專利名稱：某些取代的己內(nèi)酰胺、含有它們的藥物組合物和它們在治療腫瘤中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及化學(xué)治療試劑領(lǐng)域，更確切地涉及某些取代的己內(nèi)酰胺、包含所述己內(nèi)酰胺的藥物組合物、治療腫瘤的方法、所述己內(nèi)酰胺在腫瘤化學(xué)療法中的用途和制備所述化合物的方法。
癌癥是世界范圍內(nèi)的嚴(yán)重健康難題。因此，人們付出了大量努力進(jìn)行研究，目的是開發(fā)適合于治療和減輕人類癌癥的療法。
在化學(xué)治療領(lǐng)域，為開發(fā)有效對抗各種類型癌癥的抗腫瘤劑已經(jīng)進(jìn)行了研究。時(shí)常不幸的是，已經(jīng)開發(fā)并發(fā)現(xiàn)有效對抗癌細(xì)胞的抗腫瘤劑也對正常細(xì)胞有毒性。毒性本身表現(xiàn)為體重下降、惡心、嘔吐、脫發(fā)、疲勞、瘙癢、幻覺、食欲減退等，一旦對需要癌癥化學(xué)療法的患者給藥抗腫瘤劑即出現(xiàn)這些癥狀。
此外，慣用的化學(xué)治療劑不具有所需的有效性，或者不是如所需要的那樣對不同類型癌癥都廣泛有效。因此，對這樣的化學(xué)治療劑存在迫切需要，它不僅更加有效對抗所有類型的癌癥，而且具有更高程度的選擇性，僅殺死癌細(xì)胞而對正常健康細(xì)胞沒有影響或影響最小。另外，需要高效性和選擇性抗腫瘤劑，特別是對抗結(jié)腸、膀胱、前列腺、胃、胰腺、乳房、肺、肝、腦、睪丸、卵巢、子宮頸、皮膚、外陰和小腸的癌癥。而且，特別需要對抗結(jié)腸、乳房、肺和前列腺癌以及黑瘤的抗腫瘤活性，因?yàn)槟壳叭狈θ魏翁貏e有效的療法。
本發(fā)明提供新穎的抗腫瘤劑，它們有效對抗各種癌細(xì)胞。更確切地，本發(fā)明涉及某些取代的己內(nèi)酰胺，它們在殺死癌細(xì)胞方面表現(xiàn)出高度選擇性。本發(fā)明的實(shí)質(zhì)是某些取代的己內(nèi)酰胺在治療腫瘤方面是有用的這一發(fā)現(xiàn)。
本發(fā)明涉及式I的己內(nèi)酰胺 其中R1是(C1-6)烷基或(C3-6)環(huán)烷基；R2是氫或(C1-6)烷基；X是(C1-12)亞烷基、(C2-12)亞烯基或(C2-12)亞炔基；m是0或1；R3是(C3-8)環(huán)烷基，或選自II、III、IV和V的芳族環(huán)系 其中R4是氫、氯或甲氧基；R5是氫、氯、(C1-18)烷基或(C1-18)烷氧基；Z是氧、硫、N-H或N-CH3；或者可能的話，其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽。
優(yōu)選的式I化合物是，其中R1是(C1-6)烷基；R2是氫或(C1-4)烷基；X是(C1-6)亞烷基或(C2-6)亞烯基；m是0或1；R3是(C3-8)環(huán)烷基，或選自II、III、IV和V的芳族環(huán)系，其中R4是氫、氯或甲氧基；R5是氫、氯、(C1-18)烷基或(C1-18)烷氧基；Z是氧、硫、N-H或N-CH3；或者可能的話，其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽。
更優(yōu)選的式I化合物是，其中R1是異丙基或叔丁基；R2是氫或甲基；m是0或1；X是(C1-6)亞烷基；R3是(C5-7)環(huán)烷基，或選自IIa和V的芳族環(huán)系， 其中R4’位于間位，是氫或氯；R5’位于對位，是氫、氯、(C1-18)烷基或(C1-18)烷氧基；或者可能的話，其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽。
進(jìn)而更優(yōu)選的式I化合物是，其中R1是異丙基或叔丁基；R2是氫或甲基；m是0或1；X是亞甲基或亞乙基；R3是(C5-7)環(huán)烷基、苯基、3，4-二氯苯基、4-甲氧基苯基、4-正癸基苯基、4-正癸氧基苯基或3-吡啶基；其條件是若m是0，則R3是(C5-7)環(huán)烷基、4-正癸基苯基或4-正癸氧基苯基；或者可能的話，其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽。
在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供藥物組合物，尤其用于溫血動物腫瘤的治療，包含藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑和抗腫瘤有效劑量的上式I化合物，優(yōu)選為3，4，5-三羥基-2-甲氧基-8，8-二甲基-N-[六氫-2-氧代-6-(環(huán)己基羰基)氧基-2H-氮雜-3-基]壬-6-烯酰胺或3，4，5-三羥基-2-甲氧基-8，8-二甲基-N-[六氫-2-氧代-6-(1-氧代-3-苯基丙氧基)-2H-氮雜-3-基]壬-6-烯酰胺，或者可能的話，其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽。
在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供治療腫瘤的方法，包括將治療學(xué)上有效量的上式I化合物、或者可能的話其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽對需要這樣治療的哺乳動物給藥。
在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及式I化合物或該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽用于藥物組合物制備的用途，該藥物組合物用在腫瘤的化學(xué)療法中。
此外，本發(fā)明涉及式I化合物或該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽用于腫瘤化學(xué)療法的用途。
上述定義中1)含有1至6個碳原子的烷基是直鏈或支鏈的，后者的實(shí)例包括異丙基、異丁基、叔丁基、異戊基、新戊基、異己基、3-甲基戊基、2，2-二甲基丁基、2，3-二甲基丁基和1，1，2，2-四甲基乙基；2)含有1至18個碳原子的烷基和烷氧基是直鏈或支鏈的。
本文所用的術(shù)語“(C1-12)亞烷基”指直鏈或支鏈二價(jià)基團(tuán)，僅由碳和氫組成，具有1至12個碳原子?！皝喭榛钡膶?shí)例包括亞甲基、亞乙基、亞丙基、亞丁基、亞戊基、3-甲基亞戊基等。
本文所用的術(shù)語“(C2-12)亞烯基”指直鏈或支鏈二價(jià)基團(tuán)，僅由碳和氫組成，含有至少一碳-碳雙鍵，具有2至12個碳原子?！皝喯┗钡膶?shí)例包括亞乙烯基、亞丙烯基、亞丁烯基、亞戊烯基、3-甲基亞戊烯基等。
本文所用的術(shù)語“(C2-12)亞炔基”指直鏈或支鏈二價(jià)基團(tuán)，僅由碳和氫組成，含有至少一碳-碳叁鍵，具有2至12個碳原子?！皝喨不钡膶?shí)例包括亞乙炔基、亞丙炔基、亞丁炔基、亞戊炔基、3-甲基亞戊炔基等。
式I化合物的酸加成鹽可以是藥學(xué)上可接受的有機(jī)或無機(jī)酸的鹽。盡管優(yōu)選的酸加成鹽是鹽酸和甲磺酸的鹽，不過也可以采用硫酸、磷酸、檸檬酸、富馬酸、馬來酸、苯甲酸、苯磺酸、琥珀酸、酒石酸、乳酸和乙酸的鹽。
式I的己內(nèi)酰胺可以如下所述進(jìn)行制備 其中每個R1、R2、X、m和R3定義同上。
關(guān)于各步，步驟A涉及對式VI的氨基己內(nèi)酰胺使用式VII的內(nèi)酯化合物的?；饔?，得到式VIII的二酰胺化合物。?；饔檬沁@樣進(jìn)行的，在一種極性有機(jī)溶劑中，優(yōu)選為一種質(zhì)子極性溶劑，例如異丙醇，在略低于所用溶劑的回流溫度或在回流溫度下反應(yīng)4至48小時(shí)。
步驟B涉及為式VIII的二酰胺化合物所共有的1，3-二噁烷基的水解作用，得到式I的取代的己內(nèi)酰胺化合物。水解作用通常是這樣進(jìn)行的，將二酰胺溶于溶劑混合物，該溶劑混合物的組成為1)一種質(zhì)子酸，優(yōu)選為一種有機(jī)酸，例如三氟乙酸，2)一種質(zhì)子溶劑，優(yōu)選為水，和3)一種惰性有機(jī)溶劑，優(yōu)選為一種環(huán)醚，例如四氫呋喃，在0℃至25℃的溫度下反應(yīng)5分鐘至2小時(shí)。
或者，式VIII的二酰胺化合物可以按照下列3-步反應(yīng)流程進(jìn)行制備 其中X、m與R3和每個R1與R2定義同上，R6是一種醇保護(hù)基團(tuán)。優(yōu)選地，R6是一種甲硅烷基，例如叔丁基二甲基甲硅烷基。
關(guān)于各步，步驟1涉及式IX的氨基己內(nèi)酰胺與式VII的內(nèi)酯化合物的?；饔?，得到式X的二酰胺化合物。?；饔檬沁@樣進(jìn)行的，在一種堿的存在下，優(yōu)選為一種烷基胺堿，例如二異丙基乙胺，在一種極性有機(jī)溶劑中，優(yōu)選為一種質(zhì)子極性溶劑，例如異丙醇，在略低于所用溶劑的回流溫度或在回流溫度下反應(yīng)4至48小時(shí)。
步驟2涉及為式X的二酰胺化合物所共有的基團(tuán)R6的水解作用，得到式XI的羥基己內(nèi)酰胺化合物。水解作用通常是這樣進(jìn)行的，在一種氟化物的存在下，優(yōu)選為一種氟化物鹽，例如四丁基氟化銨，在一種惰性有機(jī)溶劑中，優(yōu)選為一種環(huán)醚，例如四氫呋喃，在0℃至25℃的溫度下反應(yīng)5分鐘至2小時(shí)。
步驟3涉及式XI的羥基己內(nèi)酰胺化合物的?；饔?，方法是使其與式R3(X)mCOCl的?；确磻?yīng)，其中R3、X和m定義同上，得到式VIII的二酰胺化合物。酰化作用是這樣進(jìn)行的，在一種堿的存在下，優(yōu)選為一種烷基胺堿，例如三乙胺，在一種惰性有機(jī)溶劑中，優(yōu)選為一種氯代烷，例如二氯甲烷，在-78℃至25℃的溫度下反應(yīng)1至24小時(shí)。
或者，步驟3中式XI的羥基己內(nèi)酰胺化合物的?；饔每梢耘c式R3(X)mCO2H的羧酸這樣進(jìn)行，其中R3、X和m定義同上，在一種羧酸偶聯(lián)劑的存在下，優(yōu)選為一種二酰亞胺，例如鹽酸1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺，且在一種適當(dāng)?shù)亩啺放悸?lián)反應(yīng)常用的活化劑的存在下，優(yōu)選為一種取代的吡啶，例如4-二甲氨基吡啶，在一種惰性有機(jī)溶劑中，優(yōu)選為一種氯代烷，例如二氯甲烷，在-78℃至25℃的溫度下反應(yīng)1至24小時(shí)。
