.5,憐酸二氨鐘2,憐酸氨二鐘 3.5。 在化發(fā)酵罐中裝化去離子水，加入培養(yǎng)基組分，在115°C滅菌20min，接種量10%，30°C發(fā) 酵72h，發(fā)酵過程中的攬拌轉(zhuǎn)速和通氣量分別為60化pm和0.4vvm，發(fā)酵過程中用Imol/L鹽酸 和Imol/L氨氧化鋼調(diào)節(jié)pH 7.0±0.01，黃原膠產(chǎn)量達(dá)到lOg/L。發(fā)酵結(jié)束后向發(fā)酵液中加入 等體積的去離子水稀釋發(fā)酵液，然后8000 X g離屯、30min去除菌體，上清液中加入3倍體積無 水乙醇析出黃原膠。40°C、0.1個大氣壓下真空干燥48小時，然后粉碎過80目的篩子，得到產(chǎn) 品黃原膠。
[0026] 實施例3搖瓶中粗甘油發(fā)酵生產(chǎn)新型黃原膠 W野油菜黃單胞菌WXLB-006為出發(fā)菌株進(jìn)行發(fā)酵，培養(yǎng)基組分(g/L):粗甘油(含有水、 脂肪酸、無機鹽等雜質(zhì)巧0,魚粉蛋白腺3,酵母膏1，硝酸鋼0.8,屯水合硫酸亞鐵0.01，硫酸 儀2.5，憐酸二氨鐘2，憐酸氨二鐘3.5。在250mL搖瓶中裝50mL去離子水，加入培養(yǎng)基組分，在 115°C滅菌20min，接種量10%，在30°C搖床200rpm發(fā)酵72h，黃原膠產(chǎn)量達(dá)到3.5g/L。發(fā)酵結(jié) 束后向發(fā)酵液中加入等體積的去離子水稀釋發(fā)酵液，然后SOOOXg離屯、30min去除菌體，上 清液中加入3倍體積無水乙醇析出黃原膠。40°C、0.1個大氣壓下真空干燥48小時，然后粉碎 過80目的篩子，得到產(chǎn)品黃原膠。
[0027] 實施例4發(fā)酵罐中粗甘油發(fā)酵生產(chǎn)新型黃原膠 W野油菜黃單胞菌WXLB-006為出發(fā)菌株進(jìn)行發(fā)酵，培養(yǎng)基組分(g/L):粗甘油(含有水、 脂肪酸、無機鹽等雜質(zhì)巧0,魚粉蛋白腺3,酵母膏1，硝酸鋼0.8,屯水合硫酸亞鐵0.01，硫酸 儀2.5，憐酸二氨鐘2，憐酸氨二鐘3.5。在化發(fā)酵罐中裝化去離子水，加入培養(yǎng)基組分，在115 °C滅菌20min，接種量10%，30°C發(fā)酵72h，發(fā)酵過程中的攬拌轉(zhuǎn)速和通氣量分別為60化pm和 0.4vvm，發(fā)酵過程中用Imol/L鹽酸和Imol/L氨氧化鋼調(diào)節(jié)pH 7.0±0.01，黃原膠產(chǎn)量達(dá)到 6.8g/L.發(fā)酵結(jié)束后向發(fā)酵液中加入等體積的去離子水稀釋發(fā)酵液，然后8000 Xg離屯、 30min去除菌體，上清液中加入3倍體積無水乙醇析出黃原膠。40°C、0.1個大氣壓下真空干 燥48小時，然后粉碎過80目的篩子，得到產(chǎn)品黃原膠。
[0028] 實施例5將商品級黃原膠和新型黃原膠樣品分別溶于水中，配制濃度分別為 0.5%和1.0%(W/V)的黃原膠水溶液，然后室溫下攬拌過夜，使黃原膠充分溶解。然后采用博 勒飛DV-II數(shù)顯粘度計，25±1°C下3號轉(zhuǎn)子測量不同轉(zhuǎn)速下的粘度，然后根據(jù)非牛頓流體 的幕定律方程:μ= K 丫 十算K和n，其中μ是表觀粘度，K是稠度系數(shù)，丫是剪切速率，η是流 態(tài)特性指數(shù)(η的大小表示流體偏離牛頓流體的程度）。計算結(jié)果如下表1所示： 表1:不同黃原膠樣品和溶液的稠度系數(shù)化)和流態(tài)特性指數(shù)(η)
實施例6將新型黃原膠樣品用Ξ氣乙酸水解后，采用高效液相檢測其中單糖種類及含 量，測量結(jié)果為新型黃原膠只含有葡萄糖、葡萄糖醒酸和甘露糖，且Ξ者的摩爾比為葡萄 糖:甘露糖:葡萄糖醒酸=2.0:1.65:1.0。此外我們還采用傅里葉紅外光譜（圖1)和核磁共振 (圖2)對新型黃原膠的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了檢測。
[0029] 從圖1和圖2可W看出，新型黃原膠的官能團(tuán)和基團(tuán)與商品級黃原膠基本一樣，證 明此產(chǎn)品為黃原膠。
[0030] 實施例7新型黃原膠的空間結(jié)構(gòu)（圖3)及其在水溶液中形成的結(jié)構(gòu)（圖4) 從圖3可W看出，新型黃原膠的空間結(jié)構(gòu)較商品級黃原膠松散;從圖4看出，在形成水溶 液時，新型黃原膠產(chǎn)品形成斷斷續(xù)續(xù)的結(jié)構(gòu)，而不像商品級黃原膠形成緊密的類似蜂窩狀 的結(jié)構(gòu)。
[0031 ]實施例8新型黃原膠與商品級黃原膠攬拌形成水溶液的情況 商品級黃原膠在形成水溶液時，會有"魚眼狀"膠粒存在，需要長時間攬拌才能徹底溶 解;而新型黃原膠則能快速溶解形成均一溶液，且形成的溶液顏色也比商品級黃原膠透明。
[0032]上述實施例用來解釋說明本發(fā)明，而不是對本發(fā)明進(jìn)行限制，在本發(fā)明的精神和 權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)，對本發(fā)明作出的任何修改和改變，都落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項】
