīng)小于容器(pi)的橫截面，以避免浸液助器(P3)浸入時(shí)壓迫流體。除了簡(jiǎn)單的柱塞，還可將浸液助器(P3)設(shè)計(jì)成樣品支持器(sampleholder)。例如US2003/0087423中描述了這種浸液助器，如參考號(hào)為152的樣品支持器。US2003/0087423關(guān)于樣品支持器的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)的內(nèi)容通過(guò)引用的方式納入本文并構(gòu)成本
發(fā)明內(nèi)容的一部分。具體地說(shuō)，樣品支持器可裝有將生物學(xué)樣品引入其內(nèi)部的端口，引入樣品后可密封該端口。其側(cè)板或底板也優(yōu)選至少部分由網(wǎng)格樣或篩孔樣材料制成，在關(guān)閉蓋子(P2)時(shí)容器((31)中的流體可與樣品支持器中的樣品接觸。此外，還可將此樣品支持器設(shè)計(jì)成簡(jiǎn)單的夾具，例如能夾住生物學(xué)樣品的夾具，所述夾具固定在蓋子032)上從而在關(guān)閉蓋子((32)時(shí)能使夾住的樣品浸入流體中。本發(fā)明優(yōu)選浸液助器(卩3)穿透容器(卩1)最高至高度h'，在容器(卩l(xiāng))處于密封狀態(tài)時(shí)，該高度不超過(guò)裝填高度h，但特別優(yōu)選不超過(guò)80%，甚至更優(yōu)選不超過(guò)裝填高度h的50%。此外，本發(fā)明的第一種裝置裝有混合器件(P4)，其繞軸L可旋轉(zhuǎn)地安裝并裝有導(dǎo)流葉片以混合所述至少一個(gè)容器(I31)中的流體。與容器(P1)的直徑相比，這些導(dǎo)流葉片的排列、設(shè)計(jì)及尺寸應(yīng)使得當(dāng)用水填充該裝置達(dá)容器(卩l(xiāng))總高度H的90%時(shí)，以每分鐘10圈的轉(zhuǎn)速繞軸L勻速轉(zhuǎn)動(dòng)混合器件(p4)，在容器(pl)中心引入一滴(2pl)染料溶液(l升水配制的1g高錳酸鉀)，室溫下在1分鐘后，優(yōu)選60秒后，特別優(yōu)選30秒后，甚至更優(yōu)選15秒后，最優(yōu)選io秒后該染料能明顯均勻地分布在整個(gè)容器(pi)中。在最簡(jiǎn)單的情況中，該混合器件(P4)由，例如排列在浸液助器之上、之下或其水平面的銷釘構(gòu)成，所述銷釘?shù)拈L(zhǎng)度大致對(duì)應(yīng)于容器(P1)的直徑，其中心通過(guò)接頭與蓋子的中心相連。當(dāng)蓋子((32)擰緊時(shí)，容器(P1)內(nèi)銷釘?shù)倪\(yùn)動(dòng)混合了流體。原則上，混合器件((34)可與蓋子(|32)剛性連接，優(yōu)選整體連接，從而只在轉(zhuǎn)動(dòng)蓋子(卩2)時(shí)發(fā)生混合，例如容器(pi)密封時(shí)。例如，借助與混合器件③4)相連的輪盤(pán)或借助與混合器件((34)相連的操縱桿來(lái)驅(qū)動(dòng)混合器件(卩4)也可行，所述操縱桿或輪盤(pán)優(yōu)選位于容器(卩l(xiāng))外，特別優(yōu)選裝在底板下或蓋子(卩2)之上。此時(shí)，不轉(zhuǎn)動(dòng)蓋子((32)也可驅(qū)動(dòng)混合器件(P4)，這對(duì)于維持裝置內(nèi)的無(wú)菌環(huán)境特別有利。還可能利用位于容器(P)上的特制螺絲和特制蓋子((32)的適當(dāng)組合，該組合的特征在于可通過(guò)螺絲將蓋子擰在容器上，一旦蓋子的所有螺絲被擰緊就可在容器上自由轉(zhuǎn)動(dòng)。例如，已知這種閉合方式已用于含毒性或腐蝕性物質(zhì)的容器以保護(hù)兒童。而此時(shí)，也只在轉(zhuǎn)動(dòng)蓋子時(shí)才驅(qū)動(dòng)混合器件(卩4)，但轉(zhuǎn)動(dòng)蓋子不一定會(huì)打開(kāi)容器(|31)。根據(jù)本發(fā)明第一種裝置的具體實(shí)施方式，浸液助器(I33)是混合器件((34)的組件。此時(shí)，將混合流體的導(dǎo)流葉片安裝在浸液助器(卩3)上或構(gòu)成浸液助器(p3)的一部分。根據(jù)本發(fā)明第一種裝置的特別優(yōu)選的實(shí)施方式，用本發(fā)明方法的說(shuō)明中所述的組合物將本發(fā)明第一種裝置裝填至總高度H的至少10%，優(yōu)選至少20%，更優(yōu)選至少30%，甚至更優(yōu)選至少40%，最優(yōu)選至少50%，所述組合物包含至少一種多元醇，如果合適還可包含一種或多種添加劑。此外，根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的第一種裝置優(yōu)選裝有用針刺穿的蓋子(P2)，如WO2005/014173Al所述，特別優(yōu)選用本發(fā)明方法說(shuō)明中所述的組合物填充該容器，該容器內(nèi)可維持低于大氣壓的壓力，安裝在該容器中的浸液助器使其能沿高度h垂直運(yùn)動(dòng)甚至無(wú)需打開(kāi)蓋子。如此，由于容器((31)中的壓力低于大氣壓，作為生物學(xué)樣品的一定量的流體，例如一定量的血液經(jīng)蓋子吸入容器(P1)中，通過(guò)浸液助器(P3)的垂直運(yùn)動(dòng)將該液體樣品注入含有至少一種多元醇和至少一種添加劑(如果合適的話)的組合物中，然后立即用混合器件((34)混合該液體生物學(xué)樣品和該組合物。處理生物學(xué)樣品的第二種裝置也有助于實(shí)現(xiàn)上述目的，其裝有以下組件(卩l(xiāng))具有至少一個(gè)端口的至少一個(gè)容器，從而能接收流體最多至裝填高度h，其橫截面積為A容器，其中所述容器用本發(fā)明方法說(shuō)明中所述的組合物最高填充至裝填高度h，所述組合物含有至少一種多元醇，如果合適的話還含有至少一種添加劑，(卩2)用于密封所述至少一個(gè)端口的至少一個(gè)蓋子，(卩5)橫截面積為A物件的至少一個(gè)物件(body)，其不與容器((31)或蓋子(卩2)相連，但位于容器內(nèi)，A物件/A容器之比優(yōu)選約0.02-0.95%，特別優(yōu)選約0.1-0.9%，最優(yōu)選0.2-0.5%。述及"不與容器(P1)或蓋子(P2)相連"應(yīng)理解成物件((35)可以在該容器內(nèi)，特別是在組合物內(nèi)自由移動(dòng)。當(dāng)將因?yàn)榻M合物的高粘度而起初維持在組合物表面的生物學(xué)樣品，例如小組織片段引入本發(fā)明的第二種裝置時(shí)，本發(fā)明的該裝置還可通過(guò)使該裝置繞軸L'傾斜使此種組分充分浸入該組合物中，如圖5所示。這造成容器(|31)內(nèi)的物件((35)向橫截面A容器垂直移動(dòng)，沿移動(dòng)物件產(chǎn)生的液流導(dǎo)致組合物混合。特別優(yōu)選的容器((31)和蓋子(P2)是在本發(fā)明第一種裝置說(shuō)明的最初描述的那些容器和蓋子。