式VI的氨基己內(nèi)酰胺化合物可以如下所述進(jìn)行制備 其中每個R6、R2、X、m和R3定義同上，每個R7是一種含有羰基的基團(tuán)。優(yōu)選地，R7是烷氧基羰基，例如叔丁氧基羰基。
關(guān)于各步驟，步驟1a涉及羥基賴氨酸(或其任意的鹽或水合物)XII的環(huán)化作用，得到羥基環(huán)賴氨酸XIII。環(huán)化作用通常是這樣進(jìn)行的，在一種偶聯(lián)劑的存在下，優(yōu)選為一種二酰亞胺，例如鹽酸1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺，且在一種適當(dāng)?shù)亩啺放悸?lián)反應(yīng)常用的活化劑的存在下，優(yōu)選為一種N-羥基化合物，例如1-羥基苯并三唑水合物，且在一種堿的存在下，優(yōu)選為一種烷基胺堿，例如三乙胺，在一種極性有機(jī)溶劑中，優(yōu)選為一種酰胺，例如N，N-二甲基甲酰胺，在0℃至40℃的溫度下反應(yīng)12至72小時(shí)。
步驟2a涉及羥基環(huán)賴氨酸XIII的N-?；饔茫玫绞絏IV的N-?；u基環(huán)賴氨酸化合物。?；瘎┩ǔＪ且环N酰基氯或一種酸酐。若R7是叔丁氧基羰基，則?；瘎┦嵌妓岫宥』?。反應(yīng)是這樣進(jìn)行的，在一種堿的存在下，優(yōu)選為一種烷基胺堿，例如三乙胺，在一種極性有機(jī)溶劑中，優(yōu)選為一種酰胺，例如N，N-二甲基甲酰胺，在0℃至40℃的溫度下反應(yīng)1至24小時(shí)。
步驟3a涉及式XIV的N-?；u基環(huán)賴氨酸化合物的O-甲硅烷基化作用，得到式XV的甲硅烷基醚化合物。甲硅烷基化劑通常是一種甲硅烷基氯化物或三氟甲磺酸酯。若R6是叔丁基二甲基甲硅烷基，則甲硅烷基化劑是叔丁基二甲基甲硅烷基氯。反應(yīng)是這樣進(jìn)行的，在一種堿的存在下，優(yōu)選為一種溫和的堿，例如咪唑，在一種極性有機(jī)溶劑，優(yōu)選為一種酰胺，例如N，N-二甲基甲酰胺，在0℃至40℃的溫度下反應(yīng)1至24小時(shí)。
步驟4a涉及式XV的甲硅烷基醚化合物與一種烷基(如上R2所定義)鹵化物或磺酸酯的N-烷基化作用，得到式XVI的N-烷基己內(nèi)酰胺化合物。烷基化作用是這樣進(jìn)行的，在一種強(qiáng)堿的存在下，優(yōu)選為一種堿金屬氨基化物，例如雙(三甲基甲硅烷基)氨基化鈉，在一種惰性有機(jī)溶劑中，優(yōu)選為一種環(huán)醚，例如四氫呋喃，在-100℃至25℃的溫度下反應(yīng)5分鐘至2小時(shí)。
步驟5a涉及為式XVI的N-烷基己內(nèi)酰胺化合物所共有的基團(tuán)R6的水解作用，得到式XVII的羥基己內(nèi)酰胺化合物。水解作用通常是這樣進(jìn)行的，在一種氟化物的存在下，優(yōu)選為一種氟化物鹽，例如四丁基氟化銨，在一種惰性有機(jī)溶劑中，優(yōu)選為一種環(huán)醚，例如四氫呋喃，在0℃至25℃的溫度下反應(yīng)5分鐘至2小時(shí)。
步驟6a涉及式XVII的羥基己內(nèi)酰胺化合物的?；饔茫玫绞絏VIII的酯化合物，方法是使其與式R3(X)mCOCl的?；冗@樣反應(yīng)，其中R3、X和m定義同上，在一種堿的存在下，優(yōu)選為一種烷基胺堿，例如三乙胺，在一種惰性有機(jī)溶劑中，優(yōu)選為一種氯代烷，例如二氯甲烷，在-78℃至25℃的溫度下反應(yīng)1至24小時(shí)。
或者，步驟6a中式XVII的羥基己內(nèi)酰胺化合物的?；饔每梢耘c式R3(X)mCO2H的羧酸這樣進(jìn)行，其中R3、X和m定義同上，在一種羧酸偶聯(lián)劑的存在下，優(yōu)選為一種二酰亞胺，例如鹽酸1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺，且在一種適當(dāng)?shù)亩啺放悸?lián)反應(yīng)常用的活化劑的存在下，優(yōu)選為一種取代的吡啶，例如4-二甲氨基吡啶，在一種惰性有機(jī)溶劑中，優(yōu)選為一種氯代烷，例如二氯甲烷，在-78℃至25℃的溫度下反應(yīng)1至24小時(shí)。
步驟7a涉及式XVIII的酯化合物上基團(tuán)R7的水解作用，得到式VI的氨基己內(nèi)酰胺化合物。水解作用通常是這樣進(jìn)行的，在一種質(zhì)子酸的存在下，優(yōu)選為一種有機(jī)酸，例如三氟乙酸、氫或一種甲硅烷基鹵化物，優(yōu)選為一種甲硅烷基碘化物，例如三甲基甲硅烷基碘，在一種惰性有機(jī)溶劑中，優(yōu)選為一種氯代烷，例如二氯甲烷，在-100℃至25℃的溫度下反應(yīng)1分鐘至2小時(shí)。
式VIa的氨基己內(nèi)酰胺化合物可以如下所述進(jìn)行制備 其中每個R7、X、m和R3定義同上。
關(guān)于各步驟，步驟1b涉及式XIV的羥基己內(nèi)酰胺化合物的酰化作用，得到式XVIIIa的酯化合物，方法是使其與式R3(X)mCOCl的酰基氯這樣反應(yīng)，其中R3、X和m定義同上，在一種堿的存在下，優(yōu)選為一種烷基胺堿，例如三乙胺，在一種惰性有機(jī)溶劑中，優(yōu)選為一種氯代烷，例如二氯甲烷，在-78℃至25℃的溫度下反應(yīng)1至24小時(shí)。
或者，步驟1b中式XIV的羥基己內(nèi)酰胺化合物的?；饔每梢耘c式R3(X)mCO2H的羧酸這樣進(jìn)行，其中R3、X和m定義同上，在一種羧酸偶聯(lián)劑的存在下，優(yōu)選為一種二酰亞胺，例如鹽酸1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺，且在一種適當(dāng)?shù)亩啺放悸?lián)反應(yīng)常用的活化劑的存在下，優(yōu)選為一種取代的吡啶，例如4-二甲氨基吡啶，在一種惰性有機(jī)溶劑中，優(yōu)選為一種氯代烷，例如二氯甲烷，在-78℃至25℃的溫度下反應(yīng)1至24小時(shí)。
步驟2b涉及式XVIIIa的酯化合物上基團(tuán)R7的水解作用，得到式VIa的氨基己內(nèi)酰胺化合物。水解作用通常是這樣進(jìn)行的，在一種質(zhì)子酸的存在下，優(yōu)選為一種有機(jī)酸，例如三氟乙酸、氫或一種甲硅烷基鹵化物，優(yōu)選為一種甲硅烷基碘化物，例如三甲基甲硅烷基碘，在一種惰性有機(jī)溶劑中，優(yōu)選為一種氯代烷，例如二氯甲烷，在-100℃至25℃的溫度下反應(yīng)1分鐘至12小時(shí)。
式IXa的氨基己內(nèi)酰胺化合物可以如下所述進(jìn)行制備 其中R7和每個R6定義同上。該反應(yīng)涉及式XV的酯化合物上基團(tuán)R7的水解作用，得到式IXa的氨基己內(nèi)酰胺化合物。水解作用通常是這樣進(jìn)行的，在一種質(zhì)子酸的存在下，優(yōu)選為一種有機(jī)酸，例如三氟乙酸、氫或一種甲硅烷基鹵化物，優(yōu)選為一種甲硅烷基碘化物，例如三甲基甲硅烷基碘，在一種惰性有機(jī)溶劑中，優(yōu)選為一種氯代烷，例如二氯甲烷，在-100℃至25℃的溫度下反應(yīng)1分鐘至2小時(shí)。
式VII的內(nèi)酯化合物可以如下所述進(jìn)行制備
其中R1定義同上。
關(guān)于各步驟，步驟1c涉及式XIX的多羥基化內(nèi)酯與丙酮的二縮酮化作用，得到雙(丙酮化物)XX。二縮酮化作用是這樣進(jìn)行的，在作為溶劑的丙酮中，使用一種催化劑，例如碘，在0℃至回流溫度的溫度下反應(yīng)2至48小時(shí)。
步驟2c涉及雙(丙酮化物)XX與一種甲基化劑、例如甲基碘的甲基化作用，得到甲基醚XXI。甲基化作用是這樣進(jìn)行的，在水和一種堿的存在下，堿優(yōu)選為一種金屬氧化物，例如氧化銀，在一種惰性有機(jī)溶劑中，優(yōu)選為一種氯代烷，例如二氯甲烷，在0℃至回流溫度的溫度下反應(yīng)12小時(shí)至7天。
步驟3c涉及甲基醚XXI的水解作用，得到式XXII的二羥基化合物。水解作用是這樣進(jìn)行的，在水和一種質(zhì)子酸的存在下，酸優(yōu)選為一種羧酸，例如乙酸，在5℃至35℃的溫度下反應(yīng)1至24小時(shí)。
步驟4c涉及二羥基化合物XXII的氧化性裂解作用，得到醛XXIII。反應(yīng)是這樣進(jìn)行的，在一種氧化劑的存在下，優(yōu)選為一種高碘酸鹽，例如高碘酸鈉，在一種質(zhì)子溶劑中，優(yōu)選為一種烷醇，例如甲醇，在0℃至25℃的溫度下反應(yīng)10分鐘至4小時(shí)。
步驟5c涉及醛XXIII的烯化作用，得到式VII的內(nèi)酯化合物。烯化作用是這樣進(jìn)行的，在一種有機(jī)金屬化合物的存在下，優(yōu)選為一種有機(jī)鉻化合物，例如從氯化鉻(II)與一種二碘代烷(如R1CHI2所定義，其中R1定義同上)生成的過渡種類，在溶劑混合物中，該溶劑混合物的組成為1)一種極性有機(jī)溶劑，優(yōu)選為一種酰胺，例如N，N-二甲基甲酰胺，和2)一種惰性有機(jī)溶劑，優(yōu)選為一種環(huán)醚，例如四氫呋喃，在-80℃至25℃的溫度下反應(yīng)5分鐘至4小時(shí)。
盡管如果需要的話，上述每步反應(yīng)產(chǎn)物可以通過常規(guī)工藝加以純化，例如色譜法或重結(jié)晶法(如果是固體)，不過一步反應(yīng)的粗產(chǎn)物不經(jīng)純化而用在后面的反應(yīng)中也是有利的。
對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說顯而易見的是，式I的取代的己內(nèi)酰胺化合物含有不對稱碳原子。因此應(yīng)當(dāng)認(rèn)識到，各種立體異構(gòu)體也涵蓋在本發(fā)明范圍內(nèi)。
如上所述，某些式I化合物形成藥學(xué)上可接受的酸加成鹽。例如，式I化合物的游離堿能夠與鹽酸反應(yīng)形成相應(yīng)的鹽酸鹽形式，而式I化合物的游離堿與甲磺酸反應(yīng)形成相應(yīng)的甲磺酸鹽形式。所有式I化合物的藥學(xué)上可接受的加成鹽形式都被本發(fā)明范圍包括在內(nèi)。
