46]膠紅酵母破壁菌體中添加60ml無(wú)水乙醇，菌體與無(wú)水乙醇的質(zhì)量體積比為1:6，充分混勻后，27°C浸提23min ；
[0047]米用超聲波進(jìn)一步提取，得到海紅好青素粗提液。超聲條件:功率為500W，超聲時(shí)間8s，間歇8s，超聲90次，時(shí)間30min。
[0048]按照海紅蝦青素乙醇提取液:石油醚體積比為1:1加入石油醚萃取，輕輕晃動(dòng)幾下，以免出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，待分層后加入再加適量蒸餾水，待上層石油醚相澄清為止，使蝦青素等極性小的物質(zhì)被充分萃取到石油醚相中，而在乙醇相中為極性較大的一些非蝦青素類物質(zhì)。將石油醚相的萃取液移入旋轉(zhuǎn)瓶，用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行濃縮，濃縮溫度20°C，真空度為-0.1MPa，濃縮至黏稠狀停止。
[0049]濃縮液于通風(fēng)櫥中用氮?dú)獯蹈桑玫胶＜t蝦青素粗品。海紅蝦青素抗氧化能力很強(qiáng)，在空氣中易被氧化，采用氮?dú)獯蹈煞捎行У谋ＷC其結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。
[0050]實(shí)施例5:
[0051 ] 準(zhǔn)確稱取膠紅酵母菌體(濕菌泥)9g，加入45ml水(底物濃度25 % )，加入β -葡聚糖酶(酶活10000U/g)和β -甘露聚糖酶(酶活60000U/g)各0.22g，調(diào)節(jié)pH至4.8，50°C水浴1.5h，之后4200rpm，離心20min，棄去上清膠紅酵母破壁菌體，收集膠紅酵母破壁菌體。
[0052]膠紅酵母破壁菌體中添加70ml無(wú)水乙醇，菌體與無(wú)水乙醇的質(zhì)量體積比為1:7，充分混勻后，28°C浸提15min ；
[0053]米用超聲波進(jìn)一步提取，得到海紅Φ下青素粗提液。超聲條件:功率為1000W，超聲時(shí)間8s，間歇8s，超聲90次，時(shí)間15min。
[0054]按照海紅蝦青素乙醇提取液:石油醚體積比為1:1加入石油醚萃取，輕輕晃動(dòng)幾下，以免出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，待分層后加入再加適量蒸餾水，待上層石油醚相澄清為止，使蝦青素等極性小的物質(zhì)被充分萃取到石油醚相中，而在乙醇相中為極性較大的一些非蝦青素類物質(zhì)。將石油醚相的萃取液移入旋轉(zhuǎn)瓶，用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行濃縮，濃縮溫度20°C，真空度為-0.1MPa，濃縮至黏稠狀停止。
[0055]濃縮液于通風(fēng)櫥中用氮?dú)獯蹈桑玫胶＜t蝦青素粗品。海紅蝦青素抗氧化能力很強(qiáng)，在空氣中易被氧化，采用氮?dú)獯蹈煞捎行У谋ＷC其結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。
[0056]實(shí)施例6:
[0057]制備膠紅酵母菌體:稱取膠紅酵母發(fā)酵液3800g，離心20min，棄上清液，用蒸飽水洗后再次離心，重復(fù)操作4次，得到膠紅酵母菌體(濕菌泥)。
[0058]準(zhǔn)確稱取膠紅酵母菌體(濕菌泥)8g，加入40ml水(底物濃度20 % )，加入β -葡聚糖酶(酶活10000U/g)0.2g和β-甘露聚糖酶(酶活60000U/g)0.22g，調(diào)節(jié)pH至5.0，50°C水浴2h，之后4200rpm，離心25min，棄去上清膠紅酵母破壁菌體，收集膠紅酵母破壁菌體。
[0059]膠紅酵母破壁菌體中添加70ml無(wú)水乙醇，菌體與無(wú)水乙醇的質(zhì)量體積比為1:7，充分混勻后，28°C浸提23min ；
[0060]米用超聲波進(jìn)一步提取，得到海紅ili下青素粗提液。超聲條件:功率為900W，超聲時(shí)間9s，間歇9s，超聲95次，時(shí)間30min。
[0061]按照海紅蝦青素乙醇提取液:石油醚體積比為1:1加入石油醚萃取，輕輕晃動(dòng)幾下，以免出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，待分層后加入再加適量蒸餾水，待上層石油醚相澄清為止，使蝦青素等極性小的物質(zhì)被充分萃取到石油醚相中，而在乙醇相中為極性較大的一些非蝦青素類物質(zhì)。將石油醚相的萃取液移入旋轉(zhuǎn)瓶，用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行濃縮，濃縮溫度25°C，真空度為-0.1MPa，濃縮至黏稠狀停止。
