一株木糖氧化無色桿菌及其在去除重金屬離子中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一株木糖氧化無色桿菌(Achromobacterxylosoxidans)M2，木糖氧化無色桿菌M2對重金屬離子Mn2+具有去除作用，從土壤和水體中篩選對重金屬離子Mn2+有去除作用的木糖氧化無色桿菌的方法，包括以下步驟：a.金屬選擇培養(yǎng)基的制備；b.耐重金屬菌株的富集馴化;c.耐重金屬菌株的篩選及復(fù)篩；d.菌體對重金屬去除能力的檢測。通過含有金屬離子的培養(yǎng)基對耐重金屬菌株進行富集馴化和純化后菌體對重金屬去除能力的檢測試驗，建立合理、有效的去除重金屬菌株的篩選方法，得到適合需要的菌株。本發(fā)明應(yīng)用于重金屬污染的治理，具有無二次污染、處理效率高、適應(yīng)范圍廣、成本低等優(yōu)點。
【專利說明】一株木糖氧化無色桿菌及其在去除重金屬離子中的應(yīng)用
[0001]
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明涉及一株微生物及其在去除重金屬離子中的應(yīng)用，特別涉及一株木糖氧化無色桿菌及其在去除重金屬污染中的應(yīng)用，屬于微生物的檢測及應(yīng)用【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0003]重金屬廣泛分布于大氣圈、生物圈、巖石圈和水圈中，被排入環(huán)境后具有永久性，且有明顯的累積效應(yīng)，能夠污染水體土壤并通過食物鏈循環(huán)最終在生物體內(nèi)富集，從而嚴(yán)重的危害生態(tài)環(huán)境及人體健康。
[0004]微生物治理重金屬污染技術(shù)是國際上新興起并不斷探索發(fā)展的領(lǐng)域，利用微生物體系制備的生物吸附劑處理重金屬污染，是目前實踐證明最有發(fā)展前途的一種重金屬污染治理方法。與傳統(tǒng)的處理方法相比，其具有無二次污染、處理效率高、適應(yīng)范圍廣、成本低等優(yōu)點，在低濃度下，金屬可被選擇性地去除、分離回收。近十年來我國耐重金屬微生物研究主要集中在微生物的性質(zhì)及重金屬對菌細胞的影響方面，而對于菌種篩選、菌種特征、生長條件研究較少。目前已分離的耐重金屬種群少，菌體生長繁殖受棲息地環(huán)境的影響大，去除重金屬的能力不強，還不能滿足外部實際環(huán)境復(fù)雜的污染現(xiàn)狀，迫切需要豐富其種群多樣性，提高對重金屬的去除能力。因此應(yīng)加強具有高效修復(fù)能力的微生物的研究，在篩選大量耐重金屬微生物的基礎(chǔ)上，可將菌種馴化后進一步與適當(dāng)?shù)墓に嚱Y(jié)合構(gòu)建高效去除重金屬的工程菌，為微生物治理復(fù)雜環(huán)境的重金屬污染提供更多選擇。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于，通過耐重金屬菌株的富集馴化及篩選，從土壤和水體中篩選能夠去除重金屬的木糖氧化無色桿菌(Achromobacter建立合理有效的耐重金屬菌株的篩選方法，并對篩選出的細菌去除重金屬的作用效果進行評價，得到適合的去除重金屬效果好的菌株。通過菌種馴化后進一步與適當(dāng)?shù)墓に嚱Y(jié)合，構(gòu)建高效去除重金屬的安全、有效、經(jīng)濟的工程菌產(chǎn)品。將產(chǎn)品應(yīng)用于被重金屬污染的土壤和水體中，提高重治理金屬污染的效率，減少二次污染，降低成本，為微生物治理復(fù)雜環(huán)境的重金屬污染提供更多選擇。
[0006]本發(fā)明的另一目的是提供上述菌株在去除重金屬離子中的應(yīng)用。
[0007]該菌株于2014年2月18日被保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，簡稱CGMCC，北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，保藏編號:CGMCC N0.8828,分類命名:木糖氧化無色桿菌(Achromobacter xylosoxidms)。
[0008]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一株木糖氧化無色桿菌M2，所述木糖氧化無色桿菌M2對重金屬離子Mn2+具有去除作用。
[0009]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了一種從土壤和水體中篩選對重金屬離子具有去除作用的方法，包括以下步驟:
a.金屬選擇培養(yǎng)基的制備；
b.耐重金屬菌株的富集馴化；
c.耐重金屬菌株的篩選及復(fù)篩；