根據(jù)本發(fā)明第二種裝置的具體實(shí)施方式，用組合物填充所述裝置的裝填高度h是容器((31)的總高度H的20-99%，特別優(yōu)選40-卯％，最優(yōu)選50-80%。在本文中，體035)可以是任何形狀，但優(yōu)選球形或立方形，特別優(yōu)選球形。此外，容器((31)內(nèi)可存在多個(gè)物件(P5)，例如兩個(gè)、四個(gè)或五個(gè)，如果合適的話，最多可存在10個(gè)、20個(gè)或30個(gè)這種物件。還優(yōu)選該物件由密度超過(guò)所述組合物密度至少5%，特別優(yōu)選至少10%，更優(yōu)選至少20%，甚至更優(yōu)選至少50%，最優(yōu)選至少100%的材料制成。根據(jù)本發(fā)明該第二種裝置的特別優(yōu)選實(shí)施方式，如果容器(P1)的直徑優(yōu)選為5-500mm，特別優(yōu)選10-200mm，最優(yōu)選10-30mm，物件(卩5)可以是直徑為1-20mm，特別優(yōu)選5-10mm的鋼球形式。原則上，物件((35)還可以具有磁性，此時(shí)，物件((35)可以是例如攪拌棒的形式。此外，本發(fā)明的第二種裝置優(yōu)選裝有用針剌穿的蓋子((32)，如WO2005/014173Al所述，特別優(yōu)選容器內(nèi)的壓力維持低于大氣壓。如此，由于容器(P1)中的壓力低于大氣壓，可將作為生物學(xué)樣品的一定量的流體，例如一定量的血液經(jīng)蓋子吸入容器((31)中，通過(guò)移動(dòng)蓋子(P1)，優(yōu)選使蓋子①1)繞軸L'傾斜或轉(zhuǎn)動(dòng)來(lái)確保生物學(xué)樣品和組合物均勻混合。在特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的第一種和第二種裝置可以是無(wú)菌的，特別是容器的內(nèi)部無(wú)菌。一種試劑盒也有助于實(shí)現(xiàn)上述目的，其裝有(Yl)本發(fā)明方法說(shuō)明中所述的組合物，其包含至少一種多元醇，如果合適，還包含至少一種添加劑，和(Y2)上述裝置之一或技術(shù)人員認(rèn)為適合于接收該組合物的另一個(gè)容器，優(yōu)選可密封容器，例如Greiner試管、Falcon試管、Eppendorf容器或出版物US6,602,718、US2004/0043505Al、US2005/0160701Al、US2003/0086830Al、US2003/0087423Al或WO2005/014173Al中所述的容器之一。在本文中，組合物可以早已分散在裝置或容器(y2)中，例如，本發(fā)明的第二種裝置也是如此。然而，試劑盒也可裝有作為另一種組件的加料器件(Y4)，其填充了所述組合物，借助該加料器件可將明確體積的組合物注入(優(yōu)選無(wú)菌條件下)該裝置或容器(y2)中。這種加料器件(rO可以設(shè)計(jì)成，例如皂液壓送器(soapdispenser)的形式。裝有以下組分的試劑盒也有助于實(shí)現(xiàn)上述目的(Yl)本發(fā)明方法說(shuō)明中所述的組合物，其包含至少一種多元醇，如果合適，還包含至少一種添加劑，和(y3)分析生物學(xué)樣品中生物分子或分析生物學(xué)樣品的形態(tài)的試劑。原則上，分析生物學(xué)樣品中生物分子或分析生物學(xué)樣品的形態(tài)的試劑可以是技術(shù)人員已知可用于生物學(xué)樣品形態(tài)分析或分析生物學(xué)樣品中生物分子的所有試劑形式。具體地說(shuō)，這些試劑包括染色細(xì)胞或細(xì)胞組分的染料，任選用熒光染料或酶標(biāo)記的抗體，吸附基質(zhì)，例如DEAE-纖維素或二氧化硅膜，酶的底物，瓊脂糖凝膠，聚丙烯酰胺凝膠，諸如乙醇或苯酚等溶劑，緩沖水溶液，不含RNA酶的水，裂解試劑，醇溶液等。裝有以下組分的試劑盒也有助于實(shí)現(xiàn)上述目的(Yl)本發(fā)明方法說(shuō)明中所述的組合物，其包含至少一種多元醇，如果合適，還包含至少一種添加劑，(Y2)上述裝置之一或技術(shù)人員認(rèn)為適合于接收該組合物的另一個(gè)容器，優(yōu)選可密封容器，和(Y3)分析生物學(xué)樣品中生物分子或分析生物學(xué)樣品的形態(tài)的試劑。組合物也可分散在該裝置或容器(Y2)中，或者該試劑盒可裝有合適的加料器件(T4)。使用上述裝置或上述試劑盒之一來(lái)處理生物學(xué)樣品，在本發(fā)明方法中使用本發(fā)明裝置或使用上述試劑盒之一來(lái)處理生物學(xué)樣品，使用本發(fā)明方法說(shuō)明中所述含有至少一種多元醇和至少一種添加劑(如果合適的話)的組合物來(lái)處理生物學(xué)樣品，特別是來(lái)穩(wěn)定生物學(xué)樣品也有助于實(shí)現(xiàn)上述目的。治療疾病的方法也有助于實(shí)現(xiàn)上述目的，所述方法包括以下方法步驟(al)通過(guò)診斷方法來(lái)診斷疾病，所述診斷方法包括采用本發(fā)明方法分析生物學(xué)樣品，本發(fā)明方法包括方法步驟i)、ii)和iv)，和(CJ2)治療性治療所診斷的疾病?，F(xiàn)在，借助非限制性附圖和實(shí)施例詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明。圖1顯示了本發(fā)明第一種裝置的一種實(shí)施方式的側(cè)視圖，其中混合器件(P4)安裝在浸液助器(I33)的上方。圖la和lb顯示了裝有設(shè)計(jì)的不同導(dǎo)流葉片的兩種混合器件①4)的橫截面，這些導(dǎo)流葉片安裝在浸液助器(J33)之下。圖2顯示了本發(fā)明第一種裝置的另一種實(shí)施方式的側(cè)視圖，其中混合器件(卩4)安裝在浸液助器(P3)的下方。圖3顯示了本發(fā)明第一種裝置的另一種實(shí)施方式的側(cè)視圖，其中混合器件034)是浸液助器(P3)的一個(gè)組件。圖4顯示了本發(fā)明第一種裝置的另一種實(shí)施方式的側(cè)視圖，其中浸液助器(P3)包括樣品接收器，其中混合器件((34)是浸液助器(P3)的一個(gè)組件。圖4a顯示了與蓋子相連的浸液助器(I33)的側(cè)視圖。圖4b顯示了設(shè)計(jì)成具有傾斜側(cè)板作為導(dǎo)流葉片的浸液助器(P3)。圖5顯示了本發(fā)明第二種裝置的一種實(shí)施方式的側(cè)視圖。圖5a顯示了其中裝有物件。5)的裝置的頂視圖。圖6顯示了實(shí)施例4所得SDS聚丙烯酰胺凝膠和實(shí)施例4所得蛋白質(zhì)印跡。圖7以直方圖的形式顯示了實(shí)施例5所得酶活性分析的結(jié)果。圖8、8a和8b顯示了對(duì)實(shí)施例6所得RNA樣品在高溫保存后形成的瓊脂糖-甲醛-MOPS凝膠的分析結(jié)果。圖8c顯示了對(duì)實(shí)施例2a所得RNA形成的瓊脂糖-甲醛-MOPS凝膠的分析結(jié)果。圖9顯示了對(duì)實(shí)施例7所得RNA樣品用五元醇或六元醇穩(wěn)定后形成的瓊脂糖-甲醛-MOPS凝膠的分析結(jié)果。