一種卡非佐米前藥及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種卡非佐米前藥，具有式(Ⅰ)所示結(jié)構(gòu)。本發(fā)明以短鏈的聚乙二醇分子作為親水端，卡非佐米作為疏水端，兩部分利用L-亮氨酸以成亞胺鍵的方式相連，制備得到新型卡非佐米前藥，提高了卡非佐米的水溶性，易于制備成高濃度溶液，經(jīng)凍干制成成品，穩(wěn)定性增強(qiáng)。同時(shí)，所述卡非佐米前藥為酸敏性化合物，具有在血液(弱堿性)循環(huán)時(shí)保持穩(wěn)定，而一旦到達(dá)在腫瘤組織(偏酸性)，則能迅速釋放出卡非佐米原藥的特點(diǎn)，從而實(shí)現(xiàn)靶向給藥，在增強(qiáng)化療療效的同時(shí)減少毒副作用。
【專利說(shuō)明】
-種卡非佐米前藥及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及藥物制劑技術(shù)領(lǐng)域，尤其設(shè)及一種卡非佐米前藥及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 卡非佐米是一種經(jīng)靜脈給藥的四膚環(huán)氧酬骨架蛋白酶體抑制劑，用于曾接受過(guò)至 少巧巾既往治療方案包括棚替佐米(萬(wàn)河)和免疫調(diào)節(jié)治療的復(fù)發(fā)性多發(fā)性骨髓瘤患者，于 2012年7月20日由美國(guó)食品和藥物管理局(FDA)批準(zhǔn)上市。
[0003] 但是由于其水溶性差，難W配制足夠高濃度的組合物產(chǎn)生所需的藥理效應(yīng)，目前 采用的是經(jīng)取代的環(huán)糊精包合技術(shù)，運(yùn)需要加入大量的環(huán)糊精，制備過(guò)程需在弱酸性環(huán)境 下進(jìn)行，使制劑在制備過(guò)程中容易產(chǎn)生新的雜質(zhì)，勢(shì)必會(huì)增加毒副作用，影響其在臨床上的 應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 有鑒于此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供一種卡非佐米前藥及其制備方法， 具有較高的純度W及水溶性。
[0005] 本發(fā)明提供了一種卡非佐米前藥，具有式(I)所示結(jié)構(gòu)：
[0006]
[0007] n為3~20的整數(shù)。
[000引優(yōu)選的，n為10~15的整數(shù)。
[0009] 優(yōu)選的，n為12。
[0010] 優(yōu)選的，所述卡非佐米前藥為凍干粉針劑。
[0011] 本發(fā)明還提供了上述卡非佐米前藥的制備方法，包括：
[001。A)將L-亮氨酸進(jìn)行氨基保護(hù)；
[0013] B)將氨基保護(hù)的心亮氨酸與聚乙二醇反應(yīng)，然后脫保護(hù)，得到心亮氨酸聚乙二醇 化合物；
[0014] C)將步驟B)得到的k亮氨酸聚乙二醇化合物與卡非佐米，在四氯化鐵存在的條件 下，進(jìn)行反應(yīng)，得到式(I)所示卡非佐米前藥；
[0015]
[0016] n為3~20的整數(shù)。
[0017] 優(yōu)選的，所述氨基保護(hù)的心亮氨酸與聚乙二醇的質(zhì)量比為1: (2~3)。
[0018] 優(yōu)選的，所述步驟B)具體為：
[0019] 將氨基保護(hù)的レ亮氨酸與二環(huán)己基碳二亞胺、4-二甲氨基化晚在冰浴中進(jìn)行反 應(yīng)，然后與聚乙二醇在室溫下進(jìn)行反應(yīng)。
[0020] 優(yōu)選的，所述氨基保護(hù)的心亮氨酸與二環(huán)己基碳二亞胺、4-二甲氨基化晚的摩爾 比為 1:(1 ~1.5):(1 ~1.5)。
[0021] 優(yōu)選的，所述聚乙二醇為聚乙二醇400。
