AAGAACCTTACCTGGCCTTGACATGCTGAGAACTTTCCAGAGATGGATTGGTGCCTTCG
GGAACTCAGACACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGTAACGAGCGC
AACCCTTGTCCTTAGTTACCAGCACGTTATGGTGGGCACTCTAAGGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGG
GGATGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGGCCAGGGCTACACACGTGCTACAATGGTCGGTACAAAGGGTTGCCAA
GCCGCGAGGTGGAGCTAATCCCATAAAACCGATCGTAGTCCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGTGAATCAGAATGTCACGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGG
GAGTGGGTTGCTCCAGAAGTAGCTAGTCTAACCTTCGGGGGGACGGTTACCACGGAGTGATTCATGACTGGG
以上為細菌篩選及得到細菌序列的過程，生長曲線是經(jīng)過生長曲線儀在10小時、20小時、30小時、40小時、50小時、60小時、70小時下測得的OD值，并以時間為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)即得圖1。
[0037]實施例2:將保存的細菌接入LB培養(yǎng)基中，活化約16個小時后離心去上清液，將菌體用PBS清洗三次，將洗干凈的菌體按照接體積百分含量為5%的量接入權(quán)利要求4所述的氨氮培養(yǎng)基中，在31°C，PH=9.0，150r/min的搖床中培養(yǎng)，分別在3小時、6小時、9小時、12小時、15小時、18小時、21小時、24小時下測得培養(yǎng)基中氨氮的含量，同時在5小時、10小時、15小時、20小時、25小時、30小時、35小時、40小時下測得好氧反硝化培養(yǎng)基中總氮的含量，分別以以氨氮、總氮含量為縱坐標(biāo)，時間為橫坐，可得以上兩圖。
[0038]從圖2可知細菌接入氨氮培養(yǎng)基后在大約24個小時時，氨氮降解率即可達98%。在好養(yǎng)反硝化培養(yǎng)基中總氮降解率可達75%。
[0039]實施例3:在氨氮培養(yǎng)基中將碳源含量不變，將氮源含量減少，所述氨氮培養(yǎng)基的組分為:NH4C1 0.382g,乙酸鈉 2.0g, MgS04.7Η200.05g, K2HP04 0.2g, NaCl0.12g, MnS04.4H20 0.0lg, FeS04 0.0lg,溶于 1000ml 蒸餾水中，PH 為 7.0。將 NH4C1 的含量依次變?yōu)?.082g、0.134g、0.182g、0.382g,按照具體實施2所述的方法對菌體活化清洗后按照體積百分含量為5%的量將菌懸液接種于上述不同氨氮初始濃度的培養(yǎng)基中，放入150r/min,溫度為31°C的搖床中，在PH為7.0的條件下培養(yǎng)，分別在12小時、24小時、36小時、48小時時采集培養(yǎng)液測氨氮濃度，以時間為橫坐標(biāo)，氨氮濃度為縱坐標(biāo)，即得圖3。
[0040]從圖3可知，當(dāng)?shù)某跏紳舛葹?.082g/l和0.134g/l時氨氮降解率均較高，分別達97%和98%，而當(dāng)氨氮的初始濃度為0.182g/l時，細菌對氨氮的降解率只有47%，當(dāng)氨氮初始濃度為權(quán)利要求4所述的氨氮培養(yǎng)基原始濃度時，最大降解率為75%。當(dāng)將PH調(diào)到9.0時，在氨氮濃度為0.382g/l時，細菌仍能將氨氮降解率達到98%，也說明該細菌能耐受較高的PH值。
[0041 ] 實施例4:將細菌按照實施例2的方法活化清洗后按照體積百分含量為5%的量將菌懸液分別接種于不同PH的權(quán)利要求4所述的氨氮培養(yǎng)基中，放入150r/min的搖床中在31°C下培養(yǎng)，并在培養(yǎng)24小時后分別測出在不同PH值時的氨氮降解率，以不同PH值為橫坐標(biāo)，氨氮降解率為縱坐標(biāo)，即得到圖4。
