與高血壓和/或心血管疾病發(fā)病風險相關的多個單核苷酸多態(tài)性位點及相關應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及與高血壓和/或心血管疾病發(fā)病風險相關的多個單核苷酸多態(tài)性位 點及相關應用，具體涉及檢測多個單核苷酸多態(tài)性位點的試劑在制備用于預測高血壓和/ 或心血管疾病發(fā)病風險的檢測制劑或檢測裝置中的應用，還涉及一種用于預測高血壓和/ 或心血管疾病發(fā)病風險的檢測裝置，通過影響亞洲人群血壓變異相關的22個單核苷酸多 態(tài)性位點檢測預測高血壓和心血管疾病發(fā)病風險。
【背景技術】
[0002] 心血管疾病是全球人類健康的首要疾病負擔。我國心血管病的發(fā)病率和死亡率呈 快速上升趨勢。據(jù)估計，我國心血管疾病現(xiàn)患病人數(shù)至少2. 3億，每年約350萬人死于心血 管病。高血壓是最常見的心血管疾病之一，也是心血管病的主要危險因素。2013年中國心 血管病報告顯示，約70%的腦卒中和50%的心肌梗死的發(fā)生與血壓升高有關，至少一半的 心血管病死亡與高血壓有關。根據(jù)歷次全國性大規(guī)模高血壓患病率調查，從上世紀五六十 年代到2007-2009年，高血壓患病率已由5. 1%上升到26. 6%，上升趨勢明顯，已成為我國 重要疾病負擔。因此，高血壓的防治已經(jīng)成為預防心血管疾病、保障國民健康的重要需求。
[0003] 高血壓和心血管疾病是復雜疾病，由多個微效基因與環(huán)境因素長期相互作用所 致。鑒定出與高血壓和/或血壓升高相關的易感基因和/或致病基因，在人群中篩選增加疾 病風險的易感基因確定易感個體，將有助于高血壓和心血管疾病事件（冠心病和腦卒中） 的發(fā)病風險預測、新藥開發(fā)、診斷和個體化治療。
[0004] 遺傳風險評分（geneticriskscore,GRS)是基于遺傳易感基因建立個體患病風 險的預測評分模型，在個體水平利用個體遺傳風險評分結合傳統(tǒng)危險因素進行模型預測是 識別高血壓和心血管疾病發(fā)病高危人群的有效方法。早期識別高危人群，采取針對性的生 活方式干預，能夠有效地減少高血壓及心血管疾病的發(fā)生，遏制醫(yī)療費用增長、延長國民期 望壽命。

【發(fā)明內容】

[0005] 本發(fā)明的一個目的在于提供一種通過多個單核苷酸多態(tài)性檢測預測高血壓和/ 或心血管疾病發(fā)病風險的方法。
[0006] 本發(fā)明的另一目的在于提供檢測多個單核苷酸多態(tài)性位點的試劑在制備用于預 測高血壓和/或心血管疾病發(fā)病風險的檢測制劑或檢測裝置中的應用。
[0007] 本發(fā)明的另一目的在于提供一種用于預測高血壓和/或心血管疾病發(fā)病風險的 檢測裝置。
[0008] 本發(fā)明中，通過整合影響亞洲人群血壓變異相關的多個單核苷酸多態(tài)性位點，在 大量樣本的研究對象中進行基因分型，并對研究對象進行多年的隨訪研究，計算遺傳風險 評分（GRS)。在傳統(tǒng)危險因素的模型中，加入遺傳風險評分，提高對高血壓和心血管事件風 險的預測能力。
[0009] 根據(jù)本發(fā)明的具體實施方案，所述亞洲人群血壓變異的相關的多個單核苷酸 多態(tài)性位點包括以下22個單核苷酸多態(tài)性位點：CASZl區(qū)域rs880315、M0V10區(qū)域的 rsl0745332和rsl7030613、FIGN區(qū)域rsl6849225、SLC4A7區(qū)域rs820430、ULK4區(qū)域 rs9815354、CACNAlD區(qū)域rs9810888、FGF5區(qū)域rsl902859、ENPEP區(qū)域rs6825911、⑶CY1A3 區(qū)域rsl3143871、NPR3區(qū)域rsl 173766、HFE區(qū)域rsl799945、HLA-B區(qū)域rs9266359、 CYP21A2區(qū)域rs2021783、CYP17A1區(qū)域rs4409766、S0X6區(qū)域rs4757391、ATP2B1區(qū)域 rsl7249754、ALDH2區(qū)域rsl 1066280、TBX3-TBX5區(qū)域rsl991391、TBX3區(qū)域rs35444、 MED13L區(qū)域rsll067763和JAGl區(qū)域rsl887320。