指隨后描述的事件或情形可以但不是必須發(fā)生，并且該描 述包括其中事件或情形發(fā)生的情況以及其中事件或情形不發(fā)生的情況。
[0044] 術(shù)語"上文所定義的那些"和"本文中所定義的那些"當(dāng)涉及變量時(shí)通過引用并入 該變量的廣義定義以及優(yōu)選的、更優(yōu)選的和最優(yōu)選的定義（如果有的話）。
[0045] 術(shù)語離液劑指與水分子發(fā)生弱相互作用并破壞蛋白質(zhì)分子周圍的水分子氫鍵網(wǎng) 絡(luò)的化合物。
[0046] 術(shù)語穩(wěn)液劑指與水分子強(qiáng)烈相互作用并以通常有利的方式在蛋白質(zhì)分子周圍組 織水分子的化合物。在一些實(shí)施方案中，生物材料穩(wěn)定化組合物可包含穩(wěn)液劑。不受限于 任何特定的作用機(jī)理，在一些實(shí)施方案中，穩(wěn)液劑可以穩(wěn)定和/或改善水性組合物中的水 與水的相互作用。穩(wěn)液劑的實(shí)例可以包括但不限于，甘油、脯氨酸（例如，L-脯氨酸）、海藻 糖（例如，D_(+)海藻糖、D_(+)海藻糖二水合物）、aa_海藻糖、甘氨酸-甜菜堿、葡萄糖、右 旋糖、谷氨酸和/或天冬氨酸。在一些實(shí)施方案中，穩(wěn)液劑的實(shí)例可以包括S04、HP04、Ca' Mg'Li+、Na+、OH和 / 或P04 2。
[0047] 術(shù)語緩沖液是指給混合物提供約4.5至約8. 5的pH的化合物。在一些實(shí)施方案 中，合適的緩沖液可選自Good緩沖液（例如，HEPES)、乙酸鉀、磷酸鈉、碳酸氫鉀、三（羥 基氨基）甲烷（Tris)及它們的組合。例如，緩沖液可以包括乙酸鉀、乙酸鈉、磷酸鉀（單 堿式、三堿式）、磷酸鈉、Tris、N-(2-羥乙基）哌嗪-N'-(2-乙磺酸）（HEPES)緩沖液、 3-(N-嗎啉基）丙磺酸（MOPS)緩沖液、2-[(2-氨基-2-氧代乙基）氨基]乙磺酸（ACES) 緩沖液、N-(2-乙酰氨基）-2-亞氨基二乙酸緩沖液（ADA)、3-[(1，1-二甲基-2-羥乙基） 氨基]-2-丙磺酸（AMPSO)緩沖液、N，N-雙（2-羥乙基）-2-氨基乙磺酸（BES)緩沖液、 Bicine(N，N-雙（2-羥乙基甘氨酸）緩沖液、雙-(2-羥乙基）亞氨基-三（羥甲基）甲烷 (Bis-Tris)緩沖液、3-(環(huán)己基氨基）-1-丙磺酸（CAPS)緩沖液、3-(環(huán)己基氨基）-2-羥 基-1-丙磺酸（CAPSO)緩沖液、2-(N-環(huán)己基氨基）乙磺酸（CHES)緩沖液、3-[N，N-雙（2-羥 乙基）氨基]-2-羥基-丙磺酸（DIPSO)緩沖液、N-(2-羥乙基哌嗪）-N'-(3-丙磺酸） (HEPPS)緩沖液、N-(2-羥乙基）哌嗪-N' -(2-羥基丙磺酸）（HEPPSO)緩沖液、2-(N-嗎啉） 乙磺酸（MES)緩沖液、三乙醇胺緩沖液、咪唑緩沖液、甘氨酸緩沖液、乙醇胺緩沖液、磷酸鹽 緩沖液、3- (N-嗎啉）-2-羥基丙磺酸（MOPSO)緩沖液、哌嗪-N，N' -雙（2-乙磺酸）（PIPES) 緩沖液、哌嗪-N，N' -雙（2-羥基丙磺酸）（POPSO)緩沖液、N-三[(羥甲基）甲基]-3-氨 基丙磺酸（TAPS)緩沖液、2-羥基-3-[三（羥甲基）甲基氨基]-1-丙磺酸（TAPSO)緩沖 液、N-[三（羥甲基）甲基]-2-氨基乙磺酸（TES)緩沖液、N-[三（羥甲基）甲基]甘氨 酸（tricine)緩沖液、2-氨基-2-甲基-1，3-丙二醇緩沖液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇緩 沖液以及它們的組合。
[0048]術(shù)語螯合劑指可結(jié)合可用的金屬（例如，Mg2+和Ca2+)到這樣的程度以致于保持可 供金屬依賴性酶（例如，脫氧核糖核酸酶）使用的金屬不足以支持催化（即，核酸降解）的 化合物。例如，非金屬依賴性酶可包括DNA連接酶（例如，D4DNA連接酶）、DNA聚合酶（例 如，T7DNA聚合酶）、核酸外切酶（例如，核酸外切酶2、A-核酸外切酶）、激酶（例如，T4多 核苷酸激酶）、磷酸酶（例如，BAP和CIP磷酸酶）、核酸酶（例如，BL31核酸酶和XO核酸 酶）以及RNA修飾酶（例如，RNA聚合酶、SP6、T7、T3RNA聚合酶和T4RNA連接酶）。