圖9a和％顯示了對(duì)實(shí)施例2b所得RNA形成的瓊脂糖-甲醛-MOPS凝膠的分析結(jié)果。圖9c和9d顯示了對(duì)實(shí)施例5a中獲得的蛋白質(zhì)用BCA試驗(yàn)分析的結(jié)果。圖10和10a顯示了按照本發(fā)明穩(wěn)定的蛋白質(zhì)(恰根公司的逆轉(zhuǎn)錄酶"奧姆尼斯可利普特"("Omniscript"，QIAGEN))的活性分析結(jié)果，在實(shí)施例8中PCR反應(yīng)后形成瓊脂糖-TAE凝膠進(jìn)行所述分析。圖1所示的裝置包括總高度為H的容器1，該容器可用蓋子2密封。容器1用組合物，優(yōu)選液體組合物，優(yōu)選含有至少一種多元醇和至少一種添加劑(如果合適的話)的組合物最高裝填至裝填高度h。設(shè)計(jì)成網(wǎng)孔或篩網(wǎng)形式的浸液助器3與蓋子2相連。樣品5在浸入浸液助器3之前位于組合物的表面，在閉合蓋子2時(shí)樣品浸入組合物中，在該方法中，容器1閉合時(shí)浸液助器3穿過(guò)容器l最高到高度h'。當(dāng)蓋子2擰緊時(shí)，安裝在浸液助器3上的混合器件的導(dǎo)流葉片4混合該組合物。由圖la就lb可以看出，可將混合器件的導(dǎo)流葉片4設(shè)計(jì)成不同形狀。圖la和lb顯示了4個(gè)導(dǎo)流葉片4，但原則上還可能利用少于4個(gè)或多于4個(gè)導(dǎo)流葉片4，只要混合器件圍繞軸L的旋轉(zhuǎn)能確保容器1中的組合物充分混合。根據(jù)圖2，導(dǎo)流葉片4還可安裝在浸液助器4以下，而如圖3所示，導(dǎo)流葉片4也可以是浸液助器3的一個(gè)組件。此時(shí)，浸液助器3可具有，例如一個(gè)或多個(gè)放射狀延伸(即垂直于軸L)的突出物，這些突出物可設(shè)計(jì)成，例如小的葉片形狀。如圖3所示，本發(fā)明特別優(yōu)選導(dǎo)流葉片4盡可能接近生物學(xué)樣品5，因?yàn)檫@樣能確保組合物緊鄰樣品而盡可能徹底地混合，從而使得所述組合物特別均勻地滲入樣品5。圖3所示的裝置還可裝有輪盤(pán)6，借助該輪盤(pán)即使關(guān)閉且不移動(dòng)蓋子2也能轉(zhuǎn)動(dòng)混合器件的導(dǎo)流葉片4。圖4顯示了其中浸液助器3裝有樣品接收器的裝置，由US2003/0087423Al可以知曉。此處，裝有樣品接收器的浸液助器3還可設(shè)計(jì)成具有傾斜側(cè)板(因此從上面看呈梯形的輪廓)，因而這些傾斜的側(cè)板在浸液助器繞軸L轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)起到導(dǎo)流葉片4的作用(參見(jiàn)圖4b)。圖5顯示了本發(fā)明第二種裝置的一種實(shí)施方式。該裝置用上述組合物最高裝填至裝填高度h，鋼球7位于容器1的內(nèi)部。當(dāng)該裝置繞軸L，傾斜時(shí)，鋼球以圖5所示箭頭的方向移動(dòng)，從而混合了所述組合物。實(shí)施例1.按照本發(fā)明處理的樣品的組織學(xué)分析取出器官后，立即用lml表l所詳述的各種組合物處理大鼠肝臟組織，25"C培養(yǎng)箱中保存1天。保存后，將組織片從溶液中取出，轉(zhuǎn)移入塑料盒中，按照常規(guī)方法在一系列濃度遞增的乙醇和二甲苯中溫育并包埋在石蠟中。利用切片機(jī)制備石蠟包埋組織切片，通過(guò)常規(guī)方法用蘇木精-曙紅染色載玻片上的這些切片。利用光學(xué)顯微鏡觀察染色的組織切片。結(jié)果總結(jié)于表l:表l<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>由表l可以看出，本發(fā)明方法在室溫條件下能穩(wěn)定新鮮的組織樣品，對(duì)如此穩(wěn)定的樣品還可進(jìn)行組織學(xué)分析。la.1,2,3-丙三醇和3-甲基-l丄5-戊三醇處理樣品的組織學(xué)分析對(duì)于該實(shí)驗(yàn)，制備由25%1,2,3-丙三醇和75%3-甲基-l,3,5-戊三醇及飽和低聚甲醛水溶液(交叉活化添加劑(cross-activatingadditive))構(gòu)成的組合物。為制備最終的組合物，將以體積計(jì)90%的三醇混合物與以體積計(jì)10%的低聚甲醛溶液混合。取出器官后立即用如此制備的最終組合物處理大鼠肝臟和肌肉組織，室溫下(18-25。C)保存1天。保存后，將組織片從溶液中取出，轉(zhuǎn)移入塑料盒中，按照常規(guī)方法在一系列濃度遞增的乙醇和二甲苯中溫育并包埋在石蠟中。利用切片機(jī)制備石蠟包埋組織樣品的切片，通過(guò)常規(guī)方法用蘇木精-曙紅染色載玻片上的這些切片。利用光學(xué)顯微鏡觀察染色的組織切片。明顯可以看出該穩(wěn)定溶液能固定組織，而如此處理的組織適合于組織研究。2.按照本發(fā)明處理的保存樣品的RNA分析取出器官后，立即用lml各種不同的溶液(參見(jiàn)表2)處理大鼠肝臟組織，室溫下保存最長(zhǎng)28天，用冰箱于4-8'C保存最長(zhǎng)3個(gè)月。保存后，分離保存樣品的RNA。為分離RNA，保存后將組織從溶液中取出，每10mg組織加入350pl市售可得的異硫氰酸胍緩沖液，例如德國(guó)希爾敦市恰根公司的RLT緩沖液。利用球磨機(jī)，例如恰根公司的組織裂解儀(TissueLyzer)(2X2分鐘，20Hz，5mm鋼球)勻漿樣品，在該方法中以現(xiàn)有技術(shù)已知的方式用異硫氰酸胍緩沖液裂解細(xì)胞并使釋放的蛋白質(zhì)變性。然后以14000rpm離心裂解液3分鐘。取上清液350(^1，其代表10mg組織。向這些樣品中加入1倍體積(350pl)的70%乙醇，通過(guò)反復(fù)抽吸或旋振混合樣品約5秒。然后將裂解液施加于市售可得的含二氧化硅膜的自旋柱(spincolumn),例如恰根公司的Rnesay柱，離心(l分鐘，10000Xg)使之穿過(guò)膜。RNA維持與膜結(jié)合，然后用第一種市售可得的含異硫氰酸胍的洗滌緩沖液，例如恰根公司的緩沖液RW1洗滌。為了酶解除去結(jié)合的任何總DNA，隨后將用合適緩沖液配制的DNA酶I施加于該柱，室溫下溫育15分鐘以降解結(jié)合的DNA。然后用第一種市售可得的含異硫氰酸胍的洗滌緩沖液，例如恰根公司的緩沖液RW1再次洗滌樣品，隨后用含Tris或含Tris和醇的第二種洗滌緩沖液，例如恰根公司的緩沖液RPE洗滌。此處，通過(guò)離心(l分鐘，10000Xg)使各種洗滌緩沖液穿過(guò)膜。以較小體積的含Tris或含Tris和醇的第二種洗滌緩沖液重復(fù)此洗滌步驟，在該方法中離心(2分鐘，最高轉(zhuǎn)速，本例中是20000Xg)使膜同時(shí)干燥。對(duì)于洗脫，將40pl不含RNA酶的水加到膜上使純化的RNA與膜分離。在10-30'C的溫度下溫育1分鐘后，通過(guò)離心(l分鐘，10000Xg)使洗脫液穿過(guò)膜，重復(fù)此洗脫步驟完成洗脫。