d.菌體對重金屬去除能力的檢測。
[0010]所述步驟a可以進一步包括:計算氯化猛[MnCl2X 4H20]中金屬離子的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，溶于去離子水中配成10g/L的貯藏液。配制基礎(chǔ)培養(yǎng)基:牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(g/L) —牛肉膏3.0，蛋白胨10.0, NaCl 5.0。基礎(chǔ)培養(yǎng)基滅菌后，將金屬貯藏液根據(jù)濃度要求添加于培養(yǎng)基中。
[0011]所述步驟b可以進一步包括:取IOg環(huán)境采集樣品加入90mL液體牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中富集培養(yǎng)，37°C 150r/min培養(yǎng)24h ;取ImL富集培養(yǎng)液分別接種于含0.lg/L不同金屬離子的新鮮液體培養(yǎng)基，370C 150r/min培養(yǎng)；待金屬選擇培養(yǎng)基混濁后，從中取ImL培養(yǎng)液接種于含0.2g/L金屬離子的液體培養(yǎng)基中，逐級類推提高金屬離子濃度。根據(jù)菌體對各金屬耐受程度的不同，選取較高濃度的耐受生長條件進行多次馴化培養(yǎng)。
[0012]所述步驟c可以進一步包括:用接種環(huán)取最高耐受濃度培養(yǎng)物劃線接種于含相應(yīng)金屬離子的固體平板上，37°C培養(yǎng)24~72h。根據(jù)平板菌落形態(tài)分別挑取單菌落再接種至液體金屬選擇培養(yǎng)基進行驗證，循環(huán)三次，以獲得金屬耐受能力較好的純菌株。
[0013]所述步驟d可以進一步包括:將篩選獲得的耐重金屬單菌落分別接種于相應(yīng)的適當(dāng)濃度的液體金屬選擇培養(yǎng)基中，37°C 150r/min培養(yǎng)24~48h。12000r/min離心5min,取上清用ICP-MS方法測定金屬離子濃度。
[0014]ICP-MS儀器測試條件:反射功率1550?，采樣深度7mm，載氣流量1.04L/min,霧化室溫度2°C。Mn的積分時間為0.30S，重復(fù)測定3次。提升速度0.30rps，提升時間45S，穩(wěn)定時間30S。
[0015]重金屬去除率計算公式為:
P= [ (C0-C)/C0] X 100%
P:去除率(％)；
Co:菌處理前金屬離子濃度；
C:菌處理后金屬離子濃度
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明又提供了一株木糖氧化無色桿菌M2，包含下述基因序
列:
I aatctttaaa aatgcaagtc gaacggcagc acggacttcg gtctggtggc gagtggcgaa
61 cgggtgagta atgtatcgga acgtgcccag tagcggggga taactacgcg aaagcgtagc
121 taataccgca tacgccctac gggggaaagc aggggatcgc aagaccttgc actattggag
181 cggccgatat cggattagct agttggtggg gtaacggctc accaaggcga cgatccgtag
241 ctggtttgag aggacgacca gccacactgg gactgagaca cggcccagac tcctacggga
301 ggcagcagtg gggaattttg gacaatgggg gaaaccctga tccagccatc ccgcgtgtgc
361 gatgaaggcc ttcgggttgt aaagcacttt tggcaggaaa gaaacgtcgc gggttaatac
421 cccgcgaaac tgacggtacc tgcagaataa gcaccggcta actacgtgcc agcagccgcg
481 gtaatacgta gggtgcaagc gttaatcgga attactgggc gtaaagcgtg cgcaggcggt541 tcggaaagaa agatgtgaaa tcccagagct taactttgga actgcatttt taactaccgg
601 gctagagtgt gtcagaggga ggtggaattc cgcgtgtagc agtgaaatgc gtagatatgc
661 ggaggaacac cgatggcgaa ggcagcctcc tgggataaca ctgacgctca tgcacgaaag
721 cgtggggagc aaacaggatt agataccctg gtagtccacg ccctaaacga tgtcaactag
