布及線繩纏緊管塞，W防加熱時(shí)溶液外瓣。然后將 比色管置于滅菌鍋中，加熱至頂壓閥吹氣，關(guān)閥，繼續(xù)加熱至120°C開(kāi)始計(jì)時(shí)，保持溫度在 120-124°C之間30min。自然冷卻、開(kāi)閥放氣，移去外蓋，取出比色管，冷卻至室溫，按住管塞 將比色管中的液體混勻2-3次。
[0087] 在每個(gè)比色管分別加入1血(1+9)鹽酸溶液，用無(wú)氨水水稀釋至標(biāo)線，混勻。使用 10mm石英比色皿，在紫外分光光度計(jì)上，分別于波長(zhǎng)220皿和275皿處測(cè)定吸光度?？偟猅N對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)溶液與空白溶液差值A(chǔ)校繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖5,對(duì)應(yīng)線性方程為TN= 0. 2873A 校+0. 0157(R2 = 0. 9998)
[008引 TN數(shù)值的測(cè)定
[0089] 量取10. 00ml待測(cè)試樣于25ml具塞磨口玻璃比色管中，按照W上步驟進(jìn)行測(cè)定， 計(jì)算得到試樣校正吸光度A校，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算相應(yīng)的總氮m，總氮含量CN(mg/L)按公式 計(jì)算：
[0090] CN(mg/L) =m/V
[0091] 計(jì)算總氮變化率，比較添加不同濃度環(huán)保酵素后其總氮含量的變化，計(jì)算公式如 下：
[0092]
[0093] 式中：R為總氮變化率；
[0094] C0為試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)總氮的濃度；
[0095]C1為試驗(yàn)結(jié)束時(shí)總氮的濃度；
[0096]V為所取水樣的體積，整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中所取水樣的體積均相同。
[0097](四）藻密度抑制率計(jì)算
[0098] 通過(guò)計(jì)算藻類密度的變化量可W直觀得出環(huán)保酵素對(duì)藻類生長(zhǎng)的抑制效果，藻類 密度的變化量計(jì)算公式如下：
[0099] Am= (ma-mo)/mo*100
[0100] 式中：mo:實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)空白對(duì)照培養(yǎng)液藻密度；
[0101] ma:實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)添加環(huán)保酵素培養(yǎng)液的藻密度；
[0102] Am:整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中添加環(huán)保酵素處理組對(duì)藻類生長(zhǎng)的抑制率。
[0103](五）實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果
[0104] 將已制備的環(huán)保酵素滴加到銅綠微囊藻培養(yǎng)液中并設(shè)定空白對(duì)照，每組S個(gè)平 行。
[0105] 實(shí)驗(yàn)第3天，添加1 : 240、1 : 120和1 : 60濃度環(huán)保酵素的藻液培養(yǎng)基可明顯 觀察到銅綠微囊藻絮凝沉淀到培養(yǎng)基底部，且培養(yǎng)基中添加的環(huán)保酵素濃度越高，銅綠微 囊藻絮凝沉淀的量越少。1 : 240濃度環(huán)保酵素的藻液培養(yǎng)基上部的水體變的清澈透明； 1 : 120和1 : 60濃度環(huán)保酵素的藻液培養(yǎng)基因?yàn)樘砑咏退氐牧枯^大，帶有環(huán)保酵素本身 的顏色，水體偏黃；1 : 600濃度環(huán)保酵素的藻液培養(yǎng)基無(wú)銅綠微囊藻絮凝沉淀的現(xiàn)象，但 與未添加環(huán)保酵素的空白對(duì)照組對(duì)比顏色較淺。
[0106] 實(shí)驗(yàn)的第5天觀察培養(yǎng)基的情況與第3天基本相同，但1 : 600濃度環(huán)保酵素的 藻液培養(yǎng)基與未添加環(huán)保酵素的空白對(duì)照組培養(yǎng)基中水體顏色逐漸變綠，1 : 240、1 : 120 和1 : 60濃度環(huán)保酵素的藻液培養(yǎng)基中的銅綠微囊藻絮凝沉淀的量逐漸減少。
