用于聚合酶鏈反應(yīng)測(cè)定的組合物、方法和系統(tǒng)的制作方法
【專利說明】用于聚合酶鏈反應(yīng)測(cè)定的組合物、方法和系統(tǒng) 陽(yáng)oou 交叉引用
[0002] 本申請(qǐng)要求于2013年3月8提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)第61/775415號(hào)的權(quán)益，該申請(qǐng) 通過引用并入本文。 柳的]背景
[0004]測(cè)定是用于確定樣品中組分的存在、量、活性和/或其它性質(zhì)或特性的研究程序。 通常，樣品內(nèi)的感興趣的組分，例如核酸、酶、病毒、細(xì)菌僅為樣品的次要成分，并且因此，可 能難W檢測(cè)或定量。 陽(yáng)0化]生物測(cè)定的實(shí)例為聚合酶鏈反應(yīng)（PCR)測(cè)定。PCR的某些類型可W在特定的設(shè)置 中是定量的。例如，實(shí)時(shí)PCR(其通常設(shè)及使用巧光探針監(jiān)測(cè)擴(kuò)增的進(jìn)展）可允許定量在樣 品中的祀核酸，特別是在祀核酸在某種程度上是豐富的情況下。
[0006] 微滴式數(shù)字聚合酶鏈反應(yīng)（ddPCR)是用于定量測(cè)量絕對(duì)DNA濃度的普遍的工具。 與從實(shí)時(shí)PCR反應(yīng)獲得的相對(duì)測(cè)量相反，ddPCR使得能夠絕對(duì)測(cè)量祀脫氧核糖核酸值NA)、 核糖核酸（RNA)分子。絕對(duì)定量在若干種應(yīng)用中是有利的，例如測(cè)量拷貝數(shù)變異，檢測(cè)稀有 序列和突變，并分析基因表達(dá)反應(yīng)。
[0007] 概述
[0008] 在一方面中，本公開內(nèi)容提供產(chǎn)生多個(gè)微滴的方法。所述方法包括：提供油組 合物，所述油組合物包含油和含氣表面活性劑；提供含水組合物，所述含水組合物包含 革己核酸、非離子型非含氣表面活性劑（non-ionicnon-fluorosurfactant)和嵌入染料 (intercalatingdye);和使油組合物與含水組合物接觸，從而產(chǎn)生懸浮在連續(xù)相中的多個(gè) 微滴。所述含氣表面活性劑可W選自由W下組成的組：
[0009]
[0010] 其中A和B中的每個(gè)為氧做或NRi，其中Ri為H或烷基；m1和m2中的每個(gè)為從 約10至100的數(shù)字；n為從約10至60的數(shù)字；
[0011]
陽(yáng)〇1引其中m3為從約20至50的數(shù)字；n2為從約8至30的數(shù)字；并且R為H或烷基訊 [0013]
[0014] 其中ni4為從約20至50的數(shù)字；n3和n4中的每個(gè)是從約5至25的數(shù)字；n日是從約 0至3的數(shù)字；并且Ri和R2中的每個(gè)是烷基或H。在某些情況下，含氣表面活性劑可為非離 子型。在某些情況下，含氣表面活性劑可包含式I、式II和/或式III的混合物。例如，含 氣表面活性劑可W包含式I和式II的混合物。在某些實(shí)例中，該混合物還可包含式XI:
[0015]
[0016]
[0017] 其中n為從約10至100的數(shù)字。
[001引在某些情況下，含氣表面活性劑可W具有至少約90% (w/w)的純度。例如，含氣表 面活性劑可W包含至少約90% (w/w)的式I和式II的混合物。此外，式I和式II的混合 物可為至少約90:10(w/w)的比率。在某些情況下，含氣表面活性劑混合物可包含約0.5% 至5% (w/w)的式XI。在某些情況下，油制劑可包含小于約0.5% (w/w)的式XI。