在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及制備式I的己內(nèi)酰胺化合物的方法，該方法包括，在第一步中，在一種極性有機(jī)溶劑的存在下，將式VI的氨基己內(nèi)酰胺化合物 用式VII的內(nèi)酯化合物 ?；?，得到式VIII的二酰胺化合物 其中每個R1、R2、X、m和R3定義同上，在第二步中，將第一步所得二酰胺化合物溶于溶劑混合物進(jìn)行水解，得到所需式I的己內(nèi)酰胺化合物。優(yōu)選地，第一步中的?；饔檬窃诋惐贾?、在略低于異丙醇的回流溫度或在回流溫度下進(jìn)行的，而第二步中的水解作用是在由一種質(zhì)子有機(jī)酸、一種質(zhì)子溶劑與一種惰性有機(jī)溶劑組成的混合物中進(jìn)行的，更優(yōu)選為由三氟乙酸、水與四氫呋喃組成的混合物。
如上所述，所有式I化合物及其相應(yīng)的藥學(xué)上可接受的酸加成鹽是抗腫瘤劑，因此可用于抑制各種淋巴瘤、肉瘤、癌、骨髓瘤和白血病細(xì)胞系的生長。式I化合物的抗腫瘤活性可以采用依賴貼壁生長單層測定法(ADGMA)加以證明，該測定法測量供試化合物對貼壁細(xì)胞單層增殖的生長抑制作用。該測定法改自由國家癌癥研究院(NCI)采用的60細(xì)胞系測定法，并作下列修改1)采用一種單細(xì)胞系，代表重要的腫瘤類型，即MDA-MB-435乳腺癌，2)采用一種四唑鎓衍生物，即MTS，以測定細(xì)胞密度。
ADGMA比較接觸供試化合物3天后的存活細(xì)胞數(shù)與加入供試化合物時(shí)存在的細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞存活力利用一種四唑鎓衍生物加以測量，即3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑鎓內(nèi)鹽(MTS)，它在一種電子偶聯(lián)劑(PMS吩嗪甲基硫酸酯)的存在下被活細(xì)胞代謝還原為一種水溶性甲衍生物。甲衍生物在490nm下的吸光度(A490)與活細(xì)胞數(shù)成比例。供試化合物的IC50是減少最終細(xì)胞數(shù)至最終對照細(xì)胞數(shù)的50％所需的化合物濃度。如果細(xì)胞增殖被抑制，該測定法進(jìn)一步將化合物定義為細(xì)胞抑制性的(3天化合物培養(yǎng)后的細(xì)胞數(shù)＞化合物加入時(shí)的細(xì)胞數(shù))或細(xì)胞毒性的(3天化合物培養(yǎng)后的細(xì)胞數(shù)＜化合物加入時(shí)的細(xì)胞數(shù))。
從美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)獲得MDA-MB-435乳腺癌系，融化后使用第4-20代。維持MDA-MB-435乳腺癌的生長，將其平板接種在DME/F12培養(yǎng)液中，培養(yǎng)液中含有10％胎牛血清、15mMHEPES(pH＝7.4)、青霉素100單位/ml和鏈霉素100μg/ml。
細(xì)胞系受到胰蛋白酶作用，用Coulter計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)，以測定平板接種密度。然后按下列密度在96孔平皿內(nèi)將細(xì)胞平板接種在它們各自的維持培養(yǎng)液(100μl/孔)中MDA-MB-435，3000個細(xì)胞/孔。在預(yù)實(shí)驗(yàn)中測定細(xì)胞平皿數(shù)，使平板接種后4天所匯合的細(xì)胞密度達(dá)到75-90％。在平板接種后一天所測定的最初細(xì)胞密度大約比空白培養(yǎng)液高0.15-0.20個吸光度單位。在第0天接種96孔平皿，在第1天加入供試化合物。為每個細(xì)胞系準(zhǔn)備對照平皿，在A行僅接受培養(yǎng)液，在B行接受細(xì)胞。平板接種后一天，向供試平皿中加入供試化合物(最終體積為100μl)。對照平皿接受10μl MTS混合物(是在向細(xì)胞平皿中加入當(dāng)天新制備的，加入比例為10μl 0.92mg/m1PMS溶液比190μl 2mg/ml MTS溶液)和100μl培養(yǎng)液。在MTS加入后4小時(shí)讀取對照平皿的A490，以測定每個細(xì)胞系的最初細(xì)胞密度值。供試化合物加入后三天，向供試平皿中加入10μl/孔MTS混合物，4小時(shí)后讀取A490。將含有細(xì)胞的小孔的A490值對培養(yǎng)液吸光度進(jìn)行校正，然后正?；癁樽畛趺芏茸x數(shù)，以測定百分凈生長。從百分凈生長-化合物濃度函數(shù)圖上測定IC50值。百分凈生長是這樣計(jì)算的(細(xì)胞＋藥物A490－最初A490/細(xì)胞＋藥物載體A490－最初A490)。
得到下列IC50值(平均±S.D.)，以μM表示表1
式I化合物的抗腫瘤活性可以進(jìn)一步采用無胸腺(T細(xì)胞缺陷)裸鼠模型加以證明，該模型已經(jīng)是并且仍然是臨床前期腫瘤學(xué)藥物發(fā)現(xiàn)和開發(fā)的標(biāo)準(zhǔn)。利用這種模型，人們可以測量供試化合物抑制皮下(s.c.)異種移植在無胸腺裸鼠中的人腫瘤生長的能力。所用組織腫瘤類型是MDA-MB-435乳腺癌。
簡而言之，將三百萬個細(xì)胞s.c.植入無胸腺(nu/nu)小鼠的右側(cè)脅腹，使其生長至體積達(dá)到大約30mm3。將供試化合物的5％葡萄糖、10％DMSO水溶液靜脈內(nèi)(i.v.)給藥，每周三次，持續(xù)三周。供試化合物是按照劑量-反應(yīng)方式給藥的，目的是評價(jià)和證明給定化合物的完整的潛在活性范圍(功效和毒性)。用阿霉素進(jìn)行陽性對照，每周i.v.給藥三次。
通過每周記錄兩次組平均體重和每天觀察一般狀況，監(jiān)測毒性。通過每周利用與自動數(shù)據(jù)收集儀連接的數(shù)字測徑規(guī)測量腫瘤長度、寬度和深度，監(jiān)測功效。從最終的平均腫瘤體積(MTV)減去治療開始時(shí)的MTV，表示治療期間的實(shí)際腫瘤生長(ΔMTV)?？鼓[瘤活性以％T/C表示(治療組的ΔMTV÷對照組的ΔMTV×100)。利用單尾Student’st-檢驗(yàn)(p＜0.05)評價(jià)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
試驗(yàn)化合物Ex.1-Ex.10對抗MDA-MB-435腫瘤異種移植物3X/周的效果3周，得到下列結(jié)果表2
*％T/C值有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＝＜0.05；Student’s t-檢驗(yàn))用于抑制腫瘤的式I化合物的精確劑量取決于若干因素，包括宿主、所治療疾病的性質(zhì)與嚴(yán)重性、給藥方式和所采用的特定化合物。不過，為了實(shí)現(xiàn)令人滿意的腫瘤抑制效果，一般將式I化合物以腸胃外方式給藥，例如腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、腫瘤內(nèi)或直腸，或以腸內(nèi)方式給藥，例如口服，優(yōu)選為靜脈內(nèi)或口服，更優(yōu)選為靜脈內(nèi)，每日劑量為1-300mg/kg體重，或者對大多數(shù)靈長類來說，每日劑量為50-5000、優(yōu)選為500-3000mg。優(yōu)選的靜脈內(nèi)每日劑量為1-75mg/kg體重，或者對大多數(shù)靈長類來說，每日劑量為50-1500mg。典型的靜脈內(nèi)劑量為20mg/kg，一周三至五次。
通常，最初為小劑量給藥，然后逐漸增加劑量，直至測定到對受治療宿主來說的最佳劑量。劑量的上限是產(chǎn)生副作用的劑量，可以通過對受治療宿主進(jìn)行試驗(yàn)加以測定。
式I化合物可以與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體和可選的一種或多種其它常規(guī)的藥物助劑結(jié)合，以腸內(nèi)方式給藥，例如口服，劑型為片劑、膠囊劑、小膠囊等，或者以腸胃外方式給藥，例如腹膜內(nèi)或靜脈內(nèi)，劑型為無菌可注射溶液或懸液。腸內(nèi)和腸胃外組合物可以通過常規(guī)方式加以制備。
根據(jù)本發(fā)明的輸液優(yōu)選是無菌的。這一點(diǎn)是易于實(shí)現(xiàn)的，例如通過無菌濾膜進(jìn)行過濾。任何液體形式組合物的無菌制備、小瓶的無菌灌裝和/或本發(fā)明的藥物組合物在無菌條件下與適當(dāng)?shù)南♂寗┙Y(jié)合，都是技術(shù)人員所熟知的。
式I化合物可以配制成腸內(nèi)和腸胃外藥物組合物，其中含有抑制腫瘤有效量的活性物質(zhì)，這樣的組合物是單位劑型，這樣的組合物包含藥學(xué)上可接受的載體。
下列實(shí)施例說明被本發(fā)明所涵蓋的代表性化合物及其合成。不過，應(yīng)當(dāng)清楚地認(rèn)識到，實(shí)施例僅僅是出于舉例說明的目的。
實(shí)施例1(2R，3R，4S，5R，6E)-3，4，5-三羥基-2-甲氧基-8，8-二甲基-N-[(3S，6R)-六氫-2-氧代-6-(環(huán)己基羰基)氧基-2H-氮雜-3-基]壬-6-烯酰胺a)3，5:6，7-雙-O-(1-甲基亞乙基)-α-D-葡庚糖酸γ-內(nèi)酯的制備在5加侖塑料鼓桶內(nèi)，向9L丙酮中加入α-D-葡庚糖酸γ-內(nèi)酯(500g，2.4mol)。對混合物進(jìn)行機(jī)械攪拌，直到大多數(shù)固體溶解時(shí)為止(15-20分鐘)。歷經(jīng)5-10分鐘分批向內(nèi)酯溶液中加入碘(60g，0.236mol)。所得混合物攪拌過夜。向碘溶液中加入飽和Na2S2O3溶液(1.3L)以終止反應(yīng)。所得溶液在真空中濃縮至原始體積的大約一半，加入鹽水溶液(5L)。所得混合物用3×1.2L EtOAc萃取。所有有機(jī)層合并，蒸發(fā)至干。固體用乙醚與己烷(3∶7)的混合物懸浮，過濾。濾餅用Et2O(50ml)洗滌，風(fēng)干，得到599g所需化合物，為白色粉末(86.5％)1H NMR(CDCl3)δ4.62(m，1H)，4.50(m，1H)，4.35(m，2H)，4.07(m，1H)，3.93(m，1H)，3.82(dd，1H)，3.08(d，1H)，1.51(s，3H)，1.44(s，3H)，1.39(s，3H)，1.35(s，3H)；13CNMR(CDCl3)δ174.4，109.4，98.6，72.8，71.4，69.3，68.4，67.8，66.7，28.6，26.7，24.6，19.3.