781 ctgttggggc cttcgggcct tggtagcgca gctaacgcgt gaagttgacc gcctggggag
841 tacggtcgca agattaaaac tcaaaggaat tgacggggac ccgcacaagc ggtggatgat
901 gtggattaat tcgatgcaac gcgaaaaacc ttacctaccc ttgacatgtc tggaatgccg
961 aagagatttg gcagtgctcg caagagaacc ggaacacagg tgctgcatgg ctgtcgtcag
1021 ctcgtgtcgt gagatgttgg gttaagtccc gcaacgagcg caacccttgt cattagttgc
1081 tacgaaaggg cactctaatg agactgccgg tgacaaaccg gaggaaggtg gggatgacgt
1141 caagtcctca tggcccttat gggtagggct tcacacgtca tacaatggtc gggacagagg
1201 gtcgccaacc cgcgaggggg agccaatccc agaaacccga tcgtagtccg gatcgcagtc
1261 tgcaactcga ctgcgtgaag tcggaatcgc tagtaatcgc ggatcagcat gtcgcggtga
1321 atacgttccc gggtcttgta cacaccgccc gtcacaccat gggagtgggt tttaccagaa
1381 gtagttagcc ta accgcaag gggggcgatt accacggtag gattcatgaa Ctggggtga0
[0016]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明再提供了一株木糖氧化無色桿菌M2，采用如下方法進行鑒定時，包含下述基因序列:
I aatctttaaa aatgcaagtc gaacggcagc acggacttcg gtctggtggc gagtggcgaa
61 cgggtgagta atgtatcgga acgtgcccag tagcggggga taactacgcg aaagcgtagc
121 taataccgca tacgccctac gggggaaagc aggggatcgc aagaccttgc actattggag
181 cggccgatat cggattagct agttggtggg gtaacggctc accaaggcga cgatccgtag
241 ctggtttgag aggacgacca gccacactgg gactgagaca cggcccagac tcctacggga
301 ggcagcagtg gggaattttg gacaatgggg gaaaccctga tccagccatc ccgcgtgtgc
361 gatgaaggcc ttcgggttgt aaagcacttt tggcaggaaa gaaacgtcgc gggttaatac
421 cccgcgaaac tgacggtacc tgcagaataa gcaccggcta actacgtgcc agcagccgcg
481 gtaatacgta gggtgcaagc gttaatcgga attactgggc gtaaagcgtg cgcaggcggt
541 tcggaaagaa agatgtgaaa tcccagagct taactttgga actgcatttt taactaccgg
601 gctagagtgt gtcagaggga ggtggaattc cgcgtgtagc agtgaaatgc gtagatatgc
661 ggaggaacac cgatggcgaa ggcagcctcc tgggataaca ctgacgctca tgcacgaaag
721 cgtggggagc aaacaggatt agataccctg gtagtccacg ccctaaacga tgtcaactag
781 ctgttggggc cttcgggcct tggtagcgca gctaacgcgt gaagttgacc gcctggggag
841 tacggtcgca agattaaaac tcaaaggaat tgacggggac ccgcacaagc ggtggatgat
901 gtggattaat tcgatgcaac gcgaaaaacc ttacctaccc ttgacatgtc tggaatgccg
961 aagagatttg gcagtgctcg caagagaacc ggaacacagg tgctgcatgg ctgtcgtcag
1021 ctcgtgtcgt gagatgttgg gttaagtccc gcaacgagcg caacccttgt cattagttgc