[0022] 優(yōu)選的，所述卡非佐米與レ亮氨酸聚乙二醇化合物、四氯化鐵的摩爾比為1:(1~ 1.1):(1 ~1.1)。
[0023] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供了一種卡非佐米前藥，具有式（I)所示結(jié)構(gòu)。本發(fā)明 W短鏈的聚乙二醇分子作為親水端，卡非佐米作為疏水端，兩部分利用k亮氨酸W成亞胺 鍵的方式相連，制備得到新型卡非佐米前藥，提高了卡非佐米的水溶性，易于制備成高濃度 溶液，經(jīng)凍干制成成品，穩(wěn)定性增強(qiáng)。同時(shí)，所述卡非佐米前藥為酸敏性化合物，具有在血液 (弱堿性)循環(huán)時(shí)保持穩(wěn)定，而一旦到達(dá)在腫瘤組織(偏酸性），則能迅速釋放出卡非佐米原 藥的特點(diǎn)，從而實(shí)現(xiàn)祀向給藥，在增強(qiáng)化療療效的同時(shí)減少毒副作用。
【附圖說(shuō)明】
[0024] 圖1是本申請(qǐng)實(shí)施例1的核磁H譜圖；
[0025] 圖2是本申請(qǐng)實(shí)施例3的凍干曲線圖；
[0026] 圖3為實(shí)施例3制備的卡非佐米凍干制劑色譜圖；
[0027] 圖4為比較例1制備的卡非佐米凍干制劑色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0028] 本發(fā)明提供了一種卡非佐米前藥，具有式(I)所示結(jié)構(gòu)：
[0029]
[0030] 其中，n優(yōu)選為3~20的整數(shù)，更優(yōu)選為10~15的整數(shù)，最優(yōu)選為12。
[0031] 本發(fā)明W短鏈的聚乙二醇分子作為親水端，卡非佐米作為疏水端，兩部分利用k 亮氨酸W成亞胺鍵的方式相連，制備得到新型卡非佐米前藥，提高了卡非佐米的水溶性，易 于制備成高濃度溶液，經(jīng)凍干制成成品，穩(wěn)定性增強(qiáng)。同時(shí)，所述卡非佐米前藥為酸敏性化 合物，具有在血液(弱堿性)循環(huán)時(shí)保持穩(wěn)定，而一旦到達(dá)在腫瘤組織(偏酸性），則能迅速釋 放出卡非佐米原藥的特點(diǎn)，從而實(shí)現(xiàn)祀向給藥，在增強(qiáng)化療療效的同時(shí)減少毒副作用。
[0032] 本發(fā)明中，所述卡非佐米前藥可W用一水巧樣酸調(diào)節(jié)pH值，凍干，制成凍干粉針 劑。
[0033] 本發(fā)明還提供了上述卡非佐米前藥的制備方法，包括：
[0034] 4)將心亮氨酸進(jìn)行氨基保護(hù)；
[0035] B)將氨基保護(hù)的心亮氨酸與聚乙二醇反應(yīng)，然后脫保護(hù)，得到心亮氨酸聚乙二醇 化合物；
[0036] C)將步驟B)得到的k亮氨酸聚乙二醇化合物與卡非佐米，在四氯化鐵存在的條件 下，進(jìn)行反應(yīng)，得到式(I)所示卡非佐米前藥。
[0037] 女而田欠純巾n了.
[0038；
[0039] 首先采用二碳酸二叔下醋(80〇對(duì)心亮氨酸的氨基進(jìn)行保護(hù)。
[0040] 具體的，將レ亮氨酸溶于1,4-二氧六環(huán)中，冰浴中加入氨氧化鋼飽和水溶液，攬 拌，所述攬拌時(shí)間優(yōu)選為20~40min;然后滴加 BOC進(jìn)行反應(yīng)。所述1,4-二氧六環(huán)為k亮氨酸 的溶解量即可，優(yōu)選的，所述心亮氨酸與1,4-二氧六環(huán)的質(zhì)量比為1: (3~7);所述k亮氨酸 與氨氧化鋼的摩爾比優(yōu)選為1: (1.5~3);所述心亮氨酸與BOC的摩爾比為1: (1~2)。
[0041] 反應(yīng)結(jié)束后，優(yōu)選的，將反應(yīng)體系進(jìn)行濃縮，然后加水稀釋，然后用IMol/LHCl水溶 液將體系抑調(diào)節(jié)至3,體系析出固體，采用丙酬與水的混合溶劑進(jìn)行重結(jié)晶，得到氨基保護(hù) 的心亮氨酸。