b)2-O-甲基-3，5:6，7-雙-O-(1-甲基亞乙基)-α-D-葡庚糖酸γ-內(nèi)酯的制備在5加侖塑料鼓桶內(nèi)，向4.5L CH2Cl2中加入3，5:6，7-雙-O-(1-甲基亞乙基)-α-D-葡庚糖酸γ-內(nèi)酯(719g，2.49mol)。混合物在N2下攪拌。加入氧化銀(I)(1750g，7.58mol)后立即加入碘代甲烷(2500g，17.6mol)。向反應(yīng)混合物中加入水(30ml)。利用冰浴保持反應(yīng)溫度在15-30℃。反應(yīng)物在避光下攪拌18小時(shí)。反應(yīng)混合物用1.5L CH2Cl2稀釋后，過濾出固體，用另外的2.2L CH2Cl2洗滌。棄去所不需要的固體，將濾液蒸發(fā)至干。將殘余物懸浮在Et2O(1.5L)中，過濾，干燥，得到618g產(chǎn)物(82％)1H NMR(CDCl3)δ4.75(m，1H)，4.33(m，1H)，4.29(m，1H)，4.15(m，1H)，4.07(m，1H)，3.96(dd，1H)，3.83(dd，1H)，3.65(s，3H)，1.57(s，3H)，1.42(s，6H)，1.35(s，3H)；13CNMR(CDCl3)δ172.5，109.6，98.5，79.0，73.1，69.5，68.6，67.5，66.9，59.1，28.9，26.9，24.9，19.4.
c)2-O-甲基-3，5-0-(1-甲基亞乙基)-α-D-葡庚糖酸γ-內(nèi)酯的制備歷經(jīng)30分鐘將2-O-甲基-3，5:6，7-雙-O-(1-甲基亞乙基)-α-D-葡庚糖酸γ-內(nèi)酯(618g，2.05mol)溶于8L乙酸與水(1∶1)的混合物。溶液在環(huán)境溫度下攪拌過夜。溶液在真空中蒸發(fā)至干。將固體懸浮在3-5L熱丙酮中，過濾。在20-30℃下烘箱干燥后，得到363g所需化合物(67.6％)1H NMR(CDCL3)δ4.92(d，1H)，4.80(m，1H)，4.47(d，1H)，4.42(t，1H)，4.39(m，1H)，3.95(dd，1H)，3.75(m，2H)，3.4(s，3H)，2.5(m，1H)，1.42(s，3H)，1.22(s，3H).
d)2，4-O-(1-甲基亞乙基)-5-O-甲基-L-葡糖醛酸γ-內(nèi)酯的制備將2-O-甲基-3，5-O-(1-甲基亞乙基)-α-D-葡庚糖酸γ-內(nèi)酯(200g，0.76mol)溶于甲醇與水的1∶1混合物(3.6L)?；旌衔飻嚢?，在冰水浴中冷卻至約8℃。分批加入固體NaIO4(213g，0.98mol)。TLC(硅膠，5％甲醇，15％EtOAc的CH2Cl2溶液)指示反應(yīng)在40分鐘內(nèi)完成。向反應(yīng)混合物中加入固體NaCl，使甲醇溶液飽和。過濾出固體，用2L CH2Cl2洗滌。濾液用7×500ml CH2Cl2萃取。合并后的有機(jī)層經(jīng)Na2SO4干燥，過濾，濃縮至糖漿狀物，加入己烷后生成沉淀。過濾出固體，用Et2O沖洗。將一部分粗產(chǎn)物(50g)溶于3L CHCl3，加熱至回流。在大氣壓下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)2.1L CHCl3后(通過與CHCl3的共蒸發(fā)，從系統(tǒng)中帶走甲醇)，殘余物蒸發(fā)至干。在真空中干燥過夜后得到44g所需產(chǎn)物，為固體。1H NMR(CDCl3)δ9.60(s，1H)，4.78(m，1H)，4.42(s，2H)，4.15(dd，1H)，3.65(s，3H)，1.58(s，3H)，1.55(s，3H)；13C NMR(CDCl3)δ198.8，171.9，99.0，78.4，74.4，72.9，68.4，67.4，59.2，28.7，19.0.
e)(6E)-6，7，8，9-四脫氧-8，8-二甲基-2-O-甲基-3，5-O-(1-甲基亞乙基)-壬-6-烯古洛糖酸(gulo-non-6-enonic acid)內(nèi)酯的制備向2L圓底燒瓶內(nèi)加入CrCl2(50g，41mmol)、無水THF(750ml)和DMF(32ml)?；旌衔镌贜2下攪拌1小時(shí)。向反應(yīng)混合物中緩慢加入2，4-O-(1-甲基亞乙基)-5-O-甲基-L-葡糖醛酸γ-內(nèi)酯(12g，50mmol)、1，1-二碘-2，2-二甲基丙烷(15ml)與500ml無水THF的溶液。加入后，反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下攪拌1.5小時(shí)。反應(yīng)用飽和含水NH4Cl終止。殘余物用EtOAc/水分配，經(jīng)過色譜純化(5％EtOAc-CH2Cl2)，得到9g(63％)所需化合物，為白色結(jié)晶性固體
1HNMR(CDCl3)δ5.82(d，1H)，5.58(q，1H)，4.71(m，1H)，4.46(m，1H)，4.10(dd，1H)，4.0(m，1H)，3.66(s，3H)，1.58(s，3H)，1.53(s，3H)，1.07(s，9H)；13CNMR(CDCl3)δ172.5，147.0，120.2，98.7，79.1，71.9，70.3，67.6，59.2，33.2，29.3，19.3.
f)(3S，6R)-3-(叔丁氧基羰基)氨基六氫-6-羥基-2H-氮雜-2-酮的制備在1L燒瓶內(nèi)，在攪拌下向500ml DMF中加入(5R)-5-羥基-L-賴氨酸(10g，0.040mol)、1-羥基苯并三唑水合物(8.2g，0.060mol)和1-[3-(二甲氨基)丙基]-3-乙基碳二亞胺-HCl(11.6g，0.060mol)。0.5小時(shí)后加入三乙胺(16.8ml，0.120mol)。反應(yīng)物在室溫下攪拌48小時(shí)。加入二碳酸二叔丁基酯(17.6g，0.080mol)和三乙胺(16.8ml，0.120mol)。繼續(xù)攪拌16小時(shí)。反應(yīng)混合物過濾，以除去三乙胺-HCl，在高真空下通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，得到濃的油。將油溶于150ml CH2Cl2，上硅膠柱(150g，40×250mm)。柱子用3％甲醇的CH2Cl2溶液洗脫，得到粗產(chǎn)物，為固體。將粗的固體溶于120ml熱CH2Cl2，冷卻至-20℃達(dá)1小時(shí)。過濾出所得固體，用50ml CH2Cl2洗滌。合并后的濾液蒸發(fā)至干。向該殘余物中加入CH2Cl2(40ml)，所得混懸液在室溫下攪拌0.5小時(shí)。混懸液過濾，固體用25ml CH2Cl2洗滌。合并固體，得到5.57g(3S，6R)-3-(叔丁氧基羰基)氨基六氫-6-羥基-2H-氮雜-2-酮。300MHz1H NMR(DMSO)δ7.42(1H，t，J＝5.1Hz)，6.38(1H，d，J＝6.6Hz)，4.60(1H，d，J＝4.2Hz)，4.07(1H，m)，3.74(1H，m)，3.32(1H，m)，3.03(1H，m)，1.8-1.5(4H，m)，1.39(9H，s).
g)(3S，6R)-3-(叔丁氧基羰基)氨基六氫-6-(環(huán)己烷羰基)氧基-2H-氮雜-2-酮的制備在5℃下，向環(huán)己烷碳酰氯(6.3g，43.0mmol)、(3S，6R)-3-(叔丁氧基羰基)氨基六氫-6-羥基-2H-氮雜-2-酮(7.0g，28.7mmol)與100ml CH2Cl2的溶液中加入三乙胺(8.4ml，60mmol)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。反應(yīng)混合物然后用水分配，有機(jī)層干燥(Na2SO4)，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)法濃縮。所得殘余物經(jīng)過色譜純化(5％EtOAc-CH2Cl2)，得到10.1(99.5％的(3S，6R)-3-(叔丁氧基羰基)氨基六氫-6-(環(huán)己烷羰基)氧基-2H-氮雜-2-酮，為白色固體1H NMR(CDCl3)δ5.89(d，J＝5.27Hz，1H)，5.65(t，J＝4.90Hz，1H)，4.89(s，1H)，4.30(q，J＝4.14Hz，1H)，3.49(m，2H)，2.31(tt，J＝10.92Hz and 3.39Hz，1H)，2.13(d，J＝14.32Hz，1H)，1.98(d，J＝13.56Hz，2H)，1.88(d，J＝14.31Hz，2H)，1.75(d，J＝11.30Hz，2H)，1.66(s，2H)，1.45(s，9H)，1.30(m，5H).
h)(3S，6R)-3-氨基六氫-6-(環(huán)己烷羰基)氧基-2H-氮雜-2-酮的制備在室溫下，向(3S，6R)-3-(叔丁氧基羰基)氨基六氫-6-(環(huán)己烷羰基)氧基-2H-氮雜-2-酮(10g，28.2mmol)的40ml CH2Cl2溶液中加入TFA(25ml)，反應(yīng)溶液在室溫下攪拌1小時(shí)，然后經(jīng)過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮(浴溫＜20℃)。殘余物用CH2Cl2(100ml)稀釋，用NH4OH(10ml)、然后用水(2×20ml)洗滌，干燥(Na2SO4)。使反應(yīng)混合物吸附在二氧化硅上，經(jīng)過色譜純化(5％甲醇-CH2Cl2)，得到6.0(85.0％)(3S，6R)-3-氨基六氫-6-(環(huán)己烷羰基)氧基-2H-氮雜-2-酮，為白色固體1H NMR(CDCl3)δ6.91(s，1H)，4.91(s，1H)，4.39(s，2H)，3.87(d，J＝9.80Hz，1H)，3.48(t，J＝6.02Hz，1H)，3.43(dd，J＝15.45Hz and 4.90Hz，1H)，2.30(tt，J＝10.92Hz and3.39Hz，1H)，2.13(m，1H)，1.91(m，4H)，1.73(m，2H)，1.65(m，1H)，1.40(q，J＝11.68Hz，4H)，1.24(m，2H)。
i)(2R，3R，4S，5R，6E)-3，5-(甲基亞乙基)-3，4，5-三羥基-2-甲氧基-8，8-二甲基-N-[(3S，6R)-六氫-2-氧代-6-(環(huán)己基羰基)氧基-2H-氮雜-3-基]壬-6-烯酰胺的制備將由(6E)-6，7，8，9-四脫氧-8，8-二甲基-2-O-甲基-3，5-O-(1-甲基亞乙基)-壬-6-烯古洛糖酸內(nèi)酯(1.0g，3.5mmol)、(3S，6R)-3-氨基六氫-6-環(huán)己烷羧基-2H-氮雜-2-酮(2.5g，9.8mmol)與i-PrOH(4ml)組成的溶液在回流下攪拌24小時(shí)。使反應(yīng)混合物吸附在二氧化硅上，經(jīng)過色譜純化(2％甲醇-CH2Cl2)，得到1.85g(97％)所需化合物，為白色固體1H NMR(CDCl3)δ7.58(d，J＝6.341Hz，1H)，5.80(t，J＝7.68Hz，1H)， 5.78(d，J＝15.83Hz，1H)，5.53(dd，J＝15.83Hz and 6.78Hz 1H)，4.92(sd，J＝3.39Hz，1H)，4.60(dd，J＝0.42Hz and 7.4Hz，1H)，4.28(d，J＝6.79Hz，1H)，4.07(dd，J＝7.54Hz and 1.13Hz，1H)，3.90(d，J＝7.15Hz，1H)，3.52(dd，J＝12.05Hz and 7.91Hz，2H)，3.48(s，3H)，2.82 (d，J＝9.04Hz，1H)，2.32(m，1H)，2.12(m，H)，2.00(m，2H)，1.89(d，J＝13.06Hz，2H)，1.75(m，4H)，1.66(m，1H)，1.46(d，J＝4.90Hz，6H)，1.38(m，2H)，1.26(m，3H)，1.03(s，9H).
