一種用于治療慢性粒細胞性白血病的新的黃烷酮類化合物的制作方法
【技術(shù)領域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領域，具體涉及從刺五加的干燥根及根莖中分離得到的一種 黃烷酮類化合物，含其的藥物組合物及其制備方法和應用。
【背景技術(shù)】
[0002] 刺五加Acanthopanaxsenticosu(Rupr.EtMaxim)Harms的干燥根及根莖入藥，其 莖、葉也可藥用。刺五加與人參同屬于五加科植物，是一種落葉植物，因小枝密生針刺而得 名。主產(chǎn)于中國東北部（黑龍江、吉林、遼寧、河北）、俄羅斯遠東地區(qū)及日本北海道等地，刺 五加是我國東北地區(qū)典型的藥用植物，味辛、微苦、性溫、無毒。刺五加具有益氣健脾、補腎 安神、益精壯骨之功效。本草綱目稱刺五加為"本經(jīng)上品"，能"補中益氣，堅筋骨強意志，久 服輕身耐老"。民間有"寧得一把五加，不用金玉滿車"的說法。以刺五加為原料的中成藥 種類繁多，如刺五加片、刺五加注射液、安神補腦膠囊、腦安片等；另外中醫(yī)處方對刺五加需 求量也較大，刺五加全國年需求量500萬公斤以上，使刺五加的市場供應日趨緊張。
[0003] 刺五加化學成分復雜，根和根莖的主要成分為酚苷類化合物，實驗證明刺五 加總苷是其生物活性成分之一。已分離出七種刺五加苷（A、B、C、D、E、F、G)含量比例 8:30:10:12:4:2:1，分別為胡蘿卜苷（A)，紫丁香酚苷（B)，乙基半乳糖普（C)，紫丁香樹脂 酚二糖苷（D)，此外還有E、F和G，以及L。近些年對刺五加莖葉的研究不斷深入，從葉中分 離得到齊墩果酸為配基的五加葉苷I、K、L和M等。
[0004] 現(xiàn)代藥理研究表明刺五加可增強機體非特異性防御能力，除具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫 瘤、抗衰老、抗輻射、抗損傷及抗疲勞作用外，還可治療心腦血管疾病、糖尿病、神經(jīng)衰弱等 癥。近年來，經(jīng)過對刺五加生理活性和化學成分方面的研究，表明刺五加有效成分為苷類， 其中刺五加苷B、E是主要有效成分。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種從刺五加的干燥根及根莖中分離得到的一種黃烷酮類 化合物，含其的藥物組合物及其制備方法和應用。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實現(xiàn)的：
[0007] 具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I):
[0008]
[0009] 所述的化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：(a)將刺五加的干燥根及根 莖粉碎，用70~80 %乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙 酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b) 步驟（a)中乙酸乙酯萃取物用大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫6個柱體積，再用70%乙 醇洗脫8個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟（b)中 70 %乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為85:1、50:1、25:1、10:1和1:1的二 氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到5個組分；（d)步驟（c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次 用體積比為15:1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟（d)中 組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為70%的甲醇水溶液等度洗 脫，收集8~12個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I)。
[0010] 進一步地，步驟（a)中，用75%乙醇熱回流提取，合并提取液。
[0011] 進一步地，所述大孔樹脂為D101型大孔吸附樹脂。
[0012] -種藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物（I)和藥學上可接受的 載體。
[0013] 所述的化合物（I)在制備治療慢性粒細胞白血病的藥物中的應用。
[0014] 所述的藥物組合物在制備治療慢性粒細胞白血病的藥物中的應用。
[0015] 本發(fā)明化合物用作藥物時，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。
[0016] 該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I)，其余為藥物學上可接受的、 對人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0017] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等；用于注射時，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
【附圖說明】
[0018] 圖1為化合物（I)結(jié)構(gòu)式；
[0019] 圖2為化合物（I)計算E⑶和實驗E⑶圖。
【具體實施方式】