[0042] 然后將上述氨基保護(hù)的レ亮氨酸與二環(huán)己基碳二亞胺（DCC)、4-二甲氨基化晚 (DMAP)在冰浴中進(jìn)行反應(yīng)，然后與聚乙二醇(PEG)在室溫下進(jìn)行反應(yīng)。
[0043] 具體的，將氨基保護(hù)的心亮氨酸溶解于二氯甲燒(DCM)中，冰浴條件下，加入二環(huán) 己基碳二亞胺、4-二甲氨基化晚進(jìn)行反應(yīng)，所述反應(yīng)的時(shí)間優(yōu)選為0.5~化;所述二氯甲燒 為氨基保護(hù)的k亮氨酸的溶解量即可，優(yōu)選的，所述氨基保護(hù)的心亮氨酸與二氯甲燒的質(zhì) 量比為1: (2~3);所述氨基保護(hù)的心亮氨酸與二環(huán)己基碳二亞胺、4-二甲氨基化晚的摩爾 比為 1:(1 ~1.5):(1 ~1.5)。
[0044] 然后向反應(yīng)體系中加入聚乙二醇，升溫至室溫進(jìn)行反應(yīng)，所述反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選為5~ 15h;所述氨基保護(hù)的心亮氨酸與聚乙二醇的質(zhì)量比優(yōu)選為1: (2~3);優(yōu)選的，所述聚乙二 醇為聚乙二醇400。
[0045] 反應(yīng)結(jié)束后，優(yōu)選的，反應(yīng)體系中加入二氯甲燒，水洗，濃縮干燥，柱層析提純，得 到N-BOCA-亮氨酸聚乙二醇。
[0046] 聚乙二醇與氨基保護(hù)的心亮氨酸反應(yīng)后，進(jìn)行脫保護(hù)。
[0047] 具體的，將上述反應(yīng)得到的N-BOC-k亮氨酸聚乙二醇溶解于二氯甲燒中，冰浴下 滴加 S氣乙酸(TFA)，反應(yīng)后體系濃縮除去S氣乙酸，再次加入二氯甲燒，滴加甲基叔下基 酸(MTBE)，抽濾得到心亮氨酸聚乙二醇化合物。
[004引所述S氣乙酸質(zhì)量為上述N-B0C-レ亮氨酸聚乙二醇質(zhì)量的4~5倍。再次加入二氯 甲燒的量為N-B0C-レ亮氨酸聚乙二醇質(zhì)量的50%~80%;所述甲基叔下基酸的質(zhì)量為N- BOCA-亮氨酸聚乙二醇的1~2倍。
[0049] 然后將k亮氨酸聚乙二醇化合物與卡非佐米，在四氯化鐵存在的條件下，進(jìn)行反 應(yīng)，得到式(I)所示卡非佐米前藥。
[0050] 所述卡非佐米與^亮氨酸聚乙二醇化合物、四氯化鐵的摩爾比優(yōu)選為1:(1~ 1.1):(1 ~1.1)。
[0051] 所述反應(yīng)的溶劑優(yōu)選為甲醇，所述反應(yīng)優(yōu)選為回流反應(yīng)，所述反應(yīng)的時(shí)間優(yōu)選為6 ~IOho
[0052] 反應(yīng)結(jié)束后，優(yōu)選的，對(duì)體系進(jìn)行濃縮，加入丙締酸乙醋化A)，水洗，然后碳酸氨鋼 溶液洗涂，干燥濃縮得到粗品。
[0053] 優(yōu)選的，采用異丙醇、水的混合溶劑進(jìn)行重結(jié)晶，得到卡非佐米前藥純品。
[0054] 經(jīng)檢測(cè)，本申請(qǐng)制備的卡非佐米前藥具有優(yōu)良的穩(wěn)定性、水溶性，且純度較高。
[0055] 本發(fā)明利用心亮氨酸將PEG部分和卡非佐米分子相連，而卡非佐米分子中也含有 心亮氨酸結(jié)構(gòu)單元，從而減少代謝產(chǎn)物的生成，從一定程度上保證藥品的安全性。
[0056] 同時(shí)應(yīng)用亞胺鍵將PEG部分和卡非佐米分子相連，利用亞胺在酸堿性環(huán)境中的穩(wěn) 定性的差別實(shí)現(xiàn)祀向給藥。
[0057] 為了進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明提供的卡非佐米前藥及其制備 方法進(jìn)行詳細(xì)描述。
[0化引實(shí)施例1