j)標(biāo)題化合物的制備在0℃下，向攪拌著的TFA(10ml)、THF(10ml)與水(5ml)的溶液中一次性加入(2R，3R，4S，5R，6E)-3，5-(甲基亞乙基)-3，4，5-三羥基-2-甲氧基-8，8-二甲基-N-[(3S，6R)-六氫-2-氧代-6-(環(huán)己基羰基)氧基-2H-氮雜-3-基]壬-6-烯酰胺(3.8g，7.1mmol)。反應(yīng)物在該溫度下攪拌30分鐘，經(jīng)過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮(浴溫＜20℃)，與飽和NH4HCO3(5ml)混合，攪拌15分鐘?；旌衔镌谡婵罩袧饪s，經(jīng)過色譜純化(2％甲醇-CH2Cl2)，得到白色固體，H2O溶解度為3.7mg/ml。該物質(zhì)進(jìn)一步用制備型HPLC純化(反相，用90％ CH3CN-水洗脫)，得到2.9g(82.4％)標(biāo)題化合物，為白色固體，mp 79-80℃；1H NMR(CDCl3)δ8.00(d，J＝6.30Hz，1H)，5.98(t，J＝5.52Hz，1H)，5.83(d，J＝15.77Hz，1H)，5.42(dd，J＝15.76Hz and 7.25Hz 1H)，4.93(m，1H)，5.56(m，1H)，4.22(m，2H)，3.82(m，2H)，3.81(t，J＝5.99Hz，1H)，3.55(s，3H)，3.49(dd，J＝15.77Hz and 5.36Hz，1H)，3.30(d，J＝7.25Hz，1H)，3.10(s，1H)，2.31(m，1H)，2.16(d，J＝11.19Hz，1H)，2.00(m，2H)，1.88(m，3H)，1.76(s，2H)，1.65(d，J＝0.87Hz，1H)，1.42(m，2H)，1.25(m，4H)，1.02(s， 9H)；13C NMR(CDCl3)δ175.19，174.11，172.12，145.74，123.20，81.10，74.50，72.75，72.45，66.74，59.93，51.66，43.31，43.22，33.03，31.96，29.43，29.07，29.00，25.70，25.65，25.39，25.36.
實(shí)施例2(2R，3R，4S，5R，6E)-3，4，5-三羥基-2-甲氧基-8，8-二甲基-N-[(3S，6R)-六氫-2-氧代-6-(環(huán)戊基羰基)氧基-2H-氮雜-3-基]壬-6-烯酰胺基本上延續(xù)實(shí)施例1g)的操作，用大約當(dāng)量的環(huán)戊烷碳酰氯代替環(huán)己烷碳酰氯，得到(3S，6R)-3-(叔丁氧基羰基)氨基六氫-6-(環(huán)戊烷羰基)氧基-2H-氮雜-2-酮。采用上面的化合物代替化合物1g)，并基本上延續(xù)實(shí)施例1h)、1i)和實(shí)施例1最后一步的操作，得到標(biāo)題化合物。H2O溶解度＝18mg/ml；mp75-76℃；1H NMR(DMSO)δ7.81(d，J＝6.47Hz，1H)，7.76(t，J＝6.07Hz，1H)，5.64(d，J＝15.77Hz，1H)，5.34(dd，J＝15.76Hz and2.84Hz，1H)，4.80(s，1H)，4.57(d，J＝4.73Hz，1H)，4.48(d，J＝6.94Hz，1H)，4.45(m，1H)，4.36(d，J＝5.83Hz，1H)，3.98(m，1H)，3.71(d，J＝6.94Hz 1H)，3.57(td，J＝6.78Hz and 2.68Hz，1H)，3.52(dd，J＝15.61Hz and 4.57Hz，1H)，3.34(td，6.15Hz and 2.84Hz，1H)，3.32(s，3H)，3.23(m，1H)，2.72(m，1H)，2.50(m，1H)，1.93(m，2H)，1.80(m，2H)，1.73(m，3H)，1.61(m，2H)，1.53(m，2H)，0.98(s，9H)；13C NMR (DMSO)δ174.75，173.56，169.73，141.69，125.32，81.60，72.82，72.54，70.80，67.20，57.31，50.95，43.21，32.44，31.31，29.45，29.38，25.30，25.23.
實(shí)施例3(2R，3R，4S，5R，6E)-3，4，5-三羥基-2-甲氧基-8，8-二甲基-N-[(3S，6R)-六氫-2-氧代-6-(環(huán)庚基羰基)氧基-2H-氮雜-3-基]壬-6-烯酰胺基本上延續(xù)實(shí)施例1g)的操作，用大約當(dāng)量的一種混合物代替環(huán)己烷碳酰氯，該混合物由環(huán)庚烷羧酸、鹽酸1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺與4-二甲氨基吡啶組成，得到(3S，6R)-3-(叔丁氧基羰基)氨基六氫-6-(環(huán)庚烷羰基)氧基-2H-氮雜-2-酮。采用上面的化合物代替化合物1g)，并基本上延續(xù)實(shí)施例1h)、1i)和實(shí)施例1最后一步的操作，得到標(biāo)題化合物；mp 84-86℃；1H NMR(CDCl3)δ8.00(d，J＝6.30Hz，1H)，5.93(t，J＝5.52Hz，1H)，5.83(d，J＝15.77Hz，1H)，5.42(dd，J＝15.7Hz and7.26Hz，1H)，4.93(m，1H)，4.55(dd，J＝9.46Hz and 6.31Hz，1H)，4.23(m，2H)，3.82(m，2H)，3.61(t，J＝6.14Hz，1H)，3.57(m，1H)，3.55(s，3H)，3.49(dd，J＝15.60Hz and 5.20Hz，1H)，3.29(d，J＝7.25Hz，1H)，3.10(s，1H)，2.50(m，1H)，2.17(m，1H)，1.95(m，4H)，1.70(m，1H)，1.65(m，2H)，1.55(m，4H)，1.47(m，4H)，1.02(s，9H)；13C NMR (CDCl3)δ176.17，174.07，172.14，145.75，123.20，81.08，74.51，72.76，72.44，66.79，59.95，51.67，45.07，43.36，33.03，31.95，30.91，30.84，29.43，28.24，28.21，26.26，25.73.
實(shí)施例4(2R，3R，4S，5R，6E)-3，4，5-三羥基-2-甲氧基-8，8-二甲基-N-[(3S，6R)-六氫-2-氧代-6-(1-氧代-3-苯基丙氧基)-2H-氮雜-3-基]壬-6-烯酰胺基本上延續(xù)實(shí)施例1g)的操作，用大約當(dāng)量的3-苯基丙酰氯代替環(huán)己烷碳酰氯，得到(3S，6R)-3-(叔丁氧基羰基)氨基六氫-6-(1-氧代-3-苯基丙氧基)-2H-氮雜-2-酮。采用上面的化合物代替化合物1g)，并基本上延續(xù)實(shí)施例1h)、1i)和實(shí)施例1最后一步的操作，得到標(biāo)題化合物。H2O溶解度＝0.8mg/ml；mp75-77℃；1H NMR(CDCl3)δ7.96(d，J＝6.15Hz，1H)，7.31(t，J＝7.25Hz，2H)，7.23(t，J＝7.57Hz，1H)，7.20(d，J＝7.41Hz，2H)，5.82(d，J＝15.76Hz，1H)，5.62(s，1H)，5.41(dd，J＝15.76Hz and 7.09Hz，1H)，4.92(s，1H)，4.49 (dd，J＝9.46Hz and 6.31Hz，1H)，4.22(m，2H)，3.80(m，2H)，3.60(s，1H)，3.52(s，3H)，3.37(m，3H)，3.17(s，1H)，2.95(t，J＝7.57Hz，2H)，2.67(t，J＝7.72Hz，2H)，2.06(d，J＝11.98Hz，1H)，1.96(t，J＝12.77Hz，1H)，1.88(s，1H)，1.70(m，1H)，1.02(s，9H)；13C NMR(CDCl3)δ173.96，172.05，172.00 145.68，140.08，128.61，128.42，126.52，123.21，81.18，74.46，72.69，72.50，67.14，59.83，51.49，43.22，35.78，33.02，31.79，31.07，29.43，25.58.
