一種供注射用海藻糖的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種供注射用的海藻糖制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 海藻糖是由兩個(gè)葡萄糖分子以1，1-糖苷鍵構(gòu)成的非還原性糖，無毒，結(jié)構(gòu)穩(wěn)定， 具有化學(xué)惰性，在120°c、90min和37°C、12個(gè)月的儲(chǔ)存條件下均無褐變，且一般只對(duì)海藻 糖酶有響應(yīng)，是一種應(yīng)急代謝產(chǎn)物。近年來發(fā)現(xiàn)海藻糖對(duì)多種生物活性物質(zhì)具有非特異性 保護(hù)作用，而且海藻糖在科學(xué)界有"生命之糖"的美譽(yù)，廣泛存在于動(dòng)植物和微生物體內(nèi)。它 的這種性質(zhì)使其在食品、保健品、化妝品、醫(yī)藥、分子生物等領(lǐng)域有廣闊的應(yīng)用前景。
[0003] CN1219071C公開了一種兩步發(fā)酵法生產(chǎn)酵母胞外海藻糖的方法，發(fā)酵以后的海 藻糖通過混合床離子交換系統(tǒng)進(jìn)行純化。
[0004] CN1807465A公開了一種海藻糖的分離純化方法，釀酒酵母發(fā)酵培養(yǎng)后經(jīng)離心、 超濾、離子交換、濃縮、結(jié)晶干燥得海藻糖純品。所得海藻糖純品經(jīng)HPLC檢測(cè)，純度達(dá)到 98. 0%。
[0005] 申請(qǐng)人在經(jīng)過大量檢索后，發(fā)現(xiàn)與本發(fā)明最接近的現(xiàn)有技術(shù)為CN103980327A， 該發(fā)明公開了一種藥用注射劑的高純海藻糖制備方法，通過熱溶冷析結(jié)晶、除熱原、除菌、 乙醇結(jié)晶獲得純度> 99%，可作為藥用注射劑使用的海藻糖。該發(fā)明是利用超濾法和超膜 過濾法進(jìn)行除菌除熱原來獲得可供注射用的海藻糖，然而超濾和超膜過濾法既耗時(shí)，且易 堵塞，給實(shí)際操作帶來不便。
[0006] 綜合目前對(duì)海藻糖制備工藝的研究，大多目的都是為了獲得食品級(jí)海藻糖，而對(duì) 于供注射用海藻糖的研究還比較少。然而，兩者的主要區(qū)別就在于供注射用的海藻糖涉及 到除菌除熱原這一關(guān)鍵步驟。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 針對(duì)現(xiàn)有工藝技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的是提供一種供注射用海藻糖的制備方 法。
[0008] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的具體方案為： 一種供注射用海藻糖的制備方法，其步驟包括： (1)乙醇結(jié)晶：將經(jīng)過離子交換后的海藻糖粗品加入到體積分?jǐn)?shù)為60%_80%的乙醇溶 液中，使其完全析出晶體，過濾，獲得粗結(jié)晶海藻糖。
[0009] (2)除菌除熱原：將純化水加熱到95°C-120°C后，再加入粗結(jié)晶的海藻糖進(jìn)行溶 解，使海藻糖溶液的最終濃度為70%-90%，然后將壓力控制在2Mpa-4Mpa，保持20-60min。
[0010] (3)純化結(jié)晶：將高溫高壓滅菌除熱原后的料液經(jīng)攪拌均勻后，經(jīng)冷卻至海藻糖晶 體全部析出，過濾即得海藻糖晶體； (4)減壓干燥分裝包裝：將析出的晶體減壓干燥后進(jìn)行無菌分裝及包裝，獲得最終產(chǎn) 品。
[0011] 減壓干燥條件為：干燥溫度：50~65°c，真空度：-0. 06Mpa以上，干燥時(shí)間：10~30h。
[0012] 步驟（3)的冷卻結(jié)晶過程如下：以3. 5-4. 5°C/min的速率降至80°C，然后在80°C 下再保持5-15min，再以1-1. 5°C/min的速率降至60°C，再以2-2. 5°C/min的速率降溫至 25。。。
[0013] 純化結(jié)晶步驟中所述的攪拌速度為100_150r/min。
[0014] 進(jìn)一步，所用的海藻糖粗品為經(jīng)過離子交換后除去大量雜質(zhì)的原料，純度大于 60%。
[0015] 本發(fā)明的有益效果 (1)本發(fā)明的最大特點(diǎn)為除菌除熱原一步完成，縮短了工藝流程， 提高了效率，降低了生產(chǎn)成本，而且高溫高壓后的液體經(jīng)過降溫減壓結(jié)晶可直接獲得 終產(chǎn)品。由于熱溶冷析結(jié)晶法的海藻糖容易結(jié)成塊狀，無法滿足藥用注射的要求，而本申請(qǐng) 雖然在最后的結(jié)晶步驟中采用熱溶冷析結(jié)晶法，但是經(jīng)過仔細(xì)摸索各種條件，克服了上述 缺陷，獲得了粒度均勻、顆粒較小的粉體。