[0049]螯合劑可以包括，例如，乙二胺四乙酸（EDTA)、[乙烯雙（氧乙烯次氮基）]四乙酸 (EGTA)和1，2-雙（2-氨基苯氧基）乙烷-N，N，N'，N' -四乙酸（BAPTA)和/或它們的鹽。 螯合劑可以以任何需要的濃度存在。在兩種或更多種螯合劑包含在單個(gè)試劑中的情況下， 每種螯合劑的濃度或組合螯合劑的總濃度可以落入所提供的任何范圍內(nèi)。在一些實(shí)施方案 中，螯合劑可包括￡0了4、￡6了4、84?了4、咪唑、亞氨基二乙酸酯（104)、雙（5-脒基-2-苯并咪 唑基）甲烷（BABni)和/或它們的鹽。
[0050]術(shù)語代謝調(diào)節(jié)劑指用于優(yōu)化試劑制劑內(nèi)的化學(xué)品的膜滲透性以及穩(wěn)定細(xì)胞（并 且尤其是缺氧癌細(xì)胞）的基因表達(dá)的滲透劑/代謝調(diào)節(jié)劑。
[0051]術(shù)語凋亡為可發(fā)生在多細(xì)胞生物體中的程序性細(xì)胞死亡（P⑶）的過程。生化事件 導(dǎo)致特征性細(xì)胞變化（形態(tài)）和死亡。這些變化包括起泡、細(xì)胞收縮、核碎裂、染色質(zhì)凝縮 和染色體DNA片段化。（還參見凋亡的DNA片段化。）
[0052]術(shù)語"凋亡底物"是作為減少凋亡中的關(guān)鍵組分的化合物或分子。凋亡底物與其 他試劑制劑組分協(xié)同作用，以阻止凋亡并促進(jìn)細(xì)胞的穩(wěn)定性和細(xì)胞生長。
[0053]術(shù)語"基因表達(dá)分析"指涉及檢測細(xì)胞中、尤其是癌細(xì)胞中的過表達(dá)、欠表達(dá)或差 異性表達(dá)的基因的分析。
[0054]術(shù)語"過表達(dá)"（"overexpress" 或 "overexpression"）或"過表達(dá) 的"（"overexpressed"）可以互換，是指與正常細(xì)胞相比通常在癌細(xì)胞中以可檢測的更高 水平翻譯或轉(zhuǎn)錄的蛋白質(zhì)或核酸（RNA)。該術(shù)語包括與正常細(xì)胞相比由于轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后加 工、翻譯、翻譯后加工、細(xì)胞定位（例如，細(xì)胞器、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核、細(xì)胞表面）以及RNA和蛋 白質(zhì)穩(wěn)定性而引起的過表達(dá)?？梢允褂糜糜跈z測mRNA(S卩，RT-PCR、PCR、雜交）或者蛋白質(zhì) (即ELISA，免疫組織化學(xué)技術(shù)）的常規(guī)技術(shù)來檢測過表達(dá)。過表達(dá)可以是與正常細(xì)胞相比 高10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更高。在某些情況下，過表達(dá)是與 正常細(xì)胞相比1倍、2倍、3倍、4倍或更高水平的轉(zhuǎn)錄或翻譯。
[0055]術(shù)語"欠表達(dá)"（"underexpress" 或 "underexpression"）或"欠表達(dá) 的"（"underexpressed"）或"下調(diào)"（"downregulated"）可以互換，是指與正常細(xì)胞相比 在癌細(xì)胞中以可檢測的較低水平翻譯或轉(zhuǎn)錄的蛋白質(zhì)或核酸。該術(shù)語包括與對照相比由于 轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后加工、翻譯、翻譯后加工、細(xì)胞定位（例如，細(xì)胞器、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核、細(xì)胞表面） 以及RNA和蛋白質(zhì)穩(wěn)定性而引起的欠表達(dá)。可以使用用于檢測mRNA(即，RT-PCR、PCR、雜 交）或者蛋白質(zhì)（即ELISA，免疫組織化學(xué)技術(shù)）的常規(guī)技術(shù)來檢測欠表達(dá)。欠表達(dá)可以是 與對照相比10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更低。在某些情況下，欠 表達(dá)是與對照相比1倍、2倍、3倍、4倍或更低水平的轉(zhuǎn)錄或翻譯。
[0056] 術(shù)語"差異性表達(dá)"或"差異性調(diào)節(jié)"在本發(fā)明的上下文中通常指相比于在至少一 個(gè)其他樣品中在一個(gè)樣品中過表達(dá)（上調(diào)）或欠表達(dá)（下調(diào)）的蛋白質(zhì)或核酸（通常在癌 癥患者中相比于非癌性組織的樣品）。