[0020] 下面結(jié)合實施例進一步說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發(fā)明作了詳細說明，本領域的普通技術(shù)人員應當理解，可以對 本發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實質(zhì)和范圍。
[0021] 主要材料、試劑來源及儀器類型：
[0022] 乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化學試劑有限 公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學試劑有限公司。
[0023] 實施例1 :化合物（I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0024] (a)刺五加的干燥根及根莖（10kg)粉碎，用75%乙醇熱回流提?。?0LX3次）， 合并提取液，濃縮至無醇味（6L)，依次用石油醚（6LX3次）、乙酸乙酯（6LX3次）和水飽 和的正丁醇（6LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物（381g)和正丁醇 萃取物；(b)步驟（a)中乙酸乙酯萃取物用D101大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫6個柱 體積，再用70 %乙醇洗脫8個柱體積，收集70 %洗脫液，減壓濃縮得70 %乙醇洗脫濃縮物 (131g) ;(c)步驟（b)中70 %乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為85:1(8個 柱體積）、50:1 (8個柱體積）、25:1 (8個柱體積）、10:1 (10個柱體積）和1:1 (8個柱體積） 的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到5個組分；（d)步驟（c)中組分4 (27g)用正相硅膠進一步 分離，依次用體積比為15:1 (8個柱體積）、10:1 (8個柱體積）和5:1 (6個柱體積）的二氯 甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟（d)中組分2 (18g)用十八烷基硅烷鍵合的反 相硅膠分離，用體積百分濃度為70 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~12個柱體積洗脫液， 洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I) (30mg)。
[0025] 結(jié)構(gòu)確證：黃色無定形粉末；HR-ES頂S顯示[M+Na]+為m/z387. 0800,結(jié)合 核磁特征可得分子式為C21H1606,不飽和度為14。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)5H(ppm，DMS0-d6， 800MHz) :H-2(5. 84,s)，H-5(7. 91，d，J= 8. 5)，H-6(6. 63,d，J= 8. 5)，H-2'，6'（7. 28， m)，H-3'，5'（7. 33,m)，H-4'（7. 29,m)，H-2"（6. 47,d，J= 6. 4)，H-6"（3. 87,d，J= 6.4)，4"-Me(1.01，s)，4"-Me(1.31，s);核磁共振碳譜數(shù)據(jù)Sc(ppm，DMS0-d6,200MHz): 94. 2 (CH，2-C)，196. 6 (C，3-C)，190. 4 (C，4-C)，115. 1 (C，4a-C)，129. 2 (CH，5-C)，104. 5 (CH， 6-C)，164. 2 (C，7-C)，112. 3 (C，8-C)，157. 0 (C，8a-C)，137. 4 (C，1' -C)，125. 3 (CH，2'，6' -C)， 129. 3(CH，3'，5' -C)，127. 6(CH，4' -C)，89. 6(CH，2"-C)，88. 2(C，4"-C)，211. 4(C，5"-C)， 55. 3 (CH，6"-C)，24. 2 (CH3,4"-Me)，26. 2 (CH3,4"-Me);碳原子標記參見圖 1。紅外光譜表 明該化合物含有羰基（1746cm1)和苯環(huán)（1600和1580cm1)基團。蟲NMR譜顯示了典型 的黃酮類化合物信號SH5.84(s，H-2)，7.28(m，H-2'，6'），7.33(m，H-3'，5'），7.29(m， H-4'），7. 91(d，J= 8. 5Hz，H-5)，6. 63(d，J= 8. 5Hz，H-6)。13CNMR光譜顯示 21 個碳信號， 包含兩個甲基（SC24. 2,4"-Me和 26. 2,4"-Me)，十個次甲基（SC94. 2,2-C;129. 2,5-C; 104. 5,6-C;125. 3,2'，6'-C;129. 3,3'，5'-C;127. 6,4'-C;89. 6,2"-C;55. 3,6"-C;)， 九個季碳（SC196. 6,3-C;190. 4,4-C;115.l，4a-C;164. 2,7-C;112. 3,8-C;157. 0,8a-C; 137. 4,1'-C;88. 2,4"-C;211. 4, 5"-C;)。通過觀察H-2"和H-6" 的化學位移（SH6. 41 和 SH3. 85)，以及與報道的類似化合物的核磁數(shù)值比較，最終確定兩者均為a構(gòu)型。綜合氫 譜、碳譜、HMBC譜和NOESY譜，以及文獻關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如圖1 所示，立體構(gòu)型進一步通過E⑶試驗確定，理論值與實驗值基本一致（圖2)。
[0026] 實施例2 :化合物（I)藥理作用試驗
[0027] -、材料和儀器
[0028] K562細胞由中科院上海生物細胞所提供?；衔铮↖)為自制，HPLC歸一化純 度大于98%。RPMI-1640干粉培養(yǎng)基購于Gibco公司。小牛血清購