kg、聚氧丙稀甘油40kg。先將發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，冷卻至20?27°C，并用無(wú)菌空氣保壓。經(jīng)檢測(cè)，氨基氮80mg/100ml、溶磷98g/ml、總糖40mg/100ml。將培養(yǎng)好的種子液移入發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，首次移種量為10m3，發(fā)酵培養(yǎng)70h后，第二次移種量為5m3。發(fā)酵培養(yǎng)基初始pH6.7 ;采用變溫控制工藝，O?50h:培養(yǎng)溫度26?27°C，51?120h:培養(yǎng)溫度24?25°C，121h?發(fā)酵結(jié)束:培養(yǎng)溫度23?24°C ;采用變頻攪拌控制工藝，O?50h:轉(zhuǎn)速控制在80r/min，51?120h:轉(zhuǎn)速控制在120r/min，12 Ih?發(fā)酵結(jié)束:轉(zhuǎn)速控制在90r/min ;發(fā)酵過(guò)程中罐壓0.05?0.06MPa ；pH控制在6?7 ;0?50h:空氣流量200m3/h ；51?120h:空氣流量300m3/h ;121h?發(fā)酵結(jié)束:空氣流量100m3/h ;發(fā)酵前50h內(nèi)，不控制溶氧；51?80h，溶氧控制在60%以上；81?120h，溶氧控制在30%以上；121?發(fā)酵結(jié)束:溶氧控制在40%以上。發(fā)酵160h，菌體濃度40%、總糖 8.7mg/100ml、氨基氮 13.2mg/100ml、化學(xué)效價(jià) 11.lmg/L、pH6.9。
[0051]上述實(shí)施例1-5的發(fā)酵過(guò)程中，根據(jù)檢測(cè)情況，采用流加法進(jìn)行補(bǔ)料，補(bǔ)料包括補(bǔ)油、補(bǔ)水、補(bǔ)硫酸錢(qián)、補(bǔ)糖和pH控制，其中
a補(bǔ)增效劑工藝控制:
發(fā)酵前50h不用進(jìn)行補(bǔ)增效劑；
發(fā)酵時(shí)間在51?120h，當(dāng)脂肪含量低于lg/L，補(bǔ)入增效劑，控制脂肪含量為I?1.5g/L，每隔6?8h檢測(cè)發(fā)酵液脂肪含量，
發(fā)酵時(shí)間在121h?發(fā)酵結(jié)束，當(dāng)脂肪含量低于0.3g/L，補(bǔ)入增效劑，控制脂肪含量為
0.3?0.5g/L，每隔6?8h檢測(cè)發(fā)酵液脂肪含量； b補(bǔ)水工藝控制:
發(fā)酵前60h不用進(jìn)行補(bǔ)水，
發(fā)酵時(shí)間在61?121h，當(dāng)菌體濃度高于40%，加入滅菌水，要求控制發(fā)酵液菌體濃度在35?40%，每隔6?8h檢測(cè)發(fā)酵液菌體濃度，
發(fā)酵時(shí)間在121h?發(fā)酵結(jié)束，當(dāng)菌體濃度高于35%，加入滅菌水，要求控制發(fā)酵液菌體濃度在30?35%，每隔6?8h檢測(cè)發(fā)酵液菌體濃度；c發(fā)酵過(guò)程pH控制工藝:
發(fā)酵前60h，pH不進(jìn)行控制，
發(fā)酵時(shí)間在61?120h，若pH < 6.0，加入10?20%的氫氧化鈉，調(diào)節(jié)pH至6?7 ;若pH > 7，加入30%的硫酸溶液，調(diào)節(jié)pH至6?7 ;
發(fā)酵時(shí)間在121?發(fā)酵結(jié)束，若pH < 6.3，加入10?20%的氫氧化鈉，調(diào)節(jié)pH控至
6.3?6.7 ;若pH > 6.7，加入30%的硫酸溶液，調(diào)節(jié)pH至6.3?6.7 ; d補(bǔ)入麥芽糖:
發(fā)酵前60h，總糖含量不進(jìn)行控制，
發(fā)酵61h至120h:總糖含量< 15mg/100ml時(shí)，補(bǔ)入已滅菌的麥芽糖溶液，使總糖的含量控制在15?20mg/100ml.發(fā)酵121h至發(fā)酵結(jié)束:總糖含量< 5mg/100ml時(shí)，補(bǔ)入已滅菌的麥芽糖溶液，使總糖的含量控制在5?10mg/100ml。
[0052]上述補(bǔ)糖工藝中加入麥芽糖酶，其濃度控制在0.001?0.003%。
[0053]e補(bǔ)硫酸銨