用水稀釋后，通過(guò)光度計(jì)檢測(cè)260nm波長(zhǎng)的吸光度來(lái)測(cè)定分離的RNA總量。通過(guò)光度計(jì)檢測(cè)260nm吸光度與280nm吸光度的比值來(lái)測(cè)定如此獲得的RNA含量。分離步驟的結(jié)果見(jiàn)表2。從表2可以看出，采用本發(fā)明方法能在室溫穩(wěn)定新鮮的生物學(xué)樣品，從這些樣品中可以分離足夠量的RNA，即使保存長(zhǎng)達(dá)3個(gè)月后，仍可通過(guò)260nm吸光度與280nm吸光度的比值表征該RNA的含量。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>2a.按照本發(fā)明處理的樣品的RNA分析為研究含添加劑的組合物穩(wěn)定RNA的特性，如實(shí)施例1所述制備了含不同量低聚甲醛的組合物(參見(jiàn)表2a)。取出器官后，立即用1.5ml的各種最終組合物處理大鼠肝臟組織，室溫下保存3天。然后按照實(shí)施例2所述方法分離RNA。各例研究三份樣品。用水稀釋后，通過(guò)光度計(jì)檢測(cè)260nm波長(zhǎng)的吸光度來(lái)測(cè)定分離的RNA總量。通過(guò)光度計(jì)檢測(cè)260nm吸光度與280nm吸光度的比值來(lái)測(cè)定如此獲得的RNA含量。分離步驟的結(jié)果見(jiàn)表2a。給出了各例所研究的三份樣品的平均值。此外，用溴化乙錠染色瓊脂糖凝膠分析分離的RNA。為此，用1%的甲醛瓊脂糖-MOPS凝膠分離，例如10nl洗出液。結(jié)果見(jiàn)圖8c。表2a<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>結(jié)果顯示盡管混合有交聯(lián)添加劑(低聚甲醛)，但本發(fā)明的組合物出乎意料地分離到質(zhì)量和產(chǎn)量非常好的RNA。因此，本發(fā)明方法不僅能維持樣品的形態(tài)，還能穩(wěn)定分子成分，例如核酸。2b.按照本發(fā)明處理的樣品長(zhǎng)期保存后的RNA分析取出器官后，立即用lml的組合物a)25。/o3-甲基-l,2,5-戊三醇和750/01,2，6-己三醇處理大鼠肝臟組織，用冰箱于4-8。C保存最長(zhǎng)12個(gè)月。同樣，用1ml組合物b)25%1,2,3-丙三醇和75%3-甲基-l,2,5-戊三醇處理大鼠腎臟組織并保存。表2b:<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>在表2b所述的時(shí)間點(diǎn)，采用實(shí)施例2所述方法分離保存在組合物a)和b)中的樣品的RNA。用溴化乙錠染色瓊脂糖凝膠分析分離的RNA。為此，制備例如0.1%甲醛瓊脂糖-MOPS凝膠。圖9a顯示了用組合物a)處理樣品的結(jié)果，圖9b顯示了用組合物b)處理樣品的結(jié)果。兩幅圖均明確顯示本發(fā)明方法能將RNA保存甚至非常長(zhǎng)的時(shí)期，而無(wú)需冷凍。3.按照本發(fā)明方法處理的保存樣品的DNA分析取出器官后，立即用lml各種不同的溶液(參見(jiàn)表3)處理大鼠肺組織，25'C保存6天。保存后，分離保存樣品的DNA。為分離DNA，保存后將組織從溶液中取出，每10mg組織加入180pl恰根公司的緩沖液ALT。利用球磨機(jī)，例如恰根公司的組織裂解儀(45秒，25Hz，利用5m鋼球)勻漿樣品。加入40pl蛋白酶K溶液(恰根公司)后，55t:振蕩溫育裂解液l小時(shí)。溫育后，加入220pl市售可得的含鹽酸胍的裂解緩沖液，例如恰根公司的緩沖液AL，旋振混合樣品。與220^1100%的乙醇混合后，將樣品施加于含二氧化硅膜的自旋柱(恰根公司的QIAamp迷你自旋柱)，離心(10,000rpm)l分鐘使裂解液穿過(guò)膜。DNA維持與膜結(jié)合，首先用第一種市售可得的含鹽酸胍的洗滌緩沖液，例如恰根公司的緩沖液AW1洗滌，隨后用含酒精的第二種洗滌緩沖液，例如恰根公司的緩沖液AW2洗滌。在該方法中，通過(guò)離心(l分鐘，10000Xg或3分鐘，14000Xg)使洗滌緩沖液穿過(guò)膜。施加60plAE洗脫緩沖液(恰根公司)洗脫DNA。溫育1分鐘后，通過(guò)離心(l分鐘，10000Xg)使洗脫緩沖液穿過(guò)膜，重復(fù)洗脫。用水稀釋后，通過(guò)光度計(jì)檢測(cè)260nm波長(zhǎng)的吸光度來(lái)測(cè)定分離的DNA總量。通過(guò)光度計(jì)檢測(cè)260nm吸光度與280nm吸光度比值來(lái)測(cè)定如此獲得的RNA含量。分離步驟的結(jié)果見(jiàn)表3。表3試劑260nm/280nm產(chǎn)量1,2，6-己三醇1,930.93-甲基-l,3，5-戊三醇1.921.125%1,2,3-丙三醇/75%1，2，6-己三醇1.924.675%1,2,3-丙三醇/25%3-甲基-l,3,5-戊三醇1.921.725%1,2,3-丙三醇/75%3-甲基-l,3,5-戊三醇2.026.975%1，2，6-己三醇/25%3-甲基-l，3，5-戊三醇1.914.750%1，2,6-己三醇/50%3-甲基-l，3,5-戊三醇1.919.4從表3可以看出，即使在室溫下保存6天，本發(fā)明的穩(wěn)定方法也能在穩(wěn)定的樣品中分離得到質(zhì)量和產(chǎn)量良好的DNA，因此，本發(fā)明的穩(wěn)定方法適用于穩(wěn)定RNA(實(shí)施例2)和穩(wěn)定DNA。4.按照本發(fā)明處理的保存樣品的蛋白質(zhì)分析取出器官后，立即用lml各種不同的三醇(參見(jiàn)表4)處理大鼠肝臟組織，在培養(yǎng)箱中于25"C保存2天和7天。保存后，制備保存樣品的蛋白質(zhì)提取物。取出大鼠的肝臟組織后，將其直接冷凍在液氮中，然后于-8(TC保存用作對(duì)照。為制備蛋白質(zhì)提取物，保存后將組織從穩(wěn)定組合物中取出，每10mg組織加入400iLil常規(guī)提取緩沖液，在本例中是8M脲、100mM磷酸二氫鈉和10mMTris，pH8.0的組合物，利用球磨機(jī)，例如恰根公司的組織裂解儀勻漿樣品。以可能的最高轉(zhuǎn)速(例如，約20000Xg)離心得到的裂解液15秒以沉淀未溶解的成分。取出蛋白上清液，采用Bradford試驗(yàn)測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。通過(guò)常規(guī)方法用SDS-聚丙烯酰胺凝膠分離各3pg蛋白質(zhì)，采用考馬斯染色法染色凝膠中的蛋白質(zhì)(參見(jiàn)圖6)。與對(duì)照相比，保存期間染色的蛋白質(zhì)條帶的模式未改變。蛋白質(zhì)維持穩(wěn)定，沒(méi)有任何降解。按照生產(chǎn)商的使用說(shuō)明書(shū)，用半干印跡設(shè)備將施加了相同樣品的第二份SDS-聚丙烯酰胺凝膠印跡到硝酸纖維素膜上。按照現(xiàn)有技術(shù)用奶粉飽和該膜，按照生產(chǎn)商的使用說(shuō)明書(shū)使膜與ERK2-特異性抗體，例如恰根公司的TaqlOO抗體雜交，并進(jìn)行免疫檢測(cè)。