一種生產(chǎn)安薩菌素p-3及15-羥基衍生物的擬諾卡氏菌及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及工業(yè)微生物的技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種擬諾卡氏菌及其生產(chǎn)安莎霉素P-3及其15-羥基衍生物的技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]安莎類(lèi)抗生素具有抗癌、抗細(xì)菌、抗真菌、抗病毒、抗結(jié)核、降血脂等多種生物活性，近年來(lái)已成為許多科研機(jī)構(gòu)和制藥公司研宄的熱點(diǎn)。安莎霉素(又稱(chēng)安絲菌素，Jasaffii1ci/?)是一類(lèi)微生物來(lái)源的美登木素生物堿，其組分有Ρ-0、Ρ-1、Ρ-2、Ρ-3、Ρ-3’、P_4和P-4’。其中安莎霉素P-3 (Ansamitocin P_3)為主要發(fā)酵產(chǎn)物，其通過(guò)阻礙微管形成從而阻止細(xì)胞的有絲分裂使細(xì)胞死亡，在體外和荷瘤動(dòng)物中具有顯著抗腫瘤作用。
[0003]已報(bào)道的安莎霉素P-3產(chǎn)生菌株僅有束絲放線(xiàn)菌屬的pret1sumsubsp.pret1sum N0.Higashide et al., 1977)和 Jciiflo1SjTweffia pret1sumsubsp.aurantium ATCC 31565及其突變株，而其他屬菌株未見(jiàn)報(bào)道。因此，從自然環(huán)境中尋找產(chǎn)安莎霉素P-3的新菌源，對(duì)獲得抗癌藥物安莎霉素P-3高效產(chǎn)生菌和提高其發(fā)酵水平具有重要意義。
[0004]參考文獻(xiàn):
L Higashide, E” K Asai, K.0otsu， S.Tanida, Y.Kozai， Τ.Hasegawa,L Kishi， Y.Sugino, and M.Yoneda.1977.Ansamitocin， a group of novelmaytansinoid antib1tics with antitumour properties from Nocardia.Nature270:721-722 o
[0005]2.Cassady，J.M.，K.K.Chan, K G.Floss，and E.Leistner.2004.Recentdevelopments in the maytansinoi d an ti tumor agents.Chem Pharm Bull (Tokyo)52:1-26o
[0006]3.Tanidaf S.f T.Hasegawaf K.Hatano， E.Higashidef and M.Yoneda.1980.Ansami toe ins, maytansinoi d an ti tumor an ti bi o ti cs.Producing organ! sm，fermentat1n，and antimicrobial activities.J Antib1t (Tokyo) 33:192-8。
[0007]4.1zawaf K，Y.Vada, F.Kasaharaf M.Asaif and T.Kish1.1981.Hydroxyla ti on of ansamitocin P~3.J Antib1t (Tokyo) 34:1591-5。
[0008]5.Nakahamaf Κ.，M.1zawaf M.Asaif M.Kida, and T.Kish1.1981.Microbial convers1n of ansamitocin.J Antib1t (Tokyo) 34:1581-6。
[0009]6.Suwanborirux，K.，C.J.Chang，R.V.Spjut, and J.M Cassady.1990.Ansami toe in P_3，a maytansinoi dy from Claopodium cri spi foil um and Anomodonattenuatus or associated actinomycetes.Experientia 46:117-20o
[0010]7.Bandi，S., Y.Kim，Y.K.Changf G.R Shangf T.K Yu, and K G.Floss.2006.Construct1n of asm2 delet1n mutant of Actinosynnema pret1sumand medium optimizat1n for ansamitocin P~3 product1n using statisticalapproach.Journal of Microb1logy and B1 technology 16:1338-1346。