薩菲菌素發(fā)酵培養(yǎng)過(guò)程中，分別在60h和120h補(bǔ)入30%的硫酸銨溶液，其用量控制在發(fā)酵液體積的0.01?0.03%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種淡黃色鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)薩菲菌素的培養(yǎng)基，其特征在于包括種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基，其中 所述種子培養(yǎng)基的組成為:花生油I?5ml/L、麥芽糖5?9g/L、麥芽糖酶0.0Ol?.0.005g/L、蟲(chóng)丘蟲(chóng)弓丨粉11?15g/L、玉米楽10?14ml/L、生物氮素5?9g/L、硝酸錢(qián)0.5?0.9g/L、輕質(zhì)碳酸媽I?5g/L ;磷酸二氫鉀0.1?0.5g/L ； 所述發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為:花生油10?14ml/L、麥芽糖15?19g/L、麥芽糖酶0.003?.0.007g/L、蚯蚓粉20?24g/L、玉米漿17?21ml/L、生物氮素12?16g/L、硫酸銨0.5?.0.9g/L、輕質(zhì)碳酸1? 3?7g/L、磷酸二氫鉀0.5?0.9g/L、氯化鉀0.1?0.5g/L、硫酸鎂.0.03 ?0.07g/L、硫酸亞鐵 0.1 ?0.5g/L、氯化鈷 0.003 ?0.007g/L，氧載體 0.1 ?0.5g/L、堿式碳酸鎂或氧化鋁0.3?0.7g/L、聚氧丙烯甘油0.3?0.4g/L。
2.按照權(quán)利要求1所述的淡黃色鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)薩菲菌素的培養(yǎng)基，其特征在于所述氧載體是正己烷或全氟化碳。
3.一種利用權(quán)利要求1或2所述培養(yǎng)基生產(chǎn)薩菲菌素的培養(yǎng)方法，其特征在于其工藝步驟為: . O種子培養(yǎng):首先將種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至25?30°C，并用無(wú)菌空氣保壓，然后在火焰保護(hù)下，將已經(jīng)培養(yǎng)好的淡黃色鏈霉菌母瓶發(fā)酵液按照0.1?0.2L/m3的接種量接入種子培養(yǎng)基中進(jìn)行種子培養(yǎng)，至菌體濃度20?30%、pH值6?7、培養(yǎng)時(shí)間40?60h移種； . 2)發(fā)酵培養(yǎng):先將發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，冷卻至20?27°C，并用無(wú)菌空氣保壓，然后將培養(yǎng)好的種子液移入發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，至菌體濃度35?40%、總糖< 10mg/100ml、氨基氮5?15mg/100ml、化學(xué)效價(jià)> 10mg/L、pH6?7、培養(yǎng)時(shí)間140?160h終止發(fā)酵。
4.按照權(quán)利要求3所述的培養(yǎng)方法，其特征在于所述種子液的移種為:種子培養(yǎng)結(jié)束，首先移種8?10%，當(dāng)發(fā)酵培養(yǎng)60?70h時(shí)，再次移種3?5%。
5.按照權(quán)利要求3所述的培養(yǎng)方法，其特征在于所述種子培養(yǎng)基滅菌后的的質(zhì)量要求為:氛基氣 30 ?50mg/100ml、溶憐 30 ?50ug/ml、總糖 10 ?20mg/100ml、pH6 ?7。
6.按照權(quán)利要求3所述的培養(yǎng)方法，其特征在于所述發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后的質(zhì)量要求為:氛基氣 60 ?80mg/100ml、溶憐 50 ?100ug/ml、總糖 30 ?40mg/100ml、pH6 ?7。
7.按照權(quán)利要求3所述的培養(yǎng)方法，其特征在于所述培養(yǎng)好的淡黃色鏈霉菌母瓶發(fā)酵液質(zhì)量要求為:pH6?8 ;菌體濃度25?30% ;鏡檢無(wú)雜菌。
8.按照權(quán)利要求3所述的培養(yǎng)方法，其特征在于所述種子培養(yǎng)條件為:罐壓0.03?.0.05MPa ;罐溫24?26°C ;空氣流量:0?10h，采用空氣攪拌代替機(jī)械攪拌；llh?移種:.20 ?40m3/h ;攬樣轉(zhuǎn)速 60 ?80r/min。