[0062]濃縮液于通風(fēng)櫥中用氮?dú)獯蹈桑玫胶＜t蝦青素粗品。海紅蝦青素抗氧化能力很強(qiáng)，在空氣中易被氧化，采用氮?dú)獯蹈煞捎行У谋ＷC其結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。
[0063]實(shí)施例7
[0064]制備膠紅酵母菌體:稱取膠紅酵母發(fā)酵液4000g，離心15min，棄上清液，用蒸飽水洗后再次離心，重復(fù)操作4次，得到膠紅酵母菌體(濕菌泥)。
[0065]準(zhǔn)確稱取膠紅酵母菌體(濕菌泥)9g，加入30ml水(底物濃度30 % )，加入β -葡聚糖酶(酶活10000U/g)0.2g和β-甘露聚糖酶(酶活60000U/g)0.3g，調(diào)節(jié)pH至5.0，50°C水浴2h，之后4200rpm，離心25min，棄去上清膠紅酵母破壁菌體，收集膠紅酵母破壁菌體，破壁情況如圖1a-圖1b所示。
[0066]膠紅酵母破壁菌體中添加90ml無(wú)水乙醇，菌體與無(wú)水乙醇的質(zhì)量體積比為1:9，充分混勻后，29°C浸提25min ；
[0067]米用超聲波進(jìn)一步提取，得到海紅好青素粗提液。超聲條件:功率為1000W，超聲時(shí)間8s，間歇7s，超聲115次，時(shí)間19min。
[0068]按照海紅蝦青素乙醇提取液:石油醚體積比為1:1加入石油醚萃取，輕輕晃動(dòng)幾下，以免出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，待分層后加入再加適量蒸餾水，待上層石油醚相澄清為止，使蝦青素等極性小的物質(zhì)被充分萃取到石油醚相中，而在乙醇相中為極性較大的一些非蝦青素類物質(zhì)。將石油醚相的萃取液移入旋轉(zhuǎn)瓶，用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行濃縮，濃縮溫度25°C，真空度為-0.1MPa，濃縮至黏稠狀停止。
[0069]濃縮液于通風(fēng)櫥中用氮?dú)獯蹈?，得到海紅蝦青素粗品。海紅蝦青素抗氧化能力很強(qiáng)，在空氣中易被氧化，采用氮?dú)獯蹈煞捎行У谋ＷC其結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。
[0070]實(shí)施例8
[0071]制備膠紅酵母菌體:稱取膠紅酵母發(fā)酵液4000g，離心15min，棄上清液，用蒸餾水洗后再次離心，重復(fù)操作4次，得到膠紅酵母菌體(濕菌泥)。
[0072]準(zhǔn)確稱取膠紅酵母菌體(濕菌泥)9g，加入30ml水(底物濃度30 % )，加入β -葡聚糖酶(酶活10000U/g)0.2g和β-甘露聚糖酶(酶活60000U/g)1.5g，調(diào)節(jié)pH至5.0，50°C水浴2h，之后4200rpm，離心25min，棄去上清膠紅酵母破壁菌體，收集膠紅酵母破壁菌體，破壁情況如圖1a-圖1b所示。
[0073]膠紅酵母破壁菌體中添加90ml無(wú)水乙醇，菌體與無(wú)水乙醇的質(zhì)量體積比為1:9，充分混勻后，28°C浸提25min ；
[0074]米用超聲波進(jìn)一步提取，得到海紅好青素粗提液。超聲條件:功率為1000W，超聲時(shí)間8s，間歇7s，超聲115次，時(shí)間19min。
[0075]按照海紅蝦青素乙醇提取液:石油醚體積比為1:1加入石油醚萃取，輕輕晃動(dòng)幾下，以免出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，待分層后加入再加適量蒸餾水，待上層石油醚相澄清為止，使蝦青素等極性小的物質(zhì)被充分萃取到石油醚相中，而在乙醇相中為極性較大的一些非蝦青素類物質(zhì)。將石油醚相的萃取液移入旋轉(zhuǎn)瓶，用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行濃縮，濃縮溫度31°C，真空度為-0.1MPa，濃縮至黏稠狀停止。
[0076]濃縮液于通風(fēng)櫥中用氮?dú)獯蹈桑玫胶＜t蝦青素粗品。海紅蝦青素抗氧化能力很強(qiáng)，在空氣中易被氧化，采用氮?dú)獯蹈煞捎行У谋ＷC其結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。
[0077]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所述的從膠紅酵母中提取海紅蝦青素的方法，達(dá)到了如下效果:
[0078](I)本發(fā)明中采用酶法破壁比較徹底，破壁效果明顯好于化學(xué)法，有利于保持海紅蝦青素結(jié)構(gòu)的完整性，成本方面也存在較大的優(yōu)勢(shì)，可以進(jìn)行大規(guī)模提取，容易實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。
