一種具有抗肝癌活性的異戊烯基化黃酮類(lèi)化合物的制備方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥，特別是一種具有抗肝癌活性的異戊烯基化黃酮類(lèi)化合物的制備 方法及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 惡性腫瘤已經(jīng)成為當(dāng)前嚴(yán)重影響人類(lèi)健康、威脅人類(lèi)生命的主要疾病之一。肝癌 是指發(fā)生于肝臟的惡性腫瘤，全世界每年新發(fā)肝癌患者約60萬(wàn)，發(fā)病率居惡性腫瘤的第五 位，其死亡率僅次于胃癌和食道癌居第三位。我國(guó)每年死于肝癌的患者約11萬(wàn)，占全世界 肝癌死亡人數(shù)的45%。目前臨床上廣泛使用的合成的抗肝癌藥物普遍存在著毒副作用如脫 發(fā)、貧血和胃腸不適等現(xiàn)象。因此加強(qiáng)肝癌治療的研究，延長(zhǎng)患者的生存期，改善患者的生 活質(zhì)量是藥學(xué)工作者的當(dāng)務(wù)之急。中草藥在抗腫瘤方面的應(yīng)用歷史悠久，從中草藥中尋找 高效低毒的抗腫瘤活性物質(zhì)，研制選擇性強(qiáng)、毒副作用低的新型抗腫瘤藥物是藥學(xué)科研工 作者迫切解決的首要問(wèn)題。
[0003] 小葉蓮是小檗科桃兒七屬植物鬼白Sinopodophyllumemodi(Wall.)Ying.的干 燥成熟果實(shí)。鬼白是一種具有悠久歷史的藥用植物，古代《神農(nóng)本草經(jīng)》中就有記載：殺大 毒，療咳嗽喉疾，風(fēng)邪煩感，失魄妄見(jiàn)。不入湯。以后的歷代本草亦多有記載，主要用于活血 散結(jié)、祛風(fēng)除濕、蟲(chóng)蛇咬傷、跌打、心胃痛、風(fēng)寒咳嗽、月經(jīng)不調(diào)、鐵棒錘中毒、風(fēng)濕筋骨痛及 氣管炎等癥。鬼白分布比較廣泛，我國(guó)主要分布在四川、青海、西藏、甘肅、陜西。小葉蓮作 為傳統(tǒng)藏藥始載于《月王藥診》，具有悠久的藥用歷史?；瘜W(xué)成分研究表明主要含有木脂素 和黃酮類(lèi)化合物，其中異戊烯基化黃酮是小葉蓮中代表性的活性成分，具有重要而廣泛的 生物活性如抗氧化、抗腫瘤、抗炎、抗菌、抗骨質(zhì)疏松、預(yù)防老年癡呆、抗糖尿病、心腦血管保 護(hù)、雌激素樣等。本發(fā)明所涉及的異戊烯基化黃酮類(lèi)化合物及其生物活性，迄今為止未見(jiàn)有 專利或文獻(xiàn)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 針對(duì)上述情況，為克服現(xiàn)有技術(shù)之缺陷，本發(fā)明之目的就是提供一種具有抗肝癌 活性的異戊烯基化黃酮類(lèi)化合物的制備方法及其應(yīng)用，可有效解決制備具有抗肝癌活性的 異戊烯基化黃酮類(lèi)化合物，實(shí)現(xiàn)制備抗肝癌藥物的問(wèn)題。
[0005] 本發(fā)明解決的技術(shù)方案是，該類(lèi)化合物是從小葉蓮藥材中分離得到的桃兒七酮E(SinoflavonoidE)、桃兒七酮H(SinoflavonoidH)、桃兒七酮I(SinoflavonoidI)，分子 結(jié)構(gòu)式分別為：
[0006]
[0007] 其制備方法是，以小葉蓮6_9kg為原料，以2 - 5倍原料重量、體積比為75% -95%的乙醇加熱回流提取3次，提取溫度為90 - 95°C，每次提取時(shí)間為1. 5 - 2小時(shí)，減壓回 收乙醇，得浸膏狀乙醇提取物，混懸于2 - 3. 2L的蒸餾水中，依次以石油醚、二氯甲烷、乙酸 乙酯、正丁醇萃取3次，每次2 - 3. 2L，時(shí)間為1. 5 - 2小時(shí)；將乙酸乙酯萃取部位經(jīng)硅膠柱 色譜分離，依次用體積比為 100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、100:70、100:100、 100:200、0:100的石油醚-丙酮混合溶劑進(jìn)行梯度洗脫，每一梯度用9. 