1081 tacgaaaggg cactctaatg agactgccgg tgacaaaccg gaggaaggtg gggatgacgt
1141 caagtcctca tggcccttat gggtagggct tcacacgtca tacaatggtc gggacagagg
1201 gtcgccaacc cgcgaggggg agccaatccc agaaacccga tcgtagtccg gatcgcagtc
1261 tgcaactcga ctgcgtgaag tcggaatcgc tagtaatcgc ggatcagcat gtcgcggtga1321 atacgttccc gggtcttgta cacaccgccc gtcacaccat gggagtgggt tttaccagaa
1381 gtagttagcc taaccgcaag gggggcgatt accacggtag gattcatgaa Ctggggtga0
[0017]鑒定方法:PCR擴增采用細菌16S rDNA通用引物:27f(5，-AGAGTTTGATCMTGGC-TCAG-3’)和 1541r (5，-AAGGAGGTGATCCAGCC-3’)。PCR 反應(yīng)體系(50 μ D=MgCl2 (1.5mM)、基因組 DNA (10ng)、dNTP (200 μ Μ)、引物(0.4 μ Μ)和 7? DNA 聚合酶(L25U)。反應(yīng)條件:94°C變性30s，50°C退火30s，72°C延伸1.5min，共30個循環(huán)。按PCR 回收試劑盒(TIAN gel Midi Purification Kit，Dp209，TIANGEN)的說明書操作，純化PCR產(chǎn)物，測序由上海生物工程有限公司完成。
[0018]測得的基因序列為:
I aatctttaaa aatgcaagtc gaacggcagc acggacttcg gtctggtggc gagtggcgaa
61 cgggtgagta atgtatcgga acgtgcccag tagcggggga taactacgcg aaagcgtagc
121 taataccgca tacgccctac gggggaaagc aggggatcgc aagaccttgc actattggag
181 cggccgatat cggattagct agttggtggg gtaacggctc accaaggcga cgatccgtag
241 ctggtttgag aggacgacca gccacactgg gactgagaca cggcccagac tcctacggga
301 ggcagcagtg gggaattttg gacaatgggg gaaaccctga tccagccatc ccgcgtgtgc
361 gatgaaggcc ttcgggttgt aaagcacttt tggcaggaaa gaaacgtcgc gggttaatac
421 cccgcgaaac tgacggtacc tgcagaataa gcaccggcta actacgtgcc agcagccgcg
481 gtaatacgta gggtgcaagc gttaatcgga attactgggc gtaaagcgtg cgcaggcggt
541 tcggaaagaa agatgtgaaa tcccagagct taactttgga actgcatttt taactaccgg
601 gctagagtgt gtcagaggga ggtggaattc cgcgtgtagc agtgaaatgc gtagatatgc
661 ggaggaacac cgatggcgaa ggcagcctcc tgggataaca ctgacgctca tgcacgaaag
721 cgtggggagc aaacaggatt agataccctg gtagtccacg ccctaaacga tgtcaactag
781 ctgttggggc cttc gggcct tggtagcgca gctaacgcgt gaagttgacc gcctggggag
841 tacggtcgca agattaaaac tcaaaggaat tgacggggac ccgcacaagc ggtggatgat
901 gtggattaat tcgatgcaac gcgaaaaacc ttacctaccc ttgacatgtc tggaatgccg
961 aagagatttg gcagtgctcg caagagaacc ggaacacagg tgctgcatgg ctgtcgtcag
1021 ctcgtgtcgt gagatgttgg gttaagtccc gcaacgagcg caacccttgt cattagttgc