通過檢測這些單核苷酸多態(tài)性位點，可 以預測高血壓和/或心血管疾病發(fā)病風險。
[0010] 從而，一方面，本發(fā)明提供了檢測多個單核苷酸多態(tài)性位點的試劑在制備用于預 測高血壓和/或心血管疾病發(fā)病風險的檢測制劑或檢測裝置中的應用，其中，所述多個單 核苷酸多態(tài)性位點包括以下22個單核苷酸多態(tài)性位點：
[0011] CASZl區(qū)域rs880315、M0V10區(qū)域的rsl0745332和rsl7030613、FIGN區(qū)域 rsl6849225、SLC4A7區(qū)域rs820430、ULK4區(qū)域rs9815354、CACNAlD區(qū)域rs9810888、FGF5區(qū) 域rsl902859、ENPEP區(qū)域rs6825911、⑶CY1A3區(qū)域rsl3143871、NPR3區(qū)域rsll73766、HFE 區(qū)域rsl799945、HLA-B區(qū)域rs9266359、CYP21A2區(qū)域rs2021783、CYP17Al區(qū)域rs4409766、 S0X6區(qū)域rs4757391、ATP2B1區(qū)域rsl7249754、ALDH2區(qū)域rsll066280、TBX3-TBX5區(qū)域 rsl991391、TBX3區(qū)域rs35444、MED13L區(qū)域rsll067763和JAGl區(qū)域rsl887320。
[0012] 在本發(fā)明的大量實驗結果基礎上，本發(fā)明的進一步研究發(fā)現(xiàn)，這些SNPs的危險 等位基因分別是：rs880315多態(tài)性位點為C;rsl7030613多態(tài)性位點為C;rsl0745332多 態(tài)性位點為A;rsl6849225多態(tài)性位點為C;rs820430多態(tài)性位點為A;rs9815354多態(tài) 性位點為A;rs9810888多態(tài)性位點為G;rsl902859多態(tài)性位點為C;rs6825911多態(tài)性 位點為C;rsl3143871多態(tài)性位點為T;rsll73766多態(tài)性位點為C;rsl799945多態(tài)性位 點為G;rs9266359多態(tài)性位點為C;rs2021783多態(tài)性位點為C;rs4409766多態(tài)性位點 為T;rs4757391多態(tài)性位點為C;rsl7249754多態(tài)性位點為G;sll066280多態(tài)性位點 為T;rsl991391多態(tài)性位點為G;rs35444多態(tài)性位點為A;rsll067763多態(tài)性位點為A; rsl887320多態(tài)性位點為A。
[0013] 可用本領域中任何的可行技術在DNA水平、RNA水平檢測本發(fā)明所述的多個單 核苷酸多態(tài)性位點。例如：可以采用直接測序的方法，通過DNA直接測序可以直接揭示對 照基因和攜帶突變基因之間的序列差異，具體可以是傳統(tǒng)的使用商業(yè)測序試劑盒或自動 測序儀對DNA直接進行測序，或是近年來發(fā)展的焦磷酸測序（Pyrosequencing)、微測序 (SNaPshot)等。也可以采用基于雜交的方法，具體包括Taqman探針法，DNA芯片法等。還 可以采用基于引物延伸的方法，如基質輔助激光解析離子飛行時間質譜（MLDI-Tof-MS)。 