[0042]從圖4可知，在不同PH條件下，菌株降解氨氮的能力大不相同，菌株在ΡΗ=8.0和ΡΗ=9.0時降解能力最強，均可達到約98%，但是在ΡΗ=9.0時菌株對氨氮的降解率略微高些，因此菌株的最適生長ΡΗ值為9.0。
[0043]
實施例5:將細菌按照實施例2的方法活化清洗后按照體積百分含量為5%的量將細菌的菌懸液分別接入到氨氮培養(yǎng)基中，所述氨氮培養(yǎng)基的組分為:NH4C1 0.382g,乙酸鈉
2.0g, MgS04.7Η200.05g, Κ2ΗΡ04 0.2g, NaCl 0.12g, MnS04.4H20 0.0lg, FeS04 0.0lg,溶于1000ml蒸餾水中，PH為7.0。放入150r/min的搖床中，在PH=7.0 (當(dāng)PH為9.0時在26°C下仍能將氨氮降解到最大值，只是時間較長，所以為使最適溫度更易觀察，則選在PH為7.0的條件下檢測)時，于不同溫度下培養(yǎng)，并定時測量氨氮的降解率，以溫度為橫坐標(biāo)，氨氮降解率為縱坐標(biāo)，即得圖5。
[0044]從圖5可知，溫度對細菌的降解活性有不同程度的影響，可以看出，細菌在31°C左右時對氨氮降解率達最高，可達到75%，所以細菌的最適生長溫度為31°C。
[0045]實施例6:將細菌按照實施例2的方法活化清洗后按照體積百分含量為5%的量將細菌懸液分別接入到氨氮培養(yǎng)基中，所述氨氮培養(yǎng)基的組分為:NH4C1 0.382g,乙酸鈉
2.0g, MgS04.7Η200.05g, Κ2ΗΡ04 0.2g, NaCl 0.12g, MnS04.4H20 0.0lg, FeS04 0.0lg,溶于1000ml蒸餾水中，PH為7.0。在不同轉(zhuǎn)速的搖床中，于31°C，PH=7.0的條件下培養(yǎng)，在培養(yǎng)36小時后分別測氨氮培養(yǎng)基中的氨氮含量，以不同搖床轉(zhuǎn)速為橫坐標(biāo)，氨氮降解率為縱坐標(biāo)，即得圖6。
[0046]從圖6可知，細菌在搖床轉(zhuǎn)速為150r/min時對氨氮的降解率達到最大，所以細菌的最適搖床轉(zhuǎn)速為150r/min。
[0047]實施例7:在氨氮培養(yǎng)基中將碳源含量不變，所述氨氮培養(yǎng)基的組分為:NH4C1 0.382g,乙酸鈉 2.0g, MgS04.7Η200.05g, K2HP04 0.2g, NaCl 0.12g, MnS04.4H200.0lg, FeS04 0.0lg,溶于1000ml蒸餾水中，PH為7.0。將氮源含量減少，使C/N為20:1、15:1,10:1,5:1 即 NH4C1 的含量依次變?yōu)?0.082g、0.134g、0.182g、0.382g，將細菌按照具體實施方案二的方法活化清洗后按照體積百分含量為5%的量接種于上述不同氨氮初始濃度的培養(yǎng)基中，放入150r/min，溫度為31°C的搖床中，在PH為7.0的條件下培養(yǎng)，分別在24小時、36小時時采集培養(yǎng)液測氨氮濃度，以時間為橫坐標(biāo)，氨氮降解率為縱坐標(biāo)，即得圖7。
[0048]從圖7可知，在C/N為20和15時細菌降解氨氮率都較高，在36小時時C/N為15時氨氮降解率可達98%，所以最適C/N為15。
[0049]實施例8:將不接入細菌的氨氮培養(yǎng)基與接入細菌的氨氮培養(yǎng)基，放入150r/min的搖床中，在31°C，于PH為9.0 (比PH為7.0時明顯)的條件下培養(yǎng)48小時，對比氨氮的降解情況，以時間為橫坐標(biāo)，氨氮含量為縱坐標(biāo)即得圖8。
[0050]從圖8可知，當(dāng)接入細菌且在細菌最適生長條件下，在約24小時時氨氮含量幾乎為0，而不接入細菌時，氨氮含量減少的很緩慢，從而說明該株細菌降解氨氮的高效性。
【主權(quán)項】
