一種余甘子sod的提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種酶的提取方法，具體是一種余甘子SOD的提取方法。
【背景技術(shù)】
[0002]超氧化物岐化酶即SOD可對抗與阻斷因氧自由基對細(xì)胞造成的損害，并及時(shí)修復(fù)受損細(xì)胞，復(fù)原因自由基造成的對細(xì)胞傷害。由于現(xiàn)代生活壓力，環(huán)境污染，各種輻射和超量運(yùn)動都會造成氧自由基大量形成；因此，生物抗氧化機(jī)制中SOD的地位越來越重要。
[0003]余甘子中含有對人體有益的活性物質(zhì)S0D，但至今還沒有對其提取工藝進(jìn)行深入的研宄，也未發(fā)現(xiàn)有關(guān)從余甘子中提取SOD的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種成本低、純度高的余甘子SOD的提取方法，以解決上述【背景技術(shù)】中提出的問題。
[0005]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案:
[0006]一種余甘子SOD的提取方法，具體步驟包括:
[0007](I)清洗、去核、壓榨:將新鮮的余甘子清洗、去核，將果肉放入壓榨機(jī)中進(jìn)行壓榨，得到壓榨后的果汁；
[0008](2)加熱:將步驟(I)中壓榨的果汁進(jìn)行加熱，得到變性的果汁；
[0009](3)離心:將步驟(2)中變性的果汁降至常溫后進(jìn)行離心分離，過濾，得到SOD粗酶液；
[0010](4)向步驟(3)的SOD粗酶液中加入磷酸鹽緩沖液與石英砂并進(jìn)行離心分離，磷酸鹽緩沖液的PH為7.0,7.2或7.4，磷酸鹽緩沖液的加入量是SOD粗酶液質(zhì)量的100-120%，石英砂的加入量是SOD粗酶液質(zhì)量的2-5%，抽取上清液，得到SOD清濾液；
[0011](5)將步驟(4)中SOD清濾液進(jìn)行層析，層析時(shí)間為12-20h ;將層析后的溶液在真空下進(jìn)行濃縮，真空度為50-60KPa，濃縮溫度為50-60°C，濃縮時(shí)間為30_40min，得到濃縮液；
[0012](6)將步驟(5)中濃縮液放入透析袋中進(jìn)行透析，透析時(shí)間為25_30h，得到透析溶液；
[0013](7)將步驟(6)中透析溶液在真空下進(jìn)行干燥，得到S0D。
[0014]作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案:步驟(2)中加熱溫度為85_95°C，加熱時(shí)間為1_1.5h。
[0015]作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案:步驟(3)中離心速度為6000-9000r/min，離心時(shí)間為25_35min0
[0016]作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案:步驟(4)中離心速度為10000-14000r/min，離心時(shí)間為 40_50min。
[0017]作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案:步驟(J)中真空干燥的真空度為50_60KPa，干燥溫度為40-50 °C，干燥時(shí)間為2-3h。
[0018]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明的設(shè)備與過程簡單，原料易得，成本低，采用磷酸鹽緩沖液，在提高了分離效率的同時(shí)對SOD的活性進(jìn)行了很好的保護(hù)，保證了成品的質(zhì)量，得到純度較高的S0D。
【具體實(shí)施方式】
[0019]下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例，對本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0020]實(shí)施例1
[0021]本發(fā)明實(shí)施例中，一種余甘子SOD的提取方法，具體步驟包括:
[0022](I)清洗、去核、壓榨:將新鮮的余甘子清洗、去核，將果肉放入壓榨機(jī)中進(jìn)行壓榨，得到壓榨后的果汁；
[0023](2)加熱:將步驟(I)中壓榨的果汁進(jìn)行加熱，加熱溫度為85°C，加熱時(shí)間為lh，得到變性的果汁；
