一種醋酸丙氨瑞林的藥物組合物及其醫(yī)藥用圖
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種醋酸丙氨瑞林的藥物組合物及其醫(yī)藥用途，本發(fā)明提供的醋酸丙氨瑞林的藥物組合物中含有醋酸丙氨瑞林和一種從射干的干燥根莖中分離得到的結構新穎的天然產物化合物(Ⅰ)，醋酸丙氨瑞林、化合物(Ⅰ)單獨作用時，可以降低肝損傷動物血清轉氨酶、膽紅素及尿素氮含量，減輕黃疽及腎功能障礙，并可降低血漿內毒素含量；醋酸丙氨瑞林和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時，藥理作用更明顯，可以開發(fā)成治療急性肝功能衰竭的藥物，與現(xiàn)有技術相比具有突出的實質性特點和顯著的進步。
【專利說明】
一種醋酸丙氨瑞林的藥物組合物及其醫(yī)藥用途
技術領域
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領域，涉及醋酸丙氨瑞林的新用途，具體涉及醋酸丙氨瑞林 的藥物組合物及其在急性肝功能衰竭中的應用。
【背景技術】
[0002] 醋酸丙氨瑞林為人工合成的促性腺激素釋放激素(GnRH)的九肽類似物，用藥初期 可刺激垂體釋放促黃體生成素(LH)和促卵泡素(FSH)，引起卵巢源性留體激素短暫升高;重 復用藥可抑制垂體釋放LH和FSH，使血中的雌二醇水平下降，達到藥物去卵巢的作用，這種 抑制作用可用于治療子宮內膜異位癥等激素依賴性疾病。
[0003] 肝炎防治藥物目前品種繁多，但尚乏對急性肝功能衰竭的有效防治藥物。
[0004] 迄今為止，尚未見醋酸丙氨瑞林及其藥物組合物與急性肝功能衰竭的相關性報 道。

【發(fā)明內容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種醋酸丙氨瑞林的藥物組合物，該藥物組合物中含有醋 酸丙氨瑞林和一種結構新穎的天然產物，醋酸丙氨瑞林和該天然產物可以協(xié)同治療急性肝 功能衰竭。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現(xiàn)的：
[0007] 一種具有下述結構式的化合物（I)，
[0008]
[0009] - tTH百EKIAJ安0而外tf」約似J5且甘柳，'既估斷阪卜」安0而林、如權利要求1所述的化合物 (I)和藥學上可以接受的載體，制備成需要的劑型。
[0010] 進一步地，藥學上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、 崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。
[0011] 進一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0012] 上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將射干的干燥根莖粉碎，用75 ~85%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的 正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正丁 醇取物用大孔樹脂除雜，先用25%乙醇洗脫8個柱體積，再用70 %乙醇洗脫12個柱體積，收 集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫濃縮物用正 相硅膠分離，依次用體積比為85:1、45:1、25:1和15:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組 分；⑷步驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為20:1、15:1和1:1的二氯甲 烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離， 用體積百分濃度為72 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集10~16個柱體積洗脫液，洗脫液減壓 濃縮得到化合物(I)。
[0013] 進一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)用80%乙醇熱回流提取，合并提取 液。
[0014] 進一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹脂為D101型大孔吸附樹脂。
[0015]進一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0016] 上述化合物(I)在制備治療急性肝功能衰竭的藥物中的應用。
[0017] 上述醋酸丙氨瑞林的藥物組合物在制備治療急性肝功能衰竭的藥物中的應用。
[0018] 本發(fā)明的優(yōu)點：
[0019] 本發(fā)明提供的醋酸丙氨瑞林的藥物組合物中含有醋酸丙氨瑞林和一種從射干的 干燥根莖中分離得到的結構新穎的天然產物，醋酸丙氨瑞林和該天然產物單獨作用時，對 急性肝功能衰竭具有治療作用；二者聯(lián)合作用時，對急性肝功能衰竭的治療效果進一步提 高，可以開發(fā)成治療急性肝功能衰竭的藥物。本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比具有突出的實質性特 點和顯著的進步。
【具體實施方式】
[0020] 下面結合實施例進一步說明本發(fā)明的實質性內容，但并不以此限定本發(fā)明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發(fā)明作了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可以對 本發(fā)明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術方案的實質和范圍。
[0021 ]實施例1:化合物(I)分離制備及結構確證