[0107] 實(shí)驗(yàn)的第11天觀察培養(yǎng)基的情況，1 : 240、1 : 120和1 : 60濃度環(huán)保酵素的藻 液培養(yǎng)基底部絮凝沉淀的物質(zhì)偏黃。1 : 240濃度環(huán)保酵素的藻液培養(yǎng)基中長(zhǎng)出類似菌落 的白色斑點(diǎn)浮于培養(yǎng)基表面，1 : 600濃度環(huán)保酵素的藻液培養(yǎng)基與未添加環(huán)保酵素的空 白對(duì)照組培養(yǎng)基中的水體仍然呈綠色。
[0108] 從顯微鏡下觀察銅綠微囊藻，添加環(huán)保酵素培養(yǎng)基中的銅綠微囊藻大多變得透 舞。
[0109] 用0.ImL膠頭吸管在藻液W下1cm處準(zhǔn)確吸取0.ImL銅綠微囊藻液于浮游植物計(jì) 數(shù)框內(nèi)，蓋好蓋玻片，每個(gè)實(shí)驗(yàn)樣品分別在顯微鏡下用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。同一個(gè)樣品的兩片 計(jì)算結(jié)果和平均數(shù)之差不大于其均數(shù)的± 10%，其均數(shù)視為有效結(jié)果，否則必須測(cè)第=片， 直至=片平均數(shù)與相近兩數(shù)之差不超過(guò)均數(shù)的±10%為止，運(yùn)兩個(gè)相近值的均數(shù)即可視為 計(jì)算結(jié)果。每24h取樣測(cè)定一次藻細(xì)胞總數(shù)。
[0110] 圖9為未添加環(huán)保酵素的空白對(duì)照組和添加不同濃度環(huán)保酵素的藻液培養(yǎng)基的 藻密度隨時(shí)問(wèn)的變化趨勢(shì)圖。由圖9分析可知，未添加環(huán)保酵素的空白對(duì)照組中銅綠微藻 的數(shù)量在前5天處于持續(xù)增長(zhǎng)狀態(tài)。添加1 : 600環(huán)保酵素的藻液培養(yǎng)液中銅綠微囊藻增 長(zhǎng)緩慢，環(huán)保酵素濃度為1 : 240、1 : 120和1 : 60的藻液培養(yǎng)液中銅綠微囊藻的數(shù)量在 前5天處于持續(xù)減少狀態(tài)，且添加酵素的濃度越高，銅綠微囊藻的數(shù)量減少的越多。
[0111] 通過(guò)對(duì)環(huán)境因子的相關(guān)性分析，環(huán)保酵素濃度與藻數(shù)的秩相關(guān)系數(shù)隨著時(shí)間增長(zhǎng) 分別為-0. 168、-0. 820、-0. 745、-0. 821、-0. 772和-0. 776,說(shuō)明酵素濃度與藻數(shù)存在顯著 負(fù)相關(guān)性。對(duì)于空白試驗(yàn)和添加酵素濃度為1 : 600的實(shí)驗(yàn)組，藻數(shù)與時(shí)間存在顯著正相 關(guān)性，相關(guān)系數(shù)分別為0.946和0.946;添加酵素濃度為1 : 240、1 : 120和1 : 60的實(shí) 驗(yàn)組，藻數(shù)與時(shí)間存在顯著負(fù)相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)分別為-0. 228、-0. 620和-0. 628,說(shuō)明添加 酵素從1 : 240開(kāi)始，開(kāi)始對(duì)藻類存在抑制作用。
[0112] 表3添加不同濃度環(huán)保酵素銅綠微囊藻的抑制率 [011 引
[0114] 由表3數(shù)據(jù)得知，添加酵素后實(shí)驗(yàn)組的銅綠微囊藻增長(zhǎng)量均低于空白對(duì)照組，且 添加環(huán)保酵素的濃度越大，對(duì)抑制銅綠微囊藻生長(zhǎng)的效果越好。從添加酵素濃度為1 : 240 的實(shí)驗(yàn)組開(kāi)始，抑制效果已非常顯著，當(dāng)添加酵素濃度為1 : 120和1 : 60時(shí)，實(shí)驗(yàn)組藻數(shù) 的增長(zhǎng)量為負(fù)數(shù)，說(shuō)明環(huán)保酵素對(duì)藻類存在顯著抑制作用。但隨著濃度的升高，抑藻的效果 增加附加幅度有限，考慮到環(huán)保酵素濃度增大會(huì)導(dǎo)致經(jīng)濟(jì)成本增加，W及環(huán)保酵素本身的 性質(zhì)會(huì)影響水質(zhì)的抑值和氣味，所W綜合考慮，應(yīng)用環(huán)保酵素濃度為1 : 240時(shí)，對(duì)藻類的 抑制效果最好。