[0024](3)離心:將步驟⑵中變性的果汁降至常溫后進(jìn)行離心分離，離心速度為6000r/min，離心時(shí)間為35min，過濾，得到SOD粗酶液；
[0025](4)向步驟(3)的SOD粗酶液中加入磷酸鹽緩沖液與石英砂并進(jìn)行離心分離，磷酸鹽緩沖液的pH為7.0，磷酸鹽緩沖液的加入量是SOD粗酶液質(zhì)量的100%，石英砂的加入量是SOD粗酶液質(zhì)量的2%，離心速度為10000r/min，離心時(shí)間為50min，去沉淀，抽取上清液，得到SOD清濾液；
[0026](5)將步驟(4)中SOD清濾液進(jìn)行層析，層析時(shí)間為12h ;將層析后的溶液在真空下進(jìn)行濃縮，真空度為50KPa，濃縮溫度為50°C，濃縮時(shí)間為30min，得到濃縮液；
[0027](6)將步驟(5)中濃縮液放入透析袋中進(jìn)行透析，透析時(shí)間為25h，得到透析溶液；
[0028](7)將步驟(6)中透析溶液在真空下進(jìn)行干燥，真空度為50KPa，干燥溫度為40°C，干燥時(shí)間為2h，得到S0D。
[0029]實(shí)施例2
[0030]本發(fā)明實(shí)施例中，一種余甘子SOD的提取方法，具體步驟包括:
[0031](I)清洗、去核、壓榨:將新鮮的余甘子清洗、去核，將果肉放入壓榨機(jī)中進(jìn)行壓榨，得到壓榨后的果汁；
[0032](2)加熱:將步驟(I)中壓榨的果汁進(jìn)行加熱，加熱溫度為90°C，加熱時(shí)間為1.2h，得到變性的果汁；
[0033](3)離心:將步驟⑵中變性的果汁降至常溫后進(jìn)行離心分離，離心速度為7500r/min,離心時(shí)間為30min，過濾，得到SOD粗酶液；
[0034](4)向步驟(3)的SOD粗酶液中加入磷酸鹽緩沖液與石英砂并進(jìn)行離心分離，磷酸鹽緩沖液的pH為7.2，磷酸鹽緩沖液的加入量是SOD粗酶液質(zhì)量的110%，石英砂的加入量是SOD粗酶液質(zhì)量的3%，離心速度為12000r/min，離心時(shí)間為45min，去沉淀，抽取上清液，得到SOD清濾液；
[0035](5)將步驟(4)中SOD清濾液進(jìn)行層析，層析時(shí)間為16h ;將層析后的溶液在真空下進(jìn)行濃縮，真空度為55KPa，濃縮溫度為55°C，濃縮時(shí)間為35min，得到濃縮液；
[0036](6)將步驟(5)中濃縮液放入透析袋中進(jìn)行透析，透析時(shí)間為28h，得到透析溶液；
[0037](7)將步驟(6)中透析溶液在真空下進(jìn)行干燥，真空度為55KPa，干燥溫度為45°C，于燥時(shí)間為2.5h，得到S0D。
[0038]實(shí)施例3
[0039]本發(fā)明實(shí)施例中，一種余甘子SOD的提取方法，具體步驟包括:
[0040](I)清洗、去核、壓榨:將新鮮的余甘子清洗、去核，將果肉放入壓榨機(jī)中進(jìn)行壓榨，得到壓榨后的果汁；
[0041](2)加熱:將步驟(I)中壓榨的果汁進(jìn)行加熱，加熱溫度為95°C，加熱時(shí)間為1.5h，得到變性的果汁；
[0042](3)離心:將步驟⑵中變性的果汁降至常溫后進(jìn)行離心分離，離心速度為9000r/min,離心時(shí)間為25min，過濾，得到SOD粗酶液；
[0043](4)向步驟(3)的SOD粗酶液中加入磷酸鹽緩沖液與石英砂并進(jìn)行離心分離，磷酸鹽緩沖液的pH為7.4，磷酸鹽緩沖液的加入量是SOD粗酶液質(zhì)量的120%，石英砂的加入量是SOD粗酶液質(zhì)量的5%，離心速度為14000r/min，離心時(shí)間為40min，去沉淀，抽取上清液，得到SOD清濾液；
[0044](5)將步驟(4)中SOD清濾液進(jìn)行層析，層析時(shí)間為20h ;將層析后的溶液在真空下進(jìn)行濃縮，真空度為60KPa，濃縮溫度為60°C，濃縮時(shí)間為40min，得到濃縮液；
[0045](6)將步驟(5)中濃縮液放入透析袋中進(jìn)行透析，透析時(shí)間為30h，得到透析溶液；
[0046](7)將步驟(6)中透析溶液在真空下進(jìn)行干燥，真空度為60KPa，干燥溫度為50°C，干燥時(shí)間為3h，得到S0D。
