一種紫花苜蓿生物活性肽的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物來源生物活性肽的制備領(lǐng)域，尤其是一種紫花苜蓿生物活性肽的 制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 紫花苜蓿系豆科，屬于多年生草本植物，是世界上種植最廣、栽培最早的牧草，具 有產(chǎn)量高、適口性好、營養(yǎng)豐富等特點所以被譽為"牧草之王"，在我國東北、華北、西北等地 區(qū)已經(jīng)普遍種植。紫花苜蓿的氨基酸種類較為齊全且均衡，營養(yǎng)價值較高，是一種優(yōu)良的植 物性蛋白資源。
[0003] 目前，國內(nèi)外對于紫花苜蓿的研究主要集中在育種、種植、篩選及黃酮類化合物、 葉蛋白的提取等方面，現(xiàn)有技術(shù)中對紫花苜蓿生物活性肽的研究很少。其中，張勇等對堿性 蛋白酶水解苜蓿葉蛋白制備寡肽的最佳條件進行了研究，最佳條件下水解度為27.50%，寡 肽的平均肽鏈長度為3.64(中國飼料，2007，18:15-17);在中國發(fā)明專利申請公開說明書 CN104195204A中公開了一種紫花苜蓿多肽的制備方法，采用加熱法獲得紫花苜蓿粗蛋白， 再經(jīng)乙醇浸提脫色脫腥，后用Protamex酶和FlavourzymelOOOL酶酶解紫花苜蓿粗蛋白，最 后經(jīng)噴霧干燥得到紫花苜蓿多肽，多肽含量達70%~75%，所得的肽粉無苦澀感，可直接 服用。但是上述兩種方法均是先從苜蓿草中提取出葉蛋白后再將其酶解進行多肽制備的， 葉蛋白提取率低，能耗大，此兩種方法均存在工藝繁雜、生產(chǎn)成本高的缺點。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種工藝簡便、生產(chǎn)成 本低、成品具有較強抗氧化活性的紫花苜蓿生物活性肽的制備方法。
[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下的技術(shù)方案來實現(xiàn)的。本發(fā)明是一種紫花 苜蓿生物活性肽的制備方法，其特點是，其步驟如下： (1) 原料處理:取紫花苜蓿鮮草或干草，篩選去雜、清洗、瀝干后投入粉碎機粉碎，粉碎 后按料水質(zhì)量比1:9~1:11加水勻漿，得到原料液； (2) 酶解:將上述原料液栗入酶解罐，用氫氧化鈉溶液或鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH，并不斷攪拌， 按加酶量800~1200U/g底物蛋白向上述原料液中加入胰蛋白酶進行酶解，酶解工藝參數(shù)為： 酶解時間3~5 · 5h，酶解溫度45~60 °C，酶解pH 6~7 · 5; (3 )滅酶:酶解結(jié)束后升溫至90 °C以上，保持1 Omin，滅酶，冷卻，對滅酶后的混合物進行 離心處理，得上清液，或?qū)⑺鰷缑负蟮幕旌衔镞^濾，得濾液； (4)真空濃縮:對上述清液或濾液抽入濃縮罐進行濃縮處理，濃縮溫度為50~65°C，濃縮 至最終水分含量在40~60%，即得到紫花苜蓿生物活性肽膏。
[0006] (5)冷凍干燥:對上述紫花苜蓿生物活性肽膏進行冷凍干燥處理，干燥溫度為-60 ~-40°C，干燥至最終水分含量在10%以下，即得到紫花苜蓿生物活性肽粉。
[0007] 本發(fā)明所述的紫花苜蓿生物活性肽的制備方法中，進一步優(yōu)選的技術(shù)方案或者技 術(shù)特征是： 1、在步驟(1)中：勻漿時原料與水的質(zhì)量比為1:10。
[0008] 2、在步驟(2 )中：按加酶量900U/g底物蛋白向上述原料液中加入胰蛋白酶進行酶， 酶解工藝參數(shù)為:酶解時間4h，酶解溫度55 °C，酶解pH 6.5。
[0009] 3、在步驟(4)中：對上述上清液或濾液抽入濃縮罐進行濃縮處理，濃縮溫度為55 °C，濃縮至最終水分含量為50%，即得到紫花苜蓿生物活性肽膏。
