別嘌醇的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了別嘌醇的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用，本發(fā)明提供的別嘌醇的藥物組合物中含有別嘌醇和一種從浙貝母的干燥鱗莖中分離得到的結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物化合物(Ⅰ)，別嘌醇與化合物(Ⅰ)組合物可以顯著降低膿毒血癥引發(fā)的肺損傷，且效果優(yōu)于別嘌醇或化合物(Ⅰ)單獨(dú)作用的結(jié)果，可以開發(fā)成治療急性肺損傷的藥物，與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步。
【專利說(shuō)明】
別嘌醇的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及別嘌醇的新用途，具體涉及別嘌醇的藥物組合物 及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 別嘌醇是結(jié)構(gòu)上環(huán)繞于黃嘌呤的化合物(在嘌呤環(huán)上第七位是C，第八位是N)，對(duì) 黃嘌呤氧化酶有很強(qiáng)的抑制作用，常用來(lái)治療痛風(fēng)。
[0003] 別嘌醇及其代謝產(chǎn)物氧嘌呤醇通過(guò)抑制黃嘌呤氧化酶的活性(后者能使次黃嘌呤 轉(zhuǎn)為黃嘌呤，再使黃嘌呤轉(zhuǎn)變成尿酸），使尿酸生成減少，血中及尿中的尿酸含量降低到溶 解度以下的水平，從而防止尿酸結(jié)石的沉積，有助于痛風(fēng)結(jié)節(jié)及尿酸結(jié)晶的重新溶解。別嘌 醇主要在痛風(fēng)發(fā)作間期和慢性期使用，適用于尿酸生成過(guò)多、對(duì)排尿酸藥過(guò)敏或無(wú)效，以及 不宜使用排尿酸藥物(如有腎功能不全）的原發(fā)性和繼發(fā)性痛風(fēng)病人，以控制高尿酸血癥。 本藥也可與排尿酸藥合用，以加強(qiáng)療效，特別適用于痛風(fēng)石嚴(yán)重而腎功能尚好的病人。
[0004] 急性肺損傷(ALI)的發(fā)病機(jī)制至今尚未完全闡明。研究發(fā)現(xiàn)失控的炎癥反應(yīng)在ALI 的發(fā)病過(guò)程中起到重要的作用?？股睾椭С质侄芜M(jìn)步并未降低患者的死亡率，因此迫切 需要新的藥物進(jìn)行干預(yù)。ALI是全身炎癥反應(yīng)綜合征在肺部的表現(xiàn)，肺內(nèi)炎性反應(yīng)與抗炎反 應(yīng)的失衡是引起ALI/ARDS的根本原因。
[0005] 迄今為止，尚未見別嘌醇及其藥物組合物與急性肺損傷的相關(guān)性報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種別嘌醇的藥物組合物，該藥物組合物中含有別嘌醇和 一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，別嘌醇和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同治療急性肺損傷。
[0007] 本發(fā)明的上述目的是通過(guò)下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0008] 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0010] -種別嘌醇的藥物組合物，包括別嘌醇、如權(quán)利要求1所述的化合物（I)和藥學(xué)上 可以接受的載體，制備成需要的劑型。
[0011] 進(jìn)一步地，藥學(xué)上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、 崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體或潤(rùn)滑劑。
[0012] 進(jìn)一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0013] 上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將浙貝母的干燥鱗莖粉碎，用 85~95 %乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無(wú)醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和 的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正 丁醇取物用大孔樹脂除雜，先用35 %乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用90 %乙醇洗脫12個(gè)柱體積， 收集90%洗脫液，減壓濃縮得90%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中90%乙醇洗脫濃縮物用 正相硅膠分離，依次用體積比為120:1、60:1、30:1和15:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4 個(gè)組分；（d)步驟(c)中組分3用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為40:1、30:1和10:1的 二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅 膠分離，用體積百分濃度為85 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集14~18個(gè)柱體積洗脫液，洗脫 液減壓濃縮得到化合物(I)。