[0047]對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實(shí)施例的細(xì)節(jié)，而且在不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。因此，無論從哪一點(diǎn)來看，均應(yīng)將實(shí)施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求而不是上述說明限定，因此旨在將落在權(quán)利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有變化囊括在本發(fā)明內(nèi)。
[0048]此外，應(yīng)當(dāng)理解，雖然本說明書按照實(shí)施方式加以描述，但并非每個(gè)實(shí)施方式僅包含一個(gè)獨(dú)立的技術(shù)方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)將說明書作為一個(gè)整體，各實(shí)施例中的技術(shù)方案也可以經(jīng)適當(dāng)組合，形成本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的其他實(shí)施方式。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種余甘子SOD的提取方法，其特征在于，具體步驟包括: (1)清洗、去核、壓榨:將新鮮的余甘子清洗、去核，將果肉放入壓榨機(jī)中進(jìn)行壓榨，得到壓榨后的果汁； (2)加熱:將步驟(I)中壓榨的果汁進(jìn)行加熱，得到變性的果汁； (3)離心:將步驟(2)中變性的果汁降至常溫后進(jìn)行離心分離，過濾，得到SOD粗酶液； (4)向步驟(3)的SOD粗酶液中加入磷酸鹽緩沖液與石英砂并進(jìn)行離心分離，磷酸鹽緩沖液的pH為7.0、7.2或7.4，磷酸鹽緩沖液的加入量是SOD粗酶液質(zhì)量的100-120%，石英砂的加入量是SOD粗酶液質(zhì)量的2-5%，抽取上清液，得到SOD清濾液； (5)將步驟(4)中SOD清濾液進(jìn)行層析，層析時(shí)間為12-20h;將層析后的溶液在真空下進(jìn)行濃縮，真空度為50-60KPa，濃縮溫度為50-60°C，濃縮時(shí)間為30_40min，得到濃縮液； (6)將步驟(5)中濃縮液放入透析袋中進(jìn)行透析，透析時(shí)間為25-30h，得到透析溶液； (7)將步驟￠)中透析溶液在真空下進(jìn)行干燥，得到S0D。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的余甘子SOD的提取方法，其特征在于，所述步驟(2)中加熱溫度為85-95°C，加熱時(shí)間為1-1.5ho
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的余甘子SOD的提取方法，其特征在于，所述步驟(3)中離心速度為 6000-9000r/min，離心時(shí)間為 25_35min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的余甘子SOD的提取方法，其特征在于，所述步驟(4)中離心速度為 10000-14000r/min，離心時(shí)間為 40_50min。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的余甘子SOD的提取方法，其特征在于，所述步驟(J)中真空干燥的真空度為50-60KPa，干燥溫度為40-50°C，干燥時(shí)間為2_3h。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種余甘子SOD的提取方法，將新鮮余甘子經(jīng)過清洗、去核、壓榨、加熱、離心分離，得到SOD粗酶液；向SOD粗酶液中加入磷酸鹽緩沖液與石英砂并進(jìn)行離心分離，得到SOD清濾液；再對SOD清濾液進(jìn)行層析、真空濃縮、透析、真空干燥，即可得到SOD。本發(fā)明的設(shè)備與過程簡單，原料易得，成本低，采用磷酸鹽緩沖液，在提高了分離效率的同時(shí)對SOD的活性進(jìn)行了很好的保護(hù)，保證了成品的質(zhì)量，得到純度較高的SOD。
【IPC分類】C12N9-02
【公開號】CN104630161
【申請?zhí)枴緾N201410597821
【發(fā)明人】馮穎, 張宏, 侯彬, 趙宇
【申請人】中國林業(yè)科學(xué)研究院資源昆蟲研究所, 云南天啟生物科技有限公司
【公開日】2015年5月20日
【申請日】2014年10月31日