氧基，羥基， 氧基，硝基，氣基，氣基烷基（如氣甲基等），氛基，鹵素，駿基，幾基烷氧基（如幾基乙氧基 等），硫基，芳基，環(huán)烷基，雜芳基，雜環(huán)烷基（如呢陡基，嗎琳基，啦略基等），亞氣基，輕燒 基，芳基氧基，芳基烷基及其結(jié)合。
[0068] "藥物組合物（pharmaceuticalcomposition) "是指含有治療上顯著量的活性藥 劑的制備物，其以適于給予患者的形式被制備。因此，所述制備物不含有這樣量的任何一種 組分或多種組分，即，適當(dāng)謹(jǐn)慎的醫(yī)療實(shí)施者發(fā)現(xiàn)所述制備物不適于給予普通對象。在許多 情況下，這種藥物組合物是無菌制備物。
[0069] 本發(fā)明中所涉及的"室溫"具體的溫度范圍是25-30°C。
[0070] 二、2, 9-二取代嘌呤-6-氨基異羥肟酸類組蛋白去乙酰化酶抑制劑的制備方法
[0071] -種2, 9-二取代嘌呤-6-氨基異羥肟酸類組蛋白去乙?；敢种苿┑闹苽浞椒ǎ?步驟如下：不同取代的6-氯嘌呤在回流條件下與各種氨基酸發(fā)生親核取代反應(yīng)得到中間 體2A-2W，該中間體2A-2W甲酯化后在羥胺的甲醇溶液中反應(yīng)得到目標(biāo)化合物4A-4T;化合 物3E，3U和3V與磺酰氯反應(yīng)得到中間體5A-5C，該中間體5A-5C后在羥胺的甲醇溶液中反 應(yīng)得到目標(biāo)化合物6A-6C;化合物2L和2W與嗎啉反應(yīng)后甲酯化得到中間體7A和7B，該中 間體7A和7B后在羥胺的甲醇溶液中反應(yīng)得到目標(biāo)化合物8A和8B;
[0072] 合成路線如下：
[0073]
[0074] 其中，&、R2、R3、n的定義同上通式I所述；
[0075] 試劑和條件：a)各種氨基酸，碳酸鈉，H20,100°C或三乙胺，正丁醇，120°C;b)氯化 亞砜，甲醇，80°C;c)羥胺的甲醇溶液，室溫；d)磺酰氯，吡啶，0°C-室溫；e)嗎啉，正丁醇， 120。。；
[0076] 所述的各種氨基酸是指甘氨酸，丙氨酸，Y-氨基丁酸，5-氨基戊酸，6-氨基己 酸，7-氨基庚酸；所述的磺酰氯是指4-甲氧基苯磺酰氯和4-氟苯磺酰氯。
[0077] 合成路線中目標(biāo)化合物的結(jié)構(gòu)式如下表1所示：
[0078]
[0079] 表1目標(biāo)化合物的結(jié)構(gòu)式
[0080]
[0081] 根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，本發(fā)明化合物的制備方法以化合物2- [ (2-氨基-9H-嘌 呤-6-基）氨基]-N-羥基乙酰胺（4A)為例，具體制備步驟如下：
[0082] ⑴2-[ (2-氨基-9H-嘌呤-6-基）氨基]-乙酸（2A)的合成
[0083] 將500mg化合物6-氯鳥嘌呤1A溶于10mLH20中，分別加入352mgNa2C03和443mg 甘氨酸，于100°C反應(yīng)8h;反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，然后用2M稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至5-7,過濾， 濾餅水洗3次，干燥后得化合物2A不經(jīng)純化直接進(jìn)行下一步；
[0084] (2) 2-[(2-氨基-9H-嘌呤-6-基）氨基]-乙酸甲酯（3A)的合成
[0085] 冰浴條件下，將步驟（1)制得的416mg2A溶于15mLMeOH中，滴加0.72mLS0C12， 滴加結(jié)束后，冰浴條件繼續(xù)反應(yīng)30min，然后80°C反應(yīng)4h;反應(yīng)結(jié)束后，旋蒸除掉大部分有 機(jī)溶劑，加入少量水，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的NaHC(^§液調(diào)節(jié)pH至7-8,過濾，濾餅水洗3次， 干燥后得到400mg白色固體化合物3A，產(chǎn)率95% ;
[0086] (3) 2- [ (2-氨基-9H-嘌呤-6-基）氨基]-N-羥基乙酰胺（4A)的合成
[0087] 羥胺甲醇溶液的制備：
[0088] 溶液A:將4. 67g干燥好的鹽酸羥胺溶于24mL甲醇中即得；
[0089] 溶液B:將5. 61g氫氧化鉀溶于14mL甲醇中即得；
[0090] 0°C時(shí)將溶液B滴加到溶液A中，滴加過程中不斷攪拌，滴加結(jié)束后0°C繼續(xù)反應(yīng) 30min后，過濾除掉固體得到無色透明的羥胺甲醇溶液，干燥備用；