1081 tacgaaaggg cactctaatg agactgccgg tgacaaaccg gaggaaggtg gggatgacgt
1141 caagtcctca tggcccttat gggtagggct tcacacgtca tacaatggtc gggacagagg
1201 gtcgccaacc cgcgaggggg agccaatccc agaaacccga tcgtagtccg gatcgcagtc
1261 tgcaactcga ctgcgtgaag tcggaatcgc tagtaatcgc ggatcagcat gtcgcggtga
1321 atacgttccc gggtcttgta cacaccgccc gtcacaccat gggagtgggt tttaccagaa
1381 gtagttagcc taaccgcaag gggggcgatt accacggtag gattcatgaa Ctggggtga0
[0019]挑取各菌種純培養(yǎng)物單菌落，接種于BUG培養(yǎng)基平板，33°C恒溫培養(yǎng)24h，轉(zhuǎn)接1_2代。在無菌條件下，使用Inoculatorz棉簽從BUG平板中沾取直徑約3mm的菌落接種于IF-A接種液中，將濁度調(diào)整為90-98%。菌懸液倒入V型加樣水槽中，使用8道移液器將菌懸液按順序加入微孔板的所有孔中，每孔100μL。微孔板33°C恒溫培養(yǎng)16-24h，使用BiologGenIII MicroStation自動微生物鑒定系統(tǒng)進行鑒定。
[0020]Biolog微生物鑒定系統(tǒng)利用微生物對不同碳源進行呼吸代謝的差異，在BiologGenIII微孔板上對微生物進行94種表型測試(71種碳源利用、23種化學(xué)敏感性測試)。通過檢測微生物代謝過程中產(chǎn)生的氧化還原物質(zhì)與四唑類物質(zhì)(如TTC、TV)發(fā)生反應(yīng)而導(dǎo)致的顏色變化(吸光度)以及由于微生物生長造成的濁度差異(濁度)，生成特征指紋圖譜，與標(biāo)準(zhǔn)菌株圖譜數(shù)據(jù)庫進行比對，即可得出鑒定結(jié)果，見圖4。
[0021]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明另提供了一種所述木糖氧化無色桿菌M2及其在去除重金屬污染中的應(yīng)用。
[0022]本發(fā)明有益的技術(shù)效果在于:通過金屬選擇培養(yǎng)基的制備；耐重金屬菌株的富集馴化；耐重金屬菌株的篩選及復(fù)篩；菌體對重金屬去除能力的檢測試驗，從土壤和水體中建立合理、有效的去除重金屬菌株的篩選方法，得到適合需要的菌株。本發(fā)明應(yīng)用于重金屬污染的治理，具有無二次污染、處理效率高、適應(yīng)范圍廣、成本低等優(yōu)點。
[0023]下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明進行詳細說明。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0024]圖1為具備去除Mn2+能力的菌株平板形態(tài)；
圖2為菌株M2對不同濃度Mn2+的生長能力和去除效果；
圖3為菌株M2對不同濃度Mn2+的去除能力比較；
圖4為菌株M2的Biolog鑒定結(jié)果。
【具體實施方式】
[0025]去除重金屬離子Mn2+的菌株篩選 I實驗材料
1.1實驗菌株 樣品來源
從濰坊、日照、南京等地區(qū)采集不同地點的土樣或水樣，土壤樣品在取樣地的多處取
l-4cm的表層土，分別混合。樣品共計27份。
[0026]1.2實驗儀器
立式壓力蒸汽滅菌器(日本Hirayama HVE-50);空氣浴搖床(德國IKA KS 4000 ic)；分析天平(瑞士 Mettler Toledo PL 602-S);恒溫培養(yǎng)箱(德國MMM Incucell 111);移液槍(德國Eppendorf);臺式高速離心機(德國Eppendorf 5417R);電感I禹合等離子體質(zhì)譜(ICP-MS，美國 Agilent 7700X)等。
[0027]1.3實驗試劑
氯化錳[MnCl2X4H20]化學(xué)試劑為分析純。計算金屬離子的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，分別溶于去離子水中配成10g/L的貯藏液。
[0028]1.4培養(yǎng)基
基礎(chǔ)培養(yǎng)基:牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(g/L) —牛肉膏3.0，蛋白胨10.0，NaCl 5.0。
[0029]金屬選擇培養(yǎng)基:基礎(chǔ)培養(yǎng)基滅菌后，將金屬忙藏液根據(jù)濃度要求添加于培養(yǎng)基中。
