一種新的檸檬苦素類化合物及其制備方法和醫(yī)藥用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及從吳榮英的干燥成熟果實(shí)中分離得到的一種 具有治療腎癌作用的巧樣苦素類化合物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 吳榮英為傳統(tǒng)中藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品。其味辛、苦，性熱，有小毒；具 有散寒止痛，降逆止嘔，助陽止瀉的功效。主要用于治療厥陰頭痛，寒痛腹痛，寒濕腳氣等。 1977-2010版《中國(guó)藥典》均收載吳榮英為蕓香科植物吳榮英Evodiarutaeca巧aGuss.) Benth.，石虎E.Rutaecarpa(Juss. )Benth.var.Officinalis值ode)Huang或疏毛吳榮英 6.化11日60日巧日(]1133.)86]11：11.￥日1\8〇(1；[]1161'；[值0(16)化日]1邑的干燥成熟果實(shí)。常綠灌木或小 喬木，主要分布在中國(guó)的貴州、四川、湖南、湖北、江西、廣西、安徽和浙江省等。
[0003] 吳榮英主要包括生物堿類、巧樣苦素類、揮發(fā)油類、黃酬類等化學(xué)成分。生物堿是 吳榮英成分研究的主流。目前，從該屬植物中已經(jīng)分離鑒定出多種生物堿，主要有嗎I噪類、 哇諾酬類、巧喃哇嘟類和叮喧酬類生物堿，另外，還有其他類型生物堿。巧樣苦素也是吳榮 英的重要活性成分，主要包括巧樣苦素佑2進(jìn)3。化)，吳榮英苦素，吳榮英內(nèi)醋醇，黃柏酬，吳榮 英苦素乙酸醋，格羅苦素甲等化合物。吳榮英富含揮發(fā)油，主要成分是月桂締（占揮發(fā)油總 量的45. 37% )。此外，還包括祗類，異戊締黃酬類黃酬化合物，香豆精，醬體（0 -谷醬醇）， 木質(zhì)素，多糖，花色巧，多種氨基酸類化合物及微量元素和脂肪酸類化合物等。
[0004] 現(xiàn)代藥理研究表明，吳榮英具有鎮(zhèn)痛作用，體溫上升作用，對(duì)消化系統(tǒng)具有抗?jié)?瘍、雙向調(diào)節(jié)腸運(yùn)動(dòng)和保肝利膽作用，對(duì)子宮平滑肌和支氣管具有雙向調(diào)節(jié)作用，對(duì)屯、血管 系統(tǒng)具有降低血壓，溶栓、增加血流量、擴(kuò)張血管等作用，其中生物堿、巧樣苦素類化合物為 其主要有效成分。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種從吳榮英的干燥成熟果實(shí)中分離得到的一種具有治療 腎癌作用的巧樣苦素類化合物及其制備方法。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得W實(shí)現(xiàn)的：
[0007]具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0008] 一
[0009] 所述的化合物（I)的制備方法，包含W下操作步驟：(a)將吳榮英的干燥成熟果 實(shí)粉碎，用75~85%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油酸、乙酸乙 醋和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；化） 步驟（a)中乙酸乙醋萃取物用大孔樹脂除雜，先用15%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用75%乙 醇洗脫12個(gè)柱體積，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏；（C)步驟化）中75%乙醇洗脫浸膏 用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1、55:1、35:1、10:1和1:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗 脫得到5個(gè)組分；（d)步驟（C)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為15:1、10:1 和5:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟（d)中組分2用十八烷基硅烷 鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75%的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~10個(gè)柱體 積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I)。