[0019] 在某些情況下，方法還可W包括熱循環(huán)多個(gè)微滴W擴(kuò)增祀核酸和檢測(cè)祀核酸。在 某些情況下，含氣表面活性劑可具有式I。A和B中的每個(gè)可為0。mi和m2中的每個(gè)可為從 約20至40,并且n可為從約15至30。例如，mi和m2中的每個(gè)可為約35并且n可為約22。 在某些情況下，含氣表面活性劑可W包含式I和式II的混合物。在某些情況下，混合物還 可W包含式XI。含氣表面活性劑可具有至少約0.5的親水親脂平衡值。含氣表面活性劑可 具有小于約5. 0的親水親脂平衡值。含氣表面活性劑可具有在從約0. 5至5. 0的范圍中的 親水親脂平衡值。例如，含氣表面活性劑可具有約1. 5的親水親脂平衡值。
[0020] 非離子型非含氣表面活性劑可為環(huán)氧乙燒和環(huán)氧丙烷的共聚物。非離子型非含 氣表面活性劑可為聚環(huán)氧乙燒-聚環(huán)氧丙烷-聚環(huán)氧乙燒的=嵌段共聚物。在某些實(shí)例 中，非離子型非含氣表面活性劑可為的uronfc?。例如，非離子型非含氣表面活性劑可為PiuroiiicKF-98。Piuronic"'F-98的濃度可在從約0. 1%-3.0% (重量百分比）的范圍 內(nèi)。
[0021] 油可包括氣油。氣油可為2-S氣甲基-3-乙氧基十二氣己燒化陽(yáng)-7500)或 1，1，1，2,2,3,4,5,5,5-十氣-3-甲氧基-4-(^氣甲基）戊燒化尸6-7300)。嵌入染料可為 EvaGreen嚴(yán)或SYB及(?陸e斌。連續(xù)相可包含油。
[0022] 多個(gè)微滴可為被油包封的含水微滴。在某些情況下，在約5次熱循環(huán)之后，在含水 微滴的水相之外可檢測(cè)到小于約5%的嵌入染料。在某些情況下，在約10次熱循環(huán)之后，在 含水微滴的水相之外可檢測(cè)到小于約5%的嵌入染料。在某些情況下，在約20次熱循環(huán)之 后，在含水微滴的水相之外可檢測(cè)到小于約5%的嵌入染料。在某些情況下，在約50次熱循 環(huán)之后，在含水微滴的水相之外可檢測(cè)到小于約5%的嵌入染料。在某些情況下，在約100 次熱循環(huán)之后，在含水微滴的水相之外可檢測(cè)到小于約5%的嵌入染料。
[0023] 在某些情況下，在約5次熱循環(huán)之后，在含水微滴的水相之外可檢測(cè)到小于約 10%的嵌入染料。在某些情況下，在約10次熱循環(huán)之后，在含水微滴的水相之外可檢測(cè)到 小于約10%的嵌入染料。在某些情況下，在約20次熱循環(huán)之后，在含水微滴的水相之外可 檢測(cè)到小于約10%的嵌入染料。在某些情況下，在約50次熱循環(huán)之后，在含水微滴的水相 之外可檢測(cè)到小于約10%的嵌入染料。在某些情況下，在約100次熱循環(huán)之后，在含水微滴 的水相之外可檢測(cè)到小于約10%的嵌入染料。
[0024] 在熱循環(huán)之后，多個(gè)微滴中的每個(gè)平均可包含小于5. 5X1〇12個(gè)祀核酸。檢測(cè)可包 括測(cè)量來自嵌入染料的巧光。
[00巧]本公開內(nèi)容的另一方面提供微滴發(fā)生器，所述微滴發(fā)生器包括與載體流體源流體 連通的第一通道和與樣品源流體連通的第二通道。第一通道在交叉點(diǎn)處與第二通道會(huì)合。 微滴通道與交叉點(diǎn)流體連通。在使用期間，在交叉點(diǎn)處產(chǎn)生的包含一個(gè)或更多個(gè)微滴的乳 液沿著微滴通道流動(dòng)。載體流體源包含油和含氣表面活性劑。含氣表面活性劑可W選自由 W下組成的組：
[00261
[0027] 其中A和B中的每個(gè)為氧（0)或NRi，其中Ri為H或烷基；mi和m2中的每個(gè)為從 約10至100的數(shù)字；n為從約10至60的數(shù)字；