實(shí)施例5(2R，3R，4S，5R，6E)-3，4，5-三羥基-2-甲氧基-8，8-二甲基-N-[(3S，6R)-六氫-2-氧代-6-(1-氧代-3-[3-吡啶基]丙氧基)-2H-氮雜-3-基]壬-6-烯酰胺基本上延續(xù)實(shí)施例1g)的操作，用大約當(dāng)量的一種混合物代替環(huán)己烷碳酰氯，該混合物由3-(吡啶基)丙酸、鹽酸1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺與4-二甲氨基吡啶組成，得到(3S，6R)-3-(叔丁氧基羰基)氨基六氫-6-(1-氧代-3-[3-吡啶基]丙氧基)-2H-氮雜-2-酮。采用上面的化合物代替化合物1g)，并基本上延續(xù)實(shí)施例1h)、1i)和實(shí)施例1最后一步的操作，得到標(biāo)題化合物。1H NMR(CDCl3)δ8.46(s，2H)，7.97(d，J＝6.2Hz，1H)，7.53(m，1H)，7.23(m，1H)，5.88(t，J＝6.0Hz，1H)，5.81(d，J＝15.6Hz，1H)，5.4(dd，J＝15.6 and 7.3Hz，1H)，4.93(m，1H)，4.27(s，1H)，4.23-4.19(m，1H)，3.8(m，2H)，3.59(d，J＝5.2Hz，1H)，3.52(s，3H)，3.48(m，2H)，3.28(s，1H)，3.19(s，1H)，2.95(t，J＝7.3Hz，2H)，2.67(t，J＝7.3，2H)，2.1-1.67(m，6H)，1.0(s，9H)；13C NMR(CDCl3)δ174.0，172.0，171.5，149.7，148.0，145.7，136.0，135.5，123.6，123.2，81.2，74.5，72.7，72.5，67.6，59.8，51.6，43.3，35.2，33.0，31.8，29.4，28.0，25.5.HPLCC-18 Novapac，4.6×250mm，1.5mL/min；溶劑系統(tǒng)25％MeCN/75％H2O[等度]；保留時(shí)間＝13.7min。
實(shí)施例6(2R，3R，4S，5R，6E)-3，4，5-三羥基-2-甲氧基-8，8-二甲基-N-[(3S，6R)-六氫-2-氧代-6-(環(huán)己基甲基羰基)氧基-2H-氮雜-3-基]壬-6-烯酰胺基本上延續(xù)實(shí)施例1g)的操作，用大約當(dāng)量的一種混合物代替環(huán)己烷碳酰氯，該混合物由環(huán)己基乙酸、鹽酸1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺與4-二甲氨基吡啶組成，得到(3S，6R)-3-(叔丁氧基羰基)氨基六氫-6-(環(huán)己基甲基羰基)氧基-2H-氮雜-2-酮。采用上面的化合物代替化合物1g)，并基本上延續(xù)實(shí)施例1h)、1i)和實(shí)施例1最后一步的操作，得到標(biāo)題化合物。1H NMR(CDCl3)δ7.98(d，J＝6.2，1H)，5.83-5.7(m，1H)，5.80(d，J＝15.6Hz，1H)，4.94(m，1H)，4.52(m，1H)，4.2(m，2H)，3.78(m，2H)，3.6-3.48(m，3H)，3.52(s，3H)，3.23(d，J＝7.3Hz，1H)，3.06(m，1H)，2.80(d，J＝7Hz，2H)，2.13-1.63(m，12H)，1.30-0.85(m，5H)，1.0(s，9H)；13C NMR (CDCl3)δ174.0，172.3，172.2，145.7，123.3，81.1，74.5，72.8，72.5，67.0，60.0，51.7，43.5，42.1，35.0，33.0，32.0，29.5，26.1，26.0，25.7.HPLCC-18 Novapac，4.6×250mm，1.5mL/min；溶劑系統(tǒng)40％MeCN/60％H2O[等度]；保留時(shí)間＝11.5min。
實(shí)施例7(2R，3R，4S，5R，6E)-3，4，5-三羥基-2-甲氧基-8，8-二甲基-N-[(3S，6R)-六氫-2-氧代-6-(1-氧代-2-苯基乙氧基)-2H-氮雜-3-基]壬-6-烯酰胺基本上延續(xù)實(shí)施例1g)的操作，用大約當(dāng)量的一種混合物代替環(huán)己烷碳酰氯，該混合物由苯乙酸、鹽酸1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺與4-二甲氨基吡啶組成，得到(3S，6R)-3-(叔丁氧基羰基)氨基六氫-6-(1-氧代-2-苯基乙氧基)-2H-氮雜-2-酮。采用上面的化合物代替化合物1g)，并基本上延續(xù)實(shí)施例1h)、1i)和實(shí)施例1最后一步的操作，得到標(biāo)題化合物。1H NMR(CDCl3)δ7.96(d，J＝6.2，1H)，7.28(m，5H)，5.80(d，J＝15.8，1H)，5.68(t，J＝6.4Hz，1H)，5.39(dd，J＝15.8 and 7.3Hz，1H)，4.93(m，1H)，4.53-4.47(m，1H)，4.22-4.18(m，2H)，3.60-3.56(m，2H)，3.52(s，3H)，3.48-3.38(m，2H)，3.27(d，J＝6.6Hz，1H)，3.08(s，1H)，2.15-1.67(m，5H)，1.0(s，9H)；13C NMR(CDCl3)δ173.9，172.1，170.8，145.8，133.6，129.2，128.8，127.4，123.2，81.1，74.5，72.7，72.4，67.6，59.9，51.6，43.2，41.5，33.0，31.8，29.4，25.5.HPLCC-18 Novapac，4.6×250mm，1.5mL/min；溶劑系統(tǒng)10-100％MeCN/H2O[＞20min梯度]；保留時(shí)間＝12.2min.
實(shí)施例8(2R，3R，4S，5R，6E)-3，4，5-三羥基-2-甲氧基-8，8-二甲基-N-[(3S，6R)-六氫-2-氧代-6-(1-氧代-2-[3，4-二氯苯基]乙氧基)-2H-氮雜-3-基]壬-6-烯酰胺基本上延續(xù)實(shí)施例1g)的操作，用大約當(dāng)量的一種混合物代替環(huán)己烷碳酰氯，該混合物由3，4-二氯苯乙酸、鹽酸1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺與4-二甲氨基吡啶組成，得到(3S，6R)-3-(叔丁氧基羰基)氨基六氫-6-(1-氧代-2-[3，4-二氯苯基]乙氧基)-2H-氮雜-2-酮。采用上面的化合物代替化合物1g)，并基本上延續(xù)實(shí)施例1h)、1i)和實(shí)施例1最后一步的操作，得到標(biāo)題化合物；mp 132-136℃；1H NMR(CDCl3)δ8.00(d，J＝6Hz，1H)，7.51(s，1H)，7.41(m，2H)，7.16(dd，J＝3Hz and 9Hz，1H)，5.77(d，J＝16Hz，1H)，5.42(dd，J＝8Hz and 16Hz，1H)，4.93(d，J＝3Hz，1H)，4.55(q，J＝6Hz，1H)，4.19(m，1H)，3.83(m，3H)，3.63(d，J＝6 Hz，3H)，3.48(m，6H)，3.39(s，1H)，2.13(d，J＝16Hz，1H)，2.00 (m，2H)，1.77(q，J＝12Hz，1H)，1.03(s，9H)；13C NMR(CDCl3)δ169.1，144.2，133.5，131.5，130.9，130.8，129.8，128.5，123.4，81.3，73.6，72.2，71.7，67.6，58.4，50.8，49.3，42.0，32.3，31.1，30.7，28.8，24.8.
實(shí)施例9(2R，3R，4S，5R，6E)-3，4，5-三羥基-2-甲氧基-8，8-二甲基-N-[(3S，6R)-六氫-2-氧代-6-(1-氧代-2-[4-甲氧基苯基]乙氧基)-2H-氮雜-3-基]壬-6-烯酰胺a)(3S，6R)-3-(叔丁氧基羰基)氨基六氫-6-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-2H-氮雜-2-酮的制備將(3S，6R)-3-(叔丁氧基羰基)氨基六氫-6-羥基-2H-氮雜-2-酮(25g，102mmol)、叔丁基二甲基甲硅烷基氯(23.16g，153mmol)和咪唑(10.45g，153mmol)與60ml DMF混合。反應(yīng)物在室溫下攪拌過夜。混合物用1L水稀釋。所得混合物用乙酸乙酯與己烷的1∶1混合物萃取(2×200ml)。所有有機(jī)層合并，用鹽水溶液洗滌，用Na2SO4干燥，濃縮。殘余物用乙酸乙酯/己烷重結(jié)晶進(jìn)行純化，得到28.5g(78％)(3S，6R)-3-(叔丁氧基羰基)氨基六氫-6-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-2H-氮雜-2-酮，為白色固體，mp 65-66℃；1H NMR(CDCl3)δ5.86(d，J＝6Hz，1H)，5.58(t，J＝6Hz，1H)，4.18(m，1H)，3.91(s，1H)，3.35(dd，J＝6Hz and 16Hz，1H)，3.07(m，1H)，1.80(m，4H)，1.40(s，9H)，0.83(s，9H)，0.004(s，6H).
b)(3S，6R)-3-氨基六氫-6-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-2H-氮雜-2-酮的制備將(3S，6R)-3-(叔丁氧基羰基)氨基六氫-6-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-2H-氮雜-2-酮(8.0g，22mmol)溶于40ml CH2Cl2，冷卻至-78℃。緩慢加入三甲基甲硅烷基碘(3.5ml，24.5mmol)。使混合物在-78℃下反應(yīng)30分鐘。反應(yīng)物溫?zé)嶂?℃，攪拌15分鐘。溶液變成黃色。反應(yīng)用NH4HCO3(3.43g，44mmol)的30ml CH3OH與15ml水溶液終止?；旌衔餄饪s，經(jīng)過色譜純化，用CH2Cl2與甲醇的95∶5混合物洗脫，得到5.45g(96％)(3S，6R)-3-氨基六氫-6-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-2H-氮雜-2-酮，為白色固體1H NMR(CDCl3)δ5.61(s，1H)，3.88(s，1H)，3.42(d，J＝8Hz，1H)，3.32(dd，J＝6Hz and 16Hz，1H)，3.06(m，1H)，1.87(m，2H)，1.76(m，1H)，1.65(s，3H)，0.83(s，9H)，0.001(s，6H).
c)(2R，3R，4S，5R，6E)-3，5-(甲基亞乙基)-3，4，5-三羥基-2-甲氧基-8，8-二甲基-N-[(3S，6R)-六氫-2-氧代-6-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-2H-氮雜-3-基]壬-6-烯酰胺的制備在室溫下，將(3S，6R)-3-氨基六氫-6-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-2H-氮雜-2-酮(5.45g，2lmmol)、(6E)-6，7，8，9-四脫氧-8，8-二甲基-2-O-甲基-3，5-O-(1-甲基亞乙基)-壬-6-烯古洛糖酸內(nèi)酯(3.0g，11mmol)和二異丙基乙胺(4.6ml，26mmol)與30ml異丙醇混合?；旌衔锛訜嶂粱亓鬟^夜?；旌衔锢鋮s至室溫，濃縮。殘余物經(jīng)過色譜純化，用CH2Cl2與甲醇的98∶2混合物洗脫，得到2.53g(42％)(2R，3R，4S，5R，6E)-3，5-(甲基亞乙基)-3，4，5-三羥基-2-甲氧基-8，8-二甲基-N-[(3S，6R)-六氫-2-氧代-6-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-2H-氮雜-3-基]壬-6-烯酰胺(42％)，為白色固體1H NMR(CDCl3)δ7.53(d，J＝6Hz，1H)，5.72(d，J＝16Hz，1H)，5.47(dd，J＝6Hz and 16Hz，1H)，4.47(m，1H)，4.22(d，J＝6Hz，1H)，4.03(d，J＝8Hz，1H)，3.91(m，1H)，3.82(d，J＝7Hz，1H)，3.48(d，J＝9Hz，1H)，3.43(s，3H)，3.35(d，J＝6Hz，1H)，3.09(m，1H)，2.77(d，J＝9Hz，1H)，1.83(m，2H)，1.77(m，2H)，1.41(d，J＝6 Hz，6H)，0.97(s，9H)，0.83(s，9H)，0.005(s，6H)；13C NMR(CDCl3)δ172.2，169.6，148.3，145.3，121.5，108.8，99.6，81.4，80.5，79.2，78.2，74.4，73.1，69.1，67.9，65.8，59.2，56.4，51.7，36.8，36.5，33.1，29.6，29.4，19.1.