[0010] 進(jìn)一步地，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0011] 進(jìn)一步地，所述用乙醇熱回流提取采用的乙醇濃度為80%。
[0012] 一種藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物（I)和藥學(xué)上可接受的 載體。
[0013] 所述的化合物（I)在制備治療腎癌的藥物中的應(yīng)用。
[0014] 所述的藥物組合物在制備治療腎癌的藥物中的應(yīng)用。
[0015] 本發(fā)明化合物用作藥物時(shí)，可W直接使用，或者W藥物組合物的形式使用。
[0016] 該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I)，其余為藥物學(xué)上可接受的、 對(duì)人和動(dòng)物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0017] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 W及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物W單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等；用于注射時(shí)，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
【附圖說明】 陽〇1引圖1為化合物（I)結(jié)構(gòu)式；
[0019] 圖2為化合物（I)理論ECD值與實(shí)驗(yàn)ECD值比較。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不W此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可W對(duì) 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
[0021] 實(shí)施例1 :化合物（I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0022] 藥材和試劑來源：乙醇、石油酸、乙酸乙醋、正下醇、二氯甲燒為分析純，購自上海 凌峰化學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。紅豆杉的枝葉購 自安徽毫州中藥材市場(chǎng)。
[0023] 制備方法：（a)吳榮英的干燥成熟果實(shí)（10kg)粉碎，用80%乙醇熱回流提取 (2化X3次），合并提取液，濃縮至無醇味化L)，依次用石油酸（化X3次）、乙酸乙醋化LX3 次）和水飽和的正下醇化LX3次）萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物（355g) 和正下醇萃取物；(b)步驟（a)中乙酸乙醋萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，依次用15%乙 醇（8L)和75 % (12L)乙醇洗脫，收集75 %乙醇洗脫液，減壓濃縮得75 %乙醇洗脫物浸膏 (154g) ;(c)步驟化）中75%乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1(8個(gè)柱 體積）、55:1 (8個(gè)柱體積）、35:U6個(gè)柱體積）、10:1 (8個(gè)柱體積）和1:1巧個(gè)柱體積）的 二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到5個(gè)組分；（d)步驟（C)中組分4 (46g)用正相硅膠進(jìn)一步分 離，依次用體積比為15:1 (8個(gè)柱體積）、10:1 (10個(gè)柱體積）和5:U6個(gè)柱體積）的二氯甲 燒-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟（d)中組分2 (27g)用十八烷基硅烷鍵合的反相 硅膠分離，用體積百分濃度為75%的甲醇水溶液等度洗脫，收集8-10個(gè)柱體積洗脫液，洗 脫液減壓濃縮得到純的化合物（I) (35mg)。