[0011]8.Li，Y., H.Kobayashi, Y.Hashimo to, and S.1wasak1.1992.Bindingselectivity of rhizoxin, phomopsin A, vinblastine， and ansamitocin P~3 tofungal tubulins: differential interact1ns of these antimitotic agents wi thbrain and fungal tubulins.B1chem B1phys Res Conmun 187:722-9。
[0012]9.Venghateri, J.Β.，T.Κ.Gupta, P.J.Vermaf A.Kunwar，and D.Panda.2013.Ansamitocin P~3 depolymerizes microtubules and induces apoptosis bybinding to tubulin at the vinblastine site.PLoS One 8:e75182o
[0013]10.Jiaf Y., and J.J.Zhong.2011.Enhanced product1n of ansamitocinPS by addit1n of Mg2+ in fermentat1n of Actinosynnema pret1sum.B1resourTechnol 102:10147-50。
[0014]Gao，Y., Y.X.Fan，K.Nambou，L J.Wei, Z.J.Liu, T.1manaka，and Q.Hua.2014.Enhancement of ansamitocin P~3 product1n in Actinosynnema pret1sumby a synergistic effect of glycerol and glucose.Journal of IndustrialMicrob1logy & B1 technology 41:143-1520

【發(fā)明內(nèi)容】

[0015]針對(duì)目前國(guó)內(nèi)外安莎霉素P-3產(chǎn)生菌株僅有束絲放線(xiàn)菌屬未見(jiàn)報(bào)道其他屬菌株的技術(shù)現(xiàn)狀，特別是沒(méi)有擬諾卡氏菌生產(chǎn)安莎霉素P-3及其15-羥基衍生物的應(yīng)用相關(guān)報(bào)道。本發(fā)明目的旨在于提供一種生產(chǎn)安莎菌素P-3及15-羥基衍生物的擬諾卡氏菌及其制備方法和應(yīng)用，特別是本發(fā)明提供一種擬諾卡氏菌(M3CariZ1ASi1S sp.) EGI 80425 CGMCCN0.9969及其在生產(chǎn)安莎霉素P-3及其15-羥基衍生物中的應(yīng)用。
[0016]本發(fā)明采用的主要技術(shù)方案:
本發(fā)明從中國(guó)新疆準(zhǔn)噶爾盆地天然高鹽堿地樣品環(huán)境中取樣分離，以不同的培養(yǎng)溫度、PH值、培養(yǎng)基為富集條件，篩選出一批生長(zhǎng)良好的微生物菌株，從中優(yōu)選出一株編號(hào)為EGI 80425的菌株，經(jīng)過(guò)微生物菌種的生理生化特性、形態(tài)觀察和分子鑒定等系列試驗(yàn)驗(yàn)證確定，該菌種是一種擬諾卡氏菌sp.)EGI 80425，已由中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心保藏，其保藏號(hào)為CGMCC N0.9969，利用該菌種在生產(chǎn)安莎霉素P-3及其15-輕基衍生物中的應(yīng)用獲得良好的技術(shù)效果。通過(guò)試驗(yàn)證明該擬諾卡氏菌(Nocard1psissp.) EGI 80425在生產(chǎn)安莎霉素P_3及其15-羥基衍生物中具有良好的應(yīng)用前景。
[0017]本發(fā)明具體提供一種利用擬諾卡氏菌(sp.) EGI 80425 CGMCCN0.9969及在生產(chǎn)安莎霉素P-3及其15-羥基衍生物中的應(yīng)用。本發(fā)明所使用的生產(chǎn)安莎霉素P-3及其15-羥基衍生物的菌株由中國(guó)科學(xué)院新疆生態(tài)與地理研宄所從中國(guó)新疆準(zhǔn)噶爾盆地天然高鹽堿地樣品環(huán)境中取樣分離，以不同的培養(yǎng)溫度、PH值、培養(yǎng)基為富集條件，篩選出一批生長(zhǎng)良好的微生物菌株，從中優(yōu)選出一株編號(hào)為EGI 80425的菌株保藏于布達(dá)佩斯條約微生物國(guó)際保藏單位:中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)保藏，地址:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研宄所，郵編:100101，保藏日期為2014年11月13日，菌種保藏號(hào)為CGMCC N0.9969，該菌株的菌落表面干燥，扁平；氣生菌絲與基內(nèi)菌絲連接緊密?；鶅?nèi)菌絲呈黃白色或亮橘黃色，發(fā)達(dá)、不分隔；氣生菌絲為白色，發(fā)育良好，孢子表面光滑，在ISP2瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)14d的EGI 80425電鏡照片分別可見(jiàn)氣生菌絲及孢子絲和孢