[0014] 進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)用90%乙醇熱回流提取，合并提取 液。
[0015] 進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹脂為D101型大孔吸附樹脂。
[0016]進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進(jìn)行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0017] 上述化合物(I)在制備治療急性肺損傷的藥物中的應(yīng)用。
[0018] 上述別嘌醇的藥物組合物在制備治療急性肺損傷的藥物中的應(yīng)用。
[0019] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn):本發(fā)明提供的別嘌醇的藥物組合物中含有別嘌醇和一種從浙貝母 的干燥鱗莖中分離得到的結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，別嘌醇和該天然產(chǎn)物單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)急性 肺損傷具有治療作用;二者聯(lián)合作用時(shí)，對(duì)急性肺損傷的治療效果進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成 治療急性肺損傷的藥物。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。
[0021 ]實(shí)施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0022]分離方法：（a)將浙貝母的干燥鱗莖（2kg)粉碎，用90 %乙醇熱回流提取（15L X 3 次），合并提取液，濃縮至無(wú)醇味(3L)，依次用石油醚(3LX3次）、乙酸乙酯(3LX3次)和水飽 和的正丁醇(3LX3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b) 步驟(a)中乙酸乙酯萃取物用D101型大孔樹脂除雜，先用35%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用 90%乙醇洗脫12個(gè)柱體積，收集90%洗脫液，減壓濃縮得90%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b) 中90%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為120:1 (11個(gè)柱體積）、60:1 (9個(gè)柱 體積）、30:1(9個(gè)柱體積)和15:1(8個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d) 步驟(c)中組分3用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為40:1(6個(gè)柱體積）、30:1(8個(gè)柱體 積)和10:1(6個(gè)柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十 八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為85 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集14 ~18個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物（I) (373mg，HPLC歸一化純度大于98% )。 [0023] 結(jié)構(gòu)確證：白色粉末;HR-ESI-MS顯示[M+Na]+為m/z 411.1914，結(jié)合核磁特征可得 分子式為C2iH28N2〇 5，不飽和度為9。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δΗ(ΡΡπι，DMS〇-d6，600MHz): H-2 (3 · 61， m)，H-3(2.91，m，2H)，H-5(2.52，m，2H)，H-6(2.88，m)，H-6(3.46，m)，H-7(2.48，m)，H-9 (7.40，d，J = 7.6)，H-10(6.92，t，J = 7.6)，H-ll(7.01，t，J = 7.6)，H-12(7.25，d，J = 7.6)， H-14(3.51，t，J = 4.6)，H-15(3.35，d，J = 4.6)，H-17(2.44，d，J=12.7)，H-17(2.75，d，J = 12.7)，H-18(0.98，t，J = 7.5)，H-19(1.58，m)，H-19(1.67，m)，H-21(3.94，s)，16-⑶ 2Me (3.73，s)，NH(10.03，br，s);核磁共振碳譜數(shù)據(jù) δ。