[0057] 如本文所用的術(shù)語"腫瘤"指所有的贅生性細(xì)胞生長和增殖（無論是惡性的或良 性的）以及所有的癌前和癌性細(xì)胞和組織。
[0058] 術(shù)語"癌癥"和"癌性"意指或描述了哺乳動物中通常以不受調(diào)控的細(xì)胞生長為特 征的生理狀況。癌癥的實(shí)例包括但不限于，乳腺癌、卵巢癌、結(jié)腸癌、肺癌、前列腺癌、肝細(xì)胞 癌、胃癌、胰腺癌、宮頸癌、肝癌、膀胱癌、尿道癌、甲狀腺癌、腎癌、癌、黑素瘤和腦癌。
[0059] 生物或組織樣品包括諸如活檢和尸檢樣品等組織的切片。生物樣品通常獲自真核 生物，最優(yōu)選哺乳動物，如靈長類動物（例如，黑猩猩或人）、牛、狗、貓、嚙齒動物（例如，豚 鼠、大鼠或小鼠）、兔或禽類、爬行動物或魚類。
[0060] 活檢指移取組織樣品以供診斷或預(yù)后評估的過程，并指組織樣本本身。本領(lǐng)域中 已知的任何活檢技術(shù)可應(yīng)用于本發(fā)明的診斷和預(yù)后方法中。所應(yīng)用的活檢技術(shù)將取決于 待評估的組織類型（例如，肺等）、腫瘤的大小和類型以及其他因素。代表性的活檢技術(shù) 包括但不限于，切除活檢、切口活檢（incisionalbiopsy)、針吸活檢（needlebiopsy)、手 術(shù)活檢和骨髓活檢。切除活檢指稱取整個(gè)腫瘤塊以及其周圍的正常組織的小邊緣。切口 活檢指從腫瘤內(nèi)移取組織的楔形物。通過內(nèi)窺鏡術(shù)或射線照相指導(dǎo)作出的診斷或預(yù)后可 能需要"針芯活檢（core-needlebiopsy)" 或"細(xì)針抽吸活檢（fine-needleaspiration biopsy) "，該活檢通常從靶組織內(nèi)獲得細(xì)胞懸浮液。
[0061] 治療性處理和癌癥療法指化學(xué)療法、激素療法、放射療法、免疫療法和生物（靶 向）療法。
[0062] 術(shù)語PCR指聚合酶鏈反應(yīng)。這指核苷酸在核苷酸聚合酶、優(yōu)選DNA聚合酶的存在 下通過溫度循環(huán)技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增的任何技術(shù)。這包括但不限于實(shí)時(shí)PCR技術(shù)，逆轉(zhuǎn)錄酶-PCR 和標(biāo)準(zhǔn)的PCR方法。
[0063] 本發(fā)明公開了制備用于保持組織樣品的細(xì)胞活力、允許進(jìn)行組織樣品中細(xì)胞的基 因表達(dá)分析的試劑的方法。本發(fā)明還涉及允許檢測組織樣品中的活細(xì)胞、尤其是癌細(xì)胞的 準(zhǔn)確基因表達(dá)的試劑組合物。用于制備細(xì)胞活力試劑的方法通常包括相繼添加化合物/分 子以實(shí)現(xiàn)本發(fā)明試劑的最佳制劑。
[0064] 參照圖1，其為根據(jù)本發(fā)明制備細(xì)胞活力試劑的方法的一個(gè)實(shí)施方案的流程圖。用 于生成細(xì)胞活力試劑的方法1〇〇包括在事件110提供離液劑。將離液劑添加至凈化水的整 分試樣中。離液劑為具有對抗降解核酸的酶如DNA酶和RNA酶以及負(fù)責(zé)蛋白質(zhì)破壞和凋亡 的蛋白酶和調(diào)節(jié)酶的活性的分子。離液劑還對細(xì)胞中的水分布以及相關(guān)的代謝衰減具有顯 著的影響。
[0065] 在大多數(shù)實(shí)施方案中，離液劑為以下化合物中的至少一種：SCN(硫氰酸鈉）、 H2PO4、HC03、I、C1、N03、NH4、CS、K+、（NH4)C+胍、胍的所有鹽、Br或Rb。已知所有這些化合 物均對細(xì)胞周圍的水分布具有影響并有助于保持細(xì)胞活力。
[0066] 在一些實(shí)施方案中，離液劑在細(xì)胞活力試劑中具有以下范圍濃度的最終濃度：約 〇. 1摩爾至約2摩爾，更優(yōu)選至少約ImM、至少約10mM、至少0. 05M、至少約0. 1M、至少0. 5M、 至少約1M、至少約I. 75M、至少約2M到至少約3M的最大值。
[0067] 在事件120中，方法100包括提供至少一種螯合劑。將螯合劑添加至細(xì)胞活力制 劑中，以有助于使降解核酸的Ca、Mg驅(qū)動的酶體系失活。在該實(shí)施方案中，螯合劑選自下組 的化合物：EDTA、EGTA或BABTA。
[0068] 在配制細(xì)胞活力試劑