結(jié)果示于圖6。從圖6可以看出，即使在室溫下保存7天后，處理樣品中的蛋白質(zhì)與處理前一樣仍維持完整并未降解，分離的產(chǎn)量良好。因此，本發(fā)明的穩(wěn)定方法適合于穩(wěn)定核酸(參見(jiàn)實(shí)施例2和3)和穩(wěn)定蛋白質(zhì)。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>5.按照本發(fā)明處理的保存樣品的蛋白質(zhì)分析取出器官后，立即用lml各種不同的三醇(參見(jiàn)表5)處理大鼠肝臟組織，在冰箱中于4-8。C保存2天。取出器官后組織立即冷凍在液氮中，-80'C冷凍保存用作陽(yáng)性對(duì)照。保存后，將組織從穩(wěn)定溶液中取出，每10mg組織加入400^1恰根公司的"液相芯片廣譜Ser/Thr-激酶(LiquiChipBroad-RangeSer/Thr-Kinase)"手冊(cè)所述的提取緩沖液。利用球磨機(jī)，例如恰根公司的組織裂解儀(5分鐘時(shí)期，30Hz，利用5mm鋼球)勻漿樣品，然后用臺(tái)式離心機(jī)(benchtopcentrifuge)以14000rpm離心3分鐘。取出上清液，用提取緩沖液作1:10稀釋。按照生產(chǎn)商的使用說(shuō)明書(shū)，使用恰根公司的"液相芯片廣譜Ser/Thr-激酶"試劑盒，用相應(yīng)的設(shè)備(液相芯片讀數(shù)計(jì)(LiquiChipReader))檢測(cè)如此獲得的樣品的激酶活性。未加蛋白質(zhì)的生產(chǎn)商試驗(yàn)緩沖液l用作陰性對(duì)照。各樣品的制備和檢測(cè)按一式兩份進(jìn)行。圖7顯示了用各激酶底物(HH:組蛋白H1，MBP:髓磷脂堿性蛋白(myelinbasicprotein))檢測(cè)的熒光均值(MFI=中等熒光強(qiáng)度)結(jié)果。這些結(jié)果顯示，按照本發(fā)明方法處理并按照本發(fā)明方法保存生物學(xué)樣品后，從中分離的蛋白質(zhì)仍能顯示它們的活性。因此，所示穩(wěn)定劑也適用于依賴天然和活性蛋白質(zhì)的下游分析。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>5a.按照本發(fā)明處理的樣品經(jīng)長(zhǎng)期保存后的蛋白質(zhì)分析取出器官后，立即各自用1.5ml的25。/。3-甲基-l,2,5-戊三醇(penantrio1)和75%1,2，6-己三醇的組合物處理大鼠肝臟組織，在培養(yǎng)箱中于25。C或在冰箱中于2-8'C保存最長(zhǎng)6個(gè)月。在表5a所示的各時(shí)間點(diǎn)制備保存樣品的蛋白質(zhì)提取物。表5a》<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>為制備蛋白質(zhì)提取物，保存后將組織從穩(wěn)定組合物中取出，每10mg組織加入400nl常規(guī)提取緩沖液，在本例中是恰根公司的哺乳動(dòng)物裂解緩沖液，利用球磨機(jī)，例如恰根公司的組織裂解儀勻漿樣品。以可能的最高轉(zhuǎn)速(例如，約20000Xg)離心得到的裂解液15秒以沉淀不溶解的成分。取出蛋白上清液，采用BCA試驗(yàn)(例如皮爾斯公司(Pierce)的)測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。通過(guò)常規(guī)方法用SDS-聚丙烯酰胺凝膠分離各3嗎蛋白質(zhì)，按照生產(chǎn)商的使用說(shuō)明書(shū)，用半干印跡設(shè)備將凝膠印跡到硝酸纖維素膜上。按照現(xiàn)有技術(shù)用奶粉飽和該膜，按照生產(chǎn)商的使用說(shuō)明書(shū)使膜與肌動(dòng)蛋白-特異性抗體和ERK2-特異性抗體，例如恰根公司的TaqlOO抗體雜交，并進(jìn)行免疫檢測(cè)。圖9顯示了用ERK2-特異性抗體的結(jié)果，圖9c顯示了用肌動(dòng)蛋白-特異性抗體的結(jié)果。從圖9c和9d可以看出，無(wú)需冷凍，并且甚至在高溫，例如室溫下也可能將穩(wěn)定樣品中的蛋白質(zhì)長(zhǎng)時(shí)間保存。5b.通過(guò)ELISA技術(shù)分析按照本發(fā)明處理的樣品中的蛋白質(zhì)取出器官后，立即各自用1.5ml的25。/()3-甲基-l,2,5-戊三醇(penantrio1)和75%1,2,6-己三醇的組合物處理大鼠肝臟組織，在培養(yǎng)箱中于25'C保存7天。取出器官后組織樣品立即冷凍在液氮中，-S(TC冷凍保存用作對(duì)照。保存后，制備蛋白質(zhì)提取物。為制備蛋白質(zhì)提取物，保存后將組織從穩(wěn)定組合物中取出，每10mg組織加入200pl常規(guī)提取緩沖液，在本例中是恰根公司的哺乳動(dòng)物裂解緩沖液，利用球磨機(jī)，例如恰根公司的組織裂解儀勻漿樣品。以可能的最高轉(zhuǎn)速(例如，約20000Xg)離心得到的裂解液15秒以沉淀不溶解的成分。取出蛋白上清液，采用BCA試驗(yàn)(例如皮爾斯公司的)測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。將裂解液按濃度2.5mg/ml標(biāo)準(zhǔn)化，用20pl該稀釋裂解液分析。按照生產(chǎn)商(恰根公司)的使用說(shuō)明書(shū)，用GADPH和TBP的"液相芯片細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)檢測(cè)試劑盒(LiquiChipCellSignalingDetectionKits)"和匹配的"核心試劑盒(CoreKit)"在相應(yīng)的工作站(液相芯片工作站(LiquichipWorkstation))上進(jìn)行該分析。用不含組織的純緩沖液樣品測(cè)定背景。從樣品數(shù)據(jù)中扣除背景。各樣品的制備和檢測(cè)按一式三份進(jìn)行。表515為檢測(cè)的熒光均值(^^1=中等熒光強(qiáng)度)，顯示了各蛋白質(zhì)(GADPH、TBP)的檢測(cè)結(jié)果。表5b:<table>complextableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>這些結(jié)果明確證明，按照本發(fā)明方法穩(wěn)定和保存生物學(xué)樣品后，仍可通過(guò)ELISA方法分析這些樣品的蛋白質(zhì)。即使在25"C保存7天后仍能檢測(cè)到與對(duì)照相當(dāng)?shù)牡鞍踪|(zhì)含量。6.按照本發(fā)明處理并在高溫下保存的樣品的RNA分析取出器官后，立即各自用lml的1,2，4-丁三醇(1)、3-甲基-l,3,5-戊三醇(2)、1,2，6-己三醇(3)和75%1,2，3-丙三醇與25%1,2,6-己三醇的混合物(4)處理大鼠腎臟組織，在培養(yǎng)箱中于40"C保存1天或5(TC保存2小時(shí)?