[0028]
[0029]
[0030] 其中m3為從約20至50的數(shù)字；n2為從約8至30的數(shù)字；R為H或烷基訊
[0031]
陽(yáng)0巧其中ni4為從約20至50的數(shù)字；n3和n沖的每個(gè)為從約5至25的數(shù)字；n5為從 約0至3的數(shù)字；并且Ri和R2中的每個(gè)為烷基或H。樣品源可W包含祀核酸、非離子型非 含氣表面活性劑和嵌入染料。在某些情況下，含氣表面活性劑可為非離子型。在某些情況 下，含氣表面活性劑可W是式I、式II和/或式III的混合物。例如，含氣表面活性劑可W 是式I和式II的混合物。在某些實(shí)例中，混合物還可包含式XI:
[0033]
[0034] 其中n為從約10至100的數(shù)字。
[0035] 在某些情況下，含氣表面活性劑可W具有至少約90% (w/w)的純度。例如，含氣表 面活性劑可W包含至少90% (w/w)的式I和式II的混合物。此外，式I和式II的混合物 可為至少約90:10(w/w)的比率。在某些情況下，含氣表面活性劑混合物可包含約0. 5%至 5% (w/w)的式XI。在某些情況下，油制劑可包含小于約0.5% (w/w)的式XI。
[0036] 在另一方面中，本公開內(nèi)容提供組合物，所述組合物包含含氣表面活性劑、非離子 型非含氣表面活性劑和嵌入染料。含氣表面活性劑可選自由W下組成的組：
[0037]
陽(yáng)03引其中A和B中的每個(gè)為氧（0)或NRi，其中Ri為H或烷基；m1和m2中的每個(gè)為從 約10至100的數(shù)字；n為從約10至60的數(shù)字；
[0039]
柳4〇] 其中m3為從約20至50的數(shù)字；n2為從約8至30的數(shù)字；R為H或烷基訊
[0041 ]
[00創(chuàng)其中ni4為從約20至50的數(shù)字，n3和n沖的每個(gè)為從約5至25的數(shù)字，并且n5 為從約0至3的數(shù)字；并且R郝R2中的每個(gè)為H或烷基。在某些情況下，含氣表面活性劑 可為非離子型。在某些情況下，含氣表面活性劑可W是式I、式II和/或式III的混合物。 例如，含氣表面活性劑可W是式I和式II的混合物。在某些實(shí)例中，混合物還可包含式XI。 在某些情況下，含氣表面活性劑可W具有至少約90% (w/w)的純度。例如，含氣表面活性劑 可W包含至少90% (w/w)的式I和式II的混合物。此外，式I和式II的混合物可為至少 約90:10(w/w)的比率。在某些情況下，含氣表面活性劑混合物可包含約0.5%至5% (w/w) 的式XI。在某些情況下，油制劑可包含小于約0.5% (w/w)的式XI。
[0043] 在另一方面中，本公開內(nèi)容提供式I的共聚物，其中A和B中的每個(gè)為氧（0)或NRi，其中Ri為H或烷基；mi和m2中的每個(gè)為從約10至100的數(shù)字；并且n為從約10至60 的數(shù)字。在某些情況下，共聚物可具有至少約90% (w/w)的純度。
[0044]
[0045] 在另一方面中，本公開內(nèi)容提供合成共聚物的方法。該方法包括在草酷氯和催化 量的二甲基甲酯胺值MF)的存在下將全氣聚酸簇酸在第一氣油中的溶液加熱W形成酷基 氯。接著，在包含第二氣油和酸的溶劑中，可W使酷基氯與聚乙二醇在胺的存在下反應(yīng)W形 成包含含有全氣聚酸的共聚物的產(chǎn)物混合物，其中聚乙二醇的量為酷基氯的約1/2當(dāng)量。 然后，可W將含有全氣聚酸的共聚物從產(chǎn)物混合物中分離。