d)(2R，3R，4S，5R，6E)-3，5-(甲基亞乙基)-3，4，5-三羥基-2-甲氧基-8，8-二甲基-N-[(3S，6R)-六氫-2-氧代-6-羥基-2H-氮雜-3-基]壬-6-烯酰胺的制備將(2R，3R，4S，5R，6E)-3，5-(甲基亞乙基)-3，4，5-三羥基-2-甲氧基-8，8-二甲基-N-[(3S，6R)-六氫-2-氧代-6-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-2H-氮雜-3-基]壬-6-烯酰胺(2.5g，4.6mmol)溶于30mlTHF。在室溫下加入1.0M四丁基氟化銨的THF溶液(13.8ml，14mmol)，攪拌3小時(shí)?；旌衔餄饪s，經(jīng)過色譜純化，用CH2Cl2與甲醇的95∶5混合物洗脫，得到1.8g(91％)(2R，3R，4S，5R，6E)-3，5-(甲基亞乙基)-3，4，5-三羥基-2-甲氧基-8，8-二甲基-N-[(3S，6R)-六氫-2-氧代-6-羥基-2H-氮雜-3-基]壬-6-烯酰胺，為白色固體1H NMR(CDCl3)δ7.61(d，J＝6Hz，1H)，6.45(t，J＝6Hz，1H)，5.77(d，J＝6Hz，1H)，5.52(dd，J＝6Hz，and 16Hz，1H)，4.56(m，1H)，4.28(d，J＝6Hz，1H)，4.06(d，J＝8Hz，1H)，4.00(m，1H)，3.91(d，J＝8Hz，1H)，3.54(m，1H)，3.47(s，3H)，3.35(m，2H)，3.08(d，J＝8Hz，1H)，2.76(d，J＝6Hz，1)，2.02(m，2H)，1.83(m，2H)，1.45(s，6H)，1.03(s，9H)；13C NMR(CDCl3)δ175.1，169.7，145.3，121.5，99.7，83.1，80.6，74.5，73.2，65.8，64.6，59.1，51.8，45.9，34.5，33.1，29.5，29.3，25.1，19.1，13.7.
e)(2R，3R，4S，5R，6E)-3，5-(甲基亞乙基)-3，4，5-三羥基-2-甲氧基-8，8-二甲基-N-[(3S，6R)-六氫-2-氧代-6-(1-氧代-2-[4-甲氧基苯基]乙氧基)-2H-氮雜-3-基]壬-6-烯酰胺的制備將4-甲氧基苯乙酸(0.35g，2.1mmol)、鹽酸1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(0.42g，2.1mmol)和DMAP(0.17g，1.4mmol)與30ml CH2Cl2混合，在室溫下攪拌30分鐘。向混合物中加入(2R，3R，4S，5R，6E)-3，5-(甲基亞乙基)-3，4，5-三羥基-2-甲氧基-8，8-二甲基-N-[(3S，6R)-六氫-2-氧代-6-羥基-2H-氮雜-3-基]壬-6-烯酰胺(0.6g，1.4mmol)，在室溫下攪拌過夜。混合物濃縮。殘余物經(jīng)過色譜純化，用CH2Cl2與甲醇的98∶2混合物洗脫，得到0.644g(80％)(2R，3R，4S，5R，6E)-3，5-(甲基亞乙基)-3，4，5-三羥基-2-甲氧基-8，8-二甲基-N-[(3S，6R)-六氫-2-氧代-6-(1-氧代-2-[4-甲氧基苯基]乙氧基)-2H-氮雜-3-基]壬-6-烯酰胺，為白色固體1H NMR(CDCl3)δ7.56(d，J＝6Hz，1H)，7.18(d，J＝8Hz，2H)，6.86(d，J＝8Hz，2H)，5.78(d，J＝16Hz，1H)，5.62(t，J＝6Hz，1H)，5.52(dd，J＝6Hz and 16Hz，1H)，4.93(s，1H)，4.58(m，1H)，4.28(d，J＝12Hz，1H)，4.06(d，J＝8Hz，1H)，3.88(d，J＝7Hz，1H)，3.80(s，3H)，3.56(s，2H)，3.48(s，5H)，2.82(d，J＝11Hz，1H)，2.05(m，3H)，1.71(s，2H)，1.42(d，J＝6Hz，6H)，1.03(s，9H)；13C NMR(CDCl3)δ174.3，171.1，169.7，158.9，145.3，130.2，125.7，121.6，114.2，99.7，80.6，74.5，73.3，67.7，65.8，59.3，55.3，51.7，43.3，40.6，33.1，31.8，31.4，29.4，25.8，19.1.
f)標(biāo)題化合物的制備在0℃下，向含有(2R，3R，4S，5R，6E)-3，5-(甲基亞乙基)-3，4，5-三羥基-2-甲氧基-8，8-二甲基-N-[(3S，6R)-六氫-2-氧代-6-(1-氧代-2-[4-甲氧基苯基]乙氧基)-2H-氮雜-3-基]壬-6-烯酰胺(0.64g，1.1mmol)的燒瓶內(nèi)加入TFA、THF與水(3∶3∶2)的30ml溶液。使混合物在0℃下反應(yīng)30分鐘?；旌衔镌诟哒婵障抡舭l(fā)至干。殘余物用NH4HCO3溶液(1.2g的20ml水溶液)中和?；旌衔镌诟哒婵障抡舭l(fā)至干。殘余物經(jīng)過色譜純化，用CH2Cl2與甲醇的95∶5混合物洗脫，得到0.35g(60％)標(biāo)題化合物，為白色固體1H NMR(CDCl3)δ7.98(d，J＝6Hz，1H)，7.18(d，J＝9Hz，2H)，6.87(d，J＝9Hz，2H)，5.83(d，J＝16Hz，1H)，5.72(t，J＝6Hz，1H)，5.42(dd，J＝8Hz and 16Hz，1H)，4.93(d，J＝3Hz，1H)，4.53(m，1H)，4.23(t，J＝6Hz，2H)，3.81 (m，2H)，3.80(s，3H)，3.61(t，J＝5Hz，1H)，3.57(s，2H)，3.54 (s，3H)，3.47(m，1H)，3.30(d，J＝7Hz，1H)，3.12(s，1H)，2.16(d，J＝16Hz，1H)，1.99(m，2H)，1.82(m，1H)，1.72(s，1H)，1.04(s，9H)；13C NMR(CDCl3)δ173.8，172.2，171.1，158.9，145.8，130.2，125.6，123.2，114.2，81.0，74.5，72.8，72.4，67.5，60.0，55.3，51.6，43.2，40.6，33.0，31.8，31.3，29.4，25.6.
實(shí)施例10(2R，3R，4S，5R，6E)-3，4，5-三羥基-2-甲氧基-8，8-二甲基-N-[(3S，6R)-六氫-2-氧代-6-([4-正癸氧基苯基]羰基)氧基-2H-氮雜-3-基]壬-6-烯酰胺基本上延續(xù)實(shí)施例9e)的操作，用大約當(dāng)量的4-癸氧基苯甲酸代替4-甲氧基苯乙酸，得到(2R，3R，4S，5R，6E)-3，5-(甲基亞乙基)-3，4，5-三羥基-2-甲氧基-8，8-二甲基-N-[(3S，6R)-六氫-2-氧代-6-([4-正癸氧基苯基]羰基)氧基-2H-氮雜-3-基]壬-6-烯酰胺。采用上面的化合物代替化合物9e)，并基本上延續(xù)實(shí)施例9最后一步的操作，得到標(biāo)題化合物，為固體，mp 70-74℃；1H NMR(CDCl)δ8.06(d，J＝6Hz，1H)，7.96(d，J＝9Hz，2H)，6.90(d，J＝9Hz，2H)，6.05(t，J＝6Hz，1H)，5.80(d，J＝15Hz，1H)，5.44(dd，J＝7Hz and 15Hz，1H)，5.20(m，1H)，4.63(m，1H)，4.25(t，J＝6Hz，1H)，4.02(t，J＝6Hz，2H)，3.84(dd，J＝7Hzand 13Hz，2H)，3.69(m，1H)，3.62(m，2H)，3.38(d，J＝5Hz，1H)，3.56(s，3H)，3.33(s，1H)，3.15(s，1H)，2.32(d，J＝12Hz，1H)，2.13(t，J＝12Hz，1H)，2.01(m，2H)，1.82(m，2H)，1.48(m，2H)，1.30(m，12H)，1.05(s，9H)，0.94(t，J＝6Hz，3H)；13C NMR(CDCl3)δ174.1，172.1，165.2，163.4，145.7，131.7，123.2，121.6，114.2，81.1，74.5，72.7，72.4，68.3，67.2，59.9，51.7，43.6，33.0，32.1，31.9，29.5，29.4，29.3，29.2，29.0，25.9，25.9，22.6，14.1.
實(shí)施例11(2R，3R，4S，5R，6E)-3，4，5-三羥基-2-甲氧基-8，8-二甲基-N-[(3S，6R)-六氫-2-氧代-6-(1-氧代-3-苯基-2-丙烯氧基)-2H-氮雜-3-基]壬-6-烯酰胺基本上延續(xù)實(shí)施例1g)的操作，用大約當(dāng)量的肉桂酰氯代替環(huán)己烷碳酰氯，得到(3S，6R)-3-(叔丁氧基羰基)氨基六氫-6-(1-氧代-3-苯基-2-丙烯氧基)-2H-氮雜-2-酮。采用上面的化合物代替化合物1g)，并基本上延續(xù)實(shí)施例1h)、1i)和實(shí)施例1最后一步的操作，得到標(biāo)題化合物，為固體，mp 83-85℃；1H NMR(DMSO)δ8.03(m，1H)，7.71(d，J＝16Hz，1H)，7.54(m，2H)，7.41(m，2H)，6.45(d，J＝16Hz，1H)，5.97(m，1H)，5.81(d，J＝16Hz，1H)，5.45(dd，J＝16 and 8Hz，1H)，5.09(m，1H)，4.58(m，1H)，4.22(m，2H)，3.81(m，2H)，3.62(m，4H)，3.54(s，3H)，3.30(d，J＝8Hz，1H)，3.10(s，1H)，2.25(m，1H)，2.00(m，3H)，1.02(s，9H)；13C NMR(DMSO)δ174.10，172.15，166.01，145.91，145.75，134.03，130.70，129.00，128.22，123.20，117.34，81.10，74.50，72.76，72.46，67.29，59.93，51.67，43.51，33.03，32.00，29.43，25.75.
實(shí)施例12(2R，3R，4S，5R，6E)-3，4，5-三羥基-2-甲氧基-8，8-二甲基-N-[(3S，6R)-六氫-2-氧代-6-([4-正癸基苯基]羰基)氧基-2H-氮雜-3-基]壬-6-烯酰胺基本上延續(xù)實(shí)施例9e)的操作，用大約當(dāng)量的4-癸基苯甲酸代替4-甲氧基苯乙酸，得到(2R，3R，4S，5R，6E)-3，5-(甲基亞乙基)-3，4，5-三羥基-2-甲氧基-8，8-二甲基-N-[(3S，6R)-六氫-2-氧代-6-([4-正癸基苯基]羰基)氧基-2H-氮雜-3-基]壬-6-烯酰胺。采用上面的化合物代替化合物9e)，并基本上延續(xù)實(shí)施例9最后一步的操作，得到標(biāo)題化合物mp 60-64℃；1H NMR(CDCl)δ8.06(d，J＝6Hz，1H)，7.94(d，J＝8Hz，2H)，7.26(d，J＝8Hz，2H)，6.10(t，J＝7Hz，1H)，5.85(d，J＝16Hz，1H)，5.45(dd，J＝8Hz and 16Hz，1H)，5.22(d，J＝3Hz，1H)，4.64(dd，J＝6Hz and 8Hz，1H)，4.25(t，J＝6Hz，2H)，3.84(dd，J＝6Hz and 11Hz，2H)，3.69(t，J＝7Hz，1H)，3.63(dd，J＝5Hz and 8Hz，2H)，3.56(s，3H)，2.68(t，J＝8Hz，2H)，2.34(d，J＝13Hz，1H)，2.14(t，J＝12Hz，1H)，2.04(t，J＝11Hz，1H)，1.96(t，J＝3Hz，1H)，1.63(m，2H)，1.32(m，18H)，1.82(m，2H)，1.05(s，9H)，0.90(t，J＝7Hz，3H)；13C NMR(CDCl3)δ174.1，172.1，165.5，149.3，145.7，129.7，128.6，127.0，123.2，81.1，74.5，72.7，72.4，67.4，59.9，51.7，43.5，36.0，33.0，32.1，31.9，31.1，29.6，29.5，29.4，29.3，29.2，25.9，22.6，14.1.