[0079](2)本發(fā)明在濃縮海紅蝦青素時(shí)在氮?dú)猸h(huán)境下吹干，由于海紅蝦青素抗氧化能力很強(qiáng)，在空氣中易被氧化，采用氮?dú)獯蹈煞捎行У谋ＷC其結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。
[0080]上述說(shuō)明示出并描述了本發(fā)明的若干優(yōu)選實(shí)施例，但如前所述，應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明并非局限于本文所披露的形式，不應(yīng)看作是對(duì)其他實(shí)施例的排除，而可用于各種其他組合、修改和環(huán)境，并能夠在本文所述發(fā)明構(gòu)想范圍內(nèi)，通過(guò)上述教導(dǎo)或相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)或知識(shí)進(jìn)行改動(dòng)。而本領(lǐng)域人員所進(jìn)行的改動(dòng)和變化不脫離本發(fā)明的精神和范圍，則都應(yīng)在本發(fā)明所附權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種從膠紅酵母中提取海紅蝦青素的方法，其特征在于，包括步驟:膠紅酵母菌體破壁:采用酶法對(duì)所述膠紅酵母菌體進(jìn)行破壁，破壁條件:加入酶活為10000U/g的β-葡聚糖酶和酶活為60000U/g的β-甘露聚糖酶，兩種酶的比例為1:1，分別加酶量為0.005-0.05g/ml，調(diào)節(jié)pH至4.5-5.0，50°C水浴l_2h，得到膠紅酵母破壁菌體；無(wú)水乙醇浸提:收集所述膠紅酵母破壁菌體，按料液比為1:3-9加入無(wú)水乙醇溶液浸提，25-30°C浸提10_25min，離心后舍棄上清液，得到海紅蝦青素混合液； 超聲提取:對(duì)所述海紅蝦青素混合液進(jìn)行超聲提取，超聲條件為:功率500W-1000W，工作5-10s，間歇5-10s，超聲80-120次，時(shí)間15_30min，得到海紅蝦青素粗提液； 去除極性雜質(zhì):向所述海紅蝦青素粗提液中添加等體積的石油醚和無(wú)水乙醇，輕輕晃動(dòng)，待分層后加入蒸餾水，得到石油醚相萃取液； 獲得產(chǎn)品:將所述石油醚相萃取液用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行濃縮，濃縮液于通風(fēng)櫥中用氮?dú)獯蹈?，得到海紅蝦青素產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從膠紅酵母中提取海紅蝦青素的方法，其特征在于，還包括膠紅酵母菌體收集的步驟，膠紅酵母發(fā)酵液3500-5500g，離心15-30min，棄上清液，用蒸餾水洗后再次離心，重復(fù)操作3-4次，得到膠紅酵母菌體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從膠紅酵母中提取海紅蝦青素的方法，其特征在于，所述真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮時(shí)的濃縮溫度為20-35°C、真空度為-0.05一-0.1MPa，濃縮至黏稠狀停止。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從膠紅酵母中提取海紅蝦青素的方法，其特征在于，所述步驟去除極性雜質(zhì)中加入蒸餾水至上層澄清為止。
【專利摘要】本申請(qǐng)公開了一種從膠紅酵母中提取海紅蝦青素的方法，包括步驟：膠紅酵母菌體破壁，采用酶法對(duì)所述膠紅酵母菌體進(jìn)行破壁，破壁條件：加入酶活為10000U/g的β-葡聚糖酶和酶活為60000U/g的β-甘露聚糖酶，兩種酶的比例為1:1，分別加酶量為0.005-0.05g/ml，調(diào)節(jié)pH至4.5-5.0，50℃水浴1-2h，得到膠紅酵母破壁菌體；無(wú)水乙醇浸提；超聲提??；去除極性雜質(zhì)；獲得產(chǎn)品。本發(fā)明中采用酶法破壁比較徹底，破壁效果明顯好于化學(xué)法，有利于保持海紅蝦青素結(jié)構(gòu)的完整性，成本方面也存在較大的優(yōu)勢(shì)，可以進(jìn)行大規(guī)模提取，容易實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。CGMCC NO.1012320141201
【IPC分類】C07C403-24
【公開號(hào)】CN104844492
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510242521
【發(fā)明人】魏升寧, 張文麗, 孫常明, 李紀(jì)豐, 張美麗, 程振偉
【申請(qǐng)人】威海利達(dá)生物科技有限公司
【公開日】2015年8月19日
【申請(qǐng)日】2015年5月13日