9.按照權(quán)利要求3所述的培養(yǎng)方法，其特征在于所述發(fā)酵培養(yǎng)條件為: a培養(yǎng)基初始pH:發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后pH控制在6?7 ; b溫度:采用變溫控制工藝，. O?50h:培養(yǎng)溫度26?27°C， .51?120h:培養(yǎng)溫度24?25°C，.121h?發(fā)酵結(jié)束:培養(yǎng)溫度23?24°C ； c攪拌轉(zhuǎn)速:采用變頻攪拌控制工藝，. O?50h:轉(zhuǎn)速控制在80r/min，. 51?120h:轉(zhuǎn)速控制在120r/min， 121h?發(fā)酵結(jié)束:轉(zhuǎn)速控制在90r/min ； d壓力控制:罐壓0.05?0.06MPa ； e pH控制:發(fā)酵過(guò)程中pH控制在5?7 ; f空氣流量:. O ?50h:150 ?200m3A ;.51 ?120h:200 ?300m3A ;. 121h?發(fā)酵結(jié)束:50?100m3/h ； h溶氧控制: 發(fā)酵前50h內(nèi)，不控制溶氧； . 51?80h，溶氧控制在60%以上； . 81?120h，溶氧控制在30%以上； .121?發(fā)酵結(jié)束:溶氧控制在40%以上。
10.按照權(quán)利要求3所述的培養(yǎng)方法，其特征在于所述發(fā)酵過(guò)程中采用流加法進(jìn)行補(bǔ)料，補(bǔ)料包括補(bǔ)增效劑、補(bǔ)水、補(bǔ)硝酸銨、補(bǔ)麥芽糖和PH控制，其中a補(bǔ)增效劑工藝控制: 發(fā)酵前50h不用進(jìn)行補(bǔ)增效劑， 發(fā)酵時(shí)間在51?120h，當(dāng)脂肪含量低于lg/L，補(bǔ)入增效劑，控制脂肪含量為I?1.5g/L，每隔6?8h檢測(cè)發(fā)酵液脂肪含量， 發(fā)酵時(shí)間在121h?發(fā)酵結(jié)束，當(dāng)脂肪含量低于0.3g/L，補(bǔ)入增效劑，控制脂肪含量為.0.3?0.5g/L，每隔6?8h檢測(cè)發(fā)酵液脂肪含量； b補(bǔ)水工藝控制: 發(fā)酵前60h不用進(jìn)行補(bǔ)水， 發(fā)酵時(shí)間在61?121h，當(dāng)菌體濃度高于40%，加入滅菌水，要求控制發(fā)酵液菌體濃度在.35?40%，每隔6?8h檢測(cè)發(fā)酵液菌體濃度， 發(fā)酵時(shí)間在121h?發(fā)酵結(jié)束，當(dāng)菌體濃度高于35%，加入滅菌水，要求控制發(fā)酵液菌體濃度在30?35%，每隔6?8h檢測(cè)發(fā)酵液菌體濃度；c發(fā)酵過(guò)程pH控制工藝: 發(fā)酵前60h，pH不進(jìn)行控制， 發(fā)酵時(shí)間在61?120h，若pH < 6.0，加入10?20%的氫氧化鈉，調(diào)節(jié)pH至6?7 ;若pH > 7，加入30%的硫酸溶液，調(diào)節(jié)pH至6?7， 發(fā)酵時(shí)間在121?發(fā)酵結(jié)束，若pH < 6.3，加入10?20%的氫氧化鈉，調(diào)節(jié)pH控至.6.3?6.7 ;若pH > 6.7，加入30%的硫酸溶液，調(diào)節(jié)pH至6.3?6.7 ; d補(bǔ)入麥芽糖: 發(fā)酵前60h，總糖含量不進(jìn)行控制， 發(fā)酵61h至120h:總糖含量< 15mg/100ml時(shí)，補(bǔ)入已滅菌的麥芽糖溶液，使總糖的含量控制在15?20mg/100ml.發(fā)酵121h至發(fā)酵結(jié)束:總糖含量< 5mg/100ml時(shí)，補(bǔ)入已滅菌的麥芽糖溶液，使總糖的含量控制在5?10mg/100ml， 上述補(bǔ)糖工藝中加入麥芽糖酶，其濃度控制在0.0Ol?0.003% ； e補(bǔ)硫酸錢(qián): 薩菲菌素發(fā)酵培養(yǎng)過(guò)程中，分別在60h和120h補(bǔ)入30%的硫酸銨溶液，其用量控制在發(fā)酵液體積的0.01?0.03%。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種淡黃色鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)薩菲菌素的培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法，利用本發(fā)明中提供的培養(yǎng)基配方和發(fā)酵控制工藝，能夠提高薩菲菌素發(fā)酵單位，降低發(fā)酵成本，并且最大限度的降低原輔料來(lái)源不受環(huán)境影響，保證其供應(yīng)充足，實(shí)現(xiàn)薩菲菌素穩(wěn)定、高效的生產(chǎn)。
【IPC分類(lèi)】C12R1-465, C12P21-02
【公開(kāi)號(hào)】CN104846045
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510294684
【發(fā)明人】任勇
【申請(qǐng)人】寧夏泰益欣生物科技有限公司
【公開(kāi)日】2015年8月19日
【申請(qǐng)日】2015年6月2日