[0115] 如圖10所示，藻類生長(zhǎng)抑變化趨勢(shì)表明，未添加環(huán)保酵素的空白對(duì)照組的抑值 在穩(wěn)定增長(zhǎng)期達(dá)到9. 46-10. 23。添加環(huán)保酵素濃度為1 : 600的藻液培養(yǎng)基的pH值一直 處于上升狀態(tài)，在第11天時(shí)，該濃度的抑值與未添加酵素的空白對(duì)照基本相同；添加酵素 濃度為1 : 240、1 : 120和1 : 60的藻液培養(yǎng)基前5天基本保持穩(wěn)定，且抑值偏酸性，但 在第11天時(shí)，添加酵素濃度為1 : 240的藻液培養(yǎng)基抑值回升至中性。
[0116] 銅綠微囊藻在生長(zhǎng)過(guò)程中抑會(huì)逐漸升高，環(huán)保酵素利用廢棄水果皮發(fā)酵而成，發(fā) 酵產(chǎn)物為酸性物質(zhì)，添加濃度越高的環(huán)保酵素會(huì)使得藻類培養(yǎng)液抑值越低，故相對(duì)而言添 加酵素濃度為1 : 240、1 : 120和1 : 60的藻液培養(yǎng)基的抑值比未添加酵素和添加酵素 濃度為1 : 600的實(shí)驗(yàn)組低，對(duì)銅綠微囊藻的生長(zhǎng)抑制作用會(huì)較好。但需要實(shí)際湖泊抑值 過(guò)低時(shí)，會(huì)影響魚(yú)類和其他水生生物生長(zhǎng)，最終確定添加1 : 240濃度的環(huán)保酵素，對(duì)應(yīng)用 于實(shí)際湖泊水體抑制銅綠微囊藻水華的爆發(fā)具有重大實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。
[0117]圖11為未添加酵素的空白對(duì)照組和添加不同濃度酵素的藻液培養(yǎng)基的總氮含量 隨時(shí)問(wèn)的變化趨勢(shì)圖。由圖11分析可知，未添加酵素的空白對(duì)照組培養(yǎng)基中的總氮含量在 前5天處于緩慢增長(zhǎng)狀態(tài)，從第5天開(kāi)始空白對(duì)照組培養(yǎng)基中的總氮含量較之前有所降低， 實(shí)驗(yàn)結(jié)束與實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)培養(yǎng)基中總氮數(shù)值相比，數(shù)值有所減小。添加酵素后，添加酵素濃度 為1 : 600的實(shí)驗(yàn)組總氮含量第3天有少量增加，整體趨勢(shì)總氮含量下降幅度較大；添加酵 素濃度為1 : 240和1 : 120的實(shí)驗(yàn)組總氮含量均在前5天持續(xù)緩慢增加，之后一直保持 緩慢減少的狀態(tài)，且實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)總氮含量較實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)有所減少；添加酵素濃度為1 : 60 的實(shí)驗(yàn)組在第2天總氮含量有所降低，但是第5天總氮含量又有所增加，到實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，總 氮的含量較實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)有所減少。
[0118] 通過(guò)對(duì)環(huán)境因子的相關(guān)性分析，環(huán)保酵素濃度與總氮含量的秩相關(guān)系數(shù)隨著時(shí) 間增長(zhǎng)分別為0. 998、0. 994、0. 928、0. 931、0. 948和0. 907,說(shuō)明酵素濃度與總氮含量存 在顯著正相關(guān)性。對(duì)于五個(gè)實(shí)驗(yàn)組，總氮含量與時(shí)間存在顯著負(fù)相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)分別 為-0. 047、-0. 853、-0. 425、-0. 492和-0. 095。而總氮含量與添加不同濃度酵素后培養(yǎng) 基中藻數(shù)的秩相關(guān)系數(shù)隨著時(shí)間增長(zhǎng)分別為-0. 119、-0.842、-0.827、-0.841、-0.805 和-0. 777,說(shuō)明總氮含量與添加酵素后培養(yǎng)基中藻數(shù)存在顯著負(fù)相關(guān)。
[0119] 表4空白對(duì)照