；蛘撸〕銎鞴俸?，各自用lmll,2,4-丁三醇(1)或3-甲基-1,3,5-戊三醇(2)處理大鼠肺組織，在冰箱中于4-8。C保存1天。取出用于分離RNA(a)的一部分樣品后，將該組織樣品于4(TC在溶液中保存1小時(shí)。隨后，取出另一部分樣品(b)，用其分離RNA。然后，將溶液中剩余的組織樣品在冰箱中于4-8'C再保存1小時(shí)，在培養(yǎng)箱中于4(TC保存1小時(shí)。4輪循環(huán)后，利用最后一次4(TC溫育后的剩余樣品分離RNA(c)。保存后，如實(shí)施例2所述分離保存樣品的RNA。用溴化乙錠染色瓊脂糖凝膠上分析分離的RNA。為此，制備例如1.0%甲醛瓊脂糖-MOPS凝膠。4(TC保存的結(jié)果示于圖8,5(TC保存的結(jié)果示于圖8a。在4"和4(TC之間交替保存的結(jié)果示于圖8b。從圖8、8a和8b可以看出，即使在4(TC或5(TC的溫度下保存，也可從按照本發(fā)明穩(wěn)定的樣品中分離足夠量的完整RNA。7.按照本發(fā)明用不同多元醇處理的樣品的RNA分析取出器官后，立即各自用lml的1,2,3,4,5-戊五醇(飽和水溶液)(l)、1,2,3,4，5，6-己六醇(4.72M，水配制)(2)或1,2,3-丙三醇(3)處理大鼠脾臟組織，在培養(yǎng)箱中于25'C保存1天或在冰箱中于4-8°。保存3天。保存后，如實(shí)施例2所述從保存的樣品分離RNA。用溴化乙錠染色瓊脂糖凝膠分析分離的RNA。為此，制備例如1.0%甲醛瓊脂糖-MOPS凝膠。結(jié)果示于圖9。從圖9可以看出，利用五元醇或六元醇也可穩(wěn)定生物學(xué)樣品。8.按照本發(fā)明方法處理分離的蛋白質(zhì)利用恰根公司的純化逆轉(zhuǎn)錄酶，"奧姆尼斯可利普特"證明該穩(wěn)定劑適合于穩(wěn)定分離的蛋白質(zhì)。用10倍體積的表6所示各種穩(wěn)定劑各處理5嗎純化的酶。將這些混合物在冰箱中于4-8。C保存過(guò)夜。為從穩(wěn)定劑中回收酶，按照生產(chǎn)商恰根公司的使用說(shuō)明書(shū)，利用"拜爾斯普林特(Biosprint)"設(shè)備進(jìn)行基于鎳-NTA-親和結(jié)合的自動(dòng)純化。純化前，用生產(chǎn)商的試驗(yàn)緩沖液將所有樣品的總體積補(bǔ)充至lml，各用50pg磁珠懸液。使用的第一種對(duì)照是生產(chǎn)商的保存緩沖液配制的5ng奧姆尼斯可利普特，以相同的條件保存(樣品6)，第二種對(duì)照是以前未保存在穩(wěn)定溶液中的5ng奧姆尼斯可利普特，只經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單的純化(樣品7)。此外，實(shí)驗(yàn)所用的lpl逆轉(zhuǎn)錄酶在PCR中直接用作陽(yáng)性對(duì)照，即不經(jīng)保存和/或純化(樣品8)。表6<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>隨后用純化的酶作PCR檢測(cè)逆轉(zhuǎn)錄的酶活性。為此，借助傳統(tǒng)的Bradford反應(yīng)檢測(cè)純化后的蛋白質(zhì)濃度(結(jié)果見(jiàn)表6)，用DTT(恰根公司)以RT保存緩沖液透析純化的酶。各2pl的透析蛋白質(zhì)組分用于逆轉(zhuǎn)錄。為進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，制備所有反應(yīng)的反應(yīng)混合物，包括2pll0倍濃度的逆轉(zhuǎn)錄酶緩沖液、10mMdNTP混合物、2pM寡聚-dT15(恰根公司的奧姆尼斯可利普特試劑盒(Omniscriptkit))、每次反應(yīng)用75ngHela細(xì)胞的總RNA，用蒸餾水將每次反應(yīng)的總體積補(bǔ)充至18^1。將該混合物分配在各反應(yīng)容器中，每例加入2iil各自的奧姆尼斯可利普特組分。37'C進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄1小時(shí)。加水而不是逆轉(zhuǎn)錄酶用作陰性對(duì)照(樣品9)。在隨后的PCR中擴(kuò)增人P-肌動(dòng)蛋白的1.6kb片段轉(zhuǎn)錄物。為此，制備所有反應(yīng)的反應(yīng)混合物，包括2pllO-倍濃度的PCR緩沖液、4MdNTP混合物、0.4pl25mM氯化鎂溶液，各引物0.8ml、4pl5-倍濃度的Q溶液和0.25mlTaq-DNA聚合酶(恰根公司的PCR試劑盒)，用蒸餾水將每次反應(yīng)的總體積補(bǔ)充至19pl。將該混合物分配在各反應(yīng)容器中，各加入lpl先制備的cDNA。使用的非模板對(duì)照是水而不是cDNA(NTC樣品)。如下所示進(jìn)行擴(kuò)增93°C、5分鐘；各30輪的93。C30秒，55。C30秒，72。C90秒；然后1輪72'C5分鐘。各反應(yīng)按一式兩份進(jìn)行。擴(kuò)增后，將各10plPCR反應(yīng)物施加于瓊脂糖-TAE凝膠，120V分離1小時(shí)。所用的分子量大小標(biāo)記物是英杰公司(Invitrogen)的"低分子量DNA梯(LowDNAMassLadder)"。結(jié)果示于圖10和10a。從圖IO可以看出，本發(fā)明方法還適用于保存和再純化分離的蛋白質(zhì)而不會(huì)明顯影響蛋白質(zhì)的活性。9.按照本發(fā)明方法處理的樣品的RNA分析取出器官后，立即用lml表7所示各種組合物處理大鼠脾臟組織，25X:保存7天。然后，按照實(shí)施例2所述的方法分離這些樣品的RNA。在下游分析中通過(guò)PCR分析測(cè)定如此分離的RNA的性能。利用從脾臟組織分離并冷凍于-8(TC的RNA作為對(duì)照。為測(cè)定分離的RNA的性能，按照生產(chǎn)商的使用說(shuō)明書(shū)，利用總體積為25pl的各10ng總RNA與實(shí)時(shí)RT-PCR的合適主混合物(mastermix)，例如恰根公司的昆泰克探針RT-PCR試劑盒(QuantitectProbeRT-PCRkit),以及可商品化購(gòu)得的試驗(yàn)引物和樣品，例如ABI公司的?？衫煤线m的實(shí)時(shí)擴(kuò)增設(shè)備，例如ABI公司的7700設(shè)備進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增各按一式兩份進(jìn)行。求出所得ct值的平均值，測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)偏差?？衫胏t值來(lái)相對(duì)定量測(cè)定所用RNA的轉(zhuǎn)錄物水平。結(jié)果示于表7。表7<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>從表7可以看出，可從本發(fā)明處理的樣品中分離的RNA仍非常適合于下游分析。