(ppm，DMS〇-d6，150MHz): 136 · 4 (CH，2-C)， 52.6(CH2,3-C)，52.4(CH2,5-C)，27.5(CH2,6-C)，109.3(CH，7-C)，128.6(C，8-C)，118.1(CH， 9-C)，119.4(CH，10-C)，121.7(CH，11-C)，119.6(CH，12-C)，137.4(C，13-C)，72.7(CH，14-C)，67.9(CH，15-C)，86.7(C，16-C)，43.3(CH2，17-C)，8.2(CH 3，18-C)，27.6(CH2，19-C)，51.1 (C，20-C)，101.1 (CH，21-C)，173.2(C，16-C02Me)，53.1 (CH3，16-C〇2Me)<JR 光譜表明該化合 物含有胺基，羥基（3382cm-〇和酯羰基（匪R譜顯示四個(gè)芳族共振信號(hào)（δ 冊(cè).92,7.〇1，7.25,7.4〇)，一個(gè)吲哚順0!11〇.〇3)，一個(gè)酯甲基0!13.73)，兩個(gè)含氧次甲基信 號(hào)0H3.35，d，J = 4.6Hz和3.51，^ = 4.6抱），一個(gè)含氧含氮質(zhì)子信號(hào)〇!13.94,8)，以及一 個(gè)乙基側(cè)鏈(SH0.98,1.58和1.67)。 13(：-匪1?譜顯示了21個(gè)碳信號(hào)，包括兩個(gè)甲基，五個(gè)亞甲 基，九個(gè)次甲基，以及五個(gè)季碳。HMBC譜中，H-140H3.51，t，J = 4.6Hz)與C-3(SC52.6)和C-5 0〇52.4)，以及!1-193(3!11.58，111)與(：-15(3〇67.9)、(：-17(3〇43.3)、(：-2〇(3〇51.1)和(：-21(3 C101.1)的交叉峰表明C-14和C-15各連有一個(gè)羥基。HMBC譜中，Η 2-17(δΗ2.44和2.75)與C-2 0(：136.4)，(：-160〇86.7)和甲基酯的碳0(：173.2)的相關(guān)性表明甲基酯基位于(：-16位。 ROESY譜中，Η-21與H-19a，以及Η-15與Me-18的交叉峰表明Η-15、Η-21和C-20位的乙基為α構(gòu) 型。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和ROESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化 合物如下所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過(guò)ECD試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致。該化合物化 學(xué)式及碳原子編號(hào)如下：
[0025] 實(shí)施例2:藥理作用 [0026] 1、材料與方法
[0027] 1.1動(dòng)物
[0028]選用健康雄性清潔級(jí)SD大鼠，體重320-370g(由南京軍區(qū)總醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提 供）。動(dòng)物飼養(yǎng)在溫度(22 ± 1) °C、相對(duì)濕度55 %~65 %、12h光照周期的通風(fēng)干燥環(huán)境中，采 用大小鼠維持料1022飼養(yǎng)。
[0029] 1.2試劑與樣品
[0030] 別嘌醇購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所?；衔铮↖)自制，制備方法見實(shí)施例1。大鼠 腫瘤壞死因子-a(TNF-a)、白細(xì)胞介素-6(IL_6)、白細(xì)胞介素-IO(IL-IO)，酶聯(lián)免疫吸附法 (ELISA)檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)Biosource International公司；大鼠 HMGB1 ELISA檢測(cè)試劑 盒購(gòu)自日本Shino-Test公司產(chǎn)品。HMGB1即高迀移率族蛋白1。
[0031] 1.3大鼠分組及模型制備
[0032]采用盲腸結(jié)扎穿孔法(CLP)建立膿毒血癥模型，術(shù)前禁食12h，以烏拉坦（1250mg/ kg)腹腔注射劑量麻醉，沿腹正中線做一 2cm長(zhǎng)的切口，進(jìn)腹找到盲腸，以4-0絲線環(huán)形結(jié)扎 盲腸根部，以18G針頭在游離端對(duì)穿1次后擠出糞便少許，送回腹腔，隨后依次縫合腹膜和皮 膚。Sham組僅做剖腹、分離盲腸遠(yuǎn)端、關(guān)腹手術(shù)。術(shù)后立即皮下注射生理鹽水lmL補(bǔ)充術(shù)中液 體丟失。大鼠隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為假手術(shù)組(Sham組）、模型對(duì)照組(CLP組）、別嘌 醇組(40mg · kg-Ο、化合物（I)組(40mg · kg-Ο、別噪醇與化合物（I)組合物組【20mg · kg-1另lj 嘌醇+20mg · kg<化合物（I)】。CLP+藥物組于CLP后即時(shí)及6h后腹腔分別注射藥物;Sham組于 假手術(shù)后即時(shí)及6h后、CLP組于CLP后0及6h腹腔分別注射生理鹽水lmL。
[0033] 1.4檢測(cè)指標(biāo)及方法
[0034] 各組動(dòng)物均于CLP后24h取股靜脈血2mL，離心10min后取血清-80°C保存。采用 ELISA法檢測(cè)血清中TNF-a、HMGBl及IL-10的水平。此外，CLP 24h后檢測(cè)肺組織干濕重比(W/ D)、髓過(guò)氧化物酶活性(MPO)。
[0035] 1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