[0046] 從W下的詳細(xì)描述中，本發(fā)明的另外的方面和優(yōu)點(diǎn)對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員將容易是 明顯的，其中僅示出和描述本公開內(nèi)容的例證性實(shí)施方案。如將意識(shí)到的是，本公開內(nèi)容能 夠具有其他和不同的實(shí)施方案，并且其若干細(xì)節(jié)能夠在各種明顯的方面具有修改，所有運(yùn) 些都不脫離本公開內(nèi)容。因此，附圖和描述在本質(zhì)上將被視為例證性的、且非限制性的。
[0047] 通過引用并入
[0048] 在本說明書中提到所有的出版物和專利申請(qǐng)通過引用并入本文，如同每個(gè)單獨(dú)的 出版物或?qū)＠暾?qǐng)被具體地且單獨(dú)地指示為通過引用并入。
[0049] 附圖簡(jiǎn)述
[0050] 本發(fā)明的新穎特征在所附的權(quán)利要求中被特別地陳述。通過參考W下的詳細(xì)描述 (其陳述例證性實(shí)施方案），將獲得本發(fā)明的特征和優(yōu)點(diǎn)的更好的理解，在例證性實(shí)施方案 中利用本發(fā)明的原理和附圖，在附圖中：
[0051] 圖1是DNA嵌入染料的浸出率對(duì)簇酸IV(K巧tox? 157FS巧（簇酸XI)被用作 代表性實(shí)施例）的濃度的依賴性的圖示；
[0052] 圖2是根據(jù)本公開內(nèi)容的實(shí)施方案在簇酸XI、含氣表面活性劑xn和HFE-7500中 的相對(duì)于時(shí)間的歸一化染料響應(yīng)的圖示；
[0053] 圖3例證根據(jù)本公開內(nèi)容的實(shí)施方案的用于染料浸出（其中SYB民飯Green作為 代表性的DNA嵌入染料）的離子對(duì)介導(dǎo)的機(jī)制；
[0054] 圖4是根據(jù)本公開內(nèi)容的實(shí)施方案的表面活性劑I的工作濃度范圍的粗滴定 (coarsetitration)的圖不； 陽(yáng)化5] 圖5是根據(jù)本公開內(nèi)容的實(shí)施方案的PluronicK.類型和濃度對(duì)微滴穩(wěn)定性的影響 的圖示；
[0056] 圖6是根據(jù)本公開內(nèi)容的實(shí)施方案的PlufOi曲戸F，縱的濃度對(duì)微滴大小的影響 的圖示；
[0057] 圖7示意性地例證根據(jù)本公開內(nèi)容的實(shí)施方案的微滴發(fā)生器；
[0058] 圖8A例證在優(yōu)化的微滴式數(shù)字聚合酶鏈反應(yīng)（ddPCR)體系中的單個(gè)孔的圖示，該 體系包含作為連續(xù)相的在肥F-7500中的2. 5mM含氣表面活性劑XII、和作為水相的抑~ 8. 3-8. 4 的緩沖的 0. 50-0. 75%w/wPluronic飯F(tuán)-98,使用EvaGreen飯.嵌入染料；
[0059] 圖8B例證根據(jù)本公開內(nèi)容的實(shí)施方案的在優(yōu)化的ddPCR體系中的96孔的圖示， 該體系包含作為連續(xù)相的在肥F-7500中的2. 5mM含氣表面活性劑XII、和作為水相的抑~ 8. 3-8. 4 的緩沖的 0. 50-0. 75%w/wPluroilic?F-98,使用EvaGreeni嚴(yán)嵌入染料； W60] 圖9示出化合物XI的叩NMR光譜； W61] 圖10示出化合物XI的"CNMR光譜；
[0062] 圖11示出化合物XI的FTIR光譜；
[0063] 圖12示出用于基于它的i9pNMR光譜計(jì)算化合物XI的平均分子量的感興趣的峰；
[0064] 圖13示出化合物XII的叩NMR光譜； 陽(yáng)0化]圖14示出化合物XII的"CNMR光譜；
[0066] 圖15示出化合物XII的FTIR光譜；