[0059] 將100g k亮氨酸加入到500g 1,4-二氧六環(huán)中，冰浴加入氨氧化鋼（2eq)飽和水 溶液，攬拌30min，滴力郵OC2〇( 1.5eq)，監(jiān)測(cè)原料反應(yīng)完，濃縮，濃縮后加水稀釋，IM肥1調(diào)PH =3,析出固體，丙酬加水重結(jié)晶，得到產(chǎn)品氨基保護(hù)的心亮氨酸(一水合物)770.Og,收率 81%，純度 99.2%。
[0060] 將氨基保護(hù)的k亮氨酸200g加入到反應(yīng)瓶中，加入500g DCM溶解，冰浴反應(yīng)，加入 DCC( 1.2eq)，DMAP( 1.2eq)，攬拌比，加入陽(yáng)G400500g，自然升至室溫反應(yīng)IOh，反應(yīng)結(jié)束補(bǔ)加 DCM SOOg，水洗，干燥濃縮，柱層析得到油狀物350g。
[0061 ] 然后將油狀物350g加入至反應(yīng)瓶，加入DCM 500g攬拌溶清，冰浴滴加 TFA 1500g， 反應(yīng)完濃縮，濃縮得到油狀物補(bǔ)加 DCM 200g，滴加 MT肥約500g，析出大量白色固體，抽濾， MTBE淋洗，干燥得產(chǎn)品心亮氨酸聚乙二醇化合物212g。
[0062] 將卡非佐米原料藥100g加入至反應(yīng)瓶，加入甲醇500g，溶清，加入k亮氨酸聚乙二 醇化合物54.9g，加入四氯化鐵（Ieq)，回流反應(yīng)化，濃縮，加入EA 1000 g，水洗，碳酸氨鋼飽 和溶液洗，干燥濃縮得粗品，異丙醇加水重結(jié)晶得產(chǎn)品卡非佐米前藥81.3g，收率60%，純度 99%。
[0063] 通過(guò)核磁共振對(duì)產(chǎn)物結(jié)構(gòu)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)圖1，圖1是本申請(qǐng)實(shí)施例1的核磁訊普 圖。
[0064] 對(duì)制備的卡非佐米前藥穩(wěn)定性進(jìn)行測(cè)試，將樣品在相對(duì)濕度75%、溫度4(TC條件 下放置，用HPLC測(cè)定純度，結(jié)果見(jiàn)表1，表1是本申請(qǐng)實(shí)施例1制備的卡非佐米前藥的穩(wěn)定性 數(shù)據(jù)匯總。
[0065] 表1本申請(qǐng)實(shí)施例1制備的卡非佐米前藥的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)匯總
[0066]
[0067]由表1可W看出，本發(fā)明制備的卡非佐米前藥具有優(yōu)良的穩(wěn)定性。
[006引實(shí)施例2
[0069] 溶解性測(cè)定
[0070] 分別將卡非佐米與實(shí)施例1制備的卡非佐米前藥溶解于水中，制備過(guò)飽和溶液，用 HPLC檢測(cè)器溶解度，結(jié)果如表2所示，表2是本申請(qǐng)實(shí)施例1制備的卡非佐米前藥與卡非佐米 水溶性對(duì)比。
[0071] 表2本申請(qǐng)實(shí)施例1制備的卡非佐米前藥與卡非佐米水溶性對(duì)比

[0073] 由表2可W看出，本發(fā)明制備的卡非佐米前藥在水中的溶解度顯著增加。
[0074] 實(shí)施例3
[0075] 將實(shí)施例1制備的卡非佐米前藥，溶于水中，用一水巧樣酸溶液調(diào)節(jié)抑至3.5,裝入 3ml小瓶，置于凍干機(jī)中，在-45°C預(yù)凍6小時(shí)W上，初次干燥溫度為-20°C維持10小時(shí)，并逐 漸升溫至-15 °C維持2小時(shí)，-10°C維持2小時(shí)，(TC維持2小時(shí);第二次干燥溫度為20°C維持2 小時(shí)。將凍干小瓶加塞緊，加蓋，制備得到卡非佐米前藥凍干粉針劑。
[0076] 上述凍干過(guò)程的凍干曲線見(jiàn)附圖2W及表3,表3是上述凍干過(guò)程的過(guò)程參數(shù)。
[0077] 表3凍干曲線具體參數(shù) 「007?!