10.按照本發(fā)明處理的冷凍樣品的RNA分析取出器官后，立即將大鼠肝臟組織冷凍在液氮中，然后保存在液氮中。然后將這些樣品各20-50mg與1ml的表8所示各種組合物溫育，4-8。C保存3天。然后如實(shí)施例2所述分離如此預(yù)處理的樣品的RNA。結(jié)果示于表8。從表8可以看出，本發(fā)明方法不僅適用于穩(wěn)定新鮮的生物學(xué)樣品，還適用于制備冷凍樣品以供分析生物分子。表8.組合物RNA量[jig1，3-丙二醇55.51,4-丁二醇55.21，3-丁二醇53.1二丙二醇60.8三甘醇65.650%三甘醇+50%1,3-丙二醇51.11,2,6-己三醇46.71,2,3-丙三醇49.31,7-庚二醇53.51,5-戊二醇48.31,6-己二醇51,72,4-戊二醇45.42-乙基-2-(羥甲基)-l，3-丙二醇50.33-烯丙氧基-12-丙二醇40.4順-2-丁烯-l，4-二醇35.011.按照本發(fā)明方法處理的樣品的誘導(dǎo)分析從生物體采集生物學(xué)樣品觸發(fā)了細(xì)胞中的應(yīng)激反應(yīng)。基因表達(dá)分布模式立即開(kāi)始變化，首先是RNA降解，然后還誘導(dǎo)了新轉(zhuǎn)錄物的合成。因此，必須按照本發(fā)明處理生物學(xué)樣品不僅是防止降解，而且可防止誘導(dǎo)新轉(zhuǎn)錄物合成。為檢測(cè)按照本發(fā)明處理樣品是否能立即防止誘導(dǎo)新轉(zhuǎn)錄物合成，取出器官后，立即用由25%3-甲基-1,3,5-戊三醇和75%1,2，6-己三醇構(gòu)成的1ml組合物處理大鼠肺組織，并在25'C保存2小時(shí)、4小時(shí)和24小時(shí)。用PBS處理并相同保存的組織樣品，和取出器官后立即冷凍在液氮中并在-80r保存的組織樣品用作對(duì)照。然后按照實(shí)施例2所述的方法分離RNA。為進(jìn)一步分析所分離的RNA，按照生產(chǎn)商的使用說(shuō)明書(shū)，利用總體積為25pl的10ng總RNA與實(shí)時(shí)RT-PCR的合適主混合物，例如恰根公司的昆泰克SYBR綠RT-PCR試劑盒(QuantitectSYBRGreenRT-PCRkit)?？衫煤线m的實(shí)時(shí)擴(kuò)增設(shè)備，例如ABI公司的7700設(shè)備進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增各按照一式兩份進(jìn)行。求出所得ct值的平均值，測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)偏差?？衫胏t值來(lái)相對(duì)定量測(cè)定所用RNA的轉(zhuǎn)錄物水平。為此，在有GAPDH存在下，不僅擴(kuò)增各樣品中的靶轉(zhuǎn)錄物，而且擴(kuò)增各樣品中并非應(yīng)激所誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄物作為內(nèi)源性對(duì)照。待測(cè)試的轉(zhuǎn)錄物量與對(duì)照轉(zhuǎn)錄物的檢測(cè)量有關(guān)，借助A-A-ct方法(儀器生產(chǎn)商ABI公司所述的計(jì)算方法)測(cè)定與冷凍在液氮中的對(duì)照相比，待測(cè)試的轉(zhuǎn)錄物量的變化。立即冷凍在液氮中阻止了轉(zhuǎn)錄物的任何誘導(dǎo)或降解，因此該樣品代表參比樣品(第O時(shí))。用數(shù)學(xué)和圖表方法測(cè)定樣品保存在PBS或本發(fā)明組合物期間轉(zhuǎn)錄物量的變化。保存在PBS中明顯誘導(dǎo)了c-fos基因轉(zhuǎn)錄，因此c-fos轉(zhuǎn)錄物的量顯著增加。然而，按照本發(fā)明處理樣品成功地抑制了這種誘導(dǎo)。權(quán)利要求1.一種處理生物學(xué)樣品的方法，所述方法包括以下方法步驟i)提供生物學(xué)樣品，和ii)使所述生物學(xué)樣品與包含以下組分的組合物接觸(α1)以重量計(jì)，1％到最多100％的至少一種多元醇，和(α2)以重量計(jì)，0-99％的至少一種添加劑，其中，以重量計(jì)，組分(α1)和(α2)的總量為100％。2.如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，所述生物學(xué)樣品是冷凍的生物學(xué)樣品。3.如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，所述生物學(xué)樣品是未冷凍的生物學(xué)樣品。4.如以上權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述多元醇是二醇、三醇、四醇、五醇、六醇、七醇、八醇或九醇。5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述多元醇是二醇或三醇。6.如以上權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述多元醇具有2-20個(gè)碳原子。7.如以上權(quán)利要求1和4-6中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述多元醇選自1，2-乙二醇、1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、1,2-丁二醇、1,3-丁二醇、1，4-丁二醇、2,3-丁二醇、1,2-戊二醇、1,3-戊二醇、1,4-戊二醇、1,5-戊二醇、2,3-戊二醇、2,4-戊二醇、1,2-己二醇、1，3-己二醇、1,4-己二醇、1,5-己二醇、1,6-己二醇、2，3-己二醇、2，4-己二醇、2,5-己二醇、3,4-己二醇、1,2,3-丙三醇、1,2,3-丁三醇、1,2,4-丁三醇、1，2,3-戊三醇、1,2,4-戊三醇、1.2.5-戊三醇、2，3，4-戊三醇、1,2,3-己三醇、1,2,4-己三醇、1，2,5-己三醇、1.2.6-己三醇、2,3,4-己三醇、2,3,5-己三醇、3-甲基-l，3,5-戊三醇、三羥甲基丙醇、季戊四醇、二甘醇、二丙二醇、三甘醇、三丙二醇、聚乙二醇和聚丙二醇。8.如以上權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述組合物包含至少兩種多元醇的混合物。9.如以上權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述添加劑選自洗滌劑，抑制核酸或蛋白質(zhì)降解的抑制劑，粘度調(diào)節(jié)劑，著色劑，緩沖化合物，防腐劑，絡(luò)合劑，還原劑，提高細(xì)胞通透性的物質(zhì)，離液物質(zhì)，固定劑，除多元醇以外的其它溶劑，和這些添加劑中至少兩種的混合物。10.如以上權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，在-8(TC至+80x:的溫度范圍使所述生物學(xué)樣品與所述組合物接觸。