[0091] 向223mg化合物3A中加入6mL羥胺甲醇溶液，室溫下攪拌lh ;旋蒸除掉大部分有 機(jī)溶劑，加入少量水，用2M稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至5-7,過濾；濾餅用水洗滌，干燥得到目標(biāo)化合 物2- [ (2-氨基-9H-嘌呤-6-基）氨基]-N-羥基乙酰胺（4A)，產(chǎn)率89 %。
[0092] 所述化合物的具體操作步驟將在實(shí)施例中將加以詳細(xì)說明。
[0093] 本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對上述步驟進(jìn)行變動(dòng)以提高收率，他們可據(jù)本領(lǐng)域的基本知 識(shí)確定合成的路線，如選擇反應(yīng)物，溶劑和溫度，可以通過使用各種常規(guī)保護(hù)基以避免副反 應(yīng)的發(fā)生從而提高收率。這些常規(guī)的保護(hù)方法可參見例如T.Greene,ProtectingGroups inOrganicSynthesis.
[0094] 三、2, 9-二取代嘌呤-6-氨基異羥肟酸類組蛋白去乙?；敢种苿┑膽?yīng)用
[0095] 活性篩選實(shí)驗(yàn)顯示本發(fā)明化合物具有抗組蛋白去乙?；讣翱鼓[瘤增殖活性，因 此，本發(fā)明還提供了該系列化合物在制備預(yù)防或治療因組蛋白去乙?；副磉_(dá)異常導(dǎo)致的 相關(guān)哺乳動(dòng)物疾病藥物中的應(yīng)用。所述的與組蛋白去乙?；富钚援惓１磉_(dá)相關(guān)的哺乳動(dòng) 物疾病包括癌癥、神經(jīng)變性疾病、病毒感染、炎癥、白血病、瘧疾和糖尿病等。
[0096] 此外，本發(fā)明還包括一種適于口服給予哺乳動(dòng)物的藥物組合物，包含上述通式I 的任一化合物，和藥學(xué)上可接受載體，任選包含一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑。
[0097] 此外，本發(fā)明還包括一種適于胃腸外給予哺乳動(dòng)物的藥物組合物，包含上述通式I 的任一化合物，和藥學(xué)上可接受載體，任選包含一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑。
[0098] 進(jìn)行抑制酶活性和細(xì)胞活性兩方面測試評(píng)價(jià)化合物在體外的生物活性。
[0099] 體外抑酶實(shí)驗(yàn)中，含乙?；嚢彼醾?cè)鏈的寡肽底物（ColordeLys?Substrate) 在HDAC的作用下，發(fā)生去乙酰化作用。去乙酰化后的產(chǎn)物敏感性增加，在乙?；磻?yīng)檢 測試劑（ColordeLys?Developer)誘導(dǎo)下，在405nm處產(chǎn)生吸光度值，與待測化合物的 HDACs抑制作用成比例。通過測定對照組和待測化合物組的405nm吸光度，可計(jì)算待測化合 物的抑制率并求得IC5。值。
[0100] 化合物的細(xì)胞活性的測試使用MTT檢測方法，腫瘤細(xì)胞懸液（人乳腺癌細(xì)胞株 MDA-MB-231，白血病細(xì)胞株KG1和K562,前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3)分別接種于96孔板，每孔中 加入含不同濃度化合物的培養(yǎng)基，經(jīng)孵育后，用MTT染色，繼續(xù)孵育后，于酶標(biāo)儀上在570nm 處測定每孔的吸光度0D值，計(jì)算出細(xì)胞生長抑制率，從而確定化合物的活性。
[0101] 體外抑酶實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明中的部分化合物對于HDAC有較強(qiáng)的抑制活性，4G、4J、 4L、4S和4R活性與陽性對照SAHA相當(dāng)，而化合物4M、4N、4H和41抑制活性則優(yōu)于SAHA;同 時(shí)，體外抗腫瘤細(xì)胞增殖的試驗(yàn)中，化合物4M、4N和41對測試的所有腫瘤細(xì)胞均有抑制活 性，尤其是化合物4M，對實(shí)驗(yàn)的所有腫瘤細(xì)胞株均有顯著抑制，活性比陽性對照SAHA略好， 有很大的開發(fā)前景，并可用于指導(dǎo)發(fā)現(xiàn)新型高效組蛋白去乙?；敢种苿?。
【具體實(shí)施方式】