[0067] 圖16A示出化合物XI標(biāo)準(zhǔn)的準(zhǔn)一級(jí)動(dòng)力學(xué)浸出圖； W側(cè)圖1她示出用于計(jì)算化合物XII的純度的校準(zhǔn)曲線； W例圖17例證根據(jù)本公開內(nèi)容的實(shí)施方案的在優(yōu)化的ddPCR體系中的96孔的圖示， 該體系包含各種含氣表面活性劑混合物，使用EvaGreen瑕嵌入染料。
[0070] 詳述
[0071] 雖然本發(fā)明的各種實(shí)施方案在本文中已被示出和描述，但對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員明顯 的是，運(yùn)些實(shí)施方案通過僅實(shí)施例的方式被提供。本領(lǐng)域技術(shù)人員在不脫離本發(fā)明的情況 下可W想到許多變型、改變和替代。應(yīng)當(dāng)理解的是，本文描述的本發(fā)明的實(shí)施方案的各種替 代方案可在實(shí)踐本發(fā)明中被利用。
[0072] 本公開內(nèi)容提供用于在聚合酶鏈反應(yīng)測(cè)定諸如例如微滴式數(shù)字聚合酶鏈反應(yīng) (ddPCR)測(cè)定中使用核酸嵌入染料的設(shè)備、系統(tǒng)、方法和組合物。本公開內(nèi)容的設(shè)備、系統(tǒng)、 方法和組合物可被用于與各種類型的核酸一起使用，所述各種類型的核酸例如脫氧核糖核 酸值NA)、核糖核酸（RNA)、及其變體。本公開內(nèi)容的設(shè)備、系統(tǒng)、方法和組合物可W防止、 減少或抑制在PCR測(cè)定期間嵌入染料從含水微滴浸出到連續(xù)相中（本文中也稱為"染料浸 出"）。通常，本文描述的本公開內(nèi)容設(shè)及雙相表面活性劑體系，其使得能應(yīng)用除了化qman 探針之外的巧光嵌入染料，W用于在PCR中使用。
[0073] 在某些實(shí)施方案中，雙相體系是包含含氣表面活性劑的油相和包含非離子型非含 氣表面活性劑的水相。在某些情況下，油是氣油，含氣表面活性劑是式I的=嵌段聚合物， 并且水相是式VI的S嵌段聚合物PEG-PPG-PEG的緩沖溶液。在某些情況下，含氣表面活性 劑可W是非離子型。在某些情況下，含氣表面活性劑可包含式I、式II和/或式III的混合 物。例如，含氣表面活性劑可包含式I和式II的混合物。在某些實(shí)施例中，混合物還可包 含式XI。
[0074] 在一方面中，本公開內(nèi)容提供獲得高純度的含氣表面活性劑的合成方法。在微滴 產(chǎn)生、熱循環(huán)和微滴詢問工作流程（化opletinterrogationworkflow)期間，運(yùn)些高純度 的含氣表面活性劑可允許足夠量的嵌入染料保持在微滴中。本文獲得的高純度的含氣表面 活性劑還可W利于染料浸出現(xiàn)象的機(jī)制的更好或W其他方式改進(jìn)的理解。
[00巧]染料浸出背后的機(jī)制的意外實(shí)現(xiàn)，加上用于生產(chǎn)高純度含氣表面活性劑的方法， 提供對(duì)ddPCR測(cè)定的關(guān)鍵缺點(diǎn)的系統(tǒng)化解決方案。包含本文描述的連續(xù)相和水相的特定組 合的微乳液提供非離子型穩(wěn)定化微滴W用于在ddPCR測(cè)定中應(yīng)用DNA嵌入染料。
[0076] 制推含氣表而活忡劑的方法
[0077] 在一方面中，本公開內(nèi)容提供合成含有全氣聚酸的含氣表面活性劑的方法。方案 1示出本公開內(nèi)容的代表性含氣表面活性劑XII和示例性簇酸XI起始物料。
[0078]