[0016] (2)本發(fā)明首次公開報(bào)道了利用高溫高壓方法對(duì)海藻糖進(jìn)行滅菌除 熱原處理，利用純化水溶解粗結(jié)晶的方式，克服、避免了在高溫高壓條件下使用乙醇溶 劑對(duì)海藻糖進(jìn)行重結(jié)晶時(shí)可能會(huì)引發(fā)的安全隱患。
[0017] (3)制備工藝符合藥用注射劑產(chǎn)品的生產(chǎn)要求，并且避免了由晶種 引入新的微生物及熱原。
[0018] (4)為進(jìn)一步提高產(chǎn)品純度，結(jié)合高溫高壓對(duì)溶劑的要求，本發(fā)明 采用了純化水結(jié)晶法作為二次結(jié)晶工藝，利用熱溶冷析的原理，對(duì)目標(biāo)產(chǎn)物海藻糖進(jìn) 行進(jìn)一步純化，經(jīng)檢驗(yàn)，純度可達(dá)到99%以上。
[0019] (5)本發(fā)明所制得的海藻糖產(chǎn)品的細(xì)菌內(nèi)毒素含量〈0. 10EU/mg，且 產(chǎn)品無菌檢查合格，符合《中國藥典》的相關(guān)規(guī)定。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 下面詳細(xì)描述本發(fā)明的實(shí)施例，這些實(shí)施例旨在用于解釋本發(fā)明，而不能理解為 對(duì)本發(fā)明的限制。
[0021] 實(shí)施例1 乙醇結(jié)晶：室溫下，往反應(yīng)釜內(nèi)加入海藻糖純度為65%的粗品25kg，然后再加入體積 分?jǐn)?shù)為60%的乙醇100L，以150r/min的速度攪拌30min-50min至晶體完全析出，攪拌下卸 料，靜置lOmin分鐘，移去上層結(jié)晶母液，晶體沉淀經(jīng)砂芯漏斗過濾進(jìn)一步除水后，分裝于 托盤，置真空干燥箱溫度65°C、真空度0. 06MPa，干燥10h，得晶體17. 5kg。
[0022] 除菌除熱原：于高溫高壓反應(yīng)釜內(nèi)加入13L純化水升溫至95°C，然后加入乙醇結(jié) 晶后的晶體17. 5kg，攪拌下溶解，壓力控制在2Mpa下保持60min。
[0023] 冷卻結(jié)晶：經(jīng)過除菌除熱原后降到標(biāo)準(zhǔn)大氣壓的料液在無菌條件下卸料，然后在 150r/min的攪拌速度下以4°C/min的速率由95°C降至80°C，然后在80°C下再保持lOmin， 再以1. 2°C/min的速率降至60°C，再以2. 2°C/min的速率降溫至25°C，靜置lOmin分鐘， 移去上層結(jié)晶母液，晶體沉淀經(jīng)砂芯漏斗過濾進(jìn)一步除水后，分裝于托盤，置真空干燥箱溫 度60°C、真空度0. 06MPa，干燥20h)干燥后取出晶體，分裝后無菌包裝，共得產(chǎn)品16. 8kg。 產(chǎn)品經(jīng)檢測(cè)，純度>99%，無菌，細(xì)菌內(nèi)毒素檢查合格。
[0024] 實(shí)施例2 乙醇結(jié)晶：室溫下，往反應(yīng)釜內(nèi)加入海藻糖純度為80%的粗品45kg，然后再加入體積 分?jǐn)?shù)為80%的乙醇100L，以150r/min的速度攪拌30min-50min至晶體完全析出，攪拌下卸 料，靜置lOmin分鐘，移去上層結(jié)晶母液，晶體沉淀經(jīng)砂芯漏斗過濾進(jìn)一步除水后，分裝于 托盤，置真空干燥箱溫度65°C、真空度0. 06MPa，干燥10h，得晶體38. 2kg。
[0025] 除菌除熱原：于高溫高壓反應(yīng)釜內(nèi)加入20L純化水升溫至120°C，然后加入乙醇結(jié) 晶后的晶體38. 2kg，攪拌下溶解，壓力控制在3Mpa，保持30min。
[0026] 冷卻結(jié)晶：經(jīng)過除菌除熱原后降到標(biāo)準(zhǔn)大氣壓的料液在無菌條件下卸料，然后在 150r/min的攪拌速度下以4°C/min的速率由120°C降至80°C，然后在80°C下再保持12min， 再以1. 2°C/min的速率降至60°C，再以2. 3°C/min的速率降溫至25°C，靜置lOmin分鐘， 移去上層結(jié)晶母液，晶體沉淀經(jīng)砂芯漏斗過濾進(jìn)一步除水后，分裝于托盤，置真空干燥箱溫 度50°C、真空度0. 06MPa，干燥30h后取出晶體，分裝后無菌包裝，共得產(chǎn)品36. 5kg。產(chǎn)品經(jīng) 檢測(cè)，純度>99%，無菌，細(xì)菌內(nèi)毒素檢查合格。
[0027] 實(shí)施例3 乙醇結(jié)晶：室溫下，往反應(yīng)釜內(nèi)加入海藻糖純度為90%的粗