[0102] 下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的說明，但不限于此。
[0103] 實(shí)施例1. 2-[ (2-氨基-9H-嘌呤-6-基）氨基]-N-羥基乙酰胺（4A)的合成
[0104] 2-[ (2-氨基-9H-嘌呤-6-基）氨基]-乙酸（2A)的合成
[0105] 將500mg化合物6-氯鳥嘌呤1A溶于10mLH20中，分別加入352mgNa2C0#P443mg 甘氨酸，于100°C反應(yīng)8h;反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，然后用2M稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至5-7,過濾， 濾餅水洗3次，干燥后得化合物2A不經(jīng)純化直接進(jìn)行下一步；
[0106] 化合物2B- 2N，2U和2V參照2A的方法進(jìn)行合成。
[0107] 2- [ (2-氨基-9H-嘌呤-6-基）氨基]-乙酸甲酯（3A)的合成
[0108] 冰浴條件下，將步驟（1)制得的416mg2A溶于15mLMeOH中，滴加0. 72mLS0C12， 滴加結(jié)束后，冰浴條件繼續(xù)反應(yīng)30min，然后80°C反應(yīng)4h;反應(yīng)結(jié)束后，旋蒸除掉大部分有 機(jī)溶劑，加入少量水，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的NaHC(^§液調(diào)節(jié)pH至7-8,過濾，濾餅水洗3次， 干燥后得到 400mg白色固體化合物 3A。產(chǎn)率 95%NMR(300MHz,DMS0-d6)S12. 12(s, 1H ),7. 68 (s, 1H), 7. 40 (s, 1H), 5. 72 (s, 2H), 4. 16 (s, 2H), 3. 64 (s, 3H)；
[0109] 化合物3B- 3N，3U和3V參照3A的方法進(jìn)行合成。
[0110] 2-[(2-氨基-911-嘌呤-6-基）氨基]-^羥基乙酰胺（44)的合成
[0111] 羥胺甲醇溶液的制備：
[0112] 溶液A:將4. 67g干燥好的鹽酸羥胺溶于24mL甲醇中即得；
[0113] 溶液B:將5. 61g氫氧化鉀溶于14mL甲醇中即得；
[0114] 0°C時(shí)將溶液B滴加到溶液A中，滴加過程中不斷攪拌，滴加結(jié)束后0°C繼續(xù)反應(yīng) 30min后，過濾除掉固體得到無色透明的羥胺甲醇溶液，干燥備用；
[0115] 向223mg化合物3A中加入6mL羥胺甲醇溶液，室溫下攪拌lh;旋蒸除掉大部分有 機(jī)溶劑，加入少量水，用2M稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至5-7,過濾；濾餅用水洗滌，干燥得到目標(biāo)化合 物2-[ (2-氨基-9H-嘌呤-6-基）氨基]-N-羥基乙酰胺（4A)。產(chǎn)率89% ;m.p. >250°C NMR(400MHz，DMS0-d6)S12. 21 (s，1H), 10. 52(s，1H)，8. 81(s，1H)，7. 73(s，1H)，7. 21(s，1H) ，5. 88(s，2H)，3. 98(s，2H);13CNMR(100MHz，DMS0-d6)S167. 07, 159. 86, 154. 63, 152. 50, 13 6. 85, 112. 38, 41. 55 ；HRMS(AP-ESI)m/zCalcdforC7H9N7〇2[M+H]+224. 0890,found:224. 089 3.
[0116] 實(shí)施例2. 3- [ (2-氨基-9H-嘌呤-6-基）氨基]-N-羥基丙酰胺（4B)的合成
[0117] 中間體和目標(biāo)化合物制備方法如實(shí)施例1。產(chǎn)率73 % ;m.p. 201-202°C NMR(400MHz,DMS〇-d6) 8 12. 07 (s, 1H), 10. 43 (s, 1H), 8. 76 (s, 1H), 7. 64 (s, 1H), 6. 94 (s, 1H) ,5. 71(s, 2H),3. 62(s, 2H),2. 31(t,J= 7. 1Hz, 2H)；13CNMR(100MHz,DMS〇-d6) 8 168.29, 16 0. 63, 154. 97, 152. 24, 135. 84, 113. 46, 36. 91, 33. 04；HRMS(AP-ESI)m/zCalcdforC8HnN7〇 2[M+H]+238. 1047,found:238. 1048.
