一種從石蒜屬植物中提取單體石蒜堿的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種石蒜堿的提取方法，尤其是設(shè)及一種從石蒜屬植物中提取石蒜堿 單體的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 石蒜中石蒜堿等生物堿的化學(xué)合成方法已經(jīng)有報(bào)道，但從石蒜屬植物中提取仍是 該類物質(zhì)的一大重要來(lái)源，現(xiàn)有技術(shù)中石蒜生物堿的提取方法主要有溶劑提取法、超聲波 提取法、微波提取法、超臨界流體萃取等方法，該些方法一般都存在環(huán)境污染嚴(yán)重、生產(chǎn)成 本高等缺點(diǎn)。
[0003] 中國(guó)專利2008102047350公開了一種石蒜中石蒜堿的提取分離方法，W石蒜鱗莖 為原料，采用復(fù)合酶預(yù)處理，稀鹽酸浸提，超聲波輔助提取，氯仿萃取方法提取石蒜堿。雖提 高了石蒜堿的提取率，但提取的不是石蒜堿單體，且步驟復(fù)雜，操作繁瑣。目前缺乏對(duì)石蒜 堿單體的提取。
[0004] 中國(guó)專利2007100532075公開了一種從石蒜屬植物中提取活性生物堿的方法，生 物堿純化根據(jù)石蒜生物堿堿性強(qiáng)弱不同，使用分段萃取技術(shù)同步得到多種石蒜生物堿粗產(chǎn) 品，再經(jīng)過(guò)柱層析和反復(fù)重結(jié)晶得到高純度的石蒜生物堿單體（加蘭他敏、石蒜堿、力可拉 敏、多花水仙堿），而萃取用的有機(jī)溶劑為0. 5-3倍體積的氯仿、正了醇、石油離、己酸己醋、 己離和異戊醇中的一種，雖該發(fā)明提高了石蒜綜合利用度，但是操作復(fù)雜，有機(jī)溶劑含量 高，污染環(huán)境。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是，克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷，提供一種提取時(shí) 間短、溶劑用量少、環(huán)保的從石蒜屬植物中提取石蒜堿單體的方法。
[0006] 本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是，一種從石蒜屬植物中提取石蒜堿單 體的方法，包括W下步驟：
[0007] (1)提??；稱取經(jīng)處理的石蒜粉末，W料液比1:10,比例單位為g/mU加入抑 為4. 5的水中，加入石蒜粉末質(zhì)量1.0% -3.0% (優(yōu)選2.0% -2. 8%，更優(yōu)選2.5% ) 的纖維素酶與果膠酶的混合酶，所述纖維素酶與果膠酶的質(zhì)量比為1:1，在50°C下酶解 20-100min (優(yōu)選 40-80min，更優(yōu)選 60min)，然后超聲波處理 5-25min (優(yōu)選 15min-20min， 更優(yōu)選15min)，500化/min離屯、20min，取上清液，即得石蒜堿提取液；
[000引 （2)純化
[0009] ①溶劑萃取；將步驟（1)提取的石蒜堿提取液用化OH調(diào)節(jié)抑至10,按體積比1:1 加入萃取劑立氯甲燒，搖勻，靜置過(guò)夜，取下層氯仿化肥1調(diào)節(jié)抑至2,抽濾，得石蒜堿萃取 濃縮液；
[0010] ②陽(yáng)離子交換樹脂吸附；將步驟①中萃取濃縮液經(jīng)肥1調(diào)節(jié)抑至1~6(優(yōu)選 抑為2)用D-001型陽(yáng)離子交換樹脂，W上樣速率l-3BV/h(優(yōu)選3BV/h)上樣至飽和，用含 0. 5-2. 5mol/L (優(yōu)選1. 5mol/L)氨水的40% -80% (優(yōu)選70% )己醇溶液w 3BVA的洗脫 速率進(jìn)行洗脫，干燥，得干燥物I ;
[0011] ⑨反相硅膠柱層析；C18填料預(yù)處理，將20倍質(zhì)量于步驟②中干燥物I的Ci8填 料裝于層析柱中，然后W流動(dòng)相（流動(dòng)相；V(己膳）；V(磯酸鹽）為16 ; 84)溶解層析 出來(lái)的層析物，上樣，采用甲醇-水溶液分次洗脫，收集洗脫液，濃縮，真空冷凍干燥，得干 燥物II ;