[0079] 用于形成含有全氣聚酸的含氣表面活性劑的方法包括：(a)在草酷氯的存在下加 熱全氣聚酸簇酸在氣油中的溶液w形成酷基氯，比如全氣聚酸酷基氯；化）使酷基氯與聚 乙二醇反應(yīng)W形成包含含有全氣聚酸的含氣表面活性劑的產(chǎn)物混合物；和（C)從產(chǎn)物混合 物中分離含有全氣聚酸的含氣表面活性劑，W提供含氣表面活性劑產(chǎn)品。運(yùn)些合成操作在 關(guān)于作為代表性實(shí)施例的含氣表面活性劑X的方案2 (見下文）中概括。
[0080]
[0081]操作 1
[0082] 可W使用各種試劑來實(shí)現(xiàn)全氣聚酸簇酸起始物料向全氣聚酸酷基氯的轉(zhuǎn)化。在某 些情況下，通過用草酷氯（C2O2CI2)處理全氣聚酸簇酸來實(shí)現(xiàn)運(yùn)種轉(zhuǎn)化。在其他情況下，可 通過全氣聚酸簇酸與亞硫酷氯（S0C12)反應(yīng)來實(shí)現(xiàn)運(yùn)種轉(zhuǎn)化。在又其他情況下，五氯化憐 ((pels)或=氯化憐（PC13)被用來完成運(yùn)種轉(zhuǎn)變。在某些情況下，簇酸起始物料向相應(yīng)的 酷基氯的轉(zhuǎn)化通過與四氯化碳和=苯基麟（P化3)的反應(yīng)來實(shí)現(xiàn)。在某些情況下，通過與= 聚氯氯（C3N3CI3)的反應(yīng)來實(shí)現(xiàn)該轉(zhuǎn)變。
[0083] 在某些情況下，用于將簇酸起始物料轉(zhuǎn)化為酷基氯產(chǎn)物的試劑的量為在約0. 1當(dāng) 量（當(dāng)量）至100當(dāng)量、或約1. 0當(dāng)量到10. 0當(dāng)量的范圍內(nèi)。在某些情況下，所用的試劑 的量為在約1. 0當(dāng)量-2. 0當(dāng)量、約1. 0當(dāng)量-3. 0當(dāng)量、約1. 0當(dāng)量-4. 0當(dāng)量、約1. 0當(dāng) 量-5. 0當(dāng)量、約1. 0當(dāng)量-6. 0當(dāng)量、約1. 0當(dāng)量-7. 0當(dāng)量、約1. 0當(dāng)量-8. 0當(dāng)量、約1. 0 當(dāng)量-9. 0當(dāng)量、約2. 0當(dāng)量-3. 0當(dāng)量、約2. 0當(dāng)量-4. 0當(dāng)量、約2. 0當(dāng)量-5. 0當(dāng)量、約2. 0 當(dāng)量-6. 0當(dāng)量、約2. 0當(dāng)量-7. 0當(dāng)量、約2. 0當(dāng)量-8. 0當(dāng)量、約2. 0當(dāng)量-9. 0當(dāng)量、約2. 0 當(dāng)量-10. 0當(dāng)量、約3. 0當(dāng)量-4. 0當(dāng)量、約3. 0當(dāng)量-5. 0當(dāng)量、約3. 0當(dāng)量-6. 0當(dāng)量、約 3. 0當(dāng)量-7. 0當(dāng)量、約3. 0當(dāng)量-8. 0當(dāng)量、約3. 0當(dāng)量-9. 0當(dāng)量、約3. 0當(dāng)量-10. 0當(dāng)量、 約4. 0當(dāng)量-5. 0當(dāng)量、約4. 0當(dāng)量-6. 0當(dāng)量、約4. 0當(dāng)量-7. 0當(dāng)量、約4. 0當(dāng)量-8. 0當(dāng) 量、約4. 0當(dāng)量-9. 0當(dāng)量、約4. 0當(dāng)量-10. 0當(dāng)量、約5. 0當(dāng)量-6. 0當(dāng)量、約5. 0當(dāng)量-7. 0 當(dāng)量、約5. 0當(dāng)量-8. 0當(dāng)量、約5. 0當(dāng)量-9. 0當(dāng)量、約5. 0當(dāng)量-10. 0當(dāng)量、約6. 