實(shí)施例13(2R，3R，4S，5R，6E)-3，4，5-三羥基-2-甲氧基-8，8-二甲基-N-[(3S，6R)-六氫-2-氧代-6-(1-氧代-3-[3-噻吩基]乙氧基)-2H-氮雜-3-基]壬-6-烯酰胺基本上延續(xù)實(shí)施例1g)的操作，用大約當(dāng)量的一種混合物代替環(huán)己烷碳酰氯，該混合物由3-噻吩乙酸、鹽酸1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺與4-二甲氨基吡啶組成，得到(3S，6R)-3-(叔丁氧基羰基)氨基六氫-6-(1-氧代-3-[3-噻吩基]乙氧基)-2H-氮雜-2-酮。采用上面的化合物代替化合物1g)，并基本上延續(xù)實(shí)施例1h)、1i)和實(shí)施例1最后一步的操作，得到標(biāo)題化合物；hplc(C-18 Novapac，4.6×250mm，1.5mL/min)溶劑系統(tǒng)35％MeCN/65％H2O[等度]；保留時(shí)間＝7.89min.1HNMR(CDCl3)δ7.97(d，J＝6Hz，1H)，7.30(m，1H)，7.14(m，1H)，7.00(m，1H)，5.83(m，1H)，5.81(d，J＝16Hz，1H)，5.40(dd，J＝7Hz and 16Hz，1H)，4.90(m，1H)，4.45(m，1H)，4.15(m，1H)，3.75(m，2H)，3.66(s，2H)，3.57(s，3H)，3.40(m，2H)，3.32(d，J＝7Hz，1H)，3.12(s，1H)，1.7(m，4H)，1.01(s，9H)；13C NMR(CDCl3)δ174.0，172.1，170.3，145.7，133.1，126.2，123.3，123.1，81.2，74.5，72.8，72.5，67.8，59.9，51.6，43.2，36.0，33.0，31.8，29.5，25.6.
實(shí)施例14(2R，3R，4S，5R，6E)-3，4，5-三羥基-2-甲氧基-8，8-二甲基-N-[(3S，6R)-六氫-2-氧代-6-(1-氧代-3-[3-吲哚基]乙氧基)-2H-氮雜-3-基]壬-6-烯酰胺基本上延續(xù)實(shí)施例1g)的操作，用大約當(dāng)量的一種混合物代替環(huán)己烷碳酰氯，該混合物由3-吲哚乙酸、鹽酸1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺與4-二甲氨基吡啶組成，得到(3S，6R)-3-(叔丁氧基羰基)氨基六氫-6-(1-氧代-3-[3-吲哚基]乙氧基)-2H-氮雜-2-酮。采用上面的化合物代替化合物1g)，并基本上延續(xù)實(shí)施例1h)、1i)和實(shí)施例1最后一步的操作，得到標(biāo)題化合物；hplc(C-18 Novapac，4.6×250mm，1.5mL/min)、溶劑系統(tǒng)35％MeCN/65％H2O[等度]；保留時(shí)間＝9.2min。1HNMR(CDCl3)δ8.47(s，1H)，7.90(d，J＝6Hz，1H)，7.55(d，J＝8Hz，1H)，7.36(d，J＝8Hz，1H)，7.20-7.05(m，3H)，5.81(d，J＝16Hz，1H)，5.75(m，1H)，5.37(dd，J＝8Hz and 16Hz，1H)，4.8(m，1H)，4.45-4.30(m，2H)，4.25-4.15(m，1H)，3.9-3.7(m，4H)，3.65-3.55(m，1H)，3.50(s，3H)，3.45-3.30(m，1H)，3.25-3.10(m，2H)，2.15-2.00(m，1H)，2.00-1.60(m，4H)，0.99(s，9H)；13C NMR(CDCl3)δ173.9，171.9，145.7，136.2，127.1，123.3，123.3，122.3，119.8，118.6，111.5，108.0，81.6，74.4，72.7，72.6，67.5，59.7，51.5，43.1，33.0，31.8，31.6，29.5，25.6.
下面是實(shí)施例1-14化合物的對應(yīng)結(jié)構(gòu)實(shí)施例1
權(quán)利要求
1.式I化合物 其中R1是(C1-6)烷基或(C3-6)環(huán)烷基；R2是氫或(C1-6)烷基；X是(C1-12)亞烷基、(C2-12)亞烯基或(C2-12)亞炔基；m是0或1；R3是(C3-8)環(huán)烷基，或選自II、III、IV和V的芳族環(huán)系 其中R4是氫、氯或甲氧基；R5是氫、氯、(C1-18)烷基或(C1-18)烷氧基；Z是氧、硫、N-H或N-CH3；或者可能的話，其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的式I化合物，其中R1是(C1-6)烷基；R2是氫或(C1-4)烷基；X是(C1-6)亞烷基或(C2-6)亞烯基；m是0或1；R3是(C3-8)環(huán)烷基，或選自II、III、IV和V的芳族環(huán)系，其中R4是氫、氯或甲氧基；R5是氫、氯、(C1-18)烷基或(C1-18)烷氧基；Z是氧、硫、N-H或N-CH3；或者可能的話，其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的式I化合物，其中R1是異丙基或叔丁基；R2是氫或甲基；m是0或1；X是(C1-6)亞烷基；R3是(C5-7)環(huán)烷基，或選自IIa和V的芳族環(huán)系， 其中R4’位于間位，是氫或氯；R5’位于對位，是氫、氯、(C1-18)烷基或(C1-18)烷氧基；或者可能的話，其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任意一項(xiàng)的式I化合物，其中R1是異丙基或叔丁基；R2是氫或甲基；m是0或1；X是亞甲基或亞乙基；R3是(C5-7)環(huán)烷基、苯基、3，4-二氯苯基、4-甲氧基苯基、4-正癸基苯基、4-正癸氧基苯基或3-吡啶基；其條件是若m是0，則R3是(C5-7)環(huán)烷基、4-正癸基苯基或4-正癸氧基苯基；或者可能的話，其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的式I化合物，選自3，4，5-三羥基-2-甲氧基-8，8-二甲基-N-[六氫-2-氧代-6-(環(huán)己基羰基)氧基-2H-氮雜-3-基]壬-6-烯酰胺，和3，4，5-三羥基-2-甲氧基-8，8-二甲基-N-[六氫-2-氧代-6-(1-氧代-3-苯基丙氧基)-2H-氮雜-3-基]壬-6-烯酰胺或其藥學(xué)上可接受的鹽。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的式I化合物，選自(2R，3R，4S，5R，6E)-3，4，5-三羥基-2-甲氧基-8，8-二甲基-N-[(3S，6R)-六氫-2-氧代-6-(環(huán)己基羰基)氧基-2H-氮雜-3-基]壬-6-烯酰胺，和(2R，3R，4S，5R，6E)-3，4，5-三羥基-2-甲氧基-8，8-二甲基-N-[(3S，6R)-六氫-2-氧代-6-(1-氧代-3-苯基丙氧基)-2H-氮雜-3-基]壬-6-烯酰胺或其藥學(xué)上可接受的鹽。
7.藥物組合物，包含根據(jù)權(quán)利要求1-6任意一項(xiàng)的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，可能的話，以及藥學(xué)上可接受的載體。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的藥物組合物，包含治療學(xué)上有效量的式I化合物，該化合物是3，4，5-三羥基-2-甲氧基-8，8-二甲基-N-[六氫-2-氧代-6-(環(huán)己基羰基)氧基-2H-氮雜-3-基]壬-6-烯酰胺。
9.根據(jù)權(quán)利要求7的藥物組合物，包含治療學(xué)上有效量的式I化合物，該化合物是3，4，5-三羥基-2-甲氧基-8，8-二甲基-N-[六氫-2-氧代-6-(1-氧代-3-苯基丙氧基)-2H-氮雜-3-基]壬-6-烯酰胺。
10.治療腫瘤的方法，包括將治療學(xué)上有效量的根據(jù)權(quán)利要求1-6任意一項(xiàng)的式I化合物、或者可能的話其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽對需要這樣治療的哺乳動物給藥。
11.藥物組合物，用于包括人在內(nèi)的溫血動物腫瘤的治療，包含抗腫瘤有效劑量的根據(jù)權(quán)利要求1-6任意一項(xiàng)的式I化合物或該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽以及藥物載體。
12.根據(jù)權(quán)利要求1-6任意一項(xiàng)的式I化合物或該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽用于藥物組合物制備的用途，該藥物組合物用在腫瘤的化學(xué)療法中。
13.根據(jù)權(quán)利要求1-6任意一項(xiàng)的式I化合物或該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽用于腫瘤化學(xué)療法的用途。
14.制備式I的己內(nèi)酰胺化合物的方法 其中R1是(C1-6)烷基或(C3-6)環(huán)烷基；R2是氫或(C1-6)烷基；X是(C1-12)亞烷基、(C2-12)亞烯基或(C2-12)亞炔基；m是0或1；R3是(C3-8)環(huán)烷基，或選自II、III、IV和V的芳族環(huán)系 其中R4是氫、氯或甲氧基；R5是氫、氯、(C1-18)烷基或(C1-18)烷氧基；Z是氧、硫、N-H或N-CH3；或者可能的話，其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽，該方法包括，在第一步中，在一種極性有機(jī)溶劑的存在下，將式VI的氨基己內(nèi)酰胺化合物 用式VII的內(nèi)酯化合物 ?；?，得到式VIII的二酰胺化合物 其中每個R1、R2、X、m和R3定義同權(quán)利要求1，在第二步中，將第一步所得二酰胺化合物溶于溶劑混合物進(jìn)行水解，得到所需式I的己內(nèi)酰胺化合物。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其中酰化步驟是在異丙醇的存在下、在略低于異丙醇的回流溫度或在回流溫度下進(jìn)行的。
全文摘要
本發(fā)明涉及某些取代的式Ⅰ的己內(nèi)酰胺化合物,其中R
文檔編號B60R13/01GK1326445SQ99813410
公開日2001年12月12日 申請日期1999年11月15日 優(yōu)先權(quán)日1998年11月17日
發(fā)明者F·R·小金德, K·W·貝爾, C·T·杰戈, R·W·弗塞斯, S·瓦特納辛 申請人:諾瓦提斯公司