1.一株具有降解氨氮及總氮的細菌，其特征在于該菌株為革蘭氏陰性菌，單個細菌呈桿狀，無芽孢，菌株在無機鹽固定培養(yǎng)基上生長，菌落呈乳白色略帶淡黃色，圓形，不透明，表面光滑略微隆起，其名稱為Pseudomonas sp.ZXY_1，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其保藏編號為CGMCC N0.10936，保藏時間為2015年6月1號。2.權(quán)利要求1所述的一株具有降解氨氮及總氮的細菌在農(nóng)田廢水中氨氮及總氮的應(yīng)用。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一株具有降解氨氮及總氮的細菌在農(nóng)田廢水中氨氮及總氮的應(yīng)用，其特征在于所述細菌包括其發(fā)酵液或其代謝產(chǎn)物。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一株具有降解氨氮及總氮的細菌在農(nóng)田廢水中氨氮及總氮的應(yīng)用的處理方法，其特征在于將細菌Pseudomonas sp.ZXY_1的菌懸液接種于氨氮培養(yǎng)基或模擬農(nóng)田廢水或為好氧反硝化培養(yǎng)基中培養(yǎng)，實現(xiàn)氨氮的降解； 所述細菌的菌懸液按照體積百分含量為5%的量接種； 所述細菌在ΡΗ值為9.0，生長溫度為31°C，生長搖床轉(zhuǎn)速為150r/min的條件下進行培養(yǎng)。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一株具有降解氨氮及總氮的細菌在農(nóng)田廢水中氨氮及總氮的應(yīng)用，其特征在于氨氮培養(yǎng)基的組分為:NH4C1 0.382g,乙酸鈉2.0g，MgS04*7H200.05g，K2HP04 0.2g, NaCl 0.12g, MnS04.4Η20 0.0lg, FeS04 0.0lg,溶于 1000ml 蒸餾水中，PH為 7.0。6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一株具有降解氨氮及總氮的細菌在農(nóng)田廢水中氨氮及總氮的應(yīng)用，其特征在于好氧反硝化培養(yǎng)基:Na2HP04.7H20 5.0g，KH2P04 1.0g，MgS04.7H200.lg，琥珀酸鈉5.5g，KN03 2.0g，NaN02 0.5g，微量元素溶液2 mL,溶于1000ml蒸餾水中，ρΗ7.0 -7.5 ;所述微量元素溶液:EDTA 50.0g, ZnS04 2.2g, CaCl2 5.5g，MnCl2.4H205.06g，F(xiàn)eS04.7H20 5.0g，(NH4)6Mo702.4Η20 1.lg，CuS04.5H20 1.57g，CoCl2.6Η20 1.61g,溶于1000ml蒸餾水中，pH =7.0。7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的一株具有降解氨氮及總氮的細菌在農(nóng)田廢水中氨氮及總氮的應(yīng)用，其特征在于氨氮培養(yǎng)基、好氧反硝化培養(yǎng)基用高壓滅菌鍋在121°C，滅菌15min。
【專利摘要】一株具有降解氨氮及總氮的細菌及其應(yīng)用和處理方法，屬于環(huán)境微生物技術(shù)領(lǐng)域，于2015年6月1日保藏于“中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心”，保藏編號為CGMCC？No.10936。本發(fā)明細菌（Pseudomonas？sp.ZXY-1）是從吉林化工有限公司農(nóng)藥廠受污染土壤中分離得到，該細菌可以以氯化銨作為氮源生長,具有降解氨氮的能力并且在好氧反硝化培養(yǎng)基中具有降解總氮的能力，在最適生長條件下，在氨氮培養(yǎng)基中24小時氨氮降解率即可達98%，在好氧反硝化培養(yǎng)基中經(jīng)測得總氮降解率可達75%。經(jīng)過驗證，該菌株對模擬農(nóng)田廢水中的氨氮及總氮也有一定的降解作用。該菌株適用于農(nóng)田廢水中氨氮及總氮的生物降解與生物修復(fù)。CGMCC No.1093620150601
【IPC分類】C12N1/20, C12R1/38, C02F101/16, C02F3/02, C02F3/34
【公開號】CN105255754
【申請?zhí)枴緾N201510555117
【發(fā)明人】王立, 齊珊珊, 趙廷, 趙晰悅, 馬放, 楊基先, 董靜, 張雪
【申請人】哈爾濱工業(yè)大學(xué)宜興環(huán)保研究院
【公開日】2016年1月20日
【申請日】2015年9月5日