0當(dāng) 量-7. 0當(dāng)量、約6. 0當(dāng)量-8. 0當(dāng)量、約6. 0當(dāng)量-9. 0當(dāng)量、約6. 0當(dāng)量-10. 0當(dāng)量、約7. 0 當(dāng)量-8. 0當(dāng)量、約7. 0當(dāng)量-9. 0當(dāng)量、約7. 0當(dāng)量-10. 0當(dāng)量、約8. 0當(dāng)量-9. 0當(dāng)量、約 8. 0當(dāng)量-10. 0當(dāng)量、或約9. 0當(dāng)量-10. 0當(dāng)量的范圍中。在某些情況下，所用的試劑的量 為至少約1. 0當(dāng)量、約1. 5當(dāng)量、約2. 0當(dāng)量、約2. 5當(dāng)量、約3. 0當(dāng)量、約3. 5當(dāng)量、約4. 0 當(dāng)量、約4. 5當(dāng)量、約5. 0當(dāng)量、約5. 5當(dāng)量、約6. 0當(dāng)量、約6. 5當(dāng)量、約7. 0當(dāng)量、約7. 5 當(dāng)量、約8. 0當(dāng)量、約8. 5當(dāng)量、約9. 0當(dāng)量、約9. 5當(dāng)量、或約10. 0當(dāng)量。在某些情況下， 簇酸向酷基氯的轉(zhuǎn)化可通過用約5. 0當(dāng)量的草酷氯處理來實(shí)現(xiàn)。
[0084] 在某些情況下，簇酸向相應(yīng)的酷基氯的轉(zhuǎn)化在氣溶劑中實(shí)施。在某些情況 下，溶劑是全氣烷基酸。在某些情況下，全氣烷基酸是甲基九氣下基酸（HFE-7100)、 1，1，1，2,2,3,4,5,5,5-十氣-3-甲氧基-4-(S氣甲基）戊燒化FE-7300)或3-乙氧 基-1，1，1，2, 3, 4, 4, 5, 5, 6, 6, 6-十二氣-2-S氣甲基-己燒化FE-7500)。
[00化]在某些情況下，簇酸向酷基氯的轉(zhuǎn)化還通過添加反應(yīng)催化劑來促進(jìn)。在某些情況 下，催化劑是相對(duì)于反應(yīng)物小量使用的物質(zhì)，其增加或W其他方式修改反應(yīng)的速率而在過 程中沒有被明顯地消耗。在某些情況下，酷基氯的形成通過與亞硫酷氯或草酷氯反應(yīng)來實(shí) 現(xiàn)，并且添加二甲基甲酯胺值M巧作為反應(yīng)催化劑。在某些情況下，所使用的催化劑的量為 在約0. 001當(dāng)量-10當(dāng)量或約0. 01當(dāng)量至1. 0當(dāng)量的范圍內(nèi)。在某些情況下，所使用的催化 劑的量為在約0. 01當(dāng)量-0. 10當(dāng)量、約0. 01當(dāng)量-0. 20當(dāng)量、約0. 01當(dāng)量-0. 30當(dāng)量、約 0. 01當(dāng)量-0. 40當(dāng)量、約0. 01當(dāng)量-0. 50當(dāng)量、約0. 01當(dāng)量-0. 60當(dāng)量、約0. 01當(dāng)量-0. 70 當(dāng)量、約0. 01當(dāng)量-0. 80當(dāng)量、約0. 01當(dāng)量-0. 90當(dāng)量、約0. 1當(dāng)量-0. 20當(dāng)量、約0. 1當(dāng) 量-0.30當(dāng)量、約0. 1當(dāng)量-0.4當(dāng)量、約0. 1當(dāng)量-0.5當(dāng)量、約0. 1當(dāng)量-0.6當(dāng)量、約0. 1 當(dāng)量-0.7當(dāng)量、約0. 1當(dāng)量-0.8當(dāng)量、約0. 1當(dāng)量-0.9當(dāng)量、約0. 1當(dāng)量-1.