Rgds修飾的吲哚喹嗪，其制備，納米結(jié)構(gòu)，活性和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及化巧-3-己醜基-4-氧代-4,6, 7,12-四氨巧隙巧，3-a]哇嗦-6-甲 醜-Arg-Gly-Asp-Ser,Arg-Gly-Asp-Ser的正規(guī)簡稱是RGDS。涉及它的制備方法，涉及它 的納米結(jié)構(gòu)，涉及它的體內(nèi)外抗腫瘤作用，涉及它抗腫瘤細(xì)胞粘附侵襲和遷移的作用。因而 本發(fā)明涉及它在制備抗腫瘤藥物，制備抗腫瘤細(xì)胞粘附侵襲和遷移藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明 屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。 技術(shù)背景
[0002] 惡性腫瘤嚴(yán)重威脅人類的健康。除了自身對腫瘤患者的預(yù)后惡劣之外，惡性腫瘤 并發(fā)的炎癥、血栓和轉(zhuǎn)移進(jìn)一步惡化患者的預(yù)后。例如，超過90%W上的惡性腫瘤患者都是 死于腫瘤轉(zhuǎn)移。腫瘤轉(zhuǎn)移依賴于4個因素；1)腫瘤細(xì)胞表面形成微血栓，逃避巨瞻細(xì)胞吞 瞻，通過血液循環(huán)遷移到遠(yuǎn)端；2)遷移到遠(yuǎn)端的腫瘤細(xì)胞粘附到血管壁；3)細(xì)胞粘附到血 管壁的腫瘤細(xì)胞通過侵襲出血管而進(jìn)入正常組織。
[0003] 由于現(xiàn)有抗腫瘤藥物不具備抗轉(zhuǎn)移作用，所W療效不理想。發(fā)明同時具有抗腫瘤、 抗炎癥、抗血栓和抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用的藥物是臨床的迫切需求。
[0004] RGD四膚，即RGDS，RGDF和RGDV是整合素aV目3的阻斷劑，具有抗血栓和抗細(xì) 胞粘附活性。Arg-Gly-Asp-Ser則具備抗腫瘤細(xì)胞遷移作用。申請人曾經(jīng)把RGD四膚與雌 激素偶聯(lián)，制備沒有凝血副作用的抗骨質(zhì)疏松劑。申請人曾經(jīng)把RGD四膚與四氨-目-巧 晰-3-駿酸偶聯(lián)制備高效的抗血栓劑。申請人也曾經(jīng)用氨基酸修飾四氨-目-巧晰-3-駿 酸、目-巧晰-3-駿酸及1-位取代的目-巧晰-3-駿酸，包括1-位取代的四氨-目-巧 晰-3-駿酸或^位取代的目-巧晰-3-駿酸制備高效的抗血栓劑或抗腫瘤劑。下面是發(fā) 明人創(chuàng)造的結(jié)構(gòu)類型的代表。盡管發(fā)明人付出了大量研究精力，篩選了數(shù)百種化合物，一直 沒有得到同時具有抗腫瘤和抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用的化合物。
[0005] 發(fā)明人在分析數(shù)百種化合物的結(jié)構(gòu)及活性變化的基礎(chǔ)上，認(rèn)識到將 Arg-Gly-Asp-Ser與化巧-3-己醜基-4-氧代-4,6, 7,12-四氨剛巧巧，3-a]哇嗦-6-駿酸 偶聯(lián)，形成的化合物會同時具有抗腫瘤和抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用。基于送個認(rèn)識，發(fā)明人提出了本 發(fā)明。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的第一個內(nèi)容是提供下面結(jié)構(gòu)的化巧-3-己醜基-4-氧代-4,6,7，12-四 氨巧隙巧，3-曰]哇嗦-6-甲醜-Arg-Gly-Asp-Ser。
[0007]