[0024]結(jié)構(gòu)確證：HR-ESIMS顯示[M+Na]+為m/z605. 2406,結(jié)合核磁特征可得分子式 為〔32&8〇1〇,不飽和度為14。核磁共振氨譜數(shù)據(jù)5h(卵m，DMS0-de，400MHz) :H-3(4.97， s)，H-5(2. 95,t，J= 6. 7)，H-6(2. 22,d，J= 6. 7)，H-1U5. 73,dd，J= 4. 4,3. 1)， H-12 (2. 04,dd，J= 18. 7, 4. 4)，H-12 (2. 46,dd，J= 18. 7, 3. 1)，H-14 (1. 69,dd，J= 12. 2, 7. 0)，H-15 (2. 59,dd，J= 18. 4, 7. 0)，H-15 (2. 93,dd，J= 18. 4,12. 2)，H-17 巧.04， s)，H-18(0. 98,s)，17,s)，H-21(7. 24,br，s)，H-22 巧.15,br，s)，H-23(7. 31， t，J= 1. 7)，H-28 (0. 80,s)，H-29 (0. 77,s)，H-30 (3. 32,s)，H-3,化.96,q，J= 7. 2)， H-4,（1.83，d，J= 7.2)，H-5,（1.86，br，s)，8-〇H〇3.97，br，s)，7-〇CH3(3.59，s);核磁共振 碳譜數(shù)據(jù) 5c(卵m，DMSO-de，lOOHz) :209. 4 (C，1-C)，78. 7 (C，2-C)，84. 6 (CH，3-C)，39. 1 (C， 4-C)，46. 9 (CH，5-C)，30. 5 (邸2,6-C)，172. 8 (C，7-C)，60. 3 (C，8-C)，136. 4 (C，9-C)，51. 1 (C， 10-C)，126. 4 (CH，11-C)，31. 2 (邸2,12-C)，34. 7 (C，13-C)，38. 7 (CH，14-C)，28. 8 (邸2,15-C)， 169. 0 (C，16-C)，81. 5 (CH，17-C)，23. 1 (細(xì)3, 18-C)，14. 4 (畑3, 19-C)，121. 5 (C，20-C)， 140. 1 (CH，21-C)，109. 0 (CH，22-C)，143. 1 (CH，23-C)，19. 8 (邸3, 28-C)，22. 9 (邸3, 29-C)， 63. 7(CH，30-C)，166.l(C，r-C)，127. 3(C，2, -C)，139. 0(CH，3, -C)，14. 1(邸3,4' -C)， 12. 3畑3, 5' -C)，51.6畑3, 7-0邸3);碳原子標(biāo)記參見圖1。紅外光譜顯示該化合物含有徑 基和幾基基團(tuán)（3438cm1和1728cm1)。"CNMR和DEPT譜共顯示32個(gè)碳信號(hào)，包括屯個(gè)甲 基（一個(gè)含氧甲基），十個(gè)次甲基（五個(gè)締控碳，兩個(gè)含氧碳），=個(gè)亞甲基W及十二個(gè)季 碳（兩個(gè)含氧碳，四個(gè)幾基碳，立個(gè)締控碳）。此外，該化合物含有一個(gè)典型的P取代巧 喃環(huán)（5H7. 24,br，S，1H;6. 15,br，S，1H和 7. 31，t，J= 1. 7 ; 5C121. 5,140. 1，109. 0 和 143. 1)，一個(gè)酬幾基（5C209. 4)和S個(gè)醋幾基（5C172. 8,169. 0 和 166. 1)。古和"CNMR 數(shù)據(jù)的分析表明該化合物為巧樣苦素類化合物。兩個(gè)碳信號(hào)（5 口8.7, 2-C;63. 7, 30-C) W及質(zhì)子信號(hào)（5冊(cè).32,S，H-30)表明該化合物含有一個(gè)30, 2-環(huán)氧基團(tuán)。HMBC譜中， &-19 ( 5H1. 17,S)和H-30 (S冊(cè).32,S)與C-1 ( 5C209. 4)的相關(guān)性表明C-1為酬幾基。此 夕F，-〇邸3(8冊(cè).59,S)與C-7(5C172. 8)，&-6(5 肥.22,d，J=6. 7Hz)與C-5(5C46. 9) 和C-7(5C172.8)的相關(guān)性表明C-6(5C30. 5)連有一個(gè)甲氧幾基片段。根據(jù)HMBC譜中 H-17 巧.04,S)與C-20 (SC121. 5)，C-21 ( 5C140. 1)和C-22 (SC109. 0)的相關(guān)性，可推斷 巧喃環(huán)位于C-17(SC81.5)位上。此外，C-3(SC84.6)位上連有一個(gè)己豆酷氧基。HMBC譜 中，H-3'（S冊(cè).96,q，J= 7. 2Hz)和H-3( 5H4. 97,S)與C-r(SC166. 1)的相關(guān)性驗(yàn)證 了上述推論。綜合氨譜、碳譜、HMBC譜和ROESY譜，W及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基 本確定該化合物如圖1所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過ECD試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致 (圖2)。
[00巧]實(shí)施例2 :化合物（I)藥理作用試驗(yàn)
[0026] -、材料和儀器
[0027] 人腎癌RC-2細(xì)胞株購于ATCC細(xì)胞庫（美國(guó)）。分析純薦糖購于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué) 試