1 - 13L洗脫液，流速 為10 - 15mLmin\每350 - 500mL為一流份，收集260個(gè)流份，各個(gè)流份經(jīng)硅膠薄層色譜檢測(cè) 分析，用GF254薄層板，分別以體積比1 : 1的石油醚-丙酮和體積比5 : 1的二氯甲烷-甲 醇作為展開(kāi)劑，以體積比10 : 90的硫酸-乙醇溶液作為顯色劑，105°C加熱3 - 5min，根據(jù) 薄層色譜檢測(cè)結(jié)果，分別合并流份1 - 35、流份36 - 85、流份86 - 104、流份105 - 115、流份 116 - 132、流份 133 - 144、流份 145 - 157、流份 158 - 163、流份 164 - 170、流份 171 - 182、 流份 183 - 188、流份 189 - 195、流份 196 - 204、流份 205 - 208、流份 209 - 234、流份 235 -260,得到Fr. 1-Fr. 16個(gè)組份；將組份Fr. 5經(jīng)S印hadexLH-20凝膠柱色譜，甲醇洗脫，每 5 - 10mL為一流份，收集36個(gè)流份，各個(gè)流份經(jīng)硅膠薄層色譜檢測(cè)分析，用GF254薄層板，以 體積比5 : 1的二氯甲烷-丙酮作為展開(kāi)劑，以體積比10 : 90的硫酸-乙醇溶液作為顯 色劑，105°C加熱3 - 5min，根據(jù)薄層色譜檢測(cè)結(jié)果，分別合并流份4 - 16、流份17 - 28、流份 29 - 36,得到3個(gè)亞組份Fr. 5-1，F(xiàn)r. 5-2,Fr. 5-3 ;將Fr. 5-2經(jīng)硅膠柱色譜純化，用體積比 100 : 10、體積比100 : 15、體積比100 : 20的石油醚-丙酮作洗脫液進(jìn)行梯度洗脫，分別 收集洗脫液，收集體積比100 : 10石油醚-丙酮洗脫液得化合物桃兒七酮H，收集體積比 100 : 15石油醚-丙酮洗脫液得化合物桃兒七酮I，收集體積比100 : 20石油醚-丙酮洗 脫液得化合物桃兒七酮E。
[0008] 本發(fā)明制備的具有抗肝癌活性的異戊烯基化黃酮類(lèi)化合物桃兒七酮E、桃兒七酮 H、桃兒七酮I具有抗肝癌活性，有效用于制備抗肝癌藥物，具有實(shí)際的臨床意義，經(jīng)濟(jì)和社 會(huì)效益顯著。
【具體實(shí)施方式】
[0009] 以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】作詳細(xì)說(shuō)明。
[0010] 本發(fā)明在具體實(shí)施中可由以下實(shí)施例給出。
[0011] 實(shí)施例1
[0012] 本發(fā)明在具體實(shí)施中，具有抗肝癌活性的異戊烯基化黃酮類(lèi)化合物可由小葉蓮 9kg為原料，以18L、體積比為95%的乙醇加熱回流提取3次，提取溫度為95°C，每次提取 時(shí)間為1. 5小時(shí)，減壓回收乙醇，得浸膏狀乙醇提取物，混懸于3. 2L的蒸餾水中，依次以 石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，每次3. 2L，時(shí)間為1. 5小時(shí)；將乙酸乙酯萃 取部位經(jīng)硅膠柱色譜分離，依次用體積比為100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、 100:70、100:100、100:200、0:100的石油醚-丙酮混合溶劑進(jìn)行梯度洗脫，每一梯度用13L 洗脫液，流速為15mLmin\每500mL為一流份，收集260個(gè)流份，各個(gè)流份經(jīng)硅膠薄層色譜 檢測(cè)分析，用GF254薄層板，分別以體積比1 : 1的石油醚-丙酮和體積比5 : 1的二氯甲 烷-甲醇作為展開(kāi)劑，以體積比10 : 90的硫酸-乙醇溶液作為顯色劑，105°C加熱3 - 5min， 根據(jù)薄層色譜檢測(cè)結(jié)果，分別合并流份1 - 35、流份36 - 85、流份86 - 104、流份105 - 115、 流份 116 - 132、流份 133 - 144、流份 145 - 157、流份 158 - 163、流份 164 - 170、流份 171 -182、流份 183 - 188、流份 189 - 195、流份 196 - 204、流份 205 - 208、流份 209 - 234、流份 235 - 260,得到Fr. 1-Fr. 16個(gè)組份；將組份Fr. 