[0008] 本發(fā)明的第二個內(nèi)容是提供化巧-3-己醜基-4-氧代-4,6,7，12-四氨巧隙巧， 3-a]哇嗦-6-甲醜-Arg-Gly-Asp-Ser的制備方法，該方法包括：
[0009] (1)在多聚磯酸的存在下色氨酸和苯甲醇反應(yīng)，生成k色氨酸予醋；
[0010] 似在H氣己酸的存在下，在二氯甲焼中1，1，3,3-四甲氧基丙焼和k色氨酸予醋 縮合為（3巧-1-化2-二甲氧己基）-2,3,4,9-四氨-目-巧晰-3-駿酸予醋；
[0011] 做在S己胺的存在下，在丙麗中雙己帰麗和（3巧-1-(2,2-二甲氧己基）-2,3,4， 9-四氨-目-巧晰-3-駿酸予醋縮合為（3巧-1- (2, 2-二甲氧己基）-2-己醜己醜基-2, 3， 4,9-四氨-目-巧晰-3-駿酸予醋；
[001引 （4)在鹽酸水溶液（2M)的存在下，在丙麗中（3巧-1-化2-二甲氧己基）-2-己醜 己醜基-2, 3,4,9-四氨-目-巧晰-3-駿酸予醋氧化環(huán)合為化巧-苯基-3-己醜基-4-氧 代-4,6, 7,12-四氨日引巧[2, 3-a]哇嗦-6-駿酸醋；
[001引 （5)冰浴下在化OH的水溶液（2M)和甲醇中，（6S)-苯基-3-己醜基-4-氧代-4，6, 7,12-四氨巧隙[2, 3-a]哇嗦-6-駿酸醋轉(zhuǎn)化為化巧-3-己醜基-4-氧代-4,6, 7,12-四 氨剛巧巧，3-a]哇嗦-6-駿酸；
[0014] (6)采用逐步縮合法，在N，N-二環(huán)己基碳二亞胺和N-居基苯拼H氮哇的存在下， 在干燥四氨巧喃中反應(yīng)，得到全保護(hù)多膚序列Boc-Arg (N02) -Gly-Asp (OBzl) -Ser度Zl) -OB zl ;
[001引 （7)冰浴下在氯化氨的己酸己醋溶液（4M)中，全保護(hù)多膚序列Boc-Arg(N02)-Gly -Asp(OBzl)-Ser度Z1)-OBzl脫除Boc得Arg(N02) -Gly-Asp(OBzl)-Ser度Z1)-OBzl;
[0016] (8)在1-己基-(3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽和N-居基苯拼H氮哇存在 下，在無水N，N-二甲基甲醜胺中化巧-3-己醜基-4-氧代-4,6, 7,12-四氨剛巧巧，3-a] 哇嗦-6-駿酸和Arg (N02)-Gly-Asp (OBzl)-Ser度zl)-OBzl縮合為化巧-3-己醜基-4-氧 代-4,6,7,12-四氨剛巧[2,3-a]哇嗦-6-甲醜-Arg(N〇2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser度zl)-〇Bz 1;
[0017] (9)冰浴下在H氣己酸和H氣甲礙酸中，化巧-3-己醜基-4-氧代-4,6,7， 12-四氨剛巧巧，3-a]哇嗦-6-甲醜-Arg(N〇2)-Gly-Asp (OBzl)-Ser度zl)-OBzl轉(zhuǎn)化為 化巧-3-己醜基-4-氧代-4,6, 7,12-四氨巧隙[2,3-a]哇嗦-6-甲醜-Arg-Gly-Asp-Ser。
[0018] 本發(fā)明的第H個內(nèi)容是測定化巧-3-己醜基-4-氧代-4,6,7，12-四氨剛巧巧， 3-a]哇嗦-6-甲醜-Arg-Gly-Asp-Ser的納米結(jié)構(gòu)。
[0019] 本發(fā)明的第四個內(nèi)容是評價化巧-3-己醜基-4-氧代-4,6, 7,12-四氨巧隙巧， 3-a]哇嗦-6-甲醜-Arg-Gly-Asp-Ser體外抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用。
[0020] 本發(fā)明的第五個內(nèi)容是評價化巧-3-己醜基-4-氧代-4,6, 7,12-四氨巧隙巧， 3-a]哇嗦-6-甲醜-Arg-Gly-Asp-Ser對荷S180小鼠腫瘤生長的抑制作用。