[0036] 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(X 土 s)表示，多 組間比較采用單因素方差分析，P〈〇.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0037] 2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0038] 2.1對(duì)膿毒血癥大鼠 TNF_a、HMGBl及IL-10水平的影響
[0039] 與Sham組比較，CLP明顯增加血漿TNF-a、HMGBl及IL-10水平。CLP+藥物組CLP后24h 時(shí)的TNF-a和HMGB1水平低于CLP組；與模型對(duì)照組比較，別嘌醇與化合物（I)組合物組血漿 TNF-a、HMGB1及IL-10水平明顯降低(P<0.01);與模型對(duì)照組比較，別嘌醇組、化合物⑴組 血漿TNF-a、HMGBl及IL-10水平降低(Ρ<0·05)。結(jié)果見下表。
[0040] 2.2對(duì)膿毒血癥大鼠肺組織W/D及ΜΡΟ活性的影響
[0041 ] 與Sham組比較，CLP明顯增加肺組織W/D及ΜΡΟ活性，（Ρ〈0.05);而CLP+藥物組肺組 織W/D及ΜΡΟ活性低于CLP組。與模型對(duì)照組比較，別嘌醇與化合物（I)組合物組肺組織W/D及 MPO活性明顯降低(P<0.01);與模型對(duì)照組比較，別噪醇組、化合物⑴組肺組織W/D及MPO 活性降低(P<〇.05)。結(jié)果見下表。
[0042]
[0043] 上述結(jié)果表明，別嘌醇與化合物（I)組合物可以顯著降低膿毒血癥引發(fā)的肺損傷， 且效果優(yōu)于別嘌醇或化合物(I)單獨(dú)作用的結(jié)果，可以開發(fā)成治療急性肺損傷的藥物。
[0044]上述實(shí)施例的作用在于說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù) 范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，2. -種別嘌醇的藥物組合物，其特征在于:包括別嘌醇、如權(quán)利要求1所述的化合物（I) 和藥學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的別嘌醇的藥物組合物，其特征在于:藥學(xué)上可以接受的載體包 括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體或 潤(rùn)滑劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的別嘌醇的藥物組合物，其特征在于:所述劑型包括片劑、膠囊 劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓 劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含以下操作步驟：（a)將浙 貝母的干燥鱗莖粉碎，用85~95%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無(wú)醇味，依次用石 油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇 萃取物；（b)步驟（a)中正丁醇取物用大孔樹脂除雜，先用35%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用 90%乙醇洗脫12個(gè)柱體積，收集90%洗脫液，減壓濃縮得90%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b) 中90 %乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為120:1、60:1、30:1和15:1的二氯 甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d)步驟(c)中組分3用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積 比為40:1、30:1和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得至丨」3個(gè)組分；（e)步驟⑷中組分2用十八 烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為85 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集14~ 18個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)用90%乙醇熱回 流提取，合并提取液。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為DlOl型 大孔吸附樹脂。8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯進(jìn)行萃取，得到二氯甲烷萃取物。9. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)在制備治療急性肺損傷的藥物中的應(yīng)用。10. 權(quán)利要求2~4任一所述的別嘌醇的藥物組合物在制備治療急性肺損傷的藥物中的 應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61K31/519GK105884796SQ201610264077
【公開日】2016年8月24日
【申請(qǐng)日】2016年4月23日
【發(fā)明人】徐挺
【申請(qǐng)人】徐挺