還可以采用基于構象的方法，具體例如限制性片段長度多態(tài)性（RFLP)分析、單鏈構象 多態(tài)性（single-strandconformationalpolymorphism，SSCP)分析、變性梯度凝膠電 泳（denaturinggradientgelelectrophoresis，DGGE)分析、變性高效液相色譜技術 (denaturinghighperformanceliquidchromatography，dHPLC)等分析技術。還可以 采用高分辨率溶解曲線分析技術（HRM)。在具體實施時，本領域的技術人員可以根據(jù)實 際情況選擇上述的任一種技術體外檢測本發(fā)明所述多個單核苷酸多態(tài)性位點，也可以采 用多種技術的組合來體外檢測所述多個單核苷酸多態(tài)性位點。本發(fā)明中所述的檢測多個 單核苷酸多態(tài)性位點的試劑可以是這些任何可行的檢測所述多個單核苷酸多態(tài)性位點的 技術中所用到的試劑材料和/或儀器設備等。在本發(fā)明的一個【具體實施方式】中，應用的 是iPLEXSequenomMassARRAY分型系統(tǒng)對所述多個單核苷酸多態(tài)性位點進行檢測，其中 將PCR擴增后的延伸產(chǎn)物用MassARRAYNanodispenserRSlOOO點樣儀（Sequenom)移至 SpectroCHIP(Sequenom)芯片上，使用MALDI-TOP(matrix-assistedlaserdesorption/ ionization-timeoffligh，基質輔助飛行時間質譜）分析，并使用TYPER4.0軟件 (Sequnom)分型并輸出結果。
[0014] 根據(jù)本發(fā)明的具體實施方案，所述的待測個體可以為亞洲人群，優(yōu)選為中國漢族 人群。具體檢測時，待測樣品可來自待測個體的血液、尿、唾液、胃液、頭發(fā)或活組織檢查。
[0015] 在本發(fā)明的具體實施方案中，本發(fā)明在中國漢族人群中選取26262例正常人群研 究對象，平均隨訪觀察6. 9年，采集空腹血并收集性別、年齡、血壓水平、血脂水平、身高、體 重、吸煙、飲酒和疾病史等相關信息。應用iPLEX Sequenom MassARRAY分型系統(tǒng)，對22個 血壓相關單核苷酸多態(tài)性（SNP)位點進行基因分型實驗（CASZ1區(qū)域rs880315、MOVlO區(qū) 域的rsl0745332和rsl7030613、FIGN區(qū)域rsl6849225、SLC4A7區(qū)域rs820430、ULK4區(qū)域 rs9815354、CACNAlD區(qū)域rs9810888、FGF5區(qū)域rsl902859、ENPEP區(qū)域rs6825911、⑶CY1A3 區(qū)域rsl3143871、NPR3區(qū)域rsl 173766、HFE區(qū)域rsl799945、HLA-B區(qū)域rs9266359、 CYP21A2區(qū)域rs2021783、CYP17A1區(qū)域rs4409766、S0X6區(qū)域rs4757391、ATP2B1區(qū)域 rsl7249754、ALDH2區(qū)域rsl 1066280、TBX3-TBX5區(qū)域rsl991391、TBX3區(qū)域rs35444、 MED13L區(qū)域rsll067763和JAGl區(qū)域rsl887320)。使用logistic和cox回歸分析評估每 個SNP位點與年平均血壓增加、高血壓發(fā)病以及心血管病事件發(fā)生（冠心病和腦卒中）的 關系，計算危險等位基因的效應值（(6)、相對危險度（Odds ratio, 0R)或風險比（Hazard ratio, HR)。綜合每個個體攜帶22個SNP位點的危險等位基因情況，對每個研究對象進行 遺傳風險評分，評分方法是利用前期血壓全基因組研究獲得的風險等位基因效應值