5經(jīng)S印hadexLH-20凝膠柱色譜，甲醇洗 脫，每10mL為一流份，收集36個(gè)流份，各個(gè)流份經(jīng)硅膠薄層色譜檢測(cè)分析，用GF254薄層 板，以體積比5 : 1的二氯甲烷-丙酮作為展開(kāi)劑，以體積比10 : 90的硫酸-乙醇溶液作 為顯色劑，105°C加熱3 - 5min，根據(jù)薄層色譜檢測(cè)結(jié)果，分別合并流份4 - 16、流份17 - 28、 流份29 - 36,得到3個(gè)亞組份Fr. 5-1，F(xiàn)r. 5-2,Fr. 5-3 ;將Fr. 5-2經(jīng)硅膠柱色譜純化，用體 積比100 : 10、體積比100 : 15、體積比100 : 20的石油醚-丙酮作洗脫液進(jìn)行梯度洗脫， 分別收集洗脫液，收集體積比100 : 10石油醚-丙酮洗脫液得化合物桃兒七酮H，收集體積 比100 : 15石油醚-丙酮洗脫液得化合物桃兒七酮I，收集體積比100 : 20石油醚-丙酮 洗脫液得化合物桃兒七酮E。
[0013] 實(shí)施例2
[0014] 本發(fā)明在具體實(shí)施中，具有抗肝癌活性的異戊烯基化黃酮類(lèi)化合物還可由小葉 蓮6kg為原料，以30L、體積比為75 %的乙醇加熱回流提取3次，提取溫度為90°C，每次提 取時(shí)間為2小時(shí)，減壓回收乙醇，得浸膏狀乙醇提取物，混懸于2L的蒸餾水中，依次以石油 醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，每次2L，時(shí)間為2小時(shí)；將乙酸乙酯萃取部位經(jīng) 硅膠柱色譜分離，依次用體積比為 100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、100:70、 100:100、100:200、0:100的石油醚-丙酮混合溶劑進(jìn)行梯度洗脫，每一梯度用9. 1L洗脫液， 流速為lOmLmin\每350mL為一流份，收集260個(gè)流份，各個(gè)流份經(jīng)硅膠薄層色譜檢測(cè)分 析，用GF254薄層板，分別以體積比1 : 1的石油醚-丙酮和體積比5 : 1的二氯甲烷-甲 醇作為展開(kāi)劑，以體積比10 : 90的硫酸-乙醇溶液作為顯色劑，105°C加熱3 - 5min，根據(jù) 薄層色譜檢測(cè)結(jié)果，分別合并流份1 - 35、流份36 - 85、流份86 - 104、流份105 - 115、流份 116 - 132、流份 133 - 144、流份 145 - 157、流份 158 - 163、流份 164 - 170、流份 171 - 182、 流份 183 - 188、流份 189 - 195、流份 196 - 204、流份 205 - 208、流份 209 - 234、流份 235 -260,得到Fr. 1-Fr. 16個(gè)組份；將組份Fr. 5經(jīng)S印hadexLH-20凝膠柱色譜，甲醇洗脫，每 5. 5mL為一流份，收集36個(gè)流份，各個(gè)流份經(jīng)硅膠薄層色譜檢測(cè)分析，用GF254薄層板，以 體積比5 : 1的二氯甲烷-丙酮作為展開(kāi)劑，以體積比10 : 90的硫酸-乙醇溶液作為顯 色劑，105°C加熱3 - 5min，根據(jù)薄層色譜檢測(cè)結(jié)果，分別合并流份4 - 16、流份17 - 28、流份 29 - 36,得到3個(gè)亞組份Fr. 5-1，F(xiàn)r. 5-2,Fr. 5-3 ;將Fr. 5-2經(jīng)硅膠柱色譜純化，用體積比 100 : 10、體積比100 : 15、體積比100 : 20的石油醚-丙酮作洗脫液進(jìn)行梯度洗脫，分別 收集洗脫液，收集體積比100 : 10石油醚-丙酮洗脫液得化合物桃兒七酮H，收集體積比 100 : 15石油醚-丙酮洗脫液得化合物桃兒七酮I，收集體積比100 : 20石油醚-丙酮洗 脫液得化合物桃兒七酮E。
[0015] 實(shí)施例3<