[0079] 比較例1
[0080] 在控制為2~8°C的500ml燒杯中，將50.1 g橫下基-0-環(huán)糊精（S邸CD)溶解于160ml 水中。然后，加入l.〇〇〇5g卡非佐米原料藥，使用高效乳化剪切機(jī)實(shí)施混合W維持原料藥固 體的懸浮并溶解SBECD。開(kāi)動(dòng)高剪切混合器大約1個(gè)小時(shí)，產(chǎn)生均勻的混懸液并減小任何較 大的初級(jí)粒子或聚結(jié)的原料藥的粒度。獲得混懸液后，將〇.5341mg的一水巧樣酸作為16% 的水溶液加入。用葉輪和高剪切混合器二者繼續(xù)再混合24小時(shí)，用0.45微米和0.22微米過(guò) 濾器過(guò)濾，用0.5M的氨氧化鋼溶液調(diào)節(jié)抑至3.5。再按上述凍干工藝進(jìn)行凍干，得到橫下基- 0-環(huán)糊精包合卡非佐米凍干制劑。
[0081 ] 實(shí)施例4
[0082] 分別將實(shí)施例3和比較例1制備的卡非佐米凍干制劑進(jìn)行了HPLC檢測(cè)，檢測(cè)條件如 下：
[0083] 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（150mm X 4.6mm，5um)，W抑3.5的0.1 M的化Cl〇4為流動(dòng)相A，W乙臘為流動(dòng)相B，洗脫梯度程序見(jiàn)下表 4;流速為Iml/min;檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm。理論板數(shù)按卡非佐米峰計(jì)算應(yīng)不低于3000,分離度符 合要求。
[0084] 表4實(shí)施例4 HPLC洗脫梯度程序
[0085]
[0086] ~具體過(guò)程為：取樣品適量4青密稱定，力化H3.5的0.1 M的化化04-乙臘(50:50)超聲' 使溶解，并稀釋制成每1ml中約含Img的溶液，精密量取IOiil注入液相色譜儀，記錄色譜圖。
[0087] 所得色譜圖如圖3、圖4所示。其中圖3為實(shí)施例3制備的卡非佐米凍干制劑色譜圖， 圖4為比較例I制備的卡非佐米凍干制劑色譜圖；可W看出，本發(fā)明制備的卡非佐米凍干制 劑雜質(zhì)數(shù)量明顯減少，產(chǎn)品純度提高。
[0088] 由上述實(shí)施例及比較例可知，本發(fā)明制備的卡非佐米前藥具有良好的水溶性W及 穩(wěn)定性，并且純度較高。
[0089] W上實(shí)施例的說(shuō)明只是用于幫助理解本發(fā)明的方法及其核屯、思想。應(yīng)當(dāng)指出，對(duì) 于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可W對(duì)本發(fā)明進(jìn)行 若干改進(jìn)和修飾，運(yùn)些改進(jìn)和修飾也落入本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種卡非佐米前藥，具有式(I)所示結(jié)構(gòu)：η為3~20的整數(shù)。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的卡非佐米前藥，其特征在于，η為10~15的整數(shù)。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的卡非佐米前藥，其特征在于，η為12。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的卡非佐米前藥，其特征在于，為凍干粉針劑。5. 權(quán)利要求1所述的卡非佐米前藥的制備方法，包括： A) 將L-亮氨酸進(jìn)行氨基保護(hù)； B) 將氨基保護(hù)的L-亮氨酸與聚乙二醇反應(yīng)，然后脫保護(hù)，得到L-亮氨酸聚乙二醇化合 物； C) 將步驟B)得到的L-亮氨酸聚乙二醇化合物與卡非佐米，在四氯化鈦存在的條件下， 進(jìn)行反應(yīng)，得到式(I)所示卡非佐米前藥；η為3~20的整數(shù)。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的卡非佐米前藥的制備方法，其特征在于，所述氨基保護(hù)的L-亮 氨酸與聚乙二醇的質(zhì)量比為1: (2~3)。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的卡非佐米前藥的制備方法，其特征在于，所述步驟Β)具體為： 將氨基保護(hù)的L-亮氨酸與二環(huán)己基碳二亞胺、4-二甲氨基吡啶在冰浴中進(jìn)行反應(yīng)，然 后與聚乙二醇在室溫下進(jìn)行反應(yīng)。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的卡非佐米前藥的制備方法，其特征在于，所述氨基保護(hù)的L-亮 氨酸與二環(huán)己基碳二亞胺、4-二甲氨基吡啶的摩爾比為1: (1~1.5): (1~1.5)。9. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的卡非佐米前藥的制備方法，其特征在于，所述聚乙二醇為聚乙 二醇 400。10. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的卡非佐米前藥的制備方法，其特征在于，所述卡非佐米與L-亮氨酸聚乙二醇化合物、四氯化鈦的摩爾比為1: (1~1.1): (1~1.1)。
【文檔編號(hào)】C07K7/06GK105924500SQ201510957692
【公開(kāi)日】2016年9月7日
【申請(qǐng)日】2015年12月18日
【發(fā)明人】黃祥, 黃詩(shī)貴, 余灝, 賀耘
【申請(qǐng)人】重慶兩江藥物研發(fā)中心有限公司