[0012] ④正相硅膠柱層析；用經(jīng)預(yù)處理的20倍質(zhì)量于步驟⑨所得干燥物II的柱層析用 硅膠（200-300目）W柱直徑-柱高濕法裝柱，所述柱直徑-柱高的比例為1:10~30 (優(yōu) 選1:10)，步驟⑨所得干燥物II與硅膠混勻，加入洗脫劑溶解，所述洗脫劑為石油離、己酸己 醋、氯仿、丙酬、甲醇中的兩種溶劑混合；蒸發(fā)溶劑后干法上樣，洗脫，收集洗脫液，濃縮，真 空冷凍干燥，得干燥物III ;
[0013] ⑥重結(jié)晶；將步驟④所得干燥物III經(jīng)己醇溶解，再結(jié)晶得到石蒜堿粗品，過(guò)濾，在 50~60°C真空干燥的石蒜堿單體。
[0014] 進(jìn)一步，所述步驟④中，洗脫劑為石油離和己酸己醋，所述己酸己醋與石油離的體 積比為8. 4:1.6。
[0015] 進(jìn)一步，所述石蒜屬植物為紅花石蒜或稻草石蒜。
[0016] 進(jìn)一步，所述石蒜屬植物粉末為紅花石蒜鱗莖粉末。
[0017] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明操作簡(jiǎn)單，提取時(shí)間短、提取率高、溶劑用量少、成本較 低，采用超聲波協(xié)同酶法提取，石蒜堿得率為0. 1812% ;純化工藝環(huán)保，且純度高，可達(dá) 99. 4%。
【附圖說(shuō)明】
[001引圖1為本發(fā)明酶用量對(duì)石蒜堿得率的影響不意圖；
[0019] 圖2為本發(fā)明酶解時(shí)間對(duì)石蒜堿得率的影響示意圖；
[0020] 圖3為本發(fā)明超聲時(shí)間對(duì)石蒜堿得率的影響。
【具體實(shí)施方式】
[0021] W下結(jié)合附圖及實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明。
[00巧實(shí)施例1
[0023] 本實(shí)施例包括W下步驟；（1)提取；稱取經(jīng)處理的石蒜粉末，W料液比1:10,比例 單位為g/mU加入pH為4. 5的水中，加入石蒜粉末質(zhì)量1. 0% -3. 0%的纖維素酶與果膠酶 的混合酶，所述纖維素酶與果膠酶的質(zhì)量比為1: 1，在50°C下酶解20-100min，然后超聲波 處理5-25min，5000r/min離屯、20min，取上清液，即得石蒜堿提取液；
[0024] 似純化
[0025] ①溶劑萃?。粚⒉襟E（1)提取的石蒜堿提取液用化OH調(diào)節(jié)抑至10,按體積比1:1 加入萃取劑立氯甲燒，搖勻，靜置過(guò)夜，取下層氯仿化肥1調(diào)節(jié)抑至2,抽濾，得石蒜堿萃取 濃縮液；
[0026] ②陽(yáng)離子交換樹脂吸附；將步驟①中萃取濃縮液經(jīng)肥1調(diào)節(jié)抑至2,用D-001型陽(yáng) 離子交換樹脂，W上樣速率3BVA上樣至飽和，用含1. 5mol/L氨水的70%己醇溶液W 3BV/ h的洗脫速率進(jìn)行洗脫，干燥，得干燥物I ;
[0027] ⑨Ci8反相硅膠柱層析；C 18填料預(yù)處理，將20倍質(zhì)量于步驟②中干燥物I的C18填 料裝于層析柱中，然后W流動(dòng)相（流動(dòng)相；V(己膳）；V(磯酸鹽）為16 ; 84)溶解層析 出來(lái)的層析物，上樣，采用甲醇-水溶液分次洗脫，收集洗脫液，濃縮，真空冷凍干燥，得干 燥物II ;
[002引④正相硅膠柱層析；用經(jīng)預(yù)處理的20倍質(zhì)量于步驟⑨所得干燥物II的柱層析用 硅膠（200-300目）W柱直徑-柱高濕法裝柱，所述柱直徑-柱高的比例為1:10,步驟⑨所 得干燥物II與硅膠混勻，加入洗脫劑溶解，所述洗脫劑為石油離和己酸己醋，所述己酸己醋 與石油離的體積比為8. 4:1. 6 ;蒸發(fā)溶劑后干法上樣，洗脫，收集洗脫液，濃縮，真空冷凍干 燥，得干燥物III;
[0029] ⑥重結(jié)晶；將步驟④所得干燥物III經(jīng)己醇溶解，再結(jié)晶得到石蒜堿粗品，過(guò)濾，在 50~60°C真空干燥得純度為99. 4%的石蒜堿單體。
[0030] 石蒜屬植物粉末為紅花石蒜鱗莖粉末。
[003U 參照附圖1，酶用量的影響情況，稱取經(jīng)處理的石蒜粉末2. O