[0021] 本發(fā)明的第六個內(nèi)容是評價化巧-3-己醜基-4-氧代-4,6, 7,12-四氨巧隙巧， 3-a]哇嗦-6-甲醜-Arg-Gly-Asp-Ser體外抑制腫瘤細(xì)胞粘附侵襲和遷移的作用。
【附圖說明】
[0022] 圖1.發(fā)明人創(chuàng)造的抗血栓或抗腫瘤活性化合物的結(jié)構(gòu)類型代表，式中AA為k氨 基酸或甘氨酸。
[002引 圖2.化巧-3-己醜基-4-氧代-4,6, 7,12-四氨日引巧[2, 3-a]哇嗦-6-甲 醜-Lys-Glu的合成路線。（i)多聚磯酸，苯甲醇，8(TC;(ii)l，l，3,3-四甲氧基丙焼，H氣 己酸，二氯甲焼；（iU)雙己帰麗，S己胺，丙麗；（iv)鹽酸水溶液（2M)，丙麗；（V)化OH水溶 液（2M)，甲醇，(TC; (Vi) 1-己基-(3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽，N-居基苯拼H氮 哇，二氯甲焼/N，N-二甲基甲醜胺；(Vii)H氣己酸，H氣甲礙酸，(TC;(viii)N-居基苯拼H 氮哇，N，N-二環(huán)己基碳二亞胺，N-甲基嗎晰，四氨巧喃；（ix)氯化氨的己酸己醋溶液（4M)， (TC; (X)化OH水溶液（2M)，甲醇，(TC。
[0024]圖3.化合物7在純水溶液中1X10 %濃度下的透射電鏡照片。
【具體實施方式】
[00巧]為了進(jìn)一步闡述本發(fā)明，下面給出一系列實施例。送些實施例完全是例證性的，它 們僅用來對本發(fā)明進(jìn)行具體描述，不應(yīng)當(dāng)理解為對本發(fā)明的限制。
[0026] 實施例1制備k色氨酸予醋磯酸鹽（1)
[0027] 將20. 4g(100mmo；L) 1^-色氨酸、120mmol苯甲醇和120mmol多聚磯酸依次加入 500ml茄瓶中，瓶口安裝冷凝管，置于油浴中加熱至8(TC，反應(yīng)72小時，TLC顯示原料完全 消失，反應(yīng)結(jié)束。將反應(yīng)液冷卻至室溫，加入30ml無水己離，析出白色固體，攬拌2小時，反 應(yīng)液減壓過濾，得白色固體，用無水己離磨洗3次，得35. 4g(90. 4%)目標(biāo)化合物，為白色固 體。ESI-MS(m/e) :393. 1[M+H]+。
[002引 實施例2制備（3巧-1-(2, 2-二甲氧己基）-2,3,4,9-四氨-目-巧晰-3-駿酸予 醋似
[0029] 將250ml邸2化加入500ml茄瓶中，冰浴下依次加入15mll，l，3,3-四甲氧基丙焼 和14mlH氣己酸，攬拌0. 5小時，加入20.Og(68mmol)k色氨酸予醋，室溫攬拌120小時， 反應(yīng)結(jié)束。冰浴攬拌下向反應(yīng)液中緩慢加入飽和化2〇)3水溶液，劇烈攬拌，至水層抑為7， 分離二氯甲焼層，二氯甲焼層用5%NaHC〇3水溶液和飽和化Cl水溶液萃洗3次，二氯甲焼 層用無水Na2S〇4干燥，減壓過濾，濾液減壓濃縮至干，殘留物經(jīng)硅膠柱層析純化（石油離： 丙麗=3 : 1)，得9. 38g(35%)目標(biāo)化合物，為無色油狀物。ESI-MS(m/e) :395. 2[M+田+。
[0030] 實施例3制備（3巧-1-(2, 2-二甲氧己基）-2-己醜己醜基-2, 3,4,9-四氨-目-巧 晰-3-駿酸予醋（3)
[0031]將 9. 38g(23.8mmol) (3巧-1- (2, 2-二甲氧己基）-2, 3,4,9-四氨-目-巧晰-3-駿 酸予醋溶于200ml丙麗，冰浴攬拌下加入2. 89ml雙己帰麗和1. 81mlH己胺，室溫攬拌18 小時，TLC顯示原料完全消失，反應(yīng)結(jié)束。冰