[0010] 4、在步驟(5)中：對上述紫花苜蓿生物活性肽膏進行冷凍干燥處理，干燥溫度為-50°C，干燥至最終水分含量為8%，即得到紫花苜蓿生物活性肽粉。
[0011]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明直接用胰蛋白酶對紫花苜蓿進行酶解，肽得率高，水解度 可達到32.56%，肽段分子量主要集中在lOOODa以下，而且制得的紫花苜蓿生物活性肽具有 較強的二苯代苦味肼基自由基(DPPH·)清除能力;在制備過程中省去了提取粗蛋白及脫色 脫腥步驟，不僅簡化了生產(chǎn)工藝，還進一步降低了生產(chǎn)成本，提升了產(chǎn)品的使用效價。本發(fā) 明獲得的紫花苜蓿生物活性肽是植物天然提取物，呈淡綠色，有淡淡的青草香，風味倶佳， 同時具有較強的抗氧化活性，可在食品、保健品、化妝品及飼料加工等領(lǐng)域推廣應(yīng)用，而且 工藝簡便、生產(chǎn)成本低，適合大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。
【附圖說明】
[0012]圖1為抗壞血酸(Vc)對DPPH ·清除能力的測定結(jié)果； 圖2為采用本發(fā)明實施例4所述的方法制備得到的紫花苜蓿生物活性肽粉對DPPH ·清 除能力的測定結(jié)果。
【具體實施方式】
[0013] 以下參照附圖，進一步描述本發(fā)明的具體技術(shù)方案，以便于本領(lǐng)域的技術(shù)人員進 一步地理解本發(fā)明，而不構(gòu)成對其權(quán)利的限制。
[0014] 實施例1，一種紫花苜蓿生物活性肽的制備方法，其步驟如下： (1) 原料處理:取紫花苜蓿鮮草或干草，篩選去雜、清洗、瀝干后投入粉碎機粉碎，粉碎 后按料水質(zhì)量比1:9加水勻漿，得到原料液； (2) 酶解:將上述原料液栗入酶解罐，用氫氧化鈉溶液或鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH，并不斷攪拌， 按加酶量800U/g底物蛋白向上述原料液中加入胰蛋白酶進行酶解，酶解工藝參數(shù)為:酶解 時間3h，酶解溫度45 °C，酶解pH 6; (3 )滅酶:酶解結(jié)束后升溫至90 °C以上，保持1 Omin，滅酶，冷卻，對滅酶后的混合物進行 離心處理，得上清液，或?qū)⑺鰷缑负蟮幕旌衔镞^濾，得濾液； (4)真空濃縮:對上述清液或濾液抽入濃縮罐進行濃縮處理，濃縮溫度為50°C，濃縮至 最終水分含量為40%，即得到紫花苜蓿生物活性肽膏。
[0015] (5)冷凍干燥:對上述紫花苜蓿生物活性肽膏進行冷凍干燥處理，干燥溫度為-60 °C，干燥至最終水分含量為10%，即得到紫花苜蓿生物活性肽粉。
[0016] 實施例2,一種紫花苜蓿生物活性肽的制備方法，其步驟如下： (1)原料處理:取紫花苜蓿鮮草或干草，篩選去雜、清洗、瀝干后投入粉碎機粉碎，粉碎 后按料水質(zhì)量比1:11加水勻漿，得到原料液； (2)酶解:將上述原料液栗入酶解罐，用氫氧化鈉溶液或鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH，并不斷攪拌， 按加酶量1200U/g底物蛋白向上述原料液中加入胰蛋白酶進行酶解，酶解工藝參數(shù)為:酶解 時間5.5h，酶解溫度60 °C，酶解pH 7.5; (3 )滅酶:酶解結(jié)束后升溫至90 °C以上，保持1 Omin，滅酶，冷卻，對滅酶后的混合物進行 離心處理，得上清液，或?qū)⑺鰷缑负蟮幕旌衔镞^濾，得濾液； (4)真空濃縮:對上述清液或濾液抽入濃縮罐進行濃縮處理，濃縮溫度為65°C，濃縮至 最終水分含量為60%，即得到紫花苜蓿生物活性肽膏。
[0017] (5)冷凍干燥:對上述紫花苜蓿生物活性肽膏進行冷凍干燥處理，干燥溫度為-40 °C，干燥至最終水分含量為6%，即得到紫花苜蓿生物活性肽粉。
[0018] 實施例3,一種紫花苜蓿生物活性肽的制備方法，其步驟如下： (1) 原料處理:取紫花苜蓿鮮草或干草，篩選去雜、清洗、瀝干后投入粉碎機粉碎，粉碎 后按料水質(zhì)量比1:10加水勻漿，得到原