[0030]2實驗方法
2.1金屬選擇培養(yǎng)基的制備計算氯化錳[MnCl2X4H20]中金屬離子的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，溶于去離子水中配成10g/L的貯藏液。配制基礎(chǔ)培養(yǎng)基:牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(g/L) —牛肉膏3.0，蛋白胨10.0，NaCl 5.0?；A(chǔ)培養(yǎng)基滅菌后，將金屬忙藏液根據(jù)濃度要求添加于培養(yǎng)基中。
[0031]2.2.耐重金屬菌株的富集馴化
取IOg環(huán)境采集樣品加入90mL液體牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中富集培養(yǎng)，37°C 150r/min培養(yǎng)24h ;取ImL富集培養(yǎng)液分別接種于含0.lg/L不同金屬離子的新鮮液體培養(yǎng)基，37°C150r/min培養(yǎng)；待金屬選擇培養(yǎng)基混池后,從中取ImL培養(yǎng)液接種于含0.2g/L金屬離子的液體培養(yǎng)基中，逐級類推提高金屬離子濃度。根據(jù)菌體對各金屬耐受程度的不同，選取較高濃度的耐受生長條件進行多次馴化培養(yǎng)。
[0032]2.3耐重金屬菌株的篩選及復(fù)篩
用接種環(huán)取最高耐受濃度培養(yǎng)物劃線接種于含相應(yīng)金屬離子的固體平板上，37°C培養(yǎng)24~72h。根據(jù)平板菌落形態(tài)分別挑取單菌落再接種至液體金屬選擇培養(yǎng)基進行驗證，循環(huán)三次，以獲得金屬耐受能力較好的純菌株。
[0033]2.4.菌體對重金屬去除能力的檢測
將篩選獲得的耐重金屬單菌落分別接種于相應(yīng)的適當(dāng)濃度的液體金屬選擇培養(yǎng)基中，370C 150r/min培養(yǎng)24~48h。12000r/min離心5min，取上清用ICP-MS方法測定金屬離子濃度。
[0034]ICP-MS儀器測試條件:反射功率1550?，采樣深度7_，載氣流量1.04L/min,霧化室溫度2°C。Zn的積分時 間為0.30S，重復(fù)測定3次。提升速度0.30rps，提升時間45S，穩(wěn)定時間30S。
[0035]重金屬去除率計算公式為:
P= [ (C0-C)/C0] X 100%
P:去除率(％)；
Co:菌處理前金屬離子濃度；
C:菌處理后金屬離子濃度
2.5時間和金屬離子濃度對去除率的影響
Mn2+選擇0.2g/L，0.4g/L，0.6g/L，0.8g/L, 1.0g/L共5組金屬濃度的培養(yǎng)基，從平板上挑取單菌落接種至IOOmL低金屬濃度培養(yǎng)基，37°C振蕩培養(yǎng)24h后取ImL菌液轉(zhuǎn)接至較高一級濃度培養(yǎng)基，逐級類推至最高濃度。每個濃度每24h取樣測定菌液0D_，離心取上清測定溶液金屬含量，連續(xù)監(jiān)測6~7天。
[0036]2.6菌株對相應(yīng)金屬離子的最高耐受濃度研究
根據(jù)已獲得的時間和金屬離子濃度對去除率的影響，逐級加大金屬濃度，待培養(yǎng)基渾濁后以1%接種量轉(zhuǎn)接高一級金屬濃度的培養(yǎng)基，直至無生長現(xiàn)象。每一級濃度培養(yǎng)6天后取樣，離心取上清測定溶液金屬含量。
[0037]2.7菌株鑒定
16S rDNA基因序列PCR反應(yīng):上游引物:AGAGTTTGATCATGGCTCAG，下游引物:TACGGTTACCTTGTTACGACTT。反應(yīng)條件:94°C 5min ；94°C 45s, 58°C 30s, 72°C 45s，共 30個循環(huán)；72°C IOmin。
[0038]測得的基因序列為:I aatctttaaa aatgcaagtc gaacggcagc acggacttcg gtctggtggc gagtggcgaa
61 cgggtgagta atgtatcgga acgtgcccag tagcggggga taactacgcg aaagcgtagc
121 taataccgca tacgccctac gggggaaagc aggggatcgc aagaccttgc actattggag
181 cggccgatat cggattagct agttggtggg gtaacggctc accaaggcga cgatccgtag
241 ctggtttgag aggacgacca gccacactgg gactgagaca cggcccagac tcctacggga
301 ggcagcagtg gggaattttg gacaatgggg gaaaccctga tccagccatc ccgcgtgtgc