1. 一株野油菜黃單胞菌(Xanthomonas campestris)WXLB_006，已保藏于中國典型培養(yǎng) 物保藏中心，簡稱CCTCC，保藏號為CCTCC N0:M 2015714。2. 用權(quán)利要求1所述野油菜黃單胞菌WXLB-006菌株發(fā)酵制備黃原膠的方法，其特征在 于：以甘油為原料，再添加酵母膏、魚粉蛋白胨、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、硝酸鈉、 七水合硫酸亞鐵作為培養(yǎng)基，在有氧條件下進(jìn)行發(fā)酵獲得黃原膠;具體步驟為： (1) 發(fā)酵：以野油菜黃單胞菌WXLB-006為菌種進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)； 種子培養(yǎng)基組成以g/L計為：甘油20，魚粉蛋白胨5，牛肉膏3，酵母膏1，調(diào)節(jié)pH 7.0 土 0.01； 種子培養(yǎng)條件：250mL三角瓶裝液量50mL，搖床轉(zhuǎn)速200r/min，培養(yǎng)溫度30 ± 1°C，培養(yǎng) 時間12h，種子培養(yǎng)基中能夠達(dá)到的菌體濃度為0.27 ± 0.03g/L; 發(fā)酵培養(yǎng)基組成以g/L計為:甘油50，魚粉蛋白胨3，酵母膏1，硝酸鈉0.8，七水合硫酸亞 鐵0.01，硫酸鎂2.5，磷酸二氫鉀2，磷酸氫二鉀3.5; 發(fā)酵條件:接種量10%，發(fā)酵溫度30 ± 1°C，搖床200rpm發(fā)酵72h，得到發(fā)酵液;發(fā)酵過程 中用lmol/L鹽酸及l(fā)mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH 7.0±0.01; (2) 提取:將步驟（1)所得發(fā)酵液8000 Xg高速離心30min除去菌體，上清液中按無水乙 醇:上清液體積比為3:1加入無水乙醇析出黃原膠初品； (3) 后處理:將步驟(2)所得黃原膠初品在40°C、0.1個大氣壓下真空干燥48h，然后粉碎 過80目的篩子，得到產(chǎn)品黃原膠。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述野油菜黃單胞菌WXLB-006菌株發(fā)酵制備黃原膠的方法，其特征 在于:步驟（1)中發(fā)酵條件為采用7L發(fā)酵罐，裝液量為4L，發(fā)酵過程中的攪拌轉(zhuǎn)速和通氣量 分別為600rpm和 0 · 4vvm。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述野油菜黃單胞菌WXLB-006菌株發(fā)酵制備黃原膠的方法，其特征 在于:所述黃原膠分子量為3.0 X 106Da。5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述野油菜黃單胞菌WXLB-006菌株發(fā)酵制備黃原膠的方法，其特征 在于:所述發(fā)酵培養(yǎng)基中的碳源為甘油。6. 權(quán)利要求2制備得到的黃原膠的應(yīng)用，其特征在于:所述黃原膠應(yīng)用于食品及速溶型 飲料中。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述黃原膠的應(yīng)用，其特征在于:所述黃原膠應(yīng)用于雪糕、冰激凌、奶 油及肉類冷凍食品中。
【專利摘要】一種以野油菜黃單胞菌發(fā)酵制備黃原膠的方法及其應(yīng)用，屬生物工程技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明以野油菜黃單胞菌（<i>Xanthomonas</i><i>？campestris</i>）WXLB-006為發(fā)酵菌種，以甘油為原料，再添加酵母膏、魚粉蛋白胨、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、硝酸鈉、七水合硫酸亞鐵作為培養(yǎng)基，在有氧條件下進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)獲得黃原膠。本發(fā)明能夠得到一種分子量小、結(jié)構(gòu)松散的新型黃原膠，其水化速率比商品級黃原膠快，水溶液粘度是商品級黃原膠的六分之一左右，這可以增加黃原膠在食品中的添加量，使黃原膠能夠作為膳食纖維。本發(fā)明提供的黃原膠的水溶液經(jīng)-20℃反復(fù)凍融且溫度恢復(fù)至室溫后，膠溶液的粘度增加為原來的2倍，在雪糕、冰激凌、奶油和其他冷凍食品中應(yīng)用潛力巨大。CCTCC NO：M 201571420151130
【IPC分類】C12N1/20, C12P19/06, A23L2/52, C12R1/64, A23G9/34, A23L29/269, A23L13/40, A23C13/12
【公開號】CN105505824
【申請?zhí)枴緾N201610002283
【發(fā)明人】詹曉北, 王子朝, 朱莉, 鄭志永, 高敏杰
【申請人】江南大學(xué)
【公開日】2016年4月20日
【申請日】2016年1月6日