[0022]分離方法：（a)將射干的干燥根莖(2kg)粉碎，用80%乙醇熱回流提取（15L X 3次）， 合并提取液，濃縮至無醇味(3L)，依次用石油醚(3LX3次）、乙酸乙酯(3LX3次)和水飽和的 正丁醇(3LX3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟 (a)中乙酸乙酯萃取物用D101型大孔樹脂除雜，先用25%乙醇洗脫8個柱體積，再用70%乙 醇洗脫12個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70% 乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為85:1 (10個柱體積）、45:1 (8個柱體積）、 25:1(10個柱體積）和15:1(8個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟 (c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為20:1(10個柱體積）、15:1(8個柱體積） 和1:1(6個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷 基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為72%的甲醇水溶液等度洗脫，收集10~16 個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物（I) (320mg，HPLC歸一化純度大于98% )。 [0023] 結構確證:黃色粉末;HR-ESI-MS顯示[M+Na]+為m/z 264.1014,結合核磁特征可得 分子式為Ci5H15N〇2，不飽和度為9。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δΗ( ΡΡπι，DMS〇-d6，600MHz): H-3 (3.31， m)，H-4(5.65，d，J = 0.96)，H-7(1.26，s)，H-8(2.14，d，J = 0.96)，H-9(8.15，d，J=12.8)，H- 10(12.02，d，J=12.8)，H-2'，6'（7.31，d，J = 8.7)，H-3'，5'（7.38，dd，J = 8.7,7.4)，H-4， (7.08，^ = 7.4);核磁共振碳譜數(shù)據(jù)6。(卯!!1，0130-(16，15010^):192.7((：，1-〇,76.3((：，2- C)，60.6(CH，3-C)，122.8(CH，4-C)，133.7(C，5-C)，121.3(C，6-C)，16.8(CH 3,7-C)，21.7 (CH3,8-C)，145.1(CH，9-C)，138.6(C，Γ-C)，117.2(CH，2'，6'-C)，129.1(CH，3'，5'-C)， 124.3(CH，4'-C)。11?光譜表明該化合物含有羰基（1687cm-3和胺基（3254cm-4功能團。1H- NMR 譜顯示兩個甲基0!11.26,8，!13-7)和0!12.14，(1，了 = 〇.96泡，!13-8)，一個含氧次甲基（3 !13.31，111，!1-3)，兩個烯屬次甲基[(3!15.65，(1，了 = 0.96抱，!1-4)和（3!18.15，(1，了=12.8!^，!1- 9)]，以及五個芳族質子〇!17.31，(1，了 = 8.7泡，!1-2'，6'；7.38，(1(1，了 = 8.7,7.4泡，!1-3'，5'；7.08，t，J = 7.4Hz，H-4'）。芳香質子的低場化學位移及其耦合常數(shù)表明該化合物含有仲烯 胺〇!112.02，(1，1=12.8他，!1-10)。13(：-匪1?譜顯示15個碳信號，包括兩個甲基，八個次甲基 (一個含氧次甲基，七個烯屬次甲基），五個季碳(一個含氧季碳，一個酮羰基，三個烯烴季 碳）。上述核磁數(shù)據(jù)，再結合不飽和數(shù)，表明該化合物為兩環(huán)結構。1H-1!! COSY譜顯示了三個 主要的結構片段:單取代的苯基環(huán)，稀胺系統(tǒng)（=CH-NH_)和下部結構[C(CH3)=CHLHMBC譜 中，含氧次甲基質子信號（3113.31，1]1，1!〇與兩個含氧碳信號（5〇76.3和60.6)化學位移表明 該化合物含有一個環(huán)氧結構，此外甲基質子信號(SH1.26，3H，s)與含氧季碳C-2和含氧次甲 基碳C-3的交叉峰表明C-2位還連有一個甲基。HMBC譜中，烯屬質子H-4(δΗ5.65)與C-2，CH3- 8和C-6的相關性驗證了這部分結構。HMBC譜中，NH-10與芳族碳C-Γ (δα38.6)，C-2 '，6 '（δ C117.2)和季碳C-6(SC121.3)交叉峰表明單取代苯環(huán)和另一環(huán)狀部分由烯胺功能團連接起 來。HMBC譜中H-9與C-l，C-5，C-6和C-Γ的相關性驗證了上述推論。N0ESY譜中，H-9與甲基 Me-8的相關性表明烯胺為Z構型。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和N0ESY譜，以及文獻關于相關類 型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下所示，立體構型進一步通過ECD試驗確定，理論值與 實驗值基本一致。
[0024] 該化合物化學式及碳原子編號如下：
[0025]
[0026] 實施例2:藥理作用 [0027] 1、材料與方法
[0028] 1.1動物
[0029] Wistar大鼠，體重170~200g，雌雄兼用。
[0030] 1.2試劑與樣品
[0031 ]醋酸丙氨瑞林購自中國藥品生物制品檢定所?；衔铮↖)自制，制備方法見實施例 1。半乳糖胺(GalN)購自重慶醫(yī)科大學，堂試劑由廈門市賞試劑廠生產。
[0032] 1.3儀器
[0033]自動氨基酸分析儀（貝克曼公司）
[0034] 1.4大鼠分組及模型制備
[0035] 大鼠隨機分為5組，每組12只，分別為正常對照組、模型對照組、醋酸丙氨瑞林組 (64mg · kg-"、化合物⑴組(64mg · kg-"、醋酸丙氨瑞林與化合物（I)組合物組【32mg · kg-1醋酸丙氨瑞林+32mg · kg<化合物（I)】。實驗開始給藥組動物皮下注射藥物。ql2hX3。次日 下午，除正常對照組外，實驗動物腹腔注射GalN 1800mg/kg，40小時后乙醚麻醉下，腹主動 脈取血，作血漿游離氨基酸分析。
[0036] 1.5測定部分血生化指標