[0118] 實(shí)施例3. 4-[(2-氨基-9H-嘌呤-6-基）氨基]-N-羥基丁酰胺（4C)的合成
[0119] 中間體和目標(biāo)化合物制備方法如實(shí)施例1。產(chǎn)率79 % ;m.p. 205-206°C NMR(400MHz,DMS〇-d6) 8 12. 30 (s, 1H), 10. 43 (s, 1H), 8. 73 (s, 1H), 7. 77 (s, 1H), 6. 02 (s, 2H) ,3.41 (s, 2H), 2. 03 (t,J= 6. 6Hz, 2H),L86-1. 72 (m, 2H)；13CNMR(100MHz,DMS〇-d6) 8 169. 4 6, 160. 51, 154. 94, 135. 83, 112. 82, 30. 52, 26. 05 ；HRMS(AP-ESI)m/zCalcdforC9H13N702[M+ H]+252. 1203,found:252. 1205.
[0120] 實(shí)施例4. 5- [ (2-氨基-9H-嘌呤-6-基）氨基]-N-羥基戊酰胺（4D)的合成
[0121] 中間體和目標(biāo)化合物制備方法如實(shí)施例1。產(chǎn)率70 % ;m.p. 206-208°C NMR(400MHz,DMS0-d6)S12. 05 (s, 1H), 10. 34 (s, 1H)，8. 68 (s, 1H)，7. 65 (s, 1H)，7. 13 (s, 1H) ,5. 69(s, 2H), 3. 36(s, 2H), 1.98(s, 2H), 1.52(s, 4H)；13CNMR(100MHz,DMS〇-d6) 8 169.61, 1 60. 31, 154. 99, 152. 30, 136. 04, 112. 77, 32. 58, 29. 53, 23. 13；HRMS(AP-ESI)m/zCalcdfor C10H15N702[M+H]+266. 1360,found:266. 1360.
[0122] 實(shí)施例5. 5-[ (2-氨基-9-芐基-9H-嘌呤-6-基）氨基]-N-羥基戊酰胺（4E) 的合成
[0123] 中間體和目標(biāo)化合物制備方法如實(shí)施例1。產(chǎn)率89 % ;m.p. 89-90°C NMR(400MHz,DMS〇-d6) 8 10. 34 (s, 1H), 8. 68 (s, 1H), 7. 77 (s, 1H), 7. 41-7. 15 (m, 6H), 5. 82(s ,2H), 5. 19(s, 2H), 3. 34(s, 2H),L98(s, 2H),L53(s, 4H)；13CNMR(100MHz,DMS〇-d6) 8 169. 61, 160. 87, 155. 46, 151. 74, 138. 15, 137. 52, 129. 06, 127. 91, 127. 58, 113. 65, 45. 90, 32. 59 ,29. 51, 23. 12 ；HRMS(AP-ESI)m/zCalcdforC17H21N702[M+H]+356. 1829,found:356. 1828.
[0124] 實(shí)施例6. 6-[ (2-氨基-9H-嘌呤-6-基）氨基]-N-羥基己酰胺（4F)的合成
[0125] 中間體和目標(biāo)化合物制備方法如實(shí)施例1。產(chǎn)率78 % ;m.p. 210-211°C NMR(400MHz,DMS0-d6)S12. 02 (s, 1H), 10. 33 (s, 1H)，8. 67 (s, 1H)，7. 63 (s, 1H)，7. 00 (s, 1H) ,5. 63 (s, 2H), 3. 35 (s, 2H), 1. 95 (t,J= 7. 3Hz, 2H), 1. 60-1. 46 (m, 4H), 1. 36-1. 21 (m, 2H)；13CNMR(100MHz,DMS〇-d6) 8 169. 69, 160. 61, 155. 11, 152. 22, 135. 75, 113. 16, 32. 77, 29. 57 ,26. 53, 25. 43 ；HRMS(AP-ESI)m/zCalcdforCnH17N702[M+H]+280. 1516,found:280. 1520.
[0126] 實(shí)施例7. 6-[(2-氨