361 gatgaaggcc ttcgggttgt aaagcacttt tggcaggaaa gaaacgtcgc gggttaatac
421 cccgcgaaac tgacggtacc tgcagaataa gcaccggcta actacgtgcc agcagccgcg
481 gtaatacgta gggtgcaagc gttaatcgga attactgggc gtaaagcgtg cgcaggcggt
541 tcggaaagaa agatgtgaaa tcccagagct taactttgga actgcatttt taactaccgg
601 gctagagtgt gtcagaggga ggtggaattc cgcgtgtagc agtgaaatgc gtagatatgc
661 ggaggaacac cgatggcgaa ggcagcctcc tgggataaca ctgacgctca tgcacgaaag
721 cgtggggagc aaacaggatt agataccctg gtagtccacg ccctaaacga tgtcaactag
781 ctgttggggc cttcgggcct tggtagcgca gctaacgcgt gaagttgacc gcctggggag
841 tacggtcgca agattaaaac tcaaaggaat tgacggggac ccgcacaagc ggtggatgat
901 gtggattaat tcgatgcaac gcgaaaaacc ttacctaccc ttgacatgtc tggaatgccg
961 aagagatttg gcagtgctcg caagagaacc ggaacacagg tgctgcatgg ctgtcgtcag
1021 ctcgtgtcgt gagatgttgg gttaagtccc gcaacgagcg caacccttgt cattagttgc
1081 tacgaaaggg cactctaatg agactgccgg tgacaaaccg gaggaaggtg gggatgacgt
1141 caagtcctca tggcccttat gggtagggct tcacacgtca tacaatggtc gggacagagg
1201 gtcgccaacc cgcgaggggg agccaatccc agaaacccga tcgtagtccg gatcgcagtc
1261 tgcaactcga ctgcgtgaag tcggaatcgc tagtaatcgc ggatcagcat gtcgcggtga
1321 atacgttccc gggtcttgta cacaccgccc gtcacaccat gggagtgggt tttaccagaa
1381 gtagttagcc taaccgcaag gggggcgatt accacggtag gattcatgaa Ctggggtga0
[0039]3實驗結(jié)果與分析
3.1重金屬Mn2+耐受菌株的篩選
Mn2+耐受菌株:經(jīng)過含Mn2+的培養(yǎng)基馴化篩選以及反復(fù)純化驗證后，有25株細菌在Mn2+達到0.6g/L以上的濃度時仍可保持正常速度生長，分別標(biāo)記為M2、M3、M4、M5、M6、M7a、M7c、M8a、M8b、M9、M10a、M10b、MnB4、MnB5a、MnB5c、MnB6、MnB7、MnB10、MnBll、MnCl、MnC2、MnC3、MnC4a、MnC4b、MnC6。
[0040]3.2對重金屬Mn2+的去除能力的測定
Mn2+耐受菌共有25株，其中有15株表現(xiàn)出了對Mn2+不同程度的去除能力，其余10株雖然可以在有Mn2+的環(huán)境中生長，但是溶液上清中的Mn2+含量未見明顯減少。表1列出了15株有除Mn2+能力的菌株情況，其純培養(yǎng)的平板形態(tài)如圖1所示。
[0041]表1具備去除Mn2+能力的菌株性質(zhì)
【權(quán)利要求】
1.一株木糖氧化無色桿菌iAchromobacter #7(96?λ^?/?6θΜ2，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為:CGMCC 8828。
2.—種如權(quán)利要求1中木糖氧化無色桿菌iAchromobacter xylosoxidans) M2在去除重金屬離子 Mn2+中的應(yīng)用。
【文檔編號】C02F101/20GK103937704SQ201410085503
【公開日】2014年7月23日 申請日期:2014年3月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月10日
【發(fā)明者】趙晗, 張金玲, 許文娟, 宮小明 申請人:趙晗