11.如以上權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，在0至+8(TC的溫度范圍使所述生物學(xué)樣品與所述組合物接觸。12.如以上權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，除方法步驟i)和ii)以外，所述方法還包括以下方法步驟iii)將與所述組合物接觸的生物學(xué)樣品保存在-8(TC至+8(TC的溫度范圍內(nèi)。13.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，將與所述組合物接觸的生物學(xué)樣品保存0。C至+8(TC的溫度范圍內(nèi)。14.一種分析生物學(xué)樣品的方法，除了權(quán)利要求1和12所述的方法步驟i)和ii)以及如果合適的iii)以外，所述方法還包括以下方法步驟iv)組織學(xué)分析與所述組合物接觸的生物學(xué)樣品，或分析與所述組合物接觸的生物學(xué)樣品中的生物分子或獲自所述生物學(xué)樣品的生物分子。15.如權(quán)利要求14所述的方法，其特征在于，所述方法步驟iv)包括組織學(xué)分析和生物分子的分析。16.如權(quán)利要求14或15所述的方法，其特征在于，所述方法步驟iv)包括分析蛋白質(zhì)與分析核酸。17.如以上權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述生物學(xué)樣品包括生物體，分離的細(xì)胞，細(xì)胞器，細(xì)菌，真菌或真菌的部分，病毒，類病毒，朊病毒，組織，組織片段，組織切片，體液，天然且任選分離的蛋白質(zhì)，合成或修飾的蛋白質(zhì)，天然且任選分離的核酸，合成或修飾的核酸，其它生物分子，例如脂質(zhì)，碳水化合物，代謝產(chǎn)物和代謝物，植物或植物的部分，糞便，污跡，自來(lái)水，食物樣品，環(huán)境樣品，法醫(yī)學(xué)樣品。18.—種處理生物學(xué)樣品的裝置，所述裝置包括以下組件(|31)具有至少一個(gè)端口的至少一個(gè)容器，從而接收流體最多至裝填高度h，(卩2)用于密封所述至少一個(gè)端口的至少一個(gè)蓋子，(P3)與至少一個(gè)所述蓋子(卩2)相連的至少一個(gè)浸液助器，和(P4)混合器件，其繞軸L可旋轉(zhuǎn)地安裝并裝有導(dǎo)流葉片以混合所述至少一個(gè)容器(pl)中的流體。19.如權(quán)利要求18所述的裝置，其特征在于，所述裝填高度h為所述容器(卩1)總高度H的50-80%。20.如權(quán)利要求18或19所述的裝置，其特征在于，所述浸液助器(P3)橫跨所述容器的橫截面。21.如權(quán)利要求18-20中任一項(xiàng)所述的裝置，其特征在于，所述浸液助器(P3)是所述混合器件(P4)的組件。22.如權(quán)利要求18-21中任一項(xiàng)所述的裝置，其特征在于，所述浸液助器(P3)包括至少一個(gè)生物學(xué)樣品的接收器件。23.如權(quán)利要求19-22中任一項(xiàng)所述的裝置，其特征在于，所述浸液助器((33)與所述至少一個(gè)蓋子(P2)整體連接。24.—種處理生物學(xué)樣品的裝置，所述裝置包括以下組件(卩l(xiāng))具有至少一個(gè)端口的至少一個(gè)容器(l)，從而接收流體最多至裝填高度h，其橫截面積為A^，其中所述容器用權(quán)利要求l和4-9所述的組合物最高裝填至裝填高度h，(P2)用于密封所述至少一個(gè)端口的至少一個(gè)蓋子(2)，和(P5)橫截面積為A物件的至少一個(gè)物件(7)，其不與容器((31)或蓋子(P2)相連，但位于容器(P1)內(nèi)。25.—種試劑盒，其裝有(yl)如權(quán)利要求1和4-9中任一項(xiàng)所述的組合物，和(Y2)如權(quán)利要求18-24中任一項(xiàng)所述的裝置，或另一可密封容器。26.—種試劑盒，其裝有(Yl)如權(quán)利要求l和4-9中任一項(xiàng)所述的組合物，和03)分析生物學(xué)樣品中或獲自生物學(xué)樣品的生物分子或分析生物學(xué)樣品形態(tài)的試劑。27.—種試劑盒，其裝有(yl)如權(quán)利要求1和4-9中任一項(xiàng)所述的組合物，(y2)如權(quán)利要求18-24中任一項(xiàng)所述的裝置，或另一可密封容器，和(y3)分析生物學(xué)樣品中或獲自生物學(xué)樣品的生物分子或分析生物學(xué)樣品形態(tài)的試劑。28.如權(quán)利要求18-24中任一項(xiàng)所述的裝置或如權(quán)利要求25-27中任一項(xiàng)所述的試劑盒在處理生物學(xué)樣品中的用途。29.如權(quán)利要求18-24中任一項(xiàng)所述的裝置或如權(quán)利要求25-27中任一項(xiàng)所述的試劑盒在如權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)所述方法中的用途。30.—種制備經(jīng)處理的生物學(xué)樣品的方法，所述方法中使用如權(quán)利要求18-24中任一項(xiàng)所述的裝置或如權(quán)利要求25-27中任一項(xiàng)所述的試劑盒。31.—種分析生物學(xué)樣品的方法，所述方法中使用如權(quán)利要求18-24中任一項(xiàng)所述的裝置或如權(quán)利要求26或27所述的試劑盒。32.—種經(jīng)處理的生物學(xué)樣品，其通過(guò)將生物學(xué)樣品與如權(quán)利要求1和4-9中任一項(xiàng)所述的組合物接觸而獲得。33.如權(quán)利要求l和4-9中任一項(xiàng)所述組合物在處理生物學(xué)樣品中的用途。34.如權(quán)利要求1和4-9中任一項(xiàng)所述組合物在如權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)所述方法中的用途。全文摘要本發(fā)明涉及處理生物學(xué)樣品的方法，該方法包括以下方法步驟i)制備生物學(xué)樣品，和ii)使所述生物學(xué)樣品與包含以下組分的組合物接觸(1)以重量計(jì)，1％至100％的至少一種多元醇，和(2)以重量計(jì)，0至99％的至少一種添加劑，其中，以重量計(jì)，組分(1)和(2)的總量為100％。本發(fā)明還涉及通過(guò)所述方法獲得的生物學(xué)樣品，分析經(jīng)處理的生物學(xué)樣品的方法，處理生物學(xué)樣品的裝置，所述裝置的應(yīng)用、各種試劑盒和所述組合物的應(yīng)用。文檔編號(hào)B01L3/00GK101351693SQ200680049852公開(kāi)日2009年1月21日申請(qǐng)日期2006年12月29日優(yōu)先權(quán)日2005年12月30日發(fā)明者V·霍蘭德申請(qǐng)人:恰根有限公司