[0037]乙醚麻醉后，腹主動脈取血，測定ALT、血漿膽紅素(T)B及尿素氮(Bun)含量。
[0038] 1.6內毒素含量測定
[0039]乙醚麻醉后，腹主動脈取血，用改良過氯酸法測定內毒素含量。
[0040] 1.7統(tǒng)計學方法
[0041]實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)土標準差(X土s)表示，應用SPSS18.0版統(tǒng)計軟件進行單因素方差 分析和t檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
[0042] 2、實驗結果
[0043] 2.1對急性肝功能衰竭動物血生化影響
[0044]與正常對照組比較，模型對照組動物血漿ALT、TB、Bun含量明顯升高，動物發(fā)生了 急性肝功能不全，出現(xiàn)高膽紅素血癥及腎功能障礙。藥物組動物，ALT、TB及Bun低于模型對 照組;與模型對照組比較，醋酸丙氨瑞林與化合物（I)組合物組動物血漿ALT、TB、Bun含量明 顯降低(P<0.01);與模型對照組比較，醋酸丙氨瑞林組、化合物（I)組動物血漿ALT、TB、Bun 含量降低(P<〇.05)，表明藥物可減輕黃疽及防止肝腎綜合征發(fā)生。見表1。
[0045] 2.2對急性肝功能衰竭動物血漿內毒素含量的影響
[0046]與正常對照組比較，模型對照組動物血漿內毒素含量明顯升高，意味著出現(xiàn)了嚴 重的內毒素血癥，而經藥物治療的動物，血漿內毒素含量下降。與模型對照組比較，醋酸丙 氨瑞林與化合物（I)組合物組血漿內毒素含量明顯下降(p<0.01);與模型對照組比較，醋 酸丙氨瑞林組、化合物(I)組血漿內毒素含量下降(P<〇.05)。結果見表2。
[0047] 2.3對血漿游離氨基酸含量的影響
[0048]與正常對照組比較，模型對照組動物血漿中芳香族氨基酸明顯升高；與模型對照 組比較，醋酸丙氨瑞林與化合物（I)組合物組血漿中芳香族氨基酸明顯下降（P<〇. 01);與 模型對照組比較，醋酸丙氨瑞林組、化合物（I)組血漿中芳香族氨基酸下降(P<〇.05)。表明 藥物可改善肝功能衰竭時血漿氨基酸失衡，防止肝性腦病的發(fā)生。結果見表2。
[0049] 表1對血生化改變的影響
[0050]

[0051] 表2對血漿內毒素含量及對血漿中芳香族氨基酸含量的影響
[0052]
'[0053] 上述結果表明，醋酸丙氨瑞林·!化合物a)單獨￥用時，可以降低k損傷動物血清1轉氨酶、膽紅素及尿素氮含量，減輕黃疽及腎功能障礙，并可降低血漿內毒素含量;醋酸丙 氨瑞林和化合物（I)聯(lián)合作用時，藥理作用更明顯，可以開發(fā)成治療急性肝功能衰竭的藥 物。
[0054]上述實施例的作用在于說明本發(fā)明的實質性內容，但并不以此限定本發(fā)明的保護 范圍。本領域的普通技術人員應當理解，可以對本發(fā)明的技術方案進行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術方案的實質和保護范圍。
【主權項】
1. 一種具有下述結構式的化合物（I)，2. -種醋酸丙氨瑞林的藥物組合物，其特征在于:包括醋酸丙氨瑞林、如權利要求1所 述的化合物(I)和藥學上可W接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據(jù)權利要求2所述的醋酸丙氨瑞林的藥物組合物，其特征在于:藥學上可W接受的 載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附 載體或潤滑劑。4. 根據(jù)權利要求2所述的醋酸丙氨瑞林的藥物組合物，其特征在于：所述劑型包括片 劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注 射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含W下操作步驟：（a)將射 干的干燥根莖粉碎，用75~85 %乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油 酸、乙酸乙醋和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃 取物；（b)步驟(a)中正下醇取物用大孔樹脂除雜，先用25 %乙醇洗脫8個柱體積，再用70 % 乙醇洗脫12個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（C)步驟(b)中 70 %乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為85 :1、45:1、25 :1和15:1的二氯甲 燒-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟(C)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比 為20:1、15:1和1:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八燒 基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為72%的甲醇水溶液等度洗脫，收集10~16 個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據(jù)權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)用80%乙醇熱回 流提取，合并提取液。7. 根據(jù)權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為D101型 大孔吸附樹脂。8. 根據(jù)權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用二氯甲燒代 替乙酸乙醋進行萃取，得到二氯甲燒萃取物。9. 權利要求1所述的化合物（I)在制備治療急性肝功能衰竭的藥物中的應用。10. 權利要求2~4任一所述的醋酸丙氨瑞林的藥物組合物在制備治療急性肝功能衰竭 的藥物中的應用。
【文檔編號】A61K38/08GK105837533SQ201610262113
【公開日】2016年8月10日
【申請日】2016年